CN110494559A - 不分化地维持用培养基添加剂 - Google Patents
不分化地维持用培养基添加剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110494559A CN110494559A CN201880021329.2A CN201880021329A CN110494559A CN 110494559 A CN110494559 A CN 110494559A CN 201880021329 A CN201880021329 A CN 201880021329A CN 110494559 A CN110494559 A CN 110494559A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- trp
- culture medium
- stem cells
- culture
- multipotent stem
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 225
- 239000000654 additive Substances 0.000 title claims description 34
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 title claims description 29
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 247
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 122
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 105
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 82
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 43
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 41
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 19
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 13
- 238000012549 training Methods 0.000 claims description 12
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 9
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 7
- 150000003587 threonine derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 48
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 39
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 39
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 description 21
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 239000002585 base Substances 0.000 description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 15
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 15
- -1 for example Chemical compound 0.000 description 13
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HCZHHEIFKROPDY-UHFFFAOYSA-N kynurenic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C(=O)O)=CC(=O)C2=C1 HCZHHEIFKROPDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 8
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 6
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 6
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 5
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 5
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 5
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 4
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 3
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 3
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 3
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 2
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N docosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N nonanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(O)=O FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UTOPWMOLSKOLTQ-UHFFFAOYSA-N octacosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O UTOPWMOLSKOLTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- GWHCXVQVJPWHRF-KTKRTIGZSA-N (15Z)-tetracosenoic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCCCCCCC(O)=O GWHCXVQVJPWHRF-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- CUXYLFPMQMFGPL-UHFFFAOYSA-N (9Z,11E,13E)-9,11,13-Octadecatrienoic acid Natural products CCCCC=CC=CC=CCCCCCCCC(O)=O CUXYLFPMQMFGPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- XJLSEXAGTJCILF-RXMQYKEDSA-N (R)-nipecotic acid zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCNC1 XJLSEXAGTJCILF-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- XUJWOMMOEOHPFP-UHFFFAOYSA-N (all-Z)-8,11-Eicosadienoic acid Natural products CCCCCCCCC=CCC=CCCCCCCC(O)=O XUJWOMMOEOHPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 1,4a-dimethyl-7-propan-2-yl-2,3,4,4b,5,6,10,10a-octahydrophenanthrene-1-carboxylic acid Chemical compound C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBFKVYVGYHNCGT-UHFFFAOYSA-N 1-sulfanylpropane-1,2,3-triol Chemical class OCC(O)C(O)S PBFKVYVGYHNCGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FCSSPCOFDUKHPV-UHFFFAOYSA-N 2-Propenyl propyl disulfide Chemical compound CCCSSCC=C FCSSPCOFDUKHPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-n-naphthalen-2-ylnaphthalene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4C=C3O)=CC=C21 PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJWOMMOEOHPFP-OKLKQMLOSA-N 8,11-Eicosadienoic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCCCC(O)=O XUJWOMMOEOHPFP-OKLKQMLOSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000021357 Behenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 244000147568 Laurus nobilis Species 0.000 description 1
- 235000017858 Laurus nobilis Nutrition 0.000 description 1
- 235000021353 Lignoceric acid Nutrition 0.000 description 1
- CQXMAMUUWHYSIY-UHFFFAOYSA-N Lignoceric acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCC1=CC=C(O)C=C1 CQXMAMUUWHYSIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- DZTHIGRZJZPRDV-GFCCVEGCSA-N N-acetyl-D-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- DZTHIGRZJZPRDV-UHFFFAOYSA-N Nalpha-Acetyltryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJXROGWVRIJYMO-SJDLZYGOSA-N Nervonic acid Natural products O=C(O)[C@@H](/C=C/CCCCCCCC)CCCCCCCCCCCC XJXROGWVRIJYMO-SJDLZYGOSA-N 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021319 Palmitoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 102000015982 Pannexin Human genes 0.000 description 1
- 108050004251 Pannexin Proteins 0.000 description 1
- DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N Phenylpropyl alcohol Natural products CCC(O)C1=CC=CC=C1 DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000005212 Terminalia tomentosa Nutrition 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OHGNSVACHBZKSS-KWQFWETISA-N Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C)C([O-])=O)=CNC2=C1 OHGNSVACHBZKSS-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- PEEAINPHPNDNGE-JQWIXIFHSA-N Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PEEAINPHPNDNGE-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- SMDQRGAERNMJJF-JQWIXIFHSA-N Trp-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)=CNC2=C1 SMDQRGAERNMJJF-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- NZCPCJCJZHKFGZ-AAEUAGOBSA-N Trp-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 NZCPCJCJZHKFGZ-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- KBUBZAMBIVEFEI-ZFWWWQNUSA-N Trp-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CNC=N1 KBUBZAMBIVEFEI-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N Trp-Met Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- DXYQIGZZWYBXSD-JSGCOSHPSA-N Trp-Pro Chemical compound O=C([C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)N1CCC[C@H]1C(O)=O DXYQIGZZWYBXSD-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJGMVUXEZUEDJR-RTWAVKEYSA-N Zizanoic acid Chemical compound C=C1C(C)(C)[C@@H](C2)CC[C@]32[C@@H](C(O)=O)CC[C@@H]31 IJGMVUXEZUEDJR-RTWAVKEYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 1
- CUXYLFPMQMFGPL-SUTYWZMXSA-N all-trans-octadeca-9,11,13-trienoic acid Chemical compound CCCC\C=C\C=C\C=C\CCCCCCCC(O)=O CUXYLFPMQMFGPL-SUTYWZMXSA-N 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 229940116226 behenic acid Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002298 blastodisc Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N cis-palmitoleic acid Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWHCXVQVJPWHRF-UHFFFAOYSA-N cis-tetracosenoic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O GWHCXVQVJPWHRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical class CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FARYTWBWLZAXNK-WAYWQWQTSA-N ethyl (z)-3-(methylamino)but-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C(\C)NC FARYTWBWLZAXNK-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 1
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- XMHIUKTWLZUKEX-UHFFFAOYSA-N hexacosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XMHIUKTWLZUKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N iron(2+);1,10-phenanthroline;dicyanide Chemical compound [Fe+2].N#[C-].N#[C-].C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1.C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116191 n-acetyltryptophan Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- HUPQYPMULVBQDL-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid Chemical compound CCCCC(O)=O.CCCCC(O)=O HUPQYPMULVBQDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229960001881 sodium selenate Drugs 0.000 description 1
- 235000018716 sodium selenate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011655 sodium selenate Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 229960004274 stearic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000023895 stem cell maintenance Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012929 tonicity agent Substances 0.000 description 1
- 229950004288 tosilate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供以176μM以上的浓度含L‑色氨酸或L‑色氨酸衍生物的多能性干细胞培养用的培养基。
Description
【技术领域】
本发明涉及用于维持未分化状态的同时使多能性干细胞有效率地增殖的培养基、及使用所述培养基的多能性干细胞的增殖方法等。
【背景技术】
ES细胞(Embryonic stem cell)或诱导多能性干细胞(iPS:induced pluripotentstem cell)等的多能性干细胞从其优良的增殖性或多分化能力而期待在再生医疗等中使用。特别是iPS细胞比较容易制作-得到,制作时的伦理的制约少,再者,从移植时的排斥反应的观点来看,被看作非常优良的再生医疗的材料。
在使用多能性干细胞而进行再生医疗时,疾病的治疗或治疗法的开发研究需要大量的多能性干细胞。因此,开发及改良使大量的多能性干细胞的供给成为可能的多能性干细胞培养方法变得重要。就是在其中,需要的是培养基的改良。培养大量的细胞需要大量的培养基。例如,培养106个iPS细胞而制作1010个程度的心肌细胞,在移植到患者一人时,每一人患者需要100L的培养基,少估培养基所耗的费用也达大概100,000美元。抑制培养基所耗的费用的方法之一是增加每单位培养基体积能培养的细胞数。即,存在更高效率并且低成本的有效的多能性干细胞培养用培养基的需求。
通常,向培养基添加必须氨基酸。例如,作为干细胞培养用培养基的mTeSR1培养基(非专利文献1、2、3)或Essential-8培养基(非专利文献4)以Dulbecco改变Eagle培养基(DMEM)/F12培养基作为基础培养基,加bFGF或胰岛素等几种因子。此DMEM/F12培养基中的氨基酸的含量基于血液中的游离氨基酸量设定,含9.0200mg/L的L-色氨酸。至今开发了多种培养基,但对于培养基中的氨基酸组成,几乎未改良。
【现有技术文献】
【专利文献】
【专利文献1】特开2004-135672号公报
【专利文献2】特开2007-228815号公报
【专利文献3】US2010/0317104A1
【专利文献4】WO2011/100286A2
【非专利文献】
【非专利文献1】Ludwig TE et.al.Nat.Methods 3(8):637-46;2006
【非专利文献2】Ludwig TE et.al.Nat.Biotechnol 24(2):185-7;2006
【非专利文献3】Masters et.al.Human Cell Culture.Dordrecht:SpringerNetherlands;2007
【非专利文献4】Chen G et.al.Nat.Methods 8(5)424-9;2011
【发明的概要】
【发明要解决的课题】
本发明的目的是提供能使多能性干细胞有效率地增殖的培养基、及使用所述培养基而使多能性干细胞有效率地增殖的方法。
【用于解决课题的手段】
本发明人为达成上述目的,关注于多能性干细胞的培养过程中的培养基中的氨基酸量变化。结果发现,在多能性干细胞的培养过程中培养基中的L-色氨酸量急速减少,在培养基中所含的全氨基酸中L-色氨酸最快速地的枯渴。其中,作为必须氨基酸的L-色氨酸与其他氨基酸比,培养基配方浓度低(非专利文献1、2、3、4),预测在多能性干细胞的大量增殖时很快不足,成为限制细胞增殖的要因。从而,本发明人发现,通过使培养基中的L-色氨酸量增加,或在培养的途中添加L-色氨酸而补充消耗的L-色氨酸,可促进多能性干细胞的增殖,从而完成本发明。
即,本发明如以下。
[1]多能性干细胞培养用的培养基,其以176μM以上的浓度含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
[2][1]的培养基,其中培养基中以176μM~1408μM的浓度含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
[3][1]或[2]的培养基,其为无血清培养基。
[4][1]~[3]之任一项的培养基,其中多能性干细胞是诱导多能性干细胞。
[5][1]~[4]之任一项的培养基,其中色氨酸衍生物是色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽。
[6][5]的培养基,其中二肽是L-丙氨酰-L-色氨酸。
[7]多能性干细胞的培养方法,其包括在[1]~[6]之任一项的培养基中培养多能性干细胞。
[8][7]的方法,其为用于使多能性干细胞增殖的方法。
[9]多能性干细胞培养调制物,其含[1]~[6]之任一项的培养基及多能性干细胞。
[10]多能性干细胞的培养方法,其包括以下的工序:
(1)在含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的培养基中培养多能性干细胞;
(2)向得到的多能性干细胞培养物添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,补充(1)中消耗的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的一部分或全部;及
(3)继续培养添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的多能性干细胞培养物。
[11][10]的方法,其中含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的培养基是无血清培养基。
[12][10]或[11]的方法,其中色氨酸衍生物是色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽。
[13][12]的方法,其中二肽是L-丙氨酰-L-色氨酸。
[14]用于促进多能性干细胞的增殖的培养基添加剂,其含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
[15][14]的培养基添加剂,其中色氨酸衍生物是色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽。
[16][15]的培养基添加剂,其中二肽是L-丙氨酰-L-色氨酸。
【发明的效果】
根据本发明,由于促进多能性干细胞的细胞增殖变得可能,可有效大量地培养多能性干细胞。作为由本培养基的使用导致的具体性的效果,可与以往的培养基比而在短期间得到目标细胞数,无需向特化于大量培养的培养设备的变更,即使在既有的设备培养,也期待得到目标细胞数等。从而,可大幅地削减多能性干细胞的培养中所耗的人的成本及金钱的成本。
【附图的简单的说明】
【图1】在以成为最终浓度44μM、176μM、352μM、704μM、1408μM的方式添加L-色氨酸的Essential-8培养基中的人诱导多能性干细胞201B7的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔13,000个201B7细胞,培养6天。将以成为上述的浓度的方式添加L-色氨酸的时间设为0小时,在24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了L-色氨酸浓度依赖性地显示增殖促进效果的结果。
