CN101269203A - 一种利脑心胶囊的质量控制检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种利脑心胶囊的质量控制检测方法，在原检测标准的基础上增加了甘草的薄层色谱鉴别和何首乌的高效液相色谱法测定含量。本发明检测方法先进，精密度及重现性好，能够全面的对该药品进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。

Description

一种利脑心胶囊的质量控制检测方法

技术领域

本发明公开一种利脑心胶囊的质量控制检测方法，属于医药学检测方法技术领域。

背景技术

本发明涉及的“利脑心胶囊”是通过以下工艺制成的：将丹参40g、何首乌(制)30g、枸杞30g、赤芍30g、葛根30g、地龙30g加水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩成流浸膏状，低温干燥，粉碎成细粉，备用。取川芎30g、红花20g、郁金3g、泽泻30g、、酸枣仁(炒)20g、远志30g、九节菖蒲30g、牛膝30g、甘草20g等九味粉碎成细粉，过筛，加入干浸膏粉，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。胶囊剂，内容物为棕黄色的粉末；味苦。功能主治为活血祛瘀，行气化痰，通络止痛。用于气滞血瘀，痰浊阻络，胸痹刺痛、绞痛，固定不移，入夜更甚，心悸不宁，头晕头痛，以及冠心病，心肌梗塞，脑动脉硬化，脑血栓等见上述证候者。

该药品标准原收载于卫生部颁标准中药18册，原标准中只有何首乌、川芎、赤勺的薄层色谱鉴别，由于原标准的检测方法很少，因此，不能保证对该药品进行全面的检测。

发明内容

本发明公开一种利脑心胶囊的质量控制检测方法，用于利脑心药物的质量控制。

本发明的技术解决方案如下：

1)取利脑心胶囊内容物3g，加乙醚50ml，浸泡30分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加60％甲醇50ml，超声处理(功率250W，频率25KHz)20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率250W，频率25KHz)20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-丙酮(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2)取本品内容物5g，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(16∶4∶0.4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3)检查：应符合中国药典2005年版一部附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；

4)含量测定：照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为320nm；论板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷适量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物，混匀，取1.2g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小时，弃去氯仿液，打开滤纸筒，药渣挥开溶剂，将药粉与滤纸一同置于锥形瓶子，精密加入60％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率25KHz)30分钟，放冷，再称定重量，加60％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

利脑心胶囊每粒含何首乌以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于0.10mg。

本发明的积极效果在于：在原标准的基础上增加了甘草的薄层色谱鉴别和何首乌的高效液相色谱法测定含量。本发明检测方法先进，精密度及重现性好，能够全面的对该药品进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。

附图说明

图1为甘草的薄层色谱鉴别；

1、2、3供试品，4甘草约材，5阴性对照品

图2为2，3，5，4′-四羟基苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷的紫外光谱图；

图3为对照品色谱图；

图4为供试品图；

图5为线性关系图；

图6为阴性对照品色谱图；

图7为溶剂色谱图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

实施例1

1)取利脑心胶囊内容物3g，加乙醚50ml，浸泡30分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加60％甲醇50ml，超声处理(功率250W，频率25KHz)20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率250W，频率25KHz)20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-丙酮(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1照片

2)取本品内容物5g，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(16∶4∶0.4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3)检查：应符合中国药典2000年版一部附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；

4)含量测定：照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为320nm；论板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷适量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物，混匀，取1.2g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小时，弃去氯仿液，打开滤纸筒，药渣挥开溶剂，将药粉与滤纸一同置于锥形瓶子，精密加入60％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率25KHz)30分钟，放冷，再称定重量，加60％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

利脑心胶囊每粒含何首乌以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于0.10mg。

含量测定：

何首乌：以其主要成份2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷为指标，建立了高效液相色谱法测定其含的方法.该法灵敏，准确，快捷.

1、仪器与试药

Agilent 1100 series高效液相色谱仪，DAD检测器；试剂均为色谱纯及分析纯；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷对照品(中国药品生物制品检定析)；批号0844-200003。

2、测定波长的选择

取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加50％乙醇制成18μg/m1的溶液，在200～400nm进行扫描，在321nm具有最大吸收，参照药典何首乌项下，选择320nm作为测定波长，见图2。

3、提取溶剂的选择

取本发明1.2g，两份，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流2小时，弃去氯仿，挥干溶剂，将滤纸筒打开，将药粉及滤纸筒一同转入三角烧瓶中，分别精密加入甲醇及60％甲醇25ml，称定重量，超声处理(250W 25KHz)30分钟，冷却，再称定重量，加相应溶剂补足减失的重量，滤过，滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件进行测定，结果甲醇提取物杂质峰较多，60％甲醇提取峰分离效果好，故选择60％甲醇。

4、系统适用性试验

色谱条件色谱柱为Techsphere C18柱(4.6×250mm，5μ)；流动相为乙腈-水(14∶86)；流速为1.0ml/min。根据上述色谱条件，测得供试品及对照品色谱图，见图(3)(4)。以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷计算理论塔板数，  N＝9530.4(计算机给出)。参照中国药典2000年版一部何首乌项下，暂定理论板数以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰计算，应不低于5000。

5、方法学考察

5.1  标准曲线的制备

取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加60％甲醇制成54.2μg/ml的溶液。精密吸取该溶液2、6、10、15、20μl，分别注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝2878.67742X-0.433213，γ＝0.99999。线性范围为0.1084～0.5420μg(见图5)，结果见表1。

表1  线性关系测定结果

5.2  空白试验  按原处方工艺制成不含何首乌的阴性对照样品，按正文所收载的方法测定，结果其阴性对照图谱中，在与2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷色谱峰相应保留时间处无干扰峰出现(见图6、7)。

5.3稳定性试验取同一供试品溶液(批号070201)，分别在0、7、11、16小时依正文收载方法测定，按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰面积计，结果未发生明显改变，见表2。

表2稳定性试验结果

5.4重现性试验  取同一供试品(批号011115)五份，依法独立测定5次，测定结果见表3。

表3重现性试验结果

5.5精密度试验取同一供试品溶液(批号070201)，连续进样5次，测定结果见表4。

表4精密度试验结果

5.6  回收率试验取经同法测定的已知含量的样品(批号070201，含量0.958mg/g)五份，每份0.65g，精密称定，精密加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷适量，依正文方法测定，计算回收率，测定结果见表5。

表5  回收率试验结果

6、样品含量测定及限度的确定

根据正文所述条件及方法，测定七批样品，结果见下表。

表6样品测定结果

参照中国药典2005年版一部何首乌【含量测定】项下的规定，暂定制何首乌含2，3，5，4′-四羟基苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)不得少于0.80％。且制何首乌在方中为水煎煮入药，暂定每粒含何首乌以2，3，5，4′-四羟二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于60μg。

Claims (1)

1、一种利脑心胶囊的质量控制检测方法，包括以下步骤：

1)取利脑心胶囊内容物3g，加乙醚50ml，浸泡30分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加60％甲醇50ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-丙酮(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2)取利脑心胶囊内容物5g，加甲醇30ml超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取酸枣仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(16∶4∶0.4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

3)检查：应符合中国药典2005年版一部附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；

4)含量测定：照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为320nm；论板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷适量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物，混匀，取1.2g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小时，弃去氯仿液，打开滤纸筒，药渣挥开溶剂，将药粉与滤纸一同置于锥形瓶子，精密加入60％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加60％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

利脑心胶囊每粒含何首乌以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于0.10mg。

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