CN102288758A

CN102288758A - 一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法

Info

Publication number: CN102288758A
Application number: CN2011102172371A
Authority: CN
Inventors: 李习荣
Original assignee: BEIJING ZHONGJIAN ANTAI DIAGNOSTIC TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: BEIJING ZHONGJIAN ANTAI DIAGNOSTIC TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-07-29
Filing date: 2011-07-29
Publication date: 2011-12-21

Abstract

本发明公开了一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HAV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，所述重组甲型肝炎病毒抗原浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于4mg/ml；所述鼠抗人IgM单抗浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下为两条带。本发明的有益效果为：甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于甲型肝炎病毒IgM的检测和控制效果明显。

Description

一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗体检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

甲型肝炎(hepatitis A，简称HA)的病原体是甲型肝炎病毒(HAV)，为直径27nm的小RNA病毒(picornavirus)。病毒存在于病人的粪便、血清、胆汁与肝细胞浆中，在体外抵抗力强，60℃加热4小时不死；能耐受pH 3.0的环境；在低温下能长期存活。

常用的甲型肝炎血清抗体的检查方法主要有血球凝集试验、酶联免疫试验、放免试验等，但由于血球凝集试验操作复杂、放免具有放射污染等固有的缺陷，酶联免疫现已成为临床应用最广的实验室检查方法之一。抗-HAV-IgM是甲肝早期诊断的主要指标。血清IgM的出现与临床症状及生化指标异常的时间一致，1-2个月后抗体滴度和阳性率下降，3-4个月基本消失。但ELISA法操作复杂、检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分离、洗涤和显色等操作，大概需要用两个小时以上。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可以快速定性检测血清样本中的甲型肝炎病毒IgM抗体的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HAV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，

所述重组甲型肝炎病毒抗原浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；

所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于4mg/ml；

所述鼠抗人IgM单抗浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下为两条带。

本发明的另一个目的是提供一种根据所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HAV-Ag稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；

(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为10-23μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫干燥保存；

(3)切割装配：在反应膜所在胶板的上部揭去1.5cm宽的不干胶纸，粘贴上粗纤维滤纸，使纸的下部压住反应膜，揭去反应膜下部的0.9cm的不干胶纸，贴上HAV-IgM金结合物垫，并且金结合物垫的上部压住反应膜1mm，再揭去金结合物垫下部的的不干胶纸，贴上样品垫，样品垫的上部压住金结合物垫的下部1mm，制成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。

上述制备方法中，所述步骤(1)和(2)的干燥条件为37℃干燥3小时。

上述制备方法中，所述步骤(2)的鼠抗人IgM单抗的标记浓度为15μg/ml。。

本发明的有益效果为：甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于甲型肝炎病毒IgM的检测和控制效果明显。

具体实施方式

一、生产工艺条件的确定

1、反应膜包被条件的优化：

1.1检测线包被浓度和胶体金标记鼠抗人IgM稀释比例的选择：

按照确定好的标记条件进行标记，将其体积浓缩至原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/10，再以不同的稀释比例稀释浓缩液，用稀释液浸泡金标垫，1.5ml/条，干燥后与以不同检测线包被浓度，0.1μl/mm的包被量包被好的HAV-IgM反应膜进行配对，检测内控血清。实验方案如表1，实验结果如表2、3：

表1

表2

P1

P2

P3

P4

P5

P6

P7

P8

P9

P10

P11

P12

P13

P14

P15

1∶8

A1B1

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A1B2

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A4B4

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±

表3

N1

N2

N3

N4

N5

N6

N7

N8

N9

N10

N11

N12

N13

N14

N15

A1B1

-

A1B2

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-

A1B3

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A1B4

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-

A2B1

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A2B2

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A2B3

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A2B4

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A3B1

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A3B2

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A3B3

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A3B4

-

A4B1

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A4B2

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A4B3

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A4B4

-

通过表2、3实验可知，A3B3与A3B4两组实验结果比较理想。

浓缩液稀释比例为1∶5，检测线包被浓度为1.0mg/ml到2.0mg/ml时，HAV-IgM反应膜质控线和检测线显色效果较好，且灵敏度，特异性较好。在此选择A3B2配对组合。即：

