CN107389830B

CN107389830B - 一种痔瘘薰洗剂的质量检测方法

Info

Publication number: CN107389830B
Application number: CN201710854225.7A
Authority: CN
Inventors: 陈玉根; 刘志辉; 彭懿; 倪昌荣; 周青; 张丹
Original assignee: Jiangsu Provincial Hospital of Chinese Medicine
Current assignee: Suzhong Pharmaceutical Group Co ltd
Priority date: 2017-09-20
Filing date: 2017-09-20
Publication date: 2019-09-03
Anticipated expiration: 2037-09-20
Also published as: CN107389830A

Abstract

本发明公开了一种痔瘘薰洗剂的质量检测与控制方法，该方法包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)回归方程的获取；(4)供试品溶液的检测。本发明根据痔瘘薰洗剂中黄酮、蒽醌和酚酸等不同类型成分，共14种不同结构和性质的活性化合物的结构及其性质特点，通过大量实验筛选出最佳的色谱柱、流动相组成，洗脱程序、流速，色谱柱、检测波长等分析条件。经多次实验验证表明，本发明能够同时检测黄酮、蒽醌和酚酸等不同类成分共14种化合物，该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价痔瘘熏洗剂的质量，对控制质量和保证临床的安全有效具有重要意义。

Description

一种痔瘘薰洗剂的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，具体涉及一种具有治疗痔疮作用的中药制剂的质量控制方法。

背景技术

痔瘘熏洗剂是全国首批名老中医学术经验继承工作指导老师、全国著名肛肠专家、国家级名老中医朱秉宜教授，在借鉴中医外科经典著作《外科正宗》洗痔枳壳汤、起痔汤、洗痔肿痛方的基础上，结合自己多年临床实践，于上世纪60年代研制而成的临床验方，用于痔疮肿痛的熏洗坐浴，每年直接受益患者均在万人以上。全方组方严谨，用量考究，仅由5味中药组成，方中大黄味苦性寒，具有清热燥湿之效；五倍子味苦、酸，主治各种出血、痈肿疮疖；虎杖微苦，微寒，用于水火烫伤，跌打损伤，痈肿疮毒，具有活血化瘀、止痛、收敛、促进上皮生长的作用；荔枝草性味苦寒，清热凉血；鱼腥草性凉，常用于热毒疮疡。痔瘘熏洗剂成分复杂，依靠单一的检测方法，无法全面客观的检测其质量。

因此，为了充分控制好痔瘘熏洗剂的临床有效性和安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能准确全面检测痔瘘熏洗剂有效成分,继而确保痔瘘熏质量的检测方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，采用高效液相色谱检测，该检测方法可以同时检测痔瘘熏洗剂中的黄酮、蒽醌类和酚酸等成分，共14种活性化合物。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价痔瘘熏洗剂与制剂的质量，对控制质量和保证疗效具有重要意义。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种痔瘘薰洗剂的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解，配成混合对照品溶液贮备液。

(2)供试品溶液的制备

精密吸取痔瘘薰洗剂样品溶液至容量瓶中，称重，加甲醇定容至刻度，超声，放冷，补足重量，过0.45μm微孔滤膜，即得；

(3)回归方程的获取

精密吸取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液，分别稀释1倍，2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，得到6份对照品溶液；然后分别精密吸取6份对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪器检测，以测得的响应信号峰面积和被测物的进样浓度用最小二乘法进行线性回归，得到各对照品成分的回归方程以及线性范围；

(4)供试品溶液的检测

精密吸取步骤(2)制备得到的供试品溶液10μL，注入高效液相色谱检测，通过步骤(3)获得的回归方程，检测供试品溶液中各化学成分的含量。

作为优选方案，以上所述的痔瘘薰洗剂的质量检测方法，步骤(1)对照品溶液的制备方法为：精密称取没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解，配成浓度分别为0.0654mg/ml，0.0322mg/ml，0.2456mg/ml，0.0420mg/ml，0.0587mg/ml，0.1627mg/ml，0.1939mg/ml，0.0910mg/ml，0.0337mg/ml，0.0063mg/ml，0.1519mg/ml，0.0142mg/ml，0.0061mg/ml，0.0052mg/ml的混合对照品溶液贮备液。

作为优选方案，以上所述的痔瘘薰洗剂的质量检测方法，步骤(2)供试品溶液的制备方法为：精密吸取痔瘘薰洗剂样品溶液3mL至10mL容量瓶中，称重，加甲醇定容至刻度，超声30min，放冷，补足重量，过0.45μm微孔滤膜，即得。

