CN109666070A

CN109666070A - 单克隆抗体mers-4v2及其编码基因和应用

Info

Publication number: CN109666070A
Application number: CN201710951002.2A
Authority: CN
Inventors: 张林琦; 王新泉; 江力玮; 左腾; 史宣玲; 周盼盼
Original assignee: Tsinghua University
Current assignee: Tsinghua University
Priority date: 2017-10-13
Filing date: 2017-10-13
Publication date: 2019-04-23
Anticipated expiration: 2037-10-13
Also published as: CN109666070B

Abstract

本发明公开了一种单克隆抗体MERS‑4V2及其编码基因和应用。本发明提供了单克隆抗体MERS‑4V2，是一种IgG抗体，由重链和轻链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑77位氨基酸残基和第116‑120位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑72位氨基酸残基和第109‑119位氨基酸残基。本发明还保护所述IgG抗体在制备用于抑制中东呼吸综合征冠状病毒的药物中的应用。本发明对于治疗和/或预防新型冠状病毒MERS‑CoV的药物(疫苗)的开发具有广泛的应用前景。

Description

单克隆抗体MERS-4V2及其编码基因和应用

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体MERS-4V2及其编码基因和应用。

背景技术

中东呼吸综合征是由一种新型冠状病毒-中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)引起的病毒性呼吸道疾病。新型冠状病毒MERS-CoV于2012年首次在中东地区被发现感染人类，随后这种病毒感染疾病又先后出现在欧洲几个国家和地区。超过半数的感染病人均会出现严重的呼吸道疾病，其临床症状同2003年爆发的由SARS-CoV引起的疾病非常相似。由于这种疾病可以人传染给人，因此引起了全世界的高度关注。到目前为止，还没有特异性的药物和疫苗对这种疾病进行治疗和预防。

MERS-CoV利用其表面的膜蛋白S进入易感细胞。S蛋白由位于N端的S1结构域和位于近膜端的S2结构域和跨膜结构域组成，其中病毒对细胞易感性是由S1结构域决定的。通过利用MERS-CoV S1结构域进行共纯化实验，在2013年初Raj的研究小组确定了dipeptideyl peptidase 4(DPP4，也称为CD26)为MERS-CoV的受体。

发明内容

本发明的目的是提供一种单克隆抗体MERS-4V2及其编码基因和应用。

本发明提供了单克隆抗体MERS-4V2，是一种IgG抗体，由重链和轻链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基和第116-120位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第109-119位氨基酸残基。

所述重链中的重链可变区为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1自N末端第17-131位氨基酸残基组成的蛋白质；(a2)序列表的序列1自N末端第1-131位氨基酸残基组成的蛋白质。

所述轻链中的轻链可变区为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列3自N末端第17-129位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)序列表的序列3自N末端第1-129位氨基酸残基组成的蛋白质。

所述重链为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列1自N末端第17-461位氨基酸残基组成的蛋白质；(c2)序列表的序列3所示的蛋白质。

所述轻链为如下(d1)或(d2)：(d1)序列表的序列3自N末端第17-235位氨基酸残基组成的蛋白质；(d2)序列表的序列3所示的蛋白质。

本发明还保护编码所述IgG抗体的基因，其特征在于：

编码所述重链的基因为如下(1)或(2)：

(1)序列表的序列2自5’末端第49-1383位核苷酸所示的DNA分子；

(2)序列表的序列2所示的DNA分子；

编码所述轻链的基因为如下(3)或(4)：

(3)序列表的序列4自5’末端第49-705位核苷酸所示的DNA分子；

(4)序列表的序列4所示的DNA分子。

本发明还保护所述IgG抗体在制备用于抑制中东呼吸综合征冠状病毒的药物中的应用。本发明还保护一种用于抑制中东呼吸综合征冠状病毒的药物，其活性成分为所述IgG抗体。

本发明还保护所述IgG抗体在制备用于中和中东呼吸综合征冠状病毒的药物中的应用。本发明还保护一种用于中和中东呼吸综合征冠状病毒的药物，其活性成分为所述IgG抗体。

本发明还保护所述IgG抗体在制备用于预防和/或治疗中东呼吸综合征的药物中的应用。本发明还保护一种用于预防和/或治疗中东呼吸综合征的药物，其活性成分为所述IgG抗体。

本发明对于治疗和/或预防新型冠状病毒MERS-CoV的药物(疫苗)的开发具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为实施例2中的SDS-PAGE电泳图。