【图2】在以成为最终浓度44μM、176μM、352μM、704μM、1408μM的方式添加L-色氨酸的mTeSR1培养基中的人诱导多能性干细胞201B7的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔13,000个201B7细胞,培养6天。将以成为上述的浓度的方式添加L-色氨酸的时间设为0小时,在24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了L-色氨酸浓度依赖性地显示增殖促进效果的结果。
【图3】在以成为最终浓度44μM、176μM、352μM、704μM、1408μM的方式添加L-色氨酸的TeSR2培养基中的人诱导多能性干细胞201B7的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔13,000个201B7细胞,培养6天。将以成为上述的浓度的方式添加L-色氨酸的时间设为0小时,在24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了L-色氨酸浓度依赖性地显示增殖促进效果的结果。
【图4】在以成为最终浓度44μM、176μM、352μM、704μM、1408μM的方式添加L-色氨酸的mTeSR1培养基中的人诱导多能性干细胞253G4的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔40,000个253G4细胞,培养6天。将以成为上述的浓度的方式添加L-色氨酸的时间设为0小时,在24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了L-色氨酸浓度依赖性地显示增殖促进效果的结果。
【图5】在以成为最终浓度44μM、176μM、352μM、704μM、1408μM的方式添加L-色氨酸的mTeSR1培养基中的人胚胎干细胞H9的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔10,000个H9细胞,培养6天。将以成为上述的浓度的方式添加L-色氨酸的时间设为0小时,在24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了L-色氨酸浓度依赖性地显示增殖促进效果的结果。
【图6】在以成为最终浓度44μM、176μM、352μM、704μM、1408μM的方式添加L-色氨酸的添加10%FCS的DMEM培养基中的人胎儿肾脏来源细胞293T的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔10,000个293T细胞,培养6天。将以成为上述的浓度的方式添加L-色氨酸的时间设为0小时,在24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。不得到显示L-色氨酸浓度依赖性的增殖促进效果的结果。
【图7】在以成为最终浓度50μM、100μM、200μM、500μM、1000μM的方式添加L-犬尿氨酸的mTeSR1培养基中的人诱导多能性干细胞201B7的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔20,000个201B7细胞,培养6天。将L-犬尿氨酸添加时设为0,在0、24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了在L-犬尿氨酸50-500μM添加区中显示增殖促进效果的结果。
【图8】在以成为最终浓度50μM、100μM、200μM、500μM、1000μM的方式添加犬尿喹啉酸的mTeSR1培养基中的人诱导多能性干细胞201B7的细胞被覆率(%)。向6孔板以单细胞接种每1孔20,000个201B7细胞,培养6天。将犬尿喹啉酸添加时设为0,在0、24、48、72、96、120小时后测量细胞被覆率。得到了在犬尿喹啉酸50-500μM添加区中显示增殖促进效果的结果。
【具体实施方式】
本发明提供促进细胞的细胞增殖的培养基(以下,将其也称为本发明的培养基)、促进细胞的增殖的方法(以下,将其也称为本发明的方法)、及细胞增殖促进用的培养基添加剂。
(1)L-色氨酸或L-色氨酸衍生物
L-色氨酸(2-氨基-3-(吲哚基)丙酸)是构成蛋白质的必须氨基酸的一种。
本说明书中,L-色氨酸包含L-色氨酸的盐。作为L-色氨酸的盐,例如,可举出盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、磷酸盐等的无机酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、醋酸盐、蚁酸盐、丙酸盐、安息香酸盐、三氟醋酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、或者对甲苯磺酸盐等的有机酸盐;钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐等的无机碱盐、三乙基铵盐、三乙醇铵盐、吡啶鎓盐、二异丙基铵盐等的有机碱盐;精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等的氨基酸盐等,但不限于这些。
作为L-色氨酸的盐,优选使用盐酸盐、钠盐或钾盐。
L-色氨酸可由公知的方法得到。例如,作为L-色氨酸的制造方法,可举出特开2012-223092号公报、特开2012-100537号公报、特开2011-167071号公报、特开2010-263790号公报、特开2010-110217号公报中记载的方法等,但不限于这些。
另外,L-色氨酸也可使用商业上可得到的。作为商业上可得到的L-色氨酸,可举出和光纯药工业公司038-23581(型号)、东京化成工业公司T0541(型号)、NACALAI TESQUE公司13043-92(型号)、MP Biomedicals公司ICN1031505(型号)、Sigma-Aldrich公司T8941(型号)等,但不限于这些。
L-色氨酸衍生物只要是向培养基中提供L-色氨酸,就不特别限定,可举出例如培养基添加时由水解提供L-色氨酸的物质等。作为L-色氨酸衍生物,可举出色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽、色氨酸的C1~6烷基酯、N乙酰色氨酸等,但不限于这些。
作为结合了色氨酸和氨基酸的二肽的例,可举出L-丙氨酰-L-色氨酸、L-精氨酰-L-色氨酸、L-天冬酰胺酰-L-色氨酸、L-天冬氨酸-L-色氨酸、L-半胱氨酰-L-色氨酸、L-谷氨酰胺酰-L-色氨酸、L-谷氨酸-L-色氨酸、甘氨酰-L-色氨酸、L-组氨酰-L-色氨酸、L-异亮氨酰-L-色氨酸、L-亮氨酰-L-色氨酸、L-赖氨酰-L-色氨酸、L-甲硫氨酰-L-色氨酸、L-苯基丙氨酰-L-色氨酸、L-脯氨酰-L-色氨酸、L-丝氨酰-L-色氨酸、L-苏氨酰-L-色氨酸、L-酪氨酰-L-色氨酸、L-缬氨酰-L-色氨酸、L-色氨酰-L-色氨酸、L-色氨酰-L-丙氨酸、L-色氨酰-L-精氨酸、L-色氨酰-L-天冬酰胺、L-色氨酰-L-天冬氨酸、L-色氨酰-L-半胱氨酸、L-色氨酰-L-谷氨酰胺、L-色氨酰-L-谷氨酸、L-色氨酰-甘氨酸、L-色氨酰-L-组氨酸、L-色氨酰-L-异亮氨酸、L-色氨酰-L-亮氨酸、L-色氨酰-L-赖氨酸、L-色氨酰-L-甲硫氨酸、L-色氨酰-L-苯丙氨酸、L-色氨酰-L-脯氨酸、L-色氨酰-L-丝氨酸、L-色氨酰-L-苏氨酸、L-色氨酰-L-酪氨酸、L-色氨酰-L-缬氨酸等,但不限于这些。
作为色氨酸的C1-6烷基酯,可举出L-色氨酸甲基酯、L-色氨酸乙基酯等,但不限于这些。
本说明书中,L-色氨酸衍生物包含L-色氨酸衍生物的盐。作为L-色氨酸衍生物的盐,作为L-色氨酸的盐,可举上述的。
在多能性干细胞的培养中使用时,L-色氨酸衍生物优选L-丙氨酰-L-色氨酸、甘氨酰-L-色氨酸。
本说明书中,L-色氨酸衍生物包含L-色氨酸的代谢物或其盐。作为L-色氨酸代谢物,在多能性干细胞的培养中使用时,优选L-犬尿氨酸、犬尿喹啉酸。
L-色氨酸衍生物可由公知的方法得到。例如,作为L-色氨酸二肽的制造方法,可举出一般的固相合成法等,但不限于这些。
另外,L-色氨酸衍生物也可使用商业上可得到的。作为商业上可得到的L-色氨酸衍生物,可举出和光纯药工业公司038-23581(型号)、东京化成工业公司T0541(型号)、NACALAI TESQUE公司13043-92(型号)、MP Biomedicals公司ICN1031505(型号)、Sigma-Aldrich公司T8941(型号)等,但不限于这些。
(2)多能性干细胞
本说明书中,多能性干细胞是指有自身复制能及分化/增殖能力的未成熟的细胞,且有可向构成生物体的全部组织或细胞分化的能力的细胞。作为多能性干细胞的例,可举出胚胎干细胞(ES细胞)、诱导多能性干细胞(iPS细胞)(Takahashi K et al.,Cell.2007Nov 30;131(5):861-72)、精子干细胞(mGS细胞)(Kanatsu-Shinohara M etal.,Biol Reprod.2007Jan;76(1):55-62)、胚胎生殖细胞(Matsui Y et al.,Cell.1992Sep 4;70(5):841-7)等。
多能性干细胞可由公知的方法得到。例如,胚胎干细胞(ES细胞)是,可举出培养哺乳动物的胚盘胞中的内部细胞块的方法(例如Manipulating the Mouse Embryo:ALaboratory Manual,Fourth Edition2014Cold Spring Harbor Laboratory Press中记载的方法)、培养由体细胞核移植制作的初期胚的方法(Wilmut et al.,Nature.1997Feb 27;385(6619):810-3、Wakayama et al.,Nature.1998Jul 23;394(6691):369-74、Wakayama Tet al.,Science.2001Apr 27;292(5517):740-3)等,但不限于这些。
再者胚胎干细胞也可从指定的机关得到。例如,作为人ES细胞的KhES-1细胞、KhES-2细胞及KhES-3细胞可从京都大学再生医科学研究所得到。
作为诱导多能性干细胞的入手方法的例,可举出向体细胞导入核初始化物质(例如,Oct3/4、Sox2、c-Myc及Klf4等)的方法(Takahashi K et al.,Cell.2006Aug 25;126(4):663-76、WO2007/069666国际公开公报),但不限于此。另外,诱导多能性干细胞可基于Takahashi K et al.,Nat Protoc.2007;2(12):3081-9、Aoi et al.,Science.2008Aug1;321(5889):699-702、Takahashi,K et al.,Cell.2007Nov 30;131(5):861-72、Yu,J etal.,Science.2007Dec 21;318(5858):1917-20、Nakagawa,M et al.,NatBiotechnol.2008Jan;26(1):101-6等中记载的方法而制作,但不限于这些。
再者诱导多能性干细胞也可从指定的机关得到。例如作为人iPS细胞的253G1细胞、201B7细胞可从iPSAcademia日本株式会社购入。
胚胎生殖细胞可通过根据常规方法单离始原生殖细胞,将其在LIF、bFGF及SCF的存在下培养来诱导。另外,mGS细胞可基于WO2005/100548中记载的方法而从精巢细胞制作。
在本发明中使用的多能性干细胞优选为胚胎干细胞或诱导多能性干细胞,更优选为诱导多能性干细胞。
在本发明中,通常,使用哺乳动物来源的多能性干细胞。作为哺乳动物,例如,可举出小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠等的啮齿类、兔等的兔目、猪、牛、山羊、马、绵羊等的有蹄目、狗、猫等的猫目、人、猴、恒河猴、狨猴、猩猩、黑猩猩等的灵长类等,但不限于这些。在本发明中,优选使用小鼠等的啮齿类或人等的灵长类来源的多能性干细胞、更优选人来源的多能性干细胞。
在本发明中,最优选使用人诱导多能性干细胞。
(3)多能性干细胞培养用的培养基
作为本发明的一实施方式,本发明提供含有高浓度的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的多能性干细胞培养用的培养基(本说明书中,也称为本发明的培养基)。通过使用本发明的培养基,使多能性干细胞有效率地增殖变得可能。特别是,本发明的培养基对于维持未分化状态的同时,使多能性干细胞增殖,维持有用。
本发明的培养基以含高浓度的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物作为特征。“高浓度”是指高于与人血液中的游离L-色氨酸浓度相当的L-色氨酸浓度(44μM)。使用含有与人血液中的游离L-色氨酸浓度相当的L-色氨酸的通常的培养基而进行多能性干细胞的培养,则由培养基中的L-色氨酸的早期的枯渴限制多能性干细胞的增殖。本发明的培养基由于含有高浓度的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,可在多能性干细胞培养时难以发生L-色氨酸的枯渴,达成多能性干细胞的高的增殖率、及经长期的多能性干细胞的增殖。
