CN101363819B - 玉叶清火胶囊的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种玉叶清火胶囊的质量控制方法，对玉叶金花和栀子同时进行薄层色谱鉴别，对墨旱莲进行薄层色谱鉴别和对穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯进行含量测定。本发明玉叶清火胶囊的质量控制方法，是一种环保、含测方法分离度好，鉴别方法简化，可操作性强的质量控制方法。
Description
技术领域
本发明属于中药的质量控制、具体涉及玉叶清火胶囊的质量控制方法。
背景技术
玉叶清火胶囊为玉叶清火片的改剂型产品。原片剂处方收载于《中成药地方标准上升国家标准》(眼科耳鼻喉科皮肤科分册)144页，标准代号为WS-11093(ZD-1093)-2002，具有清热解毒，消肿止痛功效，用于喉痹，暴喑，急性咽喉炎属于风热证者。在临床上应用多年，取得比较令人满意的疗效。玉叶清火胶囊处方与片剂相同，由中药材玉叶金花400g、穿心莲300g、栀子100g、墨旱莲150g、倒扣草100g按以下工艺制成：穿心莲100g与栀子粉碎成细粉，剩余穿心莲与其余玉叶金花等三味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30～1.33(50℃)的稠膏，加入上述细粉和淀粉60g，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，加滑石粉适量，混匀，装入胶囊，制成1000粒。处方中玉叶金花为茜草科植物玉叶金花Mussaenda pubescens Ait.f.的干燥茎和根，穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.) Nees的干燥地上部分，栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoodes Ellis的干燥成熟果实，墨旱莲为菊科植物鳢肠Ecliptaprostrata L.的干燥地上部分，倒扣草为苋科植物倒扣草Achyranthes aspera L.的干燥全草。
玉叶清火胶囊提取工艺与玉叶清火片一致，但制剂工艺和辅料不同，故需对其质量控制方法进行研究，制定确实可行的方法保证产品质量和临床疗效。
原片剂质量标准[鉴别]项下有玉叶金花、穿心莲、栀子、墨旱莲薄层色谱鉴别，原片剂质量标准采用高效液相色谱法测定穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量。但经研究发现，该质量控制方法还存在一些问题有待解决：含量测定中供试品提取方法无法有效去除杂质，导致测定峰受杂质干扰、分离度差；鉴别项目较多，导致检测成本增加、周期较长等。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种含测分离度好、鉴别方法简化、可操作性强的玉叶清火胶囊的质量控制方法，进而保证产品质量和临床疗效。
本发明以如下技术方案解决上述技术问题：
玉叶清火胶囊的质量控制方法包括以下步骤中的一种或多种：
1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别：取本品内容物3g，研细，加乙醇或甲醇20～50ml，加热回流或超声处理0.5～1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水15～25ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1～3cm，柱高15～25cm)上，用水50～150ml洗脱，再用20％～95％(体积％，以下同)乙醇50～150ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水50～150ml，煎煮20～60分钟，滤过，滤液浓缩至1～3ml，加无水乙醇或甲醇30～60ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材1g，加乙醇或甲醇20～50ml，加热回流或超声处理0.5～1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇或甲醇1～3ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10～13∶4～6∶1～2)10℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开12～20cm，取出，晾干，喷以1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液(1∶1)的混合液(临用新配)或10％硫酸乙醇或2％香草醛硫酸溶液，在110±5℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别：取本品内容物6g，研细，加甲醇或乙醇30～50ml，超声处理或加热回流0.5～1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝1～4g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，3～8g，内径1cm)上，用甲醇或乙醇30～80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加甲醇或乙醇20～60ml，超声处理或加热回流05～1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(5～7.5∶0.5～1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(50～60∶40～50)为流动相；检测波长为225nm±2nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇或乙醇30～80ml，称定重量，浸泡2～12小时，超声处理30～60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10～30ml，置中性氧化铝柱(100～200目，2.5～7.5g，内径1cm)上，用甲醇或乙醇20～40ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含穿心莲以穿心莲内酯(C20H30O5)和脱水穿心莲内酯(C20H28O4)的总量计，不得少于1.0mg。
优选的技术方案包括下列步骤中的一种或多种：
1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别：
取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1cm，柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用30％乙醇100ml洗脱，收集30％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，加无水乙醇50ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材1g，加乙醇40ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开17cm，取出，晾干，喷以1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液(1∶1)的混合液(临用新配)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别：取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55∶45)为流动相；检测波长为225m。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的玉叶清火胶囊质量控制方法，通过大量试验对比，采用分离度更高的含测方法，将玉叶金花和栀子鉴别同时进行，简化了鉴别方法，并改善了墨旱莲薄层色谱鉴别的效果，从而更有效地保证产品质量。
附图说明
图1是含量测定供试品提取方法一含测图谱。
图2是含量测定供试品提取方法二含测图谱。
具体实施方式
本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下试验研究为本发明的优选过程。
