BR112020025804A2 - proteínas transmembranares quiméricas e usos das mesmas - Google Patents
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Abstract
São fornecidas na presente invenção proteínas transmembranares quiméricas que compreendem um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-7 com uma ou mais modificações. Também são fornecidos na presente invenção ácidos nucleicos que codificam essas proteínas transmembranares quiméricas, e células de mamíferos contendo esses ácidos nucleicos, e métodos para preparação e uso dessas células de mamíferos.
Description
[001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido de Patente Provisório dos U.S. Nº de série 62/688.810, depositado em 22 de junho de 2018; todos os conteúdos do qual são incorporados na presente invenção por referência.
[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequência que foi enviada eletronicamente em formato ASCII e é incorporada na presente invenção por referência em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 21 de junho de 2019, é denominada CDL-700.PF-43159-0072WO1_SL.txt e tem
176.317 bytes.
[003] A presente revelação diz respeito ao campo da biotecnologia e, mais especificamente, a proteínas transmembranares quiméricas e usos das mesmas.
[004] O receptor da interleucina-7 (IL-7) é expresso na superfície celular (temporária ou permanente) de vários tipos de células, incluindo células T naïve e de memória. Após a ligação à IL-7, o receptor de IL-7 transduz um sinal para a célula por meio da ativação das Janus quinases - JAK1 e JAK3 (Palmer et al., Cell. Mol. Immunol. 5 (2):79-89, 2008).
[005] Embora muitas melhorias tenham sido feitas para gerar um sinal proliferativo secundário em células T de receptor de antígeno quimérico (CAR) de segunda geração (por meio da inclusão de domínios de sinalização coestimuladores, tais como CD28 e 4-1BB em receptores de antígenos quiméricos), este sinal permanece frequentemente dependente de antígeno, não tem atividade coestimuladora suficiente em tumores sólidos que têm baixos níveis de antígeno associados a tumor.
[006] Em outra tentativa de fornecer atividade coestimuladora suficiente em células T CAR, foi usada a coadministração de citocinas pertencentes à família de receptores de cadeia gama (γc) comum. No entanto, uso prolongado de citocinas pró-proliferativas, recombinantes, tais como IL-2, é frequentemente associado a efeitos colaterais graves, limitando a duração e a dosagem de administração. Em vista do exposto acima, são desejados métodos aprimorados, alternativos, de fornecer um sinal coestimulador para células T CAR.
[007] A presente revelação é baseada, pelo menos em parte, na descoberta de que uma proteína que inclui um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 que inclui a sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com um ou mais (por exemplo, dois, três ou quatro) das seguintes modificações: (i) alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por ácido glutâmico-lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina; (ii) uma cisteína- prolina-treonina foi inserida entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) uma prolina-prolina-cisteína-leucina foi inserida entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1, demonstra sinalização a jusante aumentada em comparação com uma proteína correspondente que inclui um domínio transmembranar de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 ou uma proteína correspondente que inclui a sequência de SEQ ID NO: 1. Domínios transmembranares modificados representativos têm uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
[008] A presente revelação também é baseada, pelo menos em parte, na descoberta de que uma proteína transmembranar quimérica que inclui um domínio de interleucina-15 extracelular; um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15; e um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 fornece coestimulação independente de antígeno de uma célula T de receptor de antígeno quimérico (CAR).
[009] Em vista desta descoberta, são fornecidas na presente invenção proteínas transmembranares quiméricas que incluem um domínio extracelular IL-15, um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15 e um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Também são fornecidas proteínas que incluem um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 que inclui a sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com uma ou mais (por exemplo, duas, três ou quatro) das seguintes modificações: (i) alanina- leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por ácido glutâmico-lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina (ii) uma cisteína-prolina-treonina foi inserida entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) uma prolina-prolina-cisteína-leucina foi inserida entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Domínios transmembranares modificados representativos têm uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
[010] Também são fornecidos ácidos nucleicos que codificam essas proteínas transmembranares quiméricas ou essas proteínas, vetores, incluindo qualquer um desses ácidos nucleicos e células de mamíferos que incluem qualquer um desses ácidos nucleicos ou vetores. Também são fornecidos aqui métodos de tratamento de um câncer, métodos de indução de morte celular em uma célula cancerosa (por exemplo, apoptose e / ou necrose) e métodos de redução do risco de desenvolver uma metástase ou uma metástase adicional em um sujeito em necessidade de que incluem a administração de qualquer uma das células de mamífero aqui descritas ao sujeito.
[011] Em algumas modalidades, é fornecida na presente invenção uma proteína que inclui um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, em que o domínio transmembranar inclui a sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com uma ou mais das seguintes modificações: (i) alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por ácido glutâmico-lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina; (ii) uma cisteína-prolina-treonina foi inserida entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) uma prolina- prolina-cisteína-leucina foi inserida entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Domínios transmembranares modificados representativos têm uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
[012] Em algumas modalidades, a proteína inclui ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, tal como, sem limitação, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7). Em algumas modalidades, a proteína inclui ainda um domínio intracelular que inclui uma sequência de SEQ ID NO: 45 ou uma sequência que é pelo menos 80% idêntica à sequência de um domínio intracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45). Em algumas modalidades, o domínio intracelular é pelo menos 90% ou 95% idêntico à SEQ ID NO: 45. Em algumas modalidades, a proteína inclui ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7 tendo um ou ambos: (I) um a dez aminoácidos deletados do terminal N da sequência do domínio intracelular de cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45) e (ii) um a dez aminoácidos deletados do terminal C da sequência do domínio intracelular da cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45).
[013] Em algumas modalidades, a proteína inclui ainda um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, tal como, sem limitação, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7). Em algumas modalidades, a proteína inclui ainda um domínio extracelular que inclui uma sequência de SEQ ID NO: 11 ou uma sequência que é pelo menos 80% idêntica à sequência de um domínio extracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 11). Em algumas modalidades, o domínio extracelular é pelo menos 90% ou 95% idêntico à SEQ ID NO: 11. Em algumas modalidades, a proteína inclui ainda um domínio extracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7 tendo um ou ambos: (i) um a dez aminoácidos deletados do terminal N da sequência do domínio extracelular de cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 11) e (ii) um a dez aminoácidos deletados do terminal C da sequência do domínio extracelular da cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 11).
[014] Também são fornecidos na presente invenção ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção. Também são fornecidos na presente invenção vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção. Em algumas modalidades, vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção incluem um promotor operacionalmente ligado ao ácido nucleico e, opcionalmente, uma sequência intensificadora operacionalmente ligada ao ácido nucleico. Em algumas modalidades, vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção incluem uma sequência poli(A) operacionalmente ligada ao ácido nucleico. Em algumas modalidades, vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção são vetores lentivirais ou adenovirais.
[015] Em algumas modalidades, os vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção incluem uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico se liga especificamente a um antígeno tumoral (por exemplo, um antígeno tumoral é selecionado a partir do grupo que consiste em: glipican-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB ETA, 5T4, antígeno de adenocarcinoma, alfa-fetoproteína (AFP), BAFF, célula B de linfoma, antígeno C242, CA-125, anidrase carbônica 9 (CA-IX), C- MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, domínio extra B de fibronectina, receptor de folato 1, GD2, gangliosídeo GD3, glicoproteína 75,
GPNMB, HER2/neu, HGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-13, IL-6, receptor do fator I de crescimento semelhante à insulina, integrina α5β1, integrina ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, mucina CanAg, ácido N-glicolilneuramínico, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, células de carcinoma prostático, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, tenascina C, TGF beta 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2 e vimentina. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico compreende um ou mais domínios de sinalização coestimuladores selecionados a partir do grupo que consiste em: 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10 e DAP-12.
[016] Também são fornecidas na presente invenção células de mamíferos que incluem qualquer uma das variedades de ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção ou vetores que incluem tais ácidos nucleicos descritos na presente invenção. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula imune. Em algumas modalidades, a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma célula T CD4+, uma célula T CD8+, uma célula B, um monócito, uma célula natural killer, uma célula dendrítica, um macrófago, uma célula T reguladora e uma célula T auxiliar. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente a partir de um indivíduo ou é uma célula filha de uma célula de mamífero que foi obtida anteriormente do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula humana.
[017] Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável. Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de células de mamífero que incluem vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção.
[018] Também são fornecidos na presente invenção conjuntos de vetores que incluem um primeiro vetor que inclui qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, o receptor de antígeno quimérico se liga especificamente a um antígeno tumoral (por exemplo, um antígeno tumoral é selecionado a partir do grupo que consiste em: glipican-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB ETA, 5T4, antígeno de adenocarcinoma, alfa- fetoproteína (AFP), BAFF, célula B de linfoma, antígeno C242, CA-125, anidrase carbônica 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, domínio extra B de fibronectina, receptor de folato 1, GD2, gangliosídeo GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-13, IL-6, receptor do fator I de crescimento semelhante à insulina, integrina α5β1, integrina ανβ3, MORAb- 009, MS4A1, MUC1, mucina CanAg, ácido N-glicolilneuramínico, NPC-1C, PDGF- R a, PDL192, fosfatidilserina, células de carcinoma prostático, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, tenascina C, TGF beta 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2 e vimentina.
Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, o receptor de antígeno quimérico compreende um ou mais domínios de sinalização coestimuladores selecionados a partir do grupo que consiste em: 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10 e DAP-12. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, ambos dentre o primeiro vetor e o segundo vetor são um vetor lentiviral ou adenoviral. Em algumas modalidades de conjuntos de vetores fornecidos na presente invenção, o segundo vetor inclui ainda um promotor operacionalmente ligado à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico e, opcionalmente, um intensificador operacionalmente ligado à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, o segundo vetor compreende ainda uma sequência poli(A) operacionalmente ligada à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico.
[019] Também são fornecidas na presente invenção células de mamíferos que incluem qualquer uma das variedades de conjuntos de vetores fornecidos na presente invenção que incluem um primeiro vetor que inclui qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula imune. Em algumas modalidades, a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma célula T CD4+, uma célula T CD8+, uma célula B, um monócito, uma célula natural killer, uma célula dendrítica, um macrófago, uma célula T reguladora e uma célula T auxiliar. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente a partir de um indivíduo ou é uma célula filha de uma célula de mamífero que foi obtida anteriormente do indivíduo. Em algumas modalidades,
a célula de mamífero é uma célula humana.
[020] Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de conjuntos de vetores fornecidos na presente invenção (por exemplo, conjuntos de vetores que incluem um primeiro vetor que inclui qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas descritas na presente invenção e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico) e um carreador farmaceuticamente aceitável. Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de células de mamíferos que incluem tais conjuntos de vetores.
[021] Também são fornecidas na presente invenção proteínas transmembranares quiméricas que incluem: um domínio de interleucina-15 extracelular; um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15; e um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Em algumas modalidades, o domínio de interleucina-15 extracelular inclui uma sequência de uma proteína de interleucina-15 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, uma proteína de interleucina-15 de tipo selvagem é uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem tendo uma sequência de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 24). Em algumas modalidades, o domínio de interleucina-15 extracelular compreende uma sequência que é pelo menos 80% idêntica à sequência de uma proteína de interleucina-15 de tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem, tal como, sem limitação, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem tendo uma sequência de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 24). Em algumas modalidades, o domínio de interleucina-15 extracelular compreende uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à sequência de uma proteína de interleucina-15 de tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de interleucina- 15 humana de tipo selvagem, tal como, sem limitação, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem tendo uma sequência de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 24). Em algumas modalidades, o domínio de interleucina-15 extracelular é uma sequência de uma proteína de interleucina-15 de tipo selvagem tendo um ou ambos de (i) um a dez aminoácidos removidos do terminal N da sequência da proteína de interleucina-15 de tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem, tal como, sem limitação, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem tendo uma sequência de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 24), e (ii) um a dez aminoácidos removidos do terminal C da sequência da proteína de interleucina-15 de tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de interleucina- 15 humana de tipo selvagem, tal como, sem limitação, uma proteína de interleucina-15 humana de tipo selvagem tendo uma sequência de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 24).
[022] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica inclui ainda uma sequência ligante posicionada entre o domínio de interleucina-15 extracelular e o domínio extracelular sushi. Em algumas modalidades, a sequência ligante é de cerca de 2 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos. Em algumas modalidades, a sequência ligante é de cerca de 4 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos. Em algumas modalidades, o ligante é uma sequência de aminoácidos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a sequência ligante não é uma sequência de aminoácidos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a sequência ligante inclui uma sequência de SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, a sequência ligante consiste em uma sequência de SEQ ID NO: 92.
[023] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica inclui ainda uma sequência ligante adicional entre o domínio extracelular sushi e o domínio transmembranar. Em algumas modalidades, a sequência ligante adicional é de cerca de 2 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos. Em algumas modalidades, a sequência ligante adicional é de cerca de 4 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos. Em algumas modalidades, o ligante adicional é uma sequência de aminoácidos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a sequência ligante adicional não é uma sequência de aminoácidos de ocorrência natural.
[024] Em algumas modalidades de proteínas transmembranares quiméricas tendo um domínio extracelular sushi, o domínio extracelular sushi inclui um domínio sushi de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-15. Em algumas modalidades, a cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 é cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15. Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi de cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 inclui SEQ ID NO: 36 ou SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi é pelo menos 80% idêntico a uma sequência de um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15, tal como, sem limitação, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 36 ou SEQ ID NO: 37). Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi é pelo menos 95% idêntico a uma sequência de um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15, tal como, sem limitação, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 36 ou SEQ ID NO: 37). Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi é uma sequência de um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 tendo um ou ambos de (i) um a cinco aminoácidos removidos do terminal N da sequência do domínio extracelular sushi de cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15, tal como, sem limitação, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 36 ou SEQ ID NO: 37), e (ii) um a cinco aminoácidos removidos do terminal C da sequência do domínio extracelular sushi de cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina- 15 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15, tal como, sem limitação, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-15 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 36 ou SEQ ID NO: 37).
[025] Em algumas modalidades de proteínas transmembranares quiméricas tendo um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, o domínio transmembranar inclui um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7. Em algumas modalidades, a cadeia alfa de tipo selvagem do receptor de interleucina-7 é uma cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 humano. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar da cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 humano inclui uma sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1). Em algumas modalidades, o domínio transmembranar da cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 humano inclui uma sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com uma ou mais das seguintes modificações: (i) alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por ácido glutâmico- lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina; (ii) uma cisteína-prolina-treonina foi inserida entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) uma prolina-prolina-cisteína-leucina foi inserida entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Domínios transmembranares modificados representativos têm uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar é pelo menos 80% idêntico a uma sequência de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, tal como, sem limitação, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 1). Em algumas modalidades, o domínio transmembranar é pelo menos 95% idêntico a uma sequência de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, tal como, sem limitação, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 1). Em algumas modalidades, o domínio transmembranar é uma sequência de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 tendo um ou ambos de (i) um a três aminoácidos removidos do terminal N da sequência do domínio transmembranar da cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-2 (por exemplo, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, tal como, sem limitação, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 humano tendo uma sequência de SEQ ID NO: 1), e (ii) um a três aminoácidos removidos do terminal C da sequência do domínio transmembranar da cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, tal como, sem limitação, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de tipo selvagem de um receptor de interleucina-7 tendo uma sequência de SEQ ID NO: 1).
[026] Em algumas modalidades de proteínas transmembranares quiméricas fornecidas na presente invenção, a proteína transmembranar quimérica inclui ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Em algumas modalidades, a cadeia alfa de receptor de interleucina-7 é uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-
7. Em algumas modalidades, a cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 é uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7. Em algumas modalidades, o domínio intracelular inclui uma sequência de SEQ ID NO: 45. Em algumas modalidades, o domínio intracelular inclui uma sequência que é pelo menos 80% idêntica à sequência de um domínio intracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45). Em algumas modalidades, o domínio intracelular é pelo menos 90% ou 95% idêntico à SEQ ID NO: 45. Em algumas modalidades, o domínio intracelular é uma sequência de um domínio intracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 tendo um ou ambos: (i) um a dez aminoácidos deletados do terminal N da sequência do domínio intracelular da cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45) e
(ii) um a dez aminoácidos deletados do terminal C da sequência do domínio intracelular da cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45).
[027] Também são fornecidos na presente invenção ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção. Também são fornecidos na presente invenção vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção. Em algumas modalidades, vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção incluem um promotor operacionalmente ligado ao ácido nucleico e, opcionalmente, uma sequência intensificadora operacionalmente ligada ao ácido nucleico. Em algumas modalidades, vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção incluem uma sequência poli(A) operacionalmente ligada ao ácido nucleico. Em algumas modalidades, vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção são vetores lentivirais ou adenovirais.
[028] Em algumas modalidades, os vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção incluem uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico se liga especificamente a um antígeno tumoral (por exemplo, um antígeno tumoral é selecionado a partir do grupo que consiste em: glipican-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB ETA, 5T4, antígeno de adenocarcinoma, alfa- fetoproteína (AFP), BAFF, célula B de linfoma, antígeno C242, CA-125, anidrase carbônica 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, domínio extra B de fibronectina, receptor de folato 1, GD2, gangliosídeo GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-13, IL-6, receptor do fator I de crescimento semelhante à insulina, integrina α5β1, integrina ανβ3, MORAb- 009, MS4A1, MUC1, mucina CanAg, ácido N-glicolilneuramínico, NPC-1C, PDGF- R a, PDL192, fosfatidilserina, células de carcinoma prostático, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, tenascina C, TGF beta 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2 e vimentina. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico compreende um ou mais domínios de sinalização coestimuladores selecionados a partir do grupo que consiste em: 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM- 1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10 e DAP-12.
[029] Também são fornecidas na presente invenção células de mamíferos que incluem qualquer uma das variedades de ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção ou vetores que incluem tais ácidos nucleicos descritos na presente invenção. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula imune. Em algumas modalidades, a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma célula T CD4+, uma célula T
CD8+, uma célula B, um monócito, uma célula natural killer, uma célula dendrítica, um macrófago, uma célula T reguladora e uma célula T auxiliar. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente a partir de um indivíduo ou é uma célula filha de uma célula de mamífero que foi obtida anteriormente do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula humana.
[030] Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável. Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de células de mamífero que incluem vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção.
[031] Também são fornecidos na presente invenção conjuntos de vetores que incluem um primeiro vetor que é qualquer um dos vetores que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades de conjuntos de tais vetores, o receptor de antígeno quimérico se liga especificamente a um antígeno tumoral (por exemplo, um antígeno tumoral é selecionado a partir do grupo que consiste em: glipican-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB ETA, 5T4, antígeno de adenocarcinoma, alfa-fetoproteína (AFP), BAFF, célula B de linfoma, antígeno C242, CA-125, anidrase carbônica 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (receptor de
IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, domínio extra B de fibronectina, receptor de folato 1, GD2, gangliosídeo GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-13, IL-6, receptor do fator I de crescimento semelhante à insulina, integrina α5β1, integrina ανβ3, MORAb- 009, MS4A1, MUC1, mucina CanAg, ácido N-glicolilneuramínico, NPC-1C, PDGF- R a, PDL192, fosfatidilserina, células de carcinoma prostático, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, tenascina C, TGF beta 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2 e vimentina. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, o receptor de antígeno quimérico compreende um ou mais domínios de sinalização coestimuladores selecionados a partir do grupo que consiste em: 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10 e DAP-12. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, ambos dentre o primeiro vetor e o segundo vetor são um vetor lentiviral ou adenoviral. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, o segundo vetor inclui ainda um promotor operacionalmente ligado à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico e, opcionalmente, um intensificador operacionalmente ligado à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades de tais conjuntos de vetores, o segundo vetor compreende ainda uma sequência poli(A) operacionalmente ligada à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico.
[032] Também são fornecidas na presente invenção células de mamíferos que incluem qualquer uma das variedades de conjuntos de vetores descritos na presente invenção que incluem um primeiro vetor que inclui qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula imune. Em algumas modalidades, a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma célula T CD4+, uma célula T CD8+, uma célula B, um monócito, uma célula natural killer, uma célula dendrítica, um macrófago, uma célula T reguladora e uma célula T auxiliar. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente a partir de um indivíduo ou é uma célula filha de uma célula de mamífero que foi obtida anteriormente do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula humana.
[033] Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de conjuntos de vetores descritos na presente invenção (por exemplo, conjuntos de vetores que incluem um primeiro vetor que inclui qualquer um dos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico) e um carreador farmaceuticamente aceitável. Também são fornecidas na presente invenção composições farmacêuticas que incluem qualquer uma das variedades de células de mamíferos que incluem tais conjuntos de vetores.
[034] Também são fornecidos na presente invenção kits que incluem qualquer uma das variedades de composições farmacêuticas descritas na presente invenção (por exemplo, composições farmacêuticas que incluem qualquer uma da variedade de vetores ou conjuntos de vetores descritos na presente invenção).
[035] Também são fornecidos na presente invenção métodos de tratamento de um câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, os métodos incluindo: administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma da variedade de células de mamífero descritas na presente invenção (por exemplo, células de mamífero que incluem qualquer um da variedade de ácidos nucleicos, vetores ou conjuntos de vetores descritos na presente invenção). Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano e a célula de mamífero é humana. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente do indivíduo ou é uma célula filha de uma célula obtida anteriormente do indivíduo.
[036] Também são fornecidos na presente invenção métodos de redução de volume de um tumor sólido em um indivíduo em necessidade do mesmo, os métodos incluindo: administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma da variedade de células de mamífero descritas na presente invenção (por exemplo, células de mamífero que incluem qualquer um da variedade de ácidos nucleicos, vetores ou conjuntos de vetores descritos na presente invenção). Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano e a célula de mamífero é humana. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente do indivíduo ou é uma célula filha de uma célula obtida anteriormente do indivíduo.
[037] Também são fornecidos na presente invenção métodos de indução de morte celular em uma célula cancerígena em um indivíduo em necessidade do mesmo, os métodos incluindo: administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma da variedade de células de mamífero descritas na presente invenção (por exemplo, células de mamífero que incluem qualquer um da variedade de ácidos nucleicos, vetores ou conjuntos de vetores descritos na presente invenção). Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano e a célula de mamífero é humana. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente do indivíduo ou é uma célula filha de uma célula obtida anteriormente do indivíduo.
[038] Também são fornecidos na presente invenção métodos de diminuição do risco de desenvolver uma metástase ou uma metástase adicional em um indivíduo que tenha um câncer, os métodos incluindo: administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma da variedade de células de mamífero descritas na presente invenção (por exemplo, células de mamífero que incluem qualquer um da variedade de ácidos nucleicos, vetores ou conjuntos de vetores descritos na presente invenção). Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano e a célula de mamífero é humana. Em algumas modalidades, a célula de mamífero foi obtida anteriormente do indivíduo ou é uma célula filha de uma célula obtida anteriormente do indivíduo.
[039] Também são fornecidos na presente invenção métodos de ativação de sinalização de STAT5 em uma célula imune, os métodos incluindo introdução na célula imune de qualquer uma das variedades de ácidos nucleicos descritas na presente invenção (por exemplo, ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das variedades de proteínas ou proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção). Em algumas modalidades, a célula imune é obtida a partir do indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo foi identificado como portador de um câncer. Em algumas modalidades, a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma célula T CD4+, uma célula T CD8+, uma célula B, um monócito, uma célula natural killer, uma célula dendrítica, um macrófago, uma célula T reguladora e uma célula T auxiliar.
[040] O uso do termo “um” antes de um substantivo significa “um ou mais” do substantivo particular. Por exemplo, a frase “uma célula de mamífero” significa “uma ou mais células de mamífero”. Em alguns exemplos, o termo “um” pode significar uma única unidade do substantivo particular.
[041] Os termos “receptor de antígeno quimérico” e “CAR” são usados indistintamente na presente invenção e referem-se a moléculas multimódulos artificiais capazes de disparar ou inibir a ativação de uma célula imune que geralmente, mas não exclusivamente, compreende um domínio extracelular (por exemplo, um ligante/domínio de ligação a antígeno), um domínio transmembranar e um ou mais domínios de sinalização intracelular. Moléculas de CAR e derivados das mesmas (por exemplo, variantes de CAR) são descritos, por exemplo, no Pedido PCT No. US2014/016527; Fedorov et al., Sci Transl Med (2013) 5(215):215ra172; Glienke et al., Front Pharmacol (2015) 6:21; Kakarla & Gottschalk, Cancer J (2014) 20(2):151-5; Riddell et al., Cancer J (2014) 20(2):141-4; Pegram et al., Cancer J (2014) 20(2):127-33; Cheadle et al., Immunol Rev (2014) 257(1):91-106; Barrett et al., Annu Rev Med (2014) 65:333- 47; Sadelain et al., Cancer Discov (2013) 3(4):388-98; Cartellieri et al., J Biomed Biotechnol (2010) 956304; cujas revelações são incorporadas na presente invenção por referência em sua totalidade. Um CAR pode ser um receptor de antígeno quimérico de cadeia única ou um receptor de antígeno quimérico de múltiplas cadeias.
[042] O termo “domínio transmembranar” significa um domínio de um polipeptídeo que inclui pelo menos uma sequência de aminoácidos contígua que atravessa uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expresso em uma célula de mamífero. Por exemplo, um domínio transmembranar pode incluir uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez sequências de aminoácidos contíguas que cada uma atravessa uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expressa em uma célula de mamífero. Como é conhecido no estado da técnica, um domínio transmembranar pode,
por exemplo, incluir pelo menos uma (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) sequência de aminoácidos contígua (que atravessa uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expresso em uma célula de mamífero) que tem estrutura secundária em α-hélice na bicamada lipídica. Em algumas modalidades, um domínio transmembranar pode incluir duas ou mais sequências de aminoácidos contíguas (que cada uma atravessa uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expressa em uma célula de mamífero) que formam uma estrutura secundária de β-barril na bicamada lipídica. Exemplos não limitantes de domínios transmembranares são descritos na presente invenção. Exemplos adicionais de domínios transmembranares são conhecidos no estado da técnica.
[043] O termo “domínio de ligação a antígeno” significa um domínio que se liga especificamente a um antígeno alvo. Em alguns exemplos, um domínio de ligação a antígeno pode ser formado a partir dos aminoácidos presentes em um polipeptídeo de cadeia única. Em outros exemplos, um domínio de ligação a antígeno pode ser formado a partir de aminoácidos presentes dentro de um primeiro polipeptídeo de cadeia única e os aminoácidos presentes em um ou mais polipeptídeos de cadeia única adicionais (por exemplo, um segundo polipeptídeo de cadeia única). Exemplos não limitantes de domínios de ligação a antígeno são descritos na presente invenção, incluindo, sem limitação, scFvs ou domínios de ligação a ligante (LBDs) de fatores de crescimento. Exemplos adicionais de domínios de ligação a antígeno são conhecidos no estado da técnica.
[044] Conforme usado na presente invenção, o termo “antígeno” refere- se geralmente a um parceiro de ligação especificamente reconhecido por um domínio de ligação a antígeno descrito na presente invenção. Antígenos exemplares incluem diferentes classes de moléculas, tais como, mas não se limitando a, polipeptídeos e fragmentos de peptídeos dos mesmos, pequenas moléculas, lipídeos, carboidratos e ácidos nucleicos. Exemplos não limitantes de antígeno ou antígenos que podem ser especificamente ligados por qualquer um dos domínios de ligação a antígeno são descritos na presente invenção. Exemplos adicionais de antígeno ou antígenos que podem ser especificamente ligados por qualquer um dos domínios de ligação a antígeno são conhecidos no estado da técnica.
[045] O termo “domínio de sinalização intracelular” significa um domínio de sinalização intracelular de um polipeptídeo transmembranar de sinalização endógeno expresso em uma célula imune (por exemplo, um linfócito T) que promove a sinalização de células imunes a jusante (por exemplo, sinalização de receptor de célula T) e/ou ativação de célula imune (por exemplo, ativação de célula T). Exemplos não limitantes de domínios de sinalização intracelular são descritos na presente invenção. Exemplos adicionais de domínios de sinalização intracelular são conhecidos no estado da técnica. Ver, por exemplo, Chen et al., Nature Reviews Immunol. 13:227-242, 2013.
[046] O termo “motivo de ativação baseado em tirosina do imunorreceptor” ou “ITAM” significa um motivo de aminoácido que inclui uma sequência de consenso de quatro aminoácidos de uma tirosina separada de uma leucina ou isoleucina por dois outros aminoácidos (YxxL/I). O resíduo de tirosina na sequência de consenso de quatro aminoácidos torna-se fosforilado após a interação de uma quinase de via de sinalização (por exemplo, uma quinase de via de sinalização de linfócitos). Exemplos não limitantes de ITAMs são descritos na presente invenção. Exemplos adicionais de ITAMs são conhecidos no estado da técnica.
[047] A frase “tratamento de câncer” significa uma redução no número,
frequência ou gravidade de um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro ou cinco) sintomas de um câncer em um indivíduo com câncer, uma redução no número de células cancerígenas e/ou tumores presentes em um indivíduo e/ou uma redução no tamanho de um ou mais tumores sólidos presentes em um indivíduo.
[048] Conforme usado neste documento, “domínio extracelular” descreve uma porção de um polipeptídeo (por exemplo, um domínio) que está presente no espaço extracelular quando o polipeptídeo é expresso em uma célula de mamífero (por exemplo, uma célula humana).
[049] Salvo se definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados na presente invenção têm o mesmo significado conforme comumente entendido por um técnico no assunto ao qual a presente invenção pertence. Métodos e materiais são descritos na presente invenção para uso na presente invenção; outros métodos e materiais adequados conhecidos no estado da técnica também podem ser usados. Os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a ser limitantes. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes, sequências, entradas de banco de dados e outras referências mencionadas na presente invenção são incorporadas por referência em sua totalidade. Em caso de conflito, a presente especificação, incluindo definições, prevalecerá.
[050] Outras características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e figuras, e das reivindicações.
[051] A Figura 1 é um diagrama esquemático de IL7Rα. ECD = domínio extracelular. TMD = domínio transmembranar. ICD = domínio intracelular. Regiões, motivos e modificações de aminoácidos relevantes são indicados.
[052] A Figura 2 é um diagrama esquemático de IL7Rα, mostrando motivos relevantes e mecanismos de ativação de sinalização.
[053] A Figura 3 é um conjunto de dados de citometria de fluxo que mostram a expressão de proteínas IL7Rα modificadas na superfície de células T primárias. Os dados mostrados são do dia 6 pós-ativação.
[054] A Figura 4 é um diagrama esquemático de uma proteína transmembranar quimérica exemplar. Os motivos relevantes são indicados, juntamente com o mecanismo de ativação de sinalização. O domínio sushi IL15Rα é indicado pela seta.
[055] A Figura 5 é um conjunto de dados de citometria de fluxo que mostram a expressão de proteínas IL7Rα modificadas na superfície de células T primárias. Os dados mostrados são do dia 6 pós-ativação.
[056] A Figura 6A é um gráfico que mostra a porcentagem de diferentes tipos de células T CD8+ quando células T humanas primárias foram transduzidas com vetores lentivirais para expressar uma das proteínas IL7Rα específicas ou uma das proteínas de membrana quiméricas específicas mostradas.
[057] A Figura 6B é um conjunto de dois gráficos de dados de citometria de fluxo mostrando a expressão de PD-1 (gráfico à esquerda) ou CD25 (gráfico à direita) em células T humanas primárias que expressam diferentes proteínas mutantes IL7Rα e proteínas transmembranares quiméricas em células T humanas primárias no dia 15 pós-ativação.
[058] A Figura 7A é um imunoblot que mostra o nível de STAT5 fosforilado em células T humanas primárias deixadas sem transdução (“UT”) ou transduzidas com codificação lentiviral de uma das proteínas IL7Rα específicas ou uma das proteínas membranares quiméricas específicas mostradas.
[059] A Figura 7B é um conjunto de dois gráficos de barras mostrando a expressão de várias proteínas mutantes IL7Rα e proteínas transmembranares quiméricas em células T humanas primárias no dia 15 pós-ativação.
[060] A Figura 8A mostra diagramas esquemáticos de construtos de expressão mutante IL7Rα e um construto de expressão de receptor de antígeno quimérico 1928z que foram usados para coinfectar células T primárias.
[061] A Figura 8B mostra esquematicamente o receptor de antígeno quimérico 1928z sendo coexpresso na superfície de célula T com proteínas mutantes Ins_CPT IL7Rα ou EKV, a proteína transmembranar quimérica mbIL15-17Rα Ins_PPCL ou a proteína transmembranar quimérica mbIL15.
[062] A Figura 8C é um conjunto de dados citométricos de fluxo que mostram a expressão do receptor de antígeno quimérico 1928z, proteínas mutantes Ins_CPT IL7Rα ou EKV, a proteína transmembranar quimérica mbIL15-17Rα Ins_PPCL e a proteína mbIL15 na superfície das células T primárias. Os dados mostrados são do dia 6 pós-ativação.
[063] A Figura 8D é um conjunto de dois gráficos que mostram que o número de células que expressam mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL e mbIL15 diminuiu do dia 6 ao dia 14 em cultura, enquanto o número de células que expressam IL7Rα_EKV, IL7Rα_Ins_CPT e o receptor de antígeno quimérico 1928z permaneceu relativamente constante durante o mesmo período.
[064] A Figura 9 é um conjunto de dois gráficos que mostram que as células T CAR que expressam vários mutantes IL7Ra e proteínas transmembranares quiméricas mantêm o fenótipo de memória menos diferenciado no dia 14 pós-ativação.
[065] A Figura 10 é um conjunto de imunoblots que mostram os níveis de STAT5 e STAT3 fosforilados e o nível de proteína total de BCL-XL em células T humanas primárias deixadas sem transdução ou transduzidas com vetores lentivirais que codificam uma das proteínas IL7Rα específicas ou uma das proteínas transmembranares quiméricas específicas com e sem CAR (1928z).
[066] A Figura 11A é um gráfico de linha que mostra a expansão de células que expressam os vários mutantes IL7Rα e a Figura 11B é um gráfico de barras que mostra a expansão de dobra de células T CAR ao longo de 21 dias de encontro em série com células alvo Nalm6; juntas, as Figuras 11A e 11B mostram que as células T CAR que expressam mutantes IL7Rα demonstram expansão superior em comparação com CAR de controle após a exposição em série a antígeno em uma razão 1:1 razão efetor a alvo (E:T).
[067] A Figura 12A é um gráfico de linha que mostra a porcentagem de lise de células B CD19+ Nalm6 em um ensaio de morte noturno baseado em luciferase.
[068] A Figura 12B é um gráfico de linha que mostra a porcentagem de lise de células CD19- K562 em um ensaio de morte noturno baseado em luciferase.
[069] A Figura 13 é um conjunto de gráficos de barras que mostram que as células T CAR que expressam mutantes IL7Rα mantiveram um fenótipo de memória menos diferenciado no dia 14 seguinte à exposição em série a antígeno.
[070] A Figura 14A é um gráfico de linha que mostra a expansão de células expressando os vários mutantes IL7Rα e a Figura 14B é um gráfico de barras que mostra a expansão de dobra de células T CAR ao longo de 21 dias seguintes de encontro único com antígeno a uma razão 1:3 E:T; juntas, as Figuras 14A e 14B mostram que as células T CAR expressando mutantes IL7Rα demonstram expansão superior ao CAR de controle após uma exposição única ao alvo.
[071] A Figura 15 é um conjunto de gráficos de barras que mostram que as células T CAR que expressam mutantes IL7Rα mantiveram um fenótipo de memória menos diferenciado no dia 14 seguinte à exposição única a antígeno.
[072] A Figura 16 é o fluxo medido (fótons/segundo) ao longo do tempo em camundongos NOD-SCID IL2Rgammanulo administrados com 0,5 x 106 células Nalm6_luc no dia 1, seguido pela administração de 0,1 x 106 células de células T não transduzidas, ou células T transportando CD19 CAR sozinho, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP ou CD19 CAR + IL7RaPPCL. Os dados mostrados são a média +/- desvio padrão.
[073] A Figura 17 é a mudança no peso corporal ao longo do tempo em camundongos NOD-SCID IL2Rgammanulo administrados com 0,5 x 106 células Nalm6_luc no dia 1, seguido pela administração de 0,1 x 106 células de células T não transduzidas ou células T transportando CD19 CAR sozinho, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP ou CD19 CAR + IL7RaPPCL. Os dados mostrados são a média +/- desvio padrão.
[074] A Figura 18 é a intensidade de fluorescência média relativa (MFI) de pSTAT5a, b e pSTAT3 em células T não transduzidas, ou células T transportando CD19 CAR sozinho, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP ou CD19 CAR + IL7RaPPCL. Os dados de insensibilidade de fluorescência média são comparados com a intensidade de fluorescência média medida em células T não transduzidas.
[075] A Figura 19 é um gráfico que mostra a expansão de dobra de células T GPC3 CAR positivas e células T GPC3 CAR + IL7Ra CPT positivas cocultivadas com células alvo Hep3B da American Type Culture Company (ATCC, Manassas, VA) (0,5 x 106 de células CAR T cocultivadas com 0,5 x 106 de células alvo Hep3B) ao longo do tempo (conforme descrito no Exemplo 9).
[076] São fornecidas na presente invenção proteínas que incluem um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, em que o domínio transmembranar inclui a sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com uma ou mais (por exemplo, duas, três ou quatro) das seguintes modificações: (i) alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por ácido glutâmico-lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina; (ii) uma cisteína- prolina-treonina foi inserida entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) uma prolina-prolina-cisteína-leucina foi inserida entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Domínios transmembranares modificados representativos têm uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
[077] Também são fornecidas na presente invenção proteínas transmembranares quiméricas que incluem um domínio IL-15 extracelular, um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15 e um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7.
[078] Também são fornecidos ácidos nucleicos que codificam qualquer uma dessas proteínas transmembranares quiméricas e proteínas, vetores, incluindo qualquer um desses ácidos nucleicos e células de mamíferos que incluem qualquer um desses ácidos nucleicos ou vetores. Também são fornecidos aqui métodos de tratamento de um câncer, métodos de indução de morte celular em uma célula cancerosa (por exemplo, apoptose e / ou necrose) e métodos de redução do risco de desenvolver uma metástase ou uma metástase adicional em um sujeito em necessidade de que incluem a administração de qualquer uma das células de mamífero aqui descritas ao sujeito.
[079] As proteínas transmembranares quiméricas e proteínas fornecidas na presente invenção podem ser usadas para manter células T CAR na ausência de suporte de citocina exógena ou estimulação de antígeno, fornecendo assim os efeitos estimuladores de células T sem as toxicidades limitantes de dose associadas à administração prolongada de uma citocina, por exemplo, IL-2 recombinante solúvel.
[080] Aspectos não limitantes das proteínas transmembranares quiméricas, ácidos nucleicos, vetores, células de mamíferos e métodos fornecidos na presente invenção são descritos abaixo e podem ser usados em qualquer combinação sem limitação. Aspectos adicionais dessas proteínas transmembranares quiméricas, ácidos nucleicos, vetores, células de mamíferos e métodos são conhecidos no estado da técnica. Proteínas incluindo um Domínio Transmembranar de uma Cadeia Alfa de Receptor de Interleucina-7
[081] São fornecidas na presente invenção proteínas que incluem um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, em que o domínio transmembranar inclui a sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com uma ou mais (por exemplo, uma, duas, três ou quatro) das seguintes modificações: (i) alanina-leucina- leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por uma sequência de três aminoácidos diferente (por exemplo, foi substituída por ácido glutâmico-lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina); (ii) um a três (por exemplo, um, dois ou três) aminoácidos (por exemplo, cisteína- prolina-treonina) foram inseridos entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) um a quatro (por exemplo, um, dois, três ou quatro) aminoácidos (por exemplo, prolina-prolina-cisteína-leucina) foram inseridos entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Domínios transmembranares modificados representativos têm uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
[082] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar inclui a sequência de SEQ ID NO: 1 com a alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 substituída por ácido glutâmico-lisina- valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar inclui a sequência de SEQ ID NO: 1 com cisteína-prolina- treonina inserida entre posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar inclui a sequência de SEQ ID NO: 1 com uma prolina-prolina-cisteína-leucina inserida entre posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1.
[083] Em algumas modalidades, as proteínas fornecidas na presente invenção (por exemplo, proteína madura ou precursora) podem ser, por exemplo, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de
100 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de
140 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de
200 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 250 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 350 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 350 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de
400 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 450 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 450 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 550 aminoácidos, cerca de 550 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 550 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 550 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 550 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 550 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 650 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 650 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos, cerca de 650 aminoácidos a cerca de 700 aminoácidos, cerca de 700 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos, cerca de 700 aminoácidos a cerca de 750 aminoácidos ou cerca de 750 aminoácidos a cerca de 800 aminoácidos.
[084] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é SEQ ID NO: 2
(mostrada abaixo). Proteína Exemplar (SEQ ID NO: 2) (Proteína IL7RA EKA, sequência EKA está sublinhada)
PILLTISILSFFSVEKAVILACVLW Ácido Nucleico que Codifica IL7RA EKA (SEQ ID NO: 3, a sequência de ácido nucleico que codifica a sequência EKA está sublinhada) cccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggtggtgatcctggcctgcgtgct gtgg
[085] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, uma proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 2 por um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 6,7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos). Em algumas modalidades, qualquer uma das proteínas fornecidas na presente invenção podem incluir ainda um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 aminoácido a 300 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 250 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 200 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 150 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 100 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de
100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além de SEQ ID NO: 2. Adicional ou alternativamente, uma proteína pode carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) a partir do terminal N da SEQ ID NO: 2 e/ou carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , ou 20) a partir do terminal C da SEQ ID NO: 2.
[086] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 3 por um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a 60 nucleotídeos, 1 a 55 nucleotídeos, 1 a 50 nucleotídeos, 1 a 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a 35 nucleotídeos, 1 a 30 nucleotídeos, 1 a 25 nucleotídeos, 1 a 20 nucleotídeos, 1 a 15 nucleotídeos, 1 a 10 nucleotídeos ou 1 a 5 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína pode ainda incluir um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 3. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína pode carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 3 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO:
3.
[087] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é SEQ ID NO: 4 (mostrada abaixo). Proteína Exemplar (SEQ ID NO: 4) (Proteína IL7RA EKV, sequência EKV está sublinhada)
PILLTISILSFFSVEKVVILACVLW Ácido Nucleico que Codifica IL7RA EKV (SEQ ID NO: 5, sequência de ácido nucleico que codifica sequência EKV está sublinhada) cccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggtggtgatcctggcctgcgtgct gtgg
[088] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, uma proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 4 por um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 6,7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos). Em algumas modalidades, qualquer uma das proteínas fornecidas na presente invenção podem incluir ainda um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 aminoácido a 300 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 250 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 200 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 150 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 100 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além de SEQ ID NO: 4. Adicional ou alternativamente, uma proteína pode carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) a partir do terminal N da SEQ ID NO: 4 e/ou carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , ou 20) a partir do terminal C da SEQ ID NO: 4.
[089] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 5 por um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a 60 nucleotídeos, 1 a 55 nucleotídeos, 1 a 50 nucleotídeos, 1 a 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a 35 nucleotídeos, 1 a 30 nucleotídeos, 1 a 25 nucleotídeos, 1 a 20 nucleotídeos, 1 a 15 nucleotídeos, 1 a 10 nucleotídeos ou 1 a 5 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína pode ainda incluir um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 5. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína pode carecer de um a sessenta nucleotídeos
(por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 5 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO:
5.
[090] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é SEQ ID NO: 6 (mostrada abaixo). Proteína Exemplar (SEQ ID NO: 6) (Proteína de inserção IL7RA CPT, sequência CPT está sublinhada)
PILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLW Ácido Nucleico que Codifica inserção de IL7RA CPT (SEQ ID NO: 7, a sequência de ácido nucleico que codifica a sequência CPT está sublinhada) cccatcctgctgacctgccccaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcc tgcgtgctgtgg
[091] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, uma proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 6 por um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos). Em algumas modalidades, qualquer uma das proteínas fornecidas na presente invenção podem incluir ainda um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 aminoácido a 300 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 250 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 200 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 150 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 100 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além de SEQ ID NO: 6. Adicional ou alternativamente, uma proteína pode carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) a partir do terminal N da SEQ ID NO: 6 e/ou carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , ou 20) a partir do terminal C da SEQ ID NO: 6.
[092] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos
88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 7 por um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a 60 nucleotídeos, 1 a 55 nucleotídeos, 1 a 50 nucleotídeos, 1 a 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a 35 nucleotídeos, 1 a 30 nucleotídeos, 1 a 25 nucleotídeos, 1 a 20 nucleotídeos, 1 a 15 nucleotídeos, 1 a 10 nucleotídeos ou 1 a 5 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína pode ainda incluir um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 7. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína pode carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 7 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO:
7.
[093] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é SEQ ID NO: 8 (mostrada abaixo). Proteína Exemplar (SEQ ID NO: 8) (Proteína de inserção IL7RA PPCL, sequência PPCL está sublinhada)
PILLPPCLTISILSFFSVALLVILACVLW Ácido Nucleico que Codifica inserção de IL7RA PPCL (SEQ ID NO: 9, a sequência de ácido nucleico que codifica a sequência PPCL está sublinhada) cccatcctgctgccaccctgtttaaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctg gcctgcgtgctgtgg
[094] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, uma proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 8 por um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos). Em algumas modalidades, qualquer uma das proteínas fornecidas na presente invenção podem incluir ainda um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 aminoácido a 300 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 250 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 200 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 150 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 100 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além de SEQ ID NO: 8. Adicional ou alternativamente, uma proteína pode carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) a partir do terminal N da SEQ ID NO: 8 e/ou carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , ou 20) a partir do terminal C da SEQ ID NO: 8.
[095] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 9 por um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a 60 nucleotídeos, 1 a 55 nucleotídeos, 1 a 50 nucleotídeos, 1 a 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos,
1 a 35 nucleotídeos, 1 a 30 nucleotídeos, 1 a 25 nucleotídeos, 1 a 20 nucleotídeos, 1 a 15 nucleotídeos, 1 a 10 nucleotídeos ou 1 a 5 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína pode ainda incluir um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 9. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína pode carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 9 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO:
9.
[096] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é SEQ ID NO: 79 (mostrada abaixo).
Proteína Exemplar (SEQ ID NO: 79) (Proteína de inserção IL7RA MCP, sequência MCP está sublinhada)
PILLTMCPISILSFFSVALLVILACVLW Ácido Nucleico que Codifica inserção de IL7RA MCP (SEQ ID NO: 80, a sequência de ácido nucleico que codifica a sequência MCP está sublinhada) cccatcctgctgaccatgtgccccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcc tgcgtgctgtgg
[097] Em algumas modalidades, a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 79. Em algumas modalidades, uma proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 79 por um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos). Em algumas modalidades, qualquer uma das proteínas fornecidas na presente invenção inclui ainda um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 aminoácido a 300 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 250 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 200 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 150 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 100 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de
10 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além da sequência de SEQ ID NO: 79. Adicional ou alternativamente, uma proteína pode carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) a partir do terminal N da SEQ ID NO: 79 e/ou carecer de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20) a partir do terminal C da SEQ ID NO: 79.
[098] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 80. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 80 por um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a 60 nucleotídeos, 1 a 55 nucleotídeos, 1 a 50 nucleotídeos, 1 a 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a 35 nucleotídeos, 1 a 30 nucleotídeos, 1 a 25 nucleotídeos, 1 a 20 nucleotídeos, 1 a 15 nucleotídeos, 1 a 10 nucleotídeos ou 1 a 5 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica a proteína pode ainda incluir um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 80. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína pode carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 80 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO: 80.
[099] Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas descritas na presente invenção pode incluir ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios intracelulares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descritos na presente invenção ou conhecidos no estado da técnica).
[0100] Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas descritas na presente invenção pode incluir ainda um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios extracelulares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descritos na presente invenção ou conhecidos no estado da técnica).
[0101] Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas descritas na presente invenção podem incluir ainda uma sequência ligante (por exemplo, qualquer uma das sequências ligantes exemplares descritas na presente invenção ou conhecidas no estado da técnica) posicionada entre o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 e o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios extracelulares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descrito na presente invenção ou conhecido no estado da técnica).
[0102] Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas descritas na presente invenção podem incluir ainda uma sequência ligante adicional (por exemplo, qualquer uma das sequências ligantes adicionais exemplares descritas na presente invenção ou conhecidas no estado da técnica) posicionada entre o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 e o domínio intracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios intracelulares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descritos na presente invenção ou conhecidos no estado da técnica).
[0103] Em algumas modalidades, a proteína compreende ainda uma sequência de sinal em seu terminal N. Em algumas modalidades, a sequência de sinal compreende ou é a sequência MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (SEQ ID NO: 10). Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica a sequência de sinal compreende ou é a sequência atgctcctgctcgtgacttcacttcttctctgtgaactcccacaccccgcgtttttgcttatccct (SEQ ID NO: 81). Exemplos adicionais de sequências de sinal são conhecidos no estado da técnica. Por exemplo, uma sequência de sinal pode ter cerca de 5 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos para cerca de 16 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos para cerca de 14 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos s a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos ácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos ácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos ácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos ácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos para cerca de 28 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos para cerca de 26 aminoácidos s, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, ou cerca de 28 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos de comprimento.
[0104] Em algumas modalidades, a proteína pode incluir ainda um marcador de peptídeo. Por exemplo, um marcador pode ser usado para ajudar a facilitar a purificação, produção e/ou identificação da proteína transmembrana quimérica. Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de histidina que compreende pelo menos seis resíduos de histidina. Exemplos adicionais de marcadores são conhecidos no estado da técnica.
[0105] Aspectos não limitantes de qualquer uma das proteínas fornecidas na presente invenção são descritos abaixo. Domínios Extracelulares de uma Cadeia Alfa de Receptor de Interleucina- 7
[0106] Algumas modalidades das proteínas descritas na presente invenção podem incluir ainda um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descrito na presente invenção). Por exemplo, as proteínas descritas na presente invenção podem incluir um domínio extracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, de um humano, um camundongo, um rato, um macaco, um chimpanzé, um porco, um cachorro, um gato ou qualquer outras espécies apropriadas. Exemplos não limitantes de domínios extracelulares de cadeias alfa de tipo selvagem de receptores de interleucina-7 são descritos abaixo.
Exemplos adicionais de domínios extracelulares de cadeias alfa de tipo selvagem de receptores de interleucina-7 são conhecidos no estado da técnica.
[0107] Em algumas modalidades, o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 é ou compreende um domínio extracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7. Por exemplo, o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 compreende ou é um domínio extracelular de uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 15). Domínio Extracelular Exemplar de uma Cadeia Alfa Humana de Tipo Selvagem de Receptor de Interleucina-7 (SEQ ID NO: 11)
MYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMD Ácido Nucleico que Codifica o Domínio Extracelular Humano de Tipo Selvagem de uma Cadeia Alfa de Receptor de Interleucina-7 (SEQ ID NO: 12) ggcgagagcggctacgcccagaacggcgacctggaggacgccgagctggacgactacagcttcagctg ctacagccagctggaggtgaacggcagccagcacagcctgacctgcgccttcgaggaccccgacgtgaacatc accaacctggagttcgagatctgcggcgccctggtggaggtgaagtgcctgaacttcaggaagctgcaggagat ctacttcatcgagaccaagaagttcctgctgatcggcaagagcaacatctgcgtgaaggtgggcgagaagagcc tgacctgcaagaagatcgacctgaccaccatcgtgaagcccgaggcccccttcgacctgagcgtggtgtacagg gagggcgccaacgacttcgtggtgaccttcaacaccagccacctgcagaagaagtacgtgaaggtgctgatgc acgacgtggcctacaggcaggagaaggacgagaacaagtggacccacgtgaacctgagcagcaccaagctga ccctgctgcagaggaagctgcagcccgccgccatgtacgagatcaaggtgaggagcatccccgaccactacttc aagggcttctggagcgagtggagccccagctactacttcaggacccccgagatcaacaacagcagcggcgaga tggac
[0108] Em algumas modalidades, um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou pelo menos 100% idêntica a uma sequência de um domínio extracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma sequência de um domínio extracelular de uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 11). Em algumas modalidades, um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 11 por um a quarenta aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 ou 40 aminoácidos). Em algumas modalidades, um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 pode incluir ainda um a cerca de 250 aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 200 aminoácidos, 1 a cerca de 150 aminoácidos, 1 a cerca de 100 aminoácidos, 1 a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além de SEQ ID NO: 11. Adicional ou alternativamente, um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 é uma sequência de um domínio extracelular de uma cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 (por exemplo, uma sequência de um domínio extracelular de uma cadeia alfa humana de tipo selvagem de receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 11) tendo um ou ambos de: um a dez aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos) deletados do terminal N da sequência do domínio extracelular da cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7 e (ii) um a dez aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) deletados do terminal C da sequência do domínio extracelular da cadeia alfa de tipo selvagem de receptor de interleucina-7.
[0109] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 12 por um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a 55 nucleotídeos, 1 a 50 nucleotídeos, 1 a 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a 35 nucleotídeos, 1 a 30 nucleotídeos, 1 a 25 nucleotídeos, 1 a 20 nucleotídeos, 1 a 15 nucleotídeos, 1 a 10 nucleotídeos ou 1 a 5 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 pode ainda incluir um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 12. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 pode carecer um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 12 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO: 12.
[0110] Domínios extracelulares exemplares adicionais de cadeias alfa de tipo selvagem de receptores de interleucina-7 são fornecidos abaixo. Domínio Extracelular de Camundongo de Tipo Selvagem Exemplar de uma Cadeia Alfa de Isoforma 1 de Receptor de Interleucina-7 (SEQ ID NO: 13)
MYEIKVRSIPHNDYFKGFWSEWSPSSTFETPEPKNQGGWD Ácido Nucleico que Codifica o Domínio Extracelular de Camundongo do Tipo Selvagem de uma Cadeia Alfa de Isoforma 1 de Receptor de Interleucina- 7 (SEQ ID NO: 14) gaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccac agccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatc tggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttata aagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaa aatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaa tgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctac cgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaa aactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctgga gcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggat Domínio Extracelular de Camundongo de Tipo Selvagem Exemplar de uma Cadeia Alfa de Isoforma 2 de Receptor de Interleucina-7 (SEQ ID NO: 15)
KVRSIPHNDYFKGFWSEWSPSSTFETPEPKNQGGWD Ácido Nucleico que Codifica o Domínio Extracelular de Camundongo do Tipo Selvagem de uma Cadeia Alfa de Variante 2 de Receptor de Interleucina- 7 (SEQ ID NO: 16) gaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccac agccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatc tggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttata aagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaa aatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaa tgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctac cgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaa aactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctgga gcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggat
[0111] Em algumas modalidades, o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 é uma sequência de um domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, um domínio extracelular de tipo selvagem maduro de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, por exemplo, qualquer um dos domínios extracelulares de tipo selvagem maduro de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descrito na presente invenção, por exemplo, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 15) tendo um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal N da sequência do domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Em algumas modalidades, o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 é uma sequência de um domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, um domínio extracelular de tipo selvagem maduro de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, por exemplo, qualquer um dos domínios extracelulares de tipo selvagem maduro de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descrito na presente invenção, por exemplo, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 15) tendo um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal C da sequência do domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Em algumas modalidades, o domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 é uma sequência de um domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, um domínio extracelular de tipo selvagem maduro de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7, por exemplo, qualquer um dos domínios extracelulares de tipo selvagem maduro de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descrito na presente invenção, por exemplo, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 15) tendo ambos um a dez aminoácidos (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) removidos do terminal N da sequência do domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 e um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal C da sequência do domínio extracelular de tipo selvagem de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7.
[0112] Como será apreciado por técnicos no assunto, quando um ácido nucleico que codifica um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 inclui ou carece de um ou mais nucleotídeos adicionais em comparação com a SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 16, o quadro de leitura translacional deve ainda ser mantido de modo que um códon sem sentido não seja introduzido e a proteína completa possa ser traduzida (por exemplo, um ácido nucleico que codifica um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de Interleucina-7 pode incluir ou carecer de três nucleotídeos ou múltiplos dos mesmos).
[0113] Como um técnico no assunto pode apreciar, quando os aminoácidos que não são conservados entre domínios extracelulares de cadeias alfa de receptores de interleucina-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são menos propensos a causar uma diminuição no nível de uma ou mais atividades de um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Em contraste, quando os aminoácidos que são conservados entre domínios extracelulares de cadeias alfa de receptores de interleucina-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são mais propensos a causar uma diminuição no nível de uma ou mais atividades de um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Em vista deste conhecimento, um técnico no assunto pode selecionar quais posições de aminoácidos em um domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, os aminoácidos não conservados) podem ser substituídos sem diminuir a atividade do domínio extracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7. Proteínas Transmembranares Quiméricas
[0114] São fornecidas aqui proteínas transmembranares quiméricas que incluem um domínio IL-15 extracelular (por exemplo, qualquer um dos domínios IL-15 extracelulares exemplares descritos na presente invenção ou conhecidos no estado da técnica), um domínio extracelular sushi a partir de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15 (por exemplo, um ou mais de qualquer um dos domínios sushi extracelulares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15 descrito na presente invenção ou conhecido no estado da técnica), e um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios transmembranares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina- 7 descrito na presente invenção ou conhecido no estado da técnica). Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência ligante posicionada entre o domínio IL-15 extracelular e o domínio extracelular sushi a partir de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15 (por exemplo, qualquer uma das sequências ligantes exemplares descritas na presente invenção ou conhecidas no estado da técnica). Em algumas modalidades, a proteína transmembrana quimérica compreende ainda um ligante adicional posicionado entre o domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-15 e o domínio transmembranar da cadeia alfa do receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer uma das sequências ligantes exemplares descritas na presente invenção ou conhecidas no estado da técnica). Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica pode incluir ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios intracelulares exemplares de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 descrito na presente invenção ou conhecido no estado da técnica).
[0115] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende ou é SEQ ID NO: 17 (mostrada abaixo). Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 17)
NSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica Proteína Transmembranar Quimérica (SEQ ID NO: 18) aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgcc accctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcag gtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagc ctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaag gagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggagg aggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctcca atgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacag cggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccact ggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtga caacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagct ctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacag gcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctg acagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgacca tcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaagc ccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacct gaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggac gaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggc gacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcc tgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcag ggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctg ccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccag cctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
[0116] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos
98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, uma proteína transmembranar quimérica inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 17 por um a cerca de 100 aminoácidos (por exemplo, 1 a cerca de 95 aminoácidos, 1 a cerca de 90 aminoácidos, 1 a cerca de 80 aminoácidos, 1 a cerca de 75 aminoácidos, 1 a cerca de 70 aminoácidos, 1 a cerca de 65 aminoácidos, 1 a cerca de 60 aminoácidos, 1 a cerca de 55 aminoácidos, 1 a cerca de 50 aminoácidos, 1 a cerca de 45 aminoácidos, 1 a cerca de 40 aminoácidos, 1 a cerca de 35 aminoácidos, 1 a cerca de 30 aminoácidos, 1 a cerca de 25 aminoácidos, 1 a cerca de 20 aminoácidos, 1 a cerca de 15 aminoácidos, 1 a cerca de 10 aminoácidos, 1 a cerca de 5 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 15 aminoácidos ou cerca de 5 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos). Em algumas modalidades, uma proteína transmembranar quimérica inclui 1 a cerca de 300 aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 250 aminoácidos, 1 a cerca de 200 aminoácidos, 1 a cerca de 150 aminoácidos, 1 a cerca de 100 aminoácidos, 1 a cerca de 50 aminoácidos, 1 a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 100 aminoácidos ácidos, cerca de 5 a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além da sequência de SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência de SEQ ID NO: 17 tendo de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos) removidos do terminal N de SEQ ID NO: 17 e/ou um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos) removidos do terminal C de SEQ ID NO: 17.
[0117] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 18 por 1 a cerca de 300 nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 300 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 250 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 150 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 300 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 250 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 150 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos ou cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 50 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica inclui um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 18. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína transmembranar quimérica pode carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 18 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO: 18.
[0118] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende ou é uma das SEQ ID NO: 19, 83, 85, 87 ou 89 (mostradas abaixo). Proteína transmembranar quimérica exemplar (SEQ ID NO: 19)
LGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 20) aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgcc accctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcag gtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagc ctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaag gagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggagg aggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctcca atgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacag cggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccact ggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtga caacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagct ctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacag gcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctg acagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgccac cctgtttaaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaa gaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagccc aggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatcc aggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcaga ggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcag ggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagc ctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccacca acagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagccc atcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 83)
GTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 84) aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgcc accctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcag gtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagc ctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaag gagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggagg aggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctcca atgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacag cggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccact ggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtga caacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagct ctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacag gcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctg acagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgacct gccccaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaaga ggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccag gaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccag gccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagagg ctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcaggg acagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcct ggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaac agcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccat cctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 85)
LGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 86) aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgcc accctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcag gtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagc ctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaag gagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggagg aggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctcca atgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacag cggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccact ggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtga caacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagct ctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacag gcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctg acagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgatgt gccccaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaaga ggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccag gaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccag gccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagagg ctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcaggg acagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcct ggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaac agcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccat cctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 87)
NSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 88) aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgcc accctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcag gtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagc ctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaag gagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggagg aggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctcca atgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacag cggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccact ggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtga caacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagct ctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacag gcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctg acagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgacca tcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggccgtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaag cccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacc tgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggac gaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggc gacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcc tgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcag ggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctg ccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccag cctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag Proteína transmembranar quimérica exemplar (SEQ ID NO: 89)
NSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica Proteína Transmembranar Quimérica Exemplar (SEQ ID NO: 90) aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgcc accctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcag gtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagc ctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaag gagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggagg aggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctcca atgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacag cggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccact ggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtga caacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagct ctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacag gcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctg acagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgacca tcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggtggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaagc ccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacct gaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggac gaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggc gacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcc tgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcag ggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctg ccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccag cctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
[0119] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 19, 83, 85, 87 ou 89. Em algumas modalidades, uma proteína transmembranar quimérica inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 19, 83, 85, 87 ou 89 por um a cerca de 100 aminoácidos (por exemplo, 1 a cerca de 95 aminoácidos, 1 a cerca de 90 aminoácidos, 1 a cerca de 80 aminoácidos, 1 a cerca de 75 aminoácidos, 1 a cerca de 70 aminoácidos, 1 a cerca de 65 aminoácidos, 1 a cerca de 60 aminoácidos, 1 a cerca de 55 aminoácidos, 1 a cerca de 50 aminoácidos, 1 a cerca de 45 aminoácidos, 1 a cerca de 40 aminoácidos, 1 a cerca de 35 aminoácidos, 1 a cerca de 30 aminoácidos, 1 a cerca de 25 aminoácidos, 1 a cerca de 20 aminoácidos, 1 a cerca de 15 aminoácidos, 1 a cerca de 10 aminoácidos, 1 a cerca de 5 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 15 aminoácidos ou cerca de 5 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos). Em algumas modalidades, uma proteína transmembranar quimérica inclui 1 a cerca de 300 aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 250 aminoácidos, 1 a cerca de 200 aminoácidos, 1 a cerca de 150 aminoácidos, 1 a cerca de 100 aminoácidos, 1 a cerca de 50 aminoácidos, 1 a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 100 aminoácidos ácidos, cerca de 5 a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 100 aminoácidos ou cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos), por exemplo, além da sequência de SEQ ID NO: 19, 83, 85, 87 ou 89. Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência de SEQ ID NO: 19, 83, 85, 97 ou 89 tendo de um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos) removidos do terminal N de SEQ ID NO: 19, 83, 85, 87 ou 89 e/ou um a vinte aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 , 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos) removidos do terminal C de SEQ ID NO: 19, 83, 85, 87 ou 89.
[0120] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 20, 84, 86, 88 ou 90. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 20, 84, 86, 88 ou 90 por 1 a cerca de 300 nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 300 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 250 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 150 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 300 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 250 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 150 nucleotídeos, cerca de 10 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos ou cerca de
10 nucleotídeos a cerca de 50 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica inclui um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 900 nucleotídeos, 1 a cerca de 850 nucleotídeos, 1 a cerca de 800 nucleotídeos, 1 a cerca de 750 nucleotídeos, 1 a cerca de 700 nucleotídeos, 1 a cerca de 650 nucleotídeos, 1 a cerca de 600 nucleotídeos, 1 a cerca de 550 nucleotídeos, 1 a cerca de 500 nucleotídeos, 1 a cerca de 450 nucleotídeos, 1 a cerca de 400 nucleotídeos, 1 a cerca de 350 nucleotídeos, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos ou 1 a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da SEQ ID NO: 20, 84, 86, 88 ou 90. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica a proteína transmembranar quimérica pode carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 20, 84, 86, 88 ou 90 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO: 20, 84, 86, 88 ou 90.
[0121] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica (por exemplo, proteína madura ou precursora) pode ter cerca de 210 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de
640 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 340 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 320 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 280 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 260 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 340 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 320 aminoácidos ácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 280 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 260 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos ácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos ácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos ácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos ácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 3 40 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 320 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 280 aminoácidos, cerca de 240 aminoácidos a cerca de 260 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 340 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 320 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 260 aminoácidos a cerca de 280 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 340 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 320 aminoácidos, cerca de 280 aminoácidos a cerca de 300 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 340 aminoácidos, cerca de 300 aminoácidos a cerca de 320 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos ácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 320 aminoácidos a cerca de 340 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 340 a cerca de 600 aminoácidos, 340 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de
340 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 340 aminoácidos a cerca de 360 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 360 aminoácidos a cerca de 380 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos ácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos ácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos ácidos,
cerca de 380 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 380 aminoácidos a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos ácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos ácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 5 00 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 400 aminoácidos a cerca de 420 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 420 aminoácidos a cerca de 440 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de
440 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 440 aminoácidos a cerca de 460 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos, cerca de 460 aminoácidos a cerca de 480 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos ácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 480 aminoácidos a cerca de 500 aminoácidos ácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos ácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos, cerca de 500 aminoácidos a cerca de 520 aminoácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos ácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 520 aminoácidos a cerca de 540 aminoácidos ácidos,
cerca de 540 aminoácidos a cerca de 6 50 aminoácidos, cerca de 540 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 540 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 540 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 540 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 540 aminoácidos a cerca de 560 aminoácidos, cerca de 560 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 560 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 560 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 560 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 560 aminoácidos a cerca de 580 aminoácidos, cerca de 580 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 580 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 580 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 580 aminoácidos a cerca de 600 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, cerca de 600 aminoácidos a cerca de 620 aminoácidos, cerca de 620 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, cerca de 620 aminoácidos a cerca de 640 aminoácidos, ou cerca de 630 aminoácidos a cerca de 650 aminoácidos, de comprimento.
[0122] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende ainda uma sequência de sinal em seu terminal N Em algumas modalidades, a sequência de sinal compreende ou é a sequência de MDWTWILFLVAAATRVHS (SEQ ID NO: 21). Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica a sequência de sinal compreende ou é a sequência atggattggacctggattctgtttctggtggccgctgccacaagagtgcacagc (SEQ ID NO: 91). Exemplos adicionais de sequências de sinal são conhecidos no estado da técnica. Por exemplo, uma sequência de sinal pode ter cerca de 5 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos,
cerca de 5 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos para cerca de 16 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos para cerca de 14 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos s a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos ácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos ácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos ácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos ácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos,
cerca de 24 aminoácidos para cerca de 28 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos para cerca de 26 aminoácidos s, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, ou cerca de 28 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos de comprimento.
[0123] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica pode incluir ainda um marcador de peptídeo. Por exemplo, um marcador pode ser usado para ajudar a facilitar a purificação, produção e/ou identificação da proteína transmembranar quimérica. Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de histidina que compreende pelo menos seis resíduos de histidina. Exemplos adicionais de marcadores são conhecidos no estado da técnica.
[0124] Aspectos não limitantes de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas fornecidas na presente invenção são descritos abaixo. Domínios IL-15 Extracelulares
[0125] Em algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção, o domínio IL-15 extracelular compreende ou é uma sequência de uma proteína de IL-15 do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 do tipo selvagem madura). Por exemplo, a proteína de IL-15 do tipo selvagem pode ser uma proteína de IL-15 humana do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-2 humana do tipo selvagem madura), uma proteína de IL-15 de camundongo do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 de camundongo do tipo selvagem madura), uma proteína de IL-15 de chimpanzé do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 de chimpanzé do tipo selvagem madura) ou uma proteína de IL-15 de macaco do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 de macaco do tipo selvagem madura). Exemplos não limitantes de sequências de proteínas IL-15 do tipo selvagem e ácidos nucleicos que codificam essas sequências de proteína IL-15 exemplares são fornecidos abaixo. Isoforma 1 exemplar de IL-15 humana (SEQ ID NO: 22)
IHDT VENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS Ácido Nucleico que Codifica a Isoforma 1 de IL-15 humana (SEQ ID NO: 23) aactgggtgaatgtaataagtgatttgaaaaaaattgaagatcttattcaatctatgcatattgatgctac tttatatacggaaagtgatgttcaccccagttgcaaagtaacagcaatgaagtgctttctcttggagttacaagtt atttcacttgagtccggagatgcaagtattcatgatacagtagaaaatctgatcatcctagcaaacaacagtttgt cttctaatgggaatgtaacagaatctggatgcaaagaatgtgaggaactggaggaaaaaaatattaaagaattt ttgcagagttttgtacatattgtccaaatgttcatcaacacttct Isoforma 2 exemplar de IL-15 humana (SEQ ID NO: 24)
QSFVHIVQMFINTS Ácido Nucleico que Codifica a Isoforma 2 de IL-15 humana (SEQ ID NO: 25) atggtattgggaaccatagatttgtgcagctgtttcagtgcagggcttcctaaaacagaagccaactggg tgaatgtaataagtgatttgaaaaaaattgaagatcttattcaatctatgcatattgatgctactttatatacggaa agtgatgttcaccccagttgcaaagtaacagcaatgaagtgctttctcttggagttacaagttatttcacttgagtc cggagatgcaagtattcatgatacagtagaaaatctgatcatcctagcaaacaacagtttgtcttctaatgggaa tgtaacagaatctggatgcaaagaatgtgaggaactggaggaaaaaaatattaaagaatttttgcagagttttg tacatattgtccaaatgttcatcaacacttcttga Variante A Exemplar de IL-15 de Camundongo (SEQ ID NO: 26)
NETVRNVLYLANSTLSSNKNVAESGCKECEELEEKTFTEFLQSFIRIVQMFINTS Ácido Nucleico que Codifica a Variante A de IL-15 de Camundongo (SEQ ID NO: 27) aactggatagatgtaagatatgacctggagaaaattgaaagccttattcaatctattcat attgacaccactttatacactgacagtgactttcatcccagttgcaaagttactgcaatgaactgctttctcctgga attgcaggttattttacatgagtacagtaacatgactcttaatgaaacagtaagaaacgtgctctaccttgcaaac agcactctgtcttctaacaagaatgtagcagaatctggctgcaaggaatgtgaggagctggaggagaaaacctt cacagagtttttgcaaagctttatacgcattgtccaaatgttcatcaacacgtcc Variante B Exemplar de IL-15 de Camundongo (SEQ ID NO: 28)
NETVRNVLYLANSTLSSNKNVAESGCKECEELEEKTFTEFLQSFIRIVQMFINTS Ácido Nucleico que Codifica a Variante B de IL-15 de Camundongo (SEQ ID NO: 29) aactggatagatgtaagatatgacctggagaaaattgaaagccttattcaatctattcatattgacaccac tttatacactgacagtgactttcatcccagttgcaaagttactgcaatgaactgctttctcctggaattgcaggtta ttttacatgagtacagtaacatgactcttaatgaaacagtaagaaacgtgctctaccttgcaaacagcactctgtc ttctaacaagaatgtagcagaatctggctgcaaggaatgtgaggagctggaggagaaaaccttcacagagtttt tgcaaagctttatacgcattgtccaaatgttcatcaacacgtcc
[0126] Em algumas modalidades, o domínio IL-15 extracelular compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à proteína de IL-15 do tipo selvagem (por exemplo,
uma proteína de IL-15 do tipo selvagem madura, por exemplo, SEQ ID NO: 22, 24, 26, ou 28). Em algumas modalidades, um domínio IL-15 extracelular inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 22, 24, 26 ou 28 por um a 25 aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 aminoácidos). Em algumas modalidades, um domínio IL-15 extracelular inclui um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 100 aminoácidos, 1 a cerca de 80 aminoácidos, 1 a cerca de 60 aminoácidos, 1 a cerca de 40 aminoácidos, 1 a cerca de 20 aminoácidos, 1 a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 5 a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 100 aminoácidos ácidos, cerca de 10 a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 40 aminoácidos ou cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos), por exemplo, além da sequência de SEQ ID NO: 22, 24, 26, ou 28. Ainda ou alternativamente, um domínio IL-15 extracelular pode faltar de um a cerca de 25 aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 aminoácidos) em comparação com a sequência de SEQ ID NO: 22, 24, 26, ou 28.
[0127] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica um domínio IL-15 extracelular compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 23, 25, 27, ou 29. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica um domínio IL-15 inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 23, 25, 27 ou 29 por um a cerca de 75 nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 70 nucleotídeos, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 75 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 70 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 60 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 40 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 30 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 20 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 10 nucleotídeos). Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica um domínio IL-15 extracelular inclui um ou mais nucleotídeos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 300 nucleotídeos, 1 a cerca de 250 nucleotídeos, 1 a cerca de 200 nucleotídeos, 1 a cerca de 150 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 300 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 250 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 150 nucleotídeos, cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos, ou cerca de 5 nucleotídeos a cerca de 50 nucleotídeos), por exemplo, além da sequência da SEQ ID NO: 23, 25, 27, ou 29. Adicional ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica o domínio IL-15 extracelular pode carecer de um a 75 nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 70 nucleotídeos, 1 a cerca de 65 nucleotídeos, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 5'- da SEQ ID NO: 20, 23, 25, 27 ou 29 e/ou carecer de um a sessenta nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 55 nucleotídeos, 1 a cerca de 50 nucleotídeos, 1 a cerca de 45 nucleotídeos, 1 a 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 35 nucleotídeos, 1 a cerca de 30 nucleotídeos, 1 a cerca de 25 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, 1 a cerca de 15 nucleotídeos, 1 a cerca de 10 nucleotídeos ou 1 a cerca de 5 nucleotídeos) da extremidade 3'- da SEQ ID NO: 23, 25, 27, ou 29.
[0128] Como um técnico no assunto pode apreciar, quando os aminoácidos que não são conservados entre as proteínas de IL-15 do tipo selvagem de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são menos propensos a causar uma diminuição no nível de um ou mais atividades de uma proteína de IL-15. Em contraste, quando os aminoácidos que são conservados entre proteínas de IL-15 do tipo selvagem de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são mais propensos a causar uma diminuição no nível de uma ou mais atividades de uma proteína de IL-15. Em vista deste conhecimento, um técnico no assunto pode selecionar quais posições de aminoácidos em uma proteína de IL-15 do tipo selvagem (por exemplo, os aminoácidos não conservados) podem ser substituídas sem diminuir a atividade da proteína de IL-15.
[0129] Em algumas modalidades, o domínio IL-15 extracelular é uma sequência de uma proteína de IL-15 do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 do tipo selvagem madura, por exemplo, qualquer uma das proteínas de IL-15 do tipo selvagem maduras descritas na presente invenção, por exemplo, SEQ ID NO : 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26 ou SEQ ID NO: 28) tendo um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal N- da sequência da proteína de IL-15 do tipo selvagem. Em algumas modalidades, o domínio IL-15 extracelular é uma sequência de uma proteína de IL-15 do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 do tipo selvagem madura, por exemplo, qualquer uma das proteínas de IL-15 do tipo selvagem madura descritas na presente invenção, por exemplo, proteína de IL-15 humana do tipo selvagem madura, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26 ou SEQ ID NO: 28) tendo um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal C- da sequência da proteína de IL-15 do tipo selvagem. Em algumas modalidades, o domínio IL-15 extracelular é uma sequência de uma proteína de IL-15 do tipo selvagem (por exemplo, uma proteína de IL-15 do tipo selvagem madura, por exemplo, qualquer uma das proteínas de IL-15 do tipo selvagem madura descritas na presente invenção, por exemplo, proteína de IL-15 humana do tipo selvagem madura, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26 ou SEQ ID NO: 28) tendo ambos um a dez aminoácidos (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) ácidos removidos do terminal N- da sequência da proteína de IL-15 do tipo selvagem e um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal C- da sequência da proteína de IL-15 do tipo selvagem.
[0130] Como será apreciado por técnicos no assunto, quando um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica tendo um domínio IL-15 extracelular inclui ou carece de um ou mais nucleotídeos adicionais em comparação com a SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27 ou SEQ ID NO: 29, o quadro de leitura translacional ainda deve ser mantido de modo que um códon sem sentido não seja introduzido e a proteína completa possa ser traduzida (por exemplo, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica com um domínio IL-15 extracelular pode incluir ou carecer de três nucleotídeos, ou os múltiplos dos mesmos, dentro da porção extracelular de IL-15 da proteína transmembranar quimérica).
Cadeia Alfa de um Receptor IL-7
[0131] Algumas modalidades das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir ainda uma sequência de uma cadeia alfa de uma proteína receptora IL-7 ou uma porção da mesma. Por exemplo, as proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir uma sequência de uma cadeia alfa do tipo selvagem de uma proteína do receptor IL-7, de um humano, um camundongo, um rato, um macaco, um chimpanzé, um porco, um cachorro, um gato ou quaisquer outras espécies apropriadas. Exemplos não limitantes de cadeias alfa do tipo selvagem de receptores de IL-7 são descritos abaixo. Exemplos adicionais de cadeias alfa de receptores de IL-7 são conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, as proteínas transmembrana quiméricas, incluindo uma sequência de uma cadeia alfa de um receptor IL-7, ou uma porção da mesma, incluem um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor IL-7 (por exemplo, qualquer um dos domínios transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor IL-7 descrito na presente invenção). Cadeia Alfa do receptor IL-7 Humana do tipo selvagem Exemplar (SEQ ID NO: 30)
YVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica a Cadeia Alfa do receptor IL-7 Humana do tipo selvagem (SEQ ID NO: 31) gaaagtggctatgctcaaaatggagacttggaagatgcagaactggatgactactcattctcatgctata gccagttggaagtgaatggatcgcagcactcactgacctgtgcttttgaggacccagatgtcaacatcaccaatc tggaatttgaaatatgtggggccctcgtggaggtaaagtgcctgaatttcaggaaactacaagagatatatttca tcgagacaaagaaattcttactgattggaaagagcaatatatgtgtgaaggttggagaaaagagtctaacctgc aaaaaaatagacctaaccactatagttaaacctgaggctccttttgacctgagtgtcgtctatcgggaaggagcc aatgactttgtggtgacatttaatacatcacacttgcaaaagaagtatgtaaaagttttaatgcacgatgtagctt accgccaggaaaaggatgaaaacaaatggacgcatgtgaatttatccagcacaaagctgacactcctgcagag aaagctccaaccggcagcaatgtatgagattaaagttcgatccatccctgatcactattttaaaggcttctggagt gaatggagtccaagttattacttcagaactccagagatcaataatagctcaggggagatggatcctatcttacta accatcagcattttgagttttttctctgtcgctctgttggtcatcttggcctgtgtgttatggaaaaaaaggattaag cctatcgtatggcccagtctccccgatcataagaagactctggaacatctttgtaagaaaccaagaaaaaattta aatgtgagtttcaatcctgaaagtttcctggactgccagattcatagggtggatgacattcaagctagagatgaa gtggaaggttttctgcaagatacgtttcctcagcaactagaagaatctgagaagcagaggcttggaggggatgt gcagagccccaactgcccatctgaggatgtagtcatcactccagaaagctttggaagagattcatccctcacatg cctggctgggaatgtcagtgcatgtgacgcccctattctctcctcttccaggtccctagactgcagggagagtggc aagaatgggcctcatgtgtaccaggacctcctgcttagccttgggactacaaacagcacgctgccccctccatttt ctctccaatctggaatcctgacattgaacccagttgctcagggtcagcccattcttacttccctgggatcaaatca agaagaagcatatgtcaccatgtccagcttctaccaaaaccag Cadeia Alfa do receptor IL-7 de Camundongo do tipo selvagem Exemplar variante 1(SEQ ID NO: 32)
QEEAYVTMSSFYQNK Ácido Nucleico que Codifica a Cadeia Alfa do Receptor IL-7 de Camundongo do Tipo Selvagem Variante 1(SEQ ID NO: 33) gaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccac agccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatc tggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttata aagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaa aatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaa tgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctac cgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaa aactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctgga gcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggatcctgtcttgcca agtgtcaccattctgagtttgttctctgtgtttttgttggtcatcttagcccatgtgctatggaaaaaaaggattaaa cctgtcgtatggcctagtctccccgatcataagaaaactctggaacaactatgtaagaagccaaaaacgagtct gaatgtgagtttcaatcccgaaagtttcctggactgccagattcatgaggtgaaaggcgttgaagccagggacg aggtggaaagttttctgcccaatgatcttcctgcacagccagaggagttggagacacagggacacagagccgct gtacacagtgcaaaccgctcgcctgagacttcagtcagcccaccagaaacagttagaagagagtcacccttaag atgcctggctagaaatctgagtacctgcaatgcccctccactcctttcctctaggtcccctgactacagagatggt gacagaaataggcctcctgtgtatcaagacttgctgccaaactctggaaacacaaatgtccctgtccctgtccctc aaccattgcctttccagtcgggaatcctgataccagtttctcagagacagcccatctccacttcctcagtactgaat caagaagaagcgtatgtcaccatgtctagtttttaccaaaacaaa Cadeia Alfa do Receptor IL-7 de Camundongo do Tipo Selvagem Exemplar Variante 2(SEQ ID NO: 34)
VLWKKRIKPVVWPSLPDHKKTLEQL Ácido nucleico que Codifica a Cadeia Alfa do Receptor IL-7 de Camundongo Variante 2(SEQ ID NO: 35) atgatggctctgggtagagctttcgctatagttttctgcttaattcaagctgtttctggagaaagtggaaat gcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccacagccagttggaagtgg atggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatctggaatttcaaatatgt ggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttataaagacatcagaattct tactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaaaatatggctataaaca caatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaatgattttttggtgacatt taatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctaccgcccagcaaggggtg aaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaaaactacgaccaaaagc aatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctggagcgagtggagtccaag ttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggatcctgtcttgccaagtgtcaccattctgag tttgttctctgtgtttttgttggtcatcttagcccatgtgctatggaaaaaaaggattaaacctgtcgtatggcctag tctccccgatcataagaaaactctggaacaactatag
[0132] Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas fornecidas na presente invenção pode incluir, por exemplo, uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 30, 32 ou 34 ou uma porção da mesma. Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas fornecidas na presente invenção podem incluir, por exemplo, uma sequência que difere da SEQ ID NO: 30, 32 ou 34 por um a 60 aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 aminoácidos). Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir, por exemplo, uma sequência que difere da SEQ ID NO: 30, 32 ou 34 pela carência de um a 60 aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 aminoácidos).
[0133] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma cadeia alfa de um receptor IL-7 compreende ou é uma sequência que é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 31, 33, ou 35. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica uma cadeia alfa de um receptor IL-7 inclui uma sequência que difere da SEQ ID NO: 31, 33 ou 35 por um ou mais nucleotídeos (por exemplo 1 a cerca de 180 nucleotídeos, 1 a cerca de 160 nucleotídeos, 1 a cerca de 140 nucleotídeos, 1 a cerca de 120 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos, 1 a cerca de 80 nucleotídeos, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 180 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 180 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 160 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 160 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 140 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 120 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 100 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 80 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 60 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 40 nucleotídeos ou cerca de 5 a cerca de 20 nucleotídeos). Ainda ou alternativamente, um ácido nucleico que codifica uma cadeia alfa de um receptor IL-7 pode carecer de um ou mais nucleotídeos (por exemplo, 1 a cerca de 180 nucleotídeos, 1 a cerca de 160 nucleotídeos, 1 a cerca de 140 nucleotídeos, 1 a cerca de 120 nucleotídeos, 1 a cerca de 100 nucleotídeos, 1 a cerca de 80 nucleotídeos, 1 a cerca de 60 nucleotídeos, 1 a cerca de 40 nucleotídeos, 1 a cerca de 20 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 180 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 180 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 160 nucleotídeos , cerca de 5 a cerca de 160 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 140 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 120 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 100 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 80 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 60 nucleotídeos, cerca de 5 a cerca de 40 nucleotídeos, ou cerca de 5 a cerca de 20 nucleotídeos) em comparação com a sequência de SEQ ID NO: 31, 33, ou 35.
[0134] Como um técnico no assunto pode apreciar, quando os aminoácidos que não são conservados entre cadeias alfa do tipo selvagem de proteínas receptoras IL-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são menos propensos a causar uma diminuição no nível de um ou mais atividades de uma proteína de IL-7. Em contraste, quando os aminoácidos que são conservados entre cadeias alfa do tipo selvagem de cadeias alfa de proteínas receptoras de IL-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são mais propensos a causar uma diminuição no nível de uma ou mais atividades de uma cadeia alfa de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7. Em vista deste conhecimento, um técnico no assunto pode selecionar quais posições de aminoácidos em uma cadeia alfa do tipo selvagem de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 (por exemplo, os aminoácidos não conservados) podem ser substituídos sem diminuir a atividade da cadeia alfa de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7.
[0135] Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir a sequência de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, uma cadeia alfa de tipo selvagem madura de proteína receptora de IL-7, por exemplo, qualquer uma das cadeias alfa de tipo selvagem do receptor de IL-7 descrito na presente invenção, por exemplo, cadeia alfa humana do tipo selvagem madura da proteína receptora de IL-7, por exemplo, SEQ ID NO: 30) tendo um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal N- da sequência da cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7. Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir a sequência de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, uma cadeia alfa de tipo selvagem madura da proteína receptora de IL-7, por exemplo, qualquer uma das cadeias alfa de tipo selvagem maduras do receptor de IL-7 descritas na presente invenção, por exemplo, cadeia alfa humana do tipo selvagem madura da proteína receptora de IL-7, por exemplo, SEQ ID NO: 30) tendo um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal C- da sequência da cadeia alfa do tipo selvagem proteína receptora de IL-7. Algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir a sequência de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, uma cadeia alfa do tipo selvagem madura da proteína receptora de IL-7, por exemplo, qualquer uma das cadeias alfa do tipo selvagem maduras da proteína receptora de IL-7 descritas na presente invenção, por exemplo, cadeia alfa humana do tipo selvagem madura da proteína receptora de IL-7, por exemplo, SEQ ID NO: 30) tendo ambas um a dez amino (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) ácidos removidos do terminal N- da sequência da cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 e um a dez (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) aminoácidos removidos do terminal C- da sequência da cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7.
[0136] Como será apreciado por técnicos no assunto, quando um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica tendo uma cadeia alfa de um domínio de proteína receptora de IL-7 inclui ou carece de um ou mais nucleotídeos adicionais em comparação com a SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33 ou SEQ ID NO: 35, o quadro de leitura translacional ainda deve ser mantido de modo que um códon sem sentido não seja introduzido e a proteína completa possa ser traduzida (por exemplo, um ácido nucleico que codifica uma proteína transmembranar quimérica tendo um domínio que codifica uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 pode incluir ou carecer de três nucleotídeos, ou múltiplos dos mesmos, dentro da porção que codifica a cadeia alfa do receptor de IL-7). Domínio extracelular sushi de uma Cadeia Alfa de Receptor de IL-15
[0137] Em algumas modalidades, os receptores transmembranares quiméricos descritos na presente invenção podem incluir um ou mais (por exemplo, um, dois, três ou quatro) domínios sushi de uma cadeia alfa do receptor de IL-15. Por exemplo, as proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir um domínio sushi de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15 (por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem de um receptor de IL-15, uma cadeia alfa de camundongo do tipo selvagem de um receptor de IL-15 , uma cadeia alfa de rato do tipo selvagem de um receptor de IL-15, uma cadeia alfa de macaco do tipo selvagem de um receptor de IL-15, uma cadeia alfa de chimpanzé do tipo selvagem de um receptor de IL-15, uma cadeia alfa de porco do tipo selvagem de um receptor de IL-15, um cadeia alfa de cão do tipo selvagem de um receptor de IL-15 ou cadeia alfa de gato do tipo selvagem de um receptor de IL- 15). Exemplos não limitantes de domínios sushi de receptores de IL-15 são descritos abaixo. Exemplos adicionais de domínios sushi de receptores de IL-15 são conhecidos na técnica.
[0138] Um domínio sushi, também conhecido como uma repetição curta de consenso ou motivo de glicoproteína tipo 1, é um motivo comum na interação proteína-proteína. Domínios sushi foram identificados em um número de moléculas de ligação a proteínas, incluindo componentes do complemento C1r, C1s, fator H e C2m, bem como as moléculas não imunológicas fator XIII e β2-glicoproteína. Um típico domínio Sushi tem aproximadamente 60 resíduos de aminoácidos e contém quatro cisteínas (Ranganathan, Pac. Symp Biocomput. 2000:155-67). A primeira cisteína pode formar uma ligação dissulfeto com a terceira cisteína e a segunda cisteína pode formar uma ponte dissulfeto com a quarta cisteína.
[0139] Em algumas modalidades, um domínio sushi pode ser cerca de 25 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 55 aminas o ácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a um cerca de 60 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos o ácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos para cerca de 60 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos para cerca de 90 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos para cerca de 85 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos para cerca de 80 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos para cerca de 75 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos para cerca de 75 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos para cerca de 90 aminoácidos, um cerca de 75 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos,
cerca de 80 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, ou cerca de 85 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, em comprimento.
[0140] Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à uma porção extracelular de uma cadeia alfa humana do tipo selvagem madura do receptor de IL-2, por exemplo, uma cadeia alfa humana do tipo selvagem madura do receptor de IL-2, por exemplo, SEQ ID NO: 36 ou 37. Domínio Sushi de Cadeia Alfa Humana do Tipo Selvagem da Isoforma 1 de IL-15 (SEQ ID NO: 36)
PSLKCI Domínio Sushi de Cadeia Alfa Humana do Tipo Selvagem da Isoforma 2 de IL-15 (SEQ ID NO: 37)
PSLKCI Domínio Sushi de Cadeia Alfa de Camundongo do Tipo Selvagem da Isoforma 1 de IL-15 (SEQ ID NO: 38)
SLKCI Domínio Sushi de Cadeia Alfa de Camundongo do Tipo Selvagem da
Isoforma 4 de IL-15 (SEQ ID NO: 39)
SLKCI Domínio Sushi de Cadeia Alfa de Galinha do Tipo Selvagem da Proteína de IL-15 (SEQ ID NO: 40
VC Porção Extracelular de Cadeia Alfa Humana do Tipo Selvagem da Isoforma 1 de IL-15 (SEQ ID NO: 41)
[0141] Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi é uma porção extracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 (por exemplo, uma porção extracelular de uma cadeia alfa humana do tipo selvagem madura do receptor de IL-15, por exemplo, SEQ ID NO: 41). Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi é uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92 %, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma porção extracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 (por exemplo, SEQ ID NO: 41). Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi é uma sequência de uma porção extracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 (por exemplo, SEQ ID NO: 41) tendo um a vinte (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) aminoácidos removidos do terminal N- da sequência da porção extracelular da cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi é uma sequência de uma porção extracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 (por exemplo, SEQ ID NO: 41) tendo um a vinte (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) aminoácidos removidos do terminal C da sequência da porção extracelular da cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-
15. Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi é uma sequência de uma porção extracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 (por exemplo, SEQ ID NO: 41) tendo um a vinte (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) aminoácidos removidos do terminal N- da sequência da porção extracelular da cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15 e um a vinte (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) aminoácidos removidos do terminal C- da sequência da porção extracelular da cadeia alfa do tipo selvagem madura do receptor de IL-15.
[0142] Em algumas modalidades, um domínio extracelular sushi compreende ou é uma sequência de um domínio sushi de uma cadeia alfa do tipo selvagem do receptor de IL-15 (por exemplo, qualquer um dos domínios sushi de cadeias alfa do tipo selvagem do receptor de IL-15 descritos na presente invenção, por exemplo, um domínio sushi de cadeia alfa humana do tipo selvagem do receptor de IL-15, por exemplo, uma sequência que compreende uma ou ambas as SEQ ID NO: 36 ou 37).
[0143] Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi de proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica,
pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica , pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica a um domínio sushi de uma cadeia alfa de tipo selvagem do receptor de IL-15 (por exemplo, SEQ ID NO: 36, 37, 38, 39 ou 40).
[0144] Como um técnico no assunto pode apreciar, quando os aminoácidos que não são conservados entre domínios sushi de cadeias alfa do tipo selvagem de proteínas receptoras de IL-15 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são menos propensos a causar uma diminuição no nível de atividade de ligação de IL-15 do domínio sushi de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-15. Em contraste, quando os aminoácidos que são conservados entre os domínios sushi de cadeias alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-15 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são mais propensos a causar uma diminuição no nível de atividade de ligação de IL-15 do domínio sushi de uma cadeia alfa da proteína receptora de IL-15. Em vista deste conhecimento, um técnico no assunto pode selecionar quais posições de aminoácidos em um domínio sushi de uma cadeia alfa do tipo selvagem de uma proteína receptora de IL-15 (por exemplo, os aminoácidos não conservados) podem ser substituídas sem diminuir a atividade do domínio sushi de cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-15.
[0145] Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi de proteína transmembranar quimérica é uma sequência de um domínio sushi de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15 (por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NO: 36, 37, 38, 39 ou 40) tendo um a cinco (por exemplo, um,
dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal N- do domínio sushi de cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15. Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi de proteína transmembranar quimérica é uma sequência de um domínio sushi de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15 (por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NO: 36, 37, 38, 39 ou 40) tendo um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal C- do domínio sushi de cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15. Em algumas modalidades, o domínio extracelular sushi de proteína transmembranar quimérica é uma sequência de um domínio sushi de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15 (por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NO: 36, 37, 38, 39 ou 40) tendo um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal N- do domínio sushi de cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15 e um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal C- do domínio sushi de cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-15.
[0146] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende dois domínios sushi. Em algumas modalidades, cada um dos domínios sushi pode ser independentemente qualquer um dos domínios sushi descritos na presente invenção. Domínios Transmembranares de uma Cadeia Alfa de um Receptor de IL-7
[0147] Proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-7 de um humano, um camundongo, um rato, um macaco, um chimpanzé, um porco, um cachorro, um gato ou qualquer outra espécie apropriada. Exemplos não limitantes de domínios transmembranares de cadeias alfa de receptores de IL-7 são descritos abaixo.
Exemplos adicionais de domínios transmembranares da cadeia alfa de receptores de IL-7 são conhecidos na técnica. Domínio Transmembranar de Cadeia Alfa Humana do Tipo Selvagem do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 1)
PILLTISILSFFSVALLVILACVLW Domínio Transmembranar de Cadeia Alfa de Camundongo do Tipo Selvagem da Isoforma 1 do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 42)
PVLPSVTILSLFSVFLLVILAHVLW Domínio Transmembranar de Cadeia Alfa de Camundongo do Tipo Selvagem da Isoforma 2 do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 42)
PVLPSVTILSLFSVFLLVILAHVLW Domínio Transmembranar de Cadeia Alfa de Macaca fascicularis do Tipo Selvagem do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 44)
[0148] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-2 pode ser de cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 15 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 15 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a um cerca de 50 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos o ácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, ou cerca de 45 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, de comprimento.
[0149] Em algumas modalidades de qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 pode ser um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-7 (por exemplo, um domínio transmembranar de um cadeia alfa humana do tipo selvagem de um receptor de IL-7, por exemplo, SEQ ID NO: 1) (por exemplo, qualquer um dos domínios transmembranares exemplares de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-7 listado abaixo ou conhecido na técnica, por exemplo, SEQ ID NO: 1, 42, 43, ou 44).
[0150] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa do receptor de IL-7 compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80 % idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica a um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem do receptor de IL-7 (por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NO: 1, 42, 43, ou 44). Em algumas modalidades, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 inclui uma sequência que difere de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem do receptor de IL-7 (por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NO: 1, 42, 43 ou 44) por um a cinco aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, ou 5 aminoácidos). Em algumas modalidades, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 inclui um ou vinte aminoácidos adicionais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,
15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos), por exemplo, além da sequência de SEQ ID NO: 1, 42, 43, ou 44. Em algumas modalidades, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 pode ter uma sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 42, 43 ou 44), mas carece de um a cinco aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, ou 5 aminoácidos).
[0151] Como um técnico no assunto pode apreciar, quando os aminoácidos que não são conservados entre domínios transmembranares de cadeias alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são menos propensos a causar uma diminuição na atividade de do domínio transmembranar de uma cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em contraste, quando os aminoácidos que são conservados entre os domínios transmembranares das cadeias alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são mais propensos a causar uma diminuição na atividade do domínio transmembranar de uma cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em vista deste conhecimento, um técnico no assunto pode selecionar quais posições de aminoácidos em um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 (por exemplo, os aminoácidos não conservados) podem ser substituídas sem diminuir a atividade do domínio transmembranar da cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7.
[0152] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 é uma sequência de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 1, 42, 43 ou 44) tendo um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal N- do domínio transmembranar da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 é uma sequência de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 1, 42, 43 ou 44) tendo um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal C- do domínio transmembranar da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 é uma sequência de um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, um domínio transmembranar de uma cadeia alfa humana do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7, por exemplo, SEQ ID NO: 1, 42, 43 ou 44) tendo um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal N- do domínio transmembranar da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7 e um a cinco (por exemplo, um, dois, três, quatro ou cinco) aminoácidos removidos do terminal C- do domínio transmembranar da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7.
[0153] Em algumas modalidades de qualquer das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção, o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 inclui a sequência de PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1) com uma ou mais (por exemplo, uma, duas, três ou quatro) das seguintes modificações: (i) alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 foi substituída por uma sequência de três aminoácidos diferente (por exemplo, foi substituída por ácido glutâmico-lisina-valina ou ácido glutâmico-lisina- alanina); (ii) um a três (por exemplo, um, dois ou três) aminoácidos (por exemplo, cisteína-prolina-treonina) foram inseridos entre as posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1; e (iii) um a quatro (por exemplo, um, dois, três ou quatro) aminoácidos (por exemplo, prolina-prolina-cisteína-leucina) foram inseridos entre as posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar é modificado para ter uma sequência da SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
[0154] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar inclui a sequência de SEQ ID NO: 1 com a alanina-leucina-leucina nas posições de aminoácidos 15 até 17 na SEQ ID NO: 1 substituída por ácido glutâmico-lisina- valina ou ácido glutâmico-lisina-alanina. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar inclui a sequência de SEQ ID NO: 1 com cisteína-prolina- treonina inserida entre posições de aminoácidos 5 e 6 na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar inclui a sequência de SEQ ID NO: 1 com uma prolina-prolina-cisteína-leucina inserida entre posições de aminoácidos 4 e 5 na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar é modificado para ter uma sequência da SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou
8. Domínio Intracelular de uma Cadeia Alfa de Receptor de IL-7
[0155] Algumas modalidades das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 ou uma porção da mesma. Por exemplo, proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem incluir um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem de um receptor de IL-7 de um humano, um camundongo, um rato, um macaco, um chimpanzé, um porco, um cachorro, um gato ou qualquer outra espécie apropriada. Exemplos não limitantes de domínios intracelulares de cadeias alfa de receptores de IL-7 são descritos abaixo. Exemplos adicionais de domínios intercelulares da cadeia alfa de receptores de IL-7 são conhecidos na técnica.
[0156] Qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção podem compreender um domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de interleucina-7 (por exemplo, qualquer uma das cadeias alfa de receptor de interleucina-7 descritas na presente invenção). Em algumas modalidades, o domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de interleucina-7 pode ser de cerca de 100 aminoácidos a cerca de 225 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 225 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 225 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 225 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 225 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, ou cerca de 200 aminoácidos a cerca de 225 aminoácidos, de comprimento.
[0157] Qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção pode compreender um domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de interleucina-7 (por exemplo um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem de receptor de interleucina-7
(por exemplo, um domínio intracelular de um cadeia alfa humana do tipo selvagem de um receptor de interleucina-7, por exemplo, SEQ ID NO: 45) (por exemplo, um domínio intracelular de uma cadeia alfa humana de interleucina-7 da SEQ ID NO: 46). Domínio Intracelular de Cadeia Alfa Humana do Tipo Selvagem do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 45, o motivo BOX1 está sublinhado, as tirosinas que são fosforiladas estão em fonte grande em negrito)
QEEAYVTMSSFYQNQ Ácido Nucleico que Codifica um Domínio Intracelular de Cadeia Alfa Humana do Tipo Selvagem do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 82, a sequência de ácido nucleico que codifica o motivo BOX1 está sublinhada) aagaagaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgt aagaagcccaggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtgg acgacatccaggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcga gaagcagaggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagag cttcggcagggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagca gcaggagcctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctggg caccaccaacagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagg gccagcccatcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaa ccag Domínio Intracelular de Cadeia Alfa de Camundongo do Tipo Selvagem da Isoforma 1 do Receptor de IL-7 (SEQ ID NO: 46)
[0158] Em algumas modalidades, o domínio intracelular de uma cadeia alfa do receptor de IL-7 compreende ou é uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80 % idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica a um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem do receptor de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 45 ou 46). Em algumas modalidades, um domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 inclui uma sequência que difere de um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem do receptor de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: (45 ou 46) por um a 40 aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, or 40 aminoácidos). Em algumas modalidades, um domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 inclui um ou mais aminoácidos adicionais (por exemplo, 1 a cerca de 100 aminoácidos, 1 a cerca de 95 aminoácidos, 1 a cerca de 90 aminoácidos, 1 a cerca de 85 aminoácidos, 1 a cerca de 80 aminoácidos, 1 a cerca de 75 aminoácidos, 1 a cerca de 70 aminoácidos, 1 a cerca de 65 aminoácidos, 1 a cerca de 60 aminoácidos, 1 a cerca de 55 aminoácidos 1 a cerca de 50 aminoácidos, 1 a cerca de 45 aminoácidos, 1 a cerca de 40 aminoácidos, 1 a cerca de 35 aminoácidos, 1 a cerca de 30 aminoácidos, 1 a cerca de 25 aminoácidos, 1 a cerca de 20 aminoácidos, 1 a cerca de 15 aminoácidos ácidos, 1 a cerca de 10 aminoácidos, ou 1 a cerca de 5 aminoácidos), por exemplo, além da sequência de SEQ ID NO: 45 ou 46. Em algumas modalidades, um domínio intracelular de uma cadeia alfa de um receptor de IL-7 pode ter uma sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 45 ou 46, mas carece a um a quarenta aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, or 40 aminoácidos).
[0159] Como um técnico no assunto pode apreciar, quando os aminoácidos que não são conservados entre domínios intercelulares de cadeias alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são menos propensos a causar uma diminuição na atividade do domínio intracelular de uma cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em contraste, quando os aminoácidos que são conservados entre os domínios intracelulares das cadeias alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 de diferentes espécies são mutados (por exemplo, substituídos por um aminoácido diferente), eles são mais propensos a causar uma diminuição na atividade do domínio intracelular de uma cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em vista deste conhecimento, um técnico no assunto pode selecionar quais posições de aminoácidos em um domínio intracelular de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 (por exemplo, os aminoácidos não conservados) podem ser substituídas sem diminuir a atividade do domínio intracelular da cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7.
[0160] Em algumas modalidades, o domínio intracelular de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 é uma sequência de um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 45 ou 46) possuindo de um a três (por exemplo, um,
dois ou três) aminoácidos removidos do terminal -N do domínio intracelular da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em algumas modalidades, o domínio intracelular de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 é uma sequência de um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 45 ou 46) possuindo de um a três (por exemplo, um, dois ou três) aminoácidos removidos do terminal - C do domínio intracelular da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Em algumas modalidades, o domínio intracelular de uma cadeia alfa de uma proteína receptora de IL-7 é uma sequência de um domínio intracelular de uma cadeia alfa do tipo selvagem da proteína receptora de IL-7 (por exemplo, SEQ ID NO: 45 ou 46) possuindo de um a três (por exemplo, um, dois ou três) aminoácidos removidos do terminal -N do domínio intracelular da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7, e um a três (por exemplo, um, dois ou três) aminoácidos removidos do terminal -C do domínio intracelular da cadeia alfa da proteína receptora de IL-7. Sequências Ligantes
[0161] Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência ligante posicionada entre o domínio IL-15 extracelular e o domínio extracelular sushi. Em algumas modalidades, a proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência ligante adicional posicionada entre o domínio extracelular sushi e o domínio transmembranar de uma cadeia alfa de um receptor de IL-15. Quando a proteína transmembranar quimérica compreende uma sequência ligante e uma sequência ligante adicional, cada uma das sequências ligantes pode ser igual ou diferente uma da outra.
[0162] Em algumas modalidades, a sequência de ligação ou a sequência de ligação adicional é de 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 48 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 46 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 44 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 42 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 40 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 38 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 36 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 34 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 32 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 30 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 28 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 26 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 24 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 22 aminoácidos, 1 aminoácido ácido para cerca de 20 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 18 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 16 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 14 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 12 aminoácidos, 1 aminoácido para cerca de 10 aminoácidos ácidos, 1 aminoácido a cerca de 8 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 6 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 4 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 3 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 6 aminoácidos, cerca de 2 aminoácidos a cerca de 4 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 4 aminoácidos a cerca de 6 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 6 ami sem ácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 6 aminoácidos a cerca de 8 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos para cerca de 16 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos para cerca de 14 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos para cerca de 12 aminoácidos, cerca de 8 aminoácidos a cerca de 10 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos,
cerca de 10 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 10 aminoácidos a cerca de 12 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos o ácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 12 aminoácidos a cerca de 14 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos para cerca de 48 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos para cerca de 46 aminoácidos, um cerca de 14 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos,
cerca de 14 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 14 aminoácidos a cerca de 16 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 16 aminoácidos a cerca de 18 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 18 aminoácidos a cerca de 20 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 22 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 22 aminoácidos a cerca de 24 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos para cerca de 34 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos para cerca de 32 aminoácidos , cerca de 24 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de
28 aminoácidos, cerca de 24 aminoácidos a cerca de 26 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos , cerca de 26 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos , cerca de 26 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 26 aminoácidos a cerca de 28 aminoácidos , cerca de 28 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos , cerca de 28 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 28 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 32 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 32 aminoácidos a cerca de 34 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 34 aminoácidos a cerca de 36 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 36 aminoácidos a cerca de 38 aminoácidos, cerca de 38 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 38 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 38 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 38 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 38 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 38 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 42 aminoácidos, cerca de 42 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 42 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 42 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 42 aminoácidos a cerca de 44 aminoácidos, cerca de 44 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 44 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, cerca de 44 aminoácidos a cerca de 46 aminoácidos, cerca de 46 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 46 aminoácidos a cerca de 48 aminoácidos, ou cerca de 48 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos.
[0163] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional compreende uma sequência de (SG)n, onde n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional compreende uma sequência de (GS)n, onde n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25.
[0164] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional compreende uma sequência de (SGGS)n [SGGS = SEQ ID NO: 47], onde n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional compreende uma sequência de (SGGGS)n [SGGGS = SEQ ID NO: 48], onde n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional compreende uma sequência de (SGGGGS)n [SGGGGS = SEQ ID NO: 49], onde n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9.
[0165] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui a sequência de SGGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 50). Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui a sequência de ASTKGPSVFPLAPSSSGSG (SEQ ID NO: 51). Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui a sequência de GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52). Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui a sequência de GGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 53). Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui a sequência de SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ (SEQ ID NO: 92).
[0166] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência de ligante adicional pode ser um ligante Whitlow. Em algumas modalidades, o ligante Whitlow tem a sequência de aminoácidos de GSTSGSGKPGSGEGSTKG
(SEQ ID NO: 54) ou a sequência de nucleotídeos que codifica a sequência do ligante Whitlow é ggcagcaccagcggcagcggcaaaccgggcagcggcgaaggcagcaccaaaggc (SEQ ID NO: 55).
[0167] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser um ligante (G4S)5. Em algumas modalidades, o ligante (G4S)5 tem a sequência de aminoácidos de GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 56) ou a sequência de nucleotídeos que codifica a sequência do ligante (G4S)5 é ggcggtggtggttctggaggcggtggcagcggtggaggtggctcaggaggaggaggtagcggcggcggaggg agt (SEQ ID NO: 57).
[0168] Em algumas modalidades, a sequência de ligante e / ou a sequência de ligante adicional podem ser ou podem incluir um ou mais de um domínio IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 CH1, CH2 e CH3. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou pode incluir domínios CH2-CH3 de IgG1 humana. Em algumas modalidades, os domínios CH2-CH3 de IgG1 humana têm uma sequência de:
ISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD (SEQ ID NO: 58).
[0169] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui uma porção da sequência extracelular de CD8 humano que é proximal ao domínio transmembranar de CD8 humano. Por exemplo, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui sequência de CD8 humana: TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (SEQ ID NO: 59).
[0170] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional pode ser ou inclui uma sequência de dobradiça de IgG1 humana. Em algumas modalidades, a sequência de dobradiça de IgG1 humana é AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (SEQ ID NO: 60).
[0171] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional tem uma estrutura de hélice alfa. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional é um domínio de bobina enrolada.
[0172] Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional é uma sequência de aminoácidos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional não é uma sequência de aminoácidos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional compreende uma sequência de SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, a sequência ligante e/ou a sequência ligante adicional consiste em uma sequência de SEQ ID NO: 92. Aspectos e exemplos adicionais de ligantes são conhecidos na técnica. Receptores de Antígenos Quiméricos
[0173] Um receptor de antígeno quimérico (CAR) é uma proteína que inclui um domínio de ligação ao antígeno extracelular (por exemplo, qualquer um dos domínios de ligação ao antígeno descritos na presente invenção ou conhecidos na técnica), um domínio transmembranar (por exemplo, qualquer um dos domínios transmembranares descritos na presente invenção ou conhecidos na técnica), um domínio coestimulador (por exemplo, qualquer um dos domínios coestimuladores descritos na presente invenção ou conhecidos na técnica) e um motivo de ativação à base de tirosina imunorreceptor (ITAM). Em algumas modalidades, um CAR compreende sequências adicionais, tais como, sem limitação, uma sequência de haste extracelular (por exemplo, uma sequência de haste de CD28). Em algumas modalidades de um CAR que compreende uma sequência de haste extracelular (por exemplo, uma sequência de haste de CD28), a sequência de haste é coterminal com o domínio transmembranar. Em algumas modalidades de um CAR que compreende uma sequência de haste extracelular (por exemplo, uma sequência de haste de CD28), a sequência de haste extracelular é da mesma proteína que o domínio transmembranar. Em algumas modalidades de um CAR que compreende uma sequência de haste extracelular (por exemplo, uma sequência de haste de CD28), a sequência de haste extracelular é de uma proteína diferente do domínio transmembranar. Aspectos não limitativos de receptores de antígenos quiméricos são descritos em, por exemplo, Kershaw et al., Nature Reviews Immunol. 5 (12): 928-940, 2005; Eshhar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 90(2):720-724, 1993; Sadelain et al., Curr. Opin. Immunol. 21 (2): 215-223, 2009; WO 2015/142675; WO 2015/150526; e WO 2014/134165, cujas revelações são incorporadas na presente invenção por referência em sua totalidade.
[0174] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico pode incluir um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro ou cinco) domínio(s) coestimulador(es) (por exemplo, qualquer combinação de qualquer um dos domínios coestimuladores exemplares descritos na presente invenção ou conhecidos na técnica). Algumas modalidades desses receptores de antígenos quiméricos incluem um ou ambos de um domínio coestimulador 4-1BB e um domínio coestimulador CD28.
[0175] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico pode incluir um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro ou cinco) ITAMs (por exemplo, qualquer um dos ITAMs descritos na presente invenção ou conhecidos na técnica). Em algumas modalidades desses receptores de antígenos quiméricos, o ITAM inclui uma sequência de sinalização citoplasmática de CD3ζ (por exemplo, CD3ζ humano).
[0176] Em algumas modalidades, um ou mais aminoácidos entre o domínio de ligação ao antígeno extracelular e o domínio transmembranar é uma sequência do mesmo polipeptídeo de cadeia única endógeno do qual o domínio transmembranar é derivado. Em algumas modalidades, um ou mais aminoácidos entre o domínio de ligação ao antígeno extracelular e o domínio transmembranar é ou inclui uma sequência da região de dobradiça de um anticorpo, tal como, sem limitação, um anticorpo humano (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 ) Em algumas modalidades, um ou mais aminoácidos entre o domínio de ligação ao antígeno extracelular e o domínio transmembranar é ou compreende uma sequência ligante (por exemplo, uma sequência ligante de ocorrência não natural, por exemplo, GS ou qualquer uma das outras sequências ligantes descritas na presente invenção).
[0177] Em alguns exemplos de qualquer um dos CARs descritos neste documento, indo na direção do terminal N- para o terminal C-, a porção intracelular do CAR inclui um domínio coestimulador e um domínio de sinalização intracelular. Em alguns exemplos de qualquer um dos CARs descritos na presente invenção, indo da direção do terminal N- para o terminal C-, a porção intracelular do CAR inclui um domínio de sinalização intracelular e um domínio coestimulador.
[0178] Em alguns exemplos de qualquer um dos CARs descritos neste documento, indo na direção do terminal C- para o terminal N-, a porção intracelular do CAR inclui um domínio coestimulador e um domínio de sinalização intracelular. Em alguns exemplos de qualquer um dos CARs descritos na presente invenção, indo na direção do terminal C- para o terminal
N-, a porção intracelular do CAR inclui um domínio de sinalização intracelular e um domínio coestimulador.
[0179] Em algumas modalidades de qualquer um dos CARs descritos na presente invenção, o domínio transmembranar é ou inclui um domínio transmembranar de CD28, CD3 epsilon, CD4, CD5, CD6, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, 4-1BB ou CD154. Exemplos e aspectos adicionais de domínios transmembranares são descritos na presente invenção.
[0180] Em algumas modalidades de qualquer um dos CARs descritos na presente invenção, o domínio coestimulador é ou inclui o domínio coestimulador de 4-1BB, CD28, CD2, CD4 ou CD8. Exemplos e aspectos adicionais de domínios coestimuladores são descritos neste documento.
[0181] Em algumas modalidades de qualquer um dos CARs descritos na presente invenção, o CAR é gerado a partir de um precursor do CAR, cujo precursor do CAR inclui uma sequência de peptídeo de sinal para direcionar o CAR para a membrana celular. Em algumas modalidades, o peptídeo de sinal do CAR compreende ou é uma sequência de SEQ ID NO: 93: Exemplo de Peptídeo de Sequência de Sinal do CAR (SEQ ID NO: 93)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP Sequência de Ácido Nucleico Exemplar que Codifica um Peptídeo de Sequência de Sinal do CAR Exemplar (SEQ ID NO: 94) atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgattcct
[0182] Em algumas modalidades, um peptídeo sinal do CAR compreende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, em pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à sequência polipeptídica de SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, uma sequência de ácido nucleico que codifica um peptídeo sinal do CAR compreende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica , pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO :
94.
[0183] Uma variedade de métodos que podem ser usados para determinar os valores KD de qualquer um dos CARs descritos na presente invenção são conhecidos na técnica (por exemplo, um ensaio de deslocamento de mobilidade eletroforética, um ensaio de ligação de filtro, ressonância plasmônica de superfície e um ensaio de cinética de ligação biomolecular etc.).
[0184] Algumas modalidades de qualquer um dos receptores de antígenos quiméricos descritos na presente invenção pode incluir ainda um domínio de dimerização e/ou um tag de peptídeo. Domínios de Ligação ao Antígeno
[0185] Em algumas modalidades de receptores de antígenos quiméricos, o domínio de ligação ao antígeno pode ser selecionado a partir de um scFv, um scFv-Fc, um domínio VHH, um domínio VNAR, um (scFv)2 e um BiTE. Exemplos adicionais de domínios de ligação a antígeno que podem ser usados com receptores de antígeno quiméricos descritos na presente invenção são conhecidos na técnica.
[0186] Um Fv de cadeia única ou fragmento scFv inclui um domínio VH e um domínio Veu em uma única cadeia polipeptídica. Os VH e Veu são geralmente ligados por um ligante peptídico. Em outros exemplos, o ligante pode ser um único aminoácido. Em alguns exemplos, o ligante pode ser uma ligação química. Ver, por exemplo, Pluckthun, Antibodies from E. coli. Em Rosenberg M. e Moore GP (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, pp. 269-315, Spinger-Verlag, New York, 1994.
[0187] Os fragmentos ScFv-Fc incluem um scFv anexado a um domínio Fc. Por exemplo, um domínio Fc pode ser anexado, por exemplo, ao terminal C- do scFv. O domínio Fc pode seguir o VL ou VH, dependendo da orientação dos domínios variáveis no scFv. O domínio Fc pode ser qualquer domínio Fc conhecido na técnica. Em alguns exemplos, o domínio Fc é um domínio Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 (por exemplo, um domínio Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humana).
[0188] BiTEs são domínios de ligação ao antígeno que incluem dois VL e dois VH em um único polipeptídeo que juntos formam dois scFvs, que podem se ligar a diferentes epítopos no mesmo antígeno ou cada um se ligar a diferentes antígenos. Ver, por exemplo, Baeuerle et al., Curr. Opin. Peso molecular Ther. 11: 22-30, 2009; Wolf et al., Drug Discovery Today 10: 1237-1244, 2005; e Huehls et al., Immunol. Cell Biol. 93, 290-296, 2015.
[0189] Um domínio VHH é um único domínio de anticorpo variável monomérico encontrado em camelídeos, e um domínio VNAR é um único domínio de anticorpo monomérico variável encontrado em peixes cartilaginosos. Os domínios VHH e VNAR são descritos em, por exemplo, Van Audenhove et al., EBioMedicine 8:40-48, 2016; Krah et al., Immunopharmacol.
Immunotoxicol. 38:21-28, 2016; Cromie et al., Curr. Top. Med. Chem. 15:2543- 2557, 2016; Kijanka et al., Nanomedicine 10:161-174, 2015; Kovaleva et al., Expert. Opin. Biol. Ther. 14: 1527-1539, 2014; De Meyer et al., Trends Biotechnol. 32: 263-270, 2014; Mujic-Delic et al., Trends Pharmacol. Sci. 35: 247-255, 2014; Muyldermans, Ann. Rev. Biochem. 82: 775-797, 2013; Vincke et al., Methods Mol. Biol. 911:15-26, 2012; Cromie et al., Immunol. 911:15-26, 2012; Rahbarizadeh et al., Immunol. Invest. Opin. Investig. Drugs 10: 1212- 1224, 2009; Wesolowski et al., Med. Microbiol. Immunol. 198:157-174, 2009; De Genst et al., Dev. Comp. Immunol. 30:187-198, 2006; Muyldermans, J. Biotechnol. 74:277-302, 2001; e Muyldermans et al., Trends Biochem. Sci. 26, 230-235, 2001.
[0190] Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno de um CAR é uma sequência que compreende ou é SEQ ID NO: 95: Domínio de Ligação ao Antígeno anti-CD19 Exemplar (SEQ ID NO: 95)
VTVSS Ácido Nucleico que Codifica um Domínio de Ligação ao Antígeno anti- CD19 Exemplar (SEQ ID NO: 96) Gacatccagatgacccagaccaccagcagcctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctg cagagccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctg atctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacag cctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacac cttcggcggaggcaccaagctggaaatcacaggcggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggaggggg atctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctggcctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgt gtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcctggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgg gagtgatctggggcagcgagacaacctactacaacagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaa ctccaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagc actactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagc
[0191] Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno compreende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica, em pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, pelo menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à sequência polipeptídica de SEQ ID NO: 95. Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno compreende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica, pelo menos 65% idêntica, pelo menos 70% idêntica, pelo menos 75% idêntica, pelo menos 80% idêntica, pelo menos 82% idêntica , em pelo menos 84% idêntica, pelo menos 85%, pelo menos 86% idêntica, pelo menos 88% idêntica, pelo menos 90% idêntica, pelo menos 91% idêntica, pelo menos 92% idêntica, pelo menos 93% idêntica, pelo menos 94% idêntica, pelo menos 95% idêntica, pelo menos 96% idêntica, pelo menos 97% idêntica, menos 98% idêntica, pelo menos 99% idêntica ou 100% idêntica à sequência polipeptídica de SEQ ID NO: 96.
[0192] Qualquer um dos domínios de ligação ao antígeno descritos na presente invenção pode se ligar a um antígeno com uma constante de equilíbrio de dissociação (KD) de menos de 1 x 10-7 M, menos de 1 x 10-8 M, menos de 1 x 10-9 M, menos de 1 x 10-10 M, menos de 1 x 10-11 M, menos de 1 x 10-12 M ou menos de 1 x 10-13 M. Em algumas modalidades, os complexos de proteína de ligação ao antígeno fornecidos neste documento podem se ligar a um primeiro e/ou segundo antígeno com um KD de cerca de 1 x 10-4 M a cerca de 1 x 10-6 M, cerca de 1 x 10-5 M a cerca de 1 x 10-7 M, cerca de 1 x 10-6 M a cerca de 1 x 10-8 M, cerca de 1 x 10-7 M a cerca de 1 x 10-9 M, cerca de 1 x 10-8 M a cerca de 1 x 10-10 M, ou cerca de 1 x 10-9 M a cerca de 1 x 10-11 M (inclusive). Uma variedade de diferentes métodos conhecidos na técnica que podem ser usados para determinar os valores KD de um domínio de ligação ao antígeno (por exemplo, um ensaio de deslocamento de mobilidade eletroforética, um ensaio de ligação de filtro, ressonância plasmônica de superfície e um ensaio de cinética de ligação biomolecular, etc.). Antígenos
[0193] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico aqui descrito pode se ligar a um único antígeno (por exemplo, qualquer um dos antígenos exemplares descritos na presente invenção ou conhecidos na técnica). Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno descrito na presente invenção pode se ligar a dois ou mais antígenos diferentes (por exemplo, dois ou mais de qualquer um dos antígenos exemplares aqui descritos ou conhecidos na técnica). Exemplos não limitativos de antígenos incluem: glipicano-3, HER2, antígeno A33, 9-O-acetil-GD3, marcador CA19-9, BhCG, marcador CA-125, carboanidrase IX (MN/CA IX), calreticulina, CCR5, CCR8, CD2, CD3, CD5, CD16, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD27, CD28, CD30, CD33, CD38, CD40L, CD44, CD44V6, CD63, CD70, CD84, CD96, CD100, CC123, CD133, CD137, CD138, CD150, CD152 (CTLA-4), CD160, CRTAM, CS1 (CD319), DNAM-1 (CD226), CD229, CD244, CD272 (BTLA), CD274 (PDL-1, B7H1), CD279 (PD-1), CD319, CD352, CRTAM (CD355), CD358, DR3, GITR (TNFRSF 18), HVEM, ICOS, LIGHT, LTBR, OX40, formas de ativação de KIR, NKG2C, NKG2D, NKG2E, um ou mais receptores naturais de citotoxicidade, NTB-A, PEN-5,
antígeno embrionário de carcinoma (CEA; CD66e), desmogleína 4, neoepítopo de E-caderina, endosialina, efrina A2 (EphA2), receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR), molécula de adesão de células epiteliais (EpCAM), fucosil GM1, GD2, GD3, GM2, gangliosídeo GM3, Globo H, glicoproteína 100, HER2/neu, HER3, HER4, receptor 1 do fator de crescimento semelhante à insulina, Lewis-Y, LG, Ly-6, proteoglicano de sulfato de condroitina específico de melanoma (MCSCP), mesotelina, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5AC, MUC5b, MUC7, MUC16, receptor de substância inibitória de Mullerian (MIS) tipo II, antígeno de células plasmáticas, poli SA, PSCA, PSMA, hedgehog sônico (SHH), SAS, STEAP, antígeno sTn, precursor TNF-α, 2B4 (CD244), β2 -integrins, KIR, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR3DL2, KIR-L, KLRGI, LAIR-1, NKG2A, NKR-P IA, Siglec-3, Siglec-7, Siglec-9, TCRa, TCRB, TCR5, TIM1, LAG3, LAIR1, PD-1H, TIGIT, TIM2 e TIM3. Exemplos adicionais de antígenos conhecidos na técnica. Domínio Transmembranares do CAR
[0194] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, de um polipeptídeo endógeno, onde o polipeptídeo endógeno é selecionado a partir do grupo de: uma cadeia α de um receptor de célula T, uma cadeia β do receptor de célula T, uma cadeia ζ do receptor de células T, CD28 (também conhecido como Tp44), CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37 (também conhecido como GP52-40 ou TSPAN26), CD64 (também conhecido como FCGR1A), CD80 (também conhecido como B7, B7-1, B7.1, BB1, CD28LG, CD28LG1 e LAB7), CD45 (também conhecido como PTPRC, B220, CD45R, GP180, L-CA, LCA, LY5, T200 e proteína tirosina fosfatase, receptor tipo C), CD4, CD5 (também conhecido como LEU1 e T1), CD8α (também conhecido como Leu2, MAL e p32), CD9 (também conhecido como BTCC-1, DRAP-27, MIC3, MRP-1, TSPAN- 29 e TSPAN29), CD16 (também conhecido como FCGR3 eFCG3), CD22 (também conhecido como
SIGLEC-2 e SIGLEC2), CD86 (também conhecido como B7-2, B7.2, B70, CD28LG2 e LAB72), CD134 ( também conhecido como TNFRSF4, ACT35, RP5-902P8.3, IMD16, OX40, TXGP1L e membro 4 da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral), CD137 (também conhecido como TNFRSF9, 4-1BB, CDw137, ILA e membro 9 da superfamília do receptor do fator de necrose tumoral), CD27 (também conhecido como S152, S152.LPFS2, T14, TNFRSF7 e Tp55), CD152 (também conhecido como CTLA4, ALPS5, CELIAC3, CTLA-4, GRD4, GSE, IDDM12 e proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos), PD1 (também conhecido como PDCD1, CD279, PD-1, SLEB2, hPD-1, hPD-l, hSLE1 e Morte celular programada 1), ICOS (também conhecido como AILIM, CD278 e CVID1), CD272 (também conhecido como BTLA e BTLA1), CD30 (também conhecido como TNFRSF8, D1S166E e Ki-1), GITR (também conhecido como TNFRSF18, RP5-902P8.2, AITR, CD357 e GITR-D), HVEM (também conhecido como TNFRSF14, RP3-395M20.6, ATAR, CD270, HVEA, HVEM, LIGHTR e TR2) , DAP10 e CD154 (também conhecido como CD40LG, CD40L, HIGM1, IGM, IMD3, T- BAM, TNFSF5, TRAP, gp39, hCD40L e ligante de CD40). As letras “CD” na frase anterior significam “Cluster de Diferenciação”. Por exemplo, CD3 significa “Cluster de Diferenciação 3”. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, a partir de um polipeptídeo de mamífero endógeno (por exemplo, humano) (por exemplo, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um dos polipeptídeos listados acima).
[0195] Qualquer domínio transmembranar, ou porção do mesmo, que sirva para ancorar um polipeptídeo endógeno em uma camada dupla lipídica (por exemplo, membrana de plasma) de uma célula de mamífero é adequado para uso de acordo com composições e métodos divulgados na presente invenção. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, a partir de CD28 humano (por exemplo, GenBank Nº de acesso P01747, por exemplo, aminoácidos 153 a 179 da SEQ ID NO: 61. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar que é pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico) aos aminoácidos 153 a 179 da SEQ ID NO: 61 ou uma porção da mesma. SEQ ID NO: 61
[0196] Em algumas modalidades, um CAR compreende um domínio transmembranar e um domínio de haste extracelular possuindo a sequência da SEQ ID NO: 97. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar que é ou inlclui uma sequência que é pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico) da SEQ ID NO: 97. Sequência Polipeptídica Exemplar para Haste de CD28 e TMD (SEQ ID NO: 97)
[0197] Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica um CAR compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio transmembranar e um domínio de haste extracelular possuindo a sequência da SEQ ID NO: 98. Em algumas modalidades, um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico inclui um ácido nucleico que codifica um domínio transmembranar e um domínio de haste extracelular que é ou inclui uma sequência que é pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 82%, pelo menos 84%, em pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico) para SEQ ID NO: 98. Sequência de Ácido Nucleico Exemplar que Codifica uma Sequência Polipeptídica Exemplar para Haste de CD28 e TMD (SEQ ID NO: 98) ctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctat ttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaaca gtggcctttattattttctgggtg
[0198] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, a partir de CD3 humano (por exemplo, GenBank Nº de acesso P20963, por exemplo, aminoácidos 31 a 51 da SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar que é ou inclui uma sequência que é pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica) aos aminoácidos 31 a 51 de SEQ ID NO: 62. SEQ ID NO: 62
[0199] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, de qualquer uma das SEQ ID NOs. 63-69. LGLLVAGVLVLLVSLGVAIHLCC (SEQ ID NO: 63); VAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLL (SEQ ID NO: 64); ALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFCVRC (SEQ ID NO: 65); LCYLLDGILFIYGVILTALFLRV (SEQ ID NO: 66); WVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQ ID NO: 67); IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ ID NO: 68); e ALPAALAVISFLLGLGLGVACVLA (SEQ ID NO: 69).
[0200] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar que é ou inclui uma sequência que é pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica) a qualquer uma das SEQ ID NOs. 63-69.
[0201] Conforme será apreciado por técnicos no assunto, certos polipeptídeos endógenos têm duas ou mais isoformas que diferem pelo menos em sua sequência polipeptídica primária. Um receptor de antígeno quimérico revelado na presente invenção pode incluir um domínio transmembranar que inclui uma sequência de aminoácidos de qualquer isoforma de uma proteína transmembranar endógena (por exemplo, um mamífero endógeno, por exemplo, humano, proteína transmembranar) incluindo, por exemplo, uma isoforma (por exemplo, uma isoforma humana) de: uma cadeia α de um receptor de células T, uma cadeia β do receptor de células T, uma cadeia ζ do receptor de células T, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1 ou
CD154.
[0202] Em algumas modalidades, um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, de um receptor de antígeno quimérico inclui uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência aos domínios transmembranares a partir de uma ou mais das seguintes proteínas transmembranares endógenas de mamífero (por exemplo, humano): uma cadeia α de um receptor de células T, uma cadeia β do receptor de células T, uma cadeia ζ do receptor de células T, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1 ou CD154. Em algumas modalidades, um domínio transmembranar, ou porção do mesmo, de um receptor de antígeno quimérico inclui uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácidos em comparação com o domínio transmembranar de um mamífero endógeno (por exemplo, humano) proteína transmembranar: uma cadeia α de um receptor de células T, uma cadeia β do receptor de células T, uma cadeia ζ do receptor de células T, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1 ou CD154.
[0203] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar sintético. Em alguns casos, um domínio transmembranar sintético pode incluir resíduos predominantemente hidrofóbicos, como, sem limitação, leucina e valina. Em algumas modalidades, um domínio transmembranar sintético inclui um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina em cada extremidade do domínio.
[0204] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar que é um domínio transmembranar quimérico com porções de um domínio transmembranar de dois ou mais polipeptídeos transmembranares endógenos de mamíferos (por exemplo, humanos), tais como, sem limitação, uma cadeia α de um receptor de célula T, uma cadeia β do receptor de células T, uma cadeia ζ do receptor de células T, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1 e CD154, de modo que as duas ou mais porções dos domínios transmembranares em conjunto constituam um domínio transmembranar funcional. Em algumas modalidades, tal porção de um domínio transmembranar quimérico pode incluir uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácidos em comparação a uma porção de um domínio transmembranar do tipo selvagem.
[0205] Um domínio transmembranar pode incluir uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez sequências de aminoácidos contíguas que atravessam uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expresso em uma célula de mamífero. Como é conhecido na técnica, um domínio transmembranar pode, por exemplo, incluir pelo menos uma (por exemplo, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez) sequência de aminoácidos contígua (que atravessa uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expresso em uma célula de mamífero) que tem estrutura α- helicoidal secundária na bicamada lipídica. Em algumas modalidades, um domínio transmembranar pode incluir duas ou mais sequências de aminoácidos contíguas (que atravessam, cada uma, uma bicamada lipídica quando presente no polipeptídeo endógeno correspondente quando expresso em uma célula de mamífero) que formam uma estrutura secundária de β-barril na bicamada lipídica. Exemplos e características adicionais de domínios transmembranares são conhecidos na técnica.
Domínios Coestimuladores
[0206] Em linfócitos normais, a ativação de células T é mediada por duas classes de domínios de sinalização intracelular. A sinalização primária é iniciada através da ativação dependente de antígeno mediada por MHC através do receptor de células T (por exemplo, um complexo TCR/CD3). Um sinal secundário ou coestimulador é fornecido por um receptor diferente que inclui um domínio de sinalização coestimulador, o qual atua de maneira independente do antígeno. Os sinais gerados através do domínio de sinalização do TCR individuais são insuficientes para a ativação completa das células T; um sinal coestimulador também é necessário.
[0207] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio coestimulador ou porção do mesmo proveniente de um polipeptídeo transmembranar de mamífero endógeno (por exemplo, humano) selecionado a partir do grupo de: CD27 (também conhecido como S152, S152.LPFS2, T14, TNFRSF7 e Tp55), CD28 (também conhecido como Tp44), 4- 1BB (também conhecido como TNFRSF9, CD137, CDw137, ILA e membro 9 da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral), OX40 (também conhecido como TNFRSF4, ACT35, RP5-902P8.3, IMD16, CD134, TXGP1L e membro da superfamília 4 de receptor de fator de necrose tumoral), CD30 (também conhecido como TNFRSF8, D1S166E e Ki-1), CD40L (também conhecido como CD40LG, CD154, HIGM1, IGM, IMD3, T-BAM, TNFSF5, TRAP, gp39, hCD40L e ligante de CD40), CD40 (também conhecido como Bp50, CDW40, TNFRSF5, p50, CD40 (proteína) e CD40 molécula), PD-1 (também conhecido como PDCD1, CD279, PD-1, SLEB2, hPD-1, hPD-l, hSLE1 e morte celular programada 1), PD-L1 (também conhecido como CD274, B7-H, B7H1, PD-L1, PDCD1L1, PDCD1LG1, PDL1, molécula de CD274 e ligante 1 de morte celular programada 1), ICOS (também conhecido como AILIM, CD278 e CVID1),
LFA-1 (também conhecido como antígeno associado à função linfocitária 1), CD2 (também conhecido como LFA-2, SRBC, T11 e molécula de CD2), CD7 (também conhecido como GP40, LEU-9, TP41, Tp40, e molécula de CD7), CD160 (também conhecido como BY55, NK1, NK28 e molécula de CD160), LIGHT (também conhecido como TNFSF14, CD258, HVEML, LIGHT, LTg, TR2, TNLG1D e membro da superfamília de fator de necrose tumoral 14), BTLA (também conhecido como CD272 e BTLA1), TIM3 (também conhecido como HAVCR2, HAVcr-2, KIM-3, TIM3, TIMD-3, TIMD3, Tim-3, CD366 e receptor celular 2 de vírus da hepatite A), CD244 (também conhecido como 2B4, NAIL, NKR2B4, Nmrk, SLAMF4 e molécula de CD244), CD80 (também conhecido como B7, B7- 1, B7.1, BB1, CD28LG, CD28LG1, LAB7 e molécula de CD80), LAG3 (também conhecido como molécula CD223 e ativação de linfócitos 3), NKG2C (também conhecido como CD314, D12S2489E, KLR, NKG2-D, NKG2D e receptor tipo K1 de lectina de célula assassina), GITR (também conhecido como TNFRSF18, RP5- 902P8.2, AITR, CD357, e GITR-D), HVEM (também conhecido como TNFRSF14, RP3-395M20.6, ATAR, CD270, HVEA, HVEM, LIGHTR e TR2), TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR7, TLR8, TLR8, TLRIO, CARDl l, CD54 (ICAM), CD83, DAP10, LAT, SLP76, TRIM, ZAP70 e B7-H3 (também conhecido como CD276, 4Ig-B7-H3, B7H3, B7RP-2 e molécula de CD276). Em algumas modalidades, um polipeptídeo quimérico de cadeia única, um receptor de antígeno quimérico de cadeia única ou um receptor de antígeno quimérico de cadeias múltiplas inclui um domínio coestimulador, ou porção do mesmo, proveniente de um polipeptídeo transmembranar de mamífero endógeno (por exemplo, humano) (por exemplo, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um dos polipeptídeos listados acima).
[0208] Qualquer domínio coestimulador, ou porção do mesmo, que sirva para fornecer um sinal coestimulador é adequado para uso de acordo com composições e métodos revelados na presente invenção. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio coestimulador, ou parte do mesmo, proveniente de CD28 humano (por exemplo, GenBank Nº de acesso P01747, por exemplo, dos aminoácidos 180 a 220 de SEQ ID NO: 70). Em algumas modalidades, um domínio coestimulador é ou inclui uma sequência que é pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico (ou é idêntico) aos aminoácidos 180 a 220 de SEQ ID NO: 70, ou um fragmento da mesma. SEQ ID NO: 70 (Aminoácidos 180 a 220 estão sublinhados)
SRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS Ácido Nucleico Exemplar Codificando Aminoácidos de um Domínio Coestimulador de CD28 Humano (SEQ ID NO: 99) aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacc cgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcc
[0209] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio coestimulador, ou parte do mesmo, proveniente de 4-1BB humano (por exemplo, GenBank Nº de acesso Q07011, por exemplo, dos aminoácidos 214 a 255 de SEQ ID NO: 71). Em algumas modalidades, um domínio coestimulador é ou inclui uma sequência que é pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos aminoácidos 214 a 255 de SEQ ID NO: 75 ou uma porção da mesma. SEQ ID NO: 71
[0210] Um receptor de antígeno quimérico revelado na presente invenção pode incluir um domínio coestimulador que inclui uma sequência de aminoácidos proveniente de qualquer isoforma de um polipeptídeo transmembranar de mamífero endógeno (por exemplo, humano) tendo um domínio coestimulador incluindo, por exemplo, uma isoforma de: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C, ou B7-H3 (incluindo, sem limitação, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um destes polipeptídeos).
[0211] Em algumas modalidades, um domínio coestimulador, ou porção do mesmo, de um receptor de antígeno quimérico inclui uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência com um domínio coestimulador proveniente de um ou mais de um mamífero (por exemplo, humano) CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C ou B7-H3. Em algumas modalidades, um domínio coestimulador, ou porção do mesmo, de um receptor de antígeno quimérico inclui uma sequência de aminoácidos com uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácidos em comparação a um domínio coestimulador de um ou mais de um mamífero endógeno (por exemplo, humano) polipeptídeo transmembranar: uma cadeia α de um receptor de células T, uma cadeia β do receptor de células T, uma cadeia ζ do receptor de células T, CD27, CD28, 4- 1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C ou B7-H3 (incluindo, sem limitação, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um desses polipeptídeos).
[0212] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um domínio coestimulador que é um domínio coestimulador quimérico tando porções de um domínio coestimulador proveniente de dois ou mais polipeptídeos transmembranares de mamíferos endógenos (por exemplo, humanos) incluindo, sem limitação, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C ou B7-H3 (incluindo, sem limitação, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um desses polipeptídeos), de modo que as duas ou mais porções dos domínios transmembranares em conjunto constituem um domínio coestimulador funcional. Em algumas modalidades, tal porção de um domínio coestimulatório quimérico pode incluir uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácidos em comparação a uma porção correspondente de um domínio coestimulador de tipo selvagem.
[0213] Um domínio coestimulador de um receptor de antígeno quimérico revelado na presente invenção pode ser de qualquer comprimento adequado. Por exemplo, um domínio coestimulador pode ter um comprimento de cerca de 20 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos ou cerca de 25 aminoácidos (inclusive); cerca de 25 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos ou cerca de 30 aminoácidos (inclusive); cerca de 30 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos ou cerca de 35 aminoácidos (inclusive); cerca de 35 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos,
cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos, cerca de 45 aminoácidos ou cerca de 40 aminoácidos (inclusive); cerca de 40 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos, cerca de 50 aminoácidos ou cerca de 45 aminoácidos (inclusive); cerca de 45 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos ou cerca de 50 aminoácidos (inclusive); cerca de 50 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos ou cerca de 55 aminoácidos (inclusive); cerca de 55 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de
170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos ou cerca de 60 aminoácidos (inclusive); cerca de 60 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos ou cerca de 65 aminoácidos (inclusive); cerca de 65 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos ou cerca de 70 aminoácidos (inclusive); cerca de 70 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos ou cerca de 80 aminoácidos (inclusive); cerca de 80 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos ou cerca de 90 aminoácidos (inclusive); cerca de 90 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos, cerca de 110 aminoácidos ou cerca de 100 aminoácidos (inclusive); cerca de 100 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos ou cerca de 110 aminoácidos (inclusive); cerca de 110 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos ou cerca de 120 aminoácidos (inclusive); cerca de 120 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos ou cerca de 130 aminoácidos (inclusive); cerca de 130 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos ou cerca de 140 aminoácidos (inclusive); cerca de 140 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos ou cerca de 150 aminoácidos (inclusive); cerca de 150 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos ou cerca de 160 aminoácidos (inclusive); cerca de 160 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos ou cerca de 170 aminoácidos (inclusive); cerca de 170 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos ou cerca de 180 aminoácidos (inclusive); cerca de 180 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos or cerca de 190 aminoácidos (inclusive); or cerca de 190 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos (inclusive).
[0214] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui dois ou mais domínios coestimuladores, por exemplo, dois, três, quatro, cinco ou mais domínios coestimuladores. Em algumas modalidades, os dois ou mais domínios coestimuladores são idênticos (por exemplo, têm a mesma sequência de aminoácidos). Em algumas modalidades, os domínios coestimuladores não são idênticos. Por exemplo, os domínios coestimuladores podem ser selecionados a partir de diferentes polipeptídeos transmembranares endógenos de mamíferos (por exemplo, humanos) incluindo, sem limitação, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C ou B7-H3 (incluindo, sem limitação, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um destes polipeptídeos). Em algumas modalidades, os dois ou mais domínios coestimuladores podem diferir entre si por uma ou mais (por exemplo, duas, três, quatro ou cinco) substituições, deleções ou adições de aminoácidos. Em algumas modalidades, os dois ou mais domínios coestimuladores exibem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, 99% ou mais identidade de sequência entre si. Motivos de ativação baseados em tirosina do imunorreceptor (ITAMs)
[0215] ITAMs são normalmente repetidos (por exemplo, duas ou mais vezes) nas caudas citoplasmáticas de certas proteínas de superfície celular do sistema imunológico e são normalmente separados por entre seis e oito aminoácidos.
[0216] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um ITAM, ou porção do mesmo, proveniente de um polipeptídeo de mamífero endógeno (por exemplo, humano), em que o polipeptídeo de mamífero endógeno (por exemplo, humano) é selecionado a partir do grupo de: CD3ζ (também referido como CD3 zeta), CD3 (CD3 delta), CD3ε (CD3 epsilon), CD3γ (CD3 gama), DAP12, FCεR1γ (cadeia gama I do receptor Fc epsilon), FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A (cadeia alfa associada ao complexo receptor de antígeno), CD79B (cadeia beta da proteína associada ao complexo receptor de antígeno) e CD66d.
[0217] Qualquer ITAM, ou porção do mesmo, que sirva para mediar a sinalização em uma proteína transmembrana de mamífero endógena (por exemplo, humano) adequada para uso de acordo com composições e métodos revelados na presente invenção. Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um ITAM, ou porção do mesmo, proveniente de CD3 zeta humano (por exemplo, GenBank Nº de Acesso P20963, por exemplo, um ITAM presente nos aminoácidos 52 – 164 de SEQ ID NO: 72, ou uma porção da mesma; ou SEQ ID NO: 73 ou uma porção da mesma). Em algumas modalidades, um ITAM compreende uma sequência que é pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 92%, pelo menos 94%, pelo menos 96%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a: sequência de aminoácidos 52-164 de SEQ ID NO: 72 (ou uma porção da mesma), ou a sequência de SEQ ID NO: 73 (ou uma porção da mesma). SEQ ID NO: 72
KMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 73 (Domínio de sinalização zeta de CD3 humano)
R SEQ ID NO: 74 (cDNA que codifica o domínio de sinalização zeta de CD3 humano de SEQ ID NO: 73) ctgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataa cgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggg ggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggc ctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagt acagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc
[0218] Conforme será apreciado por técnicos no assunto, certos polipeptídeos têm duas ou mais isoformas que diferem pelo menos em sua sequência polipeptídica primária. Por exemplo, diferentes isoformas podem ser geradas como resultado de splicing alternativo. Um receptor de antígeno quimérico revelado na presente invenção pode incluir um ITAM que inclui uma sequência de aminoácidos proveniente de qualquer isoforma de um polipeptídeo transmembranar de mamífero endógeno tendo um ITAM incluindo, por exemplo, uma isoforma de mamífero (por exemplo, humano) de: CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B ou CD66d.
[0219] Em algumas modalidades, um ITAM, ou porção do mesmo, de um receptor de antígeno quimérico inclui uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (por exemplo, duas, três, quatro ou cinco) substituições, deleções ou adições de aminoácidos em comparação a um ITAM de um ou mais de um ITAM em uma proteína transmembrana de mamífero endógeno (por exemplo,
humano), tal como CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B ou CD66d. Por exemplo, a tirosina e a leucina ou isoleucina de um ITAM podem ser retidas, ao passo que os dois aminoácidos que as separam podem ser substituídos por aminoácidos diferentes.
[0220] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui um ITAM que é um ITAM quimérico com porções de um ITAM provenientes de dois ou mais polipeptídeos transmembranares de mamíferos endógenos (por exemplo, humanos) incluindo, sem limitação, CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B ou CD66d (incluindo, sem limitação, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um desses polipeptídeos), de modo que as duas ou mais porções de ITAM juntas constituem um ITAM funcional. Em algumas modalidades, tal porção de um ITAM quimérico pode incluir uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácidos em comparação a uma porção correspondente de um ITAM de tipo selvagem.
[0221] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico inclui dois ou mais ITAMs, por exemplo, dois, três, quatro, cinco ou mais ITAMs. Em algumas modalidades, os dois ou mais ITAMs são idênticos (por exemplo, têm a mesma sequência de aminoácidos). Em algumas modalidades, os dois ou mais ITAMs não são idênticos. Por exemplo, os ITAMs podem ser selecionados a partir de diferentes polipeptídeos transmembranares de mamíferos endógenos (por exemplo, humanos) incluindo, sem limitação, CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B (incluindo, sem limitação, um mamífero ou homólogo humano de qualquer um desses polipeptídeos). Em algumas modalidades, os dois ou mais ITAMs podem diferir entre si por uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácidos.
Sequências ligantes CAR
[0222] Quaisquer dois domínios vizinhos de um receptor de antígeno quimérico podem ser separados por uma sequência ligante (por exemplo, qualquer uma das sequências ligantes exemplares descritas na presente invenção ou conhecidas na técnica).
[0223] Em algumas modalidades, a sequência ligante entre o domínio de ligação a antígeno e o domínio transmembranar pode ser 1 aminoácido a cerca de 250 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 240 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 230 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 220 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 210 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 200 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 190 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 180 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 170 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 160 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 150 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 140 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 130 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 120 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 110 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 100 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 95 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 90 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 85 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 80 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 75 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 70 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 65 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 60 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 55 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 50 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 45 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 40 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 35 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 30 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 25 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 20 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 15 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 10 aminoácidos, 1 aminoácido a cerca de 5 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos,
cerca de 5 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 5 aminoácidos a cerca de 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cerca de 20 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a 220 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 20 aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 25 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos,
cerca de 25 aminoácidos a cerca de 30 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 30 aminoácidos a cerca de 35 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de
170 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 55 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 50 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 45 aminoácidos, cerca de 35 aminoácidos a cerca de 40 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 40 aminoácidos a cerca de
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80 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 55 aminoácidos a cerca de 60 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 70 aminoácidos, cerca de 60 aminoácidos a cerca de 65 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 65 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 65 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cerca de 170 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 80 aminoácidos, cerca de 70 aminoácidos a cerca de 75 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 75 aminoácidos a cerca de 190 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cerca de 80 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 80 aminoácidos a cerca de 85 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 85 aminoácidos a cerca de 90 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 90 aminoácidos a cerca de 95 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 95 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 120 aminoácidos, cerca de 100 aminoácidos a cerca de 110 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 120 aminoácidos a cerca de 130 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 130 aminoácidos a cerca de 140 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 140 aminoácidos a cerca de 150 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 150 aminoácidos a cerca de 160 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 160 aminoácidos a cerca de 170 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 170 aminoácidos a cerca de 180 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 180 aminoácidos a cerca de 190 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 190 aminoácidos a cerca de 200 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a 220 aminoácidos, cerca de 200 aminoácidos a cerca de 210 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 210 aminoácidos a cerca de 220 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, cerca de 220 aminoácidos a cerca de 230 aminoácidos, cerca de 230 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos, cerca de 230 aminoácidos a cerca de 240 aminoácidos, ou cerca de 240 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos.
[0224] Em algumas modalidades, uma sequência ligante entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio transmembranar pode ser ou pode incluir um ou mais dentre um domínio IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 CH1, CH2 e CH3. Em algumas modalidades, o ligante entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio transmembranar pode ser ou pode incluir domínios CH2-CH3 IgG1 humanos. Em algumas modalidades, os domínios CH2-CH3 de IgG1 humana têm uma sequência de:
KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD (SEQ ID NO: 75).
[0225] Em algumas modalidades, a sequência ligante entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio transmembranar pode ser ou incluir uma porção da sequência extracelular de CD8 humano que é proximal ao domínio transmembranar de CD8 humano. Por exemplo, a sequência ligante entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio transmembranar pode ser ou incluir a sequência CD8 humana de TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (SEQ ID NO: 76).
[0226] Em algumas modalidades, a sequência ligante entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio transmembranar pode ser ou incluir uma sequência de dobradiça de IgG1 humana. Em algumas modalidades, a sequência de dobradiça de IgG1 humana é AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (SEQ ID NO: 77).
[0227] Em algumas modalidades, uma sequência ligante (por exemplo, qualquer uma das sequências ligantes descritas na presente invenção ou conhecidas na técnica) pode estar presente entre o domínio transmembrana e um domínio coestimulador. Em algumas modalidades, uma sequência ligante (por exemplo, qualquer uma das sequências ligante descritas na presente invenção ou conhecidas na técnica) pode estar presente entre o domínio coestimulador e o ITAM. Ácidos Nucleicos
[0228] Também são fornecidos, na presente invenção, ácidos nucleicos que codificam qualquer um da variedade de polipeptídeos tendo um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-7 tendo uma ou mais modificações de aminoácidos, proteínas transmembranares quiméricas ou outras proteínas descritas na presente invenção. Vetores
[0229] Forcem-se, na presente invenção, vetores que incluem qualquer um dentre os ácidos nucleicos que codificam qualquer um da variedade de polipeptídeos tendo um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-7 tendo uma ou mais modificações de aminoácidos, proteínas transmembranares quiméricas ou outras proteínas fornecidas na presente invenção. Um “vetor”, de acordo com a presente revelação, é um polinucleotídeo capaz de induzir a expressão de uma proteína recombinante (por exemplo, uma proteína transmembrana quimérica, uma proteína e/ou um receptor de antígeno quimérico) em uma célula de mamífero. Um vetor fornecido na presente invenção pode ser, por exemplo, na forma circular ou linearizada. Exemplos não limitante de vetores incluem plasmídeos, vetores SV40, vetores virais adenovirais e vetores de vírus adeno-associados (AAV). Exemplos não limitantes de vetores incluem vetores lentivirais ou vetores retrovirais, por exemplo, vetores gama-retrovirais. Vide, por exemplo, Carlens et al., Exp. Hematol. 28(10:1137-1146, 2000; Park et al., Trends Biotechnol. 29(11):550-557, 2011; e Alonso-Camino et al., Mol. Ther. Nucleic Acids 2:e93,
2013. Exemplos não limitantes de vetores retrovirais incluem aqueles derivados a partir de vírus da leucemia murina Moloney, vírus do sarcoma mieloproliferativo, vírus da célula-tronco embrionária murina, vírus da célula- tronco murina, vírus formador do foco do baço ou vírus adeno-associado. Exemplos não limitantes de vetores retrovirais são descritos, por exemplo, nas Patentes US Nº 5,219,740 e 6,207,453; Miller et al., BioTechniques 7:980-990, 1989; Miller, Human Gene Therapy 1:5-14, 1990; Scarpa et al., Virology 180:849-852, 1991; Burns et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:8033-8037, 1993; e Boris-Lawrie et al., Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109, 1993. Vetores lentivirais exemplares são descritos em, por exemplo, Wang et al., J. Immunother. 35(9):689-701, 2003; Cooper et al., Blood 101:1637-1644, 2003; Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97-114, 2009; e Cavalieri et al., Blood 102(2):497-505, 2003.
[0230] Vectores exemplares, nos quais qualquer um dos ácidos nucleicos fornecidos na presente invenção pode ser inserido, são descritos em, por exemplo, Ausubel et al., Eds. “Current Protocols in Molecular Biology” Current Protocols, 1993; e Sambrook et al., Eds. “Molecular Cloning: A Laboratory Manual,” 2ª ed., Cold Spring Harbor Press, 1989.
[0231] Em algumas modalidades, os vetores incluem, ainda, uma sequência promotora e/ou sequência intensificadora operacionalmente ligada a qualquer um dos ácidos nucleicos descritos na presente invenção. Exemplos não limitantes de promotores incluem promotores de citomegalovírus humano (CMV), fosfoglicerato quinase 1 de camundongo, polioma adenovírus, hormônio estimulador da tireoide α, vimentina, vírus símio 40 (SV40), fator de necrose tumoral, β-globina, α-fetoproteína, γ-globina, β-interferon, γ-glutamil transferase, ubiquitina C humana (UBC), vírus do tumor mamário de camundongo (MMTV), vírus do sarcoma de Rous, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, β-actina, metalotioneína II (MT II), amilase , EF1α humano, catepsina, receptor muscarínico MI, LTR retroviral (por exemplo, vírus da leucemia de células T humanas HTLV), AAV ITR, interleucina-2, colagenase, fator de crescimento derivado de plaquetas, adenovírus E2, estromelisina, MX murino, insulina de rato, glicose proteína regulada 78, vírus da imunodeficiência humana, proteína regulada por glicose 94, α-2- macroglobulina, MHC classe I, HSP70, proliferina, cadeia leve de imunoglobulina, receptor de células T, HLA DQα, HLA DQβ, receptor de interleucina-2, MHC classe II, pré-albumina (transtirretina), elastase I, albumina, c-fos, célula neural molécula de adesão (NCAM), histona H2B, hormônio de crescimento de rato, amiloide de soro humano (SAA), creatinina quinase muscular, troponina I (TN I) e Vírus da Leucemia do Macaco Gibão (GALV). Em algumas modalidades, o promotor pode ser um promotor induzível ou um promotor constitutivo. Exemplos adicionais de promotores são conhecidos na técnica.
[0232] Em alguns exemplos, os vetores fornecidos na presente invenção incluem, ainda, uma sequência poli(A), a qual está operacionalmente ligada e posicionada em 3’ em relação à sequência que codifica a proteína transmembranar quimérica, a proteína ou o receptor de antígeno quimérico. Exemplos não limitantes de uma sequência poli(A) incluem aqueles derivados a partir do hormônio de crescimento bovino (Woychik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81(13): 3944-3948, 1984, e Patente US Nº 5,122, 458), globina β de camundongo, globina α de camundongo (Orkin et al., EMBO J. 4(2): 453-456, 1985), colágeno humano, vírus de polioma (Batt et al., Mol. Cell Biol.
15(9):4783-4790, 1995), o gene da timidina quinase do vírus Herpes simplex (HSV TK), sinal de poliadenilação do gene da cadeia pesada de IgG (Publicação de Pedido de Patente US Nº 2006/0040354), hormônio de crescimento humano (hGH) (Szymanski et al., Mol. Terapia 15(7):1340-1347, 2007), sítio SV40 poli (A), por exemplo, sítio SV40 poli(A) tardio e inicial (Schek et al., Mol. Cell Biol. 12(12):5386-5393, 1992). Em algumas modalidades, a sequência poli(A) inclui um elemento a montante altamente conservado (AATAAA). Esta sequência AATAAA pode, por exemplo, ser substituída por outras sequências de hexanucleotídeos com homologia para AATAAA, as quais são capazes de sinalizar poliadenilação, incluindo, por exemplo, ATTAAA, AGTAAA, CATAAA, TATAAA, GATAAA, ACTAAA, AATATA, AAGAAA, AATAAT, AAAAAA, AATGAA, AATCAA, AACAAA, AATCAA, AATAAC, AATAGA, AATTAA e AATAAG. Vide, por exemplo, WO 06012414 A2).
[0233] Uma sequência poli(A) pode, por exemplo, ser um sítio de poliadenilação sintético. Vide, por exemplo, Levitt el al, Genes Dev. 3(7) 1019- 1025, 1989). Em alguns exemplos, uma sequência poli(A) pode ser o sinal de poliadenilação de neuropilina-1 solúvel: AAATAAAATACGAAATG (SEQ ID NO: 78). Exemplos adicionais de sequências poli(A) são conhecidos na técnica. Exemplos e aspectos adicionais de vetores também são conhecidos na técnica.
[0234] Em algumas modalidades de qualquer um dos vetores descritos na presente invenção, o vetor pode incluir, ainda, uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico pode ser ligar especificamente a um antígeno tumoral (por exemplo, selecionado a partir do grupo que consiste em: glypican-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB ETA, 5T4, antígeno de adenocarcinoma, alfa-fetoproteína (AFP), BAFF, célula B de linfoma, antígeno C242, CA-125, anidrase carbônica 9 (CA-IX), C-MET, CCR4,
CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, domínio extra B de fibronectina, receptor de folato 1, GD2, gangliosídeo GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-13, IL-6, receptor do fator I de crescimento semelhante à insulina, integrina α5β1, integrina ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, mucina CanAg, ácido N-glicolilneuramínico, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, células de carcinoma prostático, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, tenascina C, TGF beta 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2 e vimentina. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico compreende um ou mais domínios de sinalização coestimuladores selecionados a partir do grupo de 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR- I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10 e DAP-12. Em alguns exemplos de qualquer um dos vetores descritos na presente invenção, o vetor é um vetor lentiviral ou adenoviral.
[0235] Também são fornecidos, na presente invenção, conjuntos de vetores que incluem um primeiro vetor que inclui uma sequência que codifica qualquer uma das proteínas transmembranares quiméricas descritas na presente invenção (por exemplo, qualquer um dos vetores que inclui uma sequência que codifica qualquer uma das proteínas transmembrana quiméricas descritas na presente invenção), e um segundo vetor que inclui uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico (por exemplo, qualquer um dos receptores de antígeno quiméricos descritos na presente invenção). Em algumas modalidades, um ou ambos dentre o primeiro vetor e o segundo vetor é um vetor lentiviral ou adenoviral. Em algumas modalidades, o segundo vetor inclui ainda uma sequência promotora e/ou uma sequência intensificadora que é ligada operacionalmente à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico. Em algumas modalidades, o segundo vetor inclui, ainda, uma sequência poli(A) ligada operacionalmente à sequência que codifica o receptor de antígeno quimérico. Métodos para Introduzir um Ácido Nucléico ou Vetores em Uma Célula de Mamífero
[0236] Uma variedade de métodos diferentes conhecidos na técnica pode ser usados para introduzir qualquer um dos ácidos nucleicos e vetores revelados na presente invenção em uma célula de mamífero (por exemplo, qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção, por exemplo, qualquer uma das células T (por exemplo, T humana células) descritas na presente invenção). Exemplos não limitantes de métodos que podem ser usados para introduzir um ácido nucleico ou vetor em uma célula de mamífero incluem lipofecção, transfecção, eletroporação, microinjeção, transfecção de fosfato de cálcio, transfecção baseada em dendrímero, transfecção de polímero catiônico, compressão de células, sonoporação, transfecção óptica, impalection, hidrodinâmica distribuição, magnetofecção, transdução viral (por exemplo, transdução adenoviral e lentiviral) e transfecção de nanopartículas. Métodos adicionais de introdução de um ácido nucleico ou vetor em uma célula de mamífero são conhecidos na técnica. Células de Mamífero
[0237] Também são fornecidas, na presente invenção, células de mamíferos que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos ou vetores descritos na presente invenção. Também são fornecidas células de mamíferos que incluem qualquer um dos conjuntos de vetores descritos na presente invenção.
[0238] Em algumas modalidades, a célula de mamífero é obtida anteriormente a partir de um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humano, por exemplo, um indivíduo humano identificado ou diagnosticado com um câncer) ou é uma célula filha de uma célula de mamífero que foi previamente obtida de um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humano, por exemplo, um indivíduo humano identificado ou diagnosticado com um câncer). Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula imune. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula humana.
[0239] Exemplos não limitantes de células imunes incluem uma célula T (por exemplo, uma célula T humana). Exemplos não limitantes de células T (por exemplo, células T humanas) incluem, por exemplo, um timócito imaturo, um linfócito de sangue periférico, uma célula T auxiliar, uma célula T naive, um precursor de célula TH pluripotente, uma célula progenitora linfóide, uma célula Treg, uma célula T de memória, uma célula TH17, uma célula TH22, uma célula TH9, uma célula TH2, uma célula TH1, uma célula TH3, células γδ T, uma célula αβ T, uma célula T reguladora (célula Treg) e uma célula T infiltrante de tumor. Exemplos adicionais de uma célula T (por exemplo, uma célula T humana) incluem um Célula CD8+ T, uma célula CD4+ T, célula T de memória, célula Treg, célula natural killer, célula B e um monócito. Exemplos adicionais de células de mamíferos incluem um mastócito, um macrófago, um neutrófilo, uma célula dendrítica, um basófilo, um eosinófilo e uma célula natural killer. Composições e Kit
[0240] Também são fornecidas neste documento composições (por exemplo, composições farmacêuticas) que incluem qualquer um dos ácidos nucleicos, vetores, conjuntos de ácidos nucleicos, conjuntos de vetores ou células de mamíferos descritos na presente invenção. Por exemplo, fornece-se, na presente invenção, uma composição que inclui qualquer um dos ácidos nucleicos ou conjuntos de ácidos nucleicos descritos na presente invenção, ou qualquer um dos vetores ou conjuntos de vetores fornecidos na presente invenção e um solvente ou carreador farmaceuticamente aceitável.
[0241] Em algumas modalidades, uma composição pode ser qualquer uma das células de mamífero aqui descritas (por exemplo, qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção anteriormente obtidas a partir de um indivíduo, por exemplo, um indivíduo identificado ou diagnosticado com um câncer) que compreende um ácido nucleico que codifica qualquer uma dentre as proteínas transmembranares quiméricas e/ou qualquer um dos receptores de antígenos quiméricos descritos na presente invenção. Em uma composição incluindo qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção, a composição pode incluir, ainda, um meio de cultura celular ou um tampão farmaceuticamente aceitável (por exemplo, tampão fosfato-salino). Uma composição que inclui qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção pode ser formulada para administração intravenosa ou intra-arterial.
[0242] Também são fornecidos kits que incluem uma ou mais de qualquer uma das composições (por exemplo, composições farmacêuticas) descritas na presente invenção. Em algumas modalidades, um kit pode incluir, ainda, instruções para realizar qualquer um dos métodos descritos na presente invenção. Métodos para tratar câncer em um indivíduo
[0243] Também são fornecidos, na presente invenção, métodos para tratar um câncer em um indivíduo (por exemplo, um ser humano, um camundongo, um coelho, um rato, um cavalo, um cachorro, um macaco ou um símio) que incluem administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma dentre as células de mamífero incluindo um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo um domínio transmembranar de uma cadeia alfa de receptor de interleucina-7 tendo uma ou mais modificações de aminoácidos conforme descrito na presente invenção, uma proteína transmembrana quimérica conforme descrito na presente invenção, ou ambos (e opcionalmente um ácido nucleico incluindo qualquer um dos receptores de antígenos quiméricos descritos na presente invenção). Em alguns exemplos desses métodos, a célula de mamífero é uma célula T (por exemplo, uma célula T CD8 +, uma célula T CD4 +, uma célula T de memória, uma célula Treg e uma célula T natural killer). Em alguns exemplos, a célula de mamífero (por exemplo, qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção) é uma célula de mamífero previamente obtida de um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que foi identificado ou diagnosticado com um câncer, por exemplo, qualquer um dos cânceres descritos na presente invenção). Algumas modalidades desses métodos incluem, ainda, a obtenção da célula de mamífero proveniente do indivíduo.
[0244] Algumas modalidades destes métodos incluem, ainda, introduzir um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico de cadeia única descrito na presente invenção ou um receptor de antígeno quimérico de cadeias múltiplas descrito na presente invenção em uma célula de mamífero (por exemplo, qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção ou conhecidas na técnica) para gerar a célula de mamífero que é administrada ao indivíduo.
[0245] Exemplos não limitantes de câncer que podem ser tratados usando qualquer um dos métodos fornecidos na presente invenção incluem: carcinoma hepatocelular, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, carcinoma adrenocortical, sarcoma de Kaposi, linfoma, câncer anal, câncer de apêndice, tumor teratóide/rabdóide, basal carcinoma celular, câncer do ducto biliar, câncer de bexiga, câncer ósseo, câncer cerebral, câncer de mama, tumor brônquico, tumor carcinoide, tumor cardíaco, câncer cervical, cordoma, leucemia linfocítica crônica, neoplasia mieloproliferativa crônica, câncer de cólon, câncer colorretal, craniofaringioma, câncer de ducto bilar, câncer endometrial, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, sarcoma de Ewing, câncer de olho, câncer de trompa de Falópio, câncer de vesícula biliar, câncer gástrico, tumor carcinoide gastrointestinal, tumor estromal gastrointestinal, tumor de células germinativas, leucemia de células pilosas, câncer de cabeça e pescoço, câncer de coração, câncer de fígado, câncer de hipofaringe, câncer de pâncreas, câncer de rim, câncer de laringe, mielite crônica leucemia ogenosa, câncer de lábio e cavidade oral, câncer de pulmão, melanoma, carcinoma de células Merkel, mesotelioma, câncer de boca, câncer oral, osteossarcoma, câncer de ovário, câncer de pênis, câncer de faringe, câncer de próstata, câncer retal, câncer de glândula salivar, câncer de pele, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecidos moles, câncer gástrico, câncer testicular, câncer de garganta, câncer de tireoide, câncer uretral, câncer uterino, câncer vaginal e câncer vulvar.
[0246] Em algumas modalidades de qualquer um desses métodos, os métodos resultam em uma diminuição na carga tumoral (por exemplo, uma diminuição na massa tumoral e/ou volume de um tumor sólido) em um indivíduo. Por exemplo, qualquer um dos métodos descritos na presente invenção pode resultar em pelo menos cerca de 1% a cerca de 99% (por exemplo, cerca de 1% a cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 2% a cerca de
99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 3% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 5% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, ou cerca de 10% (inclusive); cerca de 10% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, ou cerca de 15% (inclusive); cerca de 15% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, ou cerca de 20% (inclusive); cerca de 20% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, ou cerca de 25% (inclusive); cerca de 25% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, ou cerca de 30% (inclusive); cerca de 30% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, ou cerca de 35% (inclusive); cerca de 35% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, ou cerca de 40% (inclusive); cerca de 40% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, ou cerca de 45% (inclusive); cerca de 45% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, ou cerca de 50% (inclusive); cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, ou cerca de 55% (inclusive); cerca de 55% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, ou cerca de 60% (inclusive); cerca de 60% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, ou cerca de 65% (inclusive); cerca de 65% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, ou cerca de 70% (inclusive); cerca de 70% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, ou cerca de 72% (inclusive); cerca de 72% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, ou cerca de 74% (inclusive); cerca de 74% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, ou cerca de 76% (inclusive); cerca de 76% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, ou cerca de
78% (inclusive); cerca de 78% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, ou cerca de 80% (inclusive); cerca de 80% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, ou cerca de 82% (inclusive); cerca de 82% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, ou cerca de 84% (inclusive); cerca de 84% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, ou cerca de 86% (inclusive); cerca de 86% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, ou cerca de 88% (inclusive); cerca de 88% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, ou cerca de 90% (inclusive); cerca de 90% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, ou cerca de 92% (inclusive); cerca de 92% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, ou cerca de 94% (inclusive); cerca de 94% a cerca de 99%, cerca de 98%, ou cerca de 96% (inclusive); ou cerca de 96% a cerca de 99% ou cerca de 98% (inclusive)) de redução no carga tumoral em um indivíduo (por exemplo, em comparação à carga tumoral no indivíduo antes de um tratamento).
[0247] Em algumas modalidades, os métodos resultam em uma diminuição na taxa de progressão de um câncer no indivíduo. Por exemplo, qualquer um desses métodos descritos na presente invenção pode resultar em pelo menos cerca de 1% a cerca de 99% (e.g., cerca de 1% a cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de
5% (inclusive); cerca de 2% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 3% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 5% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, ou cerca de 10% (inclusive); cerca de 10% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, ou cerca de 15% (inclusive); cerca de 15% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, ou cerca de 20% (inclusive); cerca de 20% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, ou cerca de 25% (inclusive); cerca de 25% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, ou cerca de 30% (inclusive); cerca de 30% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, ou cerca de 35% (inclusive); cerca de 35% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, ou cerca de 40% (inclusive); cerca de 40% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, ou cerca de 45% (inclusive); cerca de 45% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, ou cerca de 50% (inclusive); cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, ou cerca de 55% (inclusive); cerca de 55% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, ou cerca de 60% (inclusive); cerca de 60% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, ou cerca de 65% (inclusive); cerca de 65% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, ou cerca de 70% (inclusive); cerca de 70% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, ou cerca de 72% (inclusive); cerca de 72% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, ou cerca de 74% (inclusive); cerca de 74% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, ou cerca de 76% (inclusive); cerca de 76% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%,
cerca de 80%, ou cerca de 78% (inclusive); cerca de 78% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, ou cerca de 80% (inclusive); cerca de 80% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, ou cerca de 82% (inclusive); cerca de 82% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, ou cerca de 84% (inclusive); cerca de 84% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, ou cerca de 86% (inclusive); cerca de 86% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, ou cerca de 88% (inclusive); cerca de 88% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, ou cerca de 90% (inclusive); cerca de 90% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, ou cerca de 92% (inclusive); cerca de 92% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, ou cerca de 94% (inclusive); cerca de 94% a cerca de 99%, cerca de 98%, ou cerca de 96% (inclusive); ou cerca de 96% a cerca de 99% ou cerca de 98% (inclusive)) de redução na taxa de progressão de um câncer em um indivíduo (por exemplo, em comparação à taxa de progressão de um câncer no indivíduo antes do tratamento ou em um indivíduo de controle ou uma população de controle de indivíduos com o mesmo câncer e sem tratamento ou um tratamento diferente).
[0248] Em algumas modalidades de qualquer um desses métodos, os métodos resultam em um aumento no tempo de sobrevivência de um câncer em um indivíduo. Por exemplo, qualquer um dos métodos descritos na presente invenção pode resultar em cerca de 1% a cerca de 800% (e.g., cerca de 1% a cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de
300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, cerca de 100%, cerca de 80%, cerca de 60%, cerca de 40%, cerca de 20%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 5% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, cerca de 100%, cerca de 80%, cerca de 60%, cerca de 40%, cerca de 20%, ou cerca de 10% (inclusive); cerca de 10% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, cerca de 100%, cerca de 80%, cerca de 60%, cerca de 40%, ou cerca de 20% (inclusive); cerca de 20% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, cerca de 100%, cerca de 80%, cerca de 60%, ou cerca de 40% (inclusive); cerca de 40% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, cerca de 100%, cerca de 80%, ou cerca de 60% (inclusive); cerca de 60% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, cerca de 100%, cerca de 80% (inclusive); cerca de 80% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, cerca de 150%, ou cerca de 100% (inclusive); cerca de 100% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de
450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, cerca de 200%, ou cerca de 150% (inclusive); cerca de 150% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, cerca de 250%, ou cerca de 200% (inclusive); cerca de 200% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, cerca de 300%, ou cerca de 250% (inclusive); cerca de 250% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, cerca de 350%, ou cerca de 300% (inclusive); cerca de 300% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, cerca de 400%, ou cerca de 350% (inclusive); cerca de 350% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, cerca de 450%, ou cerca de 400% (inclusive); cerca de 400% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, cerca de 500%, ou cerca de 450% (inclusive); cerca de 450% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, cerca de 550%, ou cerca de 500% (inclusive); cerca de 500% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, cerca de 600%, ou cerca de 550% (inclusive); cerca de 550% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, cerca de 650%, ou cerca de 600% (inclusive); cerca de 600% a cerca de 800%, cerca de 750%, cerca de 700%, ou cerca de 650% (inclusive); cerca de 650% a cerca de 800%, cerca de 750%, ou cerca de 700% (inclusive); cerca de 700% a cerca de 800% ou cerca de 750% (inclusive); ou cerca de 750% a cerca de 800% (inclusive)) aumento no tempo de sobrevivência de um câncer em um indivíduo (por exemplo, em comparação ao tempo de sobrevivência de um indivíduo controle ou uma população de indivíduos controle tendo o mesmo câncer e recebendo nenhum tratamento ou um tratamento diferente).
[0249] Também são fornecidos, na presente invenção, métodos para induzir morte celular em uma célula cancerosa em um indivíduo em necessidade do mesmo que incluem administrar, ao indivíduo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção.
[0250] Também são fornecidos, na presente invenção, métodos para diminuir o risco de desenvolver uma metástase ou uma metástase adicional em um indivíduo com câncer que incluem administrar, ao indivíduo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma das células de mamífero descritas na presente invenção. Por exemplo, qualquer um dos métodos descrito na presente invenção pode resultar em pelo menos cerca de 1% a cerca de 99% (por exemplo, cerca de 1% a cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 2% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 3% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de
80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, ou cerca de 5% (inclusive); cerca de 5% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, cerca de 15%, ou cerca de 10% (inclusive); cerca de 10% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, cerca de 20%, ou cerca de 15% (inclusive); cerca de 15% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, cerca de 25%, ou cerca de 20% (inclusive); cerca de 20% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, cerca de 30%, ou cerca de 25% (inclusive); cerca de 25% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de
82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, cerca de 35%, ou cerca de 30% (inclusive); cerca de 30% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, cerca de 40%, ou cerca de 35% (inclusive); cerca de 35% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, cerca de 45%, ou cerca de 40% (inclusive); cerca de 40% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, cerca de 50%, ou cerca de 45% (inclusive); cerca de 45% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 55%, ou cerca de 50% (inclusive); cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, cerca de 60%, ou cerca de 55% (inclusive); cerca de 55% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%,
cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, cerca de 65%, ou cerca de 60% (inclusive); cerca de 60% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, cerca de 70%, ou cerca de 65% (inclusive); cerca de 65% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, cerca de 72%, ou cerca de 70% (inclusive); cerca de 70% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, cerca de 74%, ou cerca de 72% (inclusive); cerca de 72% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, cerca de 76%, ou cerca de 74% (inclusive); cerca de 74% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, cerca de 78%, ou cerca de 76% (inclusive); cerca de 76% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, cerca de 80%, ou cerca de 78% (inclusive); cerca de 78% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, cerca de 82%, ou cerca de 80% (inclusive); cerca de 80% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, cerca de 84%, ou cerca de 82% (inclusive); cerca de 82% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, cerca de 86%, ou cerca de 84% (inclusive); cerca de 84% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de
96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, cerca de 88%, ou cerca de 86% (inclusive); cerca de 86% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, cerca de 90%, ou cerca de 88% (inclusive); cerca de 88% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, cerca de 92%, ou cerca de 90% (inclusive); cerca de 90% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, cerca de 94%, ou cerca de 92% (inclusive); cerca de 92% a cerca de 99%, cerca de 98%, cerca de 96%, ou cerca de 94% (inclusive); cerca de 94% a cerca de 99%, cerca de 98%, ou cerca de 96% (inclusive); ou cerca de 96% a cerca de 99% ou cerca de 98% (inclusive)) de diminuição no risco de desenvolver uma metástase ou uma metástase adicional no indivíduo (por exemplo, em comparação ao risco de desenvolver uma metástase ou uma metástase adicional em um indivíduo de controle ou uma população de controle de indivíduos com o mesmo câncer e sem tratamento ou um tratamento diferente).
[0251] A invenção é ainda descrita nos seguintes exemplos, os quais não limitam o escopo da invenção descrita nas reivindicações. Exemplo 1. Proteínas IL7Rα Modificadas Expressas na Superfície de Células T Primárias
[0252] As células T primárias foram manchadas com um anticorpo conjugado com fluorocromo contra uma marca N-terminal His para detectar a expressão de superfície das proteínas IL7Rα mutadas. Resumidamente, até 1x106 as células foram coletadas 72 horas após a transdução com vetores lentivirais e incubadas com anti-His (APC; 1: 100) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. A citometria de fluxo foi realizada usando instrumentos BD LSRII Fortessa e analisada usando software FlowJo V10 (Figura 3, os dados mostrados são do dia 6 após a ativação). A detecção de GFP (FITC)
por citometria de fluxo foi usada como um substituto para a expressão, uma vez que o gene GFP é codificado no mesmo transgene das proteínas mutantes IL7Ra e separado por uma sequência de peptídeo de autoclivagem T2A. A detecção de GFP e a detecção de superfície de marcação His foi linear. Exemplo 2. Proteínas Transmembranares Quiméricas Expressas na Superfície de Células T Primárias
[0253] A mbIL15-IL17Rα-WT é uma proteína transmembrana quimérica com domínios transmembranares e intracelulares de IL7Rα de tipo selvagem, um domínio extracelular IL15Rα (incluindo um domínio sushi), um ligante e um domínio polipeptídico IL15 (vide esquemática do construto mostrado na Figura 4). A mbIL15-IL17Rα-Ins_PPCL é uma proteína transmembranar quimérica com um domínio intracelular IL7Rα de tipo selvagem, um domínio transmembranar IL7Rα com uma inserção da sequência de PPCL entre as posições de aminoácidos 4 e 5 de IL7Rα de tipo selvagem maduro, um domínio extracelular IL15Rα (incluindo um domínio extracelular de IL15Rα ), um ligante e um domínio de polipeptídeo IL15.
[0254] As células T primárias foram manchadas com um anticorpo conjugado com fluorocromo contra IL15Rα para detectar a expressão de superfície das proteínas mbIL15 quiméricas. Resumidamente, até 1x106 as células foram coletadas 72 horas após a transdução com vetores lentivirais e incubadas com anti-IL15Rα (APC; 1: 100) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. A citometria de fluxo foi realizada usando instrumentos BD LSRII Fortessa e analisada usando software FlowJo V10 (Figura 5, os dados mostrados são do dia 6 após a ativação). A detecção de GFP (FITC) por citometria de fluxo foi usada como um substituto para a expressão, uma vez que o gene GFP é codificado no mesmo transgene das proteínas mbIL15 quimérica e IL7Rα mutantes e separado por uma sequência de peptídeo de autoclivagem T2A. A detecção de GFP e a expressão de superfície de IL15Rα foi linear. Exemplo 3. Células T que Expressam Receptores Mutantes IL7 Mantêm Alta Expressão de CD62L (Populações Tscm e Tcm) e Expressão Variável de CD25
[0255] As células T humanas primárias foram transduzidas com vetores lentivirais para expressar uma dentre proteínas IL7Rα específicas ou uma dentre proteínas de membrana quiméricas específicas mostradas no eixo x da Figura 6A. Resumidamente, até 1x106 células foram colhidas em cada ponto de tempo e incubadas com anticorpos anti-Myc (PE; 1:100), anti-CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti-CD45RO (APC; 1:200) e anti-CD62L (BV605; 1: 200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. Os níveis de expressão relativa de CD45RO e CD62L foram usados para determinar o estado de diferenciação das células. Teff = células T efetoras. Tem = células T de memória efetoras. Tcm = células T de memória central. Tscm = células T de memória de células-tronco. A Figura 6A mostra a porcentagem de diferentes tipos de células T CD8 + quando as células T humanas primárias foram transduzidas com as proteínas indicadas.
[0256] A expressão de PD-1 (Figura 6B, gráfico à esquerda) ou CD25 (Figura 6B, gráfico à direita) em células T humanas primárias que expressam diferentes proteínas mutantes IL7Rα e proteínas transmembrana quiméricas foram avaliadas 15 dias após a ativação. Resumidamente, até 1x106 células foram colhidas em cada ponto de tempo e incubadas com anticorpos anti-Myc (PE; 1:100), anti-CD25 (BV421; 1:100), anti-CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti-CD45RO (APC; 1:200), anti-CD62L (BV605; 1:200) e anti-PD1 (PE- Cy7; 1:200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. Células T de controle não transduzidas (“UT”) fornecem nível basal de expressão de PD-1 e CD25. Exemplo 4. Mutações de Domínio Transmembranar de IL7Rα Induzem Fosforilação de STAT5 em Células T Primárias
[0257] Os níveis de STAT5 fosforilado em células T humanas primárias deixadas sem transdução (“UT”) ou transduzidas com lentivírus que codificam uma das proteínas IL7Rα específicas ou uma das proteínas membranares quiméricas específicas mostradas na Figura 7A foram avaliados por Western blotting (Western blot superior). Os lisados de células inteiras foram preparados a partir de células T após 16-20 horas sob condições de privação de soro/citocina 14 dias após a ativação. As células UT T estimuladas com 100 ng/mL de IL2 solúvel durante 15 min servem como um controle positivo (+ stim), ao passo que as células UT não estimuladas (- stim) fornecem níveis basais de fosfo/proteína. Uma proteína de controle (alfa tubulina) também foi avaliada por Western blotting (Western blot inferior).
[0258] A expressão de várias proteínas mutantes IL7Rα e proteínas transmembranares quiméricas em células T humanas primárias foi avaliada no dia 15 após a ativação (Figura 7B). Os dados GFP são mostrados como % de expressão (gráfico de barra superior) e intensidade de fluorescência média (gráfico de barra inferior). A detecção da expressão de GFP por citometria de fluxo foi usada para rastrear o número relativo de células que expressam as várias proteínas transmembranares quiméricas ou mutantes IL7Rα durante um período de cultura de 14 dias (células transduzidas no dia 1 após a ativação). Exemplo 5. Mutações de Domínio Transmembranar de IL7Rα Co- Infectam Células T Primárias com CD19 CAR
[0259] A expressão do CD19 CAR (receptor de antígeno quimérico de 1928z), proteínas mutantes EKV ou Ins_CPT IL7Rα, a proteína transmembranar quimérica mbIL15-17Rα Ins_PPCL e a proteína mbIL15 na superfície das células
T primárias foi avaliada. As Figuras 8A e 8B mostram esquematicamente as construções e sua coexpressão em células T primárias.
[0260] As células T primárias foram manchadas com anticorpos conjugados com fluorocromo contra as marcações His e Myc presentes no terminal N dos mutantes IL7Rα e CAR, respectivamente, ou manchadas com um anticorpo anti-IL15Rα para detectar a expressão de superfície das proteínas mbIL15 quiméricas. Resumidamente, até 1x106 as células foram coletadas 72 horas após a transdução com vetores lentivirais e incubadas com anti-His (APC; 1:100), ou anti-IL15Rα (APC; 1: 100) e anti-Myc (PE; 1:100) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. A citometria de fluxo foi realizada usando instrumentos BD LSRII Fortessa e analisada usando software FlowJo V10 (Figura 8C, os dados mostrados são do dia 6 após a ativação). GFP é expresso dentro do mesmo transgene das proteínas mbIL15 quiméricas e IL7Ra mutantes, a detecção de GFP (FITC) por citometria de fluxo pode ser usada como um substituto para a expressão. Uma população duplamente positiva (Myc-PE +, FITC) demonstra a coexpressão de ambas as proteínas em células T humanas primárias.
[0261] O número de células que expressam mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL e mbIL15 diminuiu do dia 6 ao dia 14 em cultura (Figura 8D). Em contraste, o número de células que expressam IL7Rα_EKV, IL7Rα_Ins_CPT e o receptor de antígeno quimérico 1928z permaneceu relativamente constante durante o mesmo período. A detecção da expressão de GFP e tag Myc terminal N (Myc- PE; 1:100 em tampão FACS durante 30 min) por citometria de fluxo foi usada para rastrear o número relativo de células que expressam os vários mutantes IL7Rα ou proteínas transmembrana quiméricas e CD19 CAR, respectivamente, durante um período de cultura de 14 dias (células transduzidas no dia 1 após a ativação).
[0262] As células CAR T que expressam vários mutantes IL7Ra e proteínas transmembrana quiméricas mantêm o fenótipo de memória menos diferenciado no dia 14 após a ativação (Figura 9). Resumidamente, até 1x106 células foram coletadas 14 dias após a ativação e incubadas com anticorpos anti-Myc (FITC; 1:100), anti-CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti- CD45RO (APC; 1:200), e anti CD62L (BV605; 1:200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. A citometria de fluxo foi realizada com instrumentos BD LSRII Fortessa e analisada com o software FlowJo V10. Populações de subconjunto de memória de células T (CD62L vs CD45RO) foram bloqueadas em populações Myc+, CD8+. Teff = células T efetoras. Tem = células T de memória efetoras. Tcm = células T de memória central. Tscm = células T de memória de células-tronco.
[0263] Os níveis de STAT5 e STAT3 fosforilados e o nível de proteína total de BCL-XL em células T humanas primárias deixadas sem transdução ou transduzidas com vetores lentivirais que codificam uma das proteínas IL7Rα mostradas ou uma das proteínas transmembrana quiméricas mostradas (com e sem CAR) foram avaliados. Os lisados de células inteiras foram preparados a partir de células T após 16-20 hrs sob condições de privação de soro/citocina 14 dias após a ativação. As células UT T estimuladas com 100 ng/mL de IL2 solúvel durante 15 min servem como um controle positivo (+ stim), ao passo que as células - UT não estimuladas (- stim) fornecem níveis basais de fosfo/proteína. Exemplo 6. Células CAR-T que Expressam IL7Rα Mutantes Demonstram Expansão Superior para Controlar Células CAR-T após Exposição Serial ao Antígeno
[0264] A expansão de células CAR T que expressam mutantes IL7Rα em comparação a CAR de controle após exposição em série ao antígeno em uma proporção de efetor para alvo (E:T) de 1:1 foi avaliada. No dia 14 após a ativação, 5x105 células CAR+ T foram plaqueadas contra 5x105 células Nalm6 B no dia 0 em cada poço de uma placa GRex de 24 poços. As células foram plaqueadas em repetições em triplicado. Células Nalm6 B e meio de cultura celular fresco foram adicionados de volta às placas de cultura nos dias 4, 7, 11, 14 e 17 a uma razão de 1:1 com base no número de células CAR+ em cada poço, calculado por citometria de fluxo. Todas as células que expressam mutantes IL7R mantiveram 100% de lise das células tumorais ao longo do ensaio de 21 dias em relação aos controles não transduzidos e com tumor apenas. A expansão dobrada de células CAR+ T foi determinada por análise de citometria de fluxo nos dias 4, 7, 11, 17 e 21. Resumidamente, até 1x106 células foram coletadas em cada ponto de tempo e incubadas com anticorpos anti- Myc (PE; 1:100), anti-CD3 (BV421; 1:100), anti-CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti-CD45RO (APC; 1:200), anti-CD62L (BV605; 1:200) e anti-PD1 (PE-Cy7; 1:200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. Grânulos de contagem (50 l, 123count™ eBeads, Thermo Fisher Scientific) foram adicionados a cada tubo diretamente antes da análise de citometria de fluxo permitindo a quantificação do número de células em cada condição. Esses números foram usados para rastrear as taxas de expansão do CAR+ e para determinar o número de células alvo Nalm6 a serem adicionadas de volta a cada poço em uma razão E:T de 1:1. Estes dados mostram que as células CAR T que expressam mutantes IL7Rα demonstram expansão superior em comparação a CAR de controle após exposição em série ao antígeno em uma razão de efetor para alvo (E:T) de 1:1 (Figuras 11A e 11B).
[0265] A porcentagem de lise de células B CD19 + Nalm6 (Figura 12A) e células CD19- K562 (Figura 12B) em um ensaio de morte noturno à base de luciferase foi avaliada. Células T retiradas do final de um ensaio de morte em série de 21 dias (conforme descrito na presente invenção) e uma linhagem de células Nalm6 ou CD19- K562 projetada para expressar luciferase de pirilampo (fLuc+). 1x104 células Nalm6 ou K562 foram plaqueadas por poço e as células T foram plaqueadas de acordo com % CAR+ em várias razões de E:T. A lise celular foi medida com base na intensidade da unidade de luz relativa (RLU) de células Nalm6 B- ou K652 vivas e normalizada para controles Nalm6 K562 apenas.
[0266] As células T que expressam mutantes IL7Rα demonstram morte superior de células CD19+ Nalm6 B sobre o CD19 CAR de controle em razões E:T baixas após 22 dias de encontro de antígeno em série (Figura 12A). Conforme esperado, as células UT T do doador e idade correspondente (dia 35 após ativação) não sobreviveram ao ensaio de morte em série de 21 dias, portanto, não foram testadas aqui.
[0267] As células CAR T que expressam IL7Rα_EKV demonstraram citotoxicidade fora do alvo aumentada contra CD19- K562 em razões altas E:T (20:1 e 6:1), ao passo que as células CAR-T que expressam outras variantes do receptor de citocina demonstraram citotoxicidade fora do alvo comparável ao controle CAR (Figura 12B).
[0268] A diferenciação do tipo de memória de células CAR-T que expressam mutantes IL7Rα no dia 14 após a exposição em série ao antígeno foi avaliada (Figura 13). As células B Nalm6 foram adicionadas à cultura celular nos dias 0, 4, 7, 11, 14, 17 e 21. Teff = células T efetoras. Tem = células T de memória efetoras. Tcm = células T de memória central. Tscm = células T de memória de células-tronco. Resumidamente, até 1x106 células foram colhidas em cada ponto de tempo e incubadas com anticorpos anti-Myc (PE; 1:100), anti-CD3 (BV421; 1:100), anti-CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti- CD45RO (APC; 1:200), anti-CD62L (BV605; 1:200) e anti-PD1 (PE-Cy7; 1:200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. Estes dados mostram que as células CAR T que expressam mutantes IL7Rα mantiveram um fenótipo de memória menos diferenciado no dia 14 após a exposição em série ao antígeno. Exemplo 7. Células CAR-T que Expressam IL7Rα Mutantes Demonstram Expansão Superior para Controlar Células CAR-T após Exposição Única ao Antígeno
[0269] A expansão de células CAR T que expressam mutantes IL7Rα em comparação ao CAR de controle após uma única exposição ao alvo a uma razão E:T de 1:3 foi avaliada (Figuras 14A e 14B). No dia 14 após a ativação, 5x105 células CAR+ T foram plaqueadas contra 1,5x105 células Nalm6 B no dia 0 em cada poço de uma placa GRex de 24 poços. As células foram plaqueadas em repetições em triplicado. Todas as células mantiveram 100% de lise das células tumorais ao longo do ensaio de 21 dias em relação aos controles não transduzidos e com tumor apenas. A expansão dobrada de células CAR+ T foi determinada por análise de citometria de fluxo nos dias 4, 7, 11, 17 e 21. Resumidamente, até 1x106 células foram coletadas em cada ponto de tempo e incubadas com anticorpos anti-Myc (PE; 1:100), anti-CD3 (BV421; 1:100), anti- CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti-CD45RO (APC; 1:200), anti- CD62L (BV605; 1:200) e anti-PD1 (PE-Cy7; 1:200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. Grânulos de contagem (50 l, 123count™ eBeads) foram adicionados a cada tubo diretamente antes da análise permitindo a quantificação do número de células em cada condição. Estes dados mostram que as células CAR T que expressam mutantes IL7Rα demonstram expansão superior para controlar CAR após uma única exposição ao alvo.
[0270] A diferenciação do tipo de memória de células CAR-T que expressam mutantes IL7Rα no dia 14 após a exposição em série ao antígeno foi avaliada (Figura 15). As células B Nalm6 foram adicionadas à cultura celular no dia 0. Resumidamente, até 1x106 células foram colhidas em cada ponto de tempo e incubadas com anticorpos anti-Myc (PE; 1:100), anti-CD3 (BV421; 1:100), anti-CD4 (BV785; 1:200), anti-CD8 (PE; 1:200), anti-CD45RO (APC; 1:200), anti-CD62L (BV605; 1:200) e anti-PD1 (PE-Cy7; 1:200) em PBS + FBS a 2% (Tampão FACS) durante 30 minutos a 4 °C. Estes dados mostram que células CAR T que expressam mutantes IL7Rα mantiveram um fenótipo de memória menos diferenciado no dia 14 após a exposição única ao antígeno. Teff = células T efetoras. Tem = células T de memória efetoras. Tcm = células T de memória central. Tscm = células T de memória de células-tronco. EXEMPLO 8. Teste in vivo de CD19 CAR + IL7Ra CPT, MCP ou PPCL com tumor Nalm6.
[0271] Linhagem celular Nalm6 de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) CD19+ foi adquirida da ATCC e transduzida com luciferase para permitir a imagiologia bioluminescente. 0,5 x 106 de células Nalm6_luc foram implantadas em camundongos NOD-SCID IL2Rgammanulo (NSG) no primeiro dia do experimento. No dia 6 (e a cada três a quatro dias depois disso) os animais foram injetados intraperitonealmente com D-luciferina (150 mg/kg de 15 mg/mL de substrato da Promega) e a bioluminescência (BLI) foi medida em um gerador de imagens IVIS S5 Lumina (PerkinElmer, MA). As imagens foram analisadas usando Living Image 4.3.1 (PerkinElmer, MA) para quantificar o corpo inteiro, ROI de volume fixo e fluxo total (fótons/seg.) foi calculado e mostrado na Tabela 1 abaixo. No dia 6 do experimento, os animais também foram divididos em grupos de seis animais (com exceção do grupo veículo para o qual havia apenas três animais) e dosados com células T não transduzidas ou células T portando CD19 CAR apenas, CD19 CAR + IL7RCPT, CD19 CAR + IL7RMCP ou CD19 CAR + IL7RPPCL. Todos os animais que receberam células
CAR T receberam a dose de teste de estresse de 0,1 x 106 de células T CAR, e todos os animais receberam o mesmo número total de células T.
[0272] As sequências de proteína e DNA para cada um dos CD19 CAR, CD19 CAR + IL7RαCPT, CD19 CAR + IL7RMCP ou CD19 CAR + IL7RPPCL usado nesses experimentos são mostrados abaixo. CD19 CAR DNA (SEQ ID NO: 100) GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcag cctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaac tggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgc ccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatc gctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacagg cggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctgg cctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcct ggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactaca acagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacag cctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggact actggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAA
GGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTC AATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCC
GACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCT Proteína CD19 CAR (SEQ ID NO: 101)
DKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD19 CAR + IL7RA_CPT DNA (SEQ ID NO: 102) GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcag cctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaac tggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgc ccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatc gctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacagg cggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctgg cctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcct ggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactaca acagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacag cctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggact actggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAA
GGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTC AATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCC
AAGCCCATCCCCAACCCACTGCTGGGCCTGGATAGCACCTCCGGAAGCGGAGAGGGC AGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTG CTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatc atcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAG
GGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG Proteína CD19 CAR + IL7RA_CPT (SEQ ID NO: 103)
MSSFYQNQ CD19CAR + IL7RaMCP DNA (SEQ ID NO: 104) GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcag cctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaac tggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgc ccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatc gctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacagg cggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctgg cctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcct ggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactaca acagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacag cctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggact actggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAA
GGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTC AATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCC
AAGCCCATCCCCAACCCACTGCTGGGCCTGGATAGCACCTCCGGAAGCGGAGAGGGC AGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTG CTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatc atcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAG
GGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG Proteína CD19CAR + IL7RaMCP (SEQ ID NO: 105)
MSSFYQNQ CD19CAR + IL7RaPPCL DNA (SEQ ID NO: 106) GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcag cctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaac tggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgc ccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatc gctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacagg cggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctgg cctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcct ggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactaca acagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacag cctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggact actggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAA
GGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTC AATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCC
AAGCCCATCCCCAACCCACTGCTGGGCCTGGATAGCACCTCCGGAAGCGGAGAGGGC AGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTG CTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatc atcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAG
GGAGGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG Proteína CD19CAR + IL7RaPPCL (SEQ ID NO: 107)
[0273] O atraso no crescimento tumoral e a porcentagem de aumento na expectativa de vida foram calculados conforme descrito abaixo.
[0274] Atraso de crescimento tumoral (TGD ou TC) - TGD é um desfecho de grupo. O atraso no crescimento tumoral é expresso em unidades de dias e é calculado a partir dos tempos médios que os camundongos em um grupo levaram para alcançar uma carga tumoral especificada (tempo para avaliação de tamanho, TES). Foi calculado como: TGD = TES tratada média – controle de TES média Em que o controle são células UT T.
[0275] A % de aumento na expectativa de vida (ILS) – % ILS é um desfecho de grupo. Foi calculado como:
[0276] Os dados desses experimentos são mostrados nas Figuras 16-18. As células T não transduzidas não tinham atividade anticâncer. Na dose de teste de estresse de 0,1 x 106 células, o CD19 CAR individualmente aumentou a expectativa de vida dos animais em 68,8%, mas nenhum aumento no atraso do crescimento tumoral. O tratamento com CD19 CAR + IL7RaCPT foi mais eficaz com aumento de 175% na expectativa de vida em relação ao tratamento com veículo e atraso do crescimento tumoral de > 29,2 dias. O tratamento com CD19 CAR + IL7RaMCP e CD19 CAR + IL7RaPPT foram ambos eficazes e aumentaram a expectativa de vida > 175% cada, com atraso de crescimento tumoral de > 22,0 e > 17,9 dias, respectivamente. Tabela 1. Dias após a
VEÍCULO inoculação 11300 6 49300000 63300000 0000
1,29E 96300000 10400000 12 +10 00 000 3,57E 20300000 31400000 15 +10 000 000 1,48E 22 +11 26 29 36 43 Dias após a
NÃO TRANDUZIDO inoculação 64500 11200000 6290000 7950000 8220000 6 54500000 000 0 0 0 0 19500 13400000 26900000 1750000 2690000 1710000 9 00000 00 00 000 000 000 86200 68000000 22000000 1,17E+1 9370000 12 1,27E+10 00000 00 000 0 000 3,72E 34200000 54800000 2,74E+1 15 3,66E+10 1,11E+10 +10 000 000 0 22 26 29 36
Dias após a CD19 CAR inoculação 84800 1100000 5480000 7790000 6 61600000 68500000 000 00 0 0 16200 13200000 16900000 2450000 1260000 1370000 9 00000 00 00 000 000 000 87900 67600000 10700000 7700000 8000000 12 1,14E+10 00000 00 000 000 000 3,44E 77700000 28300000 2,99E+1 15 2,25E+10 3,42E+10 +10 00 000 0 3,14E 21900000 33600000 8,93E+1 22 3,12E+10 3,18E+10 +10 000 000 0 1,67E 27300000 28200000 1,36E+1 26 4,9E+10 4,02E+10 +10 000 000 1 1,21E 63500000 83100000 1,05E+1 29 8,4E+10 4,71E+10 +11 000 000 1 1,72E 84000000 36 +11 000 43 Dias após a CD19 CAR + IL7RaCPT inoculação 68600 10700000 5990000 7680000 5590000 6 88400000 000 0 0 0 0 23900 15100000 18200000 7620000 1740000 1370000 9 00000 00 00 00 000 000 12 82200 82600000 90800000 5280000 8400000 5540000
1,79E 16200000 14200000 1,14E+1 15 1,07E+10 1,56E+10 +10 000 000 0 36200 35500000 17400000 1890000 1360000 3490000 22 00000 00 00 000 000 000 69000 49500000 14700000 2200000 1260000 1350000 26 0000 0 0 00 00 000 28300 1430000 4010000 29 38700000 6530000 5090000 000 0 00 34600 2640000 36 1170000 1730000 1070000 938000 00 0 25500 43 953000 873000 797000 3340000 00 Dias após a CD19 CAR + IL7RaMCP inoculação 69600 7480000 1000000 5590000 6 58600000 90700000 000 0 00 0 18700 19500000 19900000 1110000 2620000 1010000 9 00000 00 00 000 000 000 1,03E 63500000 11500000 1,32E+1 5740000 12 1,38E+10 +10 00 000 0 000 1,69E 16100000 25700000 3,07E+1 15 1,86E+10 1,38E+10 +10 000 000 0 17700 59000000 24700000 5390000 8260000 7520000 22 00000 00 000 000 000 000 11500 19700000 80200000 1820000 9760000 26 5300000 0000 00 000 00 000
29 2130000 2900000 2,31E+10 00 00 000 29900 36 2770000 1,33E+11 1890000 2230000 6,85E+10 00 12400 43 1510000 978000 1330000 4,58E+10 00 Dias após a CD19 CAR + IL7RaPPCL inoculação 74000 10000000 7470000 5670000 5620000 6 97400000 000 0 0 0 0 18900 19800000 31700000 1000000 9980000 8110000 9 00000 00 00 000 00 00 1,12E 11700000 16100000 6850000 7990000 9090000 12 +10 000 000 000 000 000 1,98E 23300000 21200000 15 1,3E+10 1,92E+10 2,52E+10 +10 000 000 43000 18800000 36000000 1290000 2610000 1580000 22 00000 000 000 000 000 000 14400 14100000 62400000 4460000 8730000 26 3110000 00000 000 000 00 000 66500 82100000 75200000 4280000 1530000 29 1570000 000 00 000 00 000 27800 14800000 36 47600000 659000 1550000 2990000 00 00 14000 15000000 43 4250000 1020000 1440000 2140000 00 0 EXEMPLO 9. Experimento de morte em série in vitro com GPC3 CAR +
IL7RaCPT
[0277] Um número igual de células T GPC3 CAR positivas e células T GPC3 CAR + IL7R CPT positivas cocultivadas com células alvo Hep3B da American Type Culture Company (ATCC, Manassas, VA) (0,5 x 106 de células CAR T cocultivadas com 0,5 x 106 de células alvo Hep3B). A proteína CPT IL7Ra é a mesma descrita no Exemplo 8. As células alvo foram adicionadas duas vezes por semana a cada três a quatro dias (em uma razão de células T CAR 1:1 para células Hep3B alvo) durante 35 dias e o número de células CAR T foi medido por contagem de grânulos e citometria de fluxo. As células alvo foram adicionadas até o dia 35 e o número de células CAR T após o dia 35 foram medidas uma vez por semana. Os números das células CAR T são mostrados na Tabela 2 abaixo.
[0278] As sequências de proteína e DNA para o GPC3 CAR e o GPC3 CAR + IL7RαCPT são mostradas abaixo. GPC3 CAR DNA (SEQ ID NO: 108)
ATTGCGTGGCTGGCAACTCCTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACTTTAGTGACCGTGA GCTCCgggtccACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGC GTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAgcggcggggggcgcagTGCA
GTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCT CTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCG
CAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC Proteína GPC3 CAR (SEQ ID NO: 109)
QEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR GPC3CAR + IL7RaCPT (SEQ ID NO: 110)
ATTGCGTGGCTGGCAACTCCTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACTTTAGTGACCGTGA GCTCCgggtccACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGC GTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAgcggcggggggcgcagTGCA
GTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCT CTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCG
GAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTA CAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCgggtcC GGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCC
CATGCTCCTGCTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCT TATCCCTcatcatcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAG
AACCAGGAGGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG Proteína GPC3CAR + IL7RaCPT (SEQ ID NO: 111)
[0279] Os dados desse experimento são mostrados na Figura 19. As células GPC3 CAR T atingiram o pico em sua expansão no dia 10 com um máximo de 2,4 vezes acima da densidade celular inicial. Células GPC3 CAR T que também expressam IL7R CPT se expandiu até 40 vezes em relação à linha de base no dia 28 e só pararam de se expandir após o dia 31 quando os alvos não foram mais adicionados.
[0280] Entende-se que, embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com a descrição detalhada da mesma, a descrição anterior destina-se a ilustrar e não limitar o escopo da invenção, o qual é definido pelo escopo das reivindicações anexas. Outros aspectos, vantagens e modificações estão dentro do escopo das seguintes reivindicações.
Claims (20)
1. Proteína, caracterizada pelo fato de que compreende um domínio transmembranar de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-7, com uma ou mais modificações, em que o domínio transmembranar com uma ou mais modificações tem uma sequência de SEQ ID NO: 2, 4, 6 ou 8.
2. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a proteína compreende ainda um domínio intracelular de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-7.
3. Proteína de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o domínio intracelular compreende uma sequência de SEQ ID NO: 45.
4. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a proteína compreende ainda um domínio extracelular de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-7.
5. Proteína de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o domínio extracelular compreende uma sequência de SEQ ID NO: 11.
6. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda: um domínio extracelular de interleucina-15; e um domínio extracelular sushi de uma cadeia alfa do receptor de interleucina-15.
7. Proteína de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o domínio extracelular de interleucina-15 compreende uma sequência de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 24.
8. Proteína de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o domínio extracelular sushi de cadeia alfa do receptor de interleucina-15 compreende a SEQ ID NO: 36 ou SEQ ID NO: 37.
9. Ácido nucleico, caracterizado pelo fato de que codifica uma proteína definida na reivindicação 1.
10. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico definido na reivindicação 9.
11. Vetor de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um promotor ligado operacionalmente ao ácido nucleico e, opcionalmente, uma sequência intensificadora operacionalmente ligada ao ácido nucleico.
12. Vetor de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma sequência que codifica um receptor de antígeno quimérico, que se liga especificamente a um antígeno tumoral.
13. Vetor de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o antígeno tumoral é selecionado a partir do grupo que consiste em: glipicano- 3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LICAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, antígeno de adenocarcinoma, alfa-fetoproteína (AFP), BAFF, linfoma de célula B , antígeno C242, CA-125, anidrase carbônica 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, domínio extra B de fibronectina, receptor de folato 1, GD2, gangliosídeo GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-13, IL-6, receptor do fator I de crescimento semelhante à insulina, integrina α5β1, integrina ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, mucina CanAg, ácido N-glicolilneuramínico, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, células de carcinoma prostático, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG- 72, tenascina C, TGF beta 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, e vimentina.
14. Vetor de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno quimérico compreende um ou mais domínios de sinalização coestimuladores selecionados a partir do grupo que consiste em: 4- 1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, e DAP-12.
15. Vetor de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o vetor é um vetor lentiviral ou adenoviral.
16. Célula de mamífero, caracterizada pelo fato de que compreende um vetor definido na reivindicação 10.
17. Célula de mamífero de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que a célula de mamífero é uma célula imune.
18. Célula de mamífero de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma célula T CD4+, uma célula T CD8+, uma célula B, um monócito, uma célula natural killer, uma célula dendrítica, um macrófago, uma célula T reguladora, e uma célula T auxiliar.
19. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um vetor definido na reivindicação 10 e um carreador farmaceuticamente aceitável.
20. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma célula de mamífero definida na reivindicação 16.
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| US20030125251A1 (en) | 2001-06-21 | 2003-07-03 | Wakefield Lalage M. | Transforming growth factor beta (TGF-beta) antagonist selectively neutralizes "pathological" TGF-beta |
| PT1411118E (pt) | 2001-06-22 | 2008-12-09 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Inibidores da proliferação celular contendo um anticorpo anti-glipicano 3 |
| AU2002338020A1 (en) | 2002-09-04 | 2004-03-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody against blood-solubilized n-terminal peptide in gpc3 |
| US20060040354A1 (en) | 2004-07-20 | 2006-02-23 | O'keefe Theresa L | Novel polyadenylation signal for use in expression vectors |
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| KR102070098B1 (ko) | 2010-09-21 | 2020-01-28 | 알토 바이오사이언스 코포레이션 | 다량체성 아이엘 15 용해성 융합 분자 및 그의 제조 및 사용 방법 |
| US9206257B2 (en) | 2011-04-19 | 2015-12-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies specific for glypican-3 and use thereof |
| WO2013070468A1 (en) | 2011-11-08 | 2013-05-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Glypican-3-specific antibody and uses thereof |
| PT3489254T (pt) | 2012-04-30 | 2022-12-30 | Biocon Ltd | Proteínas de fusão direcionadas/imunomoduladoras e seus métodos de fabrico |
| US9409994B2 (en) | 2012-06-01 | 2016-08-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | High-affinity monoclonal antibodies to glypican-3 and use thereof |
| NZ630790A (en) | 2012-10-24 | 2016-11-25 | Admune Therapeutics Llc | Il-15r alpha forms, cells expressing il-15r alpha forms, and therapeutic uses of il-15r alpha and il-15/il-15r alpha complexes |
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