图2为实施例3中的结合活性结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。如无特殊说明，实施例中所用的PBS缓冲液均为pH7.2、0.01mM的PBS缓冲液。TCID50，Tissue culture infective dose 50％,半数组织培养感染剂量。

pMD18-T载体：宝生物工程(大连)有限公司，产品目录号为D101A。pFastBac^TMdual载体(pFastBac^TMdual vector)：Invitrogen公司，产品目录号为10359-016。pcDNA3.1(+)载体：Invitrogen公司。293T细胞：美国模式培养物集存库(American type culturecollection，ATCC),产品目录号为CRL-3216^TM。Sf9细胞：Invitrogen公司，产品目录号为11496-015。Huh7细胞：中国科学院细胞库，产品目录号为TCHu18。大肠杆菌DH10Bac：Invitrogen公司，产品目录号为10359-016。昆虫细胞培养基：Lonza公司，产品目录号为12-730Q。

骨架质粒pNL4-3R-E-luciferase：参考文献:He J,Choe S,Walker R,DiMarzioP,Morgan DO,Landau NR.J Virol 69:6705–6711,1995.。

实施例1、单克隆抗体MERS-4V2的发现

一、单克隆抗体MERS-4的发现

通过序列和模型分析发现MERS-CoV可能有一个潜在的受体结合域(ReceptorBinding Domain,RBD)，将RBD和可溶性DPP4蛋白共结晶，解析蛋白的结构，找到了RBD与DPP4结合的关键氨基酸位点。利用纯化的RBD进行动物免疫，发现其具有较强的诱导中和抗体产生的能力。利用RBD筛选展示在酵母表面的人类非免疫scFvs文库(scFvs的英文全称为“single-chain variable fragments”)，得到了若干具有中和活性的单克隆抗体。将其中一个单克隆抗体命名为单克隆抗体MERS-4(属于IgG1抗体)。

单克隆抗体MERS-4的重链如序列表的序列5所示，轻链如序列表的序列3所示。

单克隆抗体MERS-4能够特异结合MERS-CoV膜蛋白S的RBD，对MERS-CoV的假型病毒具有中和活性。但是，单克隆抗体MERS-4存在表达量低的问题，很难大批量生产，因此将其作为治疗性抗体药物用于临床存在很大的局限性。

二、单克隆抗体MERS-4V2的发现

对单克隆抗体MERS-4进行改造，经过大量分析、筛选、构建定点随机突变文库以及效果验证，获得一个新的单克隆抗体，将其命名为单克隆抗体MERS-4V2。

单克隆抗体MERS-4V2的重链如序列表的序列1所示，轻链如序列表的序列3所示。

序列表的序列1中，第1-16位氨基酸残基组成信号肽。序列表的序列1中，CDR1、CDR2和CDR3依次为第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基、第116-120位氨基酸残基。

序列表的序列3中，第1-16位氨基酸残基组成信号肽。序列表的序列3中，CDR1、CDR2和CDR3依次为第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基、第109-119位氨基酸残基。

单克隆抗体MERS-4V2能够特异结合MERS-CoV膜蛋白S的RBD。与单克隆抗体MERS-4相比，单克隆抗体MERS-4V2的表达量显著提高，对MERS-CoV的假型病毒的中和活性和广谱性也有提高。

实施例2、单克隆抗体的制备

一、构建重组质粒

1、合成双链DNA片段甲，然后将DNA片段甲插入pMD18-T载体，得到重组质粒甲。经测序验证，双链DNA片段甲中，5’末端至3’末端方向，依次由如下元件组成：CMV启动子(如序列表的序列7所示)，单克隆抗体MERS-4的重链的编码基因(如序列表的序列6所示，编码序列表的序列5所示的重链)，ployA(如序列表的序列8所示)。

2、合成双链DNA片段乙，然后将DNA片段乙插入pMD18-T载体，得到重组质粒乙。经测序验证，双链DNA片段乙中，5’末端至3’末端方向，依次由如下元件组成：CMV启动子(如序列表的序列7所示)，单克隆抗体的轻链的编码基因(如序列表的序列4所示，编码序列表的序列3所示的轻链)，ployA(如序列表的序列8所示)。

3、合成双链DNA片段丙，然后将DNA片段丙插入pMD18-T载体，得到重组质粒丙。经测序验证，双链DNA片段丙中，5’末端至3’末端方向，依次由如下元件组成：CMV启动子(如序列表的序列7所示)，单克隆抗体MERS-4V2的重链的编码基因(如序列表的序列2所示，编码序列表的序列1所示的重链)，ployA(如序列表的序列8所示)。