一、玉叶金花和栀子的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备方法比较：
方法一取本品内容物5g，加无水乙醇50ml，静置30分钟，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱(内径1cm，长10cm)上，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(10∶7∶1.5∶1.5)的上层液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。
方法二取本品内容物5g，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。
方法三 取本品内容物5g，加无水乙醇40ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
方法四取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1cm，柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用30％乙醇100ml洗脱，收集30％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。
方法五取本品内容物3g，研细，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1cm，柱高20cm)上，用水100ml洗脱，再用40％乙醇100ml洗脱，收集40％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。
方法六取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1cm，柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用30％乙醇100ml洗脱，收集30％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法分别制备玉叶金花阴性样品溶液和栀子阴性样品溶液。
将上述六种方法进行对比，结果方法一～六中，供试品和对照药材、对照品色谱均有对应斑点，阴性对照无对应斑点，但方法一、二、三色谱中玉叶金花有杂质干扰，方法四～六均可，考虑环保问题，优选四和六。
曾试用硅胶G板、硅胶GF254板、聚酰胺板，分离效果均不如硅胶H板，故不采用。
展开系统曾比较：(1)石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸-水(18∶2∶1∶1)的上层液(2)二氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)(3)三氯甲烷-甲醇(3∶1)(4)三氯甲烷-甲醇-水(10∶6∶1)10℃以下放置分层的下层液(5)三氯甲烷-甲醇-水(13∶4∶1)10℃以下放置分层的下层液(6)三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置分层的下层液，结果(1)、(2)、(3)斑点不圆整，分离效果差，(4)、(5)、(6)展开效果均可，但以(6)最好，比移值适中，薄层分离好，斑点清晰。
经研究发现正常展距下玉叶金花的斑点与杂质无法分离，而展开12～20cm斑点分离效果较好，其中展距为17cm时展开效果最好。
检视方法：对比了碘熏、10％硫酸乙醇液、2％香草醛硫酸液、3％三氯化铁乙醇液、醋酐-硫酸(9∶1)、1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液(1∶1)的混合液(临用新配)等显色剂及紫外光灯365nm下检视等多种方法，10％硫酸乙醇液、2％香草醛硫酸液、1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液(1∶1)的混合液(临用新配)均能鉴别出该斑点，1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液(1∶1)的混合液(临用新配)显色颜色更鲜艳。
该方法在鉴别玉叶金花的同时鉴别栀子，分离效果好，斑点清晰，节省了检测时间。
二、墨旱莲的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备方法比较：
方法一：取本品内容物5g，加乙醇50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。
方法二：取本品5内容物g，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。
方法三：取本品内容物5g，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。
方法四：取本品内容物6g，研细，加无水乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液加在中性氧化铝柱(100～200目，18g，内径1cm)上，用无水乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。
方法五：取本品内容物6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。
方法六：取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。同法制备墨旱莲的阴性样品溶液。
将上述六种方法进行对比，结果方法一～六中，供试品和对照药材、对照品色谱均有对应斑点，阴性对照无对应斑点，但方法一、二色谱中墨旱莲主斑点有杂质干扰，方法三中斑点不够清晰，方法四～六效果相当，但方法六较方法四经济，较方法五环保。
展开系统曾比较：(1)石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸-水(18∶2∶1∶1)的上层液(2)二氯甲烷-丙酮-甲醇(15∶2∶3)(3)正己烷-乙酸丁酯(7.5∶1)(4)环己烷-乙酸丁酯(5∶0.5)(5)环己烷-乙酸丁酯(7.5∶1)。结果系统(1)比移值太小，系统(2)斑点分离效果差，系统(3)、(4)展开效果系统亦不如(5)。
三、穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的的含量测定方法研究
1仪器与试药
仪器：日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪。
对照品：穿心莲内酯化学对照品(含量测定用，批号：110797-200307)，脱水穿心莲内酯化学对照品(含量测定用，批号：0854-200204)，
试剂：甲醇(色谱纯)，水(自制双蒸水)。
样品：玉叶清火胶囊，20041101
2供试品溶液制备方法选择
方法一：取本品内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
方法二：取本品内容物约1.5g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的，滤过，即得。
结果方法二杂质多，干扰大，易污染色谱柱，含量测定准确度受影响；而方法一杂质少，分离效果佳，可有效保证含测准确度，进而保证产品质量。具体见附图1和附图2。
3中性氧化铝上柱用量的考查
考察了中性氧化铝上柱的用量(2.5g、5g、7.5g)，结果中性氧化铝的用量为2.5g时，穿心莲内酯分离较差，而用量为5g和7.5g均能很好地分离，且相对峰面积差别不大。为节约试剂，中性氧化铝的最佳用量为5g。
4超声时间考察
固定浸泡时间为1小时，考察超声时间10、20、30、40、60分钟，结果10、20分钟回收率不好，30、40、60分钟相对峰面积差别不大。从节省时间考虑，超声时间30分钟比较好。
5浸泡时间考察
固定超声时间为30分钟，考察浸泡时间0.5、1、2小时及过夜(12小时)，结果0.5、1小时回收率不好，2小时及12小时相对峰面积差别不大。从节省时间考虑，浸泡时间2小时比较好。
6测定波长的选择
