CN110177876A - 抗gpc3抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题在于提供：与现有的抗体(例如GC33、GC199)识别不同的表位、并且即使在单链抗体的状态下也可以与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合的抗GPC3抗体；含有所述抗GPC3单链抗体的CAR；表达所述CAR的免疫活性细胞；上述抗GPC3抗体基因或CAR基因；含有所述抗GPC3抗体基因或CAR基因的载体；导入有所述载体的宿主细胞；特异性检测GPC3的方法；以及用于特异性检测GPC3的试剂盒。含有权利要求1中所定义的特定的重链CDR1～3和特定的轻链CDR1～3且与来源于人的GPC3多肽特异性结合的抗体与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合。基于含有所述单链抗体的CAR制作的CAR‑免疫活性细胞在癌症免疫疗法中有用。

Description

抗GPC3抗体
技术领域
本发明涉及：与GPC3(Glypican-3，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)特异性结合的抗体(抗GPC3抗体)；含有抗GPC3单链抗体、融合于所述抗GPC3单链抗体的羧基(C)末端的跨膜区和融合于所述跨膜区的C末端的免疫活性细胞活化信号转导区的嵌合抗原受体(ChimericAntigen Receptor：以下也称为“CAR”)；表达CAR的免疫活性细胞；抗GPC3抗体基因或CAR基因；含有抗GPC3抗体基因或CAR基因的载体；导入有所述载体的宿主细胞；检测GPC3的方法；以及用于检测GPC3的试剂盒。
背景技术
磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在胚胎组织、特别是肝脏和肾脏中表达，是与器官形成相关的细胞外基质蛋白。在成人组织中，在胎盘以外观察不到GPC3的表达，但是在肝细胞癌、黑素瘤、卵巢透明细胞癌、肺鳞状细胞癌等各种癌组织中观察到表达。可见，GPC3与甲胎蛋白(α-fetoprotein；AFP)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen；CEA)等蛋白质同样地是在胚胎组织中表达的蛋白质，因此被归类为胚胎性癌抗原。即，GPC3显示出在正常组织细胞中不表达、但在癌细胞中特异性表达的特征，因此作为癌症治疗的靶分子、肿瘤标志物及诊断标志物有用。
GPC3是作为器官形成中的细胞外基质发挥细胞粘附作用、或作为细胞生长因子的受体起作用的蛋白聚糖家族之一。在位于GPC3的羧基(C)末端侧的第560位的丝氨酸上添加有GPI(Glycosylphosphatidylinositol，糖基磷脂酰肌醇)锚。GPI锚担负着与细胞膜脂质形成共价键而使GPC3局部存在于细胞表面上的作用。另外，GPC3的第495位的丝氨酸和第509位的丝氨酸被硫酸乙酰肝素链(HS链)进行了修饰。已知HS链调节Wnt信号、FGF信号、BMP信号等多个生长信号转导途径。已知相关的生长信号转导途径根据癌症种类而有所不同，例如，肝细胞癌(HCC)中，刺激Wnt信号途径而进行细胞增殖。作为磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族共通的特征，在胞外域富含16个半胱氨酸，认为形成多个分子内二硫键而有助于立体结构形成的稳定化。据报道，细胞膜表面的GPC3有可能被弗林蛋白酶转化酶(furinconvertase)在第358位的精氨酸(R)和第359位的丝氨酸(S)之间(R358/S359)切断。但是，GPC3的氨基(N)末端亚基由于通过分子内二硫键发生了交联，因此认为，即使在被弗林蛋白酶转化酶切断为N末端侧亚基及C末端侧亚基这两部分时，可能两者也不解离、而是保持全长型的结构，关于可溶性GPC3的结构尚无定论。可见，局部存在于细胞膜的GPC3的立体结构也包括GPC3的同种型的结构在内，不明之处仍较多。
由于细胞膜上的GPC3的结构复杂，因此认为，在制作针对GPC3的抗体时期望以最简单的结构区域为表位。作为现有的抗GPC3抗体的代表，有BioMosaics,Inc.所销售的单克隆抗体1G12。该抗体为如下得到的抗体：将避开GPC3的复杂结构、局部存在而设计的抗原(GPC3的C末端侧70个残基的多肽)免疫于Balb/c小鼠，制作杂交瘤，通过使用该抗原的筛选而得到。另外，日本国内制药厂家所开发的抗体GC33及GC199也是基于同样的构思而建立的单克隆抗体，是以GPC3的C末端侧部分片段为抗原而得到的抗体(专利文献1)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第4011100号公报
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题在于提供：与现有的抗体(例如GC33、GC199)识别不同的表位、并且即使在单链抗体的状态下也可以与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合的抗GPC3抗体；含有所述抗GPC3单链抗体的CAR；表达所述CAR的免疫活性细胞；上述抗GPC3抗体基因或CAR基因；含有所述抗GPC3抗体基因或CAR基因的载体；导入有所述载体的宿主细胞；特异性检测GPC3的方法；以及用于特异性检测GPC3的试剂盒。
用于解决问题的方法
本发明人为了解决上述课题持续进行了深入研究。在该过程中，通过与建立杂交瘤的以往单克隆抗体制作方法不同的、噬菌体展示法制作了新型抗GPC3抗体。具体而言，使用来自用全长的人GPC3进行了免疫的小鼠的B细胞合成抗体基因的免疫文库，将基因重构成至单链抗体(single chain Fv；scFv)文库中，并整合至噬菌体展示，使其在噬菌体表面表达，使用重组全长人GPC3及该GPC3表达细胞株，根据需要进一步使用作为竞争物的上述现有抗体的表位、即GPC3的C末端侧多肽进行生物淘选，从而制作抗GPC3抗体。另外，已确认所制作的抗GPC3抗体在使用表达嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor：CAR)的T细胞(以下有时称为“CAR-T细胞”)的癌症免疫疗法中是有用的。本发明是基于这些见解而完成的。
即，本发明如下所述。
[1]一种抗体(以下有时称为“本申请抗体”)，其是与由序列号155所示的氨基酸序列构成的来源于人GPC3(Glypican-3)的多肽特异性结合的抗体，其中，
(1-1)含有：由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链互补决定区(CDR)1、由序列号2所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号3所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号4所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号5所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号6所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(2-1)含有：由序列号11所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号12所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号13所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号14所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号15所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号16所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(3-1)含有：由序列号21所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号22所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号23所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号24所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号25所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号26所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(4-1)含有：由序列号31所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号32所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号33所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号34所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号35所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号36所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(5-1)含有：由序列号41所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号42所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号43所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号44所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号45所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号46所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(6-1)含有：由序列号51所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号52所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号53所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号54所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号55所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号56所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(7-1)含有：由序列号61所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号62所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号63所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号64所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号65所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号66所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(8-1)含有：由序列号71所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号72所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号73所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号74所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号75所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号76所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(9-1)含有：由序列号81所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号82所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号83所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号84所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号85所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号86所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(10-1)含有：由序列号91所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号92所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号93所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号94所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号95所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号96所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；或者
(11-1)含有：由序列号101所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号102所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号103所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号104所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号105所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号106所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
[2]根据上述[1]所述的抗体，其中，
(1-2)含有：由与序列号7所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号8所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(2-2)含有：由与序列号17所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号18所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(3-2)含有：由与序列号27所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号28所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(4-2)含有：由与序列号37所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号38所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(5-2)含有：由与序列号47所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号48所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(6-2)含有：由与序列号57所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号58所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(7-2)含有：由与序列号67所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号68所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(8-2)含有：由与序列号77所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号78所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(9-2)含有：由与序列号87所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号88所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(10-2)含有：由与序列号97所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号98所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(11-2)含有：由与序列号107所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号108所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区。
[3]根据上述[1]或[2]中任一项所述的抗体，其为单链抗体。
[4]根据上述[3]所述的抗体，其中，单链抗体
(1-3)含有与序列号165所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3)含有与序列号166所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(3-3)含有与序列号167所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(4-3)含有与序列号168所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(5-3)含有与序列号169所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(6-3)含有与序列号170所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(7-3)含有与序列号171所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(8-3)含有与序列号172所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(9-3)含有与序列号173所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(10-3)含有与序列号174所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；或者
(11-3)含有与序列号175所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列。
[5]根据上述[3]所述的抗体，其中，单链抗体
(1-3’-1)含有与序列号178所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(1-3’-2)含有与序列号179所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(1-3’-3)含有与序列号180所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3’-1)含有与序列号181所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3’-2)含有与序列号182所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3’-3)含有与序列号183所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；或者
(2-3’-4)含有与序列号184所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列。
[6]根据上述[1]或[2]所述的抗体，其中，
(1-4)含有：由与序列号9所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号10所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(2-4)含有：由与序列号19所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号20所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(3-4)含有：由与序列号29所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号30所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(4-4)含有：由与序列号39所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号40所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(5-4)含有：由与序列号49所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号50所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(6-4)含有：由与序列号59所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号60所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(7-4)含有：由与序列号69所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号70所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(8-4)含有：由与序列号79所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号80所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(9-4)含有：由与序列号89所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号90所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(10-4)含有：由与序列号99所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号100所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；或者
(11-4)含有：由与序列号109所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号110所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链。
[7]一种CAR(以下有时称为“本申请CAR”)，其含有上述[3]～[5]中任一项所述的抗体(以下有时称为“本申请单链抗体”)、融合于本申请单链抗体的羧基末端的跨膜区和融合于上述跨膜区的羧基末端的免疫活性细胞活化信号转导区。
[8]根据上述[7]所述的CAR，其含有序列号185～187中的任一者所示的氨基酸序列。
[9]一种免疫活性细胞(以下有时称为“本申请免疫活性细胞”)，其表达上述[7]或[8]所述的CAR。
[10]根据上述[9]所述的免疫活性细胞，其还表达白细胞介素7(IL-7)及趋化因子配体19(CCL19)。
[11]一种编码上述[1]～[6]中任一项所述的抗体的抗体基因(以下有时称为“本申请抗体基因”)或者编码上述[7]或[8]所述的CAR的CAR基因(以下有时称为“本申请CAR基因”)。
[12]一种抗体基因，其编码上述[1]～[4]及[6]中任一项所述的抗体。
[13]一种载体(以下有时称为“本申请载体”)，其含有启动子和可操作地连接在该启动子的下游的上述[11]所述的抗体基因或上述[11]所述的编码CAR的CAR基因。
[14]一种载体，其含有启动子和可操作地连接在该启动子的下游的上述[12]所述的抗体基因。
[15]一种宿主细胞(以下有时称为“本申请宿主细胞”)，其导入有上述[13]或[14]所述的载体。
[16]一种GPC3的检测方法(以下有时称为“本申请检测方法”)，其具备：使用上述[1]～[6]中任一项所述的抗体检测GPC3(Glypican-3)的步骤。
[17]一种GPC3(Glypican-3)的检测用试剂盒(以下有时称为“本申请检测用试剂盒”)，其含有上述[1]～[6]中任一项所述的抗体或其标记物。
作为本发明的另一个实施方式，可列举本申请抗体的制造方法，其具备：对非人动物(例如小鼠、大鼠)免疫用于在GPC3的检测中使用的本申请抗体、由序列号157所示的氨基酸序列构成的全长人GPC3的步骤；由来自上述免疫非人动物的B细胞的总RNA通过逆转录反应合成cDNA，扩增抗体基因，制作抗体基因文库的步骤；以及由上述抗体基因文库构建scFv噬菌体文库，使其感染于大肠杆菌并表达scFv，对于所得到的噬菌体文库，使用上述全长人GPC3、该GPC3表达细胞株、根据需要进一步使用作为竞争物的GPC3的C末端侧多肽(由序列号156所示的氨基酸序列构成的来源于人的GPC3多肽)进行生物淘选的步骤。
发明效果
本申请抗体是不仅在IgG型的状态下、在scFv型的状态下也与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合的抗体。另外，使用本申请抗体作为CAR中的scFv的CAR-T细胞具有优良的细胞杀伤活性及IFN-γ产生能力。因此，本申请抗体在癌症免疫疗法中有用。
附图说明
图1是示出由5种系列(A～E系列)构成的生物淘选的各轮(步骤)的图。A系列中，以固定于磁珠的重组GPC3为诱饵进行3轮生物淘选，在第4～5轮中以GPC3表达细胞株为诱饵进行生物淘选(第5轮仅对1413#3实施)。需要说明的是，在第1～4轮中添加现有的抗GPC3抗体(GC33及GC199)作为竞争抗体。B系列中，在A系列的第2轮之后在竞争抗体存在下以GPC3表达细胞为诱饵进行生物淘选。E系列中，在A系列的第3轮之后在无竞争抗体的条件下以固定于磁珠的重组GPC3为诱饵进行生物淘选。C系列中，在不存在竞争抗体的条件下以GPC3表达细胞株为诱饵进行2轮及以固定于磁珠的重组GPC3为诱饵进行2轮，共计进行4轮。D系列中，在不存在竞争抗体的条件下与A系列同样地进行生物淘选。
图2是示出使用18种抗GPC3scFv克隆(TF1413-02d023、02d028、02d030、02d039、02e003、02e004、02e014、02e030、02e040、03e001、03e004、03e005、03e015、03e016、03e019、03e027、03e034及03e045)及现有的抗GPC3抗体(GC33及GC199)与3种细胞株(GPC3 N末端片段表达细胞株、GPC3 C末端片段表达细胞株及GPC3[全长]表达细胞株)进行流式细胞术(FCM)的结果的图。图中的数值是以将基于FCM的不表达GPC3的细胞株(SK-Hep-1细胞株)的荧光强度设为1时的相对值来示出的。
图3是示出使用由11种scFv克隆(TF1413-02d028、02d039、02e004、02e014、02e030、02e040、03e001、03e004、03e005、03e015及03e034)制作的IgG抗体及现有的抗GPC3抗体(GC33及GC199)与3种细胞株(GPC3 N末端片段表达细胞株、GPC3 C末端片段表达细胞株及GPC3[全长]表达细胞株)进行FCM的结果的图。
图4是示出使用通过3种方法(EDTA、胰蛋白酶及“EDTA+胶原酶”)处理后的GPC3表达细胞株与3种抗体的组合(用APC进行了标记的抗小鼠IgG抗体[以下有时称为“APC抗小鼠IgG抗体”]、以及APC抗小鼠IgG抗体与scFv克隆[TF1413-02d028]抗体的组合)进行FACS(fluorescence activated cell sorting，荧光激活细胞分选)的结果的图。
图5是示出对于来自5种scFv克隆(TF1413-02d028、TF1413-02d039、TF1413-02e014、TF1413-02e030及TF1413-03e005)的GPC3 CAR-T细胞(表达识别GPC3的scFv的CAR的T细胞)分析针对Sk-HEP-1 GPC3细胞株的细胞杀伤活性的结果的图。各图表中，右侧的峰表示CD45阳性细胞(GPC3 CAR-T细胞)，左侧的峰表示CD45阴性细胞(残存癌细胞[Sk-HEP-1GPC3细胞])。各图表中的纵轴表示细胞数。各图表中的数值表示CD45阳性细胞相对于总细胞数(CD45阳性细胞及CD45阴性细胞)的比例(％)。作为对照，使用不表达GPC3 CAR的T细胞(图中的“未感染”)。
图6是示出图5中的CD45阴性细胞的比例(图6的A)及CD45阴性细胞数(图6的B)的图表。在成对的柱状图中，左侧的柱状图表示“mock(空白对照)”(Sk-HEP-1 mock细胞株)，右侧的柱状图表示“GPC3”(Sk-HEP-1 GPC3细胞株)。
图7是示出对来自5种scFv克隆(TF1413-02d028、TF1413-02d039、TF1413-02e014、TF1413-02e030及TF1413-03e005)的GPC3 CAR-T细胞分析针对Sk-HEP-1 GPC3细胞株的IFN-γ产生能力的结果的图。作为对照，使用不表达GPC3 CAR的T细胞(图中的“未感染”)。
具体实施方式
本申请抗体是含有上述(1-1)～(11-1)中的任一重(H)链及轻(L)链的CDR1～3、并且以由序列号155所示的氨基酸序列构成的来源于人的GPC3多肽(由序列号157所示的氨基酸序列构成的来源于人的全长GPC3的第32～471位的氨基酸残基[外显子1～7]所构成的氨基[N]末端侧多肽)的至少一部分(通常在3～30个氨基酸残基的范围内，优选为4～20个氨基酸残基，更优选为5～15个氨基酸残基)为表位进行特异性结合的抗体，并且是不仅在IgG型的状态下、在scFv型的状态下也与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合的抗体，通常包含含有上述(1-1)～(11-1)中的任一H链CDR1～3的H链可变区与含有上述(1-1)～(11-1)中的任一L链CDR1～3的L链可变区。这里，“特异性结合”是指：通过抗原-抗体间的高特异性的识别机制而识别由序列号155所示的氨基酸序列构成的多肽并进行结合的抗体。因此，本申请抗体不是与由序列号156所示的氨基酸序列构成的来源于人的GPC3多肽(由序列号157所示的氨基酸序列构成的来源于人的全长GPC3的第472～580位的氨基酸残基[外显子8～9]所构成的羧基[C]末端侧多肽)特异性结合的抗体。
本申请抗体的来源、种类、分类、形态等没有特别限制，例如本申请抗体中包括：人源抗体；小鼠、大鼠等非人动物源抗体；多克隆抗体、寡克隆抗体(数种～数十种抗体的混合物)、单克隆抗体；将抗体的一部分区域(例如恒定区)置换为来自不同生物种的区域而成的嵌合抗体或人源化抗体、将单克隆抗体用胃蛋白酶消化而得到的F(ab′)2抗体片段、将F(ab′)2抗体片段还原而得到的Fab′抗体片段、将单克隆抗体用木瓜蛋白酶消化而得到的Fab等抗体片段、将抗体重(H)链可变区和抗体轻(H)链可变区通过氨基酸交联而连接的scFv等重组抗体；等。在将本申请抗体作为CAR使用的情况下，优选scFv。
本申请抗体优选为经分离的抗体。这里，“经分离”是指通过人工操作将抗体从原本存在的环境中取出、或者使抗体在与原本所存在的环境不同的环境中表达等，从而抗体以与原本存在的状态不同的状态存在。即，“经分离的抗体”中不包括：作为来自某一个体的抗体的、并且未施加外在操作(人工操作)而包含在该个体的体内或来自体内的组织或者体液(血液、血浆、血清等)中的状态的抗体。另外，本申请抗体优选为通过人工操作而制作的抗体(例如上述重组抗体)。所述“来自通过人工操作而制作的细胞的抗体、由该细胞产生的抗体”中，不包括未实施人工操作的抗体、例如由天然存在的B细胞产生的抗体。
本申请抗体通常在H链及L链的CDR1～3的各区域的N末端及C末端连接有框架区(FR)。作为所述FR中的H链FR，可列举：连接于H链CDR1的N末端的H链FR1、连接于H链CDR1的C末端(H链CDR2的N末端)的H链FR2、连接于H链CDR2的C末端(H链CDR3的N末端)的H链FR3、连接于H链CDR3的C末端的H链FR4。另外，作为上述FR中的L链FR，可列举：连接于L链CDR1的N末端的L链FR1、连接于L链CDR1的C末端(L链CDR2的N末端)的L链FR2、连接于L链CDR2的C末端(L链CDR3的N末端)的L链FR3、连接于L链CDR3的C末端的L链FR4。
