CN111537747A - 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111537747A
CN111537747A CN202010524951.4A CN202010524951A CN111537747A CN 111537747 A CN111537747 A CN 111537747A CN 202010524951 A CN202010524951 A CN 202010524951A CN 111537747 A CN111537747 A CN 111537747A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pad
test strip
protein
antibody
quantum dot
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010524951.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111537747B (zh
Inventor
张志栋
解巧丽
齐凯歌
陈志龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Enbao Biomedical Technology Co ltd
Guangdong Provincial Laboratory Of Regenerative Medicine And Health
Guangzhou Institute of Biomedicine and Health of CAS
Original Assignee
Guangzhou Enbao Biomedical Technology Co ltd
Guangdong Provincial Laboratory Of Regenerative Medicine And Health
Guangzhou Institute of Biomedicine and Health of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Enbao Biomedical Technology Co ltd, Guangdong Provincial Laboratory Of Regenerative Medicine And Health, Guangzhou Institute of Biomedicine and Health of CAS filed Critical Guangzhou Enbao Biomedical Technology Co ltd
Priority to CN202010524951.4A priority Critical patent/CN111537747B/zh
Publication of CN111537747A publication Critical patent/CN111537747A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111537747B publication Critical patent/CN111537747B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G01N33/587—Nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/588—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with semiconductor nanocrystal label, e.g. quantum dots
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法，所述试纸条的硝酸纤维素膜设有检测线和质控线，所述检测线包被新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白，所述质控线包被鸡IgY抗体；所述试纸条的结合垫上包被有量子点标记的羊抗人IgG抗体和量子点标记的羊抗鸡IgY抗体。本发明提供的试纸条能够提高人新型冠状病毒IgG抗体检测的灵敏度和特异性，防止出现假阳性结果导致误诊，且所述试纸条在重复检测相同样本时，所得T/C值较为接近；同时所述试纸条使用方法简单，能够实现现场快速检测。

Description

一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备 方法
技术领域
本发明属于免疫检测分析技术领域，具体涉及一种免疫层析检测试纸条、试剂盒及其制备方法，尤其涉及一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法。
背景技术
新型冠状病毒(2019-nCoV或SARS-CoV-2)导致的新型冠状病毒肺炎(CoronaVirus Disease 2019，COVID-19)患者的临床表现为：以发热、乏力、干咳为主要表现，鼻塞、流涕等上呼吸道症状少见，会出现缺氧低氧状态，约半数患者多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍等。
COVID-19的检测分为核酸检测和抗体检测。核酸检测多采用荧光PCR法，双扩增法、恒温扩增-实时荧光法、联合探针锚定聚合测序法、RNA恒温扩增-金探针层析法；抗体检测多采用胶体金法、磁微粒化学发光法。
COVID-19的核酸检测容易出现假阴性。由于采样不当、标本保存不当、采用不同类型的标本以及使用不同厂家试剂都可能造成核酸检测结果“假阴性”而出现漏诊；且核酸检测对检测设备或平台要求较高，高灵敏度的RT-PCR仪价格不菲，对实验室的洁净度和操作人员要求也较高；同时，核酸检测耗时较长，完成一个RT-PCR的检测通常需要4-6个小时，然而考虑到样本运输、大量样本积压的情况，通常最快24小时才可以报告结果。
COVID-19的抗体检测包括胶体金法、磁微粒化学发光法。其中，磁微粒化学发光法需要大型仪器设备不能实现现场快速检测。胶体金法采用的是免疫层析技术，免疫层析技术是建立在层析技术和抗原-抗体特异性反应基础上的一项免疫检测技术。层析过程中，结合了标记物的待测样本，通过毛细管作用，在固相膜上与抗原或者抗体发生特异性反应从而富集，根据肉眼可见的标记物(如胶体金、乳胶微球)或者仪器可以判读的荧光标记物(如时间分辨微球、量子点)来定性或者定量检测。目前应用比较多的免疫层析技术包括胶体金免疫层析技术和量子点层析技术。
胶体金，也称金溶胶，是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子(AuCl2 -)，外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。胶体金具有胶体的特性，容易受到电解质的影响，使胶体金凝聚成大颗粒。因此，胶体金用于免疫分析中时受环境pH和电解质影响，其稳定性稍差，且胶体金是肉眼可见的颗粒，其灵敏度较差。胶体金与蛋白质是靠静电吸引结合在一起，有非特异干扰，容易出现假阳性。