分别精密吸取两种对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，绘制光谱图，结果穿心莲内酯在199.09nm、225.15nm，脱水穿心莲内酯在199.44nm、251.89nm有吸收峰，在199nm测定时干扰较大，在252nm处穿心莲内酯吸收较小，而在225nm处测定，无干扰，且脱水穿心莲内酯亦有较好的吸收。因此选择225nm为测定波长。
7色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55∶45)为流动相；检测波长为225nm±2nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。
流动相比较：(1)甲醇-水(55∶45)；(2)甲醇-水(50∶50)；(3)甲醇-水(60∶40)；(4)甲醇-水(53∶47)；(5)甲醇-水(62∶38)；(6)甲醇-水(48∶52)。
结果流动相(1)-(4)均可分离穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，以(1)为最优，(5)(6)分离效果不佳或峰形不佳。
8阴性样品溶液的测定
取不含穿心莲的阴性样品约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理(功率260W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
吸取阴性样品溶液10μl，注入液相色谱仪，结果在穿心莲的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的位置处无相应色谱峰，表明对样品测定无干扰。
9线性关系考察
9.1穿心莲内酯线性关系考察
精密称取穿心莲内酯对照品10.21mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml、2ml、3ml、5ml、8ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，按上述色谱条件，分别进样10μl，测定，以峰面积积分值A对穿心莲内酯进样量C(μg)进行回归分析，得回归方程：A＝2.24×106C-2.21×104，r＝0.9999。表明穿心莲内酯进样量在0.1021～0.8168μg范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可用单点外标法进行测定和计算，线性关系数据与标准曲线见表1。
表1穿心莲内酯线性关系考察数据
| 进样量(μg) | 峰面积积分值 | 平均积分值 | RSD(％) | ||||
| 0.1021 | 205322 | 205339 | 207790 | 206150 | 0.69 | ||
| 0.2042 | 430782 | 432811 | 433718 | 432437 | 0.35 | ||
| 0.3063 | 665147 | 667361 | 663883 | 666167 | 669404 | 666392 | 0.32 |
| 0.5105 | 1118332 | 1119559 | 1121978 | 1119956 | 0.17 | ||
| 0.8168 | 1800447 | 1810280 | 1803859 | 1804862 | 0.28 | ||
9.2脱水穿心莲内酯线性关系考察
精密称取脱水穿心莲内酯对照品10.33mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml、2ml、3ml、5ml、8ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，按上述色谱条件，分别进样10μl，测定，以峰面积积分值A对脱水穿心莲内酯进样量C(μg)进行回归分析，得回归方程：A＝1.33×106C-2.19×104，r＝0.9999。表明脱水穿心莲内酯进样量在0.2066～1.6528μg范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可用单点外标法进行测定和计算，线性关系数据与标准曲线见表2。
表2脱水穿心莲内酯线性关系考察数据
| 进样量 | 峰面积积分值 | 平均 | RSD |
| (μg) | 积分值 | (％) | |||||
| 0.2066 | 258633 | 256319 | 256703 | 257218 | 0.49 | ||
| 0.4132 | 519213 | 521700 | 520063 | 520325 | 0.25 | ||
| 0.6198 | 799705 | 800992 | 799920 | 800080 | 799386 | 800017 | 0.08 |
| 1.0330 | 1371552 | 1369867 | 1369575 | 1370331 | 0.08 | ||
| 1.6528 | 2178981 | 2171405 | 2174269 | 2174885 | 0.18 | ||
10精密度试验
分别精密吸取穿心莲内酯对照品溶液(30.63μg/ml)及脱水穿心莲内酯对照品溶液(61.98μg/ml)，按上述色谱条件，依法测定，重复进样5次，计算峰面积A的相对标准偏差，结果见表3，表明精密度好。
表3精密度试验
| № | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 穿心莲内酯(A) | 665147 | 667361 | 663883 | 666167 | 669404 | 666392 | 0.32 |
| 脱水穿心莲内酯(A) | 799705 | 800992 | 799920 | 800080 | 799386 | 800017 | 0.08 |
11稳定性试验
取供试品溶液(批号20041101)，分别在放置0、2、4、6、8、24、48、72h时，依法测定峰面积A，计算日内及日间相对标准偏差，结果见表4、表5，表明供试品溶液在72h内稳定性好。
表4日内稳定性试验
| 时间(h) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 24 | 平均值 | RSD(％) |
| 穿心莲内酯(A) | 644906 | 628504 | 621492 | 624612 | 624675 | 636104 | 630045 | 1.41 |
| 脱水穿心莲内酯(A) | 474865 | 462088 | 462648 | 465479 | 463757 | 475649 | 467414 | 1.33 |
表5日间稳定性试验
| 时间(h) | 0 | 24 | 48 | 72 | 平均值 | RSD(％) |
| 穿心莲内酯(A) | 644906 | 636104 | 629983 | 624466 | 633865 | 1.39 |
| 脱水穿心莲内酯(A) | 474865 | 475649 | 471336 | 465019 | 471717 | 1.03 |
12重复性试验
取同一样品(批号：20041101)，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，依法测定，计算含量及相对标准偏差，结果见表5，表明方法重复性较好。
表5方法重复性试验
| № | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD(％) |
| 穿心莲内酯(mg/粒) | 0.723 | 0.741 | 0.724 | 0.709 | 0.734 | 0.722 | 0.726 | 1.52 |
| 脱水穿心莲内酯(mg/粒) | 0.910 | 0.923 | 0.935 | 0.937 | 0.929 | 0.898 | 0.922 | 1.66 |
| 总和(mg/粒) | 1.633 | 1.664 | 1.659 | 1.646 | 1.663 | 1.620 | 1.648 | 1.10 |
13加样回收率试验
精密称取已测知含量的样品(批号20041101，含量：穿心莲内酯2.356mg/g、脱水穿心莲内酯2.994mg/g)0.75g，精密加入混合对照品溶液(穿心莲内酯0.3004mg/ml、脱水穿心莲内酯0.5032mg/ml：精密称取穿心莲内酯对照品15.02mg，脱水穿心莲内酯对照品25.16mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度)5ml，精密加入甲醇45ml，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率，结果见表6、表7，表明方法回收率较好。