二、单克隆抗体MERS-4的制备

1、将重组质粒甲和重组质粒乙共转染293T细胞(转染剂量：每1×10⁵个细胞转染2微克重组质粒甲和2微克重组质粒乙，采用的培养基为含10％FBS的DMEM培养基)，37℃静置孵育8小时，然后将培养基更换为含2％FBS的DMEM培养基并37℃静置孵育72小时(实际应用中，48-72小时均可)，然后收细胞培养上清，4℃、4000rpm离心1小时，收集上清液。

2、取步骤1得到的上清液，采用protein A beads(Pierce^TMProtein A Agarose；Thermo公司)纯化，然后采用10K超滤管浓缩并将蛋白缓冲体系更换为PBS缓冲液，得到MERS-4溶液。

MERS-4溶液的SDS-PAGE电泳图显示具有两个条带。分别回收两个条带并测序，一个条带的前10位氨基酸残基为序列表的序列5的前10位，另一个条带的前10位氨基酸残基为序列表的序列3的前10位。

检测MERS-4溶液的总蛋白含量，作为单克隆抗体MERS-4的含量。经计算，每L步骤1得到的上清液中含有1mg单克隆抗体MERS-4。

三、单克隆抗体MERS-4V2的制备

1、将重组质粒丙和重组质粒乙共转染293T细胞(转染剂量：每1×10⁵个细胞转染2微克重组质粒丙和2微克重组质粒乙，采用的培养基为含10％FBS的DMEM培养基)，37℃静置孵育8小时，然后将培养基更换为含2％FBS的DMEM培养基并37℃静置孵育72小时(实际应用中，48-72小时均可)，然后收细胞培养上清，4℃、4000rpm离心1小时，收集上清液。

2、取步骤1得到的上清液，采用protein A beads(Pierce^TMProtein A Agarose；Thermo公司)纯化，然后采用10K超滤管浓缩并将蛋白缓冲体系更换为PBS缓冲液，得到MERS-4V2溶液。

MERS-4V2溶液的SDS-PAGE电泳图见图1，显示具有两个条带。分别回收两个条带并测序，一个条带的前10位氨基酸残基为序列表的序列1的前10位，另一个条带的前10位氨基酸残基为序列表的序列3的前10位。

检测MERS-4V2溶液的总蛋白含量，作为单克隆抗体MERS-4V2的含量。经计算，每L步骤1得到的上清液中含有10mg单克隆抗体MERS-4V2。

与MERS-4相比，在相同条件下MERS-4V2的产量提高至了10倍。

实施例3、单克隆抗体与RBD的结合特性

一、构建重组质粒

pFastBac^TM dual载体本身不带有胞外分泌的信号肽，而RBD本身是分泌蛋白，因而需要连入信号肽。蛋白在昆虫细胞表达并分泌的过程中信号肽将被切除，最终获得的蛋白序列将不含信号肽。

用序列表的序列9所示的DNA分子代替pFastBac^TM dual载体中的序列表的序列10所示的DNA分子，得到重组质粒。序列表的序列9中，第7-120位核苷酸编码gp67信号肽，第130-849位核苷酸编码RBD蛋白，第880-924位核苷酸编码AVi标签，第925-942位核苷酸编码His₆标签。AVi标签可被生物素连接酶生物素化。

重组质粒在昆虫细胞表达并分泌的蛋白质如序列表的序列11所示，将其命名为RBD融合蛋白。

二、制备重组Bacmid

1、将步骤一构建的重组质粒和大肠杆菌DH10Bac感受态细胞混合后在冰上放置30min，然后42℃热激75s，然后冰上放置2min，然后加入500μl液体LB培养基，37℃，210rpm振荡复苏5小时。

2、完成步骤1后，吸取10μl涂布于含50μg/mL卡那霉素、7μg/mL庆大霉素、10μg/mL四环素、40μg/mLIPTG和100μg/mLX-gal的LB培养基平板，避光培养三天。

3、完成步骤2后，挑取白色单菌落，接种于含50μg/mL卡那霉素、7μg/mL庆大霉素的液体LB培养基，振荡培养16小时。

4、完成步骤3后，收集菌体，进行质粒提取，得到重组Bacmid。

三、制备重组病毒

1、在10cm培养皿培养Sf9细胞，27℃静置培养直至细胞贴壁(显微镜下观察，保证培养皿底部约有70％-80％被细胞覆盖)，吸弃培养上清。

2、取15μ lCellfectin，用100μl昆虫细胞培养基稀释。

3、取步骤二得到的重组Bacmid(约1μg)，用100μl昆虫细胞培养基稀释。

4、将步骤2得到的稀释液和步骤3得到的稀释液混匀，室温静置30min，然后用昆虫细胞培养基稀释至2ml。

5、将步骤4得到的稀释液滴加至完成步骤1的底部覆盖细胞的培养皿中，静置培养5小时，然后吸弃培养上清，加入7ml新鲜的昆虫细胞培养基，用封口膜密封于27℃静置培养7天(实际应用中，7-10天均可)。

