CN202149902U - 甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒 - Google Patents

甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本实用新型公开了一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，盒体内设置有铝箔袋；所述铝箔袋内设置有试纸条；所述试纸条由反应板切割而成；所述试纸条宽4mm；所述反应板由胶板、反应膜、鼠抗人IgM单抗金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫组成。本实用新型的有益效果为：甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于甲型肝炎病毒IgM的检测和控制效果明显。

Description

甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒
技术领域
本实用新型涉及一种医疗器械，具体涉及一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒。
背景技术
甲型肝炎(hepatitis A，简称HA)的病原体是甲型肝炎病毒(HAV)，为直径27nm的小RNA病毒(picornavirus)。病毒存在于病人的粪便、血清、胆汁与肝细胞浆中，在体外抵抗力强，60℃加热4小时不死；能耐受pH 3.0的环境；在低温下能长期存活。
常用的甲型肝炎血清抗体的检查方法主要有血球凝集试验、酶联免疫试验、放免试验等，但由于血球凝集试验操作复杂、放免具有放射污染等固有的缺陷，酶联免疫现已成为临床应用最广的实验室检查方法之一。抗-HAV-IgM是甲肝早期诊断的主要指标。血清IgM的出现与临床症状及生化指标异常的时间一致，1-2个月后抗体滴度和阳性率下降，3-4个月基本消失。但ELISA法操作复杂、检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分离、洗涤和显色等操作，大概需要用两个小时以上。
实用新型内容
本实用新型的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可以快速定性检测血清样本中的甲型肝炎病毒IgM抗体的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒。
为了实现上述目的，本实用新型提供的技术方案为：甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，盒体内设置有铝箔袋；所述铝箔袋内设置有试纸条；所述试纸条由反应板切割而成；所述试纸条宽4mm；所述反应板由胶板、反应膜、鼠抗人IgM单抗金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫组成；所述反应膜是由用磷酸盐缓冲液稀释过的重组HAV-Ag和用磷酸盐缓冲液稀释过的羊抗鼠IgG抗体包被的；所述反应膜设置在胶板上；所述胶板上部设置有1.5cm宽的粗纤维滤纸；粗纤维滤纸的下部压住反应膜；所述胶板下部依次设置有鼠抗人IgM单抗金结合物垫和样品垫；所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫宽0.9cm；所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫的上部压住反应膜；所述样品垫位于鼠抗人IgM单抗金结合物垫的下部；所述样品垫的上部压住鼠抗人IgM单抗金结合物垫。
本实用新型的有益效果为：甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于甲型肝炎病毒IgM的检测和控制效果明显。
附图说明
图1为本实用新型提供的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的盒体示意图。
图2为本实用新型提供的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的铝箔袋示意图。
图3为本实用新型提供的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的未切割前的反应板示意图。
图4为本实用新型提供的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的切割后试纸条的示意图。
其中，1为胶板，2为反应膜，3为粗纤维滤纸，4为鼠抗人IgM单抗金结合物垫，5为样品垫。
具体实施方式
实施例1：
甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，盒体内设置有铝箔袋；铝箔袋内设置有试纸条；试纸条由反应板切割而成；试纸条宽4mm；反应板由胶板1、反应膜2、鼠抗人IgM单抗金结合物垫4、粗纤维滤纸3和样品垫5组成；反应膜2是由用磷酸盐缓冲液稀释过的重组HAV-Ag和用磷酸盐缓冲液稀释过的羊抗鼠IgG抗体包被的；反应膜2设置在胶板1上；胶板1上部设置有1.5cm宽的粗纤维滤纸3；粗纤维滤纸3的下部压住反应膜2；胶板1下部依次设置有鼠抗人IgM单抗金结合物垫4和样品垫5；鼠抗人IgM单抗金结合物垫4宽0.9cm；鼠抗人IgM单抗金结合物垫4的上部压住反应膜2；样品垫5位于鼠抗人IgM单抗金结合物垫4的下部；样品垫5的上部压住鼠抗人IgM单抗金结合物垫4。
1.原料来源
甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)制备的各原料及稀释液来源及用量见下表10：
表10.原料及稀释液来源及用量
Figure BDA0000079940960000031
2、原料要求：
2.1重组HAV抗原
(1)外观：无色透明液体；
(2)浓度及纯度要求：浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下仅存一条带；
2.2羊抗鼠IgG抗体
(1)外观：无色透明液体；