表6穿心莲内酯加样回收率试验
| 编号 | 取样量g | 样品量mg | 加入量mg | 测得量mg | 回收量mg | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 123456 | 0.75060.75380.76020.75220.75630.7539 | 1.7681.7761.7911.7721.7821.776 | 1.5021.5021.5021.5021.5021.502 | 3.2933.2893.3373.2593.2933.296 | 1.5251.5131.5461.4871.5111.520 | 101.53100.73102.9399.00100.60101.20 | 101.00 | 1.28 |
表7脱水穿心莲内酯加样回收率试验
| 编号 | 取样量g | 样品量mg | 加入量mg | 测得量mg | 回收量mg | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 123456 | 0.75060.75380.76020.75220.75630.7539 | 2.2472.2572.2762.2562.2642.257 | 2.5162.5162.5162.5162.5162.516 | 4.8034.7894.8894.7484.8254.833 | 2.5562.5322.6132.4922.5612.576 | 101.59100.64103.8699.05101.79102.38 | 101.55 | 1.60 |
上述步骤并不需要按照先后顺序进行，而且同时还可以进行常规检测和穿心莲的薄层色谱鉴别，如性状，该成品性状为硬胶囊，内容物为黄棕色至黄褐色的颗粒；味苦。此外，该成品还应符合中国药典2005年版一部附录VI D胶囊剂项下有关的各项规定。
实施例1：
1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别：取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水15ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1cm，柱高15cm)上，用水50ml洗脱，再用20％乙醇50ml洗脱，收集20％乙乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水50ml，煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，加无水乙醇30ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材1g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶4∶1)10℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开20cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别：取本品内容物6g，研细，加甲醇30ml，加热回流1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝1g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，3g，内径1cm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加甲醇20ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(50∶50)为流动相；检测波长为223nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇30ml，称定重量，浸泡12小时，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液30ml，置中性氧化铝柱(100～200目，2.5g，内径1cm)上，用乙醇20ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例2：
1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别：
取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径1cm，柱高18cm)上，用水100ml洗脱，再用30％乙醇100ml洗脱，收集30％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，加无水乙醇50ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材1g，加乙醇40ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开17cm，取出，晾干，喷以1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液(1∶1)的混合液(临用新配)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
2.用薄层色谱法对药物中墨旱莲进行定性鉴别：
取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55∶45)为流动相；检测波长为225nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例3：
1.用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别：取本品内容物3g，研细，加甲醇30ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水25ml微热使溶解，滤过，加在D101型大孔树脂柱(内径3cm，柱高25cm)上，用水150ml洗脱，再用95％乙醇150ml洗脱，收集95％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材4g，加水150ml，煎煮60分钟，滤过，滤液浓缩至3ml，加甲醇60ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液。再取栀子对照药材1g，加甲醇50ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为栀子对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(11∶5∶1.5)10℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开20cm，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
2.用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别：取本品内容物6g，研细，加乙醇40ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝4g，置水浴上拌匀，干燥，加在中性氧化铝柱(100～200目，8g，内径1cm)上，用乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇60ml，加热回流1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯(6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八乙烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(60∶40)为流动相；检测波长为227nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇80ml，称定重量，浸泡3小时，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱(100～200目，7.5g，内径1cm)上，用甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