本发明的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的浓度只要是可达成多能性干细胞的增殖促进,就不特别限定,例如,本发明的培养基中的L-色氨酸浓度是176μM以上、优选352μM以上、再优选为704μM以上。本发明的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度的上限值理论上是L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的饱和浓度,从向培养基的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的溶解性或成本的观点来看,培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度优选为1408μM以下。
本发明的培养基有促进多能性干细胞的增殖的效果。“促进多能性干细胞的增殖”是指在本发明的培养基中进行培养之时,除了L-色氨酸浓度与人血液中的游离L-色氨酸浓度相当(44μM)之外,与在有与本发明的培养基相同的组成的对照培养基中进行培养之时比较,促进多能性干细胞的增殖。
对于本发明的培养基中所含的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物以外的成分,只要是可达成多能性干细胞的增殖促进效果,就不特别限定,可适宜采用在通常的多能性干细胞的维持培养中使用的组成。
本发明的培养基可通过以成为上述浓度的方式向能进行多能性干细胞的维持培养的培养基添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物来制作。在培养基的制作中,可使用1种L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,也可组合使用多种L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物。
本发明的培养基也可以通常在哺乳动物细胞的培养中使用的培养基作为基础培养基而调制。作为基础培养基,只要是可达成多能性干细胞的增殖促进等的期望的效果,就不特别限定,例如,可举BME培养基、BGJb培养基、CMRL 1066培养基、Glasgow MEM培养基、Improved MEM Zinc Option培养基、IMDM培养基、Medium 199培养基、Eagle MEM培养基、αMEM培养基、DMEM培养基、F-12培养基、DMEM/F12培养基、IMDM/F12培养基、火腿培养基、RPMI1640培养基、Fischer’s培养基、或者这些的混合培养基等,可在动物细胞的培养中使用的培养基。另外,也可以通常作为多能性干细胞培养用使用的培养基作为基础培养基而调制。作为市售的干细胞培养用的基础培养基,可举出StemFit(注册商标)AK培养基(味之素株式会社)、Essential 8培养基(Life Technologies公司)、mTeSR1培养基(STEMCELLTechnologies公司)、TeSR2培养基(STEMCELL Technologies公司)、RHB培养基(StemCells,Inc.公司)、TeSRTM-E6(STEMCELL Technologies公司)、hESF-GRO培养基(NIPRO株式会社)、HESF-DIF培养基(NIPRO株式会社)、CSTI-7(株式会社细胞科学研究所)、Essential 6培养基(Life Technologies公司)等。
本发明的培养基从回避化学上未确定的成分的混入的观点来看,优选为含有成分化学上确定的培养基(Chemically defined medium;CDM)。本发明的培养基从回避化学上未确定的成分的混入的观点来看,优选为无血清培养基。在本发明中的“无血清培养基”是指不含未调整或未纯化的血清的培养基。在本发明中,含纯化的血液来源成分或动物组织来源成分(例如,bFGF等的生长因子)的培养基只要是不含无调整或未纯化的血清,就也含在无血清培养基中。
无血清培养基也可含有血清替代物。作为血清替代物,例如,可举适宜含有血清白蛋白、转铁蛋白、脂肪酸、胶原前体、微量元素、2-巯基乙醇或3’巯基甘油、或者这些的均等物等。所涉及的血清替代物例如,可由WO98/30679中记载的方法调制。作为血清替代物,也可利用市售品。作为涉及的市售的血清替代物,例如,可举出KnockoutTM SerumReplacement(Life Technologies公司:以下,有时也记为KSR)、Chemically-definedLipid concentrated(Life Technologies公司)、GlutamaxTM(Life Technologies公司)、B27(Life Technologies公司)、N2(Life Technologies公司)等,但不限于这些。
通常,本发明的培养基除了L-色氨酸之外,含L-色氨酸以外的全部必须氨基酸(L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、L-异亮氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、L-甲硫氨酸、及L-缬氨酸)。
本发明的培养基优选含全部非必须氨基酸(L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、甘氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-酪氨酸、L-脯氨酸)。其中,也可代替L-谷氨酰胺而使用L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。
本发明的培养基也可除了上述的20种氨基酸之外,含L-胱氨酸等的天然氨基酸。
本发明的培养基也可还含有培养基添加物。作为培养基添加物,可举出Y-27632等的ROCK(ρ-associated coiled-coil forming kinase/ρ结合激酶)抑制剂、青霉素-链霉素等的抗生物质、维生素类、L-抗坏血酸、磷酸L-抗坏血酸基镁、丙酮酸钠、2-氨基乙醇、葡萄糖、碳酸氢钠、HEPES、胰岛素、黄体酮、硒酸钠、腐胺等,但不限于这些。添加物优选含在公知的浓度范围内。
本发明的培养基也可含脂肪酸。作为本发明的培养基中所含的脂肪酸,可举出油酸、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚麻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、酪酸、醋酸、棕榈油酸、缬草酸(缬草酸)、己酸、庚酸(庚基酸)、辛酸、壬酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、珠光脂酸、客烯酸、桐酸、花生酸、8,11-二十碳二烯酸、5,8,11-二十碳三烯酸、山嵛酸、木蜡酸、神经酸、蜡酸、褐煤酸、蜜蜡酸等,但不限于这些。本发明的培养基中所含的脂肪酸可为饱和脂肪酸,也可为不饱和脂肪酸。
本发明的培养基可对应于其使用目的,适宜采用在公知的细胞培养中使用的组成。例如,以维持多能性干细胞的未分化性的同时增殖作为目的时,本发明的培养基优选不含具有促进多能性干细胞的分化的效果的物质,优选含具有抑制多能性干细胞的分化的效果的物质。作为有抑制多能性干细胞的分化的效果的物质,例如,对于人多能性干细胞,可举FGF2等,对于小鼠多能性干细胞,可举白血病阻止因子(LIF)等。
更具体而言,作为用于维持多能性干细胞的未分化性的同时促进增殖的培养基,可举出向DMEM/F-12培养基添加L-抗坏血酸、硒、转铁蛋白、NaHCO3、胰岛素、FGF2及TGFβ1的培养基(Chen G et al.,Nat Methods.2011May;8(5):424-429)、向DMEM/F-12培养基添加非必须氨基酸、L谷氨酰胺、β巯基乙醇、胰岛素、转铁蛋白、胆甾醇、血清白蛋白、哌啶酸、氯化锂、FGF2及TGFβ1的培养基(Ludwig TE et al.,Nat Methods.2006Aug;3(8):637-46)、添加白血病抑制因子、聚乙烯基醇、L-谷氨酰胺、胰岛素、转铁蛋白、硒、2-巯基乙醇及抗生物质的小鼠胚胎干细胞维持用的无血清培养基(特开2007-228815号公报)、将Pannexin、bFGF、PDGF、EGF及维生素C混合而成的无血清培养基(特开2008-148643号公报)、以含有TGF-β作为特征的间充质干细胞的多分化能维持用培养基(特开2010-094062号公报)等,可参考这些的组成调制本发明的培养基。
例如,本发明的培养基可以向含L-抗坏血酸、硒、转铁蛋白、胰岛素、FGF2及TGFβ1的基础培养基添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物至成为终浓度176μM以上的方式调制,但不限于此。
本发明的培养基的pH优选调整到约6.0~约8.5,更优选约7.0~约7.5。培养基优选进行使用膜滤器等的过滤灭菌等的灭菌处理。
本发明的培养基还可在接附培养、悬浮培养、包埋培养、组织培养等之任一者的培养方法中使用。
另外,本发明的培养基的形态只要是得到了本发明的期望的效果,就不特别限定,例如,可调制为液体培养基、半流动培养基、及固体培养基的形态。另外,也可将本发明的培养基调制为粉末状的形态。通过调制为粉末状的形态,输送或保存可变得极其容易。另外,通过在使用时添加灭菌水及/或琼脂等,可容易地调制液体状、半液体状、或者固体状的培养基。
(4)多能性干细胞的培养方法1
本发明提供多能性干细胞的培养方法(本说明书中,也称为本发明的方法1),其包括在上述本发明的培养基中培养多能性干细胞。
通过使用本发明的培养基,使多能性干细胞有效率地增殖变得可能。特别是,本发明的培养基对于维持未分化状态的同时,使多能性干细胞增殖,维持有用。从而,本发明的方法1优选为,用于使多能性干细胞增殖的方法,更优选用于维持未分化状态的同时,增殖或维持多能性干细胞的方法。
在本发明的方法1中的,培养基中的多能性干细胞的浓度只要是有期望的效果,就不特别限制,通常100~107个/cm3、优选101~106个/cm3、更优选为102~105个/cm3。
多能性干细胞的培养可通过向预先将L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度调整到期望的浓度的上述本发明的培养基中接种多能性干细胞来进行,也可通过在细胞培养开始后,向培养基中添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,将L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度调整到本发明的培养基所要求的浓度后,进一步持续培养来进行。
在细胞培养开始后,在添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物时,也可使用以下详述的本发明的培养基添加物。
在本发明的方法1中的培养条件除了使用本发明的培养基之外,只要是可达成多能性干细胞的增殖促进等的期望的效果,就不特别限定,可对应于培养的目的而适宜采用在通常的多能性干细胞的培养中使用的培养条件。
例如,作为维持多能性干细胞的未分化性的同时进行培养的方法,可举出以实验医学别册目的别选的细胞培养流程(羊土公司)等中记载的方法。多能性干细胞的培养可使用小鼠胎仔成纤维细胞(MEF)或小鼠成纤维细胞株(STO)等的饲养细胞,也可在无饲养层环境下进行。
在本发明的方法1中,在细胞的培养中使用的培养器只要是能进行细胞的培养,就不特别限定,可举出瓶、组织培养用瓶、皿、平皿、组织培养用皿、多联皿、微平板、微孔板、多联盘、多孔板、显微镜载玻片、室玻片、培养皿、管、托盘、培养袋、及滚瓶等。
在细胞的培养中使用的培养器可为细胞接附性的,也可为细胞非接附性的,对应于目的适宜选择。
细胞接附性的培养器可以使与培养器的表面的细胞的接附性提升的目的,用细胞外基质(ECM)等的任意的细胞支持用基质或模拟它们的功能的人工物包被。细胞支持用基质可为以干细胞或饲养细胞(使用时)的接附作为目的的任意的物质。
此外的培养条件可适宜设定。例如,培养温度只要是可达成细胞的增殖促进等的期望的效果,就不特别限定,约30~40℃、优选为约37℃。CO2浓度为约1~10%、优选为约2~5%。氧浓度通常是1~40%,可根据培养条件等适宜选择。
在本发明的方法1中,多能性干细胞能由接附培养、悬浮培养、组织培养等的公知的方法培养。
只要是可达成细胞的增殖促进等的期望的效果,就不特别限制,在本发明的方法1中的多能性干细胞的培养的期间通常继续培养2天以上、优选4天以上、更优选为7天以上,理论上可无限继续培养。通过回收在本发明的培养基中培养的多能性干细胞,对其一部分或全部在新鲜的本发明的培养基中进行传代,持续继续培养,可经长期间,维持未分化状态的同时,增殖或维持多能性干细胞。
(5)多能性干细胞培养调制物
本发明提供含上述本发明的培养基及多能性干细胞的多能性干细胞培养调制物(本发明的培养调制物)。
在本发明的培养调制物中的多能性干细胞是生存、增殖的细胞。
在本发明的培养调制物中的多能性干细胞优选单离。“单离”是指进行除去作为目的的成分或细胞以外的因子的操作而脱离天然存在的状态。“单离的多能性干细胞”的纯度(全细胞数中所占的多能性干细胞的数的百分率)通常70%以上、优选80%以上、更优选为90%以上、再者优选99%以上、最优选100%。
在本发明的培养调制物中,多能性干细胞例如,存在于液体状、或者半流动状的本发明的培养基中。在一实施方式中,本发明的培养调制物是多能性干细胞在本发明的培养基中的悬浮液。本发明的培养调制物也可封入适合的容器中。
本发明的培养调制物对于上述本发明的方法1的实施有用。
(6)多能性干细胞的培养方法2
多能性干细胞的培养方法(本发明的培养方法2),其包括以下的工序:
(1)在含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的培养基中培养多能性干细胞;
(2)向得到的多能性干细胞培养物添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,补充(1)中消耗的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的一部分或全部;及
(3)继续培养添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的多能性干细胞培养物。
也可将本发明的培养基在工序(1)中使用。但是,在工序(1)中使用的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度只要是能使多能性干细胞增殖的浓度(优选能维持未分化状态的同时,使多能性干细胞增殖,维持的浓度),就足以,不要求如本发明的培养基一样的“高浓度”。在培养开始时间点,在工序(1)中使用的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度例如,10μM以上、优选15μM以上、更优选为44μM以上。
在工序(1)中使用的培养基的组成除不要求L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度是“高浓度”的点之外,与本发明的培养基相同。
在工序(1)中的培养条件除不要求培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度是“高浓度”的点之外,与上述本发明的方法1相同。
工序(1)的培养的结果,多能性干细胞增殖(优选维持未分化状态的同时使增殖)、伴随其,培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物被消耗,其培养基中的浓度降低。
在工序(2)中,向在工序(1)中得到的多能性干细胞培养物添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的时机只要是可达成多能性干细胞的增殖促进等的期望的效果,就不特别限制,可在任意的时机添加。例如,在工序(1)中,在培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度减少至不足10μM、优选不足15μM、更优选不足44μM的阶段,添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。或者,在工序(1)中,将培养开始时的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度设为100%,其减少至50%以下,优选25%以下的在阶段,添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。例如,从工序(1)的培养开始起2~5天后,优选3~5天后,更优选4~5天后,可添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
添加到培养基中的L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物可使用1种L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,也可组合使用多种L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物。
添加到培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的量只要是可达成多能性干细胞的增殖促进等的期望的效果,就不特别限定,以培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的浓度成为能使多能性干细胞增殖的浓度(优选能维持未分化状态的同时,使多能性干细胞增殖,维持的浓度)的方式添加。例如,以培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度成为176μM以上、优选352μM以上的方式进行添加。也可以培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度成为如本发明的培养基一样的“高浓度”的方式进行添加。在一实施方式中,以培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度成为176μM以上、优选352μM以上、再者优选704μM以上的方式进行添加。添加后的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度的上限值理论上是L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的饱和浓度,从向培养基的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的溶解性或成本的观点来看,培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物浓度优选为1408μM以下。
再者,在本说明书中的“补充在(1)中消耗的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的一部分或全部”中,除了在工序(1)中补充培养当初添加的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的量的一部分或全量之外,也含向培养基添加培养当初添加的量以上的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
其中,本发明的方法2的特征是,在多能性干细胞的培养中,培养基中所含有的氨基酸之中,最快速地被消耗,由于处于由自外的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的添加补充枯渴的L-色氨酸的一部分或全部的点,对于L-色氨酸以外的氨基酸,可与L-色氨酸或L-色氨酸衍生物一并添加,也可不添加。
在一实施方式中,在工序(2)中,作为氨基酸,仅添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,不添加其他氨基酸。
在别的实施方式中,在工序(2)中,可将L-色氨酸以外的氨基酸(L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、L-异亮氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、L-甲硫氨酸、L-缬氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、甘氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-酪氨酸、L-脯氨酸)或其衍生物与L-色氨酸或L-色氨酸衍生物一并添加,也可不添加。添加的氨基酸可为1种,也可为多种。
进而,在工序(3)中,继续培养添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的多能性干细胞培养物。在工序(3)中的培养条件可与工序(1)同样,只要是得到了本发明的期望的效果,就也可变更。在本发明的优选的一实施方式中,在工序(3)中的培养条件与工序(1)同样。由于由L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的添加回避L-色氨酸的枯渴,多能性干细胞可持续继续(优选维持未分化状态的同时)增殖。
在本发明的方法2中,由于不要求培养基整体的更换,可由作为氨基酸而仅L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,或者仅含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的一部分的氨基酸的添加维持多能性干细胞的增殖,可低成本、并且有效率地使多能性干细胞增殖。
(7)培养基添加剂
本发明提供含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的培养基添加剂(本说明书中,也称为本发明的培养基添加剂)。本发明的培养基添加剂可在上述本发明的方法1或2中添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物时使用。
本发明的培养基添加剂中所含的L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物可使用1种L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,也可组合使用多种L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物。
通过将本发明的培养基添加剂添加到多能性干细胞的培养用培养基中,有促进多能性干细胞的增殖的效果。本发明的培养基添加剂优选为多能性干细胞增殖促进用。
本发明的培养基添加剂只要是不损害期望的效果,就除了L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物之外,可对应于使用的目的,还含血清替代物、培养基添加物、脂肪酸。这些的血清替代物、培养基添加物、脂肪酸优选如上述记载,各自含在公知的浓度范围内。本发明的培养基添加剂只要是不损害期望的效果,就除了L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物之外,可适宜含一直以来在细胞的培养中使用的添加物等。
在一实施方式中,本发明的培养基添加剂是,作为氨基酸,仅含有L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,不含有其他氨基酸。
在一实施方式中,本发明的培养基添加剂除了L-色氨酸或L-色氨酸衍生物之外,含有选自L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬氨酸、L-丝氨酸及L-甲硫氨酸的1、2、3、4、5或6种氨基酸。此时,对于上述的本发明的培养基添加剂中所含有的氨基酸的氨基酸以外的氨基酸,可含在本发明的培养基添加剂中,也可不含在本发明的培养基添加剂中。
本发明的培养基添加剂只要是不损害期望的效果,就也可除了L-色氨酸及/或L-色氨酸衍生物之外,还以适当量含有任意的添加剂、例如,稳定化剂、张度剂、pH调整剂等。
本发明的培养基添加剂只要是得到了期望的效果,就可为任何的剂形,例如,可举出溶液、固体、粉末状等。在是固体或粉末状时,可使用适合的缓冲液等而以成为期望的浓度的方式溶解而使用。
培养基添加剂是溶液时,该溶液的pH优选调整到约5.0~约8.5,更优选约6.0~约8.0。培养基添加剂是溶液时,该溶液优选进行使用膜滤器等的过滤灭菌等的灭菌处理。
接下来显示参考例及实施例,对本发明更详细地进行说明,但这些不限定本发明的范围。
(参考例)
使用预先定量培养基中的各氨基酸量的培养基而将多能性干细胞201B7株(iPSAcademia日本公司)培养5天,对培养基中的各氨基酸量进行测定。多能性干细胞的培养是向包被基质胶(354277、康宁公司)的100mm组织培养用皿(353003、日本BectonDickinson公司)中接种1,000,000个细胞,于5%CO2/37℃培养。另外,残留在培养基中的氨基酸量的测定由以下的方法进行。氨基酸的定量分析用新保等(Anal Chem.2009Jul 1;81(13):5172-9.Multifunctional and highly sensitive precolumn reagents for aminoacids in liquid chromatography/tandem mass spectrometry.Shimbo K,Yahashi A,Hirayama K,Nakazawa M,Miyano H.)中报告的LC-MS/MS系统实施。细胞培养后上清取到1.5mL管,至测定时于负80℃保存。样品在实施蛋白除去处理后,用APDS试剂实施衍生物化而交付到分析装置。各样品中的氨基酸浓度使用校准曲线算出。结果,在培养开始时以44μM的浓度含的L-色氨酸在培养第4天枯渴。一方面确认到,此外的氨基酸即使在培养5天后也残留在培养基中,最少也约20%左右的残留。从而得知,在多能性干细胞的培养中,L-色氨酸在全氨基酸中最快速地的枯渴。
【实施例】
【实施例1:在3种市售的L-色氨酸的培养基中的增殖促进效果】
起初,将由L-色氨酸的诱导多能性干细胞(iPS细胞)的增殖促进效果使用3种市售培养基而进行评价。人iPS细胞使用从iPSAcademia日本公司购入的201B7株,在5%CO2/37℃的条件下进行。
L-色氨酸(Sigma-Aldrich公司:T8941)以成为指定的浓度的方式添加到Essential-8(Life Technologies公司:A1517001)、mTeSR1(Stem Cell Technologies公司:05850)、TeSR2(Stem Cell Technologies公司:05860)的培养基中,通过在培养中使用来探讨其效果。
调制以成为最终浓度44、176、352、704、1408μM的方式向Essential-8、mTeSR1、TeSR2的培养基添加L-色氨酸(Sigma-Aldrich公司:T8941)的培养基,探讨L-色氨酸的增殖促进效果。准备作为基底膜基质包被基质胶(日本Becton Dickinson公司)的6孔板,每1孔以单细胞接种13,000个细胞。在接种细胞的次日使用如上述调制的培养基而进行评价。将培养期间设为6天,将L-色氨酸添加时设为0,在24、48、72、96、120小时后使用IncuCyte而测量细胞被覆率。在未向接种时使用的培养基添加最终浓度10μM的Y-27632的培养基中进行培养。