因此，为了实现对新型冠状病毒的快速、准确检测，提供一种检测方便快捷、检测结果准确的试纸条或者检测方法是本领域亟需解决的问题。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题，本发明提供一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法。所述试纸条利用量子点标记抗体，同时在检测线上包被新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白，实现对新型冠状病毒的快速、准确检测。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，所述试纸条的硝酸纤维素膜(NC膜)设有检测线和质控线，所述检测线包被新型冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)和S1蛋白，所述质控线包被鸡IgY抗体；所述试纸条的结合垫上包被有量子点标记的羊抗人IgG抗体和量子点标记的羊抗鸡IgY抗体。
本发明中，所述试纸条利用荧光免疫层析技术、采用免疫捕获法检测人新型冠状病毒IgG抗体。所述试纸条的检测线上同时包被新型冠状病毒的N蛋白和S1蛋白，即所述核衣壳蛋白和S1蛋白混合后进行包被，混合包被后得到的试纸条的T/C值高于单独包被S1蛋白和N蛋白，也就是说，混合包被得到的试纸条灵敏度较好，能够提高检测特异性，防止出现假阳性结果导致误诊。同时，采用量子点标记检测人新型冠状病毒IgG抗体，由于量子点发射光谱宽度较窄，光化学稳定性高，不易分解，其可以实现时间分辨荧光检测，长达200ns时间延迟使瞬时荧光干扰减到最小，能够进一步提高检测的灵敏度和特异性。
其中，所述检测线包被的N蛋白(N，Nucleocapsid Protein)为病毒核衣壳内最重要的蛋白之一，主要负责RNA的复制功能；S1蛋白为新型冠状病毒中关键的S蛋白(棘突蛋白，spike protein)的亚单位之一，所述S蛋白包含S1和S2两个亚单位，S1能够促进病毒与宿主细胞受体的结合，其含有一个重要的C端RBD结构域，而RBD结构域负责和受体结合；且新型冠状病毒内N蛋白、S1蛋白均为真核表达。
在测试时，将待测样本滴加到试纸条的样品垫上，在毛细效应下，样本中的人新型冠状病毒IgG抗体与结合垫上量子点标记的羊抗人IgG抗体结合，扩散至NC膜上，被包被的新型冠状病毒N蛋白和S1蛋白捕获，并形成复合物聚集于检测线；在激发光的作用下，荧光物质发射一定波长的光信号，被荧光免疫层析读卡仪识别，并转化为一定的数值；荧光免疫层析读卡仪按内置的参考范围判断样本中人新型冠状病毒IgG抗体的浓度，从而判断待测样品的检测结果是阴性还是阳性。
作为本发明优选的技术方案，所述核衣壳蛋白的工作浓度为0.1～0.5mg/mL，例如可以是0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL、0.3mg/mL、0.35mg/mL、0.4mg/mL、0.45mg/mL或0.5mg/mL等，优选为0.25mg/mL。
优选地，所述S1蛋白的工作浓度为1.5～2mg/mL，例如可以是1.5mg/mL、1.6mg/mL、1.7mg/mL、1.8mg/mL、1.9mg/mL或2mg/mL等，优选为1.75mg/mL。
本发明中，所述核衣壳蛋白与S1蛋白的工作浓度以及两者的使用比例较为重要，若是超出此范围，待测溶液层析至检测线上时，人新型冠状病毒IgG抗体无法正常与核衣壳蛋白与S1蛋白相结合，导致检测结果准确度和灵敏性降低。同时，核衣壳蛋白与S1蛋白的工作浓度在此范围中，也能够使两者保持较好的比例，当两者比例接近1.75:0.25时，所得检测试纸条的检测效果最好。
优选地，包被所述核衣壳蛋白和S1蛋白的操作为：将所述核衣壳蛋白和S1蛋白以(0.1～0.5):(1.5～2)的比例进行混合，再用包被稀释液稀释。
优选地，所述鸡IgY抗体的工作浓度为0.8～1.2mg/mL，例如可以是0.8mg/mL、0.85mg/mL、0.9mg/mL、0.95mg/mL、1mg/mL、1.1mg/mL或2mg/mL等，优选为1mg/mL。本发明中，质控线上包被鸡IgY抗体，其工作浓度可以根据实验需求相应调整，同时，质控线的信号值还可以根据量子点标记的羊抗鸡IgY的喷量进行调整。
优选地，稀释所述新型冠状病毒核衣壳蛋白、S1蛋白和鸡IgY抗体时使用的溶液为包被稀释液，所述包被稀释液中包括质量分数为1～3％的蔗糖，例如可以是1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.5％、2.8％或3％等，优选为2％。
优选地，所述包被稀释液为含有质量分数为1～3％(例如可以是1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.5％、2.8％或3％等)蔗糖的PBS缓冲液。
优选地，所述结合垫上羊抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY抗体的浓度比为(20～30):1，例如可以是20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1或30:1等。
作为本发明优选的技术方案，所述试纸条包括顺次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。本发明提供的检测试纸条包括PVC底板，所述的PVC底板上衔接样品垫，结合垫、包被膜和吸水垫。
优选地，所述质控线位于硝酸纤维素膜上靠近吸水垫的一端，与吸水垫的距离为8～12mm，例如可以是8mm、9mm、10mm、11mm或12mm等。
优选地，所述检测线位于硝酸纤维素膜上靠近结合垫的一端，与结合垫的距离为8～12mm，例如可以是8mm、9mm、10mm、11mm或12mm等。
作为本发明扩展的技术方案，所述试纸条上还可以增加一条检测线，用于检测人新型冠状病毒IgM或IgA抗体。
作为本发明优选的技术方案，所述样品垫制备时使用的样品垫处理液包括质量分数为0.3～0.5％(例如可以是0.3％、0.32％、0.35％、0.4％、0.42％、0.45％、0.48％或0.5％等)的酪蛋白钠。优选地，所述样品垫处理液为含有质量分数为0.3～0.5％酪蛋白钠的Tris-HCl缓冲液。
本发明中，样品垫处理液需要根据检测抗体的种类进行选择，针对本发明所要检测的IgG抗体，所选择的样品垫处理液为含有0.3～0.5％酪蛋白钠的Tris-HCl缓冲液，若选用其他的缓冲液，可能无法减小待测样品中其他杂质的影响，使检测结果的特异性较差。
优选地，所述结合垫制备时使用的结合垫处理液包括质量分数为1～3％(例如可以是1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.5％、2.8％或3％等)的海藻糖和0.5～1.5％(例如可以是0.5％、0.6％、0.8％、1％、1.2％、1.3％或1.5％等)的酪蛋白钠。优选地，所述结合垫处理液为含有质量分数为1～3％的海藻糖和0.5～1.5％的酪蛋白钠的Tris-HCl缓冲液。