Claims (6)
1.一种玉叶清火胶囊的质量检测方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子作以下定性鉴别：取本品内容物3g，研细，加乙醇或甲醇20～50ml，加热回流或超声处理0.5～1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水15～25ml微热使溶解，滤过，加在内径1～3cm、柱高15～25cm的D101型大孔树脂柱上，用水50～150ml洗脱，再用体积％为20％～95％的乙醇50～150ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取玉叶金花对照药材4g，加水50～150ml，煎煮20～60分钟，滤过，滤液浓缩至1～3ml，加无水乙醇或甲醇30～60ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液；再取栀子对照药材1g，加乙醇或甲醇20～50ml，加热回流或超声处理0.5～1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇或甲醇1～3ml使溶解，作为栀子对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B规定的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10～13∶4～6∶1～210℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开12～20cm，取出，晾干，喷以临用新配的1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液为1∶1的混合液或10％硫酸乙醇或2％香草醛硫酸溶液，在110±5℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
2.如权利要求1所述的玉叶清火胶囊的质量检测方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别：取本品内容物6g，研细，加甲醇或乙醇30～50ml，超声处理或加热回流0.5～1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝1～4g，置水浴上拌匀，干燥，加在100～200目、3～8g、内径1cm的中性氧化铝柱上，用甲醇或乙醇30～80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，滤过，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材3g，加甲醇或乙醇20～60ml，超声处理或加热回流0.5～1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～3ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯为5～7.5∶0.5～1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.如权利要求1或2所述的玉叶清火胶囊的质量检测方法，其特征是用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为50～60∶40～50为流动相；检测波长为225nm±2nm；理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇或流动相制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液；
供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇或乙醇30～80ml，称定重量，浸泡2～12小时，超声处理30～60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10～30ml，置100～200目、2.5～7.5g、内径1cm的中性氧化铝柱上，用甲醇或乙醇20～40ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含穿心莲以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量计，不得少于1.0mg。
4.如权利要求1所述的玉叶清火胶囊的质量检测方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的玉叶金花和栀子进行定性鉴别：
取本品内容物3g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml微热使溶解，滤过，加在内径1cm、柱高18cm的D101型大孔树脂柱上，用水100ml洗脱，再用30％乙醇100ml洗脱，收集30％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取玉叶金花对照药材4g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，加无水乙醇50ml，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为玉叶金花对照药材溶液；再取栀子对照药材1g，加乙醇40ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为栀子对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B规定的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为13∶6∶2 10℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开17cm，取出，晾干，喷以临用新配的1％香草醛乙醇溶液-10％硫酸乙醇溶液为1∶1的混合液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与玉叶金花对照药材和栀子对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
5.如权利要求2所述的玉叶清火胶囊的质量检测方法，其特征是用薄层色谱法对药物中的墨旱莲进行定性鉴别：取本品内容物6g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加中性氧化铝3g，置水浴上拌匀，干燥，加在100～200目、5g、内径1cm的中性氧化铝柱上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B规定的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸丁酯为7.5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.如权利要求3所述的玉叶清火胶囊的质量检测方法，其特征是用高效液相色谱法测定该药物中穿心莲的特征成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为55∶45为流动相；检测波长为225nm；理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯30μg、脱水穿心莲内酯60μg的溶液；
供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液20ml，置100～200目、5g、内径1cm的中性氧化铝柱上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含穿心莲以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量计，不得少于1.0mg。
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Granted publication date: 20120418 |
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