6、完成步骤5后，吸取培养上清，即为P0代病毒液。

7、用昆虫细胞培养基培养Sf9细胞至细胞密度为2×10⁶/mL，然后加入P0代病毒液(病毒液与细胞液的体积比为1:1000)，27℃静置培养5天，吸取培养上清，即为P1代病毒液。

四、制备蛋白

1、用昆虫细胞培养基培养Sf9细胞至细胞密度为2×10⁶/ml，然后加入P1代病毒液(病毒液与细胞液的体积比为1∶100)，27℃静置培养72小时(实际应用中，48-96小时均可)，然后4000rpm离心15min，收集上清液。

2、取步骤1得到的上清液，采用双层0.45μm的玻璃纤维膜进行抽滤，收集滤液。

3、取步骤2得到的滤液，采用切向流超滤系统进行浓缩，然后将蛋白置换到上样缓冲液中，然后13000rpm离心30min，收集上清液。

上样缓冲液(pH7.2)：含10mM HEPAS，150mM NaCl，余量为水。

4、取步骤3得到的上清液，加入镍柱beads，4℃孵育5小时，然后离心弃除上清液，用含有洗涤液充分淋洗beads，然后用洗脱液洗脱并收集洗脱液。

洗涤液(pH7.2)：含20mM咪唑、10mM HEPAS，150mM NaCl，余量为水。

洗脱液(pH7.2)：含500mM咪唑、、10mM HEPAS，150mM NaCl，余量为水。

5、取步骤4得到的洗脱液，使用10kD浓缩管进行浓缩，得到浓缩液，即为RBD融合蛋白溶液。

五、生物素标记

取步骤四得到的RBD融合蛋白溶液，采用GeneCopoeia的Biotin Ligase(生物素连接酶)试剂盒标记(产品编号：B0101A)进行生物素标记，得到生物素标记的RBD融合蛋白。

六、检测单克隆抗体与生物素标记的RBD融合蛋白的结合活性。

1、取96孔酶标板，每孔加入100μl包被液(含100ng步骤四制备的RBD融合蛋白)，4℃静置过夜。

2、完成步骤1后，取所述96孔酶标板，每孔加入200μl封闭液(含10％FBS的PBS缓冲液)，37℃静置2小时，然后用PBST溶液洗涤3次。

3、完成步骤2后，取所述96孔酶标板，加入待测溶液37℃孵育1小时，然后用PBST溶液洗涤3次。待测溶液的加入量每孔为100μl。待测溶液为实施例2制备的MERS-4溶液或MERS-4V2溶液或他们各自的稀释液，蛋白浓度依次为10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml，每种溶液的每个浓度设置3个复孔。

4、完成步骤3后，取所述96孔酶标板，每孔加入100μl anti-human-HRP(工作浓度为1∶3000)，37℃孵育1小时，然后用PBST溶液洗涤3次。

5、每孔加入100μl显色液，避光静置4分钟，然后每孔加入50μl终止液，用酶标仪测量450nm波长的OD值。

结果见图2，与MERS-4相比，MERS-4V2抗体的结合活性显著提高。

七、检测单克隆抗体与生物素标记的RBD融合蛋白的亲和力。

结果见表1。单克隆抗体MERS-4的K_d值是单克隆抗体MERS-4V2的K_d值的1.71倍(K_d值越低表示亲和力越好)。

表1结合和解离常数

	K<sub>on</sub>(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>)	K<sub>off</sub>(S<sup>-1</sup>)	K<sub>a</sub>(M<sup>-1</sup>)	K<sub>d</sub>(M)
					MERS-4	8.05E+05	1.01E-03	8.00E+08	1.25E-09
MERS-4V2	4.21E+05	3.08E-04	1.37E+09	7.32E-10

实施例4、单克隆抗体对MERS-CoV突变假病毒的广谱中和活性

一、MERS-CoV假病毒的制备

表达MERS-CoV全长膜蛋白的质粒(命名为MERS-CoV膜蛋白质粒)和骨架质粒pNL4-3R-E-luciferase共转染293T细胞，孵育后能够得到具有感染性但没有复制能力的MERS-CoV假型病毒，其感染性同活病毒相似。