作为上述H链FR1，具体可列举：(1-HFR1)由序列号7所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-HFR1)由序列号17所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-HFR1)由序列号27所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-HFR1)由序列号37所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-HFR1)由序列号47所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-HFR1)由序列号57所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-HFR1)由序列号67所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-HFR1)由序列号77所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-HFR1)由序列号87所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-HFR1)由序列号97所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-HFR1)由序列号107所示的氨基酸序列的第1～30位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述H链FR2，具体可列举：(1-HFR2)由序列号7所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-HFR2)由序列号17所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-HFR2)由序列号27所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-HFR2)由序列号37所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-HFR2)由序列号47所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-HFR2)由序列号57所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-HFR2)由序列号67所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-HFR2)由序列号77所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-HFR2)由序列号87所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-HFR2)由序列号97所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-HFR2)由序列号107所示的氨基酸序列的第36～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述H链FR3，具体可列举：(1-HFR3)由序列号7所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-HFR3)由序列号17所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-HFR3)由序列号27所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-HFR3)由序列号37所示的氨基酸序列的第67～99位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-HFR3)由序列号47所示的氨基酸序列的第67～99位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-HFR3)由序列号57所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-HFR3)由序列号67所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-HFR3)由序列号77所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-HFR3)由序列号87所示的氨基酸序列的第67～99位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-HFR3)由序列号97所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-HFR3)由序列号107所示的氨基酸序列的第67～98位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述H链FR4，具体可列举：(1-HFR4)由序列号7所示的氨基酸序列的第109～118位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-HFR4)由序列号17所示的氨基酸序列的第108～117位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-HFR4)由序列号27所示的氨基酸序列的第106～115位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-HFR4)由序列号37所示的氨基酸序列的第111～120位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-HFR4)由序列号47所示的氨基酸序列的第108～117位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-HFR4)由序列号57所示的氨基酸序列的第107～116位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-HFR4)由序列号67所示的氨基酸序列的第106～115位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-HFR4)由序列号77所示的氨基酸序列的第106～115位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-HFR4)由序列号87所示的氨基酸序列的第111～120位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-HFR4)由序列号97所示的氨基酸序列的第110～119位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-HFR4)由序列号107所示的氨基酸序列的第109～118位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述L链FR1，具体可列举：(1-LFR1)由序列号8所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-LFR1)由序列号18所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-LFR1)由序列号28所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-LFR1)由序列号38所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-LFR1)由序列号48所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-LFR1)由序列号58所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-LFR1)由序列号68所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-LFR1)由序列号78所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-LFR1)由序列号88所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-LFR1)由序列号98所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-LFR1)由序列号108所示的氨基酸序列的第1～23位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述L链FR2，具体可列举：(1-LFR2)由序列号8所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-LFR2)由序列号18所示的氨基酸序列的第40～54位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-LFR2)由序列号28所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-LFR2)由序列号38所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-LFR2)由序列号48所示的氨基酸序列的第41～55位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-LFR2)由序列号58所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-LFR2)由序列号68所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-LFR2)由序列号78所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-LFR2)由序列号88所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-LFR2)由序列号98所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-LFR2)由序列号108所示的氨基酸序列的第35～49位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述L链FR3，具体可列举：(1-LFR3)由序列号8所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-LFR3)由序列号18所示的氨基酸序列的第62～93位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-LFR3)由序列号28所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-LFR3)由序列号38所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-LFR3)由序列号48所示的氨基酸序列的第63～94位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-LFR3)由序列号58所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-LFR3)由序列号68所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-LFR3)由序列号78所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-LFR3)由序列号88所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-LFR3)由序列号98所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-LFR3)由序列号108所示的氨基酸序列的第57～88位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为上述L链FR4，具体可列举：(1-LFR4)由序列号8所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(2-LFR4)由序列号18所示的氨基酸序列的第103～113位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(3-LFR4)由序列号28所示的氨基酸序列的第97～107位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(4-LFR4)由序列号38所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(5-LFR4)由序列号48所示的氨基酸序列的第104～114位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(6-LFR4)由序列号58所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(7-LFR4)由序列号68所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(8-LFR4)由序列号78所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(9-LFR4)由序列号88所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；(10-LFR4)由序列号98所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽；或者(11-LFR4)由序列号108所示的氨基酸序列的第98～108位的氨基酸残基构成的多肽、或由与该多肽的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的多肽。
作为本申请抗体的FR，优选为已知的人抗体的FR。作为所述“已知的人抗体的FR”，可列举例如GenBank等公知的序列数据库中所登录的人抗体的FR、选自来自人抗体的各亚群的共有序列(Human Most Homologous Consensus Sequence；Kabat,E.A.等人的Sequences of Proteins of Immunological Interest,US Dept.Health and HumanServices,1991)的FR等。
本申请抗体中的H链CDR1通常在基于kabat的编号(参照文献“kabat,E.A.et al.,(1991)NIH Publication No.91-3242,sequences of proteins of immunologicalinterest”)中存在于H31～35的位置。另外，本申请抗体中的H链CDR2通常在基于kabat的编号中存在于H50～52、H52A及H53～65的位置。另外，本申请抗体中的H链CDR3通常在基于kabat的编号中存在于H95～100、H100A、H100B、H101及H102的位置。另外，本申请抗体中的L链CDR1通常在基于kabat的编号中存在于L24～34的位置。另外，本申请抗体中的L链CDR2通常在基于kabat的编号中存在于L50～56的位置。另外，本申请抗体中的L链CDR3通常在基于kabat的编号中存在于L89～97的位置。
作为本申请抗体中的、含有上述(1-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(1-2)的H链及L链的可变(V)区的抗体，具体可列举：上述(1-3)的单链抗体；上述(1-3’-1)的单链抗体、上述(1-3’-2)的单链抗体及上述(1-3’-3)的单链抗体；含有上述(1-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(2-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(2-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(2-3)的单链抗体；上述(2-3’-1)的单链抗体、上述(2-3’-2)的单链抗体、上述(2-3’-3)的单链抗体及上述(2-3’-4)的单链抗体；含有上述(2-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(3-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(3-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(3-3)的单链抗体；含有上述(3-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(4-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(4-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(4-3)的单链抗体；含有上述(4-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(5-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(5-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(5-3)的单链抗体；含有上述(5-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(6-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(6-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(6-3)的单链抗体；含有上述(6-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(7-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(7-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(7-3)的单链抗体；含有上述(7-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(8-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(8-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(8-3)的单链抗体；含有上述(8-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(9-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(9-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(9-3)的单链抗体；含有上述(9-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(10-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(10-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(10-3)的单链抗体；含有上述(10-4)的H链及L链的抗体。另外，作为含有上述(11-1)的H链及L链的CDR1～3的抗体，可列举含有上述(11-2)的H链及L链的V区的抗体，具体可列举：上述(11-3)的单链抗体；含有上述(11-4)的H链及L链的抗体。需要说明的是，单链抗体中的重链可变区及轻链可变区通常借助肽接头而结合。
作为本申请CAR，只要含有本申请单链抗体、融合于本申请单链抗体的C末端的跨膜区和融合于所述跨膜区的C末端的免疫活性细胞活化信号转导区即可，在此，本申请单链抗体与跨膜区之间、以及跨膜区与免疫活性细胞活化信号转导区之间可以借助肽接头或IgG4铰链区而融合。
作为本申请抗体中的肽接头的长度，可列举例如1～100个氨基酸残基、优选10～50个氨基酸残基。另外，作为本申请抗体中的肽接头，具体可列举3个由1～4个甘氨酸和1个丝氨酸构成的氨基酸序列连续地连接而形成的接头。
作为上述跨膜区，只要是能够贯穿细胞膜的肽即可，可列举例如来自CD8、T细胞受体的α、β链、CD3ζ、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、ICOS、CD154、EGFR(epidermal growth factor receptor，表皮生长因子受体)或GITR的跨膜区，具体可列举由序列号185所示的氨基酸序列的第1～83位的氨基酸残基构成的人CD8跨膜区。另外，作为上述跨膜区，也可以是能够贯穿细胞膜的肽的C末端侧的1～10个氨基酸残基、优选6～7个氨基酸残基被去除后的肽，可列举例如：由序列号186所示的氨基酸序列的第1～77位的氨基酸残基构成的上述人CD8跨膜区的改造体1、由序列号187所示的氨基酸序列的第1～76位的氨基酸残基构成的上述人CD8跨膜区的改造体2。
作为上述免疫活性细胞活化信号转导区，只要是本申请单链抗体结合到人GPC3上时能够向免疫活性细胞内进行信号转导的区域即可，优选含有选自CD28、4-1BB(CD137)、GITR、CD27，OX40、HVEM、CD3ζ、Fc受体相关γ链(Fc Receptor-associated γ chain)的胞内区的多肽中的至少一种或两种以上，更优选含有CD28、4-1BB及CD3ζ的胞内区的多肽这3种。作为所述CD28的胞内区的多肽，具体可列举由序列号185所示的氨基酸序列的第85～124位的氨基酸残基构成的人CD28的胞内区的多肽。另外，作为上述“4-1BB的胞内区的多肽”，具体可列举由序列号185所示的氨基酸序列的第125～170位的氨基酸残基构成的人4-1BB的胞内区的多肽。另外，作为上述CD3ζ的胞内区的多肽，具体可列举由序列号185所示的氨基酸序列的第172～283位的氨基酸残基构成的人CD3ζ的胞内区的多肽。
需要说明的是，序列号185所示的氨基酸序列的第84位的精氨酸(Arg)、序列号186所示的氨基酸序列的第78位的精氨酸、序列号187所示的氨基酸序列的第77位的精氨酸为上述来自人CD8的跨膜区的多肽与上述人CD28的胞内区的多肽的共有序列。另外，序列号185所示的氨基酸序列的第171位的亮氨酸(Leu)、序列号186所示的氨基酸序列的第165位的亮氨酸、序列号187所示的氨基酸序列的第164位的亮氨酸为上述人4-1BB的胞内区的多肽与上述人CD3ζ的胞内区的多肽的共有序列。
本说明书中，“免疫活性细胞”是指在生物体内担负免疫功能的细胞。作为免疫活性细胞，可列举例如：T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)、B细胞等淋巴细胞类细胞；单核细胞、巨噬细胞、树突细胞等抗原呈递细胞；嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞等粒细胞。具体而言，优选列举来自人、狗、猫、猪、小鼠等哺乳动物的T细胞，优选为来自人的T细胞。另外，T细胞可以由血液、骨髓液等体液以及脾脏、胸腺、淋巴结等组织、或者浸润到原发肿瘤、转移肿瘤、癌性腹水等癌组织的免疫活性细胞中分离、纯化而得到，还可以利用由ES细胞、iPS细胞制作的T细胞。作为所述T细胞，可列举α-βT细胞、γ-δT细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、肿瘤浸润T细胞、记忆T细胞、初始T细胞、NKT细胞。需要说明的是，免疫活性细胞的来源和给药对象可以相同也可以不同。进而，当给药对象为人时，作为免疫活性细胞，可以使用采自作为给药对象的患者本人的自体细胞，也可以使用采自他人的异体细胞。即，供体与受体可以一致也可以不一致，优选一致。
作为上述给药对象，可优选列举哺乳动物或哺乳动物细胞，所述哺乳动物中，可更优选列举人、小鼠、狗、大鼠、豚鼠、兔、鸟、绵羊、猪、牛、马、猫、猴、黑猩猩，可特别优选列举人。
本申请CAR优选用于在癌症治疗中在采自癌症患者的免疫活性细胞的细胞表面上进行离体表达。在使用T细胞作为免疫活性细胞的情况下，作为由本申请CAR中的跨膜区和融合于所述跨膜区的C末端的免疫活性细胞活化信号转导区构成的肽，具体可列举由序列号185～187中的任一者所示的氨基酸序列构成的肽。另外，作为本申请CAR，具体可列举：包含选自由上述(1-3)的单链抗体、上述(2-3)的单链抗体、上述(1-3’-1)的单链抗体、上述(1-3’-2)的单链抗体、上述(1-3’-3)的单链抗体、上述(2-3’-1)的单链抗体、上述(2-3’-2)的单链抗体、上述(2-3’-3)的单链抗体和上述(2-3’-4)的单链抗体组成的组中的单链抗体、以及融合于所述单链抗体的C末端的由序列号185～187中的任一者所示的氨基酸序列构成的肽的CAR。
即，作为上述本申请CAR，可列举：
含有上述(1-3)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-1)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-1)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-1)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-2)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-2)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-2)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-3)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-3)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(1-3’-3)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-1)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-1)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-1)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-2)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-2)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-2)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-3)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-3)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-3)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-4)的单链抗体和由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-4)的单链抗体和由序列号186所示的氨基酸序列构成的肽的CAR；
含有上述(2-3’-4)的单链抗体和由序列号187所示的氨基酸序列构成的肽的CAR。
作为本申请免疫活性细胞，只要是表达CAR的免疫活性细胞即可，由于CAR通常在天然条件下不存在，因此是表达外源性、而非内源性的CAR的免疫活性细胞。作为本申请免疫活性细胞，优选还表达IL-7和/或CCL19。在免疫活性细胞为未见IL-7和/或CCL19的表达的细胞、例如T细胞的情况下或者免疫活性细胞为T细胞以外的IL-7和/或CCL19的表达低的细胞的情况下，作为本申请免疫活性细胞，优选为表达外源性的IL-7和/或CCL19的免疫活性细胞。
本申请免疫活性细胞可以通过将含有本申请CAR基因的本申请载体、含有IL-7和/或CCL19基因的载体导入到免疫活性细胞中来制作。作为导入方法，只要是向哺乳动物细胞中导入DNA的方法即可，可列举例如电穿孔法(Cytotechnology,3,133(1990))、磷酸钙法(日本特开平2-227075号公报)、脂质体转染法(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,84,7413(1987))、病毒感染法等方法。作为所述病毒感染法，可列举下述方法：将CAR表达载体(国际公开2016/056228号小册子)和包装质粒转染于GP2-293细胞(宝生物公司制)、Plat-GP细胞(Cosmo Bio公司制)、PG13细胞(ATCC CRL-10686)、PA317细胞(ATCC CRL-9078)等包装细胞而制作重组病毒，使所述重组病毒感染于T细胞。
另外，本申请免疫活性细胞也可以通过将编码本申请CAR的核苷酸、编码IL-7和/或CCL19的核苷酸用公知的基因编辑技术按照能够在适当的启动子的控制下表达的方式整合到细胞的基因组中来制造。作为公知的基因编辑技术，可列举使用锌指核酸酶、TALEN(转录激活因子样效应物核酸酶)、CRISPR(Clustered Regularly Interspaced ShortPalindromic Repeat，成簇的规律间隔的短回文重复序列)-Cas系统等核酸内切酶的技术。
本申请免疫活性细胞可以与其它抗癌剂组合使用。作为其它抗癌剂，可列举：环磷酰胺、苯达莫司汀、异环磷酰胺、达卡巴嗪等烷基化药；喷司他丁、氟达拉滨、克拉屈滨、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、依诺他滨等代谢拮抗药；利妥昔单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗等分子靶向药；伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、达沙替尼、舒尼替尼、曲美替尼等激酶抑制剂；硼替佐米等蛋白酶体抑制剂；环孢菌素、他克莫司等钙调神经磷酸酶抑制药；伊达比星、多柔比星、丝裂霉素C等抗癌性抗生素；伊立替康、依托泊苷等植物生物碱；顺铂、奥沙利铂、卡铂等铂制剂；他莫昔芬、比卡鲁胺等激素疗法药；干扰素、纳武单抗、派姆单抗等免疫控制药。
作为上述“将本申请免疫活性细胞与其它抗癌剂组合使用”的方法，可列举：使用其它抗癌剂进行处理，然后使用本申请免疫活性细胞的方法；同时使用本申请免疫活性细胞和其它抗癌剂的方法；使用本申请免疫活性细胞进行处理，然后使用其它抗癌剂的方法。另外，在将本申请免疫活性细胞与其它抗癌剂组合使用时，癌的治疗效果进一步提高并且减少各自的给药次数或给药量，由此，能够进一步降低单独使用所带来的副作用。
作为本申请抗体基因，只要为编码本申请抗体的抗体基因(核苷酸)则没有特别限制，可列举例如：
(1-1D)含有：由序列号111所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(1-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号111所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(1-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号111所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～324位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(1-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号112所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(1-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号112所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(1-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号112所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(1-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(2-1D)含有：由序列号115所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(2-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号115所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(2-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号115所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～321位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(2-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号116所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～117位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(2-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号116所示的核苷酸序列构成的L链V区的第163～183位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(2-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号116所示的核苷酸序列构成的L链V区的第280～306位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(2-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(3-1D)含有：由序列号119所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(3-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号119所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(3-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号119所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～315位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(3-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号120所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(3-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号120所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(3-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号120所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～288位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(3-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(4-1D)含有：由序列号123所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(4-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号123所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(4-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号123所示的核苷酸序列构成的H链V区的第298～330位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(4-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号124所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(4-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号124所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(4-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号124所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(4-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(5-1D)含有：由序列号127所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(5-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号127所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(5-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号127所示的核苷酸序列构成的H链V区的第298～321位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(5-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号128所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～120位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(5-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号128所示的核苷酸序列构成的L链V区的第166～186位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(5-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号128所示的核苷酸序列构成的L链V区的第283～309位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(5-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(6-1D)含有：由序列号131所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(6-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号131所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(6-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号131所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～318位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(6-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号132所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(6-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号132所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(6-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号132所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(6-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(7-1D)含有：由序列号135所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(7-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号135所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(7-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号135所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～315位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(7-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号136所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(7-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号136所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(7-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号136所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(7-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(8-1D)含有：由序列号139所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(8-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号139所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(8-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号139所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～315位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(8-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号140所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(8-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号140所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(8-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号140所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(8-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(9-1D)含有：由序列号143所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(9-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号143所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(9-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号143所示的核苷酸序列构成的H链V区的第298～330位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(9-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号144所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(9-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号144所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(9-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号144所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(9-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(10-1D)含有：由序列号147所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(10-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号147所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(10-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号147所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～327位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(10-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体；和
