CN112500485A - 一种抗b7-h3抗体及其应用 - Google Patents

一种抗b7-h3抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及抗体药物技术领域，尤其涉及一种抗B7‑H3抗体或其抗原结合片段，包含抗B7‑H3抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及它们的应用。本发明的抗B7‑H3抗体或其抗原结合片段具有高的亲和力和稳定性，抗肿瘤活性显著，可用于制备抗肿瘤的药物。

Description

一种抗B7-H3抗体及其应用
技术领域
本发明涉及抗体药物技术领域，尤其涉及一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，包含抗B7-H3抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及它们的应用。
背景技术
B7-H3(CD276)属于B7超家族，是一种跨膜糖蛋白，其胞外区结构分为2种，一种是单价的2Ig-B7-H3，一种是由2个重复单元结构组成的双价的4Ig-B7-H3。B7-H3作为一种新型免疫检查点，文献报导中B7-H3通过与一种结构未知的受体作用，能够抑制T细胞增殖及细胞因子释放(Suh W K,et al.The B7 family member B7-H3 preferentially down-regulates T helper type 1-mediated immune responses[J].Nature Immunology,2003,4(9):899)，抑制NK细胞对B7-H3高表达的患者来源的肿瘤细胞的裂解活性(Castriconi R,et al.Identification of 4Ig-B7-H3 as a neuroblastoma-associatedmolecule that exerts a protective role from an NK cell-mediated lysis[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2004,101(34):12640-12645)。虽然B7-H3受体未知，但是近年来关于B7-H3与受体作用在肿瘤免疫中的负调控的报导越来越多。肿瘤细胞表达B7-H3，使其规避CD8+ T细胞的免疫监视，小鼠模型中，抗鼠B7-H3抗体的使用，能增强CD8+ T细胞的免疫功能(Yonesaka K,et al.B7-H3 negatively modulatesCTL-mediated cancer immunity[J].Clinical Cancer Research,2018,clincanres.2852.2017)。在Lee Y等人研究中，基因敲除小鼠B7-H3或者使用抗鼠B7-H3抗体均能显著抑制肿瘤的生长，这种抑制作用依赖于CD8+T和NK细胞的功能(Lee Y,etal.Inhibition of the B7-H3 immune checkpoint limits tumor growth by enhancingcytotoxic lymphocyte function[J].Cell Research,2017,27(8):1034-1045)。在肺癌患者中的研究发现，B7-H3高表达患者肿瘤浸润性淋巴细胞少且更容易发生淋巴结转移(Altan M,et al.B7-H3 expression in NSCLC and its association with B7-H4,PD-L1and Tumor Infiltrating Lymphocytes[J].Clinical Cancer Research,2017,23(17):5202).
B7-H3异常表达于多种肿瘤细胞、肿瘤基质、肿瘤血管及肿瘤浸润的巨噬细胞和DC细胞。在来自病人的前列腺癌、胰腺癌、肝细胞癌、头颈癌、肾癌等组织样本中，B7-H3的表达比率均超过90％，而在正常组织中鲜见表达(Seaman S,et al.Eradication of Tumorsthrough Simultaneous Ablation of CD276/B7-H3-Positive Tumor Cells and TumorVasculature.[J].Cancer Cell,2017,31(4):501-515)。基于B7-H3的肿瘤特异性表达趋向，临床在研抗B7-H3靶点的抗体类药物，均是借助B7-H3的肿瘤靶向性来进行药物开发。Enoblituzumab，人源化抗B7-H3单克隆抗体，通过抗体靶向肿瘤介导抗体Fc段的ADCC效应来杀伤肿瘤。Burtomab是携带放射性碘的抗B7-H3鼠源抗体药物偶联物，在临床中治疗转移性神经母细胞瘤，显著提高儿童肿瘤患者生存期。
基于B7-H3在肿瘤环境中的高表达特性及其对免疫细胞的抑制活性特点，B7-H3可作为抗肿瘤药物开发的有效的靶点。需要提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有更高的亲和力和稳定性，可阻断B7-H3对肿瘤的免疫抑制，增强CD8+ T细胞和NK细胞对肿瘤的杀伤活性，并协同抗体Fc段的ADCC效应发挥抗肿瘤作用，从而具有更优异的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明一方面提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中所述重链可变区包含重链可变区的互补决定区1(HCDR1)、重链可变区的互补决定区2(HCDR2)和/或重链可变区的互补决定区3(HCDR3)，所述轻链可变区包含轻链可变区的互补决定区1(LCDR1)、轻链可变区的互补决定区2(LCDR2)和/或轻链可变区的互补决定区3(LCDR3)。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
(a1)如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；
(a2)如SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列；
(a3)如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列；和
(a4)如SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列；
(a5)与(a1)、(a2)、(a3)或(a4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR；和
(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(a6)如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列；
(a7)如SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列；
(a8)如SEQ ID NO:16、18和19所示的氨基酸序列；
(a9)如SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列；
(a10)如SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列；和
(a11)与(a6)、(a7)、(a8)、(a9)或(a10)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:1、2和3或与SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:4、5和6或与SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:7、8和9或与SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:10、11和12或与SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:13、14和15或与SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:16、18和19或与SEQ ID NO:16、18和19所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:13、14和15或与SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:17、18和19或与SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:20、21和22或与SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:23、24和25或与SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段或人源化抗体或其抗原结合片段。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(b1)如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列；
(b2)(b1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(b3)与(b1)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(b4)如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；
(b5)(b4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(b6)与(b4)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:26经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:26功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:27，SEQ IDNO:27经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:27功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:28经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:28功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:28具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:29，SEQ IDNO:29经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:29功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:30经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:30功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:31，SEQ IDNO:31经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:31功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:30经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:30功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:32，SEQ IDNO:32经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:32功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:35经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:35功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:36，SEQ IDNO:36经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:36功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:26经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:26功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:27经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:27功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:28经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:28功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:28具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:29经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:29功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:30经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:30功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:31，SEQ ID NO:31经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:31功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:16、18和19所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:30经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:30功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:32经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:32功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:35经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:35功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:36经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:36功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的抗B7-H3抗体为鼠源抗体，其还含有鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4或其变体的重链恒定区，和鼠源的κ链或其变体的轻链恒定区。
在一些优选的实施方案中，根据本发明的抗B7-H3鼠源抗体还含有鼠源的IgG1或IgG2或其变体的重链恒定区，和鼠源κ链或其变体的轻链恒定区。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7-H3抗体为人源化抗体，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(c1)如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；
(c2)(c1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c3)与(c1)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(c4)如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列；
(c5)(c4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c6)与(c4)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7-H3抗体为人源化抗体，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(c1)如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；
(c2)(c1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c3)与(c1)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(c4)如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；
(c5)(c4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c6)与(c4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7-H3抗体为人源化抗体，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(c1)如SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列；
(c2)(c1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c3)与(c1)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(c4)如SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；
(c5)(c4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c6)与(c4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7-H3抗体为人源化抗体，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(c1)如SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列；
(c2)(c1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c3)与(c1)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(c4)如SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列；
(c5)(c4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c6)与(c4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7-H3抗体为人源化抗体，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(c1)如SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；
(c2)(c1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c3)与(c1)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(c4)如SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列；
(c5)(c4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c6)与(c4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:45经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:49经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:49功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:4、5和6所示的的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:52经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:52功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:59，SEQ ID NO:59经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:59功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:63经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:63功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:65经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:65功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:65具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:64经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:64功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:72，SEQ ID NO:72经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:72功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:72具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:77，SEQ ID NO:77经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:77功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:22经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:22功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:22具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:25经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:25功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗B7-H3人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含人源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，所述轻链包含人源的κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
在本发明一个优选的实施方案中，所述的鼠源抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，和/或进一步包含鼠源IgG1，IgG2，IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。
在本发明一个优选的实施方案中，所述的抗B7-H3嵌合抗体或其抗原结合片段的抗体轻链进一步包含鼠源κ、λ链或其突变序列的轻链恒定区。所述的抗B7-H3嵌合抗体或其抗原结合片段的抗体重链进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、gG4或其突变序列的重链恒定区，优选包含人源IgG1或IgG2重链恒定区，或者使用氨基酸突变后显著降低ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)毒性的IgG4恒定区。
在一些具体的实施方案中，本发明的抗B7-H3人源化抗体或其抗原结合片段还包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，和人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。在一些优选的实施方案中，本发明的抗B7-H3人源化抗体或其抗原结合片段还包含人源IgG1或IgG2或其变体的重链恒定区，和人源κ链或其变体的轻链恒定区。
在一些实施方案中，本发明提供抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗原结合片段为Fab、Fv、sFv或F(ab)2。
本发明的另一方面提供一种分离的核酸，其编码根据本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其中编码重链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84或SEQ ID NO:86所示；编码轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示。
在一个具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其中编码重链可变区SEQID NO:45的核苷酸序列如SEQ ID NO:80所示；编码轻链可变区SEQ ID NO:49的核苷酸序列如SEQ ID NO:81所示。
在一个具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其中编码重链可变区SEQID NO:52的核苷酸序列如SEQ ID NO:82所示；编码轻链可变区SEQ ID NO:59的核苷酸序列如SEQ ID NO:83所示。
在一个具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其中编码重链可变区SEQID NO:64的核苷酸序列如SEQ ID NO:84所示；编码轻链可变区SEQ ID NO:67的核苷酸序列如SEQ ID NO:85所示。
在一个具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其中编码重链可变区SEQID NO:72的核苷酸序列如SEQ ID NO:86所示；编码轻链可变区SEQ ID NO:77的核苷酸序列如SEQ ID NO:87所示。
本发明的另一方面提供一种表达载体，其表达本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段。根据本发明的表达载体其包含本发明的分离的核酸分子。
本发明的另一方面提供一种如上所述的表达载体转化的宿主细胞。
在一些实施方案中，根据本发明的宿主细胞选自原核细胞和真核细胞。在一些实施方案中，所述的宿主细胞为细菌，优选为大肠杆菌。在另一个优选的实施方案中，所述的宿主细胞为哺乳动物细胞。
本发明的另一方面提供制备本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段的方法，包括在所述宿主细胞中表达抗体以及从宿主细胞中分离所述抗体的步骤。
本发明的另一方面提供一种药物组合物，其包含本发明的抗B7-H3人源化抗体或其抗原结合片段和药学可接受的载体。在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的抗B7-H3人源化抗体或其抗原结合片段，还包含其他活性组分，如其他抗体、靶向药物等。在一些实施方案中，所述药学可接受的载体选自抗氧化剂、多肽、蛋白质、亲水性聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、糖醇、离子和表面活性剂。在一个具体的实施方案中，所述药学可接受的载体为缓冲水溶液。在另一个具体的实施方案中，所述药学可接受的载体为脂质体的形式。
可以将本发明的抗B7-H3人源化抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于经口、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、脑内、眼内、气管内、皮下、鼻内途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的另一方面提供抑制B7-H3活性的方法，所述方法包括向有此需要的个体施用本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物。
本发明的另一方面提供本发明的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物在制备抑制B7-H3活性的药物中的应用。在一些实施方案中，所述抑制B7-H3活性的药物用于治疗白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤和/或黑素瘤。在一些实施方案中，本发明提供上述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物在制备抗肿瘤的药物中的应用，优选地，所述肿瘤选自白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤和黑素瘤。
本发明提供的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段具有更高的亲和力和稳定性，抗肿瘤作用显著，可明显抑制肿瘤增长，人源化后的抗体免疫原性大大降低，有效消除人体免疫系统对外源性单抗的排异反应，可在制备用于治疗各类肿瘤疾病的药物中应用，具有广阔的市场前景。
定义
除非另有定义，本文中使用的科学和技术术语的含义是本领域技术人员所通常理解的含义。本文中所述的细胞和组织培养、分子生物学以及蛋白质和寡或多核苷酸化学及杂交中使用的命名和技术是本领域公知且普遍使用的。对于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养与转化(如电穿孔、脂质转染)，使用了标准技术。酶促反应和纯化技术根据生产商的说明书或本领域普遍使用或本文所述的方法进行。前述技术和方法通常根据本领域公知且本说明书中引用和讨论的多部综合和较具体的文献中描述的那样使用。参见例如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual)(第2版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，纽约冷泉港(1989))。本文所述的分析化学、合成有机化学以及医学和药学化学中使用的命名以及实验室方法和技术是本领域公知且普遍使用的。
在本发明中，术语“至少80％序列同一性”是指至少80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％的序列同一性。在本发明中，术语“至少85％序列同一性”是指至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％的序列同一性。在一些优选的实施方案中，本发明所述的序列同一性可以至少为90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％。两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过National Center For Biotechnology Instutute网站上的BLASTN/BLASTP算法来进行。
在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中以相对彼此的位置排列以形成抗原结合表面。抗原结合表面与所结合抗原的三维表面互补，且每条重链和轻链的三个高变区均被称作“互补决定区”或“CDR”。氨基酸向每个结构域的分配是根据Kabat《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》(国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达(1987和1991))或Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)，Chothia等，Nature 342:878-883(1989)定义。
本发明所述的“抗原结合片段”是指具有抗原结合活性的Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段及与人B7-H3结合的Fv片段、scFv片段。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体或单链Fv(scFv)。
本发明所述的抗体指免疫球蛋白分子或其免疫活性部分，即包含特异性结合抗原(与其免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”指抗体与抗原的一种或多种抗原决定簇反应而不与其他多肽反应或以很低的亲和性(Kd>10-6)结合其他多肽。抗体包括但不限于多克隆、单克隆、嵌合、dAb(结构域抗体)、单链、Fab、Fab’和F(ab’)2片段、Fv、scFv及Fab表达文库。单克隆抗体(mAb)是由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的、原核的或噬菌体的克隆细胞株。单克隆抗体或抗原结合片段可以用如杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术及合成技术如CDR grafting或其它现有技术进行重组得到。
本发明所述的“鼠源抗体”为根据本领域知识和技能制备的对人B7-H3的单克隆抗体。制备时用B7-H3抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。
本发明所述的“嵌合抗体”是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。
本发明所述的“人源化抗体”也称为CDR移植抗体，是将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架(FR)中产生的抗体。此类可变区框架序列可以从公共的DNA数据库或公开的参考文献获得，例如从ImMunoGeneTics(IMGT)网站http://imgt.cines.fr得到或从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。
附图说明
图1是抗B7-H3人源化抗体与人4Ig-B7-H3结合活性测定(ELISA)结果，横坐标为抗体浓度ng/ml，纵坐标为OD450值。
图2是抗B7-H3人源化抗体与人2Ig-B7-H3结合活性测定(ELISA)结果，横坐标为抗体浓度ng/ml，纵坐标为OD450值。
图3是抗B7-H3人源化抗体与猴B7-H3结合活性测定(ELISA)结果，横坐标为抗体浓度ng/ml，纵坐标为OD450值。
图4是抗人B7-H3鼠单抗在SEB刺激的PBMC体系中IFNγ释放水平检测结果，PBMC来自donor B。横坐标为不同抗体，纵坐标为IFNγ释放量(pg/ml)。
图5是抗人B7-H3鼠单抗在SEB刺激的PBMC体系中IFNγ释放水平检测结果，PBMC来自donor C。横坐标为不同抗体，纵坐标为IFNγ释放量(pg/ml)。图6是抗B7-H3人源化抗体hu65在SEB刺激的PBMC体系中IFNγ释放水平检测结果。横坐标为不同抗体，纵坐标为IFNγ释放量(pg/ml)。
图7是抗B7-H3人源化抗体hu51-G34K在SEB刺激的PBMC体系中IFNγ释放水平检测结果。横坐标为不同抗体，纵坐标为IFNγ释放量(pg/ml)。
具体实施方式
下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。以下实施例中未注明条件的实验方法通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册、分子克隆手册等，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件进行。实施例中使用的材料、试剂如无特殊说明均为商购获得。
实施例1抗原蛋白及阳性对照抗体的制备
1、抗原蛋白及阳性对照抗体的表达载体构建
(1)抗原蛋白的表达载体构建
合成编码4Ig-B7-H3蛋白胞外区全长的基因片段，氨基酸序列设计如SEQ ID NO:88所示。合成编码2Ig-B7-H3蛋白的基因片段，氨基酸序列设计如SEQ ID NO:89所示。将4Ig-B7-H3的全长DNA序列(SEQ ID NO:90)克隆到真核表达质粒pTargeT上，获得其表达质粒pTargeT-4Ig-B7-H3。
将人4Ig-B7-H3蛋白胞外区氨基酸序列与hIgG1-Fc或his标签的氨基酸序列进行融合，氨基酸序列设计如SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:92所示。将人2Ig-B7-H3蛋白胞外区氨基酸序列与hIgG1-Fc或his标签氨基酸序列进行融合，氨基酸序列设计如SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:94所示。对上述氨基酸序列进行密码子优化后合成带有标签的B7-H3蛋白胞外区基因片段4Ig-B7-H3-hFc、4Ig-B7-H3-his、2Ig-B7-H3-hFc、2Ig-B7-H3-his并将其分别克隆至真核表达质粒pHR中，分别获得上述标签蛋白的表达质粒pHR-4Ig-B7-H3-hFc、pHR-4Ig-B7-H3-his、pHR-2Ig-B7-H3-hFc、pHR-2Ig-B7-H3-his。
(2)阳性对照抗体hBRCA84D的表达载体构建
使用专利申请WO2011/109400中公开的人源化抗体hBRCA84D作为阳性对照抗体，hBRCA84D的氨基酸序列如下所示：
hBRCA84D重链氨基酸序列：SEQ ID NO:95；
hBRCA84D轻链氨基酸序列：SEQ ID NO:96。
根据WO2011/109400公开的方法制备hBRCA84D。hBRCA84D为人IgG1型单克隆抗体，与天然IgG1相比，其Fc段含有特定突变位点(K214R,L235V,F243L,R292P,Y300L,D356E,L358M,P396L)。对hBRCA84D人源化抗体的氨基酸序列进行密码子人工优化，获得阳性对照抗体hBRCA84D的重链及轻链全长DNA序列。将hBRCA84D重链全长DNA片段克隆pHR载体上，获得真核表达质粒pHR-hBRCA84D-8mIgG1。将hBRCA84D轻链全长DNA片段克隆到pHR载体上，获得真核表达质粒pHR-hBRCA84D-hK。
(3)鼠源阳性对照抗体BRCA84D的表达载体构建
将阳性对照抗体hBRCA84D的重链可变区序列克隆至含鼠mG2a重链恒定区的真核表达质粒pHR-mG2a上，获得pHR-hBRCA84D-mG2a的真核表达质粒。将阳性对照抗体hBRCA84D的轻链可变区序列克隆至含鼠K轻链恒定区的真核表达质粒pHR-mK上，获得pHR-hBRCA84D-mK的真核表达质粒。
2、抗原蛋白及阳性对照抗体的表达与纯化
(1)表达抗原蛋白的稳转细胞株构建
将真核表达质粒pTargeT-B7-H3在160V电压，15msec的方形脉冲下以电转的方式转染到CHO-K1细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所)，置于37℃，5％CO2浓度的培养箱中培养。24h后采用含1000ug/ml G418(Gibco，#10131-027)的培养基进行加压培养。转染16天后采用流式细胞术检测转染pool的阳性率，将阳性率较高的pool的细胞进行铺板(按照1x106个/ml的细胞密度，100ul/孔，铺96孔板)，采用hBRCA84D抗体和Goat pAb to Hu IgG(PE)(Abcam,ab98596)抗体与细胞孵育，以流式细胞仪(ACEABIO,Novocyte 2060R)检测585nm波长下mean值，使用GraphPad生成进行数据分析。将阳性细胞株进行亚克隆，挑选出克隆化的CHO-K1细胞株，该细胞株高水平表达B7-H3分子，命名为CHO-K1-B7-H3。
(2)标签抗原蛋白及阳性对照抗体的表达
在1L细胞培养瓶中接种密度为0.5x106个细胞/ml的293E细胞，加入新鲜的预热的FreeStyle 293表达培养基，使接种后总体积达到250mL，置37℃，8％CO2，加湿的CO2培养箱中培养过夜。取8.5mL FreeStyle 293表达培养基，加入1mg/ml的PEI溶液500ul，混合均匀，取250ug待转染质粒加入8.5ml FreeStyle 293表达培养基中，混合均匀，其中标签抗原蛋白质粒pHR-4Ig-B7-H3-hFc、pHR-4Ig-B7-H3-his、pHR-2Ig-B7-H3-hFc、pHR-2Ig-B7-H3-his分别转染；阳性对照抗体hBRCA84D重链质粒pHR-hBRCA84D-8mIgG1和轻链质粒pHR-hBRCA84D-hK共同转染；鼠源阳性对照抗体BRCA84D重链质粒pHR-hBRCA84D-mG2a和轻链质粒pHR-hBRCA84D-mK共同转染。将PEI与FreeStyle 293表达培养基的混合溶液加入到质粒中，混合均匀，然后加入细胞培养物中，置37℃，8％CO2，加湿的CO2培养箱中培养。在细胞转染后第1天和第3天对细胞进行补料，每瓶加入2.5ml的谷氨酰胺(母液浓度为200mM)和5ml的葡萄糖(母液浓度为180g/L)。当细胞活力降至65％～75％时，收集细胞上清。将细胞培养物1500rpm离心5min，收集上清，再8000rpm离心20min，收集上清。
(3)亲和层析柱纯化
利用AKTA(GE，AKTA pure-150)根据蛋白性质采用不同的亲和层析柱进行纯化(不同蛋白适配的亲和层析柱见表1)，具体纯化步骤如下：
表1不同蛋白适配的亲和层析柱
Figure BDA0002684251230000201
清洗：超纯水清洗设备及管路2min，流速10mL/min，后用0.1M NaOH清洗层析系统；
接柱：将层析柱接入层析设备，并用超纯水冲洗5min；后0.1M NaOH冲洗30min，保留时间5min；
平衡：20mM PB+0.15M NaCl，pH 7.2平衡5个CV(柱体积)；
上样：将细胞表达上清上样，保留时间5min；
后平衡：20mM PB+0.15M NaCl，pH 7.2平衡5个CV；
洗脱：50mM醋酸，pH＝3.4洗脱，保留时间5min。UV280至50mAu左右时开始收集，降至50mAu左右时停止收集。用1M Tris-HCl，pH 9.0将样品pH调节至7.0；
再平衡：20mM PB+0.15M NaCl，pH 7.2平衡3个CV，保留时间5min；
在线清洗：0.1M NaOH清洗30min，保留时间5min；
清洗保存：纯化水清洗10min，后20％乙醇2个CV。
实施例2单克隆抗体的制备
1、杂交瘤单克隆的制备
(1)动物免疫
采用不同标签的4Ig-B7-H3抗原和2Ig-B7-H3抗原蛋白与佐剂共同免疫实验动物，实验动物包括SJL品系小鼠/Balb/c品系小鼠/SD大鼠。免疫动物按照首次免疫使用50ug抗原免疫一只动物，后期均使用25ug抗原免疫一只动物。免疫佐剂可以是弗氏佐剂(Sigma)或Quick Antibody-Mouse5W(北京博奥龙免疫技术有限公司)。采用弗氏佐剂乳化抗原，将不同标签的4Ig-B7-H3或者2Ig-B7-H3抗原蛋白样品逐滴加入到佐剂溶液中，边滴加边涡旋以充分混合，佐剂使用剂量参考说明书进行。混合均匀形成油包水的乳状后免疫小鼠。采用Quick Antibody-Mouse5W作为佐剂，将不同标签的4Ig-B7-H3或者2Ig-B7-H3抗原蛋白样品与Quick Antibody-Mouse5W按照1:1的体积比进行混合，混匀后即采用肌肉注射的方式，免疫SD大鼠。
采用表达B7-H3的稳定转染细胞系CHO-K1-B7-H3免疫SD大鼠和Balb/c小鼠，使之产生抗B7-H3的抗体。用胰蛋白酶消化处理实施例1中获得的CHO-K1-B7-H3细胞，然后按照1000rpm离心5min，丢弃细胞上清，用PBS重悬细胞沉淀，取样用细胞计数仪计数，剩余细胞按照1000rpm离心5min，弃上清，用PBS重悬细胞沉淀，加入适量的PBS以获得1x108个细胞/ml的细胞悬液。实验组小鼠每只免疫1x107个细胞，实验组SD大鼠每只免疫2x107个细胞。免疫方案如表2所示：
表2动物免疫方案
组别 抗原 动物 佐剂 免疫途径
1 PBS SJL/Balb/c/SD大鼠 无 s.c./i.m.
2 4Ig-B7-H3-his/4Ig-B7-H3-hFc SJL/Balb/c 弗氏佐剂 s.c./i.m.
3 2Ig-B7-H3-his/2Ig-B7-H3-hFc Balb/c 弗氏佐剂 s.c./i.m.
4 4Ig-B7-H3-his/4Ig-B7-H3-hFc SD大鼠 Quick Antibody-Mouse5W i.m.
5 CHO-K1-B7-H3 Balb/c/SD大鼠 无 i.p.
*i.m.肌内注射；s.c.皮下注射；i.p.腹腔注射。
(2)杂交瘤融合
脾细胞的获取和制备：将加强免疫后的小鼠/大鼠处死后浸泡75％的酒精中。解剖取出脾脏，用研磨棒研磨后，经细胞筛网过滤后制备成单细胞悬液。将脾细胞悬液2000rpm离心5min，弃上清。加入2mL红细胞裂解液，室温裂解红细胞2min，加入PBS至20mL，1500rpm离心7min，弃上清，重悬后进行活细胞计数。收集培养瓶中的Sp2/0细胞，1000rpm离心5min后弃上清，重悬后进行活细胞计数。按脾细胞：Sp2/0细胞＝1:1的比例混合细胞，1500rpm离心7min后弃上清。用20mL电转缓冲液重悬细胞，1500rpm离心7min。弃上清，重复一次。分别用适量电转缓冲液重悬细胞，保证细胞浓度2×107个细胞/mL左右。把细胞悬液加入9mL电转融合槽中融合。融合后将细胞悬液转入到含有20％FBS的15mL RPMI 1640完全培养基中，室温放置20min。用含1×HAT、1×BIOMYC3、20％FBS的RPMI 1640培养基重悬融合细胞。按100μl/孔将细胞悬液加到若干块96孔细胞培养板中，保证每孔细胞量约为4×104个细胞/孔，置于37℃细胞培养箱中培养。5天后补加100μL/孔RPMI 1640完全培养基(含20％FBS，1×HAT，1×BIOMYC-3)。
(3)杂交瘤及亚克隆筛选
融合一周后，取杂交瘤母克隆的细胞培养上清，通过ELISA筛选结合4Ig-B7-H3-his蛋白和食蟹猴B7-H3蛋白的杂交瘤母克隆。进一步通过流式细胞术筛选出能结合CHO-K1-B7-H3稳转细胞株的母克隆。将筛选阳性的母克隆扩至24孔板，选择培养2天的母克隆培养上清，与T细胞进行共培养，检测培养上清中IFN-γ的释放量。具体实验操作如下所述：
1.Day 1以1ug/ml anti-CD3e(R&D)包被T25细胞培养瓶，4℃条件下孵育过夜，于实验前弃去液体，用PBS缓冲液洗3次，待用。
2.Day 2复苏CD8+T细胞(用CD3和CD28诱导扩增获得，90％FBS+10％DMSO冻存)，采用IMDM+10％FBS+游离100ng/ml SEB+4ng/ml IL-2+100x双抗的培养基重悬细胞，于步骤1包被的T25中培养，培养密度2-3×106cells/ml，培养48h。
3.Day 3按照1ug/ml anti-CD3e和10ug/ml 4Ig-B7-H3-his共同包被96孔板，设置包被空白组，anti-CD3e组，anti-CD3e+B7-H3-4Ig-his组，4℃条件下过夜孵育。
4.Day 4将杂交瘤培养上清按照100ul/孔加至上一步的96孔板中，对照孔加入100ul杂交瘤培养基，于37℃孵育30min。
5.取出已经刺激2天的CD8+T，将细胞密度调整至1×106cell/ml，按照100ul/孔加入到96孔板，培养48h。
6.Day 6培养基上清中IFN-γ释放的检测，按照R&D的duset(DY285B)检测试剂盒，检测培养基上清中IFN-γ。
通过Elisa和FACS筛选出具有结合能力的母克隆，进一步评估母克隆分泌的细胞上清诱导细胞因子IFN-γ释放的水平，筛选出能促进IFN-γ释放的阳性母克隆。利用有限稀释法将阳性母克隆进行亚克隆，培养一周后利用ELISA检测亚克隆上清与4Ig-B7-H3分子的结合活性，进而获得分泌抗B7-H3抗体的单克隆细胞株。
2、亚型的鉴定
参照鼠抗体亚型鉴定试剂盒SBA Clonotyping Systerm-C57BL/6-HRP(SouthernBiotech，货号：5300-05B)说明书对抗体进行亚型鉴定，结果如表3所示：
表3抗体亚型鉴定结果
命名 抗体亚型
SHS007-17 IgG/k
SHS007-39 IgG/k
SHS007-51 IgG/k
SHS007-65 IgG/k
3、单克隆抗体的制备
根据亚克隆上清活性分析结果确定单克隆抗体母克隆株17、39、51、65，将其扩大培养。培养条件是含有10％胎牛血清、1x NAEE、1x丙酮酸钠、1％青链霉素双抗的1640培养基，待细胞汇合度大于>80％时，进将细胞传代扩培，待培养至约50ml时收集上清，纯化抗体。获得抗体经SDS-PAGE凝胶电泳确定纯度良好。
4、单克隆抗体测序
将经亚克隆操作的阳性杂交瘤细胞进行扩大培养，取适量细胞按RNeasy PlusMini Kit(Qiagen，74134)试剂盒说明书提取总RNA，利用Prime Script 1st strand cDNASynthesis Kit(Takara，6110A)反转录试剂盒合成cDNA第一条链。
根据小鼠抗体亚型可变区设计特异性引物(5’端含有用于与真核表达载体发生同源重组的同源臂序列)，以cDNA为模板进行抗体可变区基因的PCR扩增，从而分别获得小鼠抗体轻链与重链可变区的基因片段；设计引物(参考文献：1.Anke Krebber,SusanneBornhauser,Jorg Burmester et al.Reliable cloning of functional antibodyvariable domains from hybridomas and spleen cell repertoires employing areengineered phage display system.Journal of Immunological Methods,1997,201:35–55；2.Simon
Figure BDA0002684251230000241
Antibody variable-regionsequencing as a method for hybridoma cell-line authentication,2008,78:1071–1078)，进行DNA测序获得序列，测序结果见表4。
表4抗B7-H3鼠源单克隆抗体序列表
抗体 重链可变区氨基酸序列 轻链可变区氨基酸序列
SHS007-17 SEQ ID NO:26 SEQ ID NO:27
SHS007-39 SEQ ID NO:28 SEQ ID NO:29
SHS007-51 SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:31
SHS007-59 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:34
SHS007-65 SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:36
SHS007-72 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO:38
SHS007-90 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:40
SHS007-95 SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:42
SHS007-108 SEQ ID NO:43 SEQ ID NO:44
实施例3嵌合抗体的构建
将表4测序获得的小鼠抗体重链可变区基因片段克隆至含有特定突变位点(K214R,L235V,F243L,R292P,Y300L,D356E,L358M,P396L)的重链恒定区的真核表达质粒(pHR-8mIgG1)上，将表4测序获得的小鼠抗体轻链可变区基因片段克隆至含人轻链恒定区的真核表达质粒(pHR-hK)上。分别将构建的抗体重轻链质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，将混合液均匀涂布于含有相应抗生素的琼脂平板表面，于37℃恒温培养箱过夜培养后分别挑取若干单菌落进行DNA测序。将测序正确的阳性克隆接种于含有相应抗生素的2×YT液体培养基中，于37℃振荡培养12小时以上，然后收集菌体进行质粒提取，从而获得嵌合抗体轻链与重链的表达质粒，使用核酸定量分析仪检测质粒的浓度与纯度。
将嵌合抗体重轻链质粒共转染HEK293E细胞，表达纯化获得抗体，将嵌合抗体分别命名为SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-CHI、SHS007-65-CHI，然后进行纯度检测、活性分析及亲和力的检测。
利用定点突变的方法，将嵌合抗体SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-CHI、SHS007-65-CHI进行基因突变，以筛选更优的抗体。SHS007-51-CHI轻链CDR第34位G突变为K，抗体稳定性提高，标记为SHS007-51-G34K-CHI。嵌合抗体测序结果见表5。
表5抗B7-H3嵌合抗体序列表
嵌合抗体 重链可变区氨基酸序列 轻链可变区氨基酸序列
SHS007-17-CHI SEQ ID NO:26 SEQ ID NO:27
SHS007-39-CHI SEQ ID NO:28 SEQ ID NO:29
SHS007-51-CHI SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:31
SHS007-51-G34K-CHI SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:32
SHS007-65-CHI SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:36
实施例4人源化抗体的构建及生产
根据嵌合抗体的免疫活性和杀伤活性分析，选择SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-G34K-CHI、SHS007-65-CHI进行人源化抗体改造。
抗体的人源化改造，首先是通过与免疫基因数据库(IMGT)中的小鼠抗体序列进行比对，确认SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-G34K-CHI、SHS007-65-CHI抗体可变区的鼠源种系，经过同源比对，SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-G34K-CHI、SHS007-65-CHI抗体的重链可变区序列的FR区分别与小鼠抗体种系基因(IGHV1-69*02、IGHV1-2*02、IGHV3-21*01、IGHV3-48*01)最为相似；抗体轻链可变区的FR序列则分别与小鼠抗体(IGKV2-28*01、IGKV3-11*01、IGKV2-30*02、IGKV3-11*01)最为相似。以SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-G34K-CHI、SHS007-65-CHI抗体框架区序列FR1-FR3作为模板，在人框架区库中寻找3D结构相似但是免疫原性较低的全人框架替代SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-G34K-CHI、SHS007-65-CHI的FR1-FR3序列，重链/轻链全长序列进行3D建模并和原抗体重链/轻链序列进行结构比对分析，综合考虑抗原性和3D结构相似度，最终选择SHS007-17-CHI的4条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:45、46、47、48)和3条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:49、50、51)、SHS007-39-CHI的6条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:52、53、54、55、56、57)和5条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:58、59、60、61、62)、SHS007-51-G34K-CHI的2条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:63、64)和6条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70)及SHS007-65-CHI的3条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:71、72、73)和6条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:74、75、76、77、78、79)进行下一步优化。SHS007-17-CHI、SHS007-39-CHI、SHS007-51-G34K-CHI、SHS007-65-CHI的人源化抗体非CDR区序列均达到95％以上人源化。
将以上设计好的人源化抗体轻链与重链可变区氨基酸序列反转录成相对应的核苷酸序列，并生成相邻片段之间含有互补序列的寡核苷酸片段，通过Overlap PCR将寡核苷酸片段退火后连接起来，再利用特异性引物(5’端含有用于与真核表达载体发生同源重组的同源臂序列)扩增出完整的轻链与重链可变区核苷酸片段；将纯化后的轻链可变区核苷酸片段与线性化的含有人K轻链恒定区的真核表达质粒(pHR-hK)共转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，将纯化后的重链可变区核苷酸片段与人IgG1重链恒定区的真核表达质粒(pHR-IgG1)共转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，分别将转化质粒的感受态细胞均匀涂布于含有相应抗生素的琼脂平板表面，于37℃恒温培养箱过夜培养后分别挑取若干单菌落进行DNA测序。
将测序正确的阳性克隆接种于含有相应抗生素的2×YT液体培养基中，于37℃振荡培养12小时以上，然后收集菌体进行质粒提取，从而获得人源化抗体轻链与重链表达质粒，使用核酸定量分析仪检测质粒的浓度与纯度。
将质粒转染HEK293E细胞，表达纯化获得大量抗体，进行纯度检测、活性分析及亲和力的检测。
挑选纯度、活性和亲和力均较好的人源化抗体，标记为hu17-00、hu39-01、hu65-13、hu51-G34K-12，序列见表6。
表6抗B7-H3人源化抗体序列表
Figure BDA0002684251230000261
Figure BDA0002684251230000271
实施例5与人B7-H3结合活性测定(ELISA)
采用ELISA分析抗体的结合活性。将人4Ig-B7-H3-His蛋白或2Ig-B7-H3-His蛋白(1ug/孔，实施例1、2中制得)包被到96孔酶标板，于4℃条件下孵育过夜。用1xPBST清洗3次后用5％的脱脂牛奶37℃封闭2h。用1xPBST清洗3次后，本发明提供的抗B7-H3抗体作为一抗从2μg/mL开始，5倍梯度稀释加入酶标板，共8个浓度，浓度分别为2000ng/mL、400ng/mL、80ng/mL、16ng/mL、3.2ng/mL、0.64ng/mL、0.128ng/mL、0.0256ng/mL，37℃孵育2h，阳性对照抗体为hBRCA84D；用1xPBST清洗5次后，二抗使用Anti-Human IgG HRP(Jackson，109-035-003，1:5000)，37℃孵育1h。用1xPBST清洗5次后，加入显色液TMB，终止后利用酶标仪(thermo，Multiskan FC)读取OD450值。使用GraphPad生成EC50，结果如图1、2所示。
实验结果显示，本发明提供的人源化抗B7-H3抗体hu51-G34K-12、hu65-13均具有与人4Ig-B7-H3、2Ig-B7-H3结合的能力，且结合能力与阳性对照抗体hBRCA84D相当。
实施例6与食蟹猴B7-H3结合活性测定(ELISA)
采用protein based Elisa分析抗体的结合活性。食蟹猴B7-H3-His(0.5μg/孔，Sino Biological，Cat.No.90806-C08H)包被96孔酶标板。本发明提供的抗B7-H3抗体作为一抗从2μg/mL开始，5倍梯度稀释加入酶标板，共8个浓度，浓度分别为2000ng/mL、400ng/mL、80ng/mL、16ng/mL、3.2ng/mL、0.64ng/mL、0.128ng/mL、0.0256ng/mL，37℃孵育2h，阳性对照抗体为hBRCA84D。二抗使用Anti-Human IgG HRP(Jackson，109-035-003，1:10000)，加入显色液TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)，终止后利用酶标仪(thermo，Multiskan FC)读取OD450值。使用GraphPad生成EC50，结果如图3所示。
实验结果显示，本发明提供的人源化抗B7-H3抗体hu51-G34K-12、hu65-13均具有与食蟹猴B7-H3结合的能力，且结合能力与阳性对照抗体hBRCA84D相当。
实施例7与肿瘤细胞表面B7-H3结合的测定(FACS)
采用FACS分析抗体与肿瘤细胞表面B7-H3的结合活性。FACS检测的平均荧光强度(MFI)和EC50表示抗体与细胞的结合活性。786-0、MDA-MB-231细胞消化后，用2％FBS-PBS的溶液重悬，计数。raji-B7-H3细胞收集细胞后，用2％FBS-PBS的溶液重悬，计数。将上述细胞按照每孔1x105个细胞的方式铺细胞板，本发明提供的抗B7-H3抗体作为一抗从20μg/ml开始，梯度稀释加入细胞板，共8个浓度，浓度分别为20000ng/mL、10000ng/mL、2000ng/mL、400ng/mL、80ng/mL、16ng/mL、3.2ng/mL、0.64ng/mL，4℃条件下孵育1h，阳性对照抗体为hBRCA84D；二抗使用PE-Anti-Human IgG(Biolegend，Cat.No.409303，1.25μl/孔)，洗涤后使用流式细胞仪检测抗体与细胞表面结合产生的荧光强度。使用GraphPad计算EC50，结果如表7a和7b所示。
表7a与肿瘤细胞表面B7-H3结合的测定
Figure BDA0002684251230000281
表7b与肿瘤细胞表面B7-H3结合的测定
Figure BDA0002684251230000282
实验结果显示，本发明提供的人源化抗B7-H3抗体hu51-G34K-12、hu65-13均可与肿瘤细胞表面B7-H3结合，与肿瘤细胞的结合密度显著高于对照抗体hBRCA84D，结合EC50和Emax均明显优于对照抗体hBRCA84D。
实施例8固定抗体法Biacore亲和力测定
利用Biacore对实施例4中制得的人源化抗B7-H3抗体进行亲和力测定。先将抗原4Ig-B7-H3-His偶联至CM5芯片(GE，Cat.No.BR100012)表面，并用乙醇胺封闭未偶联蛋白的活性基团。待基线平稳后，分别将hu39-01、hu65-13、hBRCA84D抗体进行等比梯度稀释，稀释后的各浓度抗体蛋白按顺序放置于仪器的进样盘上，设置程序分别进样。按Biacore X100的操作规程进行hu51-G34K-12、hu65-13、hBRCA84D抗体与4Ig-B7-H3-His抗原亲和力测定，具体参数及实验结果如表8所示。
表8与人B7-H3蛋白的亲和力测定
Figure BDA0002684251230000291
实验结果显示，hu51-G34K-12和hu65-13与人4Ig-B7-H3蛋白结合具有良好的亲和力，且亲和力数值与阳性对照抗体hBRCA84D相当。
实施例9 IFN-γ释放检测B7-H3鼠单抗、人源化抗体的阻断活性
采用Ficoll(GE Healthcare,Cat.No.10268731)分离得到人外周血单个核细胞(PBMC)，将分离获得的PBMC用含10％FBS的IMDM(Life technologies，12440053)完全培养基重悬，调整密度为1*106cell/mL。按照100μL/孔将PBMC细胞加入到96孔板中，静置30min。将待检测抗体、Isotype抗体用相同培养基配制为终浓度20μg/ml，加入到96孔板，于37℃恒温培养箱中培养1h。用培养基配制终浓度为100ng/ml的SEB(Toxin techonology，BT202)溶液，加入96孔板对应孔中。上述96孔板于恒温培养箱中共培养72h后，按照DuoSet检测试剂盒(R&D，DY285B)说明书检测上述培养上清中的IFN-γ浓度，如图4、5结果显示抗人B7-H3鼠单抗SHS007-39、51、59、65、72等，在donor B和donor C来源的PBMC-SEB体系中，均能增加该体系中细胞因子IFN-γ的释放。图6、7结果显示抗人B7-H3人源化抗体hu51、hu65增强PBMC-SEB实验体系中IFN-γ的释放。
实施例10抗体依赖细胞介导的细胞毒ADCC实验(LDH法)
人肾癌细胞786-0高表达人B7-H3，将786-0细胞按照20000个细胞每孔铺96孔板。用热灭活的胎牛血清(FBS，Gibco，Cat.No.10091-148)配置含2％FBS的RPMI-1640培养基。将SHS007-17CHI、SHS007-39CHI、SHS007-51CHI、SHS007-65CHI、hBRCA84D抗体10倍梯度稀释溶于上述培养基，于37℃恒温培养箱孵育1h。按照Ficoll(GE Healthcare,Cat.No.10268731)试剂盒说明，提取人外周血PBMC作为效应细胞，将PBMC细胞和上述抗体溶液加入到铺有786-0细胞的96孔细胞板。将细胞板在37℃培养箱内培养4h，按照Cytotoxicity LDH Assay
Figure BDA0002684251230000301
(同仁化学，CK12)说明书，检测细胞毒性。计算本发明抗体杀伤EC50降低倍数(即阳性对照hBRCA84D的EC50值与本发明提供抗体EC50值的比值)，实验结果如表9所示。
表9嵌合抗体ADCC杀伤活性测定
Figure BDA0002684251230000302
实验结果显示，与阳性对照hBRCA84D抗体相比，本发明提供的抗体具有更优异的杀伤EC50值，大大提高了ADCC杀伤活性。
实施例11人源肿瘤细胞小鼠移植瘤模型的抗肿瘤试验
1、实验材料
(1)实验细胞及动物
人恶性胶质瘤U87细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；
人肾癌细胞786-0细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；
人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；SCID-Beige小鼠，雌性，6-8周龄，体重18-20克，购自上海灵畅实验动物有限公司；
(2)供试品及对照品
阴性对照品Isotype IgG1(货号C0001-4)购自中美冠科生物技术有限公司。在小鼠移植瘤模型中hBRCA84D-IgG1效果远优于hBRCA84D，故使用hBRCA84D-IgG1作为阳性对照品。hBRCA84D-IgG1为利用对标抗体hBRCA84D可变区序列构建的人IgG1形式单克隆抗体，恒定区与本发明的人IgG1嵌合抗体相同。
试验前，将本发明的抗B7-H3嵌合抗体(SHS007-39-IgG1、SHS007-65-IgG1)用PBS配制为1mg/mL，Isotype IgG1和hBRCA84D-IgG1配制为1mg/mL。
2、实验方法
(1)U87移植瘤模型
将人肿瘤细胞U87细胞接种于小鼠的右后边，接种细胞数目为5×106/只。待肿瘤生长至平均体积达140mm3时开始分组，尾静脉给药每周2次，每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。记录连续给药24天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线，结果如表10所示。
表10人恶性胶质瘤U87移植瘤模型抗肿瘤试验结果
Figure BDA0002684251230000311
(2)786-0移植瘤模型
将人肿瘤细胞786-0细胞接种于小鼠的右后边，接种细胞数目为1×107/只。接种2周后，用无菌手术器械将786-O细胞接种长成的瘤块取下，在生理盐水中将生长旺盛期的瘤组织切成30mm3左右，在无菌条件下，接种于小鼠右后背。待肿瘤生长至平均体积达160mm3时开始分组，尾静脉给药每周2次，每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。记录连续给药19天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线，结果如表11所示。
表11人肾癌细胞786-0移植瘤模型抗肿瘤试验结果
Figure BDA0002684251230000321
(3)MDA-MB-231移植瘤模型
将人肿瘤细胞MDA-MB-231细胞接种于小鼠的右后边，接种细胞数目为8×106/只。接种2周后，用无菌手术器械将MDA-MB-231细胞接种长成的瘤块取下，在生理盐水中将生长旺盛期的瘤组织切成30mm3左右，在无菌条件下，接种于小鼠右后背。待肿瘤生长至平均体积达150mm3时开始分组，尾静脉给药每周2次，每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。记录连续给药21天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线，结果如表12所示。
表12人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231移植瘤模型抗肿瘤试验结果
Figure BDA0002684251230000322
实验结果显示，本发明提供的抗体在人恶性胶质瘤U87细胞、人肾癌细胞786-0细胞、人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231接种的SCID-Beige小鼠移植瘤模型中具有抑制肿瘤生长的作用。抗体SHS007-39-CHI和SHS007-65-IgG1的抑瘤作用优于对照抗体hBRCA84D-IgG1。本发明提供的抗B7-H3抗体具有更加显著的抑制肿瘤生长的作用。
实施例12人源肿瘤细胞小鼠移植瘤模型的抗肿瘤试验
1、实验材料
(1)实验细胞及动物
人肾癌细胞786-0细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；SCID-Beige小鼠，雌性，6-8周龄，体重18-20克，购自上海灵畅实验动物有限公司；
(2)供试品及对照品
对照品Isotype IgG1(货号C0001-4)购自中美冠科生物技术有限公司，用作阴性对照品；对照品hBRCA84D-IgG1为利用对标抗体hBRCA84D可变区序列构建的人IgG1形式单克隆抗体，恒定区与本发明的人源化抗体相同，用作阳性对照；
试验前，将本发明的人源化抗B7-H3抗体hu65-13、hu51-G34K-12分别用PBS配制为1mg/mL或者2mg/ml，Isotype IgG1和hBRCA84D-IgG1配制为1mg/mL或者2mg/ml。
2、实验方法
(1)786-0移植瘤模型
将人肿瘤细胞786-0细胞接种于小鼠的右后边，接种细胞数目为1×107/只。接种2周后，用无菌手术器械将786-O细胞接种长成的瘤块取下，在生理盐水中将生长旺盛期的瘤组织切成15mm3左右，在无菌条件下，接种于小鼠右后背。待肿瘤生长至平均体积达100mm3时开始分组，尾静脉给药每周2次，给药至第21天，给药频率降低为一周给药一次。每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。记录连续给药36天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线，结果如表13所示。
表13人肾癌细胞786-0移植瘤模型抗肿瘤试验结果
Figure BDA0002684251230000331
Figure BDA0002684251230000341
(2)MDA-MB-231移植瘤模型
将人肿瘤细胞MDA-MB-231细胞接种于小鼠的右后边，接种细胞数目为8×106/只。接种2周后，用无菌手术器械将MDA-MB-231细胞接种长成的瘤块取下，在生理盐水中将生长旺盛期的瘤组织切成30mm3左右，在无菌条件下，接种于小鼠右后背。待肿瘤生长至平均体积达100mm3时开始分组，尾静脉给药每周2次，每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。记录连续给药25天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线，结果如表14所示。
表14人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231移植瘤模型抗肿瘤试验结果
Figure BDA0002684251230000342
实验结果显示，本发明提供的人源化抗体hu51-G34K-12和hu65-13在人肾癌细胞786-0细胞、人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231接种的SCID-Beige小鼠移植瘤模型中具有抑制肿瘤生长的作用。hu51-G34K-12和hu65-13的抑瘤作用优于对照抗体hBRCA84D-IgG1。本发明提供的抗B7-H3抗体具有更加显的著抑制肿瘤生长的作用。
以上实施例证明本发明提供的抗B7-H3抗体具有显著的抗肿瘤作用，可明显抑制肿瘤增长，提示该抗体可在制备抗肿瘤药物中的应用，具有可预期的市场前景。
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。
序列表
<110> 南京圣和药业股份有限公司
<120> 一种抗B7-H3抗体及其应用
<141> 2020-09-16
<150> 201910872843.3
<151> 2019-09-16
<160> 96
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Val
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 2
Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Phe Ile
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 3
Phe Pro Lys Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 4
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<212> PRT
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<400> 4
Gln Ser Ile Val His Ser Asn Arg Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 5
Gly Val Ser
1
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<211> 9
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<400> 6
Phe Gln Ser Thr Leu Phe Pro Trp Thr
1 5
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<211> 8
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<211> 8
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Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr
1 5
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
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<400> 9
Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 10
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 11
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<400> 12
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
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<211> 8
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<213> 鼠源(Mus musculus)
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly
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<211> 8
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 14
Ile Asn Ser Gly Asp Asn Tyr Ser
1 5
<210> 15
<211> 16
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 15
Ala Arg Pro His Ile Phe Tyr Tyr Gly Ser Pro Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 16
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
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<211> 11
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 17
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Lys Asn Thr Tyr
1 5 10
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<211> 3
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 18
Lys Val Ser
1
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 19
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr
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<211> 8
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
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Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 21
Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 22
Ala Thr Met Val Thr Arg Trp Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 23
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 24
Asp Thr Ser
1
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 25
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 26
<211> 117
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 26
Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Val Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Phe Ile His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Phe Pro Lys Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 27
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Tyr Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Met Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser
85 90 95
Thr Leu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 118
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 28
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
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Gly Gly Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Ala Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
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Thr Leu Ile Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 29
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Arg
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
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Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Arg Gly Ser
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Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Met Glu Ala Glu
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Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 30
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
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Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ile Leu Tyr
65 70 75 80
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 31
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Asp Gln Ala Ser Val Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
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<213> 鼠源(Mus musculus)
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 33
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
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Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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<400> 34
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1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 36
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
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Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
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Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Asn Met Glu Ala Glu
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Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 37
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Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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50 55 60
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Ala Arg Lys Ser Phe Gly Asp Phe Ile Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Thr Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 123
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 39
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ala Val Gln Met Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Ile Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Phe Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Asn Ser Tyr Gly His Tyr Gly Phe Ala Leu Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 40
<211> 106
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 40
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Thr Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Pro Thr Ser Ser Val Asn Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Ser Ser Ser Leu Val Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Val Arg
100 105
<210> 41
<211> 121
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 41
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Glu Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Arg Tyr Gly Asp Pro Thr Asn Phe Pro Asp Asn Met
50 55 60
Arg Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His His Phe Asp Gly Thr Ser Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 108
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 42
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ile
20 25 30
Asp Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Phe Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Phe Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 119
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Leu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile His Tyr Gly Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Val Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Leu Ser Tyr Val Gly Trp Phe Ala His Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Glu
1 5 10 15
Glu Ile Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Asn Ile Gly Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Arg Leu Gln Val
65 70 75 80
Glu Asp Ile Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Ser Thr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 45
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
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20 25 30
Val Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 117
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
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35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Phe Ile His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
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20 25 30
Val Val Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
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100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser
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Thr Leu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 50
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Tyr Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Leu Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser
85 90 95
Thr Leu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 51
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Tyr Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Leu Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser
85 90 95
Thr Leu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 52
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 55
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
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35 40 45
Gly Gly Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Leu Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 57
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Gly Trp Phe Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
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Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
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Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 60
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
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Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
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100 105
<210> 62
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
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100 105
<210> 63
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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115 120
<210> 64
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 65
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 66
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 67
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 68
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 69
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 70
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Val Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 71
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Val Thr Arg Trp Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 72
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Met Val Thr Arg Trp Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 73
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Met Val Thr Arg Trp Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 74
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 76
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 77
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 78
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 79
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 80
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
caggtgcagc tggttcagag cggcgctgag gtgaagaagc ccggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggctt tacctttacc gactacgtgg taagctgggt gaggcaggca 120
ccgggccagg gcctggagtg gatgggcgag atctaccctg gcggaggatt cattcactac 180
aacgagaagt tcaagggcag ggtgaccatc accgctgaca agagcacaag caccgcctac 240
atggagctgt caagcctgag gagcgaggac accgccgtgt attactgcgc caggttcccc 300
aaatactatt tcgactactg gggccaaggc accaccgtga ccgtgagcag c 351
<210> 81
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
gacatcgtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga ccccaggcga gcccgccagc 60
atcagctgca ggagcagcca gagcatcgtg cacagcaaca ggtacaccta cctggagtgg 120
tacctgcaga agcccggtca gtcaccacag ctgctgatct acggcgtgag caaccgcttc 180
agcggcgtgc ccgacaggtt tagcggaagc ggcagcggga ccgacttcac cctgaagatc 240
tctagggtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgct tccagtctac cttgttcccc 300
tggaccttcg gccagggcac caaggtggag atcaag 336
<210> 82
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
caggtgcagc tggtgcagag tggggccgag gtgaaaaagc ccggtgccag cgtgaaagtg 60
agctgcaagg ccagcggcta taccttcacc gagtacacca tccattgggt gaggcaggca 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggcggt ctgaacccca acaccggcgg aaccacctac 180
aaccaaaagt tcaaggaccg cgtaactatg accagggaca ccagcatcag caccgcctac 240
atggagctga gcaggctgag gagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caggaagggc 300
ggctggttct tcttggacta ctggggccaa ggcaccttgg tgactgttag ctct 354
<210> 83
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
gagatcgtgc tgacccagag ccccgctact ctgagcctga gccctggcga gagggccacg 60
ctgagctgct ctgcctcaag cagcgtgagc tacatgcatt ggtatcagca gaagcccgga 120
caggccccca ggcgcttgat ctacgacacc agcaagctgg cctctggcat ccccgccagg 180
ttcagcggca gcggctccgg caccgacttc accctgacca taagcagcct ggagcccgag 240
gacttcgccg tgtactactg ccagcagtgg agcagcaacc cccccacctt cggcggaggc 300
accaaggtgg agatcaag 318
<210> 84
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
gaggtgcagc tggtggagag cggtggcggt ctggtgaaac ccggtggcag cctgaggctg 60
agttgtgcgg cgagcggctt caccttcagc agcttcggca tgagctgggt gaggcaagcc 120
cctggcaagg gcttggagtg ggtggctacc atcaacagcg gcgacaacta cagctacagc 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgcgaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga acagccttag ggccgaagac accgccgtgt actactgcgc caggccccac 300
atcttctact acggctcccc cgcatggttc gcctactggg gccagggcac cctggtgact 360
gtgagcagc 369
<210> 85
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
gacgtggtga tgacccagag ccccctcagc ctgcccgtga ccctcggaca gccggcaagc 60
atcagctgca ggagcaggca gagcctggtg cacagcaaca agaacaccta cctgcactgg 120
ttccagcaaa ggcctggcca atcacccagg ctgctgatct acaaggtgag caacaggttc 180
agcggcgtgc ccgacaggtt tagtggcagt ggctcaggca ccgattttac cctgaagatt 240
agcagggtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgca gccagagcac ccatgtgcct 300
ctgaccttcg gtggcggaac taaggtggag atcaag 336
<210> 86
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
gaggtgcagc tggtggagag cggaggcggc ctggtacagc ccggtggctc actgaggctg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc gactacggca tccactgggt gcgacaagcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagctac atcagcagcg gcagcaacac catctactac 180
gccgacacag tgaagggcag gttcaccatt tctagggaca acgccaagaa ctctctttac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaagac accgccgtgt actactgcgc caccatggtg 300
accaggtggt tctattacgc tatggactac tggggccagg gcaccaccgt gactgtgagc 360
agc 363
<210> 87
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
gagatcgtgc tgacccagag ccccgcaaca ctgagcctga gtcccggcga gagggccact 60
ctgagctgct cagccagcag cagcgtgagc tatatgtatt ggtatcagca gaagcctggc 120
caagccccca ggcggttgat ctacgacacc agcaagctgg caagcggcgt ccccgccagg 180
ttcagtggta gcggcagcgg gacagactac accctgacca tctccagcct tgagcccgag 240
gacttcgccg tgtactactg ccagcaatgg agcagcaacc cccccacctt cggacaggga 300
accaaactgg aaatcaag 318
<210> 88
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Ile Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Pro Gln Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Glu Val Gln Val Pro
210 215 220
Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu Arg Cys
225 230 235 240
Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn Leu Ile
245 250 255
Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr Glu Gly
260 265 270
Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe Pro Asp
275 280 285
Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Val
290 295 300
Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp Phe Gly
305 310 315 320
Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys Pro Ser
325 330 335
Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr Val Thr
340 345 350
Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val Phe Trp
355 360 365
Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr Ser Gln
370 375 380
Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu Arg Val
385 390 395 400
Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val
405 410 415
Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln Pro Met
420 425 430
Thr Phe Pro Pro Glu Ala Leu Trp Val Thr Val Gly Leu Ser Val Cys
435 440 445
Leu Ile Ala Leu Leu Val Ala Leu Ala Phe Val Cys Trp Arg Lys Ile
450 455 460
Lys Gln Ser Cys Glu Glu Glu Asn Ala Gly Ala Glu Asp Gln Asp Gly
465 470 475 480
Glu Gly Glu Gly Ser Lys Thr Ala Leu Gln Pro Leu Lys His Ser Asp
485 490 495
Ser Lys Glu Asp Asp Gly Gln Glu Ile Ala
500 505
<210> 89
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Val Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Gly Gln Pro Met Thr Phe Pro
210 215
<210> 90
<211> 1602
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
atgctgcgga ggagaggaag ccctggcatg ggtgtccatg tgggggcagc acttggagcc 60
ctgtggtttt gcctcaccgg ggcactcgag gtccaggtgc ctgaggatcc ggttgtggcc 120
ctcgtaggga cagacgcgac tctttgctgc tccttctctc ccgagcctgg gtttagcctt 180
gcccagctca acctgatttg gcagctgacg gacaccaagc agttggtcca ctctttcgcc 240
gagggacaag accagggcag cgcgtatgcc aacagaaccg ccctttttcc tgatctcttg 300
gctcaaggca acgctagtct gcggctgcaa agggtccggg tggctgacga agggagtttc 360
acctgctttg tgagcatccg agactttggt agcgcagccg ttagtttgca ggtggcagcc 420
ccctatagca agccatccat gaccctggaa cccaataagg atctgaggcc gggtgacacg 480
gtgaccatca cgtgtagcag ctatcagggc tatccagagg ctgaggtttt ctggcaggac 540
ggccaaggcg tgccgcttac cggaaacgtg accacgagcc aaatggcgaa tgaacaaggg 600
ctgtttgacg tacactctat cctgagagtg gtgttgggcg ctaacgggac ctatagttgt 660
ttggtcagaa atcccgtcct tcaacaagac gcgcatagca gcgtcacgat cacgccccaa 720
aggagcccga caggggccgt agaggttcaa gtacccgaag acccagtcgt ggcgttggtt 780
ggaacagatg ccaccctgag gtgtagcttt agcccggaac ccggcttctc cctggcccaa 840
cttaacttga tctggcaatt gaccgacact aagcagctgg tgcacagctt cacagagggc 900
agggatcaag ggagcgccta cgcaaatagg accgcactgt ttcccgatct gctcgcccaa 960
ggtaacgcgt ccctgagact gcagcgggtg agggtcgccg acgagggatc ttttacatgt 1020
tttgttagta ttcgcgactt cggttcagcc gccgtgagcc tgcaagttgc agcgccatat 1080
tctaaacctt ctatgacatt ggaaccaaat aaagaccttc gcccaggcga cacagtaaca 1140
ataacgtgtt ctagttacag gggatacccg gaggcggagg tattttggca agacggtcaa 1200
ggtgtgcccc tgaccggcaa tgtaaccacc agccagatgg ctaatgagca aggcctgttc 1260
gacgtgcact cagtattgcg ggtcgtgctt ggcgcgaatg gcacgtattc ttgtctggtg 1320
aggaatccag ttctgcaaca ggacgcccac ggaagtgtta ccataacagg gcaaccgatg 1380
acttttcccc ccgaagcact ctgggtaacc gtaggcctga gtgtgtgcct catcgcgctt 1440
ttggtggcac tggcgttcgt gtgctggagg aagatcaaac aaagctgcga agaggagaac 1500
gccggtgccg aggaccaaga tggagaaggc gagggtagca aaacggcact gcaacccctg 1560
aaacacagcg acagcaagga agacgatgga caggagatag cc 1602
<210> 91
<211> 836
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Ile Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Pro Gln Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Glu Val Gln Val Pro
210 215 220
Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu Arg Cys
225 230 235 240
Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn Leu Ile
245 250 255
Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr Glu Gly
260 265 270
Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe Pro Asp
275 280 285
Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Val
290 295 300
Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp Phe Gly
305 310 315 320
Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys Pro Ser
325 330 335
Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr Val Thr
340 345 350
Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val Phe Trp
355 360 365
Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr Ser Gln
370 375 380
Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu Arg Val
385 390 395 400
Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val
405 410 415
Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln Pro Met
420 425 430
Thr Phe Pro Pro Glu Ala Leu Trp Val Thr Val Gly Leu Ser Val Cys
435 440 445
Leu Ile Ala Leu Leu Val Ala Leu Ala Phe Val Cys Trp Arg Lys Ile
450 455 460
Lys Gln Ser Cys Glu Glu Glu Asn Ala Gly Ala Glu Asp Gln Asp Gly
465 470 475 480
Glu Gly Glu Gly Ser Lys Thr Ala Leu Gln Pro Leu Lys His Ser Asp
485 490 495
Ser Lys Glu Asp Asp Gly Gln Glu Ile Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro
500 505 510
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
515 520 525
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
530 535 540
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
545 550 555 560
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
565 570 575
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
580 585 590
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
595 600 605
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
610 615 620
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
625 630 635 640
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
645 650 655
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
660 665 670
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
675 680 685
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
690 695 700
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
705 710 715 720
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
725 730 735
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
740 745 750
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
755 760 765
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
770 775 780
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
785 790 795 800
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
805 810 815
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
820 825 830
Ser Pro Gly Lys
835
<210> 92
<211> 522
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Ile Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Pro Gln Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Glu Val Gln Val Pro
210 215 220
Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu Arg Cys
225 230 235 240
Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn Leu Ile
245 250 255
Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr Glu Gly
260 265 270
Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe Pro Asp
275 280 285
Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Val
290 295 300
Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp Phe Gly
305 310 315 320
Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys Pro Ser
325 330 335
Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr Val Thr
340 345 350
Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val Phe Trp
355 360 365
Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr Ser Gln
370 375 380
Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu Arg Val
385 390 395 400
Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val
405 410 415
Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln Pro Met
420 425 430
Thr Phe Pro Pro Glu Ala Leu Trp Val Thr Val Gly Leu Ser Val Cys
435 440 445
Leu Ile Ala Leu Leu Val Ala Leu Ala Phe Val Cys Trp Arg Lys Ile
450 455 460
Lys Gln Ser Cys Glu Glu Glu Asn Ala Gly Ala Glu Asp Gln Asp Gly
465 470 475 480
Glu Gly Glu Gly Ser Lys Thr Ala Leu Gln Pro Leu Lys His Ser Asp
485 490 495
Ser Lys Glu Asp Asp Gly Gln Glu Ile Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser
500 505 510
Glu Glu Asp Leu His His His His His His
515 520
<210> 93
<211> 547
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Val Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Gly Gln Pro Met Thr Phe Pro Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
210 215 220
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
225 230 235 240
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
245 250 255
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
260 265 270
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
275 280 285
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
290 295 300
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
305 310 315 320
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
325 330 335
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
340 345 350
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
355 360 365
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
370 375 380
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
385 390 395 400
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
405 410 415
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
420 425 430
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
435 440 445
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
450 455 460
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
465 470 475 480
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
485 490 495
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
500 505 510
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
515 520 525
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
530 535 540
Pro Gly Lys
545
<210> 94
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Val Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Gly Gln Pro Met Thr Phe Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu
210 215 220
Glu Asp Leu His His His His His His
225 230
<210> 95
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Arg Glu Asn Ile Tyr Tyr Gly Ser Arg Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Val
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Leu Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Pro Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Leu Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Leu Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 96
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (16)

1.一种抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
(a1)如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；
(a2)如SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列；
(a3)如SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列；
(a4)如SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列；和
(a5)与(a1)、(a2)、(a3)或(a4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR；和
(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(a6)如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列；
(a7)如SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列；
(a8)如SEQ ID NO:16、18和19所示的氨基酸序列；
(a9)如SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列；
(a10)如SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列；和
(a11)与(a6)、(a7)、(a8)、(a9)或(a10)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR。
2.如权利要求1所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其具有：
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:1、2和3或与SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:4、5和6或与SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:7、8和9或与SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:10、11和12或与SEQ ID NO:10、11和12所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:13、14和15或与SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:16、18和19或与SEQ ID NO:16、18和19所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:13、14和15或与SEQ ID NO:13、14和15所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:17、18和19或与SEQ ID NO:17、18和19所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:20、21和22或与SEQ ID NO:20、21和22所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:23、24和25或与SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。
3.如权利要求1或2所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体或人源化抗体。
4.如权利要求1-3之任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(b1)如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列；
(b2)(b1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(b3)与(b1)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(b4)如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；
(b5)(b4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(b6)与(b4)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
5.如权利要求4所述的B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体还含有鼠源的IgG1、IgG2或其变体的重链恒定区，鼠源的k链或其变体的轻链恒定区。
6.如权利要求1-3之任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:26经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:26功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:27，SEQID NO:27经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:27功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:28经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:28功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:28具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:29，SEQID NO:29经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:29功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:30经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:30功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:31，SEQID NO:31经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:31功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:30经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:30功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:30具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:32，SEQID NO:32经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:32功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:35经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:35功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:36，SEQID NO:36经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:36功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
7.如权利要求1-3之任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7-H3抗体为人源化抗体，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(c1)如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；
(c2)(c1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c3)与(c1)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(c4)如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列；
(c5)(c4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(c4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(c6)与(c4)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
8.如权利要求7所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，其中
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:45经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:49，SEQID NO:49经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:49功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:52经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:52功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:59，SEQID NO:59经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:59功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:63经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:63功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:65，SEQID NO:65经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:65功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:65具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:64经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:64功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:67，SEQID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:72，SEQ ID NO:72经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:72功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:72具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:77，SEQID NO:77经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:77功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
9.一种分离的核酸，其编码权利要求1-8之任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段。
10.如权利要求9所述的核酸，其中：
(1)编码所述重链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84或SEQ ID NO:86所示；
(2)编码所述轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示。
11.一种表达载体，其包含如权利要求9或10所述的核酸。
12.一种宿主细胞，其转化如权利要求11所述的表达载体，所述宿主细胞选自原核细胞和真核细胞，优先为哺乳动物细胞。
13.制备权利要求1-8任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段的方法，包括在如权利要求12所述的宿主细胞中表达抗体，以及从宿主细胞中分离所述抗体的步骤。
14.一种药物组合物，其包含权利要求1-8之任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段和药学可接受的载体。
15.如权利要求1-8之任一项所述的抗B7-H3抗体或其抗原结合片段或如权利要求14的药物组合物在制备用于抑制B7-H3活性的药物中的应用。
16.如权利要求15所述的应用，所述抑制B7-H3活性的药物用于治疗乳腺癌、肾癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤、白血病、淋巴瘤和/或黑素瘤。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113683697A (zh) * 2021-08-27 2021-11-23 上海祥耀生物科技有限责任公司 抗b7-h3抗体、其制备方法及用途
CN114262689A (zh) * 2021-12-17 2022-04-01 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种快速检测cd19/cd20-car-t细胞活性的方法
CN114773477A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 上海优替济生生物医药有限公司 抗b7-h3抗体及其用途
CN116178553A (zh) * 2022-02-25 2023-05-30 南京蓬勃生物科技有限公司 针对人b7-h3的抗体及其变体
WO2023173393A1 (zh) * 2022-03-18 2023-09-21 北京天广实生物技术股份有限公司 结合b7-h3的抗体及其用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104105710A (zh) * 2011-10-14 2014-10-15 国家科学研究中心 抗-spla2-v抗体以及其用途
CN107412773A (zh) * 2012-05-23 2017-12-01 加尼梅德药物公司 用于治疗癌症的涉及针对密蛋白18.2之抗体的联合治疗
CN108948193A (zh) * 2017-05-18 2018-12-07 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 针对tim-3的抗体分子,抗原结合片段及其医药用途
CN109937212A (zh) * 2017-03-31 2019-06-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 B7-h3抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CN110172099A (zh) * 2018-08-16 2019-08-27 上海健信生物医药科技有限公司 抗lag-3人源化单克隆抗体分子，抗原结合片段及其医药用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112012022210B1 (pt) * 2010-03-04 2021-08-17 Macrogenics, Inc Anticorpo isolado ou seu fragmento imunorreativo, molécula de ácido nucleico, composição farmacêutica, e, uso do anticorpo isolado
TWI561531B (en) * 2011-04-25 2016-12-11 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti b7-h3 antibody
JP6636016B2 (ja) * 2014-05-29 2020-01-29 スプリング バイオサイエンス コーポレーション 抗ｂ７−ｈ３抗体及びその診断用途
CN109843927B (zh) * 2017-03-06 2022-06-21 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗b7-h3抗体、其抗原结合片段及其医药用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104105710A (zh) * 2011-10-14 2014-10-15 国家科学研究中心 抗-spla2-v抗体以及其用途
CN107412773A (zh) * 2012-05-23 2017-12-01 加尼梅德药物公司 用于治疗癌症的涉及针对密蛋白18.2之抗体的联合治疗
CN109937212A (zh) * 2017-03-31 2019-06-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 B7-h3抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CN108948193A (zh) * 2017-05-18 2018-12-07 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 针对tim-3的抗体分子,抗原结合片段及其医药用途
CN110172099A (zh) * 2018-08-16 2019-08-27 上海健信生物医药科技有限公司 抗lag-3人源化单克隆抗体分子，抗原结合片段及其医药用途

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113683697A (zh) * 2021-08-27 2021-11-23 上海祥耀生物科技有限责任公司 抗b7-h3抗体、其制备方法及用途
CN113683697B (zh) * 2021-08-27 2022-06-17 上海祥耀生物科技有限责任公司 抗b7-h3抗体、其制备方法及用途
WO2023025315A1 (zh) * 2021-08-27 2023-03-02 上海祥耀生物科技有限责任公司 抗b7-h3抗体、其制备方法及用途
CN114262689A (zh) * 2021-12-17 2022-04-01 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种快速检测cd19/cd20-car-t细胞活性的方法
CN116178553A (zh) * 2022-02-25 2023-05-30 南京蓬勃生物科技有限公司 针对人b7-h3的抗体及其变体
CN116178553B (zh) * 2022-02-25 2023-11-17 南京蓬勃生物科技有限公司 针对人b7-h3的抗体及其变体
WO2023173393A1 (zh) * 2022-03-18 2023-09-21 北京天广实生物技术股份有限公司 结合b7-h3的抗体及其用途
CN114773477A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 上海优替济生生物医药有限公司 抗b7-h3抗体及其用途
CN114773477B (zh) * 2022-06-23 2022-09-09 上海优替济生生物医药有限公司 抗b7-h3抗体及其用途

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