每各培养基进行1轮实验的结果示于图1、2、3。得到了L-色氨酸浓度依赖性地显示增殖促进效果的结果。另外,见不到未分化标志物(OCT、Nanog、碱性磷酸酶)的表达受高浓度的L-色氨酸添加的影响(数据未示)。
【实施例2:L-色氨酸的增殖促进效果-使用别的人诱导多能性干细胞株的培养结果】
接下来,将由L-色氨酸的增殖促进效果使用人诱导多能性干细胞(iPS细胞)的别株253G4及人胚胎干细胞H9株进行评价。培养基使用mTeSR1(Stem Cell Technologies公司:05850),在5%CO2/37℃的条件下进行培养。
L-色氨酸(Sigma-Aldrich公司:T8941)以成为指定的浓度的方式添加到mTeSR1(Stem Cell Technologies公司:05850)培养基中,通过在培养中使用来探讨其效果。
调制以成为最终浓度44、176、352、704、1408μM的方式向mTeSR1的培养基添加L-色氨酸(Sigma-Aldrich公司:T8941)的培养基,探讨L-色氨酸的增殖促进效果。准备作为基底膜基质包被基质胶(日本Becton Dickinson公司)的6孔板,253G4每1孔以单细胞接种40,000个细胞、H9每1孔以单细胞接种10,000个细胞。在接种细胞的次日取代为上述调制的培养基而进行评价。将培养期间设为6天,将L-色氨酸添加时设为0,在24、48、72、96、120小时后使用IncuCyte而测量细胞被覆率。在未向接种时使用的培养基添加最终浓度10μM的Y-27632的培养基中进行培养。
每各细胞进行5轮实验的结果示于图4、5。L-色氨酸的浓度依赖性增殖促进效果也在别的人多能性干细胞中确认。
【实施例3:L-色氨酸的增殖促进效果-使用人胎儿肾脏来源细胞株HEK293T的培养结果】
接下来,用人胎儿肾脏来源细胞株HEK293T细胞评价由L-色氨酸的增殖促进效果。培养基使用添加10%牛胎儿血清的DMEM培养基(ThermoFisherScientific公司:11965),在5%CO2/37℃的条件下进行培养。
L-色氨酸(Sigma-Aldrich公司:T8941)以成为指定的浓度的方式添加到添加10%的牛胎儿血清的DMEM培养基(ThermoFisherScientific公司:11965)中,通过在培养中使用来探讨其效果。
调制以成为最终浓度44、176、352、704、1408μM的方式向添加10%牛胎儿血清的DMEM培养基(ThermoFisherScientific公司:11965)添加L-色氨酸(Sigma-Aldrich公司:T8941)的培养基,探讨L-色氨酸的增殖促进效果。准备6孔板,每1孔以单细胞接种10,000个细胞。在接种细胞的次日取代为上述调制的培养基而进行评价。将培养期间设为6天,将L-色氨酸添加时设为0,在24、48、72、96、120小时后使用IncuCyte而测量细胞被覆率。
进行5轮实验的结果示于图6。L-色氨酸的浓度依赖性增殖促进效果在人胎儿肾脏来源细胞株HEK293细胞中确认不到。
【实施例4:在L-犬尿氨酸的市售培养基中的增殖促进效果】
调制以成为最终浓度50、100、200、500、1000μM的方式向mTeSR1培养基添加L-犬尿氨酸(Sigma-Aldrich公司:K8625)的培养基,探讨增殖促进效果。从接种时起2天添加最终浓度10μM的Y-27632。准备作为基底膜基质包被基质胶(日本Becton Dickinson公司)的6孔板,每1孔以单细胞接种20,000个细胞。在接种细胞的次日使用不含Y-27632的如上述调制的培养基而进行评价。将L-犬尿氨酸添加时设为0,在0、24、48、72、96、120小时后使用IncuCyte而测量细胞被覆率。结果示于图7。如图7所示,得到了在L-犬尿氨酸50-500μM添加区中显示细胞增殖促进效果的结果。
【实施例5:在犬尿喹啉酸的市售培养基中的增殖促进效果】
调制以成为最终浓度50、100、200、500、1000μM的方式向mTeSR1培养基添加犬尿喹啉酸(Sigma-Aldrich公司:K3375)的培养基,探讨增殖促进效果。从接种时起2天添加最终浓度10μM的Y-27632。准备作为基底膜基质包被基质胶(日本Becton Dickinson公司)的6孔板,每1孔以单细胞接种20,000个细胞。在接种细胞的次日使用不含Y-27632的如上述调制的培养基而进行评价。将犬尿喹啉酸添加时设为0,在0、24、48、72、96、120小时后使用IncuCyte而测量细胞被覆率。结果示于图8。如图8所示,得到了在犬尿喹啉酸50-500μM添加区中显示细胞增殖促进效果的结果。
【产业上的利用可能性】
根据本发明,促进多能性干细胞的细胞增殖变得可能,可削减多能性干细胞的培养所耗的人的成本及金钱的成本。
本申请以在日本申请的特愿2017-063842(申请日:2017年3月28日)作为基础,其内容全部包含在本说明书中。
Claims (16)
1.多能性干细胞培养用的培养基,其以176μM以上的浓度含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
2.权利要求1所述的培养基,其中培养基中以176μM~1408μM的浓度含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
3.权利要求1或2所述的培养基,其为无血清培养基。
4.权利要求1~3之任一项所述的培养基,其中多能性干细胞是诱导多能性干细胞。
5.权利要求1~4之任一项所述的培养基,其中色氨酸衍生物是色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽。
6.权利要求5所述的培养基,其中二肽是L-丙氨酰-L-色氨酸。
7.多能性干细胞的培养方法,其包括在权利要求1~6之任一项所述的培养基中培养多能性干细胞。
8.权利要求7所述的方法,其为用于使多能性干细胞增殖的方法。
9.多能性干细胞培养调制物,其包含权利要求1~6之任一项所述的培养基及多能性干细胞。
10.多能性干细胞的培养方法,其包括下列工序:
(1)在含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的培养基中培养多能性干细胞;
(2)向得到的多能性干细胞培养物添加L-色氨酸或L-色氨酸衍生物,补充(1)中消耗的培养基中的L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的一部分或全部;及
(3)继续培养添加了L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的多能性干细胞培养物。
11.权利要求10所述的方法,其中含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物的培养基是无血清培养基。
12.权利要求10或11所述的方法,其中色氨酸衍生物是色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽。
13.权利要求12所述的方法,其中二肽是L-丙氨酰-L-色氨酸。
14.用于促进多能性干细胞的增殖的培养基添加剂,其含L-色氨酸或L-色氨酸衍生物。
15.权利要求14所述的培养基添加剂,其中色氨酸衍生物是色氨酸和氨基酸经肽键键合的二肽。
16.权利要求15所述的培养基添加剂,其中二肽是L-丙氨酰-L-色氨酸。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017063842 | 2017-03-28 | ||
JP2017-063842 | 2017-03-28 | ||
PCT/JP2018/012476 WO2018181342A1 (ja) | 2017-03-28 | 2018-03-27 | 未分化維持培地添加剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110494559A true CN110494559A (zh) | 2019-11-22 |
CN110494559B CN110494559B (zh) | 2023-10-31 |
Family
ID=63677148
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880021329.2A Active CN110494559B (zh) | 2017-03-28 | 2018-03-27 | 不分化地维持用培养基添加剂 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20200040308A1 (zh) |
EP (1) | EP3604503A4 (zh) |
JP (3) | JP7181534B2 (zh) |
KR (1) | KR102641031B1 (zh) |
CN (1) | CN110494559B (zh) |
CA (1) | CA3058306A1 (zh) |
WO (1) | WO2018181342A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110494559B (zh) * | 2017-03-28 | 2023-10-31 | 味之素株式会社 | 不分化地维持用培养基添加剂 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20210068488A (ko) * | 2018-09-28 | 2021-06-09 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 동물 세포의 배양용 첨가물, 배양용 배지 및 배양 방법 |
JP7384453B2 (ja) * | 2018-10-18 | 2023-11-21 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ | 3d堆積用バイオインク |
Citations (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1425023A (zh) * | 1999-10-26 | 2003-06-18 | 德尔塔根公司 | 包含trp基因破坏的转基因小鼠 |
CN1446227A (zh) * | 2000-07-19 | 2003-10-01 | 先端研究与技术学院 | 新型成纤维细胞生长因子(fgf23)及其使用方法 |
CN101454441A (zh) * | 2006-03-06 | 2009-06-10 | 新加坡科技研究局 | 人胚胎干细胞方法与podxl表达 |
CN101755046A (zh) * | 2007-07-20 | 2010-06-23 | 东国大学校产学协力团 | 采用间充质干细胞制备真皮乳头组织的方法 |
WO2011007900A1 (ja) * | 2009-07-15 | 2011-01-20 | Dezawa Mari | 生体組織から単離できる多能性幹細胞 |
US20120052577A1 (en) * | 2010-08-31 | 2012-03-01 | The Regents Of The University Of California | Culture system for stem cell propagation and neural and oligodendrocyte specification |
CN102453693A (zh) * | 2010-10-18 | 2012-05-16 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 骨形成蛋白在诱导诱导式多能性干细胞过程中的应用 |
AU2014201955A1 (en) * | 2007-06-29 | 2014-04-24 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Automated method and apparatus for embryonic stem cell culture |
US20140170748A1 (en) * | 2012-12-14 | 2014-06-19 | DePuy Synthes Products, LLC | Nutrient Enriched Media for hUTC Growth |
EP2762558A1 (en) * | 2011-09-27 | 2014-08-06 | Public University Corporation Yokohama City University | Method for producing tissue and organ |
AU2013240972A1 (en) * | 2012-03-30 | 2014-10-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Culture medium for proliferating stem cell, which contains sulfated compound |
CN104357379A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-02-18 | 刘兴宇 | 干细胞培养基 |