将序列表的序列12所示的双链DNA分子(MERS-CoV全长膜蛋白的编码基因)插入pcDNA3.1(+)载体的HindIII和XhoI酶切位点之间，得到MERS-CoV膜蛋白质粒。

将MERS-CoV膜蛋白质粒和骨架质粒pNL4-3R-E-luciferase共转染293T细胞，37℃静置孵育，转染48小时后收集细胞培养上清，即为含有MERS-CoV假病毒的病毒液(简称MERS-CoV病毒液)。利用p24定量检测的ELISA试剂盒(HIV P24抗原定量检测试剂盒，KEY-BIO,96T)检测MERS-CoV病毒液的病毒滴度，MERS-CoV病毒液的OD_450nm(吸光值为1(1021TCID50/ml)，吸光值越大说明病毒含量越高。

二、各个MERS-CoV假病毒突变体的制备

病毒在感染过程中为了逃逸免疫压力或者快速扩增，其基因会发生一定的变异，MERS-CoV也不例外。通过NCBI查找已公布的MERS-CoV病毒序列，进行比对，找到在RBD上发生的突变；利用定点突变的方法将找到的突变位点引入MERS-CoV全长膜蛋白的编码基因上，按步骤一中的假病毒包装方法进行假病毒包装，得到各个MERS-CoV假病毒突变体。

将序列表的序列12第1270-1272位核苷酸由“act”突变为“ATT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到T424I突变体。

将序列表的序列12第1378-1380位核苷酸由“tct”突变为“TTT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到S460F突变体。

将序列表的序列12第1516-1518位核苷酸由“ctg”突变为“TTT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到L506F突变体。

将序列表的序列12第1525-1527位核苷酸由“gat”突变为“GGT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到D509G突变体。

将序列表的序列12第1531-1533位核苷酸由agg“”突变为“CCT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到R511P突变体。

将序列表的序列12第1558-1560位核苷酸由“gcc”突变为“TCT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到A520S突变体。

将序列表的序列12第1564-1566位核苷酸由“caa”突变为“CAT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到Q522H突变体。

将序列表的序列12第1609-1611位核苷酸由“gat”突变为“GAA”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到D537E突变体。

将序列表的序列12第1666-1668位核苷酸由“gca”突变为“GTT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到A556V突变体。

将序列表的序列12第1678-1680位核苷酸由“aca”突变为“ATT”，用突变后的DNA分子代替序列表的序列12所示的DNA分子，按照步骤一的方法制备得到T560I突变体。

二、检测单克隆抗体对MERS-CoV假病毒的中和活性

待测溶液为：MERS-4溶液或MERS-4V2溶液。

(1)采用含10％FBS的DMEM培养基将待测溶液倍比稀释，依次得到蛋白浓度为50.000000μg/ml、16.666670μg/ml、5.555555μg/ml、1.851852μg/ml、0.6172839μg/ml、0.2057613μg/ml、0.06858711μg/ml、0.02286237μg/ml、0.00762079μg/ml、0.002540263μg/ml、0.000846754μg/ml、0.000282251μg/ml、0.0000940838μg/ml、0.0000313613μg/ml、0.0000104538μg/ml和0.00000348459μg/ml的稀释液。

(2)将100微升步骤(1)得到的稀释液与50微升病毒液(病毒含量为100TCID50)混合，37℃静置孵育1小时。设置用100微升含10％FBS的DMEM培养基代替100微升稀释液的空白对照。病毒液为步骤一制备的MERS-CoV病毒液或步骤二制备的突变体病毒液。

(3)完成步骤(2)后，加入50微升Huh7细胞的细胞液(约含2×10⁴个Huh7细胞)，37℃静置孵育48小时(实际应用中，48-72小时均可)。

(4)完成步骤(3)后，加入100μlPBS缓冲液和50μl细胞裂解液(Bright-Glo^TMLuciferase Assay System，Promega，E2650)，静置2min，然后用化学发光仪检测荧光素酶活性。

每种处理设置5个复孔，结果取平均值。

中和活性＝(空白对照组的荧光强度-加入稀释液的实验组的荧光强度)/空白对照组的荧光强度×100％。

中和活性为50％时对应的稀释液中的蛋白浓度即为IC₅₀值。

结果见表2。与MERS-4相比，MERS-4V2抗体的广谱中和活性得到了提高。

表2抗体的广谱中和活性检测结果

SEQUENCE LISTING

<110> 清华大学

<120> 单克隆抗体MERS-4V2及其编码基因和应用

<130> CGGNQAYX-176111

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 461

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<400> 1

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asn Tyr Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Ile Ser Thr Asp Tyr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