由序列号148所示的核苷酸序列构成的L链V区的第70～102位的核苷酸残基所构成的L链CDR1基因(编码上述(10-1)的L链CDR1的基因)、或该L链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号148所示的核苷酸序列构成的L链V区的第148～168位的核苷酸残基所构成的L链CDR2基因(编码上述(10-1)的L链CDR2的基因)、或该L链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号148所示的核苷酸序列构成的L链V区的第265～291位的核苷酸残基所构成的L链CDR3基因(编码上述(10-1)的L链CDR3的基因)、或该L链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因，
(11-1D)含有：由序列号151所示的核苷酸序列构成的H链V区的第91～105位的核苷酸残基所构成的H链CDR1基因(编码上述(11-1)的H链CDR1的基因)、或该H链CDR1基因的简并密码子改造体；由序列号151所示的核苷酸序列构成的H链V区的第148～198位的核苷酸残基所构成的H链CDR2基因(编码上述(11-1)的H链CDR2的基因)、或该H链CDR2基因的简并密码子改造体；及由序列号151所示的核苷酸序列构成的H链V区的第295～324位的核苷酸残基所构成的H链CDR3基因(编码上述(11-1)的H链CDR3的基因)、或该H链CDR3基因的简并密码子改造体的抗体基因。
进而，作为本申请抗体基因，可列举：
(1-2D)含有：由与序列号111所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号7所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号112所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号8所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(2-2D)含有：由与序列号115所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号17所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号116所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号18所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(3-2D)含有：由与序列号119所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号27所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号120所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号28所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(4-2D)含有：由与序列号123所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号37所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号124所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号38所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(5-2D)含有：由与序列号127所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号47所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号128所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号48所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(6-2D)含有：由与序列号131所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号57所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号132所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号58所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(7-2D)含有：由与序列号135所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号67所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号136所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号68所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(8-2D)含有：由与序列号139所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号77所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号140所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号78所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(9-2D)含有：由与序列号143所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号87所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号144所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号88所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(10-2D)含有：由与序列号147所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号97所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号148所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号98所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因；
(11-2D)含有：由与序列号151所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链可变区基因(编码由与序列号107所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链可变区的基因)、和由与序列号152所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链可变区基因(编码由与序列号108所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链可变区的基因)的抗体基因。
特别是，作为本申请抗体基因，具体可列举：
(1-4D)含有：由与序列号113所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号9所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号114所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号10所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(2-4D)含有：由与序列号117所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号19所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号118所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号20所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(3-4D)含有：由与序列号121所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号29所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号122所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号30所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(4-4D)含有：由与序列号125所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号39所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号126所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号40所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(5-4D)含有：由与序列号129所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号49所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号130所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号50所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(6-4D)含有：由与序列号133所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号59所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号134所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号60所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(7-4D)含有：由与序列号137所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号69所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号138所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号70所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(8-4D)含有：由与序列号141所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号79所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号142所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号80所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(9-4D)含有：由与序列号145所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号89所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号146所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号90所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(10-4D)含有：由与序列号149所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号99所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号150所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号100所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因；
(11-4D)含有：由与序列号153所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的H链基因(编码由与序列号109所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的H链的基因)、和由与序列号154所示的核苷酸序列具有至少80％以上的序列一致性的核苷酸序列构成的L链基因(编码由与序列号110所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的L链的基因)的抗体基因。
作为本申请CAR基因，只要是编码本申请CAR的基因(核苷酸)则没有特别限制，具体可列举例如：
(1-3D)含有编码上述(1-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(2-3D)含有编码上述(2-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(3-3D)含有编码上述(3-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(4-3D)含有编码上述(4-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(5-3D)含有编码上述(5-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(6-3D)含有编码上述(6-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(7-3D)含有编码上述(7-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(8-3D)含有编码上述(8-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(9-3D)含有编码上述(9-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(10-3D)含有编码上述(10-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(11-3D)含有编码上述(11-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(1-3’-1D)含有编码上述(1-3’-1)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(1-3’-2D)含有编码上述(1-3’-2)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(1-3’-3D)含有编码上述(1-3’-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(2-3’-1D)含有编码上述(2-3’-1)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(2-3’-2D)含有编码上述(2-3’-2)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(2-3’-3D)含有编码上述(2-3’-3)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因；
(2-3’-4D)含有编码上述(2-3’-4)的单链抗体的基因、或该基因的简并密码子改造体的CAR基因。
本说明书中，“至少80％以上的一致性”是指一致性为80％以上，是指优选为85％以上、更优选为88％以上、进一步优选为90％以上、进一步更优选为93％以上、特别是优选为95％以上、特别是更优选为98％以上、最优选为100％的一致性。
本说明书中，术语“一致性”是指多肽或多核苷酸序列近似性的程度(其由查询序列与其它序列、优选同一类型的序列(核酸或者蛋白质序列)的匹配来决定)。作为计算或确定“一致性”的优选的计算机程序法，可列举GCG BLAST(Basic Local Alignment SearchTool)(Altschul et al.,J.Mol.Biol.1990,215:403-410；Altschul et al.,NucleicAcids Res.1997,25:3389-3402；Devereux et al.,Nucleic Acid Res.1984,12:387)、以及BLASTN 2.0(Gish W.,http://blast.wustl.edu,1996-2002)、以及FASTA(Pearson及Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1988,85:2444-2448)、以及确定并比对最长重复的一对重叠群的GCG GelMerge(Wibur及Lipman,SIAM J.Appl.Math.1984,44:557-567；Needleman及Wunsch,J.Mol.Biol.1970,48:443-453)，但不限于这些。
本说明书中，“与序列号X所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列”换句话说是“在序列号X所示的氨基酸序列中缺失、置换、插入和/或添加0、1或者数个氨基酸残基而成的氨基酸序列”且与序列号X所示的氨基酸具有同等功能。在此，“缺失、置换、插入和/或添加1或者数个氨基酸残基而成的氨基酸序列”是指：缺失、置换、插入和/或添加例如1～30个的范围内、优选为1～20个的范围内、更优选为1～15个的范围内、进一步优选为1～10个的范围内、进一步优选为1～5个的范围内、进一步优选为1～3个的范围内、进一步优选为1～2个的范围内的数量的氨基酸残基而成的氨基酸序列。这些氨基酸残基的突变处理可以通过化学合成、基因工程方法、诱变等本领域技术人员已知的任意方法来进行。
作为本申请载体中的启动子，只要是使位于启动子下游的本申请抗体基因所编码的mRNA的转录开始的区域即可，启动子中通常含有转录起始点(TSS)。
本申请载体中的启动子、载体的种类可根据所导入的宿主细胞(或宿主生物)的种类适宜选择。
作为宿主细胞，只要是使本申请抗体基因被转录从而表达本申请抗体、或使本申请CAR基因的mRNA被转录从而表达本申请CAR的宿主细胞即可，在导入“含有本申请抗体基因的载体”作为本申请载体的情况下，可以使用以下的酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞或植物细胞作为宿主细胞，在导入“含有本申请CAR基因的载体”作为本申请载体的情况下，可以使用上述免疫活性细胞作为宿主细胞。
在使用酵母(例如酿酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces Pombe)等)作为宿主细胞的情况下，作为本申请载体，可列举例如YEP13(ATCC37115)、YEp24(ATCC37051)、YCp50(ATCC37419)等载体或来自所述载体的载体，作为启动子，可列举例如己糖激酶等糖酵解基因的启动子、PHO5启动子、PGK启动子、GAP启动子、ADH启动子、gal1启动子、gal10启动子、热休克蛋白启动子、MFα1启动子、CUP1启动子等。
另外，在使用哺乳动物细胞(例如来自人的那马瓦(Namalwa)细胞、来自猴的COS细胞、来自中国仓鼠卵巢的CHO细胞、来自人或小鼠等的T细胞等)作为宿主细胞且本申请载体为含有抗体基因的载体时，作为本申请载体，可列举例如pcDNAI、pcDM8(Funakoshi公司制)、pAGE107(日本特开平3-22979号公报；Cytotechnology,3,133,(1990))、pAS3-3(日本特开平2-227075号公报)、pCDM8(Nature,329,840,(1987))、pcDNAI/Amp(Invitrogen公司制)、pREP4(Invitrogen公司制)、pAGE103(J.Biochemistry,101,1307(1987))、pAGE210等载体或来自所述载体的载体。另一方面，在使用哺乳动物细胞(例如来自人的上述免疫活性细胞等)作为宿主细胞且本申请载体为含有CAR基因的载体时，作为本申请载体，可列举例如pMSGV载体(Tamada k et al.,Clin Cancer Res 18:6436-6445(2002))、pMSCV载体(宝生物公司制)等逆转录病毒载体或来自所述载体的载体。
作为本申请载体中的启动子，可列举例如巨细胞病毒(CMV)的IE(immediateearly，即刻早期)基因的启动子、SV40的初始启动子、逆转录病毒的启动子、金属硫蛋白启动子、热休克启动子、SRα启动子、NFAT启动子、HIF启动子等。
另外，在使用昆虫细胞(例如作为草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)的卵巢细胞的Sf9细胞、Sf21细胞、作为粉纹夜蛾(Trichoplusiani)的卵巢细胞的High5细胞等)作为宿主细胞的情况下，作为本申请载体，可列举例如重组杆状病毒制作法中使用的转移载体，具体而言，可列举pVL1392、pVL1393、pBlueBacIII(均为Invitorogen公司制)等载体或来自所述载体的载体，作为启动子，可以列举例如多角体蛋白启动子、p10启动子等。
另外，在使用植物细胞(例如烟草、马铃薯、番茄、胡萝卜、大豆、油菜籽、苜蓿、水稻、小麦、大麦等)作为宿主细胞时，作为表达载体，可列举例如Ti质粒、烟草花叶病毒载体等载体或来自所述载体的载体，作为启动子，可列举例如花椰菜花叶病毒病毒(CaMV)的35S启动子、水稻肌动蛋白1启动子等。
作为本申请载体，可以为了进一步提高基因表达效率而优选进一步包含增强子区域、核糖体结合区域(RBS；ribosome binding site)的碱基序列，可以为了筛选本申请宿主细胞而优选含有与宿主细胞的种类相应的药剂抗性基因(例如壮观霉素抗性基因、氯霉素抗性基因、四环素抗性基因、卡那霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、嘌呤霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素抗性基因、遗传霉素抗性基因等)。增强子区域通常配置在启动子的上游，RBS通常配置在启动子与本申请基因之间。整合到本申请载体中的本申请抗体基因的核苷酸序列可以配合进行表达的宿主细胞来进行密码子序列的优化。本申请载体可以利用基因重组技术通过公知的方法制作。
本申请宿主细胞可以通过将本申请载体利用与宿主细胞的种类相应的方法导入(转染)到宿主细胞中来得到。
在使用上述酵母作为宿主细胞的情况下，作为本申请载体向酵母中导入的方法，只要是将DNA导入到酵母中的方法即可，可列举例如电穿孔法(Methods.Enzymol.,194,182(1990))、原生质球法(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,84,1929(1978))、乙酸锂法(J.Bacteriology,153,163(1983))等方法。
另外，在使用上述哺乳动物细胞作为宿主细胞的情况下，作为本申请载体向哺乳动物细胞中导入的方法，只要是将DNA导入到哺乳动物细胞中的方法即可，如上所述，可列举例如电穿孔法(Cytotechnology,3,133(1990))、磷酸钙法(日本特开平2-227075号公报)、脂质体转染法(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,84,7413(1987))、病毒感染法等方法。作为所述病毒感染法，如上所述，可列举将CAR表达载体(国际公开2016/056228号小册子)和包装质粒转染到GP2-293细胞(宝生物公司制)、Plat-GP细胞(Cosmo Bio公司制)、PG13细胞(ATCCCRL-10686)、PA317细胞(ATCCCRL-9078)等包装细胞中而制作重组病毒、并且使所述重组病毒感染于T细胞的方法。
另外，在使用上述昆虫细胞作为宿主细胞的情况下，作为本申请载体向昆虫细胞中导入的方法，可列举例如：按照“Current Protocols in Molecular Biology”、“Baculovirus Expression Vectors，A Laboratory Manual，W.H.Freeman and Company，New York(1992)”、“Bio/Technology,6,47(1988)”等中记载的方法将本申请载体(转移载体)和来自杆状病毒的基因组DNA共转染到上述昆虫细胞中而制作重组杆状病毒的方法。作为所述共转染的方法，可列举例如磷酸钙法(日本特开平2-227075号公报)、脂质体转染法(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,84,7413(1987)等方法。
另外，在使用上述植物细胞作为宿主细胞的情况下，作为本申请载体向植物细胞中导入的方法，可列举例如：使用农杆菌(Agrobacterium)的方法(日本特开昭59-140885号公报、日本特开昭60-70080号公报)、电穿孔法(日本特开昭60-251887号公报)、使用粒子枪(基因枪)的方法(日本专利第2606856号公报、日本专利第2517813号公报)等方法。
本申请抗体可以通过将由上述方法得到的本申请宿主细胞在与宿主细胞相应的培养液中进行培养而得到。
另外，也可以使用转基因动物制作技术制作整合有本申请抗体基因(本申请载体)的小鼠、牛、山羊、绵羊、鸡、猪等转基因动物，由所述转基因动物的血液、乳汁等中大量产生来自本申请抗体基因的抗体。
进一步地，对非人动物(例如小鼠、大鼠)免疫含有由序列号155所示的氨基酸序列构成的来源于人的GPC3多肽的物质(GPC3多肽抗原)，通过噬菌体展示法制作scFv基因的噬菌体文库，通过使用所述GPC3多肽抗原和/或表达所述GPC3多肽抗原的细胞株(优选为不表达内源性GPC3的细胞株)、并且优选进一步使用作为竞争物的由序列号159所示的氨基酸序列构成的GPC3的C末端侧多肽的生物淘选(Biopanning)法，可以得到本申请scFv。另外，还可以由用上述抗原免疫后的非人动物使用细胞融合技术制备产生抗体的杂交瘤，利用使用固定有上述抗原的板的ELISA法进行筛选，从而得到含有本申请抗体的培养上清。可以由所述培养上清使用公知的抗体纯化技术来分离、纯化本申请抗体。
作为本申请检测方法，只要是具备使用本申请抗体检测试样(例如血液、组织、尿等)中的局部存在于细胞膜的(锚定于细胞膜的)GPC3的步骤的方法即可，作为具体的检测方法，可列举使用本申请抗体的免疫荧光染色法、蛋白质印迹法、ELISA等。
作为本申请检测用试剂盒，为限定于“用于检测GPC3”的用途的、含有本申请抗体或其标记物的试剂盒，所述试剂盒中，通常含有这种试剂盒中通常使用的成分、例如载体、pH缓冲剂、稳定剂以及操作说明书、用于检测GPC3的说明书等附属资料。
在本申请检测方法、本申请检测用试剂盒中，检测对象的GPC3的生物种可以是小鼠、大鼠等非人动物，但通常为人。
作为上述本申请抗体的标记物中的标记物质，可列举例如过氧化物酶(例如、辣根过氧化物酶[HRP])、碱性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、醇脱氢酶、苹果酸脱氢酶、青霉素酶、过氧化氢酶、apo-葡萄糖氧化酶、脲酶、荧光素酶或乙酰胆碱酯酶等酶；异硫氰酸荧光素、藻胆蛋白、稀土金属螯合物、丹磺酰氯或四甲基罗丹明异硫氰酸酯等荧光物质；绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein；GFP)、青色荧光蛋白(Cyan Fluorescence Protein；CFP)、蓝色荧光蛋白(Blue Fluorescence Protein；BFP)、黄色荧光蛋白(Yellow Fluorescence Protein；YFP)、红色荧光蛋白(RedFluorescence Protein；RFP)、荧光素酶(luciferase)等荧光蛋白；3H、14C、125I或者131I等放射性同位素；生物素；亲和素；或化学发光物质。
本说明书中所引用的学术文献、专利、专利申请等参考文献以其整体与分别具体地记载的内容相同的程度作为参考引入本说明书中。另外，本申请基于日本专利申请2017-001732号(2017年1月10日提交)主张优先权，其内容整体作为参考引入本说明书中。
以下，通过实施例更具体地说明本发明，但本发明的技术范围不限于这些例示。
实施例1
1.识别人GPC3的N末端侧多肽的新型抗GPC3抗体的制备
[概要]
作为用于制备抗人GPC3抗体的免疫动物，使用SKG/Jcl小鼠，作为所免疫的抗原，使用全长人GPC3蛋白。SKG/Jcl小鼠是自然罹患类风湿性关节炎的自身免疫疾病模型小鼠，已知会由于年龄增加、饲养环境而对自体成分也作出抗体产生应答。另一方面，GPC3在人和小鼠之间同源性高，通常即使对正常小鼠进行免疫也不易引起抗体产生，因此使用SKG/Jcl小鼠作为免疫动物。由免疫GPC3后的小鼠的B细胞来源的cDNA制作scFv噬菌体文库，应用噬菌体展示法来分离出抗人GPC3抗体。
免疫后的小鼠的抗血清中含有多种抗体，但需要除去产生对GPC3的特异性低的抗体、识别GPC3的C末端侧多肽的抗体的小鼠而选择产生对GPC3的N末端侧多肽具有特异性的抗体的小鼠。因此，使用ELISA和FCM来选择显示产生与GPC3的N末端侧多肽特异性结合的抗体的小鼠个体。具体而言，由来自免疫小鼠的B细胞的总RNA通过逆转录反应合成cDNA，扩增抗体基因而制作抗体基因文库。由抗体基因文库构建scFv噬菌体文库，使其感染于大肠杆菌并表达scFv，对于所得到的噬菌体文库，进行使用重组GPC3、GPC3表达细胞株及GPC3的C末端侧多肽的生物淘选，由此将表达目的scFv、即针对GPC3的N末端侧多肽的抗体的噬菌体富集。进而，对于所得到的scFv，为了分析对细胞中的GPC3、即借助GPI(Glycosylphosphatidylinositol，糖基磷脂酰肌醇)锚局部存在于(结合于)细胞膜的GPC3(膜型GPC3)的结合特异性，使用基于细胞的-ELISA、FCM进行了验证。另外，对具有结合特异性的克隆的H链可变区及L链可变区的核苷酸序列进行了测序，基于所述序列确定来自免疫小鼠的B细胞所产生的抗GPC3抗体的核苷酸序列。最后使用使GPC3的N末端侧多肽片段及C末端侧多肽片段在细胞表面表达的哺乳动物展示法，确认scFv的表位为GPC3的N末端侧多肽片段。以下示出详细的方法及结果。
1-1材料和方法
[细胞培养]
使用JHH7细胞株、HepG2细胞株及强制表达人GPC3全长的SK-Hep-1细胞株(以下有时记作“GPC3表达细胞株”)作为人GPC3表达细胞来进行抗GPC3抗体的生物淘选及筛选。JHH7细胞株为来自肝细胞癌的GPC3表达细胞株，在该细胞中稳定地表达着借助GPI(Glycosylphosphatidylinositol，糖基磷脂酰肌醇)锚与细胞膜结合的GPC3(膜型GPC3)。另一方面，HepG2细胞株与JHH7细胞株同样为来自肝细胞癌的GPC3表达细胞株，但是，其为与膜型GPC3相比、不与细胞膜结合的分泌型GPC3的表达占优势的细胞株。另外，Sk-Hep-1细胞株是未表达GPC3的来自肝细胞癌的细胞株。因此，可以通过强制表达制作仅表达膜型的全长GPC3、或表达部分外显子缺损的部分长度的膜型GPC3的细胞株。
4种细胞株(JHH7细胞株、HepG2细胞株、GPC3表达细胞株及来自人胚胎肾上皮的293T细胞株)的培养在含有10％FBS(Gibco公司制)及1％青霉素-链霉素(Gibco公司制)的DMEM培养液(Sigma-Aldrich公司制)(以下简称为“DMEM培养液”)中在37℃、5％CO2条件下进行。另外，CHO-K1细胞株的培养在含有10％FBS(Gibco公司制)的Ham's F12培养液(Sigma-Aldrich公司制)中在37℃、5％CO2条件下进行。
[免疫抗原]
将C末端添加有6×His标签的重组GPC3(R&D systems公司制)用PBS调整为0.1mg/mL，与人工佐剂TiterMax Gold(TiterMax公司制)或CFA(Freund's Adjuvant Complete，弗氏完全佐剂)(F5881、Sigma-Aldrich公司制)等量混合，制作乳液，将其作为初次免疫抗原使用。第二次以后的免疫抗原使用将重组GPC3用PBS以10～100μg/mL进行浓度调整后的液体。