CN104928251A (zh) * | 2014-03-21 | 2015-09-23 | 中国科学院动物研究所 | 一种诱导多能性干细胞的培养体系 |
CN104955939A (zh) * | 2013-01-31 | 2015-09-30 | 味之素株式会社 | 用于进行多能性干细胞的稳定的未分化维持增殖的培养方法 |
US20150335010A1 (en) * | 2014-05-21 | 2015-11-26 | Bourbon Corporation | Maintenance medium for primate pluripotent stem cells |
AU2015255253A1 (en) * | 2008-08-12 | 2015-12-10 | Cellular Dynamics International, Inc. | Methods for the production of ips cells |
CN106062205A (zh) * | 2013-12-20 | 2016-10-26 | 基本药品有限责任公司 | 细胞培养基 |
CN106164257A (zh) * | 2014-03-31 | 2016-11-23 | 味之素株式会社 | 干细胞用培养基 |
EP3150700A1 (en) * | 2014-05-28 | 2017-04-05 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Culture medium and culturing method for anchorage-dependent cells, cell composition including stem cells and/or differentiated cells derived from stem cells, and production method for cell composition |
CN106715683A (zh) * | 2014-08-21 | 2017-05-24 | 味之素株式会社 | 间充质干细胞用培养基 |
US20180352792A1 (en) * | 2015-12-24 | 2018-12-13 | Public University Corporation Yokohama City University | Method for manufacturing tissue/organ by using blood cells |
CN109195443A (zh) * | 2016-02-16 | 2019-01-11 | 雷杰纳荣制药公司 | 具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物 |
CN110938133A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-03-31 | 贵州汉氏联合生物技术有限公司 | 一种造血干细胞生长因子 |
CN111601881A (zh) * | 2018-01-05 | 2020-08-28 | 财团法人峨山社会福祉财团 | 包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及来源于其的外泌体的用于改善、预防或治疗皮肤疾病的组合物 |
CN111690595A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-09-22 | 生物岛实验室 | 一种无血清无饲养层的胚胎干细胞或多能干细胞培养基及其应用 |
CN112771153A (zh) * | 2018-09-28 | 2021-05-07 | 味之素株式会社 | 动物细胞培养用添加物、培养用培养基和培养方法 |
WO2021145319A1 (ja) * | 2020-01-14 | 2021-07-22 | 味の素株式会社 | 細胞培養用培地組成物 |
WO2021250058A2 (en) * | 2020-06-12 | 2021-12-16 | Bayer Aktiengesellschaft | CRISPR-Cas12a DIRECTED RANDOM MUTAGENESIS AGENTS AND METHODS |
WO2022046760A2 (en) * | 2020-08-25 | 2022-03-03 | Kite Pharma, Inc. | T cells with improved functionality |
TW202214843A (zh) * | 2020-10-05 | 2022-04-16 | 蘑法生物科技股份有限公司 | 促進幹細胞增殖與繁殖之方法 |
WO2022086846A2 (en) * | 2020-10-19 | 2022-04-28 | Caribou Biosciences, Inc. | Dna-containing polynucleotides and guides for crispr type v systems, and methods of making and using the same |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE68925971T2 (de) * | 1988-09-23 | 1996-09-05 | Cetus Oncology Corp | Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte |
EP0986635A4 (en) | 1997-01-10 | 2001-11-07 | Life Technologies Inc | SERUM SUBSTITUTE FOR EMBRYONIC STEM CELLS |
FR2846004B1 (fr) | 2002-10-16 | 2006-06-23 | Maco Pharma Sa | Composition pour culture de cellules notamment animales ou de tissus, comprenant du polyethylene glycol |
CN1708582A (zh) * | 2002-10-31 | 2005-12-14 | 独立行政法人理化学研究所 | 多能干细胞培养用的组合物及其使用 |
ATE466073T1 (de) * | 2003-12-26 | 2010-05-15 | Makoto Asashima | Basalmedium zur kultivierung von es-zellen |
US20070202590A1 (en) | 2004-03-30 | 2007-08-30 | Kyoto University | Process For Producing Multipotential Stem Cell Origination In Testoid Cell |
PT1970446E (pt) | 2005-12-13 | 2011-09-01 | Univ Kyoto | Factor de reprogramação nuclear |
JP2007228815A (ja) | 2006-02-27 | 2007-09-13 | Gifu Univ | 胚性幹細胞の維持方法 |
JP2008148643A (ja) | 2006-12-19 | 2008-07-03 | Olympus Corp | 無血清培地および幹細胞の培養方法 |
JP2010110217A (ja) | 2007-02-22 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸生産菌及びl−アミノ酸の製造法 |
JP2010263790A (ja) | 2007-09-04 | 2010-11-25 | Ajinomoto Co Inc | アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
JP2011167071A (ja) | 2008-05-22 | 2011-09-01 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
JP2010094062A (ja) | 2008-10-15 | 2010-04-30 | Saitama Medical Univ | 間葉系幹細胞の多分化能維持用培地、培養方法、及び分化方法 |
EP2218778A1 (en) * | 2009-02-16 | 2010-08-18 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Conversion of unipotent germline stem cells into pluripotent stem cells without exogenous factors |
JP2012100537A (ja) | 2009-03-06 | 2012-05-31 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
US10894944B2 (en) | 2009-04-10 | 2021-01-19 | Monash University | Cell culture media |
JP2012223092A (ja) | 2009-08-28 | 2012-11-15 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
WO2011100286A2 (en) | 2010-02-09 | 2011-08-18 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods of generating a differentiated mesodermal cell |
US20110262965A1 (en) * | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Life Technologies Corporation | Cell culture medium comprising small peptides |
EP2644694B1 (en) * | 2010-10-28 | 2018-07-11 | National University Corporation Kumamoto University | Method and culture medium for improving pluripotent stem cell differentiation inducing efficiency |
US20140170693A1 (en) * | 2011-03-24 | 2014-06-19 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Compositions and methods for culturing cells from normal human tubo-ovarian epithelium and human tubo-ovarian tumors |
EP2729492B1 (en) * | 2011-07-05 | 2019-01-02 | Albumedix Ltd | Albumin formulation and use |
JP6333378B2 (ja) * | 2014-07-16 | 2018-05-30 | Heartseed株式会社 | 新規未分化幹細胞除去および心筋純化精製培地 |
JP6853467B2 (ja) * | 2015-03-30 | 2021-03-31 | 国立大学法人 岡山大学 | 骨折治療剤 |
JP7181534B2 (ja) * | 2017-03-28 | 2022-12-01 | 味の素株式会社 | 未分化維持培地添加剤 |
-
2018
- 2018-03-27 JP JP2019509902A patent/JP7181534B2/ja active Active
- 2018-03-27 EP EP18778261.0A patent/EP3604503A4/en active Pending
- 2018-03-27 CA CA3058306A patent/CA3058306A1/en active Pending
- 2018-03-27 KR KR1020197031674A patent/KR102641031B1/ko active IP Right Grant
- 2018-03-27 CN CN201880021329.2A patent/CN110494559B/zh active Active
- 2018-03-27 WO PCT/JP2018/012476 patent/WO2018181342A1/ja unknown
-
2019
- 2019-09-27 US US16/585,184 patent/US20200040308A1/en active Pending
-
2022
- 2022-11-09 JP JP2022179759A patent/JP7445268B2/ja active Active
-
2024
- 2024-02-15 JP JP2024021262A patent/JP2024056901A/ja active Pending
Patent Citations (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1425023A (zh) * | 1999-10-26 | 2003-06-18 | 德尔塔根公司 | 包含trp基因破坏的转基因小鼠 |