85 90 95

Thr Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu

100 105 110

Tyr Tyr Cys Thr Asn Thr Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

115 120 125

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

130 135 140

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

145 150 155 160

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

165 170 175

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

180 185 190

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

195 200 205

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

210 215 220

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

225 230 235 240

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

245 250 255

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

260 265 270

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

275 280 285

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

290 295 300

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

305 310 315 320

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

325 330 335

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

340 345 350

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

355 360 365

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

370 375 380

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

385 390 395 400

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

405 410 415

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

420 425 430

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

435 440 445

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 2

<211> 1386

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 2

atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggtgt acattctgag 60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120

tgtgcagcct ctggattcac cttcagtaac tatgctatgt actgggtccg ccaggctcca 180

ggcaaggggc tggagtgggt ggcacttata tcatatgata taagcactga ctactacgca 240

gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gatatatctg 300

caaatgaata atctgagaac tgaggacacg gctttgtatt actgtacgaa cacctactac 360

tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc 420

cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 480

aaggactact tccccgaacc tgtgacggtc tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 540

gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 600

accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 660

agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 720

ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 780

cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 840

agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 900

gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 960

accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 1020

gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1080

caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1140

tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1200

ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1260

tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1320

gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtccccgggt 1380

aaatga 1386

<210> 3

<211> 235

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<400> 3

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Ser Trp Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Gly Thr

20 25 30

Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile

35 40 45

Gly Asn Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser

85 90 95

Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp

100 105 110

Asp Ser Leu Ser Gly Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val

115 120 125

Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser

145 150 155 160

Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser

165 170 175

Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn

180 185 190

Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp

195 200 205

Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr

210 215 220

Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

225 230 235

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<211> 708

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 4

atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggttc ctgggcccag 60

tctgtgctga ctcagtcacc ctcagcgtct gggacccccg ggcagagggt caccatctct 120

tgttctggaa gcagctccaa catcggaaat aattatgtat actggtacca gcaactccca 180

ggaacggccc ccaaactcct catctattgg aatgatcagc ggccctcagg ggtccctgac 240

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ggaggaggca cccagctgac cgtcctcggt cagcccaagg ctgccccctc ggtcactctg 420

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ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacagaagct acagctgcca ggtcacgcat 660

gaagggagca ccgtggagaa gacagtggcc cctacagaat gttcatag 708

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<211> 461

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<400> 5

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asn Tyr Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Ile Ser Thr Asp Tyr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

85 90 95

Thr Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Gly Asn Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

115 120 125

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

130 135 140

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

145 150 155 160

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

165 170 175

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

180 185 190

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

195 200 205

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

210 215 220

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

225 230 235 240

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

245 250 255

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

260 265 270

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

275 280 285

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

290 295 300

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

305 310 315 320

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

325 330 335

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

340 345 350

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

355 360 365

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

370 375 380

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

385 390 395 400

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

405 410 415

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

420 425 430

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

435 440 445

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 6

<211> 1386

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 6

atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggtgt acattctgag 60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120

tgtgcagcct ctggattcac cttcagtaac tatgctatgt actgggtccg ccaggctcca 180

ggcaaggggc tggagtgggt ggcacttata tcatatgata taagcactga ctactacgca 240

gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gatatatctg 300

caaatgaata atctgagaac tgaggacacg gctttgtatt actgtgcggg taatgactac 360

tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc 420

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aaggactact tccccgaacc tgtgacggtc tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 540

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accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 660

agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 720

ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 780

cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 840

agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 900

gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 960

accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 1020

gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1080

caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1140

tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1200

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tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1320

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aaatga 1386

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<211> 888

<212> DNA

<213> Artificial sequence

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agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 60

ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 120

tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 180

atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 240

ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 300

gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 360

ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 420

tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa 480

aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg 540

tctatataag cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct 600

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ttggaacgcg gattccccgt gccaagagtg acgtaagtac cgcctataga gtctataggc 720

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<211> 128

<212> DNA

<213> Artificial sequence

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aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca 60

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tatcatgt 128

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<211> 945

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 9

ggatctatgc tactagtaaa tcagtcacac caaggcttca ataaggaaca cacaagcaag 60

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gcggatcccg aggctaagcc atctggctct gtggtggaac aggctgaggg agtggagtgt 180

gacttcagcc cactgctgtc tggcacacct ccacaggtct acaacttcaa gagactggtg 240

ttcaccaact gtaactacaa cctgaccaaa ctgctgtccc tgttctctgt gaatgacttc 300

acttgtagcc agattagccc tgctgccatt gccagcaact gttactcctc cctgattctg 360

gactacttct cctacccact gagtatgaag tctgacctgt ctgtgtcctc tgctggacca 420

atcagccagt tcaactacaa gcagtccttc agcaacccaa cttgtctgat tctggctaca 480

gtgccacaca acctgaccac catcaccaag ccactgaaat actcctacat caacaagtgt 540

agcagactgc tgtctgatga caggacagag gtgccacaac tagtgaatgc caaccaatac 600

agcccatgtg tgagcattgt gccaagcaca gtgtgggagg atggagacta ctacaggaag 660

caacttagcc cattggaggg aggaggctgg ctggtggcat ctggcagcac agtggctatg 720

acagaacaac tccaaatggg ctttggcatc acagtccaat atggcacaga caccaactct 780

gtgtgtccaa aattggagtt tgccaatgac accaagattg ccagccaact tggcaactgt 840

gtggaatacg ggtcgacgag ctcactagtc gcggccgcgc tgcatcatat tctcgacgca 900

cagaaaatgg tgtggaatca tcgtcatcat caccaccatc attaa 945

<210> 10

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<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 10

ggatcccggt ccgaagcgcg cggaattcaa aggcctacgt cgacgagctc actagtcgcg 60

gccgctttcg aatctagagc ctgcagtctc gac 93

<210> 11

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<213> Artificial sequence

<400> 11

Ala Asp Pro Glu Ala Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu

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Gly Val Glu Cys Asp Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln

20 25 30

Val Tyr Asn Phe Lys Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu

35 40 45

Thr Lys Leu Leu Ser Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln

50 55 60

Ile Ser Pro Ala Ala Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu

65 70 75 80

Asp Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser

85 90 95

Ser Ala Gly Pro Ile Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn

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Pro Thr Cys Leu Ile Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile

115 120 125

Thr Lys Pro Leu Lys Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu

130 135 140

Ser Asp Asp Arg Thr Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr

145 150 155 160

Ser Pro Cys Val Ser Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp

165 170 175

Tyr Tyr Arg Lys Gln Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val

180 185 190

Ala Ser Gly Ser Thr Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe

195 200 205

Gly Ile Thr Val Gln Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys

210 215 220

Leu Glu Phe Ala Asn Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys

225 230 235 240

Val Glu Tyr Leu His His Ile Leu Asp Ala Gln Lys Met Val Trp Asn

245 250 255

His Arg His His His His His His

260

<210> 12

<211> 4062

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 12

atgattcact ctgtgttcct gctgatgttc ctgctgacac caacagagtc ctatgtggat 60

gtgggacctg actctgtgaa gtctgcctgt attgaggtgg acatccaaca gaccttcttt 120

gacaagacct ggccaagacc aattgatgtg agcaaggctg atggcatcat ctacccacag 180

ggcaggacct acagcaacat caccatcacc taccagggac tgtttccata ccagggagat 240

catggagata tgtatgtcta ctctgctggt catgccacag gcaccacacc acagaaactg 300

tttgtggcta actacagcca ggatgtgaag cagtttgcca atggctttgt ggtgaggatt 360

ggagcagcag ccaacagcac aggcacagtg attatcagcc caagcacctc tgccaccatc 420

aggaagattt accctgcctt tatgctgggc tcctctgtgg gcaacttctc tgatggcaag 480

atgggcaggt tcttcaacca caccctggtg ctgctgcctg atggctgtgg caccctgctg 540

agggctttct actgtatctt ggaaccaagg tctggcaacc actgtcctgc tggcaactcc 600

tacacctcct ttgccaccta ccacacacct gccacagact gttctgatgg caactacaac 660

aggaatgcct ccctgaactc cttcaaggaa tacttcaacc tgaggaactg tacctttatg 720

tacacctaca acatcacaga ggatgagatt ttggagtggt ttggcatcac ccagacagcc 780

cagggagtgc atctgttctc gagcagatat gtggacctct atggaggcaa tatgttccag 840

tttgccaccc tgcctgtcta tgacaccatc aaatactaca gcatcatccc acacagcatc 900

aggagcatcc agtctgacag gaaggcttgg gctgccttct atgtctacaa actccaacca 960

ctgaccttcc tgctggactt ctctgtggat ggctacatca ggagggctat tgactgtggc 1020

ttcaatgacc tgagccaact tcactgttcc tatgagtcct ttgatgtgga gtctggagtc 1080

tactctgtgt cctcctttga ggctaagcca tctggctctg tggtggaaca ggctgaggga 1140

gtggagtgtg acttcagccc actgctgtct ggcacacctc cacaggtcta caacttcaag 1200

agactggtgt tcaccaactg taactacaac ctgaccaaac tgctgtccct gttctctgtg 1260

aatgacttca cttgtagcca gattagccct gctgccattg ccagcaactg ttactcctcc 1320

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ggcaactgtg tggaatactc cctctatgga gtgtctggca ggggagtgtt ccagaactgt 1860