作为本发明优选的技术方案，所述羊抗人IgG抗体的标记方法为：将活化的量子点微球与所述羊抗人IgG抗体混合反应，所述量子点微球与抗体共价偶连，得到量子点标记的羊抗人IgG抗体。本发明中所述羊抗鸡IgY抗体的标记方法与羊抗人IgG抗体的标记方法相同。
优选地，所述羊抗人IgG抗体与量子点微球的质量比为(1～1.5):10，例如可以是1:10、1.05:10、1.1:10、1.15:10、1.2:10、1.25:10、1.3:10、1.35:10、1.4:10或1.5:10等。例如，相对于50μg的量子点微球，所述羊抗人IgG抗体的使用量为50～75μg。
优选地，所述量子点微球的粒径为80～120nm，例如可以是80nm、85nm、90nm、95nm、100nm、105nm、110nm、105nm、110nm、115nm或120nm等。本发明中，免疫层析专用量子点纳米球的粒径为100±20nm；发射波长620±10nm，520±10nm；激发波长<500nm，优选为365～450nm；且表面具有羧基官能团。
优选地，所述混合反应的温度为18～26℃，例如可以是18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃或26℃等。
优选地，所述活化使用的活化剂包括N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)。
优选地，所述Sulfo-NHS的质量浓度为10～30mg/mL，例如可以是10mg/mL、12mg/mL、15mg/mL、18mg/mL、20mg/mL、22mg/mL、25mg/mL、28mg/mL或30mg/mL等，优选为20mg/mL。
优选地，所述EDC的质量浓度为10～30mg/mL，例如可以是10mg/mL、12mg/mL、15mg/mL、18mg/mL、20mg/mL、22mg/mL、25mg/mL、28mg/mL或30mg/mL等，优选为20mg/mL。
本发明中，所述标记时使用的标记缓冲液的pH为5.5～6.5，例如可以是5.5、5.6、5.8、6、6.2、6.4或6.5等。优选地，所述标记缓冲液为磷酸盐缓冲液。
优选地，所述标记完成后使用的标记保存液的pH为7～7.5，例如可以是7、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5等。优选地，所述标记保存液为含有质量分数1～3％(例如可以是1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.5％、2.8％或3％等)的海藻糖和0.5～1.5％(例如可以是0.5％、0.6％、0.8％、1％、1.2％、1.3％或1.5％等)BSA的Tris-HCl缓冲液。
示例性的，所述羊抗鸡IgY抗体的标记方法包括如下步骤：
活化：以标记50μL(含量为10mg/mL)量子点微球为例(生产环境温度18～26℃、湿度45～65％)，取量子点微球50μL加到标记缓冲液中震荡混匀，加入活化剂，室温震荡反应；4℃离心弃上清，收集沉淀，用标记缓冲液重悬，定容后超声分散；
抗体标记：取70μg标记抗体(抗人IgG抗体)分散在标记缓冲液中，加入上述活化后的微球200μL(约相当于微球原始浓度的50μL)发生震荡偶联反应；4℃离心，弃上清，收集沉淀；
封闭抗体：每个管子用1％BSA封闭液重悬，定容后超声分散，封闭2h；
纯化：4℃离心弃上清，收集沉淀，每个管子用100μL保存液重悬，震荡分散；2～8℃(例如可以是2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃等)保存备用，储存效期7天。
优选地，所述结合垫上羊抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY抗体的浓度比为(20～30):1，例如可以是20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1或30:1等。
第二方面，如第一方面所述的试纸条的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)制备量子点标记的羊抗人IgG抗体和量子点标记的羊抗鸡IgY抗体，再将所述标记后的抗体混合后喷膜得到结合垫；
(2)将鸡IgY抗体稀释后划线到硝酸纤维素膜上形成质控线，将新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白稀释后划线到所述硝酸纤维素膜上形成检测线；
(3)将吸水垫、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫依次固定于底板上得到所述试纸条。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述喷膜的喷量为3～8μL/cm，例如可以是3μL/cm、4μL/cm、5μL/cm、6μL/cm、7μL/cm或8μL/cm等。
优选地，步骤(2)所述划线的浓度为0.8～1.2μL/cm，例如可以是0.8μL/cm、0.9μL/cm、1μL/cm、1.1μL/cm或1.2μL/cm等，速度80～120mm/s，例如可以是80mm/s、90mm/s、95mm/s、100mm/s、105mm/s、110mm/s或120mm/s等。
优选地，制备得到所述结合垫和硝酸纤维素膜后还包括干燥的操作，所述干燥为将结合垫或硝酸纤维素膜放置在温度18～26℃(例如可以是18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃或26℃等)、湿度≤30％(例如湿度为0％、5％、10％、15％、20％、25％或30％)的烘箱中干燥16～18h(例如可以是16h、16.2h、16.5h、17h、17.2h、17.5h或18h等)。
作为本发明优选的技术方案，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将活化的量子点微球与所述羊抗人IgG抗体混合反应，所述羊抗人IgG抗体与量子点微球的质量比为(1～1.5):10；所述量子点微球与抗体共价偶连，得到量子点标记的羊抗人IgG抗体；量子点标记的羊抗鸡IgY抗体与所述量子点标记的羊抗人IgG抗体的制备方法相同；
再将所述标记后的抗体稀释后以体积比(20～30):1混合，上样到喷金划线机中，按照3～8μL/cm的喷量喷膜后得到结合垫；
(2)将鸡IgY抗体稀释后划线到硝酸纤维素膜上形成质控线，所述鸡IgY抗体的工作浓度为0.8～1.2mg/mL；将新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白稀释后划线到所述硝酸纤维素膜上形成检测线，所述核衣壳蛋白的工作浓度为0.1～0.5mg/mL，所述S1蛋白的工作浓度为1.5～2mg/mL；所述划线的浓度为0.8～1.2μL/cm，速度80～120mm/s；