胶体金结合物稀释液加入至原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/2，浸泡金标垫1.5mL/条，为胶体金标记后金结合物垫制备条件。

检测线包被浓度为1.0mg/ml，0.1μl/mm喷点量。

1.2质控线包被浓度的选择：

将羊抗鼠IgG配成不同浓度，与重组HAV-Ag 1.0mg/ml，以0.1μl/mm喷点量，分别包被在硝酸纤维素膜的质控线和检测线位置上，进行干燥后，与制备好的金结合物垫配组，用企业参考品血清进行检测，检测结果如表4：

表4

由表4结果可知：当质控线浓度为1.0mg/ml、1.5mg/ml时，质控线显线较其浓度较弱，而当检测强阳性样本时质控线显线更弱，这主要由于检测线与质控线的竞争引起来的。当质控线浓度为3.0mg/ml以上时，质控线显线较粗且不规则。综合以上实验结果，我们选取2.0mg/ml作为质控线的包被浓度。

为此反应膜最终包被条件为：

喷点量为0.1μL/mm，

质控线包被浓度：羊抗鼠IgG抗体为2.0mg/ml

检测线包被浓度：重组HAV-Ag为1.0mg/ml

2、胶体金颗粒的选择：

2.1原理：根据煮沸条件下氯金酸与柠檬酸三钠发生氧化还原反应制备胶体金。可以通过调节氯金酸和柠檬酸三钠的加入比例来改变和控制胶体金的颗粒大小。

2.2操作：在100mL双蒸水中加入0.1mL 10％氯金酸煮沸、在搅拌条件下加入不同体积的1％柠檬酸三钠溶液，煮沸5分钟，制备不同条件的胶体金颗粒，待其自然冷却回复至原体积。用鼠抗人IgM单抗标记不同颗粒的胶体金，然后再用企业内控品进行检测。

结果见表5：

表5.

液体加入顺序	单位	1	2	3	4
						纯化水	毫升	100	100	100	100
1％氯金酸	微升	1000	1000	1000	1000
						1％柠檬酸三钠	毫升	1	1.4	1.8	2.0
胶体金外观	颜色	紫色清亮	紫红清亮	鲜红清亮	橙红清亮
						波峰范围	nm	548	535	525	518

用制备的四种胶体金标记鼠抗人IgM单抗与重组HAV-Ag包被的反应膜配比，再用内控血清进行检测。结果见表6

表6.

结果分析：由表6结果可知，3号制金条件制的胶体金，颜色鲜红、清亮，无混浊及漂浮物，标记后的胶体金其特异性、敏感性较好。故选择制金条件为：0.01％氯金酸100ml+1.8ml 1％柠檬酸三钠。

3、胶体金标记鼠抗人IgM单抗条件的优化：

3.1原理：

根据胶体金标记技术特性，将胶体金中细微的金颗粒与纯化的鼠抗人IgM单抗稳定结合，形成红色的胶体金鼠抗人IgM单抗结合物。

3.2胶体金标记最适pH值的选择：

采用目测法。取若干个1.5mL试管，分别加入1mL胶体金；用0.1M K₂CO₃或5M盐酸将pH分别调为3，4，5，6，7，8，9，10；取96孔酶标板，按pH从低到高分别将上述胶体金分别取100μL加入孔中，重复三次；每孔分别加入3μL浓度为1mg/mL的鼠抗人IgM单抗，混合，室温下放置40min；每孔分别加入20μL浓度为10％NaCl溶液，混匀，室温下放置2小时；观察胶体金颜色变化，记录保持红色的最低pH(X)。调整pH为X-1.0、X-0.5、X、X+0.5、X+1.0，重复以上步骤，保持红色的最低pH值即为标记的最佳pH值。结果如表7：

表7

结论：由表7结果可知，当PH值为8.5时，即加入0.1MK₂CO₃ 20μl/ml时，胶体金标记鼠抗人IgM单抗的效果较好，稳定性好，因此选定PH值8.5(即加入0.1MK₂CO₃ 20μl/ml)为胶体金标记鼠抗人IgM单抗的最适PH值。

3.3鼠抗人IgM单抗最佳标记量的选择：

3.3.1最低标记量：盐沉淀法和梯度法。首先采用盐沉淀法选择鼠抗人IgM单抗的最低标记量，然后用交叉配比法选出鼠抗人IgM单抗的最佳标记量。取96孔酶标板，分别加入最佳pH的胶体金100μL，重复3次；各孔依次加入不同量的蛋白，混匀，室温下放置40min；加入20μL 10％NaCl，室温下放置2h；颜色仍保持红色的为标记的最低蛋白用量。结果如表8：

表8

由表8实验结果可知：鼠抗人IgM单抗的最低标记量为5μg/mL。

3.3.2最佳标记量选择：用0.1M K₂CO₃溶液调PH到8.5，然后分别加入5μg-30μg/mL标记用鼠抗人IgM单抗，搅拌40分钟，再加入10％的牛血清白蛋白至终浓度为1％，搅拌15分钟。12000rpm 4℃离心40分钟，小心弃去上清液，加入胶体金结合物稀释液。铺金，干燥后，与以最适包被条件包被好的HAV-IgM反应膜配对，检测其特异性和灵敏度。结果见表9：

表9

由表9结果可知：在PH值8.5条件下，鼠抗人IgM单抗标记浓度为10μg/mL时，试纸条的特异性和敏感性较好，灵敏度较高。因此我们确定的标记条件为：每毫升胶体金加入0.1M碳酸钾溶液20μL，鼠抗人IgM单抗标记浓度为15μg/mL为最终生产工艺条件。

4HAV-IgM反应膜和金标垫干燥条件的选择

将干燥完毕的反应膜和金标垫，制备成试纸条，封入铝箔袋中，置于37℃保存14天。定期检测。

适宜的干燥条件，不仅影响试剂盒的灵敏度，而且关系到试剂盒的稳定性.结果表明，在干燥环境为37℃条件下，干燥3小时制备的试纸条，其敏感性，稳定性均较好，故选择37℃条件下干燥3小时为反应膜及金结合物垫生产的干燥条件。

实施例1：

1.原料来源

甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)制备的各原料及稀释液来源及用量见下表10：

表10.原料及稀释液来源及用量

2、原料要求：

2.1重组HAV抗原

(1)外观：无色透明液体；

(2)浓度及纯度要求：浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下仅存一条带；

2.2羊抗鼠IgG抗体

(1)外观：无色透明液体；

(2)浓度要求：浓度大于4mg/ml；

2.3鼠抗人IgM单抗

(1)外观：无色透明液体；

(2)浓度及纯度要求：浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE蛋白电泳检测，重链/轻链均为单一区带；

3.液体配制：

3.10.05M PBS缓冲液的配制：

(1)标准配方：按照100mL量计。

(2)配制方法：

按照标准配方内容准确称取Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、NaCl加纯化水80.00mL，搅拌使充分溶解后，使用pH计测量液体pH值应在7.30～7.50范围内，用纯化水两倍稀释检测所配溶液的电导率应在9000μs/cm～13000μs/cm，用纯化水定容至100.00mL，混合均匀。2～8℃保存备用，有效期14天。

3.21％氯金酸溶液的配制：

(1)标准配方：按照100mL量计。

氯金酸 1.0g

纯化水定容至100.0ml

(2)配制方法：

取一支1g/支的氯金酸，打开瓶子；量取2ml纯化水倒入容器内，取纯化水把氯金酸溶解并且将盛放氯金酸的试剂瓶清洗干净，将清洗液倒入容器内，再加纯化水至100ml；盖紧瓶盖，充分摇晃15分钟，混合均匀，用铝箔包好，2～8℃保存备用，有效期12个月。3.30.1M碳酸钾溶液配制：

(1)标准配方：按照20mL量计。

K₂CO₃ 0.276g

纯化水 20.0mL

(2)配制方法：

量取待配液体积80％的纯化水于试剂瓶中，按照标准配方内容准确称取K2CO3加入试剂瓶中，加纯化水至20.0mL，使充分溶解。2～8℃保存备用，有效期14天。

3.410％牛血清白蛋白溶液的配制：

(1)标准配方：按照10mL量计。

牛血清白蛋白 1.00g

纯化水 10.00mL

(2)配制方法：

量取待配液体积80％的纯化水于试剂瓶中，按照标准配方内容准确称取牛血清白蛋白加入试剂瓶中，待完全溶解，加纯化水至10.00mL，使充分溶解，即用即配。

3.5胶体金结合物稀释液的配制：

(1)标准配方：按照100mL量计。

(2)配制方法：

按照标准配方内容准确称取三羟甲基氨基甲烷于容器中，加纯化水80mL，搅拌使充分溶解后，然后滴加盐酸使其pH值调制到9.0，再将称量好的其他配方组分依次加入上述溶液中，充分搅拌溶解后，根据配方用加样器量取吐温-20加入试剂瓶中，使用纯化水定容至100.00mL，使用pH计测量液体的批pH值为8.60～8.80，检测所配溶液的电导率应在2300μs/cm～3000μs/cm。2～8℃保存备用，有效期14天。

3.6样本稀释液的配制：

(1)标准配方：按照100mL量计。

(2)制备方法：按照标准配方内容准确称取NaH₂PO₄·2H₂O和Na₂HPO₄·12H₂O，加纯化水80.00mL，搅拌使充分溶解后加入0.85g氯化钠，充分混匀，定容至100.00mL，使用pH计测量液体的批pH值为7.30～7.50，4～30℃保存，有效期14个月。

3.7胶体金的制备：

(1)标准配方：按照100mL量计。

(2)制备方法：

按照标准配方内容准确量取1％氯金酸溶液1.0mL，加入到99mL纯化水中，边加热边搅拌至沸腾；5分钟后，准确量取1.8ml的1％柠檬酸三钠溶液，迅速、一次性加入到容器中，继续加热煮沸5min。冷却至室温后加入纯化水恢复到原来体积。2～8℃保存备用，有效期14天。

3.8HAV-IgM试剂盒检测线包被液的配制：

(1)标准配方：按照10mL量计。

0.05M PBS缓冲液适量

HAV-Ag 10mg

以0.05M PBS定容至10.00mL

(2)制备方法：

按照标准配方内容准确量取重组HAV-Ag 10mg，加入到相应体积的0.05M PBS缓冲液中。充分混匀15min。即用即配。

3.9HAV-IgM试剂盒质控线包被液的配制：

(1)标准配方：按照10mL量计。

0.05M PBS缓冲液适量

羊抗鼠IgG抗体 20mg

0.05M PBS缓冲液定容至终体积10.0mL

(2)制备方法：

按照标准配方内容准确量取羊抗鼠IgG抗体20mg，加入到相应体积的0.05M PBS缓冲液中，充分混匀15min，用0.05PBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使羊抗鼠IgG抗体的终浓度为2.0mg/ml，即用即配。

3.10胶体金标记鼠抗人IgM单抗的制备：

(1)相关试剂标准用量：按照100mL量计。

(2)制备方法：

按照试剂标准用量量取主配方规定量的胶体金于三角瓶中，准确加入主配方规定量的0.1M碳酸钾溶液，混匀，静置10分钟。准确量取主配方规定量的鼠抗人IgM单抗，快速搅拌下，将鼠抗人IgM单抗逐滴加入到三角瓶中，室温静置40分钟。准确量取主配方规定量的10％牛血清白蛋白溶液，快速搅拌下逐滴加入到三角瓶中，室温静置15分钟。12000rpm，4℃离心40分钟，小心弃去上清液，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，2～8℃保存备用，有效期14天。