actgctgtgg gagtgagaca acagaggttt gtctatgatg cctaccagaa cctggtgggc 1920

tactactctg atgatggcaa ctactactgt ctgagggctt gtgtgtctgt gcctgtgtct 1980

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cacatctcca gcacaatgag tcaatacagc aggagcacca ggagtatgct gaaaaggagg 2100

gacagcacat atggaccact ccaaacacct gtgggctgtg tgctgggact ggtgaactcc 2160

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aaggtgacag tggactgtaa gcaatatgtg tgtaatggct tccagaagtg tgaacaactt 2460

ctgagggaat atggacaatt ctgtagcaag ataaaccagg ctcttcatgg agccaacctg 2520

agacaggatg actctgtgag gaacctgttt gcctctgtga agtccagcca gtccagccca 2580

atcatccctg gctttggagg agacttcaac ctgaccctgt tggaaccggt gagcatcagc 2640

acaggcagca ggtctgccag gtctgccatt gaggacctgc tgtttgacaa ggtgaccatt 2700

gctgaccctg gctatatgca gggctatgat gactgtatgc aacagggacc tgcctctgcc 2760

agggacctga tttgtgccca atatgtggct ggctacaagg tgctgcctcc actgatggat 2820

gtgaatatgg aggctgccta cacctcctcc ctgctgggca gcattgctgg agtgggctgg 2880

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aatggagtgg gcatcaccca acaggtgctg tctgagaacc agaaactgat tgccaacaag 3000

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acccacattg tgtcctttgt ggtgaatgcc ccaaatggac tctactttat gcatgtgggc 3420

tactacccaa gcaaccacat tgaggtggtg tctgcctatg gactgtgtga tgctgccaac 3480

ccaaccaact gtattgcccc tgtgaatggc tacttcatca agaccaacaa caccaggatt 3540

gtggatgagt ggtcctacac aggctcctcc ttctatgccc ctgaaccaat cacctccctg 3600

aacaccaaat atgtggctcc acaggtgacc taccagaaca tcagcaccaa cctgcctcct 3660

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gacctgacct atgagatgct gtccctccaa caggtggtga aggctctgaa tgagtcctac 3840

attgacctga aagaactggg caactacacc tactacaaca agtggccatg gtacatctgg 3900

ctgggattca ttgcaggact ggtggccctg gctctgtgcg tcttctttat cctgtgctgt 3960

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Claims

1.一种IgG抗体，由重链和轻链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基和第116-120位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第109-119位氨基酸残基。

2.如权利要求1所述的IgG抗体，其特征在于：

所述重链中的重链可变区为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1自N末端第17-131位氨基酸残基组成的蛋白质；(a2)序列表的序列1自N末端第1-131位氨基酸残基组成的蛋白质；

3.如权利要求2所述的IgG抗体，其特征在于：

所述重链为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列1自N末端第17-461位氨基酸残基组成的蛋白质；(c2)序列表的序列3所示的蛋白质；

4.编码权利要求2所述IgG抗体的基因，其特征在于：

编码所述重链的基因为如下(1)或(2)：

(1)序列表的序列2自5’末端第49-1383位核苷酸所示的DNA分子；

(2)序列表的序列2所示的DNA分子；

编码所述轻链的基因为如下(3)或(4)：

(3)序列表的序列4自5’末端第49-705位核苷酸所示的DNA分子；

(4)序列表的序列4所示的DNA分子。

5.权利要求1或2或3所述IgG抗体在制备用于抑制中东呼吸综合征冠状病毒的药物中的应用。

6.一种用于抑制中东呼吸综合征冠状病毒的药物，其活性成分为权利要求1或2或3所述IgG抗体。

7.权利要求1或2或3所述IgG抗体在制备用于中和中东呼吸综合征冠状病毒的药物中的应用。

8.一种用于中和中东呼吸综合征冠状病毒的药物，其活性成分为权利要求1或2或3所述IgG抗体。

9.权利要求1或2或3所述IgG抗体在制备用于预防和/或治疗中东呼吸综合征的药物中的应用。

10.一种用于预防和/或治疗中东呼吸综合征的药物，其活性成分为权利要求1或2或3所述IgG抗体。