作为优选方案，以上所述的痔瘘薰洗剂的质量检测方法，步骤(3)和步骤(4)所述的高效液相色谱仪器检测的色谱条件为：

色谱柱：Hedera-ODS-2C18柱；

流动相：A相为0.1％磷酸-B相为乙腈，梯度洗脱:(1)0～5min，5％B；5～10min，5％～8％B；10～20min，8％～15％B；20～50min，15％～26％B；50～65min，26％～43％B；65～75min，43％～60％B；75～80min，60％～80％B；80～85min，55％B；85～90min，80％～5％B；90～95min，5％B；

流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为10μL；紫外检测波长为0～30min，330nm；31～95min，256nm。

作为优选方案，以上所述的痔瘘薰洗剂的质量检测方法，步骤(3)的回归方程为：

作为优选方案，以上所述的痔瘘薰洗剂的质量检测方法，所述的痔瘘薰洗剂的制备方法为：先取鱼腥草120至240g，加水蒸馏提取，收取蒸馏液，备用，并收集蒸馏后的鱼腥草水溶液，然后将蒸馏后的鱼腥草药渣与荔枝草120至240g，虎杖120至240g，大黄60至120g和五倍子60至120g合并，加水煎煮2次，第一次加总药材重量7倍体积量水，煎煮1.5小时，第二次加总药材重量6倍体积量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液与蒸馏后的鱼腥草水溶液合并，减压浓缩，放冷，然后再加入鱼腥草蒸馏液，即得。

一、色谱条件筛选实验

1、检测波长的选择

本发明经过波长筛选，没食子酸的最大吸收波长为269nm，咖啡酸为323nm，虎杖苷为304nm，槲皮苷为254nm，金丝桃苷为350nm，异槲皮苷为254nm，高车前草甘与高车前素为334nm，大黄酚、大黄素甲醚芦荟大黄素、大黄酸与大黄素的最大吸收波长为256nm。由于最大吸收波长不同，本发明选择的是可变波长进行定量，考虑到256nm是没食子酸的最大吸收波长，且没食子酸含量比较高，导致其它成分的峰需要很小的标尺才能显现，故在前30min选择330nm的波长压低没食子酸的峰，使其他目标峰在适当的标尺可见，在30-95min选择256nm测定波长。结果表明选用发明实验方案经计算准确度最接近于1，说明该方法对不同类成分的检测方法建立也具有可行性。

用Waters2695-2996高效液相色谱系统，2998PAD检测器，Empower工作站(Waters公司)。进行3D检测，选定不同波长条件下，进行单个成分的验证，结果一致。

2、供试品溶液的制备

根据待测成分的性质，本实验分别对提取溶媒(甲醇、50％甲醇、50％乙醇、705乙醇)、溶媒用量(10mL、25mL、50mL)、提取方法(超声、回流、冷浸)与提取时间(20，30，40min)进行了单因素考察，确定了以10mL甲醇，超声提取30min的提取效果最好，故选之。

3、相对较正因子的计算

影响相对校正因子的因素有很多，如流动相的、流动相的组成比例、流动相的时间程序即梯度洗脱程序、检测器(针对有紫外吸收的成分)的检测波长、流速、进样体积、柱温等。对于传统外标法测定成分含量来说，这些因素在一定程度上一般不会对测定结果造成影响。但对于本发明同时检测14种化合物来说，这些因素对于相对校正因子的影响是未知的，有必要考察此类因素在微小范围内波动时对相对校正因子的影响。另外，建立相对校正因子时所用对照品的纯度也会对其有一定的影响。故本发明用不同流速，不同温度，不同仪器，不同色谱柱，不同计算方法对不同类成分的相对较正因子的影响进行了考察和比较。误差均在可接受范围内。

4、内参物的选择

内参物的选择应该选取指标成分中化学性质稳定、廉价易得并且对照品来源有保证者，可以在大批量样品检测中降低成本，保证方法的普适性和推广价值。中药质量控制中两个关键点就是分析技术的建立和化学对照品的运用。金丝桃苷、槲皮苷、大黄素的化学性质比较稳定，对照品来源有保证，且廉价易得，这3种成分作为内参物均能体现本发明简便、易操作、低成本的特点。但在进行相对校正因子的耐用性考察时发现:以金丝桃苷或槲皮苷为内参物时，某些成分的相对校正因子波动稍大，而以大黄素为内参物时，各成分间的相对校正因子更稳定些。故选择大黄素为内参物。

5、洗脱条件的梯度选择。

1)色谱柱与流动相的选择：

柱首先选择最佳的柱系统，本发明通过大量实验筛选，分离采用反相液相色谱模式,ODS色谱柱,并采用含有乙腈和0.1％磷酸的混合流动相作为洗脱剂具有很好的分离度。本发明筛选了甲醇和水，甲醇磷酸水和乙腈和水等流动相，结果表明分离效果明显较差，单5个大黄蒽苷分离就需2小时；不考虑其它成分分离情况，单独分离及测定同时含有金丝桃苷、槲皮苷及异槲皮苷的成分，也需较长时间，分离度差，分离效率低。

2)成分的分类：

由于本发明的中药制剂需要测定14个不同结构成分的含量，故选择梯度洗脱条件，首先根据样品中各种组分保留的强弱对其进行分组。分组的大体情况：有机酸，苷元，苷类化合物三大类。

3)梯度的设计：

设计初始实验，首先以乙腈和0.1％磷酸水溶液构成二元流动相,通过改变梯度运行时间,进行1次不同的线性梯度实验。根据样品的保留值范围确定线性梯度，实验开始和结束时的流动相组成。线性梯度实验的初始流动相一般为含有较少有机溶剂的流动相或纯水,梯度结束时的流动相必须能够将样品中保留最强的溶质洗脱出来。本发明从95％的水相开始依次降低水相比例直至20％的水相，所需测量的目标组分全部洗脱。故确定水相的范围为95％-20％。

4)进行梯度的准确分离。根据2)中的分组情况，分成三个部分进行分析，第一组中含有两个成分再根据极性大小，没食子酸的极性较大，申请人尝试95％的水相洗脱没食子酸，但极性略大洗脱效果不好，遂选择降低极性，在水相95％—92％洗脱没食子酸，洗脱持续时间为5min可以得到良好的分离，咖啡酸极性较没食子酸小，故选择极性低的85％-74％的水相洗脱，持续时间为10min时，筛选过程中实验发现随之流出的其它几个目标成分分离度不好，梯度变化太快，降低梯度的变化率，将持续时间延长至20min,减慢梯度变化率，由于金丝桃苷与异槲皮苷为同分异构体，分离度仍然不理想，为了得到良好的分离度，将此段的洗脱时间延长至30分钟，相当于增加水相的极性，结果表明分离度良好。说明减小流动相的变化陡度可以使结构相似的化合物得到良好的分离。极性再次之的是白藜芦醇和高车前素，选择74％-57％的水相梯度洗脱，虽然目标成分只有2个，由于制剂成分复杂，有些非目标成分与目标成分分离度差，此段持续10min,梯度变化率为17ml/10min^-1,发现有非目标成分与高车前素分离度差，故增加时间至15min，梯度变化率减为17ml/15min^-1，分离度得到改善。大黄的5个蒽醌类苷元类成分极性最小，根据药典的方法(药典用的是等度洗脱)，芦荟大黄素与大黄酸分离度不理想，推测是因为用的流动相不一致，故增加水相，选择40％-20％水相洗脱芦荟大黄素和大黄酸，20％的水相等度洗脱出大黄素，大黄酚，大黄素甲醚。此时,样品中所有组分全部流出色谱柱，筛选出最优的分离14种成分分离的条件。

6.其它考察与选择

不同仪器与不同色谱柱对相对校正因子以及保留时间差和相对保留值的影响

本发明采用色谱柱为HederaC₁₈(4.6mm×250mm，5μm)、HypersilC₁₈(4.6mm×250mm，5μm)、AmethystC₁₈(4.6mm×250mm，5μm)柱分别在Agilent1260高效液相色谱系统，DAD检测器，AgilentChemStation工作站；Agilent1100高效液相色谱系统，VWD检测器，AgilentChemStation工作站；Waters2695-2996高效液相色谱系统，2998PAD检测器，Empower工作站(Waters公司)三台高效液相色谱仪上考察相对校正因子。结果表明结果表明没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚与大黄素间相对校正因子和保留时间差和相对保留值的重现性良好。

采用安捷伦1100和HederaC₁₈柱分别考察了流速1.1，1.0，0.9ml/min，各待测成分相对大黄素的相对校正因子。结果表明没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚与大黄素间相对校正因子和保留时间差和相对保留值的重现性良好。

不同柱温对相对校正因子和保留时间差和相对保留值的影响

采用安捷伦1100和HederaC₁₈柱分别考察了温度为20，25，30度的各待测成分相对大黄素的相对校正因子。结果表明，没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚与大黄素间相对校正因子和保留时间差和相对保留值的重现性良好。

有益效果：本发明提供的痔瘘薰洗剂的质量检测方法和现有技术相比具有以下优点：

本发明根据痔瘘薰洗剂中黄酮、蒽醌和酚酸等不同类型成分，共14种不同结构和性质的活性化合物的结构及其性质特点，通过大量实验筛选出最佳的色谱柱、流动相组成，洗脱程序、流速，色谱柱、检测波长等分析条件。经多次实验验证表明，本发明能够同时检测黄酮、蒽醌和酚酸等不同类成分共14种化合物，该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价痔瘘熏洗剂的质量，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。

附图说明

图1为混合对照品的HPLC色谱图。

图2为痔瘘薰洗剂供试品中14种成分的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1

1、一种痔瘘薰洗剂的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解，配成浓度分别为0.0654mg/ml，0.0322mg/ml，0.2456mg/ml，0.0420mg/ml，0.0587mg/ml，0.1627mg/ml，0.1939mg/ml，0.0910mg/ml，0.0337mg/ml，0.0063mg/ml，0.1519mg/ml，0.0142mg/ml，0.0061mg/ml和0.0052mg/ml的混合对照品溶液贮备液。

(2)供试品溶液的制备

精密吸取样品溶液3mL至10mL容量瓶中，称重，加甲醇定容至刻度，超声30min，放冷，补足重量，过0.45μm微孔滤膜即得。

(3)回归方程的获取

精密吸取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液，用甲醇分别稀释1倍，2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，得到6份稀释的对照品溶液；然后分别精密吸取6份对照品溶液各10μL，分别注入安捷伦1100高效液相色谱仪器检测，色谱图如图1(色谱图中色谱峰归属如下：1.没食子酸2.咖啡酸3.虎杖苷4.金丝桃苷5.异槲皮苷6.槲皮苷7.高车前草苷8.白藜芦醇9.高车前素10.芦荟大黄素11.大黄酸12大黄素13大黄酚14大黄素甲醚)。以测得的响应信号峰面积和被测物的进样浓度用最小二乘法进行线性回归，得到各对照品成分的回归方程以及线性范围；如下表1：

表1 14种成分的回归方程及线性范围

(4)供试品溶液的检测

精密吸按步骤(2)制备得到的10批次的供试品溶液10μL，注入安捷伦1100高效液相色谱检测，通过步骤(3)获得的回归方程，色谱图如图2，检测供试品溶液中各化学成分的含量，见表2至表5。

供试品溶液的制备方法为：取鱼腥草120g，加水蒸馏提取，收取蒸馏液，备用，并收集蒸馏后的鱼腥草水溶液，然后将蒸馏后的鱼腥草药渣与荔枝草120g，虎杖120g，大黄60g和五倍子60g合并，加水煎煮2次，第一次加总药材重量7倍体积量水，煎煮1.5小时，第二次加总药材重量6倍体积量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液与蒸馏后的鱼腥草水溶液合并，减压浓缩，放冷，然后再加入鱼腥草蒸馏液，即得。按此方法一共制备得到10批次的供试品溶液进行检测。

表2 本发明与外标法分别测痔瘘熏洗剂中的14种成分含量

表3 本发明与外标法分别测痔瘘熏洗剂中的14种成分含量

表4 本发明与外标法分别测痔瘘熏洗剂中的14种成分含量

表5 本发明与外标法分别测痔瘘熏洗剂中的14种成分含量

由以上检测结果表明，本发明提供的检测方法可以同时检测痔瘘熏洗剂中的14种成分含量，检测结果与单一外标法结果准确度一样。

实施例2

1、精密度试验

分别精密吸取同一混合对照品溶液10μL注入液相色谱仪，连续进样6次，按实施例1色谱方法测定。按峰面积计算，没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚RSD分别为3.21％，2.87％，3.40％，3.27％，2.60％，3.11％，3.18％，3.38％，1.16％，3.40％，3.29％，3.35％，0.87％，2.09％，结果表明仪器精密度良好。

2、重复性试验

取同一批号的痔瘘薰洗剂6份，分别按2.1.3制备供试品溶液，按实施例1色谱方法连续测定，按峰面积计算，供试品中没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量RSD分别为3.12％，0.72％，1.71％，3.72％，3.90％，2.27％，3.08％，0.44％，3.70％，2.96％，3.23％，3.63％，1.16％，0.49％结果表明该方法的重复性良好。

3、加样回收率试验

取已知含量的同一批号的痔瘘薰洗剂6份，分别精密加入适量没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的混标溶液，并按实施例1方法制备供试品溶液，测定，计算。结果6次加样平均回收率见表6。结果表明该方法的准确度良好。

表6 加样平均回收率实验结果

4、稳定性试验

取样品液3ml，按实施例1下方法制备供试品溶液，分别于供试品溶液制备后0，2，4，6，8，10，12，24h进样，按实施例1色谱方法测定供试品溶液中没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的峰面积，计算RSD。结果上述各待测成分峰面积的RSD分别为4.12％、1.88％、3.05％、2.70％、4.88％、3.05％、5.16％、5.40％、3.04％、4.64％、4.34％、0.52％、2.98％、1.98％。结果表明24h内供试品溶液的稳定性良好。

由以上实验结果表明，本发明提供的检测方法能同时准确检测14个化合物，并且本发明提供的痔瘘薰洗剂的质量控制方法，精密度高，灵敏度高，稳定性和准确度高，可以客观、全面、准确地评价痔瘘熏洗剂与制剂的质量，对准确控制痔瘘薰洗剂的质量具有重要意义。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种痔瘘薰洗剂的质量检测与控制方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解，配成混合对照品溶液贮备液；

(2)供试品溶液的制备

(3)回归方程的获取

精密吸取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液，用甲醇分别稀释1倍，2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，得到6份稀释的对照品溶液；然后分别精密吸取6份对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪器检测，以测得的响应信号峰面积和被测物的进样浓度用最小二乘法进行线性回归，得到各对照品成分的回归方程以及线性范围；

(4)供试品溶液的检测

精密吸取步骤(2)制备得到的供试品溶液10μL，注入高效液相色谱检测，通过步骤(3)获得的回归方程，检测供试品溶液中各化学成分的含量；

步骤(3)和步骤(4)所述的高效液相色谱仪器检测的色谱条件为：

色谱柱：Hedera-ODS-2 C18柱；

2.根据权利要求1所述的痔瘘薰洗剂的质量检测与控制方法，其特征在于，步骤(1)对照品溶液的制备方法为：精密称取没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解，配成浓度分别为0.0654mg/ml，0.0322mg/ml，0.2456mg/ml，0.0420mg/ml，0.0587mg/ml，0.1627mg/ml，0.1939mg/ml，0.0910mg/ml，0.0337mg/ml，0.0063mg/ml，0.1519mg/ml，0.0142mg/ml，0.0061mg/ml，0.0052mg/ml的混合对照品溶液贮备液。

3.根据权利要求1所述的痔瘘薰洗剂的质量检测与控制方法，其特征在于，步骤(2)供试品溶液的制备方法为：精密吸取痔瘘薰洗剂样品溶液3mL至10mL容量瓶中，称重，加甲醇定容至刻度，超声30min，放冷，补足重量，过0.45μm微孔滤膜，即得。

4.根据权利要求1所述的痔瘘薰洗剂的质量检测与控制方法，其特征在于，步骤(3)的回归方程为：

成分线性方程线性范围ng/ml R值没食子酸 y＝21598x-324.65 2537.0-79.28 0.9999 咖啡酸 y＝44263x-16.5 32.2-1.0 0.9997 虎杖苷 y＝4803.4x+8.05 491.3-15.4 0.9998 金丝桃苷 y＝16369x-4.5 84.1-2.6 0.9999 异槲皮苷 y＝9059.3x+0.15 111.5-3.7 0.9999 槲皮苷 y＝24020x-9.1 162.7-5.1 0.9999 高车前草苷 y＝1809.6x-1.8 775.4-24.2 0.9999 白藜芦醇 y＝7326.6x+1.75 181.9-5.7 0.9999 高车前素 y＝17006x+1.5 67.3-2.1 0.9999 芦荟大黄素 y＝36504x-0.35 25.2-0.8 0.9999 大黄酸 y＝9119.4x+18 303.8-9.5 0.9999 大黄素 y＝44493x+4.65 56.7-1.8 0.9998 大黄酚 y＝36720x+1 12.1-0.4 0.9997 大黄素甲醚 y＝39409x-5.4 5.2-0.163 0.9999

。

5.根据权利要求1至4任一项所述的痔瘘薰洗剂的质量检测与控制方法，其特征在于，所述的痔瘘薰洗剂的制备方法为：先取鱼腥草120至240g，加水蒸馏提取，收取蒸馏液，备用，并收集蒸馏后的鱼腥草水溶液，然后将蒸馏后的鱼腥草药渣与荔枝草120至240g，虎杖120至240g，大黄60至120g和五倍子60至120g合并，加水煎煮2次，第一次加总药材重量7倍体积量水，煎煮1.5小时，第二次加总药材重量6倍体积量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液与蒸馏后的鱼腥草水溶液合并，减压浓缩，放冷，然后再加入鱼腥草蒸馏液，即得。