(3)将吸水垫、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫依次固定于底板上得到所述试纸条。
示例性的，本发明提供一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，所述试纸条包括PVC底板，在PVC底板上有顺次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。具体制备步骤如下：
(1)NC膜的的制备：质控线划线，用包被稀释液稀释鸡IgY抗体稀释至1mg/mL进行包被，划线参数为1μL/cm，速度100mm/s；检测线划线，将S1蛋白与N蛋白以1.75:0.25的比例混合，再用包被稀释液稀释，稀释后蛋白总浓度为2mg/mL，即包被稀释液稀释S1蛋白的工作浓度为1.75mg/mL，N蛋白浓度的工作浓度为0.25mg/mL，划线参数为1μL/cm，速度100mm/s。
(2)NC膜的粘贴：轻轻揭开PVC板上NC膜粘贴处的保护膜，将NC膜从左向右均匀推进，使其牢固的粘贴在PVC底板上；
(3)吸水垫的粘贴：将吸水纸裁成尺寸为(23±1)mm×(300±5)mm，即为吸水垫，再将PVC底板平铺于工作台面上，轻轻揭开PVC板上吸水垫粘贴处的保护膜，将吸水垫粘附于其上，均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡，吸水垫一侧与底板的顶端对齐，吸水垫另一侧可覆盖于NC膜上2mm；
(4)结合垫的制备：将一张尺寸200mm×300mm玻璃纤维完全浸没在50mL结合垫处理液中，滚轮处理均匀。取出浸泡后的玻璃纤维，放置在37℃烘箱中干燥16～18h；
其中，所述结合垫处理液为含有质量分数为2％海藻糖、1％酪蛋白钠的0.2M pH为7.59的Tris-HCl缓冲液。
将标记后抗人IgG、羊抗鸡IgY上样到喷金划线机中，二者的混合体积比例为25:1，按照5μL/cm的喷量喷到处理后的(1.1±1)mm×(300±5)mm玻璃纤维上，完成后，将其放置在温度18～26℃、湿度≤30％的烘箱中干燥过夜16～18h，干燥完，迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口即得荧光结合垫，2～8℃保存，待用，储存效期2年；
(5)结合垫的粘贴：将PVC板平铺于工作台面上；轻轻揭开PVC板上结合垫粘贴处的保护膜，将结合垫粘附于其上，均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡，结合垫覆盖在NC膜上2mm；
(6)样品垫的制备：将样品垫裁成23mm×300mm的大小，浸泡在样品垫处理液中，1h之后取出，于室温干燥16～18h，干燥完后，迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口，2～8℃保存待用，储存效期2年；
其中，所述样品垫处理液为含有质量分数为0.4％酪蛋白钠的0.2M pH为7.59的Tris-HCl缓冲液。
(7)样品垫的粘贴：轻轻揭开PVC板最底端的保护膜，将样品垫粘附于结合垫，底端与PVC底板底端对齐，方法同吸水垫，样品垫覆盖在结合垫上2mm；
(8)将粘贴好的大板切成4.0mm左右宽的试纸条即得到本发明所述的试纸条。
第三方面，本发明提供一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的检测卡，包括如第一方面所述的试纸条，以及包装所述试纸条的塑料外壳；所述塑料外壳的卡壳上盖设有加样孔和观察窗；所述加样孔在样品垫的上方并通过所述观察窗观测检测线和质控线。
例如，将第一方面所述的试纸条装入塑料外壳内，再将每一检测卡置于铝膜袋中，并加入0.5g干燥剂1包，热合封口即可得到用于检测人新型冠状病毒IgG抗体的检测卡。
同时，本发明所述的检测卡还可以为二联卡，其中一个用于检测人新型冠状病毒IgG抗体，另一个用于检测人新型冠状病毒IgM抗体。
第四方面，一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试剂盒，所述试剂盒包括如第三方面所述的检测卡。
本发明中，对鸡IgY抗体、羊抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY抗体的来源不作特别限定，可以采用本领域技术人员熟知的符合上述要求的市售商品，也可按照本领域技术人员常用的方法制备得到符合上述要求的。
本发明中，对新型冠状病毒N蛋白和S蛋白的来源和制备方法不作特别限定，所述新型冠状病毒N蛋白和S蛋白可按照本领域常规技术制备。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
(1)本发明提供的检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，在检测线同时包被新型冠状病毒N蛋白和S1蛋白，N蛋白、S1蛋白均为真核表达，且N蛋白主要负责RNA的复制功能，S1能够促进病毒与宿主细胞受体的结合；并用量子点标记羊抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY抗体，所得试纸条能够提高人新型冠状病毒IgG抗体检测的灵敏度和特异性，防止出现假阳性结果导致误诊；
(2)本发明提供的试纸条检测结果重复度较好，检测结果较为稳定，无论是检测阴性样本还是阳性样本，在重复检测相同样本时，所得T/C值较为接近；同时所述试纸条使用方法简单，能够实现现场快速检测。因此，本发明提供的检测试纸条不论是灵敏度、特异性还是准确度都较好，在检测新型冠状病毒时能够快速准确提供检测结果。
附图说明
图1为本发明提供的试纸条的结构示意图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。
本发明所述的检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条是基于荧光免疫层析技术和免疫捕获法进行检测的，下面结合图1对所述试纸条的工作原理进行简单描述：
所述试纸条的硝酸纤维膜上包含检测线(T线)和质控线(C线)，所述检测线包被新型冠状病毒的N蛋白和S1蛋白，质控线包被鸡IgY抗体；
所述试纸条的结合垫上固定量子点荧光微球标记的羊抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY抗体；
在检测时，待测样本滴加到试纸条的样品垫上，在毛细效应下发生扩散，待测样本中的若含有人新型冠状病毒IgG抗体，所述人IgG抗体与量子点标记的羊抗人IgG抗体结合，扩散至测试区，被包被的新型冠状病毒N蛋白和S1蛋白捕获，并形成复合物聚集于硝酸纤维膜的检测线；
结合垫中的羊抗鸡IgY抗体继续扩散，并与鸡IgY抗体结合，聚集在硝酸纤维膜的质控线；
在激发光的作用下，量子点发射一定波长的光信号，被荧光免疫层析读卡仪识别，并转化为一定的数值；荧光免疫层析读卡仪按内置的参考范围判断样本中人新型冠状病毒IgG抗体的浓度。
判别标准：T/C＞0.008判定检测结果为阳性，T/C＜0.008判定检测结果为阴性。
以下实施例中，所用鸡IgY抗体、羊抗人IgG抗体(多克隆抗体)和羊抗鸡IgY抗体(多克隆抗体)均为常规手段制备的抗体；新型冠状病毒N蛋白和S蛋白均为真核表达的蛋白，均以本领域技术人员知晓的实验方法进行制备。
实施例1
本实施例提供一种快速检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，所述的检测试纸条包括PVC底板，所述的PVC底板上衔接样品垫，结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫。
本实施例中，所使用到的各种溶液的成分如下表1所示，表中％均表示质量分数；
表1
Figure BDA0002533383960000131
Figure BDA0002533383960000141
所述试纸条的制备步骤包括：
(1)样品垫的制备：将样品垫裁成23mm×300mm的大小，浸泡在样品垫处理液中，1h之后取出，于室温干燥16h，干燥完后，迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口，4℃保存待用；
(2)结合垫的制备：将一张尺寸200mm×300mm玻璃纤维完全浸没在50mL结合垫处理液中，滚轮处理均匀，取出浸泡后的玻璃纤维，放置在37℃烘箱中干燥16h，干燥完后，迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口，4℃保存待用；
喷膜与干燥：将标记后抗人IgG、羊抗鸡IgY上样到喷金划线机中，两者的混合体积比例为25:1，按照5μL/cm的喷量喷到处理后的(1.1±1)mm×(300±5)mm玻璃纤维上；
完成后，将其放置在温度25℃、湿度≤30％的烘箱中干燥过夜16h，干燥完，迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口即得荧光结合垫，2～8℃保存，待用。
其中，羊抗人IgG的标记方法为：
1、活化过程：生产环境温度25℃、湿度50％，取量子点微球50μL加到0.1mL标记缓冲液中震荡混匀，加入4μL活化剂1，3μL活化剂2，室温震荡反应30min；4℃13000r/min离心10min，弃上清，收集沉淀，用标记缓冲液重悬，定容至0.2mL，超声分散；
2、抗体标记：取70μg标记抗体(羊抗抗人IgG)分散在0.05mL标记缓冲液中，加入上述活化后的微球200μL(约相当于微球原始浓度的50μL)，震荡5s，震荡偶联反应0.5h，4℃8000r/min离心5min，弃上清，收集沉淀；
3、封闭抗体：每个管子用1％BSA封闭液重悬，定容至0.2mL，超声分散；封闭2h。
4、纯化方法：4℃8000r/min离心5min，弃上清，收集沉淀，每个管子用100μL保存液重悬，震荡分散；4℃保存备用。所述羊抗鸡IgY的标记方法同羊抗人IgG的标记。
(3)NC膜的制备：①质控线划线：C线与硝酸纤维素膜上缘的距离为10mm；用包被稀释液稀释鸡IgY抗体稀释至1mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s；
②检测线划线：T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为10mm；将S1蛋白与N蛋白以1.75:0.25的比例混合，再用包被稀释液稀释，稀释后蛋白总浓度为2mg/mL，即S1蛋白的工作浓度为1.75mg/mL，N蛋白的工作浓度为0.25mg/mL，划线参数为1μL/cm，速度100mm/s；
完成后将片材放置在温度25℃、湿度≤30％的烘箱中干燥16h，干燥完迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口即得反应膜，2～8℃保存，待用。
(4)组装：各组件在PVC底板上的排列顺序依次为吸水垫-硝酸纤维素膜-荧光结合点垫-样品垫；
将PVC板平铺于工作台面上：①轻轻揭开PVC板上NC膜粘贴处的保护膜，将NC膜从左向右均匀推进，使其牢固的粘贴在PVC板上；②揭开PVC板上吸水垫粘贴处的保护膜，将吸水垫粘附于其上，均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡，吸水垫一侧与底板的顶端对齐；③轻轻揭开PVC板上结合垫粘贴处的保护膜，将结合垫粘附于其上，均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡，结合垫覆盖在NC膜上2mm；④轻轻揭开PVC板最底端的保护膜，将样品垫粘附于结合垫，底端与PVC底板底端对齐，方法同吸水垫；
最后，将粘贴好的PVC底板切成4.0mm宽的试纸条即得到本发明所述的检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条。
实施例2～5
实施例2～5提供多个不同S1蛋白与N蛋白浓度的试纸条，与实施例1的区别在于，各实施例中检测线S1蛋白与N蛋白的工作浓度分别设定为：
实施例2：S1蛋白1.50mg/mL、N蛋白0.50mg/mL；
实施例3：S1蛋白1.00mg/mL、N蛋白1.00mg/mL；
实施例4：S1蛋白0.50mg/mL、N蛋白1.50mg/mL；
实施例5：S1蛋白0.25mg/mL、N蛋白1.75mg/mL；其余条件及制备方法与实施例1相同。
对比例1
本对比例提供一种快速检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，与实施例1的区别在于，所述检测线只包被S1蛋白，其工作浓度为2.00mg/mL；其余条件及制备方法与实施例1相同。
对比例2
本对比例提供一种快速检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，与实施例1的区别在于，所述检测线只包被N蛋白，其工作浓度为2.00mg/mL；其余条件及制备方法与实施例1相同。
性能测试1
将实施例1制备得到的试纸条装入塑料卡壳内，将每一试剂卡置于铝膜袋中，并加入0.5g干燥剂1包，热合封口得到人新型冠状病毒IgG抗体检测卡。应用上述试检测卡检测阴性血浆样本和阳性血浆样本，检测结果如下表2所示：
表2阴性和阳性样本检测结果
Figure BDA0002533383960000171
由上表可知，本发明所述的试纸条在检测同一样本时，不论是阴性样本还是阳性样本，其重复率较好，检测结果较为稳定，测试值不会出现较大变化。
在将核酸检测阳性样本稀释100倍后，试纸条的检测结果仍然为IgG阳性，说明本发明提供的检测卡的灵敏度较高。
性能测试2
使用实施例1提供的试剂条制成检测卡，检测10例阴性样本，结果如下表3所示，阴性符合率100％。
表3新型冠状病毒IgG抗体阴性样本检测结果
Figure BDA0002533383960000172
Figure BDA0002533383960000181
由上表可知，本发明所述的试纸条在检测阴性样本时，检测结果较为准确，不会出现假阳性结果，防止在诊断时出现误诊的情况。
性能测试3
将实施例1～5和对比例1～2提供的试剂条制成检测卡，检测同样的按1:100稀释的阳性样本，每个样本平行测试三次后取平均值，其中，样本稀释液为含有0.1％表面活性剂S9(Tetronic1307)、0.04M EDTA的0.2M pH为7.59的Tris-HCl缓冲液。
检测结果如表4所示：
表4
Figure BDA0002533383960000182
Figure BDA0002533383960000191
由上表中实施例1与对比例1～2可知，单独包被S1蛋白和N蛋白检测的T/C明显低于N蛋白和S1蛋白混合包被的T/C值；同时由实施例1与实施例2～5比较可知，在S1蛋白与N蛋白的工作浓度为1.75mg/mL和0.25mg/mL，即两者比值为7:1时，检测结果较好。
综上所述，本发明提供的检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条能够检测人新型冠状病毒IgG抗体，且在将核酸检测阳性样本稀释100倍后，试纸条的检测结果仍然为IgG阳性，说明所述试纸条的灵敏度和特异性较高；检测10例阴性样本时，阴性符合率100％，能够有效防止误诊。
申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条，其特征在于，所述试纸条的硝酸纤维素膜设有检测线和质控线，所述检测线包被新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白，所述质控线包被鸡IgY抗体；
所述试纸条的结合垫上包被有量子点标记的羊抗人IgG抗体和量子点标记的羊抗鸡IgY抗体。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述核衣壳蛋白的工作浓度为0.1～0.5mg/mL，优选为0.25mg/mL；
优选地，所述S1蛋白的工作浓度为1.5～2mg/mL，优选为1.75mg/mL；
优选地，所述鸡IgY抗体的工作浓度为0.8～1.2mg/mL，优选为1mg/mL；
优选地，稀释所述新型冠状病毒核衣壳蛋白、S1蛋白和鸡IgY抗体时使用的溶液为包被稀释液，所述包被稀释液中包括质量分数为1～3％的蔗糖，优选为2％；
优选地，所述包被稀释液为含有质量分数为1～3％蔗糖的PBS缓冲液。
3.根据权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括顺次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
优选地，所述质控线位于硝酸纤维素膜上靠近吸水垫的一端，与吸水垫的距离为8～12mm；
优选地，所述检测线位于硝酸纤维素膜上靠近结合垫的一端，与结合垫的距离为8～12mm。
4.根据权利要求3所述的试纸条，其特征在于，所述样品垫制备时使用的样品垫处理液包括质量分数为0.3～0.5％的酪蛋白钠；
优选地，所述样品垫处理液为含有质量分数为0.3～0.5％酪蛋白钠的Tris-HCl缓冲液；
优选地，所述结合垫制备时使用的结合垫处理液包括质量分数为1～3％的海藻糖和0.5～1.5％的酪蛋白钠；
优选地，所述结合垫处理液为含有质量分数为1～3％的海藻糖和0.5～1.5％的酪蛋白钠的Tris-HCl缓冲液；
优选地，所述结合垫上羊抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY抗体的浓度比为(20～30):1。
5.根据权利要求1～4任一项所述的试纸条，其特征在于，所述量子点标记的羊抗人IgG抗体的制备方法为：
将活化的量子点微球与所述羊抗人IgG抗体混合反应，所述量子点微球与抗体共价偶连，得到量子点标记的羊抗人IgG抗体；
优选地，所述羊抗人IgG抗体与量子点微球的质量比为(1～1.5):10；
优选地，所述量子点微球的粒径为80～120nm；
优选地，所述混合反应的温度为18～26℃；
优选地，所述活化使用的活化剂包括Sulfo-NHS和EDC；
优选地，所述Sulfo-NHS的质量浓度为10～30mg/mL，优选为20mg/mL；
优选地，所述EDC的质量浓度为10～30mg/mL，优选为20mg/mL。
6.一种如权利要求1～5任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)制备量子点标记的羊抗人IgG抗体和量子点标记的羊抗鸡IgY抗体，再将所述标记后的抗体混合后喷膜得到结合垫；
(2)将鸡IgY抗体稀释后划线到硝酸纤维素膜上形成质控线，将新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白稀释后划线到所述硝酸纤维素膜上形成检测线；
(3)将吸水垫、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫依次固定于底板上得到所述试纸条。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述喷膜的喷量为3～8μL/cm；
优选地，步骤(2)所述划线的浓度为0.8～1.2μL/cm，速度80～120mm/s；
优选地，制备得到所述结合垫和硝酸纤维素膜后还包括干燥的操作，所述干燥为将结合垫或硝酸纤维素膜放置在温度18～26℃、湿度≤30％的烘箱中干燥16～18h。
8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将活化的量子点微球与所述羊抗人IgG抗体混合反应，所述羊抗人IgG抗体与量子点微球的质量比为(1～1.5):10；所述量子点微球与抗体共价偶连，所述量子点微球的粒径为80～120nm，得到量子点标记的羊抗人IgG抗体；
再将所述标记后的抗体稀释后以体积比(20～30):1混合，上样到喷金划线机中，按照3～8μL/cm的喷量喷膜后得到结合垫；
(2)将鸡IgY抗体稀释后划线到硝酸纤维素膜上形成质控线，所述鸡IgY抗体的工作浓度为0.8～1.2mg/mL；将新型冠状病毒核衣壳蛋白和S1蛋白稀释后划线到所述硝酸纤维素膜上形成检测线，所述核衣壳蛋白的工作浓度为0.1～0.5mg/mL，所述S1蛋白的工作浓度为1.5～2mg/mL；所述划线的浓度为0.8～1.2μL/cm，速度80～120mm/s；
(3)将吸水垫、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫依次固定于底板上得到所述试纸条。
9.一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的检测卡，其特征在于，包括如权利要求1～5任一项所述的试纸条，以及包装所述试纸条的塑料外壳；
所述塑料外壳的卡壳上盖设有加样孔和观察窗，所述加样孔在样品垫的上方并通过所述观察窗观测检测线和质控线。
10.一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求9所述的检测卡。
CN202010524951.4A 2020-06-10 2020-06-10 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法 Active CN111537747B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010524951.4A CN111537747B (zh) 2020-06-10 2020-06-10 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010524951.4A CN111537747B (zh) 2020-06-10 2020-06-10 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111537747A true CN111537747A (zh) 2020-08-14
CN111537747B CN111537747B (zh) 2022-09-02

Family

ID=71968929

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010524951.4A Active CN111537747B (zh) 2020-06-10 2020-06-10 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111537747B (zh)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111983217A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 菲鹏生物股份有限公司 一种样本处理液及其应用
CN112014560A (zh) * 2020-08-31 2020-12-01 复旦大学 一种检测人抗SARS-CoV-2抗体的近红外荧光免疫层析试纸条
CN112114140A (zh) * 2020-09-11 2020-12-22 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒
CN112114151A (zh) * 2020-08-20 2020-12-22 深圳爱信生物技术有限公司 一种2019-nCoV的IgG、IgM和IgA抗体联合检测试剂盒及其检测方法
CN112649603A (zh) * 2020-08-31 2021-04-13 深圳容金科技有限公司 一种检测covid-19抗体的免疫层析试剂盒及制备方法
CN113514636A (zh) * 2021-03-03 2021-10-19 广州中医药大学顺德医院(佛山市顺德区中医院) 一种新冠中和抗体荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法
CN113533740A (zh) * 2021-06-15 2021-10-22 深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院) 用于eb病毒抗体快速联合检测的试剂盒
CN113702643A (zh) * 2021-07-12 2021-11-26 杭州奥泰生物技术股份有限公司 一种联合检测新型冠状病毒中和抗体及核衣壳蛋白抗体的装置
CN114252600A (zh) * 2021-11-08 2022-03-29 广州万德康科技有限公司 一种猫三联抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN114354924A (zh) * 2021-11-18 2022-04-15 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 一种AIE纳米微球的2019-nCoV新型冠状病毒抗原检测试剂及其制备方法与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108445210A (zh) * 2018-02-09 2018-08-24 深圳市梓健生物科技有限公司 联合检测人寨卡病毒IgG和IgM抗体的试剂盒及其制备方法
CN110045105A (zh) * 2018-11-09 2019-07-23 广州市妇女儿童医疗中心 柯萨奇A16病毒IgA抗体量子点免疫荧光层析试纸条及试剂盒
CN111024954A (zh) * 2020-03-09 2020-04-17 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法
CN111190005A (zh) * 2020-02-23 2020-05-22 重庆新赛亚生物科技有限公司 新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法
CN111233985A (zh) * 2020-02-09 2020-06-05 北京丹大生物技术有限公司 一种新型冠状病毒IgA抗体快速检测试纸条的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108445210A (zh) * 2018-02-09 2018-08-24 深圳市梓健生物科技有限公司 联合检测人寨卡病毒IgG和IgM抗体的试剂盒及其制备方法
CN110045105A (zh) * 2018-11-09 2019-07-23 广州市妇女儿童医疗中心 柯萨奇A16病毒IgA抗体量子点免疫荧光层析试纸条及试剂盒
CN111233985A (zh) * 2020-02-09 2020-06-05 北京丹大生物技术有限公司 一种新型冠状病毒IgA抗体快速检测试纸条的制备方法
CN111190005A (zh) * 2020-02-23 2020-05-22 重庆新赛亚生物科技有限公司 新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法
CN111024954A (zh) * 2020-03-09 2020-04-17 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112114151A (zh) * 2020-08-20 2020-12-22 深圳爱信生物技术有限公司 一种2019-nCoV的IgG、IgM和IgA抗体联合检测试剂盒及其检测方法
CN112014560A (zh) * 2020-08-31 2020-12-01 复旦大学 一种检测人抗SARS-CoV-2抗体的近红外荧光免疫层析试纸条
CN112649603A (zh) * 2020-08-31 2021-04-13 深圳容金科技有限公司 一种检测covid-19抗体的免疫层析试剂盒及制备方法
CN111983217A (zh) * 2020-09-03 2020-11-24 菲鹏生物股份有限公司 一种样本处理液及其应用
CN112114140A (zh) * 2020-09-11 2020-12-22 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒
CN113514636A (zh) * 2021-03-03 2021-10-19 广州中医药大学顺德医院(佛山市顺德区中医院) 一种新冠中和抗体荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法
CN113533740A (zh) * 2021-06-15 2021-10-22 深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院) 用于eb病毒抗体快速联合检测的试剂盒
CN113702643A (zh) * 2021-07-12 2021-11-26 杭州奥泰生物技术股份有限公司 一种联合检测新型冠状病毒中和抗体及核衣壳蛋白抗体的装置
CN114252600A (zh) * 2021-11-08 2022-03-29 广州万德康科技有限公司 一种猫三联抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN114252600B (zh) * 2021-11-08 2023-08-04 广州万德康科技有限公司 一种猫三联抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN114354924A (zh) * 2021-11-18 2022-04-15 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 一种AIE纳米微球的2019-nCoV新型冠状病毒抗原检测试剂及其制备方法与应用
CN114354924B (zh) * 2021-11-18 2024-05-17 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 一种AIE纳米微球的2019-nCoV新型冠状病毒抗原检测试剂及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111537747B (zh) 2022-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111537747B (zh) 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法
CN111537748B (zh) 一种检测人新型冠状病毒IgM抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法
CN106872420B (zh) 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法
EP2306194B1 (en) Developing solution for immunochromatography, and measurement method using same
EP2574926B1 (en) Chromatographic kit and chromatography method
EP1092979A2 (en) Devices made by covalent bonding of molecules to an activated solid phase
JPH06105254B2 (ja) 内在アルカリホスファターゼの失活を含むイムノアッセイ法
CN112433048A (zh) 一种用于化学发光免疫法的试剂盒及其制备方法和应用
WO2017206800A1 (zh) 离心层析免疫检测方法
CN112362867A (zh) 一种使用聚集诱导发光联合免疫磁珠的检测方法及其试剂盒
CN113567666A (zh) 一种荧光微球标记的免疫层析法新型冠状病毒检测试纸条及其制备方法和应用
CN108445216B (zh) 一种人抗缪勒氏管激素测定试剂盒及其制备方法与应用
CN111474340A (zh) 一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用
CN106568967B (zh) 一种针对赭曲霉毒素a的灵敏检测方法
CN110346553A (zh) 一种pcr产物磁珠法纯化联合快速荧光定量检测试剂盒及其检测方法
CN112578119A (zh) 一种甲氧基肾上腺素发光免疫检测试剂盒
CN111273033A (zh) 一种高尔基体蛋白73的测定试剂盒及其化学发光测定方法
EP1978365A1 (en) Reagent kit and method for measuring HCV antibody
CN113970637A (zh) 一种犬瘟热病毒乳胶微球检测试纸条及其制备方法
CN114280016A (zh) 一种外泌体检测方法
CN113358862A (zh) 一种三联毒品荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法
CN113109558A (zh) 一种定量检测cyfra21-1的磁微粒化学发光试剂盒及其制作方法
CN112578132A (zh) 一种甲氧基去甲肾上腺素发光免疫检测试剂盒
CN110927381A (zh) 一种检测6-单乙酰吗啡的试纸条及其制备方法和应用方法
CA2023850A1 (en) Stabilizing reagent for membrane immunoassay

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: No. 6, helix 3 Road, Guangzhou International Biological Island, Haizhu District, Guangzhou City, Guangdong Province, 510320

Applicant after: Bioisland Laboratory

Applicant after: GUANGZHOU N BIOMED Ltd.

Applicant after: GUANGZHOU INSTITUTES OF BIOMEDICINE AND HEALTH, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

Address before: 510320 building B2, No.96, Xingdao Huannan Road, Guangzhou International Biological Island, Haizhu District, Guangzhou City, Guangdong Province

Applicant before: Guangdong Provincial Laboratory of regenerative medicine and health

Applicant before: GUANGZHOU N BIOMED Ltd.

Applicant before: GUANGZHOU INSTITUTES OF BIOMEDICINE AND HEALTH, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant