CN111190005A

CN111190005A - 新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法

Info

Publication number: CN111190005A
Application number: CN202010109842.6A
Authority: CN
Inventors: 张念林; 何乐春; 胡昌华; 左云国; 孙婵
Original assignee: Chongqing Xinsaiya Biotechnology Co ltd
Current assignee: Chongqing Xinsaiya Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-02-23
Filing date: 2020-02-23
Publication date: 2020-05-22

Abstract

本发明涉及一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，量子垫上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或IgG抗体，硝酸纤维素膜上设置的检测线上包被有SARS‑COV2重组抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG。本发明提供的用于检测新型冠状病毒(SARS‑COV2)IgM抗体或IgG抗体的检测试剂卡，能够快速、准确的得到结果，为临床上的COVID‑19提供辅助诊断。

Description

新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法

技术领域

本发明属于医学免疫学中量子点免疫荧光层析技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法。

背景技术

研究表明：冠状病毒(Coronaviruses)为单股正链RNA病毒，分为α、 β、γ和δ属四个属：新型冠状病毒(SARS-COV2)是一种新型的冠状病毒，属于β属，被列为第七类冠状病毒。2020年1月12日被世界卫生组织命名为新型冠状病毒(SARS-COV2)，能引起病毒性肺炎。

《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版)》表述其潜伏期1-14 天，一般为3-7天。以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍等。新型冠状病毒(SARS-COV2)引起的肺部感染被命名为“新型冠状病毒肺炎”(COVID-19)。新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM 抗体是人体感染新型冠状病毒(SARS-COV2)后，首先快速产生和分泌的抗体，主要存在于血液中。随着疾病的发展而增加，在经过有效治疗后IgM抗体逐渐消失。IgG抗体在感染中晚期出现，滴度有一个持续增高的过程，并在血液循环中保持较长时间存在。临床上可根据新型冠状病毒(SARS-COV2) IgM抗体或IgG抗体的检测结果对新型冠状病毒(SARS-COV2)的感染进行辅助诊断。

新型冠状病毒(2019-nCoV)具有传播快，传染性强、发病急，病程进展快的特点，收治患者的医院面临巨大的压力。其中检测试剂短缺、检测速度慢、患者不能得到快速确诊是其中重要的瓶颈。核酸检测是现阶段确诊新型冠状病毒感染病例的主要实验室检查方法，但也存在一些方法学的局限性。检测特异抗体可以明确患者是否“近期或既往感染过新型冠状病毒”，弥补临床新型冠状病毒(SARS-COV2)的感染检验方法学单一，检验繁琐，检验要求高等不足之处。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种制作简便、反应快速、特异性强的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，其中所述的样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在衬板上，所述量子垫的一端设在样品垫的一端与衬板之间，另一端设在硝酸纤维素膜上，所述硝酸纤维素膜的一端设在量子垫的一端与衬板之间，另一端设在吸水纸的一端与衬板之间；

所述的量子垫上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或者抗人IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜上自所述的样品垫所在侧向着所述的吸水纸所在侧依次设置有检测线和质控线，所述的检测线上包被有SARS-COV2重组抗原，所述的质控线上包被有羊抗鼠IgG。

优选地，所述的SARS-COV2重组抗原的浓度为0.8～1mg/mL。

优选地，所述的量子点微球包括量子点聚苯乙烯微球、沉积在所述的量子点聚苯乙烯微球表面的一层或多层聚电解质层，所述的聚电解质层包括由聚丙烯胺盐酸盐形成的内层以及由聚苯乙烯磺酸钠形成的沉积在所述的内层表面的外层。

具体地，所述的量子点微球通过如下步骤制备得到：

(1)将所述的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30～60min形成所述的聚电解质层的内层，离心去除多余的聚丙烯胺盐酸盐；

(2)将步骤(1)制得的形成有所述的内层的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30～60min形成所述的聚电解质层的外层，离心去除多余的聚苯乙烯磺酸钠；

(3)选择性地重复步骤(1)和步骤(2)，得到所述的量子点微球。

本发明中，所述的量子点聚苯乙烯微球可以采用市购获得的量子点聚苯乙烯微球，或者采用本领域常规方法制得的量子点聚苯乙烯微球。

更具体地，步骤(1)中，所述的量子点聚苯乙烯微球与所述的聚丙烯胺盐酸盐的投料质量比为1：60～70；步骤(2)中，所述的形成有所述的内层的量子点聚苯乙烯微球与所述的聚苯乙烯磺酸钠的投料质量比为1： 60～70。

更具体地，步骤(1)中，所述的量子点聚苯乙烯微球加水稀释至浓度为2.5～4mg/mL。

更具体地，步骤(1)中，所述的聚丙烯胺盐酸盐溶液的浓度为1～3mg/mL。

更具体地，步骤(2)中，形成有所述的内层的量子点聚苯乙烯微球加水稀释至浓度为2.5～4mg/mL。

更具体地，步骤(2)中，所述的聚苯乙烯磺酸钠溶液的浓度为1～3mg/mL。

优选地，所述的量子点微球与所述的抗体的投料质量比为1：0.8～1.2。

优选地，所述的量子点微球中的量子点为CdSe/CdS和/或CdSe/ZnS。

优选地，所述的量子垫为经过预处理的量子垫，所述的预处理的方法为：将量子垫浸没在量子垫优化缓冲液中，然后干燥并控制湿度在30％以下，其中，所述的量子垫优化缓冲液包括浓度为45～55mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.8～1.2％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温 20、质量百分浓度为1.8～2.2％的蔗糖、质量百分浓度为0.08～0.12％的 proclin300、以及余量的纯化水。

本发明的另一个目的是提供一种所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡的制备方法，包括如下步骤：

(1)将所述的量子点微球分散在磷酸盐缓冲液中，然后加入所述的抗体，10～40℃摇床孵化1.5～2.5h，再加入量子点微球封闭液，孵化2～3h，离心过滤得到所述的量子点微球标记的抗体，其中，所述的量子点微球封闭液包括质量百分浓度为8～12％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.04～0.06％的 NaN₃、以及余量的纯化水；

(2)将步骤(1)制得的所述的量子点微球标记的抗体用量子点稀释缓冲液稀释至0.4～0.6μmol/L，然后以0.8～1.2μL/cm的量喷涂在所述的量子垫上，干燥制得包被有量子点微球标记的抗体的量子垫，其中，所述的量子点稀释缓冲液包括浓度为90～110mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.8～1.2％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为1.8～2.2％的蔗糖、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水；

(3)将所述的硝酸纤维素膜粘贴到所述的衬板上，将所述的SARS-COV2 重组抗原用印膜缓冲液稀释成0.8～1mg/mL，其中SARS-COV2重组抗原为哺乳动物细胞体外培养获得的SARS-COV2刺突糖蛋白(Spike Protein)片段，包含400-950个氨基酸。然后将所述的羊抗鼠IgG用印膜缓冲液稀释成0.4～0.8mg/mL，然后分别以0.8～1.2μL/cm的量喷涂在所述的硝酸纤维素膜，干燥制得所述的检测线和所述的质控线，其中，所述的印膜缓冲液包括浓度为0.01～0.03mol/L、pH7～7.4的PBS缓冲液、质量百分浓度为0.8～1.2％的海藻糖、浓度为8～12mmol/L的乙二胺四乙酸、质量百分浓度为0.08～0.12％的 proclin300；

(4)将经步骤(3)处理后的粘贴有硝酸纤维素膜的衬板、样品垫、经步骤(2)处理后的量子垫、吸水纸进行组装得到所述的检测试剂卡。

优选地，所述的制备方法还包括对所述的样品垫进行预处理的步骤：将样品垫浸没在样品垫优化缓冲液中，然后干燥并控制湿度在30％以下，其中，所述的样品垫优化缓冲液包括浓度为45～55mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水。

本发明的第三个目的是提供一种所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡在新型冠状病毒(SARS-COV2)抗体检测中的应用。

优选地，采用iSIA01荧光免疫分析仪进行检测。

本发明的技术原理是：采用捕获法检测新型冠状病毒(2019-nCoV)IgM 抗体或IgG抗体。当样本垫上加入含有待检测物质的待测样本，样本通过虹吸作用流经量子垫和膜后在T线形成固相2019-nCoV抗原-SARS-COV2 IgM抗体或IgG抗体-量子点标记的抗人IgM抗体或抗人IgG抗体，在C线形成固相羊抗鼠IgG-量子点标记的抗人IgM抗体或抗人IgG抗体。点样后通过分析仪分别读取检测线和质控线的信号值，根据SD卡内置信息判断新型冠状病毒 (SARS-COV2)IgM抗体或IgG抗体的阴阳性。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明提供的用于检测新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体或IgG抗体的检测试剂卡，能够快速、准确的得到结果。本发明采用量子点免疫荧光法检测血清、血浆、全血中的新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体或IgG抗体，根据检测结果能够判断新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体或IgG抗体的阴阳性，进而为临床上的相关疾病提供辅助诊断。

本发明的优点主要有：

1、该试剂卡采用量子点免疫荧光法，利用量子点材料的独特性质，使得检测灵敏度、精密性、稳定性大大提高，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间为3-10min；

2、该试剂卡可通过荧光免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠的诊断结果；

3、该试剂卡制作方便，体积小、便于携带。检测成本较低、可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断；易于保存，有利于基层单位推广。

附图说明

附图1为本发明试纸条的结构示意图；

其中，1：样品垫；2：量子垫；3：硝酸纤维素膜；4：吸水纸；5：衬板；6：检测线；7：质控线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件，本发明中的试剂均可市购获得。

实施例

1、检测试剂卡的制备

1、样品垫1的优化：

1.1、材料与试剂：

(1)样品垫1：玻璃纤维材质。

(2)样品垫优化缓冲液：50mmol/L、pH8.2的三羟甲基氨基甲烷(tris)、质量百分浓度为0.5％的吐温20、质量百分浓度为0.1％的proclin300、以及余量的纯化水。

1.2、将样品垫1浸没在样品垫优化缓冲液中，浸没30～45min，然后干燥间干燥5h以上，湿度控制在30％以下。

2、量子垫2的优化：

2.1、材料与试剂

(1)量子垫2：玻璃纤维材质。

(2)量子垫优化缓冲液：50mmol/L、pH8.2的三羟甲基氨基甲烷(tris)、质量百分浓度为1％的牛血清白蛋白(BSA)、质量百分浓度为0.5％的吐温 (Tween)20、质量百分浓度为2％的蔗糖、质量百分浓度为0.1％的proclin300、以及余量的纯化水。

2.2、将量子垫2浸没在量子垫优化缓冲液中，浸没30～45min，然后干燥间干燥5h以上，湿度控制在30％以下。

3、量子点微球的制备：

3.1、材料与试剂

(1)量子点聚苯乙烯微球：来源是自制或者外购，量子点为CdSe/CdS。

(2)聚丙烯胺盐酸盐(PAH)溶液：浓度为2mg/mL，溶剂为超纯水。

(3)聚苯乙烯磺酸钠(PSS)溶液：浓度为2mg/mL，溶剂为超纯水。

3.2、制备步骤：

(1)将量子点聚苯乙烯微球纯化后分散在超纯水中，稀释至浓度为3 mg/mL，取3mL量子点聚苯乙烯微球水分散液，加入200mL的聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30min，然后以12000r/min的转速离心去除多余的PAH聚电解质；

(2)将步骤(1)制得的量子点聚苯乙烯微球分散在超纯水中，稀释至浓度为3mg/mL，取3mL量子点聚苯乙烯微球水分散液，加入200mL的聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30min，然后以12000r/min的转速离心去除多余的PSS聚电解质；

(3)将步骤(2)制得的量子点聚苯乙烯微球分散在超纯水中，稀释至浓度为3mg/mL，取3mL量子点聚苯乙烯微球水分散液，加入200mL的聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30min，然后以12000r/min的转速离心去除多余的PAH聚电解质；

(4)将步骤(3)制得的量子点聚苯乙烯微球分散在超纯水中，稀释至浓度为3mg/mL，取3mL量子点聚苯乙烯微球水分散液，加入200mL的聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30min，然后以12000r/min的转速离心去除多余的PSS聚电解质；

(5)将步骤(4)制得的量子点聚苯乙烯微球分散在超纯水中，稀释至浓度为3mg/mL，取3mL量子点聚苯乙烯微球水分散液，加入200mL的聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30min，然后以12000r/min的转速离心去除多余的PAH聚电解质；

(6)将步骤(5)制得的量子点聚苯乙烯微球分散在超纯水中，稀释至浓度为3mg/mL，取3mL量子点聚苯乙烯微球水分散液，加入200mL的聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30min，然后以12000r/min的转速离心去除多余的PSS聚电解质，制得沉积有三层聚电解质层的量子点微球，其中，每层聚电解质层分别包括由聚丙烯胺盐酸盐形成的内层以及由聚苯乙烯磺酸钠形成的沉积在内层表面的外层。

上述步骤中，量子点微球制备数据：保持电解质层组成成分：聚丙烯胺盐酸盐(PAH)溶液浓度不变，聚苯乙烯磺酸钠(PSS)溶液浓度不变。对量子点聚苯乙烯微球的制备内容进行确定，如表1所示。

表1

注：表中“—、+”代表信号值强弱程度

由表1的结果可知，选择量子点聚苯乙烯微球浓度为2.5-4之间效果基本相同。为保证信号强度，取3mg/mL最为合适。

4、量子点微球标记的抗体的制备：

4.1、材料与试剂

(1)步骤3制得的量子点微球。

(2)磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)：组成为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠。

(3)抗体：抗人IgM抗体或抗人IgG抗体。

(4)量子点微球封闭液：质量百分浓度为10％的牛血清白蛋白(BSA)、质量百分浓度为0.05％的NaN₃、以及余量的纯化水。

4.2、将1mg量子点微球加入10mL磷酸盐缓冲液中，超声分散均匀；然后加入0.8mg的抗人IgM抗体或抗人IgG抗体，室温摇床孵育2h，使抗人IgM 抗体或抗人IgG抗体与量子点微球结合；加入0.5mL的量子点微球封闭液，孵化2.5h，然后以12000r/min的速度离心30min，离心2次，4℃保存。

5、包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或抗人IgG抗体的量子垫2 的制备：

5.1、材料与试剂

(1)步骤2优化后的量子垫2。

(2)步骤4制得的量子点微球标记的抗人IgM抗体或抗人IgG抗体。

(3)量子点稀释缓冲液：浓度为100mmol/L、pH8.2的三羟甲基氨基甲烷(tris)、质量百分浓度为1％的牛血清白蛋白(BSA)、质量百分浓度为0.5％的吐温(Tween)20、质量百分浓度为2％的蔗糖、质量百分浓度为0.1％的 proclin300、以及余量的纯化水。

5.2、将量子点微球标记的抗人IgM抗体或抗人IgG抗体用量子点稀释缓冲液稀释至0.5μmol/L，然后用划膜喷金仪以1μL/cm的量喷涂在量子垫2 上，干燥0.5h。

6、硝酸纤维素膜3上检测线6和质控线7的制备：

6.1、材料与试剂

(1)硝酸纤维素膜3。

(2)衬板5：PVC板。

(3)新型冠状病毒(SARS-COV2)重组抗原，由市购获得。

(4)羊抗鼠IgG。

(5)印膜缓冲液：浓度为0.01～0.03mol/L、pH7.2的PBS缓冲液、质量百分浓度为1％的海藻糖、浓度为10mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)、质量百分浓度为0.1％的proclin300。

6.2、将硝酸纤维素膜3粘贴到衬板5上，固定质控线羊抗鼠IgG的前提下，搭配不同重组片段大小或区域的新型冠状病毒(SARS-COV2)抗原，优选出刺突糖蛋白(S1)重组抗原。将选定的重组抗原用印膜缓冲液分别稀释成5个浓度规格的样品，浓度分别为0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、 1.0mg/mL、2mg/mL，搭配用印膜缓冲液稀释成0.8mg/mL的羊抗鼠IgG对 SARS-COV2重组抗原使用浓度进行确定。将新型冠状病毒(SARS-COV2)重组抗原稀释液用划膜喷金仪以1μL/cm的量喷涂在硝酸纤维素膜3上，干燥 0.5h制得检测线6；将羊抗鼠IgG稀释液用划膜喷金仪以1μL/cm的量喷涂在硝酸纤维素膜3上，干燥0.5h制得质控线7。浓度确定数据见下表2。

表2

根据表2结果可知，当重组抗原浓度为0.8mg/mL时，可满足实验要求；当重组抗原浓度＞0.8mg/mL时，T线信号值变化趋于平稳，但会提高生产成本，所以选取重组抗原浓度为0.8mg/mL。

7、检测试剂卡的组装

将步骤6制得的粘贴有硝酸纤维膜的衬板5、步骤1优化后的样品垫1、步骤5制得的量子垫2、吸水纸4按照由上到下、由内到外的顺序组装得到检测试剂卡，如图1所示。

采用本发明的试剂卡在对新型冠状病毒抗体测试样本进行检测的操作程序如下：

1、样本采集

采用正确医用技术收集血液样本(全血样本：可用EDTA抗凝采血管，采血后半小时内进行检测，2～8℃最长不超过12小时。分离后的血清血浆样本应在室温条件下4小时内完成检测；若不能及时检测，血清、血浆样本在2～8℃保存可储存24小时；长期请于-20℃以下密封，保存避免反复冻融。本项目优先选择血清样本进行检测。)。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

2、实验方法

1)准备

取出检测卡和待测样本，平衡至室温后，拆开检测卡的铝箔袋包装并混匀液体组分。

2)校准

确认SD卡与试剂盒批号匹配，将SD卡插入仪器中，具体操作步骤详见规定型号仪器使用说明。

3)样本测定

以血清/血浆/全血为检测样本时，取20μL加入样本稀释液中，混匀后取80μL垂直滴加于加样孔内。

4)检测

将检测卡插入仪器，选择仪器自动计时，读取并打印结果。

将本发明的试剂卡分别进行实验室性能验证和临床适用性验证。

一、实验室性能验证

按照方法学鉴定，达到如下指标：

1、最低检测限

将新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体和IgG抗体的灵敏度参考品1:2、 1:6、1:18稀释，稀释度为1:2、1:6的参考品检测应全为阳性，稀释度为1:18 的参考品检测应全为阴性，如表3。

表3为检测试剂卡的最低检测限检测结果

从表3可见，本发明检测试剂卡的灵敏度符合要求。

2、阴性符合率

检测5份新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体和IgG抗体阴性参考品 (N1-N5)，抗体结果全部为阴性，如表4；

表4为检测试剂卡的阴性符合率检测结果

名称	IgM抗体	IgG抗体
			阴性参考品N1	-	-
阴性参考品N2	-	-
			阴性参考品N3	-	-
阴性参考品N4	-	-
			阴性参考品N5	-	-

从表4可见，检测试剂卡的阴性符合率为100％。

3、阳性符合率

检测5份新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体和IgG抗体阳性参考品 (P1-P5)，抗体结果全部为阳性，如表5；

表5为检测试剂卡的阳性符合率检测结果

名称	IgM抗体	IgG抗体
			阳性参考品P1	+	+
阳性参考品P2	+	+
			阳性参考品P3	+	+
阳性参考品P4	+	+
			阳性参考品P5	+	+

从表5可见，检测试剂卡的阳性符合率为100％。

4、重复性

取同一批号的检测试剂10人份，检测重复性参考品(R)，检测结果一致，检测结果应均为阳性。

上述所有表格中，+表示阳性，-表示阴性。

二、临床适用性验证

将300份血清样本测值与临床确诊结果进行对比，比较本发明试剂卡与样本临床检测结果的阴阳性符合率，统计结果如表6到表11所示。

1.临床验证结果1

试剂的检测结果与核酸检测结果阴阳性符合率及一致性分析结果见表6和表7：

表6

表7

2.临床验证结果2

试剂的检测结果与核酸检测结果阴阳性符合率及一致性分析结果见表8和表9：

表8

表9

3.临床验证结果3

试剂的检测结果与核酸检测结果阴阳性符合率及一致性分析结果见表10和表11：

表10

表11

以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫(1)、量子垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水纸(4)和衬板(5)，其特征在于：所述的样品垫(1)、量子垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水纸(4)依次粘贴在衬板(5)上，所述量子垫(2)的一端设在样品垫(1)的一端与衬板(5)之间，另一端设在硝酸纤维素膜(3)上，所述硝酸纤维素膜(3)的一端设在量子垫(2)的一端与衬板(5)之间，另一端设在吸水纸(4)的一端与衬板(5)之间；

所述的量子垫(2)上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或者抗人IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜(3)上自样品垫(1)所在侧向着吸水纸(4)所在侧依次设置有检测线(6)和质控线(7)，所述的检测线(6)上包被有SARS-COV2重组抗原，所述的质控线(7)上包被有羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的SARS-COV2重组抗原的浓度为0.8～1mg/mL。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子点微球包括量子点聚苯乙烯微球、沉积在量子点聚苯乙烯微球表面的一层或多层聚电解质层，所述的聚电解质层包括由聚丙烯胺盐酸盐形成的内层以及由聚苯乙烯磺酸钠形成的沉积在内层表面的外层。

4.根据权利要求3所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子点微球通过如下步骤制备得到：

(1)将所述的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30～60min形成聚电解质层的内层，离心去除多余的聚丙烯胺盐酸盐；

(2)将步骤(1)制得的形成有内层的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30～60min形成聚电解质层的外层，离心去除多余的聚苯乙烯磺酸钠；

(3)选择性地重复步骤(1)和步骤(2)，得到量子点微球。

5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：步骤(1)中，所述的量子点聚苯乙烯微球与聚丙烯胺盐酸盐的投料质量比为1：60～70；步骤(2)中，所述的形成有内层的量子点聚苯乙烯微球与聚苯乙烯磺酸钠的投料质量比为1：60～70。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子点微球中的量子点为CdSe/CdS和/或CdSe/ZnS。

7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子垫(2)为经过预处理的量子垫，所述的预处理的方法为：将量子垫(2)浸没在量子垫优化缓冲液中，然后干燥并控制湿度在30％以下，其中，所述的量子垫优化缓冲液包括浓度为45～55mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.8～1.2％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为1.8～2.2％的蔗糖、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水。

8.一种如权利要求1至7中任一项所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将所述的量子点微球分散在磷酸盐缓冲液中，然后加入抗体，10～40℃摇床孵化1.5～2.5h，再加入量子点微球封闭液，孵化2～3h，离心过滤得到量子点微球标记的抗体，其中，所述的量子点微球封闭液包括质量百分浓度为8～12％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.04～0.06％的NaN₃、以及余量的纯化水；

(2)将步骤(1)制得的量子点微球标记的抗体用量子点稀释缓冲液稀释至0.4～0.6μmol/L，然后以0.8～1.2μL/cm的量喷涂在量子垫(2)上，干燥制得包被有量子点微球标记的抗体的量子垫(2)，其中，所述的量子点稀释缓冲液包括浓度为90～110mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.8～1.2％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为1.8～2.2％的蔗糖、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水；

(3)将硝酸纤维素膜(3)粘贴到衬板(5)上，将SARS-COV2重组抗原用印膜缓冲液稀释成0.8～1mg/mL，将羊抗鼠IgG用印膜缓冲液稀释成0.4～0.8mg/mL，然后分别以0.8～1.2μL/cm的量喷涂在硝酸纤维素膜(3)，干燥制得检测线(6)和质控线(7)，其中，所述的印膜缓冲液包括浓度为0.01～0.03mol/L、pH7～7.4的PBS缓冲液、质量百分浓度为0.8～1.2％的海藻糖、浓度为8～12mmol/L的乙二胺四乙酸、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300；

(4)将经步骤(3)处理后的粘贴有硝酸纤维素膜(3)的衬板(5)、样品垫(1)、经步骤(2)处理后的量子垫(2)、吸水纸(4)进行组装得到检测试剂卡。

9.根据权利要求8所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡的制备方法，其特征在于：

还包括对样品垫(1)进行预处理的步骤：将样品垫(1)浸没在样品垫优化缓冲液中，然后干燥并控制湿度在30％以下，其中，所述的样品垫优化缓冲液包括浓度为45～55mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水。

10.一种如权利要求1至7中任一项所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡在新型冠状病毒抗体检测中的应用。