(2)浓度要求：浓度大于4mg/ml；
2.3鼠抗人IgM单抗
(1)外观：无色透明液体；
(2)浓度及纯度要求：浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，用SDS-PAGE蛋白电泳检测，重链/轻链均为单一区带；
3.液体配制：
3.1 0.05M PBS缓冲液的配制：
(1)标准配方：按照100mL量计。
Figure BDA0000079940960000041
(2)配制方法：
按照标准配方内容准确称取Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、NaCl加纯化水80.00mL，搅拌使充分溶解后，使用pH计测量液体pH值应在7.30～7.50范围内，用纯化水两倍稀释检测所配溶液的电导率应在9000μs/cm～13000μs/cm，用纯化水定容至100.00mL，混合均匀。2～8℃保存备用，有效期14天。
3.21％氯金酸溶液的配制：
(1)标准配方：按照100mL量计。
氯金酸            1.0g
            纯化水定容至100.0ml
(2)配制方法：
取一支1g/支的氯金酸，打开瓶子；量取2ml纯化水倒入容器内，取纯化水把氯金酸溶解并且将盛放氯金酸的试剂瓶清洗干净，将清洗液倒入容器内，再加纯化水至100ml；盖紧瓶盖，充分摇晃15分钟，混合均匀，用铝箔包好，2～8℃保存备用，有效期12个月。3.30.1M碳酸钾溶液配制：
(1)标准配方：按照20mL量计。
K2CO3       0.276g
纯化水      20.0mL
(2)配制方法：
量取待配液体积80％的纯化水于试剂瓶中，按照标准配方内容准确称取K2CO3加入试剂瓶中，加纯化水至20.0mL，使充分溶解。2～8℃保存备用，有效期14天。3.410％牛血清白蛋白溶液的配制：
(1)标准配方：按照10mL量计。
牛血清白蛋白        1.00g
纯化水              10.00mL
(2)配制方法：
量取待配液体积80％的纯化水于试剂瓶中，按照标准配方内容准确称取牛血清白蛋白加入试剂瓶中，待完全溶解，加纯化水至10.00mL，使充分溶解，即用即配。
3.5胶体金结合物稀释液的配制：
(1)标准配方：按照100mL量计。
Figure BDA0000079940960000051
(2)配制方法：
按照标准配方内容准确称取三羟甲基氨基甲烷于容器中，加纯化水80mL，搅拌使充分溶解后，然后滴加盐酸使其pH值调制到9.0，再将称量好的其他配方组分依次加入上述溶液中，充分搅拌溶解后，根据配方用加样器量取吐温-20加入试剂瓶中，使用纯化水定容至100.00mL，使用pH计测量液体的批pH值为8.60～8.80，检测所配溶液的电导率应在2300μs/cm～3000μs/cm。2～8℃保存备用，有效期14天。
3.6样本稀释液的配制：
(1)标准配方：按照100mL量计。
Figure BDA0000079940960000052
(2)制备方法：按照标准配方内容准确称取NaH2PO4·2H2O和Na2HPO4·12H2O，加纯化水80.00mL，搅拌使充分溶解后加入0.85g氯化钠，充分混匀，定容至100.00mL，使用pH计测量液体的批pH值为7.30～7.50，4～30℃保存，有效期14个月。
3.7胶体金的制备：
(1)标准配方：按照100mL量计。
Figure BDA0000079940960000061
(2)制备方法：
按照标准配方内容准确量取1％氯金酸溶液1.0mL，加入到99mL纯化水中，边加热边搅拌至沸腾；5分钟后，准确量取1.8ml的1％柠檬酸三钠溶液，迅速、一次性加入到容器中，继续加热煮沸5min。冷却至室温后加入纯化水恢复到原来体积。2～8℃保存备用，有效期14天。
3.8HAV-IgM试剂盒检测线包被液的配制：
(1)标准配方：按照10mL量计。
0.05M PBS缓冲液       适量
HAV-Ag                10mg
以0.05M PBS定容至10.00mL
(2)制备方法：
按照标准配方内容准确量取重组HAV-Ag 10mg，加入到相应体积的0.05M PBS缓冲液中。充分混匀15min。即用即配。
3.9HAV-IgM试剂盒质控线包被液的配制：
(1)标准配方：按照10mL量计。
0.05M PBS缓冲液      适量
羊抗鼠IgG抗体        20mg
0.05M PBS缓冲液定容至终体积10.0mL
(2)制备方法：
按照标准配方内容准确量取羊抗鼠IgG抗体20mg，加入到相应体积的0.05M PBS缓冲液中，充分混匀15min，用0.05PBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使羊抗鼠IgG抗体的终浓度为2.0mg/ml，即用即配。
3.10胶体金标记鼠抗人IgM单抗的制备：
(1)相关试剂标准用量：按照100mL量计。
Figure BDA0000079940960000062
(2)制备方法：
按照试剂标准用量量取主配方规定量的胶体金于三角瓶中，准确加入主配方规定量的0.1M碳酸钾溶液，混匀，静置10分钟。准确量取主配方规定量的鼠抗人IgM单抗，快速搅拌下，将鼠抗人IgM单抗逐滴加入到三角瓶中，室温静置40分钟。准确量取主配方规定量的10％牛血清白蛋白溶液，快速搅拌下逐滴加入到三角瓶中，室温静置15分钟。12000rpm，4℃离心40分钟，小心弃去上清液，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，2～8℃保存备用，有效期14天。
实施例2
试剂盒的制备一
(1)反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HAV抗原稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，用点膜机将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；
(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为10μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液以1.5ml/条浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫放入干燥保存；