[GPC3表达细胞株的制作]
将编码由序列号157所示的氨基酸序列构成的全长人GPC3的基因(由序列号160所示的核苷酸序列构成的全长人GPC3基因)插入至pcDNA3.1载体(ThermoFisher Scientific公司制)中，制作GPC3表达载体。将GPC3表达载体按照常规方法转染到SK-Hep-1细胞株中，然后，在含有G418(Roche diagnostics公司制)的DMEM培养液中培养，由此建立稳定表达GPC3全长的SK-Hep-1细胞株(GPC3表达细胞株)。
[小鼠的免疫]
将SKG/jcl小鼠(CLEA Japan，8周龄，雌性，SPF)作为免疫动物，对足垫每周一次免疫重组GPC3，合计免疫4次。从免疫开始起第5周进行采血，按照常规方法制备血清，作为抗体滴度确认用样本。
[使用ELISA的抗血清的血清抗体滴度]
为了确认免疫后的小鼠中的抗GPC3抗体产生应答，使用抗原固定化ELISA测定血清抗体滴度。将0.5或2μg/mL的重组GPC3以50μL/孔添加到96孔微孔板(Nunc公司制)中，在室温下温育1小时或在4℃下温育12小时。然后，以200μL/孔添加2％Block Ace(DS Pharma公司制)进行封闭处理。将来自GPC3免疫小鼠的血清用0.1％BlockAce/PBS溶液从100倍连续稀释至16500倍，以50μL/孔添加各稀释血清样品，在室温下温育2小时，进行抗原抗体反应处理。用含有Tween20的PBS(PBST)溶液洗涤孔后，添加2μg/mL的缀合有过氧化物酶的山羊抗小鼠IgG(Jackson ImmunoResearch laboratories公司制)，在室温下温育2小时，进行二次抗体反应处理。用PBST溶液洗涤孔5次后，除去水分，然后以50μL/孔添加TMB底物(Thermo Fisher Scientific公司制)，进行显色反应。15分钟后，以50μL/孔添加0.18M硫酸而使显色反应停止，然后，用酶标仪(Bio-Rad公司制)测定450nm和540nm的吸光度。使用由450nm的测定值减去540nm的测定值而得的校正值进行定量。
[使用FCM的抗血清中的抗体的特异性]
对于免疫后的小鼠，为了进一步确认抗血清对膜型GPC3的特异结合性，将100倍稀释的小鼠血清和5×105个细胞的GPC3表达细胞株混合，在冰上温育30分钟。加入FACS缓冲液(1％BSA/PBS溶液)进行离心处理，除去上清后，添加作为二次抗体的1μg/mL的山羊抗小鼠IgG(H+L)Alexa Fluor488(ThermoFisher Scientific公司制)100μL，在冰上温育30分钟，进行二次抗体反应处理。Alexa Fluor488的检测及荧光水平的测定使用流式细胞仪(FACSCanto)(BD Biosciences公司制)来进行。
[scFv噬菌体文库的制作]
对于通过上述[流式细胞仪]的项目中记载的方法而显示出产生了与膜型GPC3结合的抗体的小鼠，按照常规方法提取来自B细胞的总RNA，按照常规方法以总RNA为模板进行RT-PCR，从而制备cDNA。利用PCR扩增抗体H链及L链的可变区基因，将它们用柔性接头连接而形成scFv，将编码该scFv与纤维状噬菌体M13的衣壳蛋白g3p(cp3)的融合蛋白的核苷酸序列插入到pTZ19R噬菌粒载体的多克隆位点，从而制作scFv表达载体。scFv文库尺寸通过大肠杆菌DH12S株(Invitrogen公司制)的转化效率算出。使作为辅助噬菌体的M13KO7(Invitrogen公司制)感染于转化后的DH12S株，从而制作表达scFv的噬菌体文库。
[噬菌体scFv的生物淘选和克隆化]
使用借助6×His标签固定在Dynabeads His-Tag Isolation & Pulldown磁珠(VERITAS公司制)上的重组GPC3与GPC3表达细胞株的组合作为诱饵的噬菌体scFv的生物淘选按照文献“J Mol Biol.1991DeC5；222(3):581-97.”、“J Med Virol.2007Jun；79(6):852-62.”、“ProCNatl Acad Sci U S A.2008May 20；105(20):7287-92.”、“JOURNAL OFVIROLOGY,Apr.2004,p.3325-3332Vol.78,No.7”等中记载的方法来进行。在由5种系列(A～E系列)构成的生物淘选(参照图1)的各轮(步骤)中，对多克隆的噬菌体抗体的一部分进行取样，为了确认scFv的结合特异性，按照上述[使用ELISA的抗血清的血清抗体滴度]的项目中记载的方法(使用含有噬菌体的大肠杆菌的培养上清来代替血清的方法)进行抗原固定化ELISA，并且按照下述[利用基于细胞的ELISA进行的scFv的筛选]的项目中记载的方法进行基于细胞的ELISA。需要说明的是，在所述生物淘选的各步骤中，通过使作为现有的抗GPC3抗体的GC33(中外制药公司制)和GC199(中外制药公司制)预先与诱饵结合，由此，以使与和现有抗体所识别的GPC3的C末端表位相同的部分结合的scFv噬菌体不被选择的方式进行设计。即，通过该竞争法，能够选择性地淘选出与现有的抗GPC3抗体识别不同的GPC3表位的新型抗体。使通过生物淘选而富集的噬菌体转化至大肠杆菌DH12S，将其播种到LB琼脂糖琼脂培养基中，分离单一菌落。进而，在小规模LB液体培养基中培养大肠杆菌后，提取质粒并纯化。对纯化后的质粒进行DNA测序，确定scFv的H链及L链的可变区的核苷酸序列。
[利用FCM进行的scFv的筛选]
向GPC3表达细胞株(每一样品为5×105个)中加入分泌有scFv噬菌体的培养上清100μL，混合后，在冰上温育30分钟。加入FACS缓冲液(1％BSA/PBS溶液)进行离心洗涤后，加入1μg/mL的作为二次抗体的抗小鼠抗体-alexa488(Thermo Fisher Scientific公司制)，在冰上温育30分钟。然后，用流式细胞仪(FACSCanto、BD公司制)测定细胞的荧光染色。
[利用基于细胞的ELISA进行的scFv的筛选]
将每孔粘附有2×105个GPC3表达细胞的96孔微孔板中的DMEM培养液除去后，为了防止scFv对细胞、板的非特异性结合而加入2％BSA-PBS溶液，在冰上温育30分钟。然后，添加分泌有scFv噬菌体的大肠杆菌的培养上清100μL，在冰上温育45分钟后，以每孔100μL添加5μg/mL的针对融合于scFv的C末端侧的cp3的兔抗cp3抗体(MBL公司制)，进一步在冰上温育45分钟。以每孔100μL添加作为抗cp3抗体检测用的三次抗体的、5000倍稀释的HRP标记抗兔IgG抗体(MBL公司制)，在冰上温育45分钟后，添加作为HRP的底物的邻苯二胺(OPD)及过氧化氢，使其显色。利用从492nm的吸光度中减去作为背景的620nm下的吸光度而得的数值进行定量。需要说明的是，不使用scFv、而是使用已经转变为IgG型抗体的抗体实施基于细胞的ELISA时，上述条件中，作为该IgG型抗体的检测用的二次抗体，使用2000倍稀释的HRP标记抗小鼠IgG抗体(MBL公司制)来代替抗cp3抗体及HRP标记抗兔IgG抗体。
[scFv的可变区基因序列的确定]
对于与膜型GPC3结合的噬菌体scFv的可变区基因序列，使用作为通用引物的T7引物(由序列号176所示的核苷酸序列构成的引物)及cp3R引物(由序列号177所示的核苷酸序列构成的引物)分别作为H链V区(VH)解读用正向引物及L链V区(VL)解读用反向引物，利用测序仪(CEQ2000XL、Beckman Coulter公司制)进行解读。
[抗体表位作图中使用的细胞株的制作]
为了鉴定所克隆的scFv的表位，应用了哺乳动物展示法。将编码由人GPC3的外显子1～7构成的GPC3 N末端片段(由序列号155所示的氨基酸序列构成的多肽)的基因和编码由人GPC3的外显子8～9构成的GPC3 C末端片段(由序列号156所示的氨基酸序列构成的多肽)的基因用PCR扩增，插入到pDisplay表达载体(Thermo Fisher Scientific公司制)的多克隆位点(MSC)。需要说明的是，pDisplay表达载体是能够在目标蛋白的C末端与血小板源生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor，PDGFR)的跨膜区融合而展示在任意的哺乳动物细胞的细胞表面的表达载体。另外，pDisplay表达载体按照在目标蛋白的N末端添加HA标签、且在上述PDGFR的C末端添加myc标签的方式构成。将上述表达GPC3 N末端片段及GPC3 C末端片段的pDisplay表达载体向SK-Hep-1细胞株、293T细胞株中进行基因导入，分离出在细胞表面表达GPC3 N末端片段、GPC3 C末端片段的细胞株(GPC3 N末端片段表达细胞株及GPC3 C末端片段表达细胞株)，用于scFv的表位作图。
[利用FCM进行的抗体表位作图]
将GPC3 N末端片段表达细胞株、GPC3 C末端片段表达细胞株及GPC3表达细胞株(分别为每一样品5×105个)和分泌有scFv噬菌体的培养上清100μL混合，在冰上温育30分钟。加入FACS缓冲液(1％BSA/PBS溶液)并进行离心洗涤后，加入1μg/mL的作为二次抗体的抗小鼠抗体-alexa488(Thermo Fisher Scientific公司制)，在冰上温育30分钟。然后，利用流式细胞仪(FACSCanto、BD公司制)测定细胞的荧光染色。
[重组IgG表达载体的构建]
为了进行从scFv向IgG的转换，使用Mammalian PowerExpress system(Toyobo公司制)的表达载体。在pEH1.1载体的MSC中插入编码scFv的H链可变区与来自小鼠IgG2aH链的恒定区的融合蛋白的核苷酸序列(pEH1.1-H)。另外，在pELX2.2载体的MSC中插入编码scFv的L链可变区与来自小鼠IgG2aL链的恒定区的融合蛋白的核苷酸序列(pEH2.2-L)。然后，用限制酶(BglII及SalI)从pEH2.2-L中切出EF1α启动子至L链基因的多核苷酸片段，连接于用限制酶(BglII及SalI)处理后的pEH1.1-H上，从而构建共表达抗体H链及L链的载体。
[重组IgG的表达]
将通过上述[重组IgG表达载体的构建]中记载的方法制作的抗体H链及L链的共表达载体32.6μg稀释到1.6mL的opti-MEM(Gibco公司制)中，与将Transficient转染试剂(MBL公司制)65μL稀释到1.6mL的opti-MEM而成的液体混合，在室温下温育10分钟。然后，与悬浮在10mL的DMEM培养液中的CHO-K1细胞(1×107个)混合，进行培养。在4小时后添加无血清培养基(Free Style expression CHO media[Gibco公司制])，再培养4～6天，回收含有重组抗体的培养上清。
[抗体的亲和纯化]
向空柱(Bio-Rad公司制)中填充Protein G Sepharose 4 Fast Flow(GEhealthcare公司制)或Bipo Resin Protein L(Protein Express公司制)柱，达到1mL柱床体积后，用10倍柱床体积量的PBS洗涤柱树脂。将用0.22微米过滤器过滤后的培养上清添加到柱中，将抗体捕获到柱内的蛋白G或蛋白L后，将柱用10倍柱床体积量的PBS洗涤，从而洗去非特异性吸附的杂质。使用100mM甘氨酸-HCl(pH2.7)溶液洗脱抗体，将洗脱液用1MTris-HCl(pH8.5)中和pH。用吸光度计nanoDrop(Thermo fisher scientific公司制)测定280nm的吸光度，算出抗体浓度。对于作为竞争抗体使用的GC33抗体及GC199抗体，也通过同样的方法设计、制作表达载体。
1-2结果
[免疫后的小鼠的抗血清评价]
从用重组GPC3免疫了4次的SKG/jcl小鼠中采血，确认血清中是否产生了针对GPC3的抗体，结果，通过针对重组GPC3的ELIS和针对GPC3表达细胞的FCM的实验检测到对GPC3具有结合性的抗体。将其中2只抗体滴度特别高的小鼠(个体编号1413#2、1413#3)作为抗体文库制作源。
[噬菌体文库的构建]
根据转化效率计算而预估的scFv文库数在小鼠1413#2的情况下为5.8×107、在小鼠1413#3的情况下为4.3×108。本实施例中制作的免疫球蛋白文库是由用作为抗原的GPC3进行免疫、观察到针对目标抗原的抗体应答的小鼠制作的文库，因此特征是，具有即使在文库尺寸小的情况下，包含目标抗体基因的可能性也高。另外，与随机的合成抗体文库相比，包含在生物体内形成正确的立体结构的抗体这一点也是有利特征。
[利用单克隆scFv的序列分析进行的克隆分类]
对抽取的单克隆scFv进行DNA序列分析，除去重复，进行克隆分类。结果，从小鼠1413#2文库的D系列鉴定出7种候补克隆、从E系列鉴定出5种候补克隆，从小鼠1413#3文库的D系列鉴定出3种候补克隆及从E系列鉴定出9种候补克隆。对这些候补克隆的重链及轻链可变区的核苷酸序列进行分析，除去重复的相同克隆，结果鉴定出来自小鼠1413#2文库的9种scFv及来自小鼠1413#3文库的9种scFv合计18种scFv。
[抗GPC3scFv克隆的表位作图分析]
使用按照上述[利用单克隆scFv的序列分析进行的克隆分类]的项目中记载的方法鉴定出的18种scFv，利用FCM对3种细胞株(GPC3 N末端片段表达细胞株、GPC3 C末端片段表达细胞株及GPC3表达细胞株)的与各种GPC3的结合进行分析。其结果是，18种scFv克隆中的14种(TF1413-02d028、02d030、02d039、02e004、02e014、02e030、02e040、03e001、03e004、03e005、03e015、03e019、03e027及03e034)与全长的GPC3及GPC3 N末端片段(由序列号155所示的氨基酸序列构成的多肽)结合，但不与GPC3 C末端片段(由序列号156所示的氨基酸序列构成的多肽)结合(参照图2)。另一方面，作为现有的抗GPC3抗体的GC33(中外制药公司制)、GC199(中外制药公司制)与全长的GPC3及GPC3 C末端片段结合，但不与GPC3 N末端片段结合。
根据以上的结果，鉴定出与现有的抗GPC3抗体(GC33及GC199)的GPC3 C末端侧的表位不同、识别GPC3 N末侧的表位的上述14种新型scFv。
从所鉴定的14种scFv克隆中，选择结合力特别高的前11种scFv克隆(TF1413-02d028、02d039、02e004、02e014、02e030、02e040、03e001、03e004、03e005、03e015及03e034)。表1中示出所述11种scFv克隆的H链及L链V区与序列号的对应，表2中示出所述11种scFv克隆的H链CDR1～3与序列号的对应，表3中示出所述11种scFv克隆的L链CDR1～3与序列号的对应。
[表1]
[表2]
[表3]
[抗GPC3scFv抗体的IgG化及其结合能力]
对于所选择的上述11种scFv克隆，使H链及L链可变区与小鼠IgG的恒定区结合，通过重组IgG表达用载体以全长的重组抗体的形式表达，进行亲和纯化。使用GPC3 N末端片段表达细胞株对这些IgG抗体与GPC3 N末端片段的结合能力进行分析，结果，9种IgG克隆(TF1413-02d028、02d039、02e004、02e014、02e030、02e040、03e004、03e005及03e034)维持了与GPC3 N末端片段的结合性，但剩余的两种IgG克隆(TF1413-03e001及03e015)与GPC3 N末端片段的结合性消失(参照图3)。另外，上述9种IgG克隆不与GPC3 C末端片段结合(参照图3)。
以上的结果表明，11种scFv克隆中，9种(TF1413-02d028、02d039、02e004、02e014、02e030、02e040、03e004、03e005及03e034)能够转换为IgG型。表4中示出上述11种IgG克隆的H链及L链与序列号的对应。
[表4]
实施例2
2.新型抗GPC3抗体对经EDTA(Ethylenediaminetetraacetic acid，乙二胺四乙酸)、胰蛋白酶或胶原酶处理后的GPC3的结合性
[经EDTA或胰蛋白酶处理后的细胞的制备]
将强制表达GPC3的SK-Hep-1细胞株在2个T-75烧瓶中进行培养。吸去各烧瓶的培养上清，用PBS 3mL洗涤，然后向各烧瓶中加入0.02％的EDTA/PBS溶液(以下简称为“EDTA”)3mL或0.05％的胰蛋白酶溶液(以下简称为“胰蛋白酶”)，在37℃下分别温育5分钟(EDTA)或2分30秒(胰蛋白酶)，从而将细胞从烧瓶剥离。然后，向各烧瓶中加入7mL的DMEM培养液，吹打后，将细胞悬浮液回收到50mL锥形管中。再用10mL的DMEM培养液洗涤各烧瓶后，将回收的洗涤液也分别回收到装有各细胞悬浮液的50mL锥形管中，离心(1500rpm、4℃、4分钟)。从锥形管中吸去上清后，向团块中加入10mL的DMEM培养液，分别计测用EDTA或胰蛋白酶剥离出来的细胞数。
将经EDTA或胰蛋白酶处理后的细胞调整为细胞数分别达到2×105个/管，进行FACS(EC800)分析。FACS分析中，使用3种抗体(用APC进行了荧光标记的抗小鼠IgG抗体[5μg/管：Biolejend公司制]、GC33抗体[1.0μg/管：MBL Life Science公司制]及上述scFv克隆[TF1413-02d028]抗体[1.0μg/管])。
[经胶原酶处理后的细胞的制备]
将如上所述用EDTA剥离出来的1×106个细胞加入到50mL锥形管中，离心(1500rpm、4℃、4分钟)，吸去上清而制备细胞块(团块)。向团块中加入5mL的胶原酶P溶液，在37℃下温育30分钟，制备细胞悬浮液后，边用30mL的DMEM培养液洗涤，边通过100μm细胞过滤网。使细胞悬浮液再次通过100μm细胞过滤网，离心(300g、4℃、10分钟)，吸去上清，加入PBS 20mL而洗涤后，离心(300g、4℃、5分钟)，吸去上清。加入5mL的DMEM培养液而悬浮后，计测细胞数，对2×105个/管的细胞进行FACS(EC800)分析。FACS分析中，与经EDTA或胰蛋白酶处理后的细胞同样地，使用3种抗体(用APC进行了荧光标记的抗小鼠IgG抗体[5μg/管：Biolejend公司制]、GC33抗体[1.0μg/管：MBL Life Science公司制]及上述scFv克隆[TF1413-02d028]抗体[1.0μg/管])。将结果示于图4。需要说明的是，图4中，横轴的右侧存在峰时，表示GC33抗体或scFv克隆[TF1413-02d028]抗体结合到GPC3蛋白上。
[结果]
如图4所示，对于经胰蛋白酶处理、胶原酶处理后的GPC3蛋白，本发明的抗体(TF1413-02d028)的结合性显著降低。这些结果表示，本发明的抗体特异性识别GPC3蛋白的立体结构，可认为本发明的抗体在生物体中的特异性高。
实施例3
3.利用新型抗GPC3抗体的GPC3 CAR-T细胞的开发
[概要]
GPC3是在成人中在胎盘以外观察不到表达、但在肝细胞癌、黑素瘤、卵巢透明细胞癌、肺鳞状细胞癌等各种癌组织中表达的细胞表面分子，可成为利用嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor；CAR)的CAR-T细胞疗法的靶分子。因此，制作利用实施例1中制备的11种scFv克隆的GPC3 CAR-T细胞，对癌细胞杀伤活性、干扰素γ(IFN-γ)产生能力进行分析。
[GPC3 CAR载体的制作]
对于实施例1中制备的11种scFv克隆(TF1413-02d028、02d039、02e004、02e014、02e030、02e040、03e001、03e004、03e005、03e015及03e034)，基于各自的VH及VL的氨基酸序列来设计VH-接头-VL序列的scFv(参照表5)。作为接头，使用由使多肽“GGGGS”重复3次而成的15个氨基酸残基构成的接头。另外，在VH的N末端添加了由序列号188所示的氨基酸序列构成的来自人免疫球蛋白H链的信号序列。
[表5-1]
[表5-2]
表中，双线框表示接头，单下划线表示VH，双下划线表示VL。
对于编码表5的抗GPC3 scFv的核苷酸序列，合成优化为人密码子的序列，插入到CAR表达载体中。所使用的CAR基因中，在scFv的下游具有编码由来自人CD8的跨膜区及来自人CD28/4-1BB/CD3zeta的免疫活性细胞活化信号转导区构成的融合肽(由序列号185所示的氨基酸序列构成的肽)的基因与2A自切断序列、人IL-7基因、2A自切断序列、人CCL19基因、2A自切断序列及HSV-TK基因，并且整体整合到MSGV1逆转录病毒载体中(参照国际公开2016/056228号小册子)。
[GPC3 CAR-T细胞的制作]
将来自上述11种scFv克隆的GPC3 CAR载体瞬时导入至各GP2包装细胞中，制作逆转录病毒载体，使它们感染于T细胞而进行基因导入，诱导GPC3 CAR-T细胞。基因导入T细胞中的表达GPC3 CAR的细胞的比例为5.3～39.2％，存在偏差。因此，使用来自该比例为25％以上的5种scFv克隆(TF1413-02d028、TF1413-02d039、TF1413-02e014、TF1413-02e030及TF1413-03e005)的GPC3 CAR-T细胞，实施以下的功能测试。
[GPC3 CAR-T细胞对GPC3表达细胞株的杀伤活性]
为了研究GPC3 CAR-T细胞对癌细胞的杀伤活性，实施GPC3CAR-T细胞与GPC3表达细胞株、即在来自肝细胞癌的细胞株Sk-HEP-1中表达GPC3的细胞株(Sk-HEP-1 GPC3细胞株)或不表达GPC3的细胞株(Sk-HEP-1 mock细胞株)的共培养测试。将GPC3 CAR-T细胞与靶标癌细胞(Sk-HEP-1 GPC3细胞株、或Sk-HEP-1 mock细胞株)以1：1(1×105/孔)混合，在24孔板中培养。48小时后回收细胞，用抗CD45抗体染色，将CD45阳性细胞作为GPC3 CAR-T细胞、将CD45阴性细胞作为残存癌细胞[Sk-HEP-1 GPC3细胞]而进行FCM分析。其结果是，来自上述5种scFv克隆的GPC3 CAR-T细胞均几乎完全杀伤Sk-HEP-1 GPC3细胞，但另一方面，对于Sk-HEP-1 mock细胞则不显示杀伤活性(参照图5及6)。在使用没有感染病毒载体的细胞(基因非导入细胞[图5及6中的“未感染”])作为针对GPC3 CAR-T细胞的阴性对照时，对于Sk-HEP-1 GPC3细胞及Sk-HEP-1 mock细胞均未显示出杀伤活性。
以上的结果表明，来自所选择的5种抗GPC3scFv克隆(TF1413-02d028、TF1413-02d039、TF1413-02e014、TF1413-02e030及TF1413-03e005)的GPC3 CAR-T细胞对表达GPC3的癌细胞发挥特异性细胞杀伤活性。
[GPC3 CAR-T细胞的、基于GPC3表达细胞识别的IFN-γ产生能力]
除了对GPC3表达(阳性)癌细胞的杀伤活性以外，还分析了GPC3CAR-T细胞的IFN-γ产生能力。将GPC3 CAR-T细胞与靶标癌细胞(Sk-HEP-1 GPC3细胞株、或Sk-HEP-1 mock细胞株)以1：1(1×105/孔)混合，在24孔板中培养48小时，通过ELISA测定培养上清中所产生的IFN-γ的浓度。其结果是，来自上述5种scFv克隆的GPC3 CAR-T细胞均显示出GPC3的表达依赖性的IFN-γ产生能力，特别是来自克隆TF1413-02d028的GPC3 CAR-T细胞，显示出最高的IFN-γ产生能力(参照图7)。
实施例4
4.人源化抗体的制作
基于实施例1中制备的2种scFv克隆(TF1413-02d028及02d039)设计scFv人源化抗体(参照表6)。作为接头，使用由使多肽“GGGGS”重复3次而成的15个氨基酸残基构成的接头。另外，在VH的N末端添加了由序列号188所示的氨基酸序列构成的来自人免疫球蛋白H链的信号序列。
[表6-1]
[表6-2]
表中，双线框表示接头，单下划线表示VH，双下划线表示VL。
产业上的可利用性
本发明有助于癌症免疫疗法的领域。
序列表
<110> 国立大学法人山口大学（YAMAGUCHI UNIVERSITY）
国立研究开发法人国立癌症研究中心（NATIONAL CANCER CENTER）
<120> 抗GPC3抗体（Anti-GPC3 antibody）
<130> FH29-004TW
<150> JP 2017-1732
<151> 2017-01-10
<160> 188
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链CDR 1
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 发明人: 玉田 耕治; 佐古田 幸美; 中面 哲也; 齐藤 桂吾
<400> 1
Gly Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链CDR 2
<400> 2
Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链CDR 3
<400> 3
Gly Asp Tyr Arg Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 L链CDR 1
<400> 4
Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 L链CDR 2
<400> 5
Leu Ala Ser Asn Arg His Thr
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 L链CDR 3
<400> 6
Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 7
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链V区
<400> 7
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Arg Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser
115
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 L链V区
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 9
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链
<400> 9
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Arg Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser
245 250 255
Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp
260 265 270
Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val
290 295 300
Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr
370 375 380
Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys
405 410 415
Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 L链
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链CDR 1
<400> 11
Ser Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链CDR 2
<400> 12
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链CDR 3
<400> 13
Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 14
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链CDR 1
<400> 14
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链CDR 2
<400> 15
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链CDR 3
<400> 16
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr
1 5
<210> 17
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链V区
<400> 17
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser
115
<210> 18
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链V区
<400> 18
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg
<210> 19
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链
<400> 19
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr
180 185 190
Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu
245 250 255
Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro
260 265 270
Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala
275 280 285
Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val
290 295 300
Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu
340 345 350
Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys
355 360 365
Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn
370 375 380
Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys
405 410 415
Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly
420 425 430
Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 20
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链
<400> 20
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链CDR 1
<400> 21
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链CDR 2
<400> 22
Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链CDR 3
<400> 23
Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链CDR 1
<400> 24
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链CDR 2
<400> 25
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链CDR 3
<400> 26
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Thr
1 5
<210> 27
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链V区
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser
115
<210> 28
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链V区
<400> 28
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 29
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
165 170 175
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro
180 185 190
Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro
245 250 255
Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
275 280 285
Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala
290 295 300
Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val
355 360 365
Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly
370 375 380
Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp
405 410 415
Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His
420 425 430
Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 30
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链
<400> 30
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro
100 105 110
Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn
130 135 140
Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn
145 150 155 160
Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr
180 185 190
Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链CDR 1
<400> 31
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链CDR 2
<400> 32
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链CDR 3
<400> 33
Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链CDR 1
<400> 34
Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链CDR 2
<400> 35
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链CDR 3
<400> 36
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 37
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链V区
<400> 37
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
115 120
<210> 38
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链V区
<400> 38
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 39
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链
<400> 39
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Lys Thr Ala Pro Ser
115 120 125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr
180 185 190
Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro
195 200 205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr
210 215 220
Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met
245 250 255
Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu
260 265 270
Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val
275 280 285
His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu
290 295 300
Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr
355 360 365
Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu
370 375 380
Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val
405 410 415
Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val
420 425 430
His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 40
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链
<400> 40
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链CDR 1
<400> 41
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链CDR 2
<400> 42
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 43
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链CDR 3
<400> 43
Thr Met Ile Thr Thr Leu Asp Tyr
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链CDR 1
<400> 44
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链CDR 2
<400> 45
Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链CDR 3
<400> 46
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 47
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链V区
<400> 47
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Ser Thr Met Ile Thr Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser
115
<210> 48
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链V区
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys Arg
<210> 49
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链
<400> 49
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Ser Thr Met Ile Thr Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr
180 185 190
Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu
245 250 255
Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro
260 265 270
Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala
275 280 285
Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val
290 295 300
Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu
340 345 350
Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys
355 360 365
Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn
370 375 380
Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys
405 410 415
Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly
420 425 430
Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 50
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser
115 120 125
Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu
145 150 155 160
Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr
180 185 190
Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215 220
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链CDR 1
<400> 51
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链CDR 2
<400> 52
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链CDR 3
<400> 53
Gly Tyr Tyr Gly Arg Phe Asp Tyr
1 5
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链CDR 1
<400> 54
Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链CDR 2
<400> 55
Leu Ala Ser Asn Arg His Thr
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链CDR 3
<400> 56
Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 57
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链V区
<400> 57
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser
115
<210> 58
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链V区
<400> 58
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 59
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链
<400> 59
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser
245 250 255
Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp
260 265 270
Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln
275 280 285
Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser
290 295 300
Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
340 345 350
Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met
355 360 365
Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn
370 375 380
Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn
405 410 415
Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu
420 425 430
His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链
<400> 60
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链CDR 1
<400> 61
Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链CDR 2
<400> 62
Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ala Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链CDR 3
<400> 63
Asn Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链CDR 1
<400> 64
Glu Ala Ser Gln Asn Val Asp Asn Asn Val Val
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链CDR 2
<400> 65
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链CDR 3
<400> 66
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 67
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链V区
<400> 67
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Val Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ala Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser
115
<210> 68
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链V区
<400> 68
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Glu Ala Ser Gln Asn Val Asp Asn Asn
20 25 30
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 69
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链
<400> 69
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Val Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ala Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
165 170 175
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro
180 185 190
Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro
245 250 255
Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
275 280 285
Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala
290 295 300
Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val
355 360 365
Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly
370 375 380
Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp
405 410 415
Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His
420 425 430
Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 70
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链
<400> 70
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Glu Ala Ser Gln Asn Val Asp Asn Asn
20 25 30
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
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Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
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210
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链CDR 1
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1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链CDR 2
<400> 72
Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
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<211> 7
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<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链CDR 3
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Gly Tyr Tyr Gly Ser Asn Tyr
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链CDR 1
<400> 74
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链CDR 2
<400> 75
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链CDR 3
<400> 76
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 77
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链V区
<400> 77
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser
115
<210> 78
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链V区
<400> 78
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 79
<211> 403
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链
<400> 79
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
165 170 175
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro
180 185 190
Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro
245 250 255
Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
275 280 285
Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala
290 295 300
Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val
355 360 365
Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly
370 375 380
Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Tyr
<210> 80
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链
<400> 80
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 81
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链CDR 1
<400> 81
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链CDR 2
<400> 82
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 83
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链CDR 3
<400> 83
Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链CDR 1
<400> 84
Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链CDR 2
<400> 85
Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链CDR 3
<400> 86
Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 87
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链V区
<400> 87
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Phe Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
115 120
<210> 88
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链V区
<400> 88
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 89
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链
<400> 89
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Phe Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Arg Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser
115 120 125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr
180 185 190
Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro
195 200 205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr
210 215 220
Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met
245 250 255
Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu
260 265 270
Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val
275 280 285
His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu
290 295 300
Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr
355 360 365
Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu
370 375 380
Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val
405 410 415
Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val
420 425 430
His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 90
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链
<400> 90
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 91
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链CDR 1
<400> 91
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 92
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链CDR 2
<400> 92
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链CDR 3
<400> 93
Gly Asp Tyr Tyr Pro Pro Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链CDR 1
<400> 94
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链CDR 2
<400> 95
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链CDR 3
<400> 96
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 97
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链V区
<400> 97
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
115
<210> 98
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链V区
<400> 98
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 99
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链
<400> 99
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Pro Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser
180 185 190
Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala
195 200 205
Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile
210 215 220
Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile
245 250 255
Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp
260 265 270
Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His
275 280 285
Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg
290 295 300
Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys
305 310 315 320
Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu
355 360 365
Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp
370 375 380
Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu
405 410 415
Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His
420 425 430
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 100
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链
<400> 100
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 101
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链CDR 1
<400> 101
Gly Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 102
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链CDR 2
<400> 102
Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 103
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链CDR 3
<400> 103
Gly Asn Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链CDR 1
<400> 104
Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链CDR 2
<400> 105
Leu Ala Ser Asn Arg His Thr
1 5
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链CDR 3
<400> 106
Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 107
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链V区
<400> 107
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser
115
<210> 108
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链V区
<400> 108
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 109
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链
<400> 109
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser
245 250 255
Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp
260 265 270
Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val
290 295 300
Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr
370 375 380
Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys
405 410 415
Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 110
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链
<400> 110
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 111
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链V区基因
<400> 111
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctgag ctggagaagc ctggtgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aatggaaaga gccttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaggagac 300
tatagggcgt actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcg 354
<210> 112
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 L链V区基因
<400> 112
gacattcaga tgacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca gaatgttcgt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcagtctc ctaaagcact gatttacttg gcatccaacc ggcacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcaatct 240
gaagacctgg cagattattt ctgtctgcaa cattggaatt atcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgg 324
<210> 113
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链基因
<400> 113
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctgag ctggagaagc ctggtgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aatggaaaga gccttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaggagac 300
tatagggcgt actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcgagcgcc 360
aaaacaacag ccccatcggt ctatccactg gcccctgtgt gtggagatac aactggctcc 420
tcggtgactc taggatgcct ggtcaagggt tatttccctg agccagtgac cttgacctgg 480
aactctggat ccctgtccag tggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc 540
tacaccctca gcagctcagt gactgtaacc tcgagcacct ggcccagcca gtccatcacc 600
tgcaatgtgg cccacccggc aagcagcacc aaggtggaca agaaaattga gccccgggga 660
cccacaatca agccctgtcc tccatgcaaa tgcccagcac ctaacctctt gggtggacca 720
tccgtcttca tcttccctcc aaagatcaag gatgtactca tgatctccct gagccccata 780
gtcacatgtg tggtggtgga tgtgagcgag gatgacccag atgtccagat cagctggttt 840
gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag acacaaaccc atagagagga ttacaacagt 900
actctccggg tggtcagtgc cctccccatc cagcaccagg actggatgag tggcaaggag 960
ttcaaatgca aggtcaacaa caaagacctc ccagcgccca tcgagagaac catctcaaaa 1020
cccaaagggt cagtaagagc tccacaggta tatgtcttgc ctccaccaga agaagagatg 1080
actaagaaac aggtcactct gacctgcatg gtcacagact tcatgcctga agacatttac 1140
gtggagtgga ccaacaacgg gaaaacagag ctaaactaca agaacactga accagtcctg 1200
gactctgatg gttcttactt catgtacagc aagctgagag tggaaaagaa gaactgggtg 1260
gaaagaaata gctactcctg ttcagtggtc cacgagggtc tgcacaatca ccacacgact 1320
aagagcttct cccggactcc gggtaaa 1347
<210> 114
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d028 H链基因
<400> 114
gacattcaga tgacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca gaatgttcgt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcagtctc ctaaagcact gatttacttg gcatccaacc ggcacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcaatct 240
gaagacctgg cagattattt ctgtctgcaa cattggaatt atcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360
tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420
cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480
aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540
ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600
tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 642
<210> 115
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链V区基因
<400> 115
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cgctttcagt agctatgaca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg gtggtggtag cacctactat 180
ccagacactg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagaagagga 300
ttacgacgag ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc g 351
<210> 116
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链V区基因
<400> 116
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacgg 339
<210> 117
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 H链基因
<400> 117
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cgctttcagt agctatgaca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg gtggtggtag cacctactat 180
ccagacactg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagaagagga 300
ttacgacgag ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc gagcgccaaa 360
acaacagccc catcggtcta tccactggcc cctgtgtgtg gagatacaac tggctcctcg 420
gtgactctag gatgcctggt caagggttat ttccctgagc cagtgacctt gacctggaac 480
tctggatccc tgtccagtgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac 540
accctcagca gctcagtgac tgtaacctcg agcacctggc ccagccagtc catcacctgc 600
aatgtggccc acccggcaag cagcaccaag gtggacaaga aaattgagcc ccggggaccc 660
acaatcaagc cctgtcctcc atgcaaatgc ccagcaccta acctcttggg tggaccatcc 720
gtcttcatct tccctccaaa gatcaaggat gtactcatga tctccctgag ccccatagtc 780
acatgtgtgg tggtggatgt gagcgaggat gacccagatg tccagatcag ctggtttgtg 840
aacaacgtgg aagtacacac agctcagaca caaacccata gagaggatta caacagtact 900
ctccgggtgg tcagtgccct ccccatccag caccaggact ggatgagtgg caaggagttc 960
aaatgcaagg tcaacaacaa agacctccca gcgcccatcg agagaaccat ctcaaaaccc 1020
aaagggtcag taagagctcc acaggtatat gtcttgcctc caccagaaga agagatgact 1080
aagaaacagg tcactctgac ctgcatggtc acagacttca tgcctgaaga catttacgtg 1140
gagtggacca acaacgggaa aacagagcta aactacaaga acactgaacc agtcctggac 1200
tctgatggtt cttacttcat gtacagcaag ctgagagtgg aaaagaagaa ctgggtggaa 1260
agaaatagct actcctgttc agtggtccac gagggtctgc acaatcacca cacgactaag 1320
agcttctccc ggactccggg taaa 1344
<210> 118
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02d039 L链基因
<400> 118
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacggg ctgatgctgc accaactgta 360
tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 420
ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 480
caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg 540
agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 600
gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgt 657
<210> 119
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链V区基因
<400> 119
caggtccagc tgcagcagtc tggggctgag cttgtgaagc ctggggctcc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacgag gcctcgagtg gattggaagg attgatcctt ccgatagtga aactcactac 180
aatcaaaagt tcaaggacga ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atccaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagggtac 300
tatgctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcg 345
<210> 120
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链V区基因
<400> 120
gacattgtgc tgacccaatc tcccaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgagt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
ggacaatctc ctaaactact gatttactca gcatcctacc ggtacactgg agtccctgat 180
cgcttcactg gcagtggatc tgggacggat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggct 240
gaagacctgg cagtttatta ctgtcagcaa cattatagta ctccgacgtt cggtggaggc 300
accaagctgg aaatcaaacg g 321
<210> 121
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 H链基因
<400> 121
caggtccagc tgcagcagtc tggggctgag cttgtgaagc ctggggctcc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacgag gcctcgagtg gattggaagg attgatcctt ccgatagtga aactcactac 180
aatcaaaagt tcaaggacga ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atccaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagggtac 300
tatgctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcgagcgc caaaacaaca 360
gccccatcgg tctatccact ggcccctgtg tgtggagata caactggctc ctcggtgact 420
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tcccggactc cgggtaaa 1338
<210> 122
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e004 L链基因
<400> 122
gacattgtgc tgacccaatc tcccaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgagt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
ggacaatctc ctaaactact gatttactca gcatcctacc ggtacactgg agtccctgat 180
cgcttcactg gcagtggatc tgggacggat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggct 240
gaagacctgg cagtttatta ctgtcagcaa cattatagta ctccgacgtt cggtggaggc 300
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<210> 123
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链V区基因
<400> 123
caggtgcagc tgaagcagtc aggggcagag cttgtgaggt caggggcctc agtcaagttg 60
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cctgaacagg gcctggagtg gattggatgg attgatcctg agaatggtga tactgaatat 180
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<210> 124
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链V区基因
<400> 124
gacattgtgc tgacacagtc tcccaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
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<210> 125
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 H链基因
<400> 125
caggtgcagc tgaagcagtc aggggcagag cttgtgaggt caggggcctc agtcaagttg 60
tcctgcacag cttctggctt caacattaaa gactactata tgcactgggt gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggatgg attgatcctg agaatggtga tactgaatat 180
gccccgaagt tccagggcaa ggccactatg actgcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtaa tgcaggctac 300
tatgattacg acggctatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcg 360
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acgactaaga gcttctcccg gactccgggt aaa 1353
<210> 126
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e014 L链基因
<400> 126
gacattgtgc tgacacagtc tcccaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccccgat 180
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<210> 127
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链V区基因
<400> 127
gaggttcagc ttcagcagtc tggggctgag cttgtgaggc caggggcctt agtcaagttg 60
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ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc tatatctact 300
atgattacga cccttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc g 351
<210> 128
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链V区基因
<400> 128
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctggctatgt cagtagggca gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta aatagtagca atcaaaagaa ctatttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaacttctgg tatactttgc atccactagg 180
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<210> 129
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 H链基因
<400> 129
gaggttcagc ttcagcagtc tggggctgag cttgtgaggc caggggcctt agtcaagttg 60
tcctgcaaag cttctggctt caacattaaa gactactata tgcactgggt gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggatgg attgatcctg agaatggtaa cactatatat 180
gacccgaagt tccagggcaa ggccagtata acagcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc tatatctact 300
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acaacagccc catcggtcta tccactggcc cctgtgtgtg gagatacaac tggctcctcg 420
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<210> 130
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e030 L链基因
<400> 130
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctggctatgt cagtagggca gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta aatagtagca atcaaaagaa ctatttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaacttctgg tatactttgc atccactagg 180
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<210> 131
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链V区基因
<400> 131
gaagtgatgc tggtggagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacacca tgaactgggt gaagcagagc 120
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atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagggtac 300
tacggtcgct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcg 348
<210> 132
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链V区基因
<400> 132
gacatcttgc tgactcagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca gaatgttcgt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
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gggaccaagc tggagctgaa acgg 324
<210> 133
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 H链基因
<400> 133
gaagtgatgc tggtggagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacacca tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga accttgagtg gattggactt attaatcctt acaatggtgg tactagctac 180
aaccagaatt ttaagggcaa ggccacatta actgtagaca agtcatccag cacagcctac 240
atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagggtac 300
tacggtcgct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcgag cgccaaaaca 360
acagccccat cggtctatcc actggcccct gtgtgtggag atacaactgg ctcctcggtg 420
actctaggat gcctggtcaa gggttatttc cctgagccag tgaccttgac ctggaactct 480
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ttcatcttcc ctccaaagat caaggatgta ctcatgatct ccctgagccc catagtcaca 780
tgtgtggtgg tggatgtgag cgaggatgac ccagatgtcc agatcagctg gtttgtgaac 840
aacgtggaag tacacacagc tcagacacaa acccatagag aggattacaa cagtactctc 900
cgggtggtca gtgccctccc catccagcac caggactgga tgagtggcaa ggagttcaaa 960
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gggtcagtaa gagctccaca ggtatatgtc ttgcctccac cagaagaaga gatgactaag 1080
aaacaggtca ctctgacctg catggtcaca gacttcatgc ctgaagacat ttacgtggag 1140
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 L链基因
<400> 134
gacatcttgc tgactcagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
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gggaccaagc tggagctgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360
tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420
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<210> 135
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链V区基因
<400> 135
caggtgcagc tgaagcagtc aggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctactaca tgcactgggt gaagcaaagc 120
catgtaaaga gccttgagtg gattggacgt attaatcctt acaatggtgc tactagctac 180
aaccagaatt tcaaggacaa ggccagcttg actgtagata agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaaactac 300
ggctactttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcg 345
<210> 136
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链V区基因
<400> 136
gacatcaaga tgacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgcg aggccagtca gaatgtggat aataatgtag tctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagt tggaaataaa acgg 324
<210> 137
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 H链基因
<400> 137
caggtgcagc tgaagcagtc aggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctactaca tgcactgggt gaagcaaagc 120
catgtaaaga gccttgagtg gattggacgt attaatcctt acaatggtgc tactagctac 180
aaccagaatt tcaaggacaa ggccagcttg actgtagata agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaaactac 300
ggctactttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcgagcgc caaaacaaca 360
gccccatcgg tctatccact ggcccctgtg tgtggagata caactggctc ctcggtgact 420
ctaggatgcc tggtcaaggg ttatttccct gagccagtga ccttgacctg gaactctgga 480
tccctgtcca gtggtgtgca caccttccca gctgtcctgc agtctgacct ctacaccctc 540
agcagctcag tgactgtaac ctcgagcacc tggcccagcc agtccatcac ctgcaatgtg 600
gcccacccgg caagcagcac caaggtggac aagaaaattg agccccgggg acccacaatc 660
aagccctgtc ctccatgcaa atgcccagca cctaacctct tgggtggacc atccgtcttc 720
atcttccctc caaagatcaa ggatgtactc atgatctccc tgagccccat agtcacatgt 780
gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca gatgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac 840
gtggaagtac acacagctca gacacaaacc catagagagg attacaacag tactctccgg 900
gtggtcagtg ccctccccat ccagcaccag gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc 960
aaggtcaaca acaaagacct cccagcgccc atcgagagaa ccatctcaaa acccaaaggg 1020
tcagtaagag ctccacaggt atatgtcttg cctccaccag aagaagagat gactaagaaa 1080
caggtcactc tgacctgcat ggtcacagac ttcatgcctg aagacattta cgtggagtgg 1140
accaacaacg ggaaaacaga gctaaactac aagaacactg aaccagtcct ggactctgat 1200
ggttcttact tcatgtacag caagctgaga gtggaaaaga agaactgggt ggaaagaaat 1260
agctactcct gttcagtggt ccacgagggt ctgcacaatc accacacgac taagagcttc 1320
tcccggactc cgggtaaa 1338
<210> 138
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 L链基因
<400> 138
gacatcaaga tgacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgcg aggccagtca gaatgtggat aataatgtag tctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagt tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360
tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420
cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480
aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540
ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600
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<210> 139
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链V区基因
<400> 139
caggtgcagc tgaagcagtc aggggctgag cttgtgaagc ctggggctcc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacgag gcctcgagtg gattggaagg attgatcctt ccgatagtga aactcactac 180
aatcaaaagt tcaaggacaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atccaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagggtac 300
tacggtagta actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcg 345
<210> 140
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链V区基因
<400> 140
gacatcaaga tgacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgg 324
<210> 141
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 H链基因
<400> 141
caggtgcagc tgaagcagtc aggggctgag cttgtgaagc ctggggctcc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacgag gcctcgagtg gattggaagg attgatcctt ccgatagtga aactcactac 180
aatcaaaagt tcaaggacaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atccaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagggtac 300
tacggtagta actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcgagcgc caaaacaaca 360
gccccatcgg tctatccact ggcccctgtg tgtggagata caactggctc ctcggtgact 420
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gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca gatgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac 840
gtggaagtac acacagctca gacacaaacc catagagagg attacaacag tactctccgg 900
gtggtcagtg ccctccccat ccagcaccag gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc 960
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caggtcactc tgacctgcat ggtcacagac ttcatgcctg aagacattta cgtggagtgg 1140
accaacaacg ggaaaacaga gctaaactac aagaacactg aaccagtcct ggactctgat 1200
ggttcttact tcatgtacag caagctgaga gtggaaaaga agaactgggt ggaaagaaat 1260
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tcccggactc cgggtaaa 1338
<210> 142
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e004 L链基因
<400> 142
gacatcaaga tgacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
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cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480
aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540
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tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 642
<210> 143
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链V区基因
<400> 143
caggtgcagc tgaaggagtc aggggcagag cttgtgaggt caggggcctc agtcaagttg 60
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<210> 144
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链V区基因
<400> 144
gatgttgtga tgacccaaac tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60
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gggaccaagc tggagctgaa acgg 324
<210> 145
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 H链基因
<400> 145
caggtgcagc tgaaggagtc aggggcagag cttgtgaggt caggggcctc agtcaagttg 60
tcctgcacag cttctggctt caacattaaa gactactata tgcactgggt gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggatgg attgatcctg agaatggtga tactgaatat 180
gccccgaagt tccagggcaa ggccactatg actgcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtaa tgccttctac 300
tatgattacg acgggtatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcg 360
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<210> 146
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e005 L链基因
<400> 146
gatgttgtga tgacccaaac tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60
ctcacttgtc gggcaagtca ggaaattagt ggttacttaa gctggcttca gcagaaacca 120
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aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag ccttgagtct 240
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gggaccaagc tggagctgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360
tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420
cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480
aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540
ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600
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<210> 147
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链V区基因
<400> 147
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacacca tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga accttgagtg gattggactt attaatcctt acaatggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacatta actgtagaca agtcatccag cacagcctac 240
atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct attactgcgc aagaggggat 300
tactaccccc cctatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcg 357
<210> 148
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链V区基因
<400> 148
gacattgtga tgtcacagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
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gggcaatctc ctaaaccact gatttattcg gcgtcctacc ggtatagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagat atcctctcac gttcggtgtt 300
gggaccaagc tggaaatcaa acgg 324
<210> 149
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 H链基因
<400> 149
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacacca tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga accttgagtg gattggactt attaatcctt acaatggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacatta actgtagaca agtcatccag cacagcctac 240
atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct attactgcgc aagaggggat 300
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gccaaaacaa cagccccatc ggtctatcca ctggcccctg tgtgtggaga tacaactggc 420
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ggacccacaa tcaagccctg tcctccatgc aaatgcccag cacctaacct cttgggtgga 720
ccatccgtct tcatcttccc tccaaagatc aaggatgtac tcatgatctc cctgagcccc 780
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<210> 150
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e015 L链基因
<400> 150
gacattgtga tgtcacagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
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ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600
tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 642
<210> 151
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链V区基因
<400> 151
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggagaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
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tacgggtact atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcg 354
<210> 152
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链V区基因
<400> 152
gacattgtga tgtcacagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
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gggaccaagc tggagctgaa acgg 324
<210> 153
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 H链基因
<400> 153
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggagaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aatggaaaga gccttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtgg tactagctac 180
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tacgggtact atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcgagcgcc 360
aaaacaacag ccccatcggt ctatccactg gcccctgtgt gtggagatac aactggctcc 420
tcggtgactc taggatgcct ggtcaagggt tatttccctg agccagtgac cttgacctgg 480
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tacaccctca gcagctcagt gactgtaacc tcgagcacct ggcccagcca gtccatcacc 600
tgcaatgtgg cccacccggc aagcagcacc aaggtggaca agaaaattga gccccgggga 660
cccacaatca agccctgtcc tccatgcaaa tgcccagcac ctaacctctt gggtggacca 720
tccgtcttca tcttccctcc aaagatcaag gatgtactca tgatctccct gagccccata 780
gtcacatgtg tggtggtgga tgtgagcgag gatgacccag atgtccagat cagctggttt 840
gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag acacaaaccc atagagagga ttacaacagt 900
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cccaaagggt cagtaagagc tccacaggta tatgtcttgc ctccaccaga agaagagatg 1080
actaagaaac aggtcactct gacctgcatg gtcacagact tcatgcctga agacatttac 1140
gtggagtgga ccaacaacgg gaaaacagag ctaaactaca agaacactga accagtcctg 1200
gactctgatg gttcttactt catgtacagc aagctgagag tggaaaagaa gaactgggtg 1260
gaaagaaata gctactcctg ttcagtggtc cacgagggtc tgcacaatca ccacacgact 1320
aagagcttct cccggactcc gggtaaa 1347
<210> 154
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e034 L链基因
<400> 154
gacattgtga tgtcacagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca gaatgttcgt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcagtctc ctaaagcact gatttacttg gcatccaacc ggcacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcaatct 240
gaagacctgg cagattattt ctgtctgcaa cattggaatt atccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360
tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420
cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480
aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540
ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600
tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 642
<210> 155
<211> 440
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人 GPC3 N末端片段
<400> 155
Asp Ala Thr Cys His Gln Val Arg Ser Phe Phe Gln Arg Leu Gln Pro
1 5 10 15
Gly Leu Lys Trp Val Pro Glu Thr Pro Val Pro Gly Ser Asp Leu Gln
20 25 30
Val Cys Leu Pro Lys Gly Pro Thr Cys Cys Ser Arg Lys Met Glu Glu
35 40 45
Lys Tyr Gln Leu Thr Ala Arg Leu Asn Met Glu Gln Leu Leu Gln Ser
50 55 60
Ala Ser Met Glu Leu Lys Phe Leu Ile Ile Gln Asn Ala Ala Val Phe
65 70 75 80
Gln Glu Ala Phe Glu Ile Val Val Arg His Ala Lys Asn Tyr Thr Asn
85 90 95
Ala Met Phe Lys Asn Asn Tyr Pro Ser Leu Thr Pro Gln Ala Phe Glu
100 105 110
Phe Val Gly Glu Phe Phe Thr Asp Val Ser Leu Tyr Ile Leu Gly Ser
115 120 125
Asp Ile Asn Val Asp Asp Met Val Asn Glu Leu Phe Asp Ser Leu Phe
130 135 140
Pro Val Ile Tyr Thr Gln Leu Met Asn Pro Gly Leu Pro Asp Ser Ala
145 150 155 160
Leu Asp Ile Asn Glu Cys Leu Arg Gly Ala Arg Arg Asp Leu Lys Val
165 170 175
Phe Gly Asn Phe Pro Lys Leu Ile Met Thr Gln Val Ser Lys Ser Leu
180 185 190
Gln Val Thr Arg Ile Phe Leu Gln Ala Leu Asn Leu Gly Ile Glu Val
195 200 205
Ile Asn Thr Thr Asp His Leu Lys Phe Ser Lys Asp Cys Gly Arg Met
210 215 220
Leu Thr Arg Met Trp Tyr Cys Ser Tyr Cys Gln Gly Leu Met Met Val
225 230 235 240
Lys Pro Cys Gly Gly Tyr Cys Asn Val Val Met Gln Gly Cys Met Ala
245 250 255
Gly Val Val Glu Ile Asp Lys Tyr Trp Arg Glu Tyr Ile Leu Ser Leu
260 265 270
Glu Glu Leu Val Asn Gly Met Tyr Arg Ile Tyr Asp Met Glu Asn Val
275 280 285
Leu Leu Gly Leu Phe Ser Thr Ile His Asp Ser Ile Gln Tyr Val Gln
290 295 300
Lys Asn Ala Gly Lys Leu Thr Thr Thr Ile Gly Lys Leu Cys Ala His
305 310 315 320
Ser Gln Gln Arg Gln Tyr Arg Ser Ala Tyr Tyr Pro Glu Asp Leu Phe
325 330 335
Ile Asp Lys Lys Val Leu Lys Val Ala His Val Glu His Glu Glu Thr
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Leu Ser Ser Arg Arg Arg Glu Leu Ile Gln Lys Leu Lys Ser Phe Ile
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Ser Phe Tyr Ser Ala Leu Pro Gly Tyr Ile Cys Ser His Ser Pro Val
370 375 380
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405 410 415
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Asp Lys Leu Lys His Ile Asn Gln
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<210> 156
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人 GPC3 C末端片段
<400> 156
Leu Leu Arg Thr Met Ser Met Pro Lys Gly Arg Val Leu Asp Lys Asn
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Leu Asp Glu Glu Gly Phe Glu Ser Gly Asp Cys Gly Asp Asp Glu Asp
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Glu Cys Ile Gly Gly Ser Gly Asp Gly Met Ile Lys Val Lys Asn Gln
35 40 45
Leu Arg Phe Leu Ala Glu Leu Ala Tyr Asp Leu Asp Val Asp Asp Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Phe His Asn Leu Gly Asn Val His Ser Pro Leu Lys Leu Leu Thr Ser
85 90 95
Met Ala Ile Ser Val Val Cys Phe Phe Phe Leu Val His
100 105
<210> 157
<211> 580
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人 GPC3
<400> 157
Met Ala Gly Thr Val Arg Thr Ala Cys Leu Val Val Ala Met Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Asp Phe Pro Gly Gln Ala Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Asp
20 25 30
Ala Thr Cys His Gln Val Arg Ser Phe Phe Gln Arg Leu Gln Pro Gly
35 40 45
Leu Lys Trp Val Pro Glu Thr Pro Val Pro Gly Ser Asp Leu Gln Val
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Gln Leu Thr Ala Arg Leu Asn Met Glu Gln Leu Leu Gln Ser Ala
85 90 95
Ser Met Glu Leu Lys Phe Leu Ile Ile Gln Asn Ala Ala Val Phe Gln
100 105 110
Glu Ala Phe Glu Ile Val Val Arg His Ala Lys Asn Tyr Thr Asn Ala
115 120 125
Met Phe Lys Asn Asn Tyr Pro Ser Leu Thr Pro Gln Ala Phe Glu Phe
130 135 140
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165 170 175
Val Ile Tyr Thr Gln Leu Met Asn Pro Gly Leu Pro Asp Ser Ala Leu
180 185 190
Asp Ile Asn Glu Cys Leu Arg Gly Ala Arg Arg Asp Leu Lys Val Phe
195 200 205
Gly Asn Phe Pro Lys Leu Ile Met Thr Gln Val Ser Lys Ser Leu Gln
210 215 220
Val Thr Arg Ile Phe Leu Gln Ala Leu Asn Leu Gly Ile Glu Val Ile
225 230 235 240
Asn Thr Thr Asp His Leu Lys Phe Ser Lys Asp Cys Gly Arg Met Leu
245 250 255
Thr Arg Met Trp Tyr Cys Ser Tyr Cys Gln Gly Leu Met Met Val Lys
260 265 270
Pro Cys Gly Gly Tyr Cys Asn Val Val Met Gln Gly Cys Met Ala Gly
275 280 285
Val Val Glu Ile Asp Lys Tyr Trp Arg Glu Tyr Ile Leu Ser Leu Glu
290 295 300
Glu Leu Val Asn Gly Met Tyr Arg Ile Tyr Asp Met Glu Asn Val Leu
305 310 315 320
Leu Gly Leu Phe Ser Thr Ile His Asp Ser Ile Gln Tyr Val Gln Lys
325 330 335
Asn Ala Gly Lys Leu Thr Thr Thr Ile Gly Lys Leu Cys Ala His Ser
340 345 350
Gln Gln Arg Gln Tyr Arg Ser Ala Tyr Tyr Pro Glu Asp Leu Phe Ile
355 360 365
Asp Lys Lys Val Leu Lys Val Ala His Val Glu His Glu Glu Thr Leu
370 375 380
Ser Ser Arg Arg Arg Glu Leu Ile Gln Lys Leu Lys Ser Phe Ile Ser
385 390 395 400
Phe Tyr Ser Ala Leu Pro Gly Tyr Ile Cys Ser His Ser Pro Val Ala
405 410 415
Glu Asn Asp Thr Leu Cys Trp Asn Gly Gln Glu Leu Val Glu Arg Tyr
420 425 430
Ser Gln Lys Ala Ala Arg Asn Gly Met Lys Asn Gln Phe Asn Leu His
435 440 445
Glu Leu Lys Met Lys Gly Pro Glu Pro Val Val Ser Gln Ile Ile Asp
450 455 460
Lys Leu Lys His Ile Asn Gln Leu Leu Arg Thr Met Ser Met Pro Lys
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Gly Arg Val Leu Asp Lys Asn Leu Asp Glu Glu Gly Phe Glu Ser Gly
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Pro Leu Lys Leu Leu Thr Ser Met Ala Ile Ser Val Val Cys Phe Phe
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580
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<220>
<221> misc_feature
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tgctgctcaa gaaagatgga agaaaaatac caactaacag cacgattgaa catggaacag 180
ctgcttcagt ctgcaagtat ggagctcaag ttcttaatta ttcagaatgc tgcggttttc 240
caagaggcct ttgaaattgt tgttcgccat gccaagaact acaccaatgc catgttcaag 300
aacaactacc caagcctgac tccacaagct tttgagtttg tgggtgaatt tttcacagat 360
gtgtctctct acatcttggg ttctgacatc aatgtagatg acatggtcaa tgaattgttt 420
gacagcctgt ttccagtcat ctatacccag ctaatgaacc caggcctgcc tgattcagcc 480
ttggacatca atgagtgcct ccgaggagca agacgtgacc tgaaagtatt tgggaatttc 540
cccaagctta ttatgaccca ggtttccaag tcactgcaag tcactaggat cttccttcag 600
gctctgaatc ttggaattga agtgatcaac acaactgatc acctgaagtt cagtaaggac 660
tgtggccgaa tgctcaccag aatgtggtac tgctcttact gccagggact gatgatggtt 720
aaaccctgtg gcggttactg caatgtggtc atgcaaggct gtatggcagg tgtggtggag 780
attgacaagt actggagaga atacattctg tcccttgaag aacttgtgaa tggcatgtac 840
agaatctatg acatggagaa cgtactgctt ggtctctttt caacaatcca tgattctatc 900
cagtatgtcc agaagaatgc aggaaagctg accaccacta ttggcaagtt atgtgcccat 960
tctcaacaac gccaatatag atctgcttat tatcctgaag atctctttat tgacaagaaa 1020
gtattaaaag ttgctcatgt agaacatgaa gaaaccttat ccagccgaag aagggaacta 1080
attcagaagt tgaagtcttt catcagcttc tatagtgctt tgcctggcta catctgcagc 1140
catagccctg tggcggaaaa cgacaccctt tgctggaatg gacaagaact cgtggagaga 1200
tacagccaaa aggcagcaag gaatggaatg aaaaaccagt tcaatctcca tgagctgaaa 1260
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<210> 159
<211> 327
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> misc_feature
<223> 人GPC3 C末端片段基因
<400> 159
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gtggtgtgct tcttcttcct ggtgcac 327
<210> 160
<211> 1743
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 160
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gatttgcaag tatgtctccc taagggccca acatgctgct caagaaagat ggaagaaaaa 240
taccaactaa cagcacgatt gaacatggaa cagctgcttc agtctgcaag tatggagctc 300
aagttcttaa ttattcagaa tgctgcggtt ttccaagagg cctttgaaat tgttgttcgc 360
catgccaaga actacaccaa tgccatgttc aagaacaact acccaagcct gactccacaa 420
gcttttgagt ttgtgggtga atttttcaca gatgtgtctc tctacatctt gggttctgac 480
atcaatgtag atgacatggt caatgaattg tttgacagcc tgtttccagt catctatacc 540
cagctaatga acccaggcct gcctgattca gccttggaca tcaatgagtg cctccgagga 600
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gtcatgcaag gctgtatggc aggtgtggtg gagattgaca agtactggag agaatacatt 900
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ctgaccacca ctattggcaa gttatgtgcc cattctcaac aacgccaata tagatctgct 1080
tattatcctg aagatctctt tattgacaag aaagtattaa aagttgctca tgtagaacat 1140
gaagaaacct tatccagccg aagaagggaa ctaattcaga agttgaagtc tttcatcagc 1200
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caaattattg acaaactgaa gcacattaac cagctcctga gaaccatgtc tatgcccaaa 1440
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caggcaactc cgaaggacaa cgagataagc acctttcaca acctcgggaa cgttcattcc 1680
ccgctgaagc ttctcaccag catggccatc tcggtggtgt gcttcttctt cctggtgcac 1740
tga 1743
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<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 162
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 163
tccccccggg ctcctgagaa ccatgtct 28
<210> 164
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> R-9 引物
<400> 164
tccccgcggg tgcaccagga agaagaagca cac 33
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<211> 241
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<213> 人工序列
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<400> 165
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met
130 135 140
Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln
145 150 155 160
Asn Val Arg Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
165 170 175
Pro Lys Ala Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His
210 215 220
Trp Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 166
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
130 135 140
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
145 150 155 160
Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
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Leu Glu Leu Lys Arg
245
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<212> PRT
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<220>
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<400> 167
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Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
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Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser
130 135 140
Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser
145 150 155 160
Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu
165 170 175
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe
180 185 190
Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val
195 200 205
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 168
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
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Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
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Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Asn Ala Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys
130 135 140
Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala
145 150 155 160
Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly
180 185 190
Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln
210 215 220
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Ile Lys Arg
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 169
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Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
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65 70 75 80
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Thr Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala
130 135 140
Met Ser Val Gly Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser
145 150 155 160
Leu Leu Asn Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg
180 185 190
Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr
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Phe Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Leu Lys Arg
245
<210> 170
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-02e040 scFv
<400> 170
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
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130 135 140
Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val
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165 170 175
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Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
225 230 235
<210> 171
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TF1413-03e001 scFv
<400> 171
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Val Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ala Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser
130 135 140
Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Glu Ala Ser Gln Asn Val Asp
145 150 155 160
Asn Asn Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala
165 170 175
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
180 185 190
Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val
195 200 205
Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr
210 215 220
Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
225 230 235
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<211> 238
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<213> 人工序列
<220>
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1 5 10 15
Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser
130 135 140
Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly
145 150 155 160
Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala
165 170 175
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
180 185 190
Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val
195 200 205
Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr
210 215 220
Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
225 230 235
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
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35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
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65 70 75 80
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100 105 110
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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser
130 135 140
Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala
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Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp
165 170 175
Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly
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Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu
210 215 220
Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu
225 230 235 240
Leu Lys Arg
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<211> 242
<212> PRT
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<220>
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1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Lys Phe
130 135 140
Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser
145 150 155 160
Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln
210 215 220
Tyr Asn Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Trp Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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Arg
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> cp3R 引物
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<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 178
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
130 135 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser
145 150 155 160
Gln Asn Val Arg Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
165 170 175
Ala Pro Lys Ala Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val
180 185 190
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
210 215 220
His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
225 230 235 240
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> #5 VH2-15-VL1
<400> 179
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Arg Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
130 135 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser
145 150 155 160
Gln Asn Val Arg Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
165 170 175
Ala Pro Lys Ala Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val
180 185 190
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195 200 205
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
210 215 220
His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
225 230 235 240
Lys
<210> 180
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> #5 VH3-15-VL1
<400> 180
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Arg Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
130 135 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser
145 150 155 160
Gln Asn Val Arg Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
165 170 175
Ala Pro Lys Ala Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val
180 185 190
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
210 215 220
His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
225 230 235 240
Lys
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<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> #6 VH1-15-VL1
<400> 181
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu
130 135 140
Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 182
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> #6 VH1-15-VL2
<400> 182
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu
130 135 140
Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 183
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> #6 VH2-15-VL1
<400> 183
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu
130 135 140
Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg
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Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 184
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> #6 VH2-15-VL2
<400> 184
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
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Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu
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Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
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Ser Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln
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Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg
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195 200 205
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 185
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hCD8-hCD28-h4-1BB-hCD3
<400> 185
Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
20 25 30
Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
35 40 45
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
50 55 60
Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn
65 70 75 80
His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
85 90 95
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
100 105 110
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Phe Ser Val
115 120 125
Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
130 135 140
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
145 150 155 160
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
165 170 175
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
180 185 190
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
195 200 205
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
210 215 220
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
225 230 235 240
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
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Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
275 280
<210> 186
<211> 277
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hCD8-hCD28-h4-1BB-hCD3
<400> 186
Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
20 25 30
Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
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Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
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100 105 110
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Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
165 170 175
Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
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Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
195 200 205
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
210 215 220
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
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Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
245 250 255
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
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Ala Leu Pro Pro Arg
275
<210> 187
<211> 276
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hCD8-hCD28-h4-1BB-hCD3
<400> 187
Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
20 25 30
Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
35 40 45
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
50 55 60
Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Arg Ser Lys Arg
65 70 75 80
Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro
85 90 95
Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe
100 105 110
Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys
115 120 125
Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr
130 135 140
Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly
145 150 155 160
Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
165 170 175
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
180 185 190
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
195 200 205
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
210 215 220
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
225 230 235 240
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
245 250 255
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
260 265 270
Leu Pro Pro Arg
275
<210> 188
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 188
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser

Claims (17)

1.一种抗体，其是与由序列号155所示的氨基酸序列构成的来源于人GPC3(磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)的多肽特异性结合的抗体，其中，(1-1)含有：由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链互补决定区(CDR)1、由序列号2所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号3所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号4所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号5所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号6所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(2-1)含有：由序列号11所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号12所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号13所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号14所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号15所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号16所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(3-1)含有：由序列号21所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号22所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号23所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号24所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号25所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号26所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(4-1)含有：由序列号31所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号32所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号33所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号34所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号35所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号36所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(5-1)含有：由序列号41所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号42所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号43所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号44所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号45所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号46所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(6-1)含有：由序列号51所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号52所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号53所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号54所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号55所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号56所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(7-1)含有：由序列号61所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号62所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号63所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号64所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号65所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号66所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(8-1)含有：由序列号71所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号72所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号73所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号74所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号75所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号76所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(9-1)含有：由序列号81所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号82所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号83所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号84所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号85所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号86所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；
(10-1)含有：由序列号91所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号92所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号93所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号94所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号95所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号96所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3；或者
(11-1)含有：由序列号101所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、由序列号102所示的氨基酸序列构成的重链CDR2及由序列号103所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、和
由序列号104所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、由序列号105所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2及由序列号106所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中，
(1-2)含有：由与序列号7所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号8所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(2-2)含有：由与序列号17所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号18所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(3-2)含有：由与序列号27所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号28所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(4-2)含有：由与序列号37所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号38所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(5-2)含有：由与序列号47所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号48所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(6-2)含有：由与序列号57所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号58所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(7-2)含有：由与序列号67所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号68所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(8-2)含有：由与序列号77所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号78所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(9-2)含有：由与序列号87所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号88所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(10-2)含有：由与序列号97所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号98所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(11-2)含有：由与序列号107所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链可变区、和由与序列号108所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链可变区。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的抗体，其为单链抗体。
4.根据权利要求3所述的抗体，其中，单链抗体
(1-3)含有与序列号165所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3)含有与序列号166所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(3-3)含有与序列号167所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(4-3)含有与序列号168所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(5-3)含有与序列号169所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(6-3)含有与序列号170所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(7-3)含有与序列号171所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(8-3)含有与序列号172所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(9-3)含有与序列号173所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(10-3)含有与序列号174所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；或者
(11-3)含有与序列号175所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列。
5.根据权利要求3所述的抗体，其中，单链抗体
(1-3’-1)含有与序列号178所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(1-3’-2)含有与序列号179所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(1-3’-3)含有与序列号180所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3’-1)含有与序列号181所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3’-2)含有与序列号182所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；
(2-3’-3)含有与序列号183所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列；或者
(2-3’-4)含有与序列号184所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列。
6.根据权利要求1或2所述的抗体，其中，
(1-4)含有：由与序列号9所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号10所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(2-4)含有：由与序列号19所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号20所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(3-4)含有：由与序列号29所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号30所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(4-4)含有：由与序列号39所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号40所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(5-4)含有：由与序列号49所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号50所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(6-4)含有：由与序列号59所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号60所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(7-4)含有：由与序列号69所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号70所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(8-4)含有：由与序列号79所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号80所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(9-4)含有：由与序列号89所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号90所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；
(10-4)含有：由与序列号99所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号100所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链；或者
(11-4)含有：由与序列号109所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的重链、和由与序列号110所示的氨基酸序列具有至少80％以上的序列一致性的氨基酸序列构成的轻链。
7.一种嵌合抗原受体(CAR)，其含有权利要求3～5中任一项所述的抗体、融合于该抗体的羧基末端的跨膜区和融合于该跨膜区的羧基末端的免疫活性细胞活化信号转导区。
8.根据权利要求7所述的CAR，其含有序列号185～187中的任一者所示的氨基酸序列。
9.一种免疫活性细胞，其表达权利要求7或8所述的CAR。
10.根据权利要求9所述的免疫活性细胞，其还表达白细胞介素7(IL-7)及趋化因子配体19(CCL19)。
11.一种编码权利要求1～6中任一项所述的抗体的抗体基因、或者编码权利要求7或8所述的CAR的CAR基因。
12.一种抗体基因，其编码权利要求1～4及6中任一项所述的抗体。
13.一种载体，其含有启动子和可操作地连接在该启动子的下游的权利要求11所述的抗体基因或权利要求11所述的编码CAR的CAR基因。
14.一种载体，其含有启动子和可操作地连接在该启动子的下游的权利要求12所述的抗体基因。
15.一种宿主细胞，其导入有权利要求13或14所述的载体。
16.一种GPC3的检测方法，其具备：使用权利要求1～6中任一项所述的抗体检测GPC3(磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)的步骤。
17.一种GPC3(磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)的检测用试剂盒，其含有权利要求1～6中任一项所述的抗体或其标记物。
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