实施例2

试剂盒的制备一

(1)反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HAV抗原稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，用点膜机将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；

(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为10μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液以1.5ml/条浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫放入干燥保存；

(3)切割装配：将反应膜、HAV-IgM金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。

反应膜及金标垫生产的干燥条件为37℃条件下干燥3小时。

实施例3

试剂盒的制备二

(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为23μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液以1.5ml/条浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫放入干燥保存；

反应膜及金标垫生产的干燥条件为37℃条件下干燥3小时。

实施例4

试剂盒的制备三

(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为15μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液以1.5ml/条浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫放入干燥保存；

反应膜及金标垫生产的干燥条件为37℃条件下干燥3小时。

实施例5

样品检测

1.检测样本的要求

血清样本按常规方法由静脉采集。血浆样本可采用肝素、柠檬酸钠、EDTA进行处理。5天内测定的样本可放置4℃保存。样本放置在-20℃至少可保存3个月。样本避免溶血或反复冻融。混浊或有沉淀的样本应离心或过滤澄清后再检测。

2.检验方法

从原包装铝箔袋中取出试剂卡，放在水平工作台面上平置并做好样本标记。用加样器取10μl血清或血浆样品，直接加入到加样孔中，再滴加样本稀释液2滴。15-20分钟内判读结果，20分钟后检验结果无效。

3.检验结果

(1)、阴性：只在C线凝集出现红色条带。

(2)、阳性：分别在T线和C线出现一条红色条带。

(3)、无效：无C线出现或T线与C线均不出现，表明实验无效。

本产品阴阳性符合率、精密性、灵敏度等均符合质量标准要求，效期内产品质量稳定。类风湿因子、乙型肝炎、梅毒不会对本品造成干扰。

实施例6

反应时间和加样量的选择

生产HAV-IgM试剂盒，对其反应时间和加样量进行确定。结果见表11：

表11加样量和判读时间的选择实验结果

由表2实验结果可知：加样量的多少会影响试纸条能否产生正确的反应结果，加样量低会出现漏检或样本展开不足，加样量高时容易产生假阳性。通过以上实验，考虑到不同使用者在应用上的误差及使用的方便性，选择加样量为10μL血清再加入100μL样本稀释液，15-20min判读为加样判读条件。

实施例7

血清及血浆不同抗凝剂标本对比验证试验

采集血液用不同抗凝剂肝素、柠檬酸钠、EDTA处理血液样本和制备血清，用上述确定的生产条件制备的试纸条，检测处理后的样本，结果显示：抗凝剂肝素、柠檬酸钠、EDTA处理的血液样本对检测结果无影响，与血清检测一致。因此本试剂盒可用于血清和血浆样本的检测。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HAV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，其特征在于：

所述重组甲型肝炎病毒抗原浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；

所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于4mg/ml；

2.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HAV-Ag稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；

（2）鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为10-23μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫干燥保存；

（3）切割装配：在反应膜所在胶板的上部揭去1.5cm宽的不干胶纸，粘贴上粗纤维滤纸，使纸的下部压住反应膜，揭去反应膜下部的0.9cm的不干胶纸，贴上HAV-IgM金结合物垫，并且金结合物垫的上部压住反应膜1mm，再揭去金结合物垫下部的的不干胶纸，贴上样品垫，样品垫的上部压住金结合物垫的下部1mm，制成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。

3.根据权利要求2所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）和（2）的干燥条件为37℃干燥3小时。

4.根据权利要求2所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）的鼠抗人IgM单抗的标记浓度为15μg/ml。