(3)切割装配：将反应膜、HAV-IgM金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。
反应膜及金标垫生产的干燥条件为37℃条件下干燥3小时。
实施例3
试剂盒的制备二
(1)反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HAV抗原稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，用点膜机将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；
(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为23μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液以1.5ml/条浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫放入干燥保存；
(3)切割装配：将反应膜、HAV-IgM金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。
反应膜及金标垫生产的干燥条件为37℃条件下干燥3小时。
实施例4
试剂盒的制备三
(1)反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HAV抗原稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，用点膜机将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；
(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为15μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液以1.5ml/条浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫放入干燥保存；
(3)切割装配：将反应膜、HAV-IgM金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。
反应膜及金标垫生产的干燥条件为37℃条件下干燥3小时。
实施例5
样品检测
1.检测样本的要求
血清样本按常规方法由静脉采集。血浆样本可采用肝素、柠檬酸钠、EDTA进行处理。5天内测定的样本可放置4℃保存。样本放置在-20℃至少可保存3个月。样本避免溶血或反复冻融。混浊或有沉淀的样本应离心或过滤澄清后再检测。
2.检验方法
从原包装铝箔袋中取出试剂卡，放在水平工作台面上平置并做好样本标记。用加样器取10μl血清或血浆样品，直接加入到加样孔中，再滴加样本稀释液2滴。15-20分钟内判读结果，20分钟后检验结果无效。
3.检验结果
(1)、阴性：只在C线凝集出现红色条带。
(2)、阳性：分别在T线和C线出现一条红色条带。
(3)、无效：无C线出现或T线与C线均不出现，表明实验无效。
本产品阴阳性符合率、精密性、灵敏度等均符合质量标准要求，效期内产品质量稳定。类风湿因子、乙型肝炎、梅毒不会对本品造成干扰。
实施例6
反应时间和加样量的选择
生产HAV-IgM试剂盒，对其反应时间和加样量进行确定。结果见表11：
表11加样量和判读时间的选择实验结果
Figure BDA0000079940960000091
由表2实验结果可知：加样量的多少会影响试纸条能否产生正确的反应结果，加样量低会出现漏检或样本展开不足，加样量高时容易产生假阳性。通过以上实验，考虑到不同使用者在应用上的误差及使用的方便性，选择加样量为10μL血清再加入100μL样本稀释液，15-20min判读为加样判读条件。
实施例7
血清及血浆不同抗凝剂标本对比验证试验
采集血液用不同抗凝剂肝素、柠檬酸钠、EDTA处理血液样本和制备血清，用上述确定的生产条件制备的试纸条，检测处理后的样本，结果显示：抗凝剂肝素、柠檬酸钠、EDTA处理的血液样本对检测结果无影响，与血清检测一致。因此本试剂盒可用于血清和血浆样本的检测。
最后应说明的是：以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

Claims (1)

1.甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，其特征在于：盒体内设置有铝箔袋；所述铝箔袋内设置有试纸条；所述试纸条由反应板切割而成；所述试纸条宽4mm；所述反应板由胶板、反应膜、鼠抗人IgM单抗金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫组成；所述反应膜是由用磷酸盐缓冲液稀释过的重组HAV-Ag和用磷酸盐缓冲液稀释过的羊抗鼠IgG抗体包被的；所述反应膜设置在胶板上；所述胶板上部设置有1.5cm宽的粗纤维滤纸；粗纤维滤纸的下部压住反应膜；所述胶板下部依次设置有鼠抗人IgM单抗金结合物垫和样品垫；所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫宽0.9cm；所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫的上部压住反应膜；所述样品垫位于鼠抗人IgM单抗金结合物垫的下部；所述样品垫的上部压住鼠抗人IgM单抗金结合物垫。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN102288758A (zh) * 2011-07-29 2011-12-21 北京中检安泰诊断科技有限公司 一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法

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