CN1446227A (zh) * | 2000-07-19 | 2003-10-01 | 先端研究与技术学院 | 新型成纤维细胞生长因子(fgf23)及其使用方法 |
CN101454441A (zh) * | 2006-03-06 | 2009-06-10 | 新加坡科技研究局 | 人胚胎干细胞方法与podxl表达 |
AU2014201955A1 (en) * | 2007-06-29 | 2014-04-24 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Automated method and apparatus for embryonic stem cell culture |
CN101755046A (zh) * | 2007-07-20 | 2010-06-23 | 东国大学校产学协力团 | 采用间充质干细胞制备真皮乳头组织的方法 |
AU2015255253A1 (en) * | 2008-08-12 | 2015-12-10 | Cellular Dynamics International, Inc. | Methods for the production of ips cells |
WO2011007900A1 (ja) * | 2009-07-15 | 2011-01-20 | Dezawa Mari | 生体組織から単離できる多能性幹細胞 |
US20120052577A1 (en) * | 2010-08-31 | 2012-03-01 | The Regents Of The University Of California | Culture system for stem cell propagation and neural and oligodendrocyte specification |
CN102453693A (zh) * | 2010-10-18 | 2012-05-16 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 骨形成蛋白在诱导诱导式多能性干细胞过程中的应用 |
EP2762558A1 (en) * | 2011-09-27 | 2014-08-06 | Public University Corporation Yokohama City University | Method for producing tissue and organ |
AU2013240972A1 (en) * | 2012-03-30 | 2014-10-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Culture medium for proliferating stem cell, which contains sulfated compound |
CN104334714A (zh) * | 2012-03-30 | 2015-02-04 | 味之素株式会社 | 含硫酸化化合物的干细胞增殖用培养基 |
US20140170748A1 (en) * | 2012-12-14 | 2014-06-19 | DePuy Synthes Products, LLC | Nutrient Enriched Media for hUTC Growth |
CN105026551A (zh) * | 2012-12-14 | 2015-11-04 | 德普伊新特斯产品公司 | 用于hUTC生长的营养富集培养基 |
CN104955939A (zh) * | 2013-01-31 | 2015-09-30 | 味之素株式会社 | 用于进行多能性干细胞的稳定的未分化维持增殖的培养方法 |
CN106062205A (zh) * | 2013-12-20 | 2016-10-26 | 基本药品有限责任公司 | 细胞培养基 |
CN104928251A (zh) * | 2014-03-21 | 2015-09-23 | 中国科学院动物研究所 | 一种诱导多能性干细胞的培养体系 |
CN106164257A (zh) * | 2014-03-31 | 2016-11-23 | 味之素株式会社 | 干细胞用培养基 |
US20150335010A1 (en) * | 2014-05-21 | 2015-11-26 | Bourbon Corporation | Maintenance medium for primate pluripotent stem cells |
EP3150700A1 (en) * | 2014-05-28 | 2017-04-05 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Culture medium and culturing method for anchorage-dependent cells, cell composition including stem cells and/or differentiated cells derived from stem cells, and production method for cell composition |
CN106715683A (zh) * | 2014-08-21 | 2017-05-24 | 味之素株式会社 | 间充质干细胞用培养基 |
CN104357379A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-02-18 | 刘兴宇 | 干细胞培养基 |
US20180352792A1 (en) * | 2015-12-24 | 2018-12-13 | Public University Corporation Yokohama City University | Method for manufacturing tissue/organ by using blood cells |
CN109195443A (zh) * | 2016-02-16 | 2019-01-11 | 雷杰纳荣制药公司 | 具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物 |
CN111601881A (zh) * | 2018-01-05 | 2020-08-28 | 财团法人峨山社会福祉财团 | 包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及来源于其的外泌体的用于改善、预防或治疗皮肤疾病的组合物 |
CN112771153A (zh) * | 2018-09-28 | 2021-05-07 | 味之素株式会社 | 动物细胞培养用添加物、培养用培养基和培养方法 |
CN110938133A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-03-31 | 贵州汉氏联合生物技术有限公司 | 一种造血干细胞生长因子 |
WO2021145319A1 (ja) * | 2020-01-14 | 2021-07-22 | 味の素株式会社 | 細胞培養用培地組成物 |
WO2021250058A2 (en) * | 2020-06-12 | 2021-12-16 | Bayer Aktiengesellschaft | CRISPR-Cas12a DIRECTED RANDOM MUTAGENESIS AGENTS AND METHODS |
CN111690595A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-09-22 | 生物岛实验室 | 一种无血清无饲养层的胚胎干细胞或多能干细胞培养基及其应用 |
WO2022046760A2 (en) * | 2020-08-25 | 2022-03-03 | Kite Pharma, Inc. | T cells with improved functionality |
TW202214843A (zh) * | 2020-10-05 | 2022-04-16 | 蘑法生物科技股份有限公司 | 促進幹細胞增殖與繁殖之方法 |
WO2022086846A2 (en) * | 2020-10-19 | 2022-04-28 | Caribou Biosciences, Inc. | Dna-containing polynucleotides and guides for crispr type v systems, and methods of making and using the same |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
ANDREW SALAZAR 等: "Amino acids in the cultivation of mammalian cells", 《AMINO ACIDS》 * |
SIMON P. JONES 等: "The Kynurenine Pathway in Stem Cell Biology", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF TRYPTOPHAN RESEARCH》 * |
张兆强等: "牙髓干细胞研究进展", 《中国美容医学》 * |
张树建: "低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物联合抑制T细胞增殖的体外研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)》 * |
李黎等: "胚胎干细胞及代谢组学在药物安全性研究中的应用进展", 《中国药理学与毒理学杂志》 * |
柳安雄等: "间充质干细胞免疫调节作用在终末期肝病治疗中的研究进展", 《中华移植杂志(电子版)》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110494559B (zh) * | 2017-03-28 | 2023-10-31 | 味之素株式会社 | 不分化地维持用培养基添加剂 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3604503A4 (en) | 2020-12-30 |
CN110494559B (zh) | 2023-10-31 |
JP2024056901A (ja) | 2024-04-23 |
WO2018181342A1 (ja) | 2018-10-04 |
KR20190133034A (ko) | 2019-11-29 |
JPWO2018181342A1 (ja) | 2020-02-20 |
JP7445268B2 (ja) | 2024-03-07 |
JP2023011911A (ja) | 2023-01-24 |
KR102641031B1 (ko) | 2024-02-28 |
CA3058306A1 (en) | 2018-10-04 |
JP7181534B2 (ja) | 2022-12-01 |
EP3604503A1 (en) | 2020-02-05 |
US20200040308A1 (en) | 2020-02-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2014323098B2 (en) | A method to direct differentiation of pluripotent stem cells into functional heart muscle | |
JP7445268B2 (ja) | 未分化維持培地添加剤 | |
JP6780638B2 (ja) | ヒト血清アルブミンを含む神経幹細胞増殖培地 | |
JP6744084B2 (ja) | 幹細胞由来の分化細胞用培地、幹細胞からの分化細胞の製造及び該分化細胞を含む細胞医薬組成物の製造のための方法 | |
JP6913694B2 (ja) | 多能性幹細胞のための培養培地 | |
JP2012143229A (ja) | 多能性幹細胞培養用組成物およびその用途 | |
CN106715683A (zh) | 间充质干细胞用培养基 | |
CN109370985A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞大规模培养无血清培养基 | |
US20210284971A1 (en) | Culture additive, culture medium and culture method for animal cells | |
WO2016159177A1 (ja) | キレート化鉄を含む神経幹細胞用培地 | |
JP6981403B2 (ja) | 神経分化能を亢進させる神経幹細胞用培地 | |
US20230002729A1 (en) | Cell culture medium composition | |
WO2015182140A1 (ja) | 足場依存性細胞の培地及び培養方法、並びに幹細胞及び/又は幹細胞から誘導された分化細胞を含む細胞組成物及びその製造方法 | |
JP2020129970A (ja) | 多能性幹細胞を培養するための組成物及び方法 | |
WO2017188082A1 (ja) | 培地添加剤 | |
CA3167733A1 (en) | High-density cell culture method |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |