KR20210025525A - 키메라 막횡단 단백질 및 그의 용도 - Google Patents
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Abstract
1개 이상의 변형을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 막횡단 단백질이 본원에 제공된다. 또한, 이들 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산, 및 이들 핵산을 함유하는 포유동물 세포, 및 이들 포유동물 세포를 제조 및 사용하는 방법이 본원에 제공된다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 6월 22일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/688,810의 우선권을 주장하고; 그의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출되었고 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 함유한다. 2019년 6월 21일에 생성된 상기 ASCII 카피는 CDL-700_PF-43159-0072WO1_SL.txt로 명명되고 크기는 176,317 바이트이다.
기술 분야
본 개시내용은 생명공학 분야, 보다 구체적으로 키메라 막횡단 단백질 및 그의 용도에 관한 것이다.
인터류킨-7 (IL-7) 수용체는 나이브 및 기억 T-세포를 포함한 다양한 세포 유형의 세포 표면 상에서 (일시적 또는 영구적) 발현된다. IL-7에 결합 시, IL-7 수용체는 야누스 키나제-JAK1 및 JAK3의 활성화를 통해 세포 내로 신호를 전달한다 (Palmer et al., Cell. Mol. Immunol. 5(2):79-89, 2008).
제2 세대 키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포에서 2차 증식성 신호를 생성하기 위해 많은 개선이 이루어졌지만 (키메라 항원 수용체에 공동-자극 신호전달 도메인, 예컨대 CD28 및 4-1BB를 포함시키는 것을 통함), 이러한 신호는 여전히 항원-의존성으로 남아있고, 종종 낮은 종양 연관 항원 수준을 갖는 고형 종양에서 충분한 공동-자극 활성을 갖지 않는다.
CAR T-세포에 충분한 공동-자극 활성을 제공하기 위한 또 다른 시도로, 공통 감마 (γc) 쇄 수용체 패밀리에 속하는 시토카인의 공동-투여가 사용되었다. 그러나, IL-2와 같은 재조합, 증식촉진 시토카인의 장기간 사용은 종종 투여의 지속기간 및 투여량을 제한하는 심각한 부작용과 연관된다. 상기 관점에서, CAR T-세포에 공동-자극 신호를 제공하는 대안적인, 개선된 방법이 요망된다.
본 개시내용은, 적어도 부분적으로, PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것; (ii) 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1에서 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1에서 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 또는 4개)을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질이 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 막횡단 도메인을 포함하는 상응하는 단백질 또는 서열식별번호: 1의 서열을 포함하는 상응하는 단백질과 비교하여 증가된 하류 신호전달을 입증하였다는 발견에 기초한다. 대표적인 변형된 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는다.
본 개시내용은 또한, 적어도 부분적으로, 세포외 인터류킨-15 도메인; 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인; 및 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 막횡단 단백질이 키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포의 항원-비의존성 공동-자극을 제공한다는 발견에 기초한다.
이러한 발견을 고려하여, 세포외 IL-15 도메인, 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인, 및 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 막횡단 단백질이 본원에 제공된다. 또한, PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것, (ii) 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상 (예를 들어, 2, 3 또는 4개)을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질이 제공된다. 대표적인 변형된 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는다.
또한, 이들 키메라 막횡단 단백질 또는 이들 단백질을 코딩하는 핵산, 이들 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터, 및 이들 핵산 또는 벡터 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포가 제공된다. 또한, 암의 치료, 암 세포에서의 세포 사멸 (예를 들어, 아폽토시스 및/또는 괴사)의 유도, 및 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험의 감소를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법, 암 세포에서 세포 사멸 (예를 들어, 아폽토시스 및/또는 괴사)을 유도하는 방법, 및 전이 또는 추가의 전이가 발생할 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질이 본원에 제공되며, 여기서 막횡단 도메인은 PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것; (ii) 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1에서 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상을 갖는다. 대표적인 변형된 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 단백질은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄, 예컨대 비제한적으로, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄)의 세포내 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 45의 서열 또는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어, 서열식별번호: 45)의 세포내 도메인의 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 세포내 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 서열식별번호: 45와 적어도 90% 또는 95% 동일하다. 일부 실시양태에서, 단백질은 (i) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 45)의 세포내 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 결실된 것, 및 (ii) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 45)의 세포내 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 결실된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 단백질은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄, 예컨대 비제한적으로, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄)의 세포외 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 11의 서열 또는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 11)의 세포외 도메인의 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 세포외 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 도메인은 서열식별번호: 11과 적어도 90% 또는 95% 동일하다. 일부 실시양태에서, 단백질은 (i) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 11)의 세포외 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 결실된 것, 및 (ii) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 11)의 세포외 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 결실된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인을 추가로 포함한다.
또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터, 및 임의로, 핵산에 작동가능하게 연결된 인핸서 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 핵산에 작동가능하게 연결된 폴리(A) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 종양 항원에 특이적으로 결합한다 (예를 들어, 종양 항원은 글리피칸-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, 선암종 항원, 알파-태아단백질 (AFP), BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 탄산 안히드라제 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오시드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨). 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, 및 DAP-12로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다.
또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 다양한 핵산 중 임의의 것 또는 본원에 기재된 이러한 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 포유동물 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 단핵구, 자연 킬러 세포, 수지상 세포, 대식세포, 조절 T 세포, 및 헬퍼 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 포유동물 세포의 딸세포이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 인간 세포이다.
또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 다양한 벡터 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터를 포함하는 다양한 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 제1 벡터, 및 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 세트가 본원에 제공된다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 종양 항원에 특이적으로 결합한다 (예를 들어, 종양 항원은 글리피칸-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, 선암종 항원, 알파-태아단백질 (AFP), BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 탄산 안히드라제 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오시드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨). 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, 및 DAP-12로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터 둘 다는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터이다. 본원에 제공된 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 제2 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터, 및 임의로, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 인핸서를 추가로 포함한다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 제2 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 폴리(A) 서열을 추가로 포함한다.
또한, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 제1 벡터, 및 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 본원에 제공된 다양한 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 단핵구, 자연 킬러 세포, 수지상 세포, 대식세포, 조절 T 세포, 및 헬퍼 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 포유동물 세포의 딸세포이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 인간 세포이다.
또한, 본원에 제공된 다양한 벡터의 세트 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 제1 벡터, 및 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 세트) 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 이러한 벡터의 세트를 포함하는 다양한 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
또한, 세포외 인터류킨-15 도메인; 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인; 및 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 막횡단 단백질이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 세포외 인터류킨-15 도메인은 야생형 인터류킨-15 단백질의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 인터류킨-15 단백질은 야생형 인간 인터류킨-15 단백질 (예를 들어, 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 24의 서열을 갖는 야생형 인간 인터류킨-15 단백질)이다. 일부 실시양태에서, 세포외 인터류킨-15 도메인은 야생형 인터류킨-15 단백질 (예를 들어, 야생형 인간 인터류킨-15 단백질, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 24의 서열을 갖는 야생형 인간 인터류킨-15 단백질)의 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 인터류킨-15 도메인은 야생형 인터류킨-15 단백질 (예를 들어, 야생형 인간 인터류킨-15 단백질, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 24의 서열을 갖는 야생형 인간 인터류킨-15 단백질)의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 인터류킨-15 도메인은 (i) 야생형 인터류킨-15 단백질 (예를 들어, 야생형 인간 인터류킨-15 단백질, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 24의 서열을 갖는 야생형 인간 인터류킨-15 단백질)의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 제거된 것, 및 (ii) 야생형 인터류킨-15 단백질 (예를 들어, 야생형 인간 인터류킨-15 단백질, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 24의 서열을 갖는 야생형 인간 인터류킨-15 단백질)의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 제거된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 야생형 인터류킨-15 단백질의 서열이다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 세포외 인터류킨-15 도메인과 세포외 스시 도메인 사이에 위치하는 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 약 2개 아미노산 내지 약 50개 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 약 4개 아미노산 내지 약 40개 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 링커는 자연 발생 아미노산 서열이다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 자연 발생 아미노산 서열이 아니다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 서열식별번호: 92의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 서열식별번호: 92의 서열로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 세포외 스시 도메인과 막횡단 도메인 사이에 추가의 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가의 링커 서열은 약 2개 아미노산 내지 약 50개 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 추가의 링커 서열은 약 4개 아미노산 내지 약 40개 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 추가의 링커는 자연 발생 아미노산 서열이다. 일부 실시양태에서, 추가의 링커 서열은 자연 발생 아미노산 서열이 아니다.
세포외 스시 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질의 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄는 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄이다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포외 스시 도메인은 서열식별번호: 36 또는 서열식별번호: 37을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 36 또는 서열식별번호: 37의 서열을 갖는 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄)의 세포외 스시 도메인의 서열과 적어도 80% 동일하다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 36 또는 서열식별번호: 37의 서열을 갖는 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄)의 세포외 스시 도메인의 서열과 적어도 95% 동일하다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 (i) 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 36 또는 서열식별번호: 37의 서열을 갖는 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄)의 세포외 스시 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 5개의 아미노산이 제거된 것, 및 (ii) 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 36 또는 서열식별번호: 37의 서열을 갖는 인터류킨-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄)의 세포외 스시 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 5개의 아미노산이 제거된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 인터류킨-15 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 스시 도메인의 서열이다.
인터류킨-7 수용체의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질의 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄는 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄이다. 일부 실시양태에서, 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인은 PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인은 PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것; (ii) 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1에서 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상을 갖는다. 대표적인 변형된 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 야생형 알파 쇄 인터류킨-7 수용체의 막횡단 도메인, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 1의 서열을 갖는 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인)의 서열과 적어도 80% 동일하다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 야생형 알파 쇄 인터류킨-7 수용체의 막횡단 도메인, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 1의 서열을 갖는 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인)의 서열과 적어도 95% 동일하다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 (i) 인터류킨-2 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 야생형 알파 쇄 인터류킨-7 수용체의 막횡단 도메인, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 1의 서열을 갖는 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인)의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 3개의 아미노산이 제거된 것, 및 (ii) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 야생형 알파 쇄 인터류킨-7 수용체의 막횡단 도메인, 예컨대 비제한적으로, 서열식별번호: 1의 서열을 갖는 인간 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인)의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 3개의 아미노산이 제거된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인의 서열이다.
본원에 제공된 키메라 막횡단 단백질의 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄이다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄는 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄이다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 서열식별번호: 45의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 45)의 세포내 도메인의 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 서열식별번호: 45와 적어도 90% 또는 95% 동일하다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 (i) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 45)의 세포내 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 결실된 것, 및 (ii) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 45)의 세포내 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산이 결실된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인의 서열이다.
또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터, 및 임의로, 핵산에 작동가능하게 연결된 인핸서 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 핵산에 작동가능하게 연결된 폴리(A) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 종양 항원에 특이적으로 결합한다 (예를 들어, 종양 항원은 글리피칸-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, 선암종 항원, 알파-태아단백질 (AFP), BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 탄산 안히드라제 9 (CA- IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오시드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨). 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, 및 DAP-12로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다.
또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 다양한 핵산 중 임의의 것 또는 본원에 기재된 이러한 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 포유동물 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 단핵구, 자연 킬러 세포, 수지상 세포, 대식세포, 조절 T 세포, 및 헬퍼 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 포유동물 세포의 딸세포이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 인간 세포이다.
또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 다양한 벡터 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터를 포함하는 다양한 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터 중 임의의 것인 제1 벡터, 및 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 세트가 본원에 제공된다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 종양 항원에 특이적으로 결합한다 (예를 들어, 종양 항원은 글리피칸-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, 선암종 항원, 알파-태아단백질 (AFP), BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 탄산 안히드라제 9 (CA- IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오시드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨). 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, 및 DAP-12로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터 둘 다는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터이다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 제2 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터, 및 임의로, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 인핸서를 추가로 포함한다. 이러한 벡터의 세트의 일부 실시양태에서, 제2 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 폴리(A) 서열을 추가로 포함한다.
또한, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 제1 벡터, 및 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는, 본원에 기재된 다양한 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 단핵구, 자연 킬러 세포, 수지상 세포, 대식세포, 조절 T 세포, 및 헬퍼 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 포유동물 세포의 딸세포이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 인간 세포이다.
또한, 본원에 기재된 다양한 벡터의 세트 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 제1 벡터, 및 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 세트) 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 이러한 벡터의 세트를 포함하는 다양한 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
또한, 본원에 기재된 다양한 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 벡터 또는 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 제약 조성물) 중 임의의 것을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, 치료 유효량의 본원에 기재된 다양한 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 핵산, 벡터, 또는 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포) 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이고, 포유동물 세포는 인간이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 세포의 딸세포이다.
또한, 치료 유효량의 본원에 기재된 다양한 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 핵산, 벡터, 또는 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포) 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 고형 종양의 부피의 감소를 필요로 하는 대상체에서 고형 종양의 부피를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이고, 포유동물 세포는 인간이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 세포의 딸세포이다.
또한, 치료 유효량의 본원에 기재된 다양한 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 핵산, 벡터, 또는 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포) 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 암 세포에서 세포 사멸의 유도를 필요로 하는 대상체에서 암 세포에서 세포 사멸을 유도하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이고, 포유동물 세포는 인간이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 세포의 딸세포이다.
또한, 치료 유효량의 본원에 기재된 다양한 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 핵산, 벡터, 또는 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포) 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 암을 갖는 대상체에서 전이 또는 추가의 전이가 발생할 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이고, 포유동물 세포는 인간이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체로부터 이전에 수득된 세포의 딸세포이다.
또한, 면역 세포 내로 본원에 기재된 다양한 핵산 (예를 들어, 본원에 기재된 다양한 단백질 또는 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산) 중 임의의 것을 도입하는 것을 포함하는, 면역 세포에서 STAT5 신호전달을 활성화시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암을 갖는 것으로 확인되었다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 단핵구, 자연 킬러 세포, 수지상 세포, 대식세포, 조절 T 세포, 및 헬퍼 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다.
명사 앞 단수 용어의 사용은 "하나 이상"의 특정한 명사를 의미한다. 예를 들어, 어구 "포유동물 세포"는 "하나 이상의 포유동물 세포"를 의미한다. 일부 예에서, 단수 용어는 특정한 명사의 단일 단위를 의미할 수 있다.
용어 "키메라 항원 수용체" 및 "CAR"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 일반적으로 세포외 도메인 (예를 들어, 리간드/항원 결합 도메인), 막횡단 도메인 및 1개 이상의 세포내 신호전달 도메인을 포함하지만 전적으로 그러한 것은 아닌, 면역 세포의 활성화를 촉발 또는 억제할 수 있는 인공 다중-모듈 분자를 지칭한다. CAR 분자 및 그의 유도체 (예를 들어, CAR 변이체)는, 예를 들어 PCT 출원 번호 US2014/016527; 문헌 [Fedorov et al., Sci Transl Med (2013) 5(215):215ra172; Glienke et al., Front Pharmacol (2015) 6:21; Kakarla & Gottschalk, Cancer J (2014) 20(2):151-5; Riddell et al., Cancer J (2014) 20(2):141-4; Pegram et al., Cancer J (2014) 20(2):127-33; Cheadle et al., Immunol Rev (2014) 257(1):91-106; Barrett et al., Annu Rev Med (2014) 65:333-47; Sadelain et al., Cancer Discov (2013) 3(4):388-98; Cartellieri et al., J Biomed Biotechnol (2010) 956304]에 기재되어 있고; 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. CAR은 단일쇄 키메라 항원 수용체 또는 다중쇄 키메라 항원 수용체일 수 있다.
용어 "막횡단 도메인"은 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 지질 이중층을 횡단하는 적어도 1개의 인접 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드의 도메인을 의미한다. 예를 들어, 막횡단 도메인은 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 지질 이중층을 각각 횡단하는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 인접 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 막횡단 도메인은, 예를 들어 지질 이중층에 α-나선 2차 구조를 갖는 적어도 1개 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 인접 아미노산 서열 (이는 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 지질 이중층을 횡단함)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 지질 이중층에 β-배럴 2차 구조를 형성하는 2개 이상의 인접 아미노산 서열 (이는 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 각각 지질 이중층을 횡단함)을 포함할 수 있다. 막횡단 도메인의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 막횡단 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
용어 "항원-결합 도메인"은 표적 항원에 특이적으로 결합하는 도메인을 의미한다. 일부 예에서, 항원-결합 도메인은 단일쇄 폴리펩티드 내에 존재하는 아미노산으로 형성될 수 있다. 다른 예에서, 항원-결합 도메인은 제1 단일쇄 폴리펩티드 내에 존재하는 아미노산 및 1개 이상의 추가의 단일쇄 폴리펩티드 (예를 들어, 제2 단일쇄 폴리펩티드) 내에 존재하는 아미노산으로 형성될 수 있다. 비제한적으로 scFv 또는 성장 인자의 리간드-결합 도메인 (LBD)을 포함하는 항원-결합 도메인의 비제한적 예가 본원에 기재되어 있다. 항원-결합 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "항원"은 일반적으로 본원에 기재된 항원-결합 도메인에 의해 특이적으로 인식되는 결합 파트너를 지칭한다. 예시적인 항원은 상이한 부류의 분자, 예컨대 폴리펩티드 및 그의 펩티드 단편, 소분자, 지질, 탄수화물 및 핵산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 임의의 항원-결합 도메인에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 항원 또는 항원들의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 임의의 항원-결합 도메인에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 항원 또는 항원들의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
용어 "세포내 신호전달 도메인"은 하류 면역 세포 신호전달 (예를 들어, T-세포 수용체 신호전달) 및/또는 면역 세포 활성화 (예를 들어, T 세포 활성화)를 촉진하는 면역 세포 (예를 들어, T 림프구)에서 발현되는 내인성 신호전달 막횡단 폴리펩티드로부터의 세포내 신호전달 도메인을 의미한다. 세포내 신호전달 도메인의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 세포내 신호전달 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., Nature Reviews Immunol. 13:227-242, 2013]을 참조한다.
용어 "면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프" 또는 "ITAM"은 2개의 다른 아미노산에 의해 류신 또는 이소류신으로부터 분리된 티로신의 4개의 아미노산 컨센서스 서열 (YxxL/I)을 포함하는 아미노산 모티프를 의미한다. 4개의-아미노산 컨센서스 서열 내의 티로신 잔기는 신호전달 경로 키나제 (예를 들어, 림프구 신호전달 경로 키나제)의 상호작용 후에 인산화된다. ITAM의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. ITAM의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
어구 "암의 치료"는 암을 갖는 대상체에서 암의 1종 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 또는 5종)의 증상의 수, 빈도, 또는 중증도의 감소, 대상체에 존재하는 암 세포 및/또는 종양의 수의 감소, 및/또는 대상체에 존재하는 1개 이상의 고형 종양의 크기의 감소를 의미한다.
본원에 사용된 "세포외 도메인"은 폴리펩티드가 포유동물 세포 (예를 들어, 인간 세포)에서 발현되는 경우에 세포외 공간에 존재하는 폴리펩티드의 부분 (예를 들어, 도메인)을 기재한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에 사용하기 위한 방법 및 물질이 본원에 기재되며; 관련 기술분야에 공지된 다른 적합한 방법 및 물질이 또한 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 예는 단지 예시적인 것이고, 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 서열, 데이터베이스 엔트리, 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다. 상충되는 경우에, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선할 것이다.
본 발명의 다른 특색 및 이점은 하기 상세한 설명 및 도면, 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
도 1은 IL7Rα의 개략도이다. ECD = 세포외 도메인. TMD = 막횡단 도메인. ICD = 세포내 도메인. 관련 영역, 모티프, 및 아미노산 변형이 표시되어 있다.
도 2는 관련 모티프 및 신호전달 활성화의 메카니즘을 보여주는 IL7Rα의 개략도이다.
도 3은 1차 T 세포의 표면 상에서의 변형된 IL7Rα 단백질의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 세트이다. 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것이다.
도 4는 예시적인 키메라 막횡단 단백질의 개략도이다. 신호전달 활성화의 메카니즘과 함께 관련 모티프가 표시된다. IL15Rα 스시 도메인은 화살표로 표시되어 있다.
도 5는 1차 T 세포의 표면 상에서의 키메라 막횡단 단백질의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 세트이다. 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것이다.
도 6a는 제시된 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막 단백질 중 1종을 발현하도록 1차 인간 T 세포에 렌티바이러스 벡터를 형질도입하였을 때의 상이한 유형의 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 그래프이다.
도 6b는 활성화 후 제15일에 1차 인간 T 세포에서 상이한 IL7Rα 돌연변이 단백질 및 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 1차 인간 T 세포에서의 PD-1 (좌측 그래프) 또는 CD25 (우측 그래프)의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 2개의 그래프 세트이다.
도 7a는 비형질도입 ("UT") 상태로 남겨지거나 또는 제시된 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막 단백질 중 1종을 코딩하는 렌티바이러스로 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 인산화된 STAT5의 수준을 보여주는 이뮤노블롯이다.
도 7b는 활성화 후 제15일에 1차 인간 T 세포에서의 다양한 IL7Rα 돌연변이 단백질 및 키메라 막횡단 단백질의 발현을 보여주는 2개의 막대 그래프의 세트이다.
도 8a는 1차 T-세포를 공동-감염시키는데 사용된 IL7Rα 돌연변이체 발현 구축물 및 1928z 키메라 항원 수용체 발현 구축물의 개략도를 보여준다.
도 8b는 T-세포 표면에서 EKV 또는 Ins_CPT IL7Rα 돌연변이 단백질, mbIL15-17Rα Ins_PPCL 키메라 막횡단 단백질, 또는 mbIL15 키메라 막횡단 단백질과 공동-발현되는 1928z 키메라 항원 수용체를 다이어그램으로 보여준다.
도 8c는 1차 T 세포의 표면 상에서의 1928z 키메라 항원 수용체, EKV 또는 Ins_CPT IL7Rα 돌연변이 단백질, mbIL15-17Rα Ins_PPCL 키메라 막횡단 단백질, 및 mbIL15 단백질의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 세트이다. 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것이다.
도 8d는 mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL 및 mbIL15를 발현하는 세포의 수가 배양물 중 제6일부터 제14일까지 감소한 반면, IL7Rα_EKV, IL7Rα_Ins_CPT, 및 1928z 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 수는 동일한 기간에 걸쳐 비교적 일정하게 유지되었음을 보여주는 2개의 그래프의 세트이다.
도 9는 다양한 IL7Ra 돌연변이체 및 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 CAR T-세포가 활성화 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지한다는 것을 보여주는 2개의 그래프의 세트이다.
도 10은 비형질도입 상태로 남겨지거나 또는 CAR (1928z)의 존재 및 부재 하에 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막횡단 단백질 중 1종을 코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 인산화된 STAT5 및 STAT3의 수준 및 BCL-XL의 총 단백질 수준을 보여주는 이뮤노블롯의 세트이다.
도 11a는 다양한 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 세포의 확장을 보여주는 선 그래프이고, 도 11b는 Nalm6 표적 세포와 연속 직면한 21일에 걸친 CAR-T 세포의 배수 확장을 보여주는 막대 그래프이고; 도 11a 및 11b는 함께, IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 1:1 비의 이펙터 대 표적 (E:T) 비로 항원에 연속 노출 시 대조군 CAR과 비교하여 우월한 확장을 입증한다는 것을 보여준다.
도 12a는 루시페라제-기반 밤새 사멸 검정에서 CD19+ Nalm6 B-세포의 퍼센트 용해를 보여주는 선 그래프이다.
도 12b는 루시페라제-기반 밤새 사멸 검정에서 CD19- K562 세포의 퍼센트 용해를 보여주는 선 그래프이다.
도 13은 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 항원에의 연속 노출 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지하였음을 보여주는 막대 그래프의 세트이다.
도 14a는 다양한 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 세포의 확장을 보여주는 선 그래프이고, 도 14b는 1:3 E:T 비로의 항원과의 단일 직면 후 21일에 걸친 CAR-T 세포의 배수 확장을 보여주는 막대 그래프이고; 도 14a 및 14b는 함께, IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 표적에의 단일 노출 시 대조군 CAR에 비해 우월한 확장을 입증한다는 것을 보여준다.
도 15는 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 항원에의 단일 노출 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지하였음을 보여주는 막대 그래프의 세트이다.
도 16은 제1일에 0.5 x 106개 Nalm6_luc 세포가 투여되고, 이어서 0.1 x 106개 세포의 비-형질도입된 T 세포, 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RaPPCL을 보유하는 T 세포가 투여된 NOD-SCID IL2R감마널 마우스에서의 시간 경과에 따른 측정된 플럭스 (광자/초)이다. 제시된 데이터는 평균 +/- 표준 편차이다.
도 17은 제1일에 0.5 x 106개 Nalm6_luc 세포가 투여되고, 이어서 0.1 x 106개 세포의 비-형질도입된 T 세포, 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RaPPCL을 보유하는 T 세포가 투여된 NOD-SCID IL2R감마널 마우스에서의 시간 경과에 따른 체중의 변화이다. 제시된 데이터는 평균 +/- 표준 편차이다.
도 18은 비-형질도입된 T 세포, 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RaPPCL을 보유하는 T 세포에서의 pSTAT5a,b, 및 pSTAT3의 상대 평균 형광 강도 (MFI)이다. 평균 형광 강도 데이터를 비-형질도입된 T 세포에서 측정된 평균 형광 강도와 비교한다.
도 19는 시간 경과에 따른 아메리칸 타입 컬쳐 캄파니 (ATCC, 버지니아주 마나사스)로부터의 Hep3B 표적 세포와 공동-배양된 GPC3 CAR 양성 T 세포 및 GPC3 CAR + IL7Ra CPT 양성 T-세포 (0.5 x 106개 Hep3B 표적 세포와 함께 0.5 x 106개 CAR T 세포가 공동-배양됨)의 배수-확장을 보여주는 그래프이다 (실시예 9에 기재된 바와 같음).
도 2는 관련 모티프 및 신호전달 활성화의 메카니즘을 보여주는 IL7Rα의 개략도이다.
도 3은 1차 T 세포의 표면 상에서의 변형된 IL7Rα 단백질의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 세트이다. 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것이다.
도 4는 예시적인 키메라 막횡단 단백질의 개략도이다. 신호전달 활성화의 메카니즘과 함께 관련 모티프가 표시된다. IL15Rα 스시 도메인은 화살표로 표시되어 있다.
도 5는 1차 T 세포의 표면 상에서의 키메라 막횡단 단백질의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 세트이다. 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것이다.
도 6a는 제시된 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막 단백질 중 1종을 발현하도록 1차 인간 T 세포에 렌티바이러스 벡터를 형질도입하였을 때의 상이한 유형의 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 그래프이다.
도 6b는 활성화 후 제15일에 1차 인간 T 세포에서 상이한 IL7Rα 돌연변이 단백질 및 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 1차 인간 T 세포에서의 PD-1 (좌측 그래프) 또는 CD25 (우측 그래프)의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 2개의 그래프 세트이다.
도 7a는 비형질도입 ("UT") 상태로 남겨지거나 또는 제시된 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막 단백질 중 1종을 코딩하는 렌티바이러스로 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 인산화된 STAT5의 수준을 보여주는 이뮤노블롯이다.
도 7b는 활성화 후 제15일에 1차 인간 T 세포에서의 다양한 IL7Rα 돌연변이 단백질 및 키메라 막횡단 단백질의 발현을 보여주는 2개의 막대 그래프의 세트이다.
도 8a는 1차 T-세포를 공동-감염시키는데 사용된 IL7Rα 돌연변이체 발현 구축물 및 1928z 키메라 항원 수용체 발현 구축물의 개략도를 보여준다.
도 8b는 T-세포 표면에서 EKV 또는 Ins_CPT IL7Rα 돌연변이 단백질, mbIL15-17Rα Ins_PPCL 키메라 막횡단 단백질, 또는 mbIL15 키메라 막횡단 단백질과 공동-발현되는 1928z 키메라 항원 수용체를 다이어그램으로 보여준다.
도 8c는 1차 T 세포의 표면 상에서의 1928z 키메라 항원 수용체, EKV 또는 Ins_CPT IL7Rα 돌연변이 단백질, mbIL15-17Rα Ins_PPCL 키메라 막횡단 단백질, 및 mbIL15 단백질의 발현을 보여주는 유동 세포측정 데이터의 세트이다. 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것이다.
도 8d는 mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL 및 mbIL15를 발현하는 세포의 수가 배양물 중 제6일부터 제14일까지 감소한 반면, IL7Rα_EKV, IL7Rα_Ins_CPT, 및 1928z 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 수는 동일한 기간에 걸쳐 비교적 일정하게 유지되었음을 보여주는 2개의 그래프의 세트이다.
도 9는 다양한 IL7Ra 돌연변이체 및 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 CAR T-세포가 활성화 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지한다는 것을 보여주는 2개의 그래프의 세트이다.
도 10은 비형질도입 상태로 남겨지거나 또는 CAR (1928z)의 존재 및 부재 하에 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막횡단 단백질 중 1종을 코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 인산화된 STAT5 및 STAT3의 수준 및 BCL-XL의 총 단백질 수준을 보여주는 이뮤노블롯의 세트이다.
도 11a는 다양한 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 세포의 확장을 보여주는 선 그래프이고, 도 11b는 Nalm6 표적 세포와 연속 직면한 21일에 걸친 CAR-T 세포의 배수 확장을 보여주는 막대 그래프이고; 도 11a 및 11b는 함께, IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 1:1 비의 이펙터 대 표적 (E:T) 비로 항원에 연속 노출 시 대조군 CAR과 비교하여 우월한 확장을 입증한다는 것을 보여준다.
도 12a는 루시페라제-기반 밤새 사멸 검정에서 CD19+ Nalm6 B-세포의 퍼센트 용해를 보여주는 선 그래프이다.
도 12b는 루시페라제-기반 밤새 사멸 검정에서 CD19- K562 세포의 퍼센트 용해를 보여주는 선 그래프이다.
도 13은 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 항원에의 연속 노출 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지하였음을 보여주는 막대 그래프의 세트이다.
도 14a는 다양한 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 세포의 확장을 보여주는 선 그래프이고, 도 14b는 1:3 E:T 비로의 항원과의 단일 직면 후 21일에 걸친 CAR-T 세포의 배수 확장을 보여주는 막대 그래프이고; 도 14a 및 14b는 함께, IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 표적에의 단일 노출 시 대조군 CAR에 비해 우월한 확장을 입증한다는 것을 보여준다.
도 15는 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 항원에의 단일 노출 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지하였음을 보여주는 막대 그래프의 세트이다.
도 16은 제1일에 0.5 x 106개 Nalm6_luc 세포가 투여되고, 이어서 0.1 x 106개 세포의 비-형질도입된 T 세포, 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RaPPCL을 보유하는 T 세포가 투여된 NOD-SCID IL2R감마널 마우스에서의 시간 경과에 따른 측정된 플럭스 (광자/초)이다. 제시된 데이터는 평균 +/- 표준 편차이다.
도 17은 제1일에 0.5 x 106개 Nalm6_luc 세포가 투여되고, 이어서 0.1 x 106개 세포의 비-형질도입된 T 세포, 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RaPPCL을 보유하는 T 세포가 투여된 NOD-SCID IL2R감마널 마우스에서의 시간 경과에 따른 체중의 변화이다. 제시된 데이터는 평균 +/- 표준 편차이다.
도 18은 비-형질도입된 T 세포, 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RaCPT, CD19 CAR + IL7RaMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RaPPCL을 보유하는 T 세포에서의 pSTAT5a,b, 및 pSTAT3의 상대 평균 형광 강도 (MFI)이다. 평균 형광 강도 데이터를 비-형질도입된 T 세포에서 측정된 평균 형광 강도와 비교한다.
도 19는 시간 경과에 따른 아메리칸 타입 컬쳐 캄파니 (ATCC, 버지니아주 마나사스)로부터의 Hep3B 표적 세포와 공동-배양된 GPC3 CAR 양성 T 세포 및 GPC3 CAR + IL7Ra CPT 양성 T-세포 (0.5 x 106개 Hep3B 표적 세포와 함께 0.5 x 106개 CAR T 세포가 공동-배양됨)의 배수-확장을 보여주는 그래프이다 (실시예 9에 기재된 바와 같음).
인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질이 본원에 제공되며, 여기서 막횡단 도메인은 PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것; (ii) 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1에서 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상 (예를 들어, 2, 3 또는 4개)을 갖는다. 대표적인 변형된 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는다.
또한, 세포외 IL-15 도메인, 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인, 및 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 막횡단 단백질이 본원에 제공된다.
또한, 이들 키메라 막횡단 단백질 및 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산, 이들 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터, 및 이들 핵산 또는 벡터 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포가 제공된다. 또한, 암의 치료, 암 세포에서의 세포 사멸 (예를 들어, 아폽토시스 및/또는 괴사)의 유도, 및 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험의 감소를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법, 암 세포에서 세포 사멸 (예를 들어, 아폽토시스 및/또는 괴사)을 유도하는 방법, 및 전이 또는 추가의 전이가 발생할 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 제공된 키메라 막횡단 단백질 및 단백질은 외인성 시토카인 지지체 또는 항원 자극의 부재 하에 CAR T-세포를 유지시키는데 사용될 수 있고, 따라서 시토카인, 예를 들어 가용성 재조합 IL-2의 장기간 투여와 연관된 용량-제한 독성 없이 T-세포 자극 효과를 제공할 수 있다.
본원에 제공된 키메라 막횡단 단백질, 핵산, 벡터, 포유동물 세포, 및 방법의 비제한적 측면이 하기 기재되고, 제한 없이 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 이들 키메라 막횡단 단백질, 핵산, 벡터, 포유동물 세포, 및 방법의 추가의 측면은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질
인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질이 본원에 제공되며, 여기서 막횡단 도메인은 PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 상이한 3개의-아미노산 서열로 대체된 것 (예를 들어, 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것); (ii) 1 내지 3개 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산 (예를 들어, 시스테인-프롤린-트레오닌)이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 1 내지 4개 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개)의 아미노산 (예를 들어, 프롤린-프롤린-시스테인-류신)이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)을 갖는다. 대표적인 변형된 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 서열식별번호: 1 내의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 서열식별번호: 1의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 서열식별번호: 1의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 서열식별번호: 1의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단백질 (예를 들어, 성숙 또는 전구체 단백질)은, 예를 들어, 약 40개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 250개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 또는 약 750개 아미노산 내지 약 800개 아미노산일 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 2 (하기 제시됨)이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 단백질 (서열식별번호: 2) (IL7RA EKA 단백질, EKA 서열은 밑줄표시됨)
IL7RA EKA를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 3, EKA 서열을 코딩하는 핵산 서열은 밑줄표시됨)
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 2와 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 2와 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단백질 중 임의의 것은, 예를 들어 서열식별번호: 2에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1개 아미노산 내지 300개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산)을 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질은 서열식별번호: 2의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여되고/거나 서열식별번호: 2의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 3과 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 3과 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 60개 뉴클레오티드, 1 내지 55개 뉴클레오티드, 1 내지 50개 뉴클레오티드, 1 내지 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 35개 뉴클레오티드, 1 내지 30개 뉴클레오티드, 1 내지 25개 뉴클레오티드, 1 내지 20개 뉴클레오티드, 1 내지 15개 뉴클레오티드, 1 내지 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 5개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 3에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 3의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 3의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 4 (하기 제시됨)이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 단백질 (서열식별번호: 4) (IL7RA EKV 단백질, EKV 서열은 밑줄표시됨)
IL7RA EKV를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 5, EKV 서열을 코딩하는 핵산 서열은 밑줄표시됨)
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 4와 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 4와 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단백질 중 임의의 것은, 예를 들어 서열식별번호: 4에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1개 아미노산 내지 300개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산)을 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질은 서열식별번호: 4의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여되고/거나 서열식별번호: 4의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 5와 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 5와 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 60개 뉴클레오티드, 1 내지 55개 뉴클레오티드, 1 내지 50개 뉴클레오티드, 1 내지 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 35개 뉴클레오티드, 1 내지 30개 뉴클레오티드, 1 내지 25개 뉴클레오티드, 1 내지 20개 뉴클레오티드, 1 내지 15개 뉴클레오티드, 1 내지 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 5개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 5에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 5의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 5의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 6 (하기 제시됨)이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 단백질 (서열식별번호: 6) (IL7RA CPT 삽입 단백질, CPT 서열은 밑줄표시됨)
IL7RA CPT 삽입물을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 7, CPT 서열을 코딩하는 핵산 서열은 밑줄표시됨)
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 6과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 6과 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단백질 중 임의의 것은, 예를 들어 서열식별번호: 6에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1개 아미노산 내지 300개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산)을 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질은 서열식별번호: 6의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여되고/거나 서열식별번호: 6의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 7과 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 7과 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 60개 뉴클레오티드, 1 내지 55개 뉴클레오티드, 1 내지 50개 뉴클레오티드, 1 내지 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 35개 뉴클레오티드, 1 내지 30개 뉴클레오티드, 1 내지 25개 뉴클레오티드, 1 내지 20개 뉴클레오티드, 1 내지 15개 뉴클레오티드, 1 내지 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 5개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 7에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 7의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 7의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 8 (하기 제시됨)이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 단백질 (서열식별번호: 8) (IL7RA PPCL 삽입 단백질, PPCL 서열은 밑줄표시됨)
IL7RA PPCL 삽입물을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 9, PPCL 서열을 코딩하는 핵산 서열은 밑줄표시됨)
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 8과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 8과 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단백질 중 임의의 것은, 예를 들어 서열식별번호: 8에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1개 아미노산 내지 300개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산)을 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질은 서열식별번호: 8의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여되고/거나 서열식별번호: 8의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 9와 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 9와 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 60개 뉴클레오티드, 1 내지 55개 뉴클레오티드, 1 내지 50개 뉴클레오티드, 1 내지 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 35개 뉴클레오티드, 1 내지 30개 뉴클레오티드, 1 내지 25개 뉴클레오티드, 1 내지 20개 뉴클레오티드, 1 내지 15개 뉴클레오티드, 1 내지 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 5개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 9에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 9의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 9의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 79 (하기 제시됨)이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 단백질 (서열식별번호: 79) (IL7RA MCP 삽입 단백질, MCP 서열은 밑줄표시됨)
IL7RA MCP 삽입물을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 80, MCP 서열을 코딩하는 핵산 서열은 밑줄표시됨)
일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 79와 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 서열식별번호: 79와 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단백질 중 임의의 것은, 예를 들어 서열식별번호: 79에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1개 아미노산 내지 300개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산)을 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질은 서열식별번호: 79의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여되고/거나 서열식별번호: 79의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)이 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 80과 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 80과 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 60개 뉴클레오티드, 1 내지 55개 뉴클레오티드, 1 내지 50개 뉴클레오티드, 1 내지 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 35개 뉴클레오티드, 1 내지 30개 뉴클레오티드, 1 내지 25개 뉴클레오티드, 1 내지 20개 뉴클레오티드, 1 내지 15개 뉴클레오티드, 1 내지 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 5개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 80에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 80의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 80의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
본원에 기재된 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 세포내 도메인 중 임의의 것)을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 세포외 도메인 중 임의의 것)을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인과 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 세포외 도메인 중 임의의 것) 사이에 위치하는 링커 서열 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 링커 서열 중 임의의 것)을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인과 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 세포내 도메인 중 임의의 것) 사이에 위치하는 추가의 링커 서열 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 추가의 링커 서열 중 임의의 것)을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 그의 N-말단에 신호 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열은 서열 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (서열식별번호: 10)이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열을 코딩하는 핵산은 서열 atgctcctgctcgtgacttcacttcttctctgtgaactcccacaccccgcgtttttgcttatccct (서열식별번호: 81)이거나 또는 이를 포함한다. 신호 서열의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 신호 서열은 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 또는 약 28개 아미노산 내지 약 30개 아미노산 길이일 수 있다.
일부 실시양태에서, 단백질은 펩티드 태그를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 태그는 키메라 막횡단 단백질의 정제, 생산, 및/또는 확인을 용이하게 하는 것을 돕기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 태그는 적어도 6개의 히스티딘 잔기를 포함하는 히스티딘 태그이다. 태그의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 제공된 단백질 중 임의의 것의 비제한적 측면이 하기에 기재된다.
인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인
본원에 기재된 단백질의 일부 실시양태는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인 (예를 들어, 본원에 기재된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 도메인 중 임의의 것)을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 단백질은 인간, 마우스, 래트, 원숭이, 침팬지, 돼지, 개, 고양이 또는 임의의 다른 적절한 종으로부터의 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인의 비제한적 예는 하기에 기재된다. 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인이거나 또는 이를 포함한다. 예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포외 도메인 (예를 들어, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 15)이거나 또는 이를 포함한다.
인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 예시적인 세포외 도메인 (서열식별번호: 11)
인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 인간 세포외 도메인을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 12)
일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인의 서열 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포외 도메인의 서열, 예를 들어 서열식별번호: 11)과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 서열식별번호: 11과 1 내지 40개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은, 예를 들어 서열식별번호: 11에 더하여, 1 내지 약 250개의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 200개 아미노산, 1 내지 약 150개 아미노산, 1 내지 약 100개 아미노산, 1 내지 약 50개 아미노산, 약 5 내지 약 250개 아미노산, 약 5 내지 약 200개 아미노산, 약 5 내지 약 150개 아미노산, 약 5 내지 약 100개 아미노산, 약 5 내지 약 50개 아미노산, 약 10 내지 약 250개 아미노산, 약 10 내지 약 200개 아미노산, 약 10 내지 약 150개 아미노산, 약 10 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10 내지 약 50개 아미노산)을 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산)이 결실된 것, 및 (ii) 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)이 결실된 것 중 하나 또는 둘 다를 갖는 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포외 도메인의 서열 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포외 도메인의 서열, 예를 들어 서열식별번호: 11)이다.
일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 12와 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 12와 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 55개 뉴클레오티드, 1 내지 50개 뉴클레오티드, 1 내지 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 35개 뉴클레오티드, 1 내지 30개 뉴클레오티드, 1 내지 25개 뉴클레오티드, 1 내지 20개 뉴클레오티드, 1 내지 15개 뉴클레오티드, 1 내지 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 5개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 12에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 12의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 12의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 추가의 예시적인 세포외 도메인이 하기에 제공된다.
인터류킨-7 수용체 이소형 1의 알파 쇄의 예시적인 야생형 마우스 세포외 도메인 (서열식별번호: 13)
인터류킨-7 수용체 이소형 1의 알파 쇄의 야생형 마우스 세포외 도메인을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 14)
인터류킨-7 수용체 이소형 2의 알파 쇄의 예시적인 야생형 마우스 세포외 도메인 (서열식별번호: 15)
인터류킨-7 수용체 변이체 2의 알파 쇄의 야생형 마우스 세포외 도메인을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 16)
일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 아미노산이 제거된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 성숙 야생형 세포외 도메인, 예를 들어 본원에 기재된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 성숙 야생형 세포외 도메인 중 임의의 것, 예를 들어 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 15)의 서열이다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 아미노산이 제거된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 성숙 야생형 세포외 도메인, 예를 들어 본원에 기재된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 성숙 야생형 세포외 도메인 중 임의의 것, 예를 들어 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 15)의 서열이다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 아미노산이 제거되고 또한 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 아미노산이 제거된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 야생형 세포외 도메인 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 성숙 야생형 세포외 도메인, 예를 들어 본원에 기재된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 성숙 야생형 세포외 도메인 중 임의의 것, 예를 들어 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 13, 또는 서열식별번호: 15)의 서열이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 코딩하는 핵산이 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 14, 또는 서열식별번호: 16과 비교하여 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드를 포함하거나 또는 이것이 결여되어 있는 경우에, 넌센스 코돈이 도입되지 않고 전체 단백질이 번역될 수 있도록 번역 리딩 프레임은 여전히 유지되어야 한다 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 코딩하는 핵산은 3개의 뉴클레오티드, 또는 그의 다수를 포함하거나 또는 이것이 결여될 수 있음).
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 상이한 종으로부터의 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인의 1종 이상의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 적다. 대조적으로, 상이한 종으로부터의 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인 사이에 보존된 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인의 1종 이상의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 크다. 이러한 지식을 고려하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인에서 어느 아미노산 위치가 (예를 들어, 비-보존된 아미노산) 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인의 활성을 감소시키지 않으면서 치환될 수 있는지 선택할 수 있다.
키메라 막횡단 단백질
세포외 IL-15 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 세포외 IL-15 도메인 중 임의의 것), 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 예시적인 세포외 스시 도메인 중 임의의 것의 1개 이상), 및 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 막횡단 도메인 중 임의의 것)을 포함하는 키메라 막횡단 단백질이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 세포외 IL-15 도메인과 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인 사이에 위치하는 링커 서열 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 링커 서열 중 임의의 것)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인과 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인 사이에 위치하는 추가의 링커 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 링커 서열 중 임의의 것)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 예시적인 세포내 도메인 중 임의의 것)을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 17 (하기 제시됨)이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 키메라 막횡단 단백질 (서열식별번호: 17)
키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 18)
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 17과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 17과 1 내지 약 100개 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 95개 아미노산, 1 내지 약 90개 아미노산, 1 내지 약 80개 아미노산, 1 내지 약 75개 아미노산, 1 내지 약 70개 아미노산, 1 내지 약 65개 아미노산, 1 내지 약 60개 아미노산, 1 내지 약 55개 아미노산, 1 내지 약 50개 아미노산, 1 내지 약 45개 아미노산, 1 내지 약 40개 아미노산, 1 내지 약 35개 아미노산, 1 내지 약 30개 아미노산, 1 내지 약 25개 아미노산, 1 내지 약 20개 아미노산, 1 내지 약 15개 아미노산, 1 내지 약 10개 아미노산, 1 내지 약 5개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 또는 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은, 예를 들어 서열식별번호: 17의 서열에 더하여, 1 내지 약 300개의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 250개 아미노산, 1 내지 약 200개 아미노산, 1 내지 약 150개 아미노산, 1 내지 약 100개 아미노산, 1 내지 약 50개 아미노산, 1 내지 약 25개 아미노산, 약 5 내지 약 300개 아미노산, 약 5 내지 약 250개 아미노산, 약 5 내지 약 200개 아미노산, 약 5 내지 약 150개 아미노산, 약 5 내지 약 100개 아미노산, 약 5 내지 약 50개 아미노산, 약 10 내지 약 300개 아미노산, 약 10 내지 약 250개 아미노산, 약 10 내지 약 200개 아미노산, 약 10 내지 약 150개 아미노산, 약 10 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10 내지 약 50개 아미노산)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 17의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)이 제거되고/거나 서열식별번호: 17의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)이 제거된 서열식별번호: 17의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 18과 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 18과 1 내지 약 300개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 300개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 250개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 200개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 150개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 100개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 300개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 250개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 200개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 150개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 50개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 18에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 18의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 18의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 19, 83, 85, 87, 또는 89 (하기 제시됨) 중 하나이거나 또는 이를 포함한다.
예시적인 키메라 막횡단 단백질 (서열식별번호: 19)
예시적인 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 20)
예시적인 키메라 막횡단 단백질 (서열식별번호: 83)
예시적인 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 84)
예시적인 키메라 막횡단 단백질 (서열식별번호: 85)
예시적인 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 86)
예시적인 키메라 막횡단 단백질 (서열식별번호: 87)
예시적인 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 88)
예시적인 키메라 막횡단 단백질 (서열식별번호: 89)
예시적인 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 90)
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 19, 83, 85, 87, 또는 89와 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 19, 83, 85, 87, 또는 89와 1 내지 약 100개 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 95개 아미노산, 1 내지 약 90개 아미노산, 1 내지 약 80개 아미노산, 1 내지 약 75개 아미노산, 1 내지 약 70개 아미노산, 1 내지 약 65개 아미노산, 1 내지 약 60개 아미노산, 1 내지 약 55개 아미노산, 1 내지 약 50개 아미노산, 1 내지 약 45개 아미노산, 1 내지 약 40개 아미노산, 1 내지 약 35개 아미노산, 1 내지 약 30개 아미노산, 1 내지 약 25개 아미노산, 1 내지 약 20개 아미노산, 1 내지 약 15개 아미노산, 1 내지 약 10개 아미노산, 1 내지 약 5개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 또는 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은, 예를 들어 서열식별번호: 19, 83, 85, 87, 또는 89의 서열에 더하여, 1 내지 약 300개의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 250개 아미노산, 1 내지 약 200개 아미노산, 1 내지 약 150개 아미노산, 1 내지 약 100개 아미노산, 1 내지 약 50개 아미노산, 1 내지 약 25개 아미노산, 약 5 내지 약 300개 아미노산, 약 5 내지 약 250개 아미노산, 약 5 내지 약 200개 아미노산, 약 5 내지 약 150개 아미노산, 약 5 내지 약 100개 아미노산, 약 5 내지 약 50개 아미노산, 약 10 내지 약 300개 아미노산, 약 10 내지 약 250개 아미노산, 약 10 내지 약 200개 아미노산, 약 10 내지 약 150개 아미노산, 약 10 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 10 내지 약 50개 아미노산)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 서열식별번호: 19, 83, 85, 87, 또는 89의 N-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)이 제거되고/거나 서열식별번호: 19, 83, 85, 87, 또는 89의 C-말단으로부터 1 내지 20개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산)이 제거된 서열식별번호: 19, 83, 85, 97, 또는 89의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 20, 84, 86, 88, 또는 90과 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 20, 84, 86, 88, 또는 90과 1 내지 약 300개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 300개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 250개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 200개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 150개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 100개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 300개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 250개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 200개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 150개 뉴클레오티드, 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 50개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 20, 84, 86, 88, 또는 90에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 900개 뉴클레오티드, 1 내지 약 850개 뉴클레오티드, 1 내지 약 800개 뉴클레오티드, 1 내지 약 750개 뉴클레오티드, 1 내지 약 700개 뉴클레오티드, 1 내지 약 650개 뉴클레오티드, 1 내지 약 600개 뉴클레오티드, 1 내지 약 550개 뉴클레오티드, 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 1 내지 약 450개 뉴클레오티드, 1 내지 약 400개 뉴클레오티드, 1 내지 약 350개 뉴클레오티드, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 20, 84, 86, 88, 또는 90의 5'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여되고/거나 서열식별번호: 20, 84, 86, 88, 또는 90의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질 (예를 들어, 성숙 또는 전구체 단백질)은 약 210개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 520개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 520개 아미노산 내지 약 540개 아미노산, 약 540개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 540개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 540개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 540개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 540개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 540개 아미노산 내지 약 560개 아미노산, 약 560개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 560개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 560개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 560개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 560개 아미노산 내지 약 580개 아미노산, 약 580개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 580개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 580개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 580개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 620개 아미노산, 약 620개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 620개 아미노산 내지 약 640개 아미노산, 또는 약 630개 아미노산 내지 약 650개 아미노산 길이일 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 그의 N-말단에 신호 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열은 MDWTWILFLVAAATRVHS (서열식별번호: 21)의 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열을 코딩하는 핵산은 서열 atggattggacctggattctgtttctggtggccgctgccacaagagtgcacagc (서열식별번호: 91)이거나 이를 포함한다. 신호 서열의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 신호 서열은 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 또는 약 28개 아미노산 내지 약 30개 아미노산 길이일 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 펩티드 태그를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 태그는 키메라 막횡단 단백질의 정제, 생산, 및/또는 확인을 용이하게 하는 것을 돕기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 태그는 적어도 6개의 히스티딘 잔기를 포함하는 히스티딘 태그이다. 태그의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 제공된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 비제한적 측면이 하기에 기재된다.
세포외 IL-15 도메인
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은 야생형 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 IL-15 단백질)의 서열이거나 또는 이를 포함한다. 예를 들어, 야생형 IL-15 단백질은 야생형 인간 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 인간 IL-2 단백질), 야생형 마우스 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 마우스 IL-15 단백질), 야생형 침팬지 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 침팬지 IL-15 단백질), 또는 야생형 원숭이 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 원숭이 IL-15 단백질)일 수 있다. 야생형 IL-15 단백질 서열 및 이들 예시적인 IL-15 단백질 서열을 코딩하는 핵산의 비제한적 예가 하기에 제공된다.
예시적인 인간 IL-15 이소형 1 (서열식별번호: 22)
인간 IL-15 이소형 1을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 23)
예시적인 인간 IL-15 이소형 2 (서열식별번호: 24)
인간 IL-15 이소형 2를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 25)
예시적인 마우스 IL-15 변이체 A (서열식별번호: 26)
마우스 IL-15 변이체 A를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 27)
예시적인 마우스 IL-15 변이체 B (서열식별번호: 28)
마우스 IL-15 변이체 B를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 29)
일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은 야생형 IL-15 단백질 (예를 들어, 야생형 성숙 IL-15 단백질, 예를 들어, 서열식별번호: 22, 24, 26, 또는 28)과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 85%이상, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은 서열식별번호: 22, 24, 26, 또는 28과 1 내지 25개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은, 예를 들어 서열식별번호: 22, 24, 26, 또는 28의 서열에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 100개 아미노산, 1 내지 약 80개 아미노산, 1 내지 약 60개 아미노산, 1 내지 약 40개 아미노산, 1 내지 약 20개 아미노산, 1 내지 약 10개 아미노산, 약 5 내지 약 100개 아미노산, 약 5 내지 약 80개 아미노산, 약 5 내지 약 60개 아미노산, 약 5 내지 약 40개 아미노산, 약 5 내지 약 20개 아미노산, 약 10 내지 약 100개 아미노산, 약 10 내지 약 80개 아미노산, 약 10 내지 약 60개 아미노산, 약 10 내지 약 40개 아미노산, 또는 약 10 내지 약 20개 아미노산)을 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 세포외 IL-15 도메인은 서열식별번호: 22, 24, 26, 또는 28의 서열과 비교하여 1 내지 약 25개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산)이 결여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 23, 25, 27, 또는 29와 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 23, 25, 27 또는 29와 1 내지 약 75개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 70개 뉴클레오티드, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 75개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 70개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 60개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 40개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 30개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 20개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 10개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인을 코딩하는 핵산은, 예를 들어 서열식별번호: 23, 25, 27 또는 29의 서열에 더하여, 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 300개 뉴클레오티드, 1 내지 약 250개 뉴클레오티드, 1 내지 약 200개 뉴클레오티드, 1 내지 약 150개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 300개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 250개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 200개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 150개 뉴클레오티드, 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 100개 뉴클레오티드, 또는 약 5개 뉴클레오티드 내지 약 50개 뉴클레오티드)를 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 세포외 IL-15 도메인을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 23, 25, 27 또는 29의 5'-말단으로부터 1 내지 75개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 70개 뉴클레오티드, 1 내지 약 65개 뉴클레오티드, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있고/거나 서열식별번호: 23, 25, 27 또는 29의 3'-말단으로부터 1 내지 60개 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 55개 뉴클레오티드, 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 1 내지 약 45개 뉴클레오티드, 1 내지 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 35개 뉴클레오티드, 1 내지 약 30개 뉴클레오티드, 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 1 내지 약 15개 뉴클레오티드, 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 또는 1 내지 약 5개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 상이한 종으로부터의 야생형 IL-15 단백질 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-15 단백질의 1종 이상의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 적다. 대조적으로, 상이한 종으로부터의 야생형 IL-15 단백질 사이에 보존된 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-15 단백질의 1종 이상의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 크다. 이러한 지식을 고려하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 야생형 IL-15 단백질에서 어느 아미노산 위치가 (예를 들어, 비-보존된 아미노산) IL-15 단백질의 활성을 감소시키지 않으면서 치환될 수 있는지 선택할 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은 야생형 IL-15 단백질의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거된 야생형 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 IL-15 단백질, 예를 들어, 본원에 기재된 성숙 야생형 IL-15 단백질 중 임의의 것, 예를 들어 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 26, 또는 서열식별번호: 28)의 서열이다. 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은 야생형 IL-15 단백질의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거된 야생형 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 IL-15 단백질, 예를 들어, 본원에 기재된 성숙 야생형 IL-15 단백질 중 임의의 것, 예를 들어 성숙 야생형 인간 IL-15 단백질, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 26, 또는 서열식별번호: 28)의 서열이다. 일부 실시양태에서, 세포외 IL-15 도메인은 야생형 IL-15 단백질의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거되고 또한 야생형 IL-15 단백질의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거된 야생형 IL-15 단백질 (예를 들어, 성숙 야생형 IL-15 단백질, 예를 들어, 본원에 기재된 성숙 야생형 IL-15 단백질 중 임의의 것, 예를 들어 성숙 야생형 인간 IL-15 단백질, 예를 들어 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 26, 또는 서열식별번호: 28)의 서열이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 세포외 IL-15 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산이 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 27, 또는 서열식별번호: 29와 비교하여 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드를 포함하거나 또는 이것이 결여되어 있는 경우에, 넌센스 코돈이 도입되지 않고 전체 단백질이 번역될 수 있도록 번역 리딩 프레임은 여전히 유지되어야 한다 (예를 들어, 세포외 IL-15 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 키메라 막횡단 단백질의 세포외 IL-15 부분 내에 3개의 뉴클레오티드, 또는 그의 다수를 포함하거나 또는 이것이 결여될 수 있음).
IL-7 수용체의 알파 쇄
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질의 일부 실시양태는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 서열, 또는 그의 부분을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질은 인간, 마우스, 래트, 원숭이, 침팬지, 돼지, 개, 고양이, 또는 임의의 다른 적절한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 서열, 또는 그의 부분을 포함할 수 있다. IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 비제한적 예는 하기에 기재된다. IL-7 수용체의 알파 쇄의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 서열, 또는 그의 부분을 포함하는 키메라 막횡단 단백질은 IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 본원에 기재된 IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인 중 임의의 것)을 포함한다.
예시적인 야생형 인간 IL-7 수용체 알파 쇄 (서열식별번호: 30)
야생형 인간 IL-7 수용체 알파 쇄를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 31)
예시적인 야생형 마우스 IL-7 수용체 알파 쇄 변이체 1 (서열식별번호: 32)
야생형 마우스 IL-7 수용체 알파 쇄 변이체 1을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 33)
예시적인 야생형 마우스 IL-7 수용체 알파 쇄 변이체 2 (서열식별번호: 34)
마우스 IL-7 수용체 알파 쇄 변이체 2를 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 35)
본원에 제공된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는, 예를 들어 서열식별번호: 30, 32 또는 34와 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열, 또는 그의 부분을 포함할 수 있다. 본원에 제공된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는, 예를 들어 서열식별번호: 30, 32 또는 34와 1 내지 60개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60개 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는, 예를 들어 1 내지 60개 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60개 아미노산)이 결여됨으로써 서열식별번호: 30, 32 또는 34와 상이한 서열을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄를 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 31, 33, 또는 35와 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄를 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 31, 33, 또는 35와 1개 이상의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 180개 뉴클레오티드, 1 내지 약 160개 뉴클레오티드, 1 내지 약 140개 뉴클레오티드, 1 내지 약 120개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 1 내지 약 80개 뉴클레오티드, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 180개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 180개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 160개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 160개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 140개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 120개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 100개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 80개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 60개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 40개 뉴클레오티드, 또는 약 5 내지 약 20개 뉴클레오티드)만큼 상이한 서열을 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, IL-7 수용체의 알파 쇄를 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 31, 33, 또는 35의 서열과 비교하여 1개 이상의 뉴클레오티드 (예를 들어, 1 내지 약 180개 뉴클레오티드, 1 내지 약 160개 뉴클레오티드, 1 내지 약 140개 뉴클레오티드, 1 내지 약 120개 뉴클레오티드, 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 1 내지 약 80개 뉴클레오티드, 1 내지 약 60개 뉴클레오티드, 1 내지 약 40개 뉴클레오티드, 1 내지 약 20개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 180개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 180개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 160개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 160개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 140개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 120개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 100개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 80개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 60개 뉴클레오티드, 약 5 내지 약 40개 뉴클레오티드, 또는 약 5 내지 약 20개 뉴클레오티드)가 결여될 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 상이한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 1종 이상의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 적다. 대조적으로, 상이한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 야생형 알파 쇄 사이에 보존된 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 알파 쇄의 1종 이상의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 크다. 이러한 지식을 고려하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 야생형 알파 쇄에서 어느 아미노산 위치가 (예를 들어, 비-보존된 아미노산) IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 알파 쇄의 활성을 감소시키지 않으면서 치환될 수 있는지 선택할 수 있다.
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, IL-7 수용체 단백질의 성숙 야생형 알파 쇄, 예를 들어 본원에 기재된 IL-7 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄 중 임의의 것, 예를 들어 IL-7 수용체 단백질의 성숙 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 30)의 서열을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, IL-7 수용체 단백질의 성숙 야생형 알파 쇄, 예를 들어 본원에 기재된 IL-7 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄 중 임의의 것, 예를 들어 IL-7 수용체 단백질의 성숙 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 30)의 서열을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태는 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거되고 또한 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 10개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, IL-7 수용체 단백질의 성숙 야생형 알파 쇄, 예를 들어 본원에 기재된 IL-7 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄 중 임의의 것, 예를 들어 IL-7 수용체 단백질의 성숙 야생형 인간 알파 쇄, 예를 들어 서열식별번호: 30)의 서열을 포함할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, IL-7 수용체 단백질 도메인의 알파 쇄를 갖는 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산이 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 33, 또는 서열식별번호: 35와 비교하여 1개 이상의 추가의 뉴클레오티드를 포함하거나 또는 이것이 결여되어 있는 경우에, 넌센스 코돈이 도입되지 않고 전체 단백질이 번역될 수 있도록 번역 리딩 프레임은 여전히 유지되어야 한다 (예를 들어, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄를 코딩하는 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산은 IL-7 수용체의 알파 쇄를 코딩하는 도메인 내에 3개의 뉴클레오티드, 또는 그의 다수를 포함하거나 또는 이것이 결여될 수 있음).
IL-15 수용체의 알파 쇄의 세포외 스시 도메인
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 키메라 막횡단 수용체는 IL-15 수용체의 알파 쇄로부터의 1개 이상 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)의 스시 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질은 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄 (예를 들어, IL-15 수용체의 야생형 인간 알파 쇄, IL-15 수용체의 야생형 마우스 알파 쇄, IL-15 수용체의 야생형 래트 알파 쇄, IL-15 수용체의 야생형 원숭이 알파 쇄, IL-15 수용체의 야생형 침팬지 알파 쇄, IL-15 수용체의 야생형 돼지 알파 쇄, IL-15 수용체의 야생형 개 알파 쇄, 또는 IL-15 수용체의 야생형 고양이 알파 쇄)로부터의 스시 도메인을 포함할 수 있다. IL-15 수용체로부터의 스시 도메인의 비제한적 예는 하기에 기재된다. IL-15 수용체로부터의 스시 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
짧은 컨센서스 반복부 또는 유형 1 당단백질 모티프로도 공지되어 있는 스시 도메인은 단백질-단백질 상호작용에서의 공통 모티프이다. 스시 도메인은 보체 성분 C1r, C1s, 인자 H, 및 C2m, 뿐만 아니라 비면역학적 분자 인자 XIII 및 β2-당단백질을 포함한 다수의 단백질-결합 분자 상에서 확인되었다. 전형적인 스시 도메인은 대략 60개의 아미노산 잔기를 갖고 4개의 시스테인을 함유한다 (Ranganathan, Pac. Symp Biocomput. 2000:155-67). 제1 시스테인은 제3 시스테인과 디술피드 결합을 형성할 수 있고, 제2 시스테인은 제4 시스테인과 디술피드 가교를 형성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 스시 도메인은 약 25개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 또는 약 85개 아미노산 내지 약 90개 아미노산 길이일 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-2 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄, 예를 들어 IL-2 수용체의 성숙 야생형 인간 알파 쇄의 세포외 부분, 예를 들어 서열식별번호: 36 또는 37과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다.
IL-15 이소형 1의 야생형 인간 알파 쇄로부터의 스시 도메인 (서열식별번호: 36)
IL-15 이소형 2의 야생형 인간 알파 쇄로부터의 스시 도메인 (서열식별번호: 37)
IL-15 이소형 1의 야생형 마우스 알파 쇄로부터의 스시 도메인 (서열식별번호: 38)
IL-15 이소형 4의 야생형 마우스 알파 쇄로부터의 스시 도메인 (서열식별번호: 39)
IL-15 단백질의 야생형 닭 알파 쇄로부터의 스시 도메인 (서열식별번호: 40)
IL-15 이소형 1의 야생형 인간 알파 쇄로부터의 세포외 부분 (서열식별번호: 41)
일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분 (예를 들어, IL-15 수용체의 성숙 야생형 인간 알파 쇄의 세포외 부분, 예를 들어 서열식별번호: 41)이다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분 (예를 들어, 서열식별번호: 41)과 적어도 80%, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열이다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 20개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)의 아미노산이 제거된 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 41)이다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 20개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)의 아미노산이 제거된 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 41)이다. 일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열의 N-말단으로부터 1 내지 20개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)의 아미노산이 제거되고 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열의 C-말단으로부터 1 내지 20개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)의 아미노산이 제거된 IL-15 수용체의 성숙 야생형 알파 쇄의 세포외 부분의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 41)이다.
일부 실시양태에서, 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 야생형 알파-쇄로부터의 스시 도메인의 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 IL-15 수용체의 야생형 알파-쇄로부터의 스시 도메인 중 임의의 것, 예를 들어 IL-15 수용체의 야생형 인간 알파-쇄로부터의 스시 도메인, 예를 들어 서열식별번호: 36 또는 37 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 서열)이거나 또는 이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질의 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄의 스시 도메인 (예를 들어, 서열식별번호: 36, 37, 38, 39, 또는 40)과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 상이한 종으로부터의 IL-15 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-15 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 IL-15 결합 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 적다. 대조적으로, 상이한 종으로부터의 IL-15 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인 사이에 보존된 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-15 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 IL-15 결합 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 크다. 이러한 지식을 고려하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 IL-15 수용체 단백질의 알파 쇄의 스시 도메인에서 어느 아미노산 위치가 (예를 들어, 비-보존된 아미노산) IL-15 수용체 단백질의 알파 쇄의 스시 도메인의 활성을 감소시키지 않으면서 치환될 수 있는지 선택할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질의 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 N-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거된 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 36, 37, 38, 39, 또는 40 중 임의의 것)이다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질의 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 C-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거된 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 36, 37, 38, 39, 또는 40 중 임의의 것)이다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질의 세포외 스시 도메인은 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 N-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거되고 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 C-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거된 IL-15 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 스시 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 36, 37, 38, 39, 또는 40 중 임의의 것)이다.
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 2개의 스시 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 스시 도메인은 독립적으로 본원에 기재된 스시 도메인 중 임의의 것일 수 있다.
IL-7 수용체의 알파-쇄의 막횡단 도메인
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질은 인간, 마우스, 래트, 원숭이, 침팬지, 돼지, 개, 고양이, 또는 임의의 다른 적절한 종으로부터의 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함할 수 있다. IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인의 비제한적 예는 하기에 기재된다. IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
IL-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 막횡단 도메인 (서열식별번호: 1)
IL-7 수용체 이소형 1의 야생형 마우스 알파 쇄의 막횡단 도메인 (서열식별번호: 42)
IL-7 수용체 이소형 2의 야생형 마우스 알파 쇄의 막횡단 도메인 (서열식별번호: 42)
IL-7 수용체의 야생형 마카카 파시쿨라리스 알파 쇄의 막횡단 도메인 (서열식별번호: 44)
일부 실시양태에서, IL-2 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인은 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 또는 약 45개 아미노산 내지 약 50개 아미노산 길이일 수 있다.
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인 (예를 들어, IL-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 막횡단 도메인, 예를 들어 서열식별번호: 1) (예를 들어, 하기 열거되거나 관련 기술분야에 공지된 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 예시적인 막횡단 도메인 중 임의의 것, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44)일 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인 (예를 들어, 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44 중 어느 하나)과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44 중 어느 하나)과 1 내지 5개의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인은, 예를 들어 서열식별번호: 1, 42, 43 또는 44의 서열에 더하여, 1 또는 20개의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산)을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44 중 어느 하나의 서열을 가질 수 있지만, 1 내지 5개의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산)이 결여될 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 상이한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 적다. 대조적으로, 상이한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 크다. 이러한 지식을 고려하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인에서 어느 아미노산 위치가 (예를 들어, 비-보존된 아미노산) IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 막횡단 도메인의 활성을 감소시키지 않으면서 치환될 수 있는지 선택할 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인의 N-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44)이다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인의 C-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44)이다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인의 N-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거되고 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 막횡단 도메인의 C-말단으로부터 1 내지 5개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 막횡단 도메인 (예를 들어, IL-7 수용체 단백질의 야생형 인간 알파 쇄의 막횡단 도메인, 예를 들어 서열식별번호: 1, 42, 43, 또는 44)의 서열이다.
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인은 PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하며 하기 변형: (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 상이한 3개의-아미노산 서열로 대체된 것 (예를 들어, 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 것); (ii) 1 내지 3개 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산 (예를 들어, 시스테인-프롤린-트레오닌)이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 것; 및 (iii) 1 내지 4개 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개)의 아미노산 (예를 들어, 프롤린-프롤린-시스테인-류신)이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 것 중 1개 이상 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)을 갖는다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖도록 변형된다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 서열식별번호: 1 내의 아미노산 위치 15 내지 17의 알라닌-류신-류신이 글루탐산-리신-발린 또는 글루탐산-리신-알라닌으로 대체된 서열식별번호: 1의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 시스테인-프롤린-트레오닌이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 5와 6 사이에 삽입된 서열식별번호: 1의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 프롤린-프롤린-시스테인-류신이 서열식별번호: 1의 아미노산 위치 4와 5 사이에 삽입된 서열식별번호: 1의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖도록 변형된다.
IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질의 일부 실시양태는 IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인 또는 그의 부분을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질은 인간, 마우스, 래트, 원숭이, 침팬지, 돼지, 개, 고양이, 또는 임의의 다른 적절한 종으로부터의 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인을 포함할 수 있다. IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인의 비제한적 예는 하기에 기재된다. IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄 (예를 들어, 본원에 기재된 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄 중 임의의 것)의 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인은 약 100개 아미노산 내지 약 225개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 225개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 225개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 225개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 225개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 또는 약 200개 아미노산 내지 약 225개 아미노산 길이일 수 있다.
본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것은 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인 (예를 들어, 인터류킨-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포내 도메인, 예를 들어 서열식별번호: 45) (예를 들어, 서열식별번호: 46의 인터류킨-7의 야생형 인간 알파 쇄의 세포내 도메인)을 포함할 수 있다.
IL-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포내 도메인 (서열식별번호: 45, BOX1 모티프는 밑줄표시되고, 인산화된 티로신은 큰 볼드체로 표시됨)
IL-7 수용체의 야생형 인간 알파 쇄의 세포내 도메인을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 82, BOX1 모티프를 코딩하는 핵산 서열은 밑줄표시됨)
IL-7 수용체 이소형 1의 야생형 마우스 알파 쇄의 세포내 도메인 (서열식별번호: 46)
일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인은 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인 (예를 들어, 서열식별번호: 45 또는 46)과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인은 IL-7 수용체의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 45 또는 46)과 1 내지 40개의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40개의 아미노산)만큼 상이한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인은, 예를 들어 서열식별번호: 45 또는 46의 서열에 더하여, 1개 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 1 내지 약 100개 아미노산, 1 내지 약 95개 아미노산, 1 내지 약 90개 아미노산, 1 내지 약 85개 아미노산, 1 내지 약 80개 아미노산, 1 내지 약 75개 아미노산, 1 내지 약 70개 아미노산, 1 내지 약 65개 아미노산, 1 내지 약 60개 아미노산, 1 내지 약 55개 아미노산 1 내지 약 50개 아미노산, 1 내지 약 45개 아미노산, 1 내지 약 40개 아미노산, 1 내지 약 35개 아미노산, 1 내지 약 30개 아미노산, 1 내지 약 25개 아미노산, 1 내지 약 20개 아미노산, 1 내지 약 15개 아미노산, 1 내지 약 10개 아미노산, 또는 1 내지 약 5개 아미노산)을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인은 서열식별번호: 45 또는 46 중 어느 하나의 서열을 가질 수 있지만, 1 내지 40개의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개의 아미노산)이 결여될 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 상이한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄로부터의 세포내 도메인 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 세포내 도메인의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 적다. 대조적으로, 상이한 종으로부터의 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄로부터의 세포내 도메인 사이에 보존되지 않은 아미노산이 돌연변이된 (예를 들어, 상이한 아미노산으로 치환된) 경우에, 이는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 세포내 도메인의 활성 수준의 감소를 유발할 가능성이 크다. 이러한 지식을 고려하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인에서 어느 아미노산 위치가 (예를 들어, 비-보존된 아미노산) IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄로부터의 세포내 도메인의 활성을 감소시키지 않으면서 치환될 수 있는지 선택할 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인은 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인의 N-말단으로부터 1 내지 3개 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 45 또는 46)이다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인은 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인의 C-말단으로부터 1 내지 3개 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 45 또는 46)이다. 일부 실시양태에서, IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인은 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인의 N-말단으로부터 1 내지 3개 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산이 제거되고 IL-7 수용체 단백질의 알파 쇄의 세포내 도메인의 C-말단으로부터 1 내지 3개 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산이 제거된 IL-7 수용체 단백질의 야생형 알파 쇄의 세포내 도메인의 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 45 또는 46)이다.
링커 서열
일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 세포외 IL-15 도메인과 세포외 스시 도메인 사이에 위치하는 링커 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 단백질은 세포외 스시 도메인과 IL-15 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인 사이에 위치하는 추가의 링커 서열을 포함한다. 키메라 막횡단 단백질이 링커 서열 및 추가의 링커 서열을 포함하는 경우에, 각각의 링커 서열은 서로 동일하거나 서로 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 또는 추가의 링커 서열은 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 6개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 4개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 3개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 6개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 4개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 6개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 24개 아미노산 내지 약 26개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 26개 아미노산 내지 약 28개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 28개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 32개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 32개 아미노산 내지 약 34개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 34개 아미노산 내지 약 36개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 36개 아미노산 내지 약 38개 아미노산, 약 38개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 38개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 38개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 38개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 38개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 38개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 42개 아미노산, 약 42개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 42개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 42개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 42개 아미노산 내지 약 44개 아미노산, 약 44개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 44개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 약 44개 아미노산 내지 약 46개 아미노산, 약 46개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 46개 아미노산 내지 약 48개 아미노산, 또는 약 48개 아미노산 내지 약 50개 아미노산이다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 (SG)n의 서열을 포함하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25일 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 (GS)n의 서열을 포함하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25일 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 (SGGS)n [SGGS = 서열식별번호: 47]의 서열을 포함하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13일 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 (SGGGS)n [SGGGS = 서열식별번호: 48]의 서열을 포함하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10일 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 (SGGGGS)n [SGGGGS = 서열식별번호: 49]의 서열을 포함하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9일 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 SGGGGSGGGGSGGGG(서열식별번호: 50)의 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 ASTKGPSVFPLAPSSSGSG (서열식별번호: 51)의 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 GGGGSGGGGSGGGGS (서열식별번호: 52)의 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 GGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGS (서열식별번호: 53)의 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ (서열식별번호: 92)의 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 위틀로 링커일 수 있다. 일부 실시양태에서, 위틀로 링커는 GSTSGSGKPGSGEGSTKG (서열식별번호: 54)의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 위틀로 링커 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 ggcagcaccagcggcagcggcaaaccgggcagcggcgaaggcagcaccaaaggc (서열식별번호: 55)이다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 (G4S)5 링커일 수 있다. 일부 실시양태에서, (G4S)5 링커는 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열식별번호: 56)의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (G4S)5 링커 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 ggcggtggtggttctggaggcggtggcagcggtggaggtggctcaggaggaggaggtagcggcggcggagggagt (서열식별번호: 57)이다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 CH1, CH2, 및 CH3 도메인 중 1종 이상일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 CH2-CH3 인간 IgG1 도메인일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, CH2-CH3 인간 IgG1 도메인은 하기 서열을 갖는다:
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 인간 CD8 막횡단 도메인에 가까운 인간 CD8 세포외 서열의 부분일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (서열식별번호: 59)의 인간 CD8 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 인간 IgG1 힌지 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG1 힌지 서열은 AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (서열식별번호: 60)이다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 알파 나선 구조를 갖는다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 코일드 코일 도메인이다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 자연 발생 아미노산 서열이다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 자연 발생 아미노산 서열이 아니다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 서열식별번호: 92의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 및/또는 추가의 링커 서열은 서열식별번호: 92의 서열로 이루어진다. 링커의 추가의 측면 및 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
키메라 항원 수용체
키메라 항원 수용체 (CAR)는 세포외 항원-결합 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 항원-결합 도메인 중 임의의 것), 막횡단 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 막횡단 도메인 중 임의의 것), 공동자극 도메인 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 공동자극 도메인 중 임의의 것), 및 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 단백질이다. 일부 실시양태에서, CAR은 추가의 서열, 예컨대 비제한적으로, 세포외 줄기 서열 (예를 들어, CD28 줄기 서열)을 포함한다. 세포외 줄기 서열 (예를 들어, CD28 줄기 서열)을 포함하는 CAR의 일부 실시양태에서, 줄기 서열은 막횡단 도메인과 공말단이다. 세포외 줄기 서열 (예를 들어, CD28 줄기 서열)을 포함하는 CAR의 일부 실시양태에서, 세포외 줄기 서열은 막횡단 도메인과 동일한 단백질로부터의 것이다. 세포외 줄기 서열 (예를 들어, CD28 줄기 서열)을 포함하는 CAR의 일부 실시양태에서, 세포외 줄기 서열은 막횡단 도메인과 상이한 단백질로부터의 것이다. 키메라 항원 수용체의 비제한적 측면은, 예를 들어 문헌 [Kershaw et al., Nature Reviews Immunol. 5(12):928-940, 2005; Eshhar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(2):720-724, 1993; Sadelain et al., Curr. Opin. Immunol. 21(2): 215-223, 2009]; WO 2015/142675; WO 2015/150526; 및 WO 2014/134165에 기재되어 있고, 그의 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4 또는 5개)의 공동자극 도메인(들) (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 공동자극 도메인 중 임의의 것의 임의의 조합)을 포함할 수 있다. 이들 키메라 항원 수용체의 일부 실시양태는 4-1BB 공동자극 도메인 및 CD28 공동자극 도메인 중 하나 또는 둘 다를 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 또는 5개)의 ITAM (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 ITAM 중 임의의 것)을 포함할 수 있다. 이들 키메라 항원 수용체의 일부 실시양태에서, ITAM은 CD3ζ (예를 들어, 인간 CD3ζ)로부터의 세포질 신호전달 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포외 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 1개 이상의 아미노산은 막횡단 도메인이 유래된 것과 동일한 내인성 단일쇄 폴리펩티드로부터의 서열이다. 일부 실시양태에서, 세포외 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 1개 이상의 아미노산은 항체, 예컨대 비제한적으로, 인간 항체 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 힌지 영역 서열이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 1개 이상의 아미노산은 링커 서열 (예를 들어, 비-자연 발생 링커 서열, 예를 들어 GS 또는 본원에 기재된 다른 링커 서열 중 임의의 것)이거나 또는 이를 포함한다.
본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 예에서, N-말단에서 C-말단 방향으로, CAR의 세포내 부분은 공동-자극 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 예에서, N-말단에서 C-말단 방향으로, CAR의 세포내 부분은 세포내 신호전달 도메인 및 공동-자극 도메인을 포함한다.
본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 예에서, C-말단에서 N-말단 방향으로, CAR의 세포내 부분은 공동-자극 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 예에서, C-말단에서 N-말단 방향으로, CAR의 세포내 부분은 세포내 신호전달 도메인 및 공동-자극 도메인을 포함한다.
본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 CD28, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD6, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, 4-1BB, 또는 CD154의 막횡단 도메인이거나 또는 이를 포함한다. 막횡단 도메인의 추가의 예 및 측면이 본원에 기재된다.
본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 공동-자극 도메인은 4-1BB, CD28, CD2, CD4 또는 CD8의 공동-자극 도메인이거나 또는 이를 포함한다. 공동-자극 도메인의 추가의 예 및 측면은 본원에 기재된다.
본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, CAR은 CAR 전구체로부터 생성되고, CAR 전구체는 CAR을 세포막으로 표적화하기 위한 신호 펩티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR 신호 펩티드는 서열식별번호: 93이거나 또는 이를 포함한다:
예시적인 CAR 신호 서열 펩티드 (서열식별번호: 93)
예시적인 CAR 신호 서열 펩티드를 코딩하는 예시적인 핵산 서열 (서열식별번호: 94)
일부 실시양태에서, CAR 신호 펩티드는 서열식별번호: 93의 폴리펩티드 서열과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR 신호 펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호: 94의 핵산 서열과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 KD 값을 결정하는데 사용될 수 있는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 전기영동 이동성 변화 검정, 필터 결합 검정, 표면 플라즈몬 공명, 및 생체분자 결합 동역학 검정 등).
본원에 기재된 키메라 항원 수용체 중 임의의 것의 일부 실시양태는 이량체화 도메인 및/또는 펩티드 태그를 추가로 포함할 수 있다.
항원-결합 도메인
키메라 항원 수용체의 일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인은 scFv, scFv-Fc, VHH 도메인, VNAR 도메인, (scFv)2, 및 BiTE로부터 선택될 수 있다. 본원에 기재된 키메라 항원 수용체와 함께 사용될 수 있는 항원-결합 도메인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
단일쇄 Fv 또는 scFv 단편은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. VH 및 VL은 일반적으로 펩티드 링커에 의해 연결된다. 다른 예에서, 링커는 단일 아미노산일 수 있다. 일부 예에서, 링커는 화학 결합일 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Pluckthun, Antibodies from E. coli. In Rosenberg M. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, pp. 269-315, Spinger-Verlag, New York, 1994]을 참조한다.
scFv-Fc 단편은 Fc 도메인에 부착된 scFv를 포함한다. 예를 들어, Fc 도메인은 예를 들어 scFv의 C-말단에 부착될 수 있다. Fc 도메인은 scFv에서 가변 도메인의 배향에 따라 VL 또는 VH에 후속할 수 있다. Fc 도메인은 관련 기술분야에 공지된 임의의 Fc 도메인일 수 있다. 일부 예에서, Fc 도메인은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 Fc 도메인 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 Fc 도메인)이다.
BiTE는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 각각 결합할 수 있거나 상이한 항원에 각각 결합할 수 있는 2개의 scFv를 함께 형성하는, 단일 폴리펩티드 내에 2개의 VL 및 2개의 VH를 포함하는 항원-결합 도메인이다. 예를 들어, 문헌 [Baeuerle et al., Curr. Opin. Mol. Ther. 11:22-30, 2009; Wolf et al., Drug Discovery Today 10:1237-1244, 2005; 및 Huehls et al., Immunol. Cell Biol. 93:290-296, 2015]을 참조한다.
VHH 도메인은 낙타류에서 발견되는 단일 단량체 가변 항체 도메인이고, VNAR 도메인은 연골 어류에서 발견되는 단일 단량체 가변 항체 도메인이다. VHH 도메인 및 VNAR 도메인은, 예를 들어 문헌 [Van Audenhove et al., EBioMedicine 8:40-48, 2016; Krah et al., Immunopharmacol. Immunotoxicol. 38:21-28, 2016; Cromie et al., Curr. Top. Med. Chem. 15:2543-2557, 2016; Kijanka et al., Nanomedicine 10:161-174, 2015; Kovaleva et al., Expert. Opin. Biol. Ther. 14:1527-1539, 2014; De Meyer et al., Trends Biotechnol. 32:263-270, 2014; Mujic-Delic et al., Trends Pharmacol. Sci. 35:247-255, 2014; Muyldermans, Ann. Rev. Biochem. 82:775-797, 2013; Vincke et al., Methods Mol. Biol. 911:15-26, 2012; Rahbarizadeh et al., Immunol. Invest. 40:299-338, 2011; Van Bockstaele et al., Curr. Opin. Investig. Drugs 10:1212-1224, 2009; Wesolowski et al., Med. Microbiol. Immunol. 198:157-174, 2009; De Genst et al., Dev. Comp. Immunol. 30:187-198, 2006; Muyldermans, J. Biotechnol. 74:277-302, 2001; 및 Muyldermans et al., Trends Biochem. Sci. 26:230-235, 2001]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열식별번호: 95이거나 또는 이를 포함하는 서열이다:
예시적인 항-CD19 항원 결합 도메인 (서열식별번호: 95)
예시적인 항-CD19 항원 결합 도메인을 코딩하는 핵산 (서열식별번호: 96)
일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 서열식별번호: 95의 폴리펩티드 서열과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인을 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호: 96의 핵산 서열과 적어도 60% 동일한, 적어도 65% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 85%, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본원에 기재된 항원-결합 도메인 중 임의의 것은 1 x 10-7 M 미만, 1 x 10-8 M 미만, 1 x 10-9 M 미만, 1 x 10-10 M 미만, 1 x 10-11 M 미만, 1 x 10-12 M 미만, 또는 1 x 10-13 M 미만의 해리 평형 상수 (KD)로 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항원-결합 단백질 복합체는 약 1 x 10-4 M 내지 약 1 x 10-6 M, 약 1 x 10-5 M 내지 약 1 x 10-7 M, 약 1 x 10-6 M 내지 약 1 x 10-8 M, 약 1 x 10-7 M 내지 약 1 x 10-9 M, 약 1 x 10-8 M 내지 약 1 x 10-10 M, 또는 약 1 x 10-9 M 내지 약 1 x 10-11 M (경계값 포함)의 KD로 제1 및/또는 제2 항원에 결합할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 다양한 상이한 방법을 사용하여 항원-결합 도메인의 KD 값을 결정할 수 있다 (예를 들어, 전기영동 이동성 변화 검정, 필터 결합 검정, 표면 플라즈몬 공명, 및 생체분자 결합 동역학 검정 등).
항원
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 키메라 항원 수용체는 단일 항원 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 항원 중 임의의 것)에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항원-결합 도메인은 2개 이상의 상이한 항원 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 항원 중 임의의 것의 2개 이상)에 결합할 수 있다. 항원의 비제한적 예는 하기를 포함한다: 글리피칸-3, HER2, A33 항원, 9-O-아세틸-GD3, CA19-9 마커, BhCG, CA-125 마커, 카르보안히드라제 IX (MN/CA IX), 칼레티쿨린, CCR5, CCR8, CD2, CD3, CD5, CD16, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD27, CD28, CD30, CD33, CD38, CD40L, CD44, CD44V6, CD63, CD70, CD84, CD96, CD100, CC123, CD133, CD137, CD138, CD150, CD152 (CTLA-4), CD160, CRTAM, CS1 (CD319), DNAM-1 (CD226), CD229, CD244, CD272 (BTLA), CD274 (PDL-1, B7H1), CD279 (PD-1), CD319, CD352, CRTAM (CD355), CD358, DR3, GITR (TNFRSF 18), HVEM, ICOS, LIGHT, LTBR, OX40, KIR의 활성화 형태, NKG2C, NKG2D, NKG2E, 1종 이상의 천연 세포독성 수용체, NTB-A, PEN-5, 암종 배아 항원 (CEA; CD66e), 데스모글레인 4, E-카드헤린 네오에피토프, 엔도시알린, 에프린 A2 (EphA2), 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM), 푸코실 GM1, GD2, GD3, GM2, 강글리오시드 GM3, 글로보 H, 당단백질 100, HER2/neu, HER3, HER4, 인슐린-유사 성장 인자 수용체 1, 루이스-Y, LG, Ly-6, 흑색종-특이적 콘드로이틴-술페이트 프로테오글리칸 (MCSCP), 메소텔린, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5AC, MUC5b, MUC7, MUC16, 뮐러 억제 물질 (MIS) 수용체 유형 II, 형질 세포 항원, 폴리 SA, PSCA, PSMA, 소닉 헷지호그 (SHH), SAS, STEAP, sTn 항원, TNF-α 전구체, 2B4 (CD244), β2-인테그린, KIR, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR3DL2, KIR-L, KLRGI, LAIR-1, NKG2A, NKR-P IA, Siglec-3, Siglec-7, Siglec-9, TCRa, TCRB, TCR5K, TIM1, LAG3, LAIR1, PD-1H, TIGIT, TIM2 및 TIM3. 항원의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
CAR 막횡단 도메인
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 내인성 폴리펩티드로부터의 막횡단 도메인 또는 그의 부분을 포함하며, 여기서 내인성 폴리펩티드는 하기 군으로부터 선택된다: T 세포 수용체의 α 쇄, T 세포 수용체의 β 쇄, T 세포 수용체의 ζ 쇄, CD28 (Tp44로도 공지됨), CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37 (GP52-40 또는 TSPAN26으로도 공지됨), CD64 (FCGR1A로도 공지됨), CD80 (B7, B7-1, B7.1, BB1, CD28LG, CD28LG1, 및 LAB7로도 공지됨), CD45 (PTPRC, B220, CD45R, GP180, L-CA, LCA, LY5, T200, 및 단백질 티로신 포스파타제, 수용체 유형 C로도 공지됨), CD4, CD5 (LEU1 및 T1로도 공지됨), CD8α (Leu2, MAL, 및 p32로도 공지됨), CD9 (BTCC-1, DRAP-27, MIC3, MRP-1, TSPAN-29, 및 TSPAN29로도 공지됨), CD16 (FCGR3 및 FCG3으로도 공지됨), CD22 (SIGLEC-2 및 SIGLEC2로도 공지됨), CD86 (B7-2, B7.2, B70, CD28LG2, 및 LAB72로도 공지됨), CD134 (TNFRSF4, ACT35, RP5-902P8.3, IMD16, OX40, TXGP1L, 및 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 4로도 공지됨), CD137 (TNFRSF9, 4-1BB, CDw137, ILA, 및 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9로도 공지됨), CD27 (S152, S152.LPFS2, T14, TNFRSF7, 및 Tp55로도 공지됨), CD152 (CTLA4, ALPS5, CELIAC3, CTLA-4, GRD4, GSE, IDDM12, 및 세포독성 T-림프구 연관 단백질 4로도 공지됨), PD1 (PDCD1, CD279, PD-1, SLEB2, hPD-1, hPD-l, hSLE1, 및 프로그램화된 세포 사멸 1로도 공지됨), ICOS (AILIM, CD278, 및 CVID1로도 공지됨), CD272 (BTLA 및 BTLA1로도 공지됨), CD30 (TNFRSF8, D1S166E, 및 Ki-1로도 공지됨), GITR (TNFRSF18, RP5-902P8.2, AITR, CD357, 및 GITR-D로도 공지됨), HVEM (TNFRSF14, RP3-395M20.6, ATAR, CD270, HVEA, HVEM, LIGHTR, 및 TR2로도 공지됨), DAP10, 및 CD154 (CD40LG, CD40L, HIGM1, IGM, IMD3, T-BAM, TNFSF5, TRAP, gp39, hCD40L, 및 CD40 리간드로도 공지됨). 이전 문장에서 문자 "CD"는 "분화 클러스터"를 나타낸다. 예를 들어, CD3은 "분화 클러스터 3"을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 폴리펩티드 (예를 들어, 상기 열거된 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체)로부터의 막횡단 도메인 또는 그의 부분을 포함한다.
포유동물 세포의 지질 이중층 (예를 들어, 형질 막)에서 내인성 폴리펩티드를 고정시키는 역할을 하는 임의의 막횡단 도메인 또는 그의 부분은 본원에 개시된 조성물 및 방법에 따라 사용하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 인간 CD28, 예를 들어 진뱅크 수탁 번호 P01747, 예를 들어 서열식별번호: 61의 아미노산 153 내지 179로부터의 막횡단 도메인 또는 그의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 61의 아미노산 153 내지 179와 적어도 80% (예를 들어, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 막횡단 도메인 또는 그의 부분을 포함한다.
서열식별번호: 61
일부 실시양태에서, CAR은 서열식별번호: 97의 서열을 갖는 막횡단 도메인 및 세포외 줄기 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 97과 적어도 80% (예를 들어, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 서열이거나 또는 이를 포함하는 막횡단 도메인 및 세포외 줄기 도메인을 포함한다.
CD28 줄기 및 TMD에 대한 예시적인 폴리펩티드 서열 (서열식별번호: 97)
일부 실시양태에서, CAR을 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 98의 서열을 갖는 막횡단 도메인 및 세포외 줄기 도메인을 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 핵산은 서열식별번호: 98과 적어도 80% (예를 들어, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 서열이거나 또는 이를 포함하는 막횡단 도메인 및 세포외 줄기 도메인을 코딩하는 핵산을 포함한다.
CD28 줄기 및 TMD에 대한 폴리펩티드 서열을 코딩하는 예시적인 핵산 서열 (서열식별번호: 98)
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 인간 CD3, 예를 들어 진뱅크 수탁 번호 P20963, 예를 들어 서열식별번호: 62의 아미노산 31 내지 51로부터의 막횡단 도메인 또는 그의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 62의 아미노산 31 내지 51과 적어도 80% (예를 들어, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 서열이거나 또는 이를 포함하는 막횡단 도메인을 포함한다.
서열식별번호: 62
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 63-69 중 어느 하나의 막횡단 도메인 또는 그의 부분을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 63-69 중 어느 하나와 적어도 80% (예를 들어, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 서열이거나 또는 이를 포함하는 막횡단 도메인을 포함한다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 특정 내인성 폴리펩티드는 적어도 그의 1차 폴리펩티드 서열이 상이한 2개 이상의 이소형을 갖는다. 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는, 예를 들어 T 세포 수용체의 α 쇄, T 세포 수용체의 β 쇄, T 세포 수용체의 ζ 쇄, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1, 또는 CD154의 이소형 (예를 들어, 인간 이소형)을 포함한 내인성 막횡단 단백질 (예를 들어, 내인성 포유동물, 예를 들어 인간, 막횡단 단백질)의 임의의 이소형으로부터의 아미노산 서열을 포함하는 막횡단 도메인을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체의 막횡단 도메인 또는 그의 부분은 하기 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 단백질: T 세포 수용체의 α 쇄, T 세포 수용체의 β 쇄, T 세포 수용체의 ζ 쇄, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1, 또는 CD154 중 1종 이상으로부터의 막횡단 도메인에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체의 막횡단 도메인 또는 그의 부분은 하기 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 단백질: T 세포 수용체의 α 쇄, T 세포 수용체의 β 쇄, T 세포 수용체의 ζ 쇄, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1, 또는 CD154의 막횡단 도메인과 비교하여 1개 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 합성 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 합성 막횡단 도메인은 우세하게 소수성 잔기, 예컨대 비제한적으로, 류신 및 발린을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 합성 막횡단 도메인은 도메인의 각각의 말단에 페닐알라닌, 트립토판, 및 발린 트리플렛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 2개 이상의 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드, 예컨대 비제한적으로, T 세포 수용체의 α 쇄, T 세포 수용체의 β 쇄, T 세포 수용체의 ζ 쇄, CD28, CD3ε, CD3δ, CD3γ, CD33, CD37, CD64, CD80, CD45, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD86, CD134, CD137, CD27, CD152, PD1, 및 CD154로부터의 막횡단 도메인의 부분을 갖는 키메라 막횡단 도메인인 막횡단 도메인을 포함하여, 막횡단 도메인의 2개 이상의 부분이 함께 기능적 막횡단 도메인을 구성한다. 일부 실시양태에서, 키메라 막횡단 도메인의 이러한 부분은 야생형 막횡단 도메인의 상응하는 부분과 비교하여 1개 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 포함할 수 있다.
막횡단 도메인은 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 지질 이중층을 각각 횡단하는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 인접 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 막횡단 도메인은, 예를 들어 지질 이중층에 α-나선 2차 구조를 갖는 적어도 1개 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 인접 아미노산 서열 (이는 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 지질 이중층을 횡단함)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 지질 이중층에 β-배럴 2차 구조를 형성하는 2개 이상의 인접 아미노산 서열 (이는 포유동물 세포에서 발현될 때 상응하는 내인성 폴리펩티드에 존재하는 경우에 각각 지질 이중층을 횡단함)을 포함할 수 있다. 막횡단 도메인의 추가의 예 및 특색은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
공동자극 도메인
정상 림프구에서, T 세포 활성화는 2가지 부류의 세포내 신호전달 도메인에 의해 매개된다. 1차 신호전달은 T 세포 수용체 (예를 들어, TCR/CD3 복합체)를 통한 MHC-매개된 항원-의존성 활성화를 통해 개시된다. 2차 또는 공동자극 신호는 항원-비의존성 방식으로 작용하는 공동자극 신호전달 도메인을 포함하는 상이한 수용체에 의해 제공된다. TCR의 신호전달 도메인 단독을 통해 생성된 신호는 완전한 T 세포 활성화에 불충분하고; 공동-자극 신호가 또한 요구된다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 하기 군으로부터 선택된 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드로부터의 공동자극 도메인 또는 그의 부분을 포함한다: CD27 (S152, S152.LPFS2, T14, TNFRSF7, 및 Tp55로도 공지됨), CD28 (Tp44로도 공지됨), 4-1BB (TNFRSF9, CD137, CDw137, ILA, 및 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9로도 공지됨), OX40 (TNFRSF4, ACT35, RP5-902P8.3, IMD16, CD134, TXGP1L, 및 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 4로도 공지됨), CD30 (TNFRSF8, D1S166E, 및 Ki-1로도 공지됨), CD40L (CD40LG, CD154, HIGM1, IGM, IMD3, T-BAM, TNFSF5, TRAP, gp39, hCD40L, 및 CD40 리간드로도 공지됨), CD40 (Bp50, CDW40, TNFRSF5, p50, CD40 (단백질), 및 CD40 분자로도 공지됨), PD-1 (PDCD1, CD279, PD-1, SLEB2, hPD-1, hPD-l, hSLE1, 및 프로그램화된 세포 사멸 1로도 공지됨), PD-L1 (CD274, B7-H, B7H1, PD-L1, PDCD1L1, PDCD1LG1, PDL1, CD274 분자, 및 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1로도 공지됨), ICOS (AILIM, CD278, 및 CVID1로도 공지됨), LFA-1 (림프구 기능-연관 항원 1로도 공지됨), CD2 (LFA-2, SRBC, T11, 및 CD2 분자로도 공지됨), CD7 (GP40, LEU-9, TP41, Tp40, 및 CD7 분자로도 공지됨), CD160 (BY55, NK1, NK28, 및 CD160 분자로도 공지됨), LIGHT (TNFSF14, CD258, HVEML, LIGHT, LTg, TR2, TNLG1D, 및 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14로도 공지됨), BTLA (CD272 및 BTLA1로도 공지됨), TIM3 (HAVCR2, HAVcr-2, KIM-3, TIM3, TIMD-3, TIMD3, Tim-3, CD366 및 A형 간염 바이러스 세포 수용체 2로도 공지됨), CD244 (2B4, NAIL, NKR2B4, Nmrk, SLAMF4 및 CD244 분자로도 공지됨), CD80 (B7, B7-1, B7.1, BB1, CD28LG, CD28LG1, LAB7 및 CD80 분자로도 공지됨), LAG3 (CD223 및 림프구 활성화 3으로도 공지됨), NKG2C (CD314, D12S2489E, KLR, NKG2-D, NKG2D 및 킬러 세포 렉틴 유사 수용체 K1로도 공지됨), GITR (TNFRSF18, RP5-902P8.2, AITR, CD357 및 GITR-D로도 공지됨), HVEM (TNFRSF14, RP3-395M20.6, ATAR, CD270, HVEA, HVEM, LIGHTR 및 TR2로도 공지됨), TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLRIO, CARDl l, CD54 (ICAM), CD83, DAP10, LAT, SLP76, TRIM, ZAP70, 및 B7-H3 (CD276, 4Ig-B7-H3, B7H3, B7RP-2 및 CD276 분자로도 공지됨). 일부 실시양태에서, 단일쇄 키메라 폴리펩티드, 단일쇄 키메라 항원 수용체, 또는 다중쇄 키메라 항원 수용체는 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드 (예를 들어, 상기 열거된 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체)로부터의 공동자극 도메인 또는 그의 부분을 포함한다.
공동자극 신호를 제공하는 역할을 하는 임의의 공동자극 도메인 또는 그의 부분은 본원에 개시된 조성물 및 방법에 따라 사용하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 인간 CD28로부터의 (예를 들어 진뱅크 수탁 번호 P01747, 예를 들어 서열식별번호: 70의 아미노산 180 내지 220으로부터의) 공동자극 도메인 또는 그의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 공동자극 도메인은 서열식별번호: 70의 아미노산 180 내지 220과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 (또는 동일한) 서열 또는 그의 단편이거나 또는 이를 포함한다.
서열식별번호: 70 (아미노산 180 내지 220은 밑줄표시됨)
아미노산 인간 CD28 공동자극 도메인을 코딩하는 예시적인 핵산 (서열식별번호: 99)
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 인간 4-1BB로부터의 (예를 들어 진뱅크 수탁 번호 Q07011, 예를 들어 서열식별번호: 71의 아미노산 214 내지 255로부터의) 공동자극 도메인 또는 그의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 공동자극 도메인은 서열식별번호: 75의 아미노산 214 내지 255와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열 또는 그의 부분이거나 또는 이를 포함한다.
서열식별번호: 71
본원에 개시된 키메라 항원 수용체는, 예를 들어 CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C 또는 B7-H3 (비제한적으로, 이들 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체 포함)의 이소형을 포함한 공동자극 도메인을 갖는 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드의 임의의 이소형으로부터의 아미노산 서열을 포함하는 공동자극 도메인을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체의 공동자극 도메인 또는 그의 부분은 포유동물 (예를 들어, 인간) CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C 또는 B7-H3 중 1종 이상으로부터의 공동자극 도메인에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체의 공동자극 도메인 또는 그의 부분은 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드: T 세포 수용체의 α 쇄, T 세포 수용체의 β 쇄, T 세포 수용체의 ζ 쇄, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C 또는 B7-H3 (비제한적으로, 이들 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체 포함) 중 1종 이상의 공동자극 도메인과 비교하여 1개 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 비제한적으로 CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C 또는 B7-H3 (비제한적으로, 이들 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체 포함)을 포함한 2개 이상의 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드로부터의 공동자극 도메인의 부분을 갖는 키메라 공동자극 도메인인 공동자극 도메인을 포함하여, 막횡단 도메인의 2개 이상의 부분이 함께 기능적 공동자극 도메인을 구성한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공동자극 도메인의 이러한 부분은 야생형 공동자극 도메인의 상응하는 부분과 비교하여 1개 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 포함할 수 있다.
본원에 개시된 키메라 항원 수용체의 공동자극 도메인은 임의의 적합한 길이일 수 있다. 예를 들어, 공동자극 도메인은 약 20개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 55개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 45개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 또는 약 25개 아미노산 (경계값 포함); 약 25개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 55개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 45개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 또는 약 30개 아미노산 (경계값 포함); 약 30개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 55개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 45개 아미노산, 약 40개 아미노산, 또는 약 35개 아미노산 (경계값 포함); 약 35개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 55개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 45개 아미노산, 또는 약 40개 아미노산 (경계값 포함); 약 40개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 55개 아미노산, 약 50개 아미노산, 또는 약 45개 아미노산 (경계값 포함); 약 45개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 55개 아미노산, 또는 약 50개 아미노산 (경계값 포함); 약 50개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 약 60개 아미노산, 또는 약 55개 아미노산 (경계값 포함); 약 55개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 65개 아미노산, 또는 약 60개 아미노산 (경계값 포함); 약 60개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 약 70개 아미노산, 또는 약 65개 아미노산 (경계값 포함); 약 65개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 75개 아미노산, 또는 약 70개 아미노산 (경계값 포함); 약 70개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 85개 아미노산, 또는 약 80개 아미노산 (경계값 포함); 약 80개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 95개 아미노산, 또는 약 90개 아미노산 (경계값 포함); 약 90개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산, 또는 약 100개 아미노산 (경계값 포함); 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산, 또는 약 110개 아미노산 (경계값 포함); 약 110개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산, 또는 약 120개 아미노산 (경계값 포함); 약 120개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산, 또는 약 130개 아미노산 (경계값 포함); 약 130개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산, 또는 약 140개 아미노산 (경계값 포함); 약 140개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산, 또는 약 150개 아미노산 (경계값 포함); 약 150개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산, 또는 약 160개 아미노산 (경계값 포함); 약 160개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산, 또는 약 170개 아미노산 (경계값 포함); 약 170개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산, 또는 약 180개 아미노산 (경계값 포함); 약 180개 아미노산 내지 약 200개 아미노산 또는 약 190개 아미노산 (경계값 포함); 또는 약 190개 아미노산 내지 약 200개 아미노산 (경계값 포함)의 길이를 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 2개 이상의 공동자극 도메인, 예를 들어 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 공동자극 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 공동자극 도메인은 동일하다 (예를 들어, 동일한 아미노산 서열을 가짐). 일부 실시양태에서, 공동자극 도메인은 동일하지 않다. 예를 들어, 공동자극 도메인은 비제한적으로 CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C 또는 B7-H3 (비제한적으로, 이들 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체 포함)을 포함한 상이한 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 공동자극 도메인은 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 또는 5개)의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가에 의해 서로 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 공동자극 도메인은 서로 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과의 서열 동일성을 나타낸다.
면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)
ITAM은 전형적으로 면역계의 특정 세포 표면 단백질의 세포질 꼬리에서 반복되고 (예를 들어, 2회 이상), 전형적으로 6 내지 8개의 아미노산에 의해 분리된다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 폴리펩티드로부터의 ITAM 또는 그의 부분을 포함하며, 여기서 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 폴리펩티드는 CD3ζ (CD3 제타로도 지칭됨), CD3δ (CD3 델타), CD3ε (CD3 엡실론), CD3γ (CD3 감마), DAP12, FCεR1γ (Fc 엡실론 수용체 I 감마 쇄), FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A (항원 수용체 복합체-연관 단백질 알파 쇄), CD79B (항원 수용체 복합체-연관 단백질 베타 쇄), 및 CD66d의 군으로부터 선택된다.
내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 단백질에서 신호전달을 매개하는 역할을 하는 임의의 ITAM 또는 그의 부분은 본원에 개시된 조성물 및 방법에 따라 사용하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 인간 CD3 제타 (예를 들어 진뱅크 수탁 번호 P20963, 예를 들어 서열식별번호: 72의 아미노산 52 - 164에 존재하는 ITAM, 또는 그의 부분; 또는 서열식별번호: 73 또는 그의 부분)로부터의 ITAM 또는 그의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, ITAM은 서열식별번호: 72의 아미노산 52-164의 서열 (또는 그의 부분), 또는 서열식별번호: 73의 서열 (또는 그의 부분)과 적어도 80% (예를 들어, 적어도 82%, 적어도 84%, 적어도 86%, 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 96%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%) 동일한 서열을 포함한다.
서열식별번호: 72
서열식별번호: 73 (인간 CD3 제타 신호전달 도메인)
서열식별번호: 74 (서열식별번호: 73의 인간 CD3 제타 신호전달 도메인을 코딩하는 cDNA)
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 특정 폴리펩티드는 적어도 그의 1차 폴리펩티드 서열이 상이한 2개 이상의 이소형을 갖는다. 예를 들어, 대안적 스플라이싱의 결과로서 상이한 이소형이 생성될 수 있다. 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는, 예를 들어 CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B, 또는 CD66d의 포유동물 (예를 들어, 인간) 이소형을 포함한 ITAM을 갖는 내인성 포유동물 막횡단 폴리펩티드의 임의의 이소형으로부터의 아미노산 서열을 포함하는 ITAM을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체의 ITAM 또는 그의 부분은 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 단백질, 예컨대, CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B 또는 CD66d에서의 ITAM 중 1종 이상의 ITAM과 비교하여 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4 또는 5개)의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산의 서열을 포함한다. 예를 들어, ITAM의 티로신 및 류신 또는 이소류신은 유지될 수 있는 한편, 이들을 분리하는 2개의 아미노산은 상이한 아미노산으로 대체될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 비제한적으로 CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B, 또는 CD66d (비제한적으로, 이들 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체 포함)를 포함한 2종 이상의 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드로부터의 ITAM의 부분을 갖는 키메라 ITAM인 ITAM을 포함하여, 2개 이상의 ITAM 부분이 함께 기능적 ITAM을 구성한다. 일부 실시양태에서, 키메라 ITAM의 이러한 부분은 야생형 ITAM의 상응하는 부분과 비교하여 1개 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 2개 이상의 ITAM, 예를 들어 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 ITAM을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 ITAM은 동일하다 (예를 들어, 동일한 아미노산 서열을 가짐). 일부 실시양태에서, 2개 이상의 ITAM은 동일하지 않다. 예를 들어, ITAM은 비제한적으로 CD3ζ, CD3D, CD3E, CD3G, DAP12, FCER1G, FcRy, FcRft, CD35, CD22, CD79A, CD79B (비제한적으로, 이들 폴리펩티드 중 임의의 것의 포유동물 또는 인간 상동체 포함)를 포함한 상이한 내인성 포유동물 (예를 들어, 인간) 막횡단 폴리펩티드로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 ITAM은 1개 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가에 의해 서로 상이할 수 있다.
CAR-링커 서열
키메라 항원 수용체의 임의의 2개의 이웃 도메인은 링커 서열 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 예시적인 링커 서열 중 임의의 것)에 의해 분리될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 링커 서열은 1개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 5개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 220개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 55개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 65개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 75개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 220개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 230개 아미노산, 약 230개 아미노산 내지 약 250개 아미노산, 약 230개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 또는 약 240개 아미노산 내지 약 250개 아미노산일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 링커 서열은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 CH1, CH2, 및 CH3 도메인 중 1개 이상일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 링커는 CH2-CH3 인간 IgG1 도메인일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, CH2-CH3 인간 IgG1 도메인은 하기 서열을 갖는다:
일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 링커 서열은 인간 CD8 막횡단 도메인에 가까운 인간 CD8 세포외 서열의 부분일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 링커 서열은 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (서열식별번호: 76)의 인간 CD8 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이의 링커 서열은 인간 IgG1 힌지 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG1 힌지 서열은 AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (서열식별번호: 77)이다.
일부 실시양태에서, 링커 서열 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 링커 서열 중 임의의 것)은 막횡단 도메인과 공동자극 도메인 사이에 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 서열 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 링커 서열 중 임의의 것)은 공동자극 도메인과 ITAM 사이에 존재할 수 있다.
핵산
또한, 1개 이상의 아미노산 변형을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 갖는 다양한 폴리펩티드, 키메라 막횡단 단백질, 또는 본원에 기재된 다른 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다.
벡터
1개 이상의 아미노산 변형을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 갖는 다양한 폴리펩티드, 키메라 막횡단 단백질, 또는 본원에 제공된 다른 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터가 본원에 제공된다. 본 개시내용에 따른 "벡터"는 포유동물 세포에서 재조합 단백질 (예를 들어, 키메라 막횡단 단백질, 단백질 및/또는 키메라 항원 수용체)의 발현을 유도할 수 있는 폴리뉴클레오티드이다. 본원에 제공된 벡터는, 예를 들어 원형 또는 선형화된 형태일 수 있다. 벡터의 비제한적 예는 플라스미드, SV40 벡터, 아데노바이러스 바이러스 벡터, 및 아데노-연관 바이러스 (AAV) 벡터를 포함한다. 벡터의 비제한적 예는 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마-레트로바이러스 벡터를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Carlens et al., Exp. Hematol. 28(10:1137-1146, 2000; Park et al., Trends Biotechnol. 29(11):550-557, 2011; 및 Alonso-Camino et al., Mol. Ther. Nucleic Acids 2:e93, 2013]을 참조한다. 레트로바이러스 벡터의 비제한적 예는 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스, 골수증식성 육종 바이러스, 뮤린 배아 줄기 세포 바이러스, 뮤린 줄기 세포 바이러스, 비장 초점 형성 바이러스, 또는 아데노-연관 바이러스로부터 유래된 것을 포함한다. 레트로바이러스 벡터의 비제한적 예는 예를 들어 미국 특허 번호 5,219,740 및 6,207,453; 문헌 [Miller et al., BioTechniques 7:980-990, 1989; Miller, Human Gene Therapy 1:5-14, 1990; Scarpa et al., Virology 180:849-852, 1991; Burns et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:8033-8037, 1993; 및 Boris-Lawrie et al., Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109, 1993]에 기재되어 있다. 예시적인 렌티바이러스 벡터는, 예를 들어 문헌 [Wang et al., J. Immunother. 35(9):689-701, 2003; Cooper et al., Blood 101:1637-1644, 2003; Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97-114, 2009; 및 Cavalieri et al., Blood 102(2):497-505, 2003]에 기재되어 있다.
본원에 제공된 핵산 중 임의의 것이 삽입될 수 있는 예시적인 벡터는, 예를 들어 문헌 [Ausubel et al., Eds. "Current Protocols in Molecular Biology" Current Protocols, 1993; 및 Sambrook et al., Eds. "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," 2nd ed., Cold Spring Harbor Press, 1989]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 핵산 중 임의의 것에 작동가능하게 연결된 프로모터 서열 및/또는 인핸서 서열을 추가로 포함한다. 프로모터의 비제한적 예는 인간 시토메갈로바이러스 (CMV), 마우스 포스포글리세레이트 키나제 1, 폴리오마 아데노바이러스, 갑상선 자극 호르몬 α, 비멘틴, 원숭이 바이러스 40 (SV40), 종양 괴사 인자, β-글로빈, α-태아단백질, γ-글로빈, β-인터페론, γ-글루타밀 트랜스퍼라제, 인간 유비퀴틴 C (UBC), 마우스 유방 종양 바이러스 (MMTV), 라우스 육종 바이러스, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, β-액틴, 메탈로티오네인 II (MT II), 아밀라제, 인간 EF1α, 카텝신, MI 무스카린성 수용체, 레트로바이러스 LTR (예를 들어 인간 T-세포 백혈병 바이러스 HTLV), AAV ITR, 인터류킨-2, 콜라게나제, 혈소판-유래 성장 인자, 아데노바이러스 E2, 스트로멜리신, 뮤린 MX, 래트 인슐린, 글루코스 조절 단백질 78, 인간 면역결핍 바이러스, 글루코스 조절 단백질 94, α-2-마크로글로불린, MHC 부류 I, HSP70, 프로리페린, 이뮤노글로불린 경쇄, T-세포 수용체, HLA DQα, HLA DQβ, 인터류킨-2 수용체, MHC 부류 II, 프리알부민 (트랜스티레틴), 엘라스타제 I, 알부민, c-fos, 신경 세포 부착 분자 (NCAM), H2B 히스톤, 래트 성장 호르몬, 인간 혈청 아밀로이드 (SAA), 근육 크레아티닌 키나제, 트로포닌 I (TN I), 및 긴팔원숭이 유인원 백혈병 바이러스 (GALV)로부터의 프로모터를 포함한다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터 또는 구성적 프로모터일 수 있다. 프로모터의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
일부 예에서, 본원에 제공된 벡터는 키메라 막횡단 단백질, 단백질, 또는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결되고 3'에 위치하는 폴리(A) 서열을 추가로 포함한다. 폴리(A) 서열의 비제한적 예는 소 성장 호르몬 (Woychik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81(13): 3944-3948, 1984, 및 미국 특허 번호 5,122, 458), 마우스-β-글로빈, 마우스-α-글로빈 (Orkin et al., EMBO J. 4(2): 453-456, 1985), 인간 콜라겐, 폴리오마 바이러스 (Batt et al., Mol. Cell Biol. 15(9):4783-4790, 1995), 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 유전자 (HSV TK), IgG 중쇄 유전자 폴리아데닐화 신호 (미국 특허 출원 공개 번호 2006/0040354), 인간 성장 호르몬 (hGH)(Szymanski et al., Mol. Therapy 15(7):1340-1347, 2007), SV40 폴리(A) 부위, 예를 들어 SV40 후기 및 초기 폴리(A) 부위 (Schek et al., Mol. Cell Biol. 12(12):5386-5393, 1992)로부터 유래된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리(A) 서열은 고도로 보존된 상류 요소 (AATAAA)를 포함한다. 이러한 AATAAA 서열은, 예를 들어 ATTAAA, AGTAAA, CATAAA, TATAAA, GATAAA, ACTAAA, AATATA, AAGAAA, AATAAT, AAAAAA, AATGAA, AATCAA, AACAAA, AATCAA, AATAAC, AATAGA, AATTAA, 및 AATAAG를 포함한, 예를 들어 폴리아데닐화를 신호전달할 수 있는 AATAAA에 대한 상동성을 갖는 다른 헥사뉴클레오티드 서열로 치환될 수 있다. 예를 들어, WO 06012414 A2를 참조한다.
폴리(A) 서열은 예를 들어 합성 폴리아데닐화 부위일 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Levitt et al., Genes Dev. 3(7): 1019-1025, 1989]을 참조한다. 일부 예에서, 폴리(A) 서열은 가용성 뉴로필린-1의 폴리아데닐화 신호일 수 있다: AAATAAAATACGAAATG (서열식별번호: 78). 폴리(A) 서열의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 벡터의 추가의 예 및 측면이 또한 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 기재된 벡터 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 종양 항원 (예를 들어, 글리피칸-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, 선암종 항원, 알파-태아단백질 (AFP), BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 탄산 안히드라제 9 (CA- IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125, CD200, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오시드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴의 군으로부터 선택된 종양 항원)에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, 및 DAP-12의 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 본원에 기재된 벡터 중 임의의 것의 일부 예에서, 벡터는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터이다.
또한, 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 서열을 포함하는 제1 벡터 (예를 들어, 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 서열을 포함하는 벡터 중 임의의 것), 및 키메라 항원 수용체 (예를 들어, 본원에 기재된 키메라 항원 수용체 중 임의의 것)를 코딩하는 서열을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 세트가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터 중 하나 또는 둘 다는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터이다. 일부 실시양태에서, 제2 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터 서열 및/또는 인핸서 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 벡터는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 폴리(A) 서열을 추가로 포함한다.
핵산 또는 벡터를 포유동물 세포 내로 도입하는 방법
관련 기술분야에 공지된 다양한 상이한 방법을 사용하여 본원에 개시된 핵산 및 벡터 중 임의의 것을 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것, 예를 들어 본원에 기재된 T 세포 중 임의의 것 (예를 들어, 인간 T 세포)) 내로 도입할 수 있다. 핵산 또는 벡터를 포유동물 세포 내로 도입하는데 사용될 수 있는 방법의 비제한적 예는 리포펙션, 형질감염, 전기천공, 미세주사, 인산칼슘 형질감염, 덴드리머-기반 형질감염, 양이온성 중합체 형질감염, 세포 스퀴징, 초음파천공, 광학 형질감염, 충돌, 유체역학적 전달, 마그네토펙션, 바이러스 형질도입 (예를 들어, 아데노바이러스 및 렌티바이러스 형질도입), 및 나노입자 형질감염을 포함한다. 핵산 또는 벡터를 포유동물 세포 내로 도입하는 추가의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
포유동물 세포
또한, 본원에 기재된 핵산 또는 벡터 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포가 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 벡터의 세트 중 임의의 것을 포함하는 포유동물 세포가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 대상체 (예를 들어, 인간 대상체, 예를 들어 암을 갖는 것으로 확인되거나 진단된 인간 대상체)로부터 이전에 수득된 것이거나, 또는 대상체 (예를 들어, 인간 대상체, 예를 들어 암을 갖는 것으로 확인되거나 진단된 인간 대상체)로부터 이전에 수득된 포유동물 세포의 딸세포이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 인간 세포이다.
면역 세포의 비제한적 예는 T 세포 (예를 들어, 인간 T 세포)를 포함한다. T 세포 (예를 들어, 인간 T 세포)의 비제한적 예는, 예를 들어 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 헬퍼 T 세포, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, 림프성 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 조절 T 세포 (Treg 세포), 및 종양-침윤 T 세포를 포함한다. T 세포 (예를 들어, 인간 T 세포)의 추가의 예는 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 기억 T 세포, Treg 세포, 자연 킬러 세포, B 세포, 및 단핵구를 포함한다. 포유동물 세포의 추가의 예는 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 킬러 세포를 포함한다.
조성물 및 키트
또한, 본원에 기재된 핵산, 벡터, 핵산의 세트, 벡터의 세트, 또는 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 본원에 제공된다. 예를 들어, 본원에 기재된 핵산 또는 핵산의 세트 중 임의의 것, 또는 본원에 제공된 벡터 또는 벡터의 세트 중 임의의 것, 및 제약상 허용되는 용매 또는 담체를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 키메라 막횡단 단백질 중 임의의 것 및/또는 키메라 항원 수용체 중 임의의 것을 코딩하는 핵산을 포함하는 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것 (예를 들어, 대상체, 예를 들어 암을 갖는 것으로 확인되거나 진단된 대상체로부터 이전에 수득된 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것)일 수 있다. 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 조성물에서, 조성물은 세포 배양 배지 또는 제약상 허용되는 완충제 (예를 들어, 포스페이트-완충 염수)를 추가로 포함할 수 있다. 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것을 포함하는 조성물은 정맥내 또는 동맥내 투여를 위해 제제화될 수 있다.
또한, 본원에 기재된 조성물 (예를 들어, 제약 조성물) 중 임의의 것을 1개 이상 포함하는 키트가 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 방법 중 임의의 것을 수행하는 것에 대한 지침서를 추가로 포함할 수 있다.
대상체에서 암을 치료하는 방법
또한, 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 아미노산 변형을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 갖는 폴리펩티드, 본원에 기재된 바와 같은 키메라 막횡단 단백질을 코딩하는 핵산, 또는 둘 다 (및 임의로 본원에 기재된 키메라 항원 수용체 중 임의의 것을 포함하는 핵산)를 포함하는 포유동물 세포 중 임의의 것을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 대상체 (예를 들어, 인간, 마우스, 토끼, 래트, 말, 개, 원숭이, 또는 유인원)에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물 세포는 T 세포 (예를 들어, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 기억 T 세포, Treg 세포, 및 자연 킬러 T 세포)이다. 일부 예에서, 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것)는 대상체 (예를 들어, 암, 예를 들어 본원에 기재된 암 중 임의의 것을 갖는 것으로 확인되거나 진단된 대상체)로부터 이전에 수득된 포유동물 세포이다. 이들 방법의 일부 실시양태는 대상체로부터 포유동물 세포를 수득하는 것을 추가로 포함한다.
이들 방법의 일부 실시양태는 본원에 기재된 단일쇄 키메라 항원 수용체 또는 본원에 기재된 다중쇄 키메라 항원 수용체를 코딩하는 핵산을 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 포유동물 세포 중 임의의 것) 내로 도입하여 대상체에게 투여될 포유동물 세포를 생성하는 것을 추가로 포함한다.
본원에 제공된 방법 중 임의의 것을 사용하여 치료될 수 있는 암의 비제한적 예는 간세포성 암종, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 입암, 구강암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암을 포함한다.
이들 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 방법은 대상체에서 종양 부담의 감소 (예를 들어, 종양 질량 및/또는 고형 종양의 부피의 감소)를 발생시킨다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법 중 임의의 것은 (예를 들어, 치료 전 대상체에서의 종양 부담과 비교하여) 대상체에서 종양 부담의 적어도 약 1% 내지 약 99% (예를 들어, 약 1% 내지 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 2% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 3% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 5% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10% (경계값 포함); 약 10% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 또는 약 15% (경계값 포함); 약 15% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 또는 약 20% (경계값 포함); 약 20% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 또는 약 25% (경계값 포함); 약 25% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 또는 약 30% (경계값 포함); 약 30% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 또는 약 35% (경계값 포함); 약 35% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 또는 약 40% (경계값 포함); 약 40% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 또는 약 45% (경계값 포함); 약 45% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 또는 약 50% (경계값 포함); 약 50% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 또는 약 55% (경계값 포함); 약 55% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 또는 약 60% (경계값 포함); 약 60% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 또는 약 65% (경계값 포함); 약 65% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 또는 약 70% (경계값 포함); 약 70% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 또는 약 72% (경계값 포함); 약 72% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 또는 약 74% (경계값 포함); 약 74% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 또는 약 76% (경계값 포함); 약 76% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 또는 약 78% (경계값 포함); 약 78% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 또는 약 80% (경계값 포함); 약 80% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 또는 약 82% (경계값 포함); 약 82% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 또는 약 84% (경계값 포함); 약 84% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 또는 약 86% (경계값 포함); 약 86% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 또는 약 88% (경계값 포함); 약 88% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 또는 약 90% (경계값 포함); 약 90% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 또는 약 92% (경계값 포함); 약 92% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 또는 약 94% (경계값 포함); 약 94% 내지 약 99%, 약 98%, 또는 약 96% (경계값 포함); 또는 약 96% 내지 약 99% 또는 약 98% (경계값 포함)) 감소를 발생시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 대상체에서 암의 진행 속도의 감소를 발생시킨다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법 중 임의의 것은 (예를 들어, 치료 전 대상체 또는 동일한 암을 갖고 치료를 투여받지 않았거나 상이한 치료를 투여받은 대조군 대상체 또는 대상체의 대조군 집단에서의 암의 진행 속도와 비교하여) 대상체에서 암의 진행 속도의 적어도 약 1% 내지 약 99% (예를 들어, 약 1% 내지 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 2% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 3% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 5% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10% (경계값 포함); 약 10% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 또는 약 15% (경계값 포함); 약 15% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 또는 약 20% (경계값 포함); 약 20% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 또는 약 25% (경계값 포함); 약 25% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 또는 약 30% (경계값 포함); 약 30% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 또는 약 35% (경계값 포함); 약 35% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 또는 약 40% (경계값 포함); 약 40% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 또는 약 45% (경계값 포함); 약 45% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 또는 약 50% (경계값 포함); 약 50% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 또는 약 55% (경계값 포함); 약 55% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 또는 약 60% (경계값 포함); 약 60% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 또는 약 65% (경계값 포함); 약 65% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 또는 약 70% (경계값 포함); 약 70% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 또는 약 72% (경계값 포함); 약 72% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 또는 약 74% (경계값 포함); 약 74% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 또는 약 76% (경계값 포함); 약 76% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 또는 약 78% (경계값 포함); 약 78% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 또는 약 80% (경계값 포함); 약 80% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 또는 약 82% (경계값 포함); 약 82% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 또는 약 84% (경계값 포함); 약 84% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 또는 약 86% (경계값 포함); 약 86% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 또는 약 88% (경계값 포함); 약 88% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 또는 약 90% (경계값 포함); 약 90% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 또는 약 92% (경계값 포함); 약 92% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 또는 약 94% (경계값 포함); 약 94% 내지 약 99%, 약 98%, 또는 약 96% (경계값 포함); 또는 약 96% 내지 약 99% 또는 약 98% (경계값 포함)) 감소를 발생시킬 수 있다.
이들 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 방법은 암 대상체의 생존 시간의 증가를 발생시킨다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법 중 임의의 것은 (예를 들어, 동일한 암을 갖고 치료를 제공받지 않았거나 상이한 치료를 제공받은 대조군 대상체 또는 대조군 대상체의 집단에 대한 생존 시간과 비교하여) 암 대상체의 생존 시간의 약 1% 내지 약 800% (예를 들어, 약 1% 내지 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 약 100%, 약 80%, 약 60%, 약 40%, 약 20%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 5% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 약 100%, 약 80%, 약 60%, 약 40%, 약 20%, 또는 약 10% (경계값 포함); 약 10% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 약 100%, 약 80%, 약 60%, 약 40%, 또는 약 20% (경계값 포함); 약 20% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 약 100%, 약 80%, 약 60%, 또는 약 40% (경계값 포함); 약 40% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 약 100%, 약 80%, 또는 약 60% (경계값 포함); 약 60% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 약 100%, 약 80% (경계값 포함); 약 80% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 약 150%, 또는 약 100% (경계값 포함); 약 100% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 약 200%, 또는 약 150% (경계값 포함); 약 150% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 약 250%, 또는 약 200% (경계값 포함); 약 200% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 약 300%, 또는 약 250% (경계값 포함); 약 250% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 약 350%, 또는 약 300% (경계값 포함); 약 300% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 약 400%, 또는 약 350% (경계값 포함); 약 350% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 약 450%, 또는 약 400% (경계값 포함); 약 400% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 약 500%, 또는 약 450% (경계값 포함); 약 450% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 약 550%, 또는 약 500% (경계값 포함); 약 500% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 약 600%, 또는 약 550% (경계값 포함); 약 550% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 약 650%, 또는 약 600% (경계값 포함); 약 600% 내지 약 800%, 약 750%, 약 700%, 또는 약 650% (경계값 포함); 약 650% 내지 약 800%, 약 750%, 또는 약 700% (경계값 포함); 약 700% 내지 약 800% 또는 약 750% (경계값 포함); 또는 약 750% 내지 약 800% (경계값 포함)) 증가를 발생시킬 수 있다.
또한, 암 세포의 세포 사멸의 유도를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 암 세포의 세포 사멸의 유도를 필요로 하는 대상체에서 암 세포의 세포 사멸을 유도하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 암을 갖는 대상체에게 치료 유효량의 본원에 기재된 포유동물 세포 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 암을 갖는 대상체에서 전이 또는 추가의 전이가 발생할 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법 중 임의의 것은 (예를 들어, 동일한 암을 갖고 치료를 투여받지 않았거나 상이한 치료를 투여받은 대조군 대상체 또는 대조군 대상체의 집단에서 전이 또는 추가의 전이가 발생할 위험과 비교하여) 대상체에서 전이 또는 추가의 전이가 발생할 위험의 적어도 약 1% 내지 약 99% (예를 들어, 약 1% 내지 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 2% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 3% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5% (경계값 포함); 약 5% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10% (경계값 포함); 약 10% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 또는 약 15% (경계값 포함); 약 15% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 또는 약 20% (경계값 포함); 약 20% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 또는 약 25% (경계값 포함); 약 25% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 또는 약 30% (경계값 포함); 약 30% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 또는 약 35% (경계값 포함); 약 35% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 또는 약 40% (경계값 포함); 약 40% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 또는 약 45% (경계값 포함); 약 45% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 또는 약 50% (경계값 포함); 약 50% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 또는 약 55% (경계값 포함); 약 55% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 65%, 또는 약 60% (경계값 포함); 약 60% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 또는 약 65% (경계값 포함); 약 65% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 또는 약 70% (경계값 포함); 약 70% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 또는 약 72% (경계값 포함); 약 72% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 또는 약 74% (경계값 포함); 약 74% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 또는 약 76% (경계값 포함); 약 76% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 또는 약 78% (경계값 포함); 약 78% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 또는 약 80% (경계값 포함); 약 80% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 또는 약 82% (경계값 포함); 약 82% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 또는 약 84% (경계값 포함); 약 84% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 약 88%, 또는 약 86% (경계값 포함); 약 86% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 약 90%, 또는 약 88% (경계값 포함); 약 88% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 92%, 또는 약 90% (경계값 포함); 약 90% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 또는 약 92% (경계값 포함); 약 92% 내지 약 99%, 약 98%, 약 96%, 또는 약 94% (경계값 포함); 약 94% 내지 약 99%, 약 98%, 또는 약 96% (경계값 포함); 또는 약 96% 내지 약 99% 또는 약 98% (경계값 포함)) 감소를 발생시킬 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에 추가로 기재되며, 이는 청구범위에 기재된 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.
실시예 1. 변형된 IL7Rα 단백질은 1차 T 세포의 표면 상에서 발현된다
1차 T 세포를 N-말단 His 태그에 대한 형광색소 접합된 항체로 염색하여 돌연변이된 IL7Rα 단백질의 표면 발현을 검출하였다. 간략하게, 렌티바이러스 벡터를 사용한 형질도입 72시간 후에 최대 1x106개의 세포를 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-His (APC; 1:100)와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 유동 세포측정법을 BD LSRII 포르테사(Fortessa) 기기를 사용하여 수행하고, 플로우조 V10 소프트웨어를 사용하여 분석하였다 (도 3, 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것임). GFP 유전자가 IL7Ra 돌연변이 단백질과 동일한 트랜스진 내에 코딩되고 T2A 자기 절단 펩티드 서열에 의해 분리되기 때문에, 발현에 대한 대용물로서 유동 세포측정법에 의한 GFP (FITC)의 검출을 사용하였다. GFP의 검출 및 His 태그의 표면 검출은 선형이었다.
실시예 2. 키메라 막횡단 단백질은 1차 T 세포의 표면 상에서 발현된다
mbIL15-IL17Rα-WT는 야생형 IL7Rα 막횡단 및 세포내 도메인, IL15Rα 세포외 도메인 (스시 도메인 포함), 링커, 및 IL15 폴리펩티드 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질이다 (도 4에 제시된 구축물의 개략도 참조). mbIL15-IL17Rα-Ins_PPCL은 야생형 IL7Rα 세포내 도메인, 성숙 야생형 IL7Rα의 아미노산 위치 4와 5 사이에 PPCL 서열이 삽입된 IL7Rα 막횡단 도메인, IL15Rα 세포외 도메인 (스시 도메인 포함), 링커, 및 IL15 폴리펩티드 도메인을 갖는 키메라 막횡단 단백질이다.
1차 T 세포를 IL15Rα에 대한 형광색소 접합된 항체로 염색하여 키메라 mbIL15 단백질의 표면 발현을 검출하였다. 간략하게, 렌티바이러스 벡터를 사용한 형질도입 72시간 후에 최대 1x106개의 세포를 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-IL15Rα (APC; 1:100)와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 유동 세포측정법을 BD LSRII 포르테사 기기를 사용하여 수행하고, 플로우조 V10 소프트웨어를 사용하여 분석하였다 (도 5, 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것임). GFP 유전자가 IL7Rα 돌연변이체 및 키메라 mbIL15 단백질과 동일한 트랜스진 내에 코딩되고 T2A 자기 절단 펩티드 서열에 의해 분리되기 때문에, 발현에 대한 대용물로서 유동 세포측정법에 의한 GFP (FITC)의 검출을 사용하였다. GFP의 검출 및 IL15Rα의 표면 발현은 선형이었다.
실시예 3. IL7 돌연변이체 수용체를 발현하는 T 세포는 CD62L의 높은 발현 (Tscm 및 Tcm 집단) 및 CD25의 가변 발현을 유지한다
1차 인간 T 세포를 렌티바이러스 벡터로 형질도입하여 도 6a의 x-축에 제시된 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막 단백질 중 1종을 발현시켰다. 간략하게, 최대 1x106개의 세포를 각각의 시점에서 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (PE; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 및 항-CD62L (BV605; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. CD45RO 및 CD62L의 상대 발현 수준을 사용하여 세포의 분화 상태를 결정하였다. Teff = 이펙터 T 세포. Tem = 이펙터 기억 T 세포. Tcm = 중심 기억 T 세포. Tscm = 줄기 세포 기억 T 세포. 도 6a는 1차 인간 T 세포가 표시된 단백질로 형질도입되었을 때 상이한 유형의 CD8+ T 세포의 백분율을 보여준다.
상이한 IL7Rα 돌연변이 단백질 및 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 1차 인간 T 세포에서의 PD-1 (도 6b, 좌측 그래프) 또는 CD25 (도 6b, 우측 그래프)의 발현을 활성화 15일 후에 평가하였다. 간략하게, 최대 1x106개의 세포를 각각의 시점에서 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (PE; 1:100), 항-CD25 (BV421; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 항-CD62L (BV605; 1:200), 및 항-PD1 (PE-Cy7; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 비형질도입 ("UT") 대조군 T-세포는 기저 수준의 PD-1 및 CD25 발현을 제공한다.
실시예 4. IL7Rα 막횡단 도메인 돌연변이는 1차 T 세포에서 STAT5의 인산화를 유도한다
비형질도입 ("UT") 상태로 남겨지거나 또는 도 7a에 도시된 특정 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 특정 키메라 막 단백질 중 1종을 코딩하는 렌티바이러스로 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 인산화된 STAT5의 수준을 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다 (상부 웨스턴 블롯). 활성화 14일 후에 혈청/시토카인 고갈 조건 하에 16-20시간 후 T-세포로부터 전세포 용해물을 제조하였다. 15분 동안 100 ng/ml 가용성 IL2로 자극된 UT T 세포는 양성 대조군 (+ stim)으로서의 역할을 하고, 비자극된 UT 세포 (- stim)는 기저 포스포/단백질 수준을 제공한다. 대조군 단백질 (알파 튜불린)을 또한 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다 (하부 웨스턴 블롯).
1차 인간 T 세포에서의 다양한 IL7Rα 돌연변이 단백질 및 키메라 막횡단 단백질의 발현을 활성화 후 제15일에 평가하였다 (도 7b). GFP 데이터를 % 발현 (상부 막대 그래프) 및 평균 형광 강도 (하부 막대 그래프)로서 제시한다. 유동 세포측정법에 의한 GFP 발현의 검출을 사용하여 14-일 배양 기간에 걸쳐 다양한 IL7Rα 돌연변이체 또는 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 세포의 상대 수를 추적하였다 (세포는 활성화 후 제1일에 형질도입됨).
실시예 5. IL7Rα 막횡단 도메인 돌연변이는 1차 T-세포를 CD19 CAR과 함께 공동-감염시킨다
1차 T 세포의 표면 상에서의 CD19 CAR (1928z 키메라 항원 수용체), EKV 또는 Ins_CPT IL7Rα 돌연변이 단백질, mbIL15-17Rα Ins_PPCL 키메라 막횡단 단백질, 및 mbIL15 단백질의 발현을 평가하였다. 도 8a 및 8b는 구축물 및 1차 T 세포 상에서의 그의 공동-발현을 개략적으로 보여준다.
1차 T 세포를 각각 IL7Rα 돌연변이체 및 CAR의 N-말단에 존재하는 His 및 Myc 태그에 대한 형광색소 접합된 항체로 염색하거나, 또는 항-IL15Rα 항체로 염색하여 키메라 mbIL15 단백질의 표면 발현을 검출하였다. 간략하게, 렌티바이러스 벡터를 사용한 형질도입 72시간 후에 최대 1x106개의 세포를 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-His (APC; 1:100), 또는 항-IL15Rα (APC; 1:100) 및 항-Myc (PE; 1:100) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 유동 세포측정법을 BD LSRII 포르테사 기기를 사용하여 수행하고, 플로우조 V10 소프트웨어를 사용하여 분석하였다 (도 8c, 제시된 데이터는 활성화 후 제6일로부터의 것임). GFP는 IL7Ra 돌연변이체 및 키메라 mbIL15 단백질과 동일한 트랜스진 내에서 발현되고, 유동 세포측정법에 의한 GFP (FITC)의 검출은 발현에 대한 대용물로서 사용될 수 있다. 이중 양성 (Myc-PE+, FITC) 집단은 1차 인간 T-세포 상에서의 둘 다의 단백질의 공동-발현을 입증한다.
mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL 및 mbIL15를 발현하는 세포의 수는 배양물에서 제6일부터 제14일까지 감소하였다 (도 8d). 대조적으로, IL7Rα_EKV, IL7Rα_Ins_CPT, 및 1928z 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포의 수는 동일한 기간에 걸쳐 비교적 일정하게 유지되었다. 유동 세포측정법에 의한 GFP 발현 및 N-말단 Myc 태그 (Myc-PE; 30분 동안 FACS 완충제 중 1:100)의 검출을 사용하여 14일 배양 기간에 걸쳐 각각 다양한 IL7Rα 돌연변이체 또는 키메라 막횡단 단백질 및 CD19 CAR을 발현하는 세포의 상대 수를 추적하였다 (세포는 활성화 후 제1일에 형질도입됨).
다양한 IL7Ra 돌연변이체 및 키메라 막횡단 단백질을 발현하는 CAR T-세포는 활성화 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지한다 (도 9). 간략하게, 활성화 14일 후에 최대 1x106개의 세포를 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (FITC; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 및 항 CD62L (BV605; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 유동 세포측정법을 BD LSRII 포르테사 기기를 사용하여 수행하고, 플로우조 V10 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. T-세포 기억 하위세트 집단 (CD62L vs CD45RO)을 Myc+, CD8+ 집단에 대해 게이팅하였다. Teff = 이펙터 T 세포. Tem = 이펙터 기억 T 세포. Tcm = 중심 기억 T 세포. Tscm = 줄기 세포 기억 T 세포.
비형질도입 상태로 남겨지거나 또는 제시된 IL7Rα 단백질 중 1종 또는 제시된 키메라 막횡단 단백질 중 1종을 코딩하는 렌티바이러스 벡터로 (CAR과 함께 및 CAR 없이) 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 인산화된 STAT5 및 STAT3의 수준 및 BCL-XL의 총 단백질 수준을 평가하였다. 활성화 14일 후에 혈청/시토카인 고갈 조건 하에 16-20시간 후 T-세포로부터 전세포 용해물을 제조하였다. 15분 동안 100 ng/ml 가용성 IL2로 자극된 UT T 세포는 양성 대조군 (+ stim)으로서의 역할을 하고, 비자극된-UT 세포 (- stim)는 기저 포스포/단백질 수준을 제공한다.
실시예 6. IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR-T 세포는 항원에 대한 연속 노출 시 대조군 CAR-T 세포보다 우월한 확장을 입증한다
1:1 비의 이펙터 대 표적 (E:T) 비로 항원에의 연속 노출 시 대조군 CAR과 비교하여 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포의 확장을 평가하였다. 활성화 후 제14일에, 5x105개의 CAR+ T-세포를 지렉스 24(GRex 24)-웰 플레이트의 각각의 웰에서 제0일에 5x105개의 Nalm6 B-세포에 대해 플레이팅하였다. 세포를 삼중으로 반복 플레이팅하였다. Nalm6 B 세포 및 신선한 세포 배양 배지를, 유동 세포측정법에 의해 계산된 바와 같이, 각각의 웰 내의 CAR+ 세포의 수에 기초하여 1:1 비로 제4일, 제7일, 제11일, 제14일, 및 제17일에 배양 플레이트에 다시 첨가하였다. IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 모든 세포는 비형질도입 및 종양 단독 대조군에 비해 21일 검정에 걸쳐 종양 세포의 100% 용해를 유지하였다. CAR+ T-세포의 배수 확장을 제4일, 제7일, 제11일, 제17일 및 제21일에 유동 세포측정 분석에 의해 결정하였다. 간략하게, 최대 1x106개의 세포를 각각의 시점에서 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (PE; 1:100), 항-CD3 (BV421; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 항-CD62L (BV605; 1:200), 및 항-PD1 (PE-Cy7; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 유동 세포측정 분석 직전에 각각의 튜브에 카운팅 비드 (50 μl, 123카운트™ 이비즈(123count™ eBeads), 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific))를 첨가하여 각각의 조건에서 세포 수의 정량화가 가능하게 하였다. 이들 수를 사용하여 CAR+ 확장 속도를 추적하고, 1:1 E:T 비로 각각의 웰에 다시 첨가할 Nalm6 표적 세포의 수를 결정하였다. 이들 데이터는 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 1:1 비의 이펙터 대 표적 (E:T) 비로 항원에 연속 노출 시 대조군 CAR과 비교하여 우월한 확장을 입증한다는 것을 보여준다 (도 11a 및 11b).
루시페라제-기반 밤새 사멸 검정에서 CD19+ Nalm6 B-세포 (도 12a) 및 CD19- K562 세포 (도 12b)의 퍼센트 용해를 평가하였다. T-세포를 21-일 연속 사멸 검정의 말미에 채취하고 (본원에 기재된 바와 같음), Nalm6 또는 CD19- K562 세포주를 반딧불이-루시페라제 (fLuc+)를 발현하도록 조작하였다. 1x104개의 Nalm6 또는 K562 세포를 웰당 플레이팅하고, T-세포를 % CAR+에 따라 다양한 E:T 비로 플레이팅하였다. 세포 용해를 살아있는 Nalm6 B- 또는 K652 세포의 상대 광 단위 (RLU) 강도에 기초하여 측정하고, Nalm6 K562 단독 대조군에 대해 정규화하였다.
IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 T-세포는 22일의 연속 항원 직면 후 낮은 E:T 비에서 대조군 CD19 CAR에 비해 CD19+ Nalm6 B-세포의 우월한 사멸을 입증한다 (도 12a). 예상된 바와 같이, 공여자 및 연령 매칭 (활성화 후 제35일) UT T-세포는 21일 연속 사멸 검정에서 생존하지 않았고, 따라서 여기서 검정되지 않았다.
IL7Rα_EKV를 발현하는 CAR T-세포는 높은 E:T 비 (20:1 및 6:1)에서 CD19- K562에 대해 증가된 오프-타겟 세포독성을 입증한 한편, 다른 시토카인 수용체 변이체를 발현하는 CAR-T 세포는 대조군 CAR과 대등한 오프-타겟 세포독성을 입증하였다 (도 12b).
항원에의 연속 노출 후 제14일에 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR-T 세포의 기억 유형 분화를 평가하였다 (도 13). Nalm6 B-세포를 제0일, 제4일, 제7일, 제11일, 제14일, 제17일, 및 제21일에 세포 배양물에 첨가하였다. Teff = 이펙터 T 세포. Tem = 이펙터 기억 T 세포. Tcm = 중심 기억 T 세포. Tscm = 줄기 세포 기억 T 세포. 간략하게, 최대 1x106개의 세포를 각각의 시점에서 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (PE; 1:100), 항-CD3 (BV421; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 항-CD62L (BV605; 1:200), 및 항-PD1 (PE-Cy7; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이들 데이터는 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 항원에의 연속 노출 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지하였음을 보여준다.
실시예 7. IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR-T 세포는 항원에 대한 단일 노출 시 대조군 CAR-T 세포보다 우월한 확장을 입증한다
1:3 E:T 비로 표적에의 단일 노출 시 대조군 CAR과 비교하여 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포의 확장을 평가하였다 (도 14a 및 14b). 활성화 후 제14일에, 5x105개의 CAR+ T-세포를 지렉스 24-웰 플레이트의 각각의 웰에서 제0일에 1.5x106개의 Nalm6 B-세포에 대해 플레이팅하였다. 세포를 삼중으로 반복 플레이팅하였다. 모든 세포는 비형질도입 및 종양 단독 대조군에 비해 21일 검정에 걸쳐 종양 세포의 100% 용해를 유지하였다. CAR+ T-세포의 배수 확장을 제4일, 제7일, 제11일, 제17일 및 제21일에 유동 세포측정 분석에 의해 결정하였다. 간략하게, 최대 1x106개의 세포를 각각의 시점에서 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (PE; 1:100), 항-CD3 (BV421; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 항-CD62L (BV605; 1:200), 및 항-PD1 (PE-Cy7; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 분석 직전에 각각의 튜브에 카운팅 비드 (50 μl, 123카운트™ 이비즈)를 첨가하여 각각의 조건에서 세포 수의 정량화가 가능하게 하였다. 이들 데이터는 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 표적에의 단일 노출 시 대조군 CAR에 비해 우월한 확장을 입증한다는 것을 보여준다.
항원에의 연속 노출 후 제14일에 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR-T 세포의 기억 유형 분화를 평가하였다 (도 15). Nalm6 B-세포를 제0일에 세포 배양물에 첨가하였다. 간략하게, 최대 1x106개의 세포를 각각의 시점에서 수거하고, PBS + 2% FBS (FACS 완충제) 중에서 항-Myc (PE; 1:100), 항-CD3 (BV421; 1:100), 항-CD4 (BV785; 1:200), 항-CD8 (PE; 1:200), 항-CD45RO (APC; 1:200), 항-CD62L (BV605; 1:200), 및 항-PD1 (PE-Cy7; 1:200) 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이들 데이터는 IL7Rα 돌연변이체를 발현하는 CAR T-세포가 항원에의 단일 노출 후 제14일에 덜 분화된 기억 표현형을 유지하였음을 보여준다. Teff = 이펙터 T 세포. Tem = 이펙터 기억 T 세포. Tcm = 중심 기억 T 세포. Tscm = 줄기 세포 기억 T 세포.
실시예 8. Nalm6 종양을 사용한 CD19 CAR + IL7Ra CPT, MCP 또는 PPCL 생체내 시험.
CD19+ 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) 세포주 Nalm6을 ATCC에서 구입하고, 루시페라제로 형질도입하여 생물발광 영상화가 가능하게 하였다. 0.5 x 106개 Nalm6_luc 세포를 실험 제1일에 NOD-SCID IL2R감마널 (NSG) 마우스에 이식하였다. 제6일 (및 그 후 3 내지 4일마다)에, 동물에게 D-루시페린 (15 mg/mL 기질 150 mg/kg, 프로메가(Promega))을 복강내로 주사하고, IVIS S5 루미나 (퍼킨엘머(PerkinElmer), 매사추세츠주) 이미저 상에서 생물발광 (BLI)을 측정하였다. 영상을 리빙 이미지 4.3.1(Living Image 4.3.1) (퍼킨엘머, 매사추세츠주)을 사용하여 분석하여 전신, 고정 부피 ROI를 정량화하고, 총 플럭스 (광자/초)를 계산하고, 이를 하기 표 1에 제시하였다. 실험 제6일에, 동물을 또한 6마리의 동물 군으로 나누고 (단지 3마리의 동물이 존재하는 비히클 군 제외), 비-형질도입된 T 세포 또는 CD19 CAR 단독, CD19 CAR + IL7RαCPT, CD19 CAR + IL7RαMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RαPPCL을 보유하는 T 세포를 투여하였다. CAR T 세포를 제공받은 모든 동물은 0.1 x 106개의 CAR T 세포의 스트레스 시험 용량을 제공받았고, 모든 동물은 동일한 총수의 T 세포를 제공받았다.
이들 실험에 사용된 각각의 CD19 CAR, CD19 CAR + IL7RαCPT, CD19 CAR + IL7RαMCP, 또는 CD19 CAR + IL7RαPPCL에 대한 단백질 및 DNA 서열을 하기 제시한다.
종양 성장 지연 및 수명 증가 백분율을 하기 기재된 바와 같이 계산하였다.
종양 성장 지연 (TGD, 또는 T-C) - TGD는 군 종점이다. 종양 성장 지연은 일 단위로 표현되고, 일군의 마우스가 명시된 종양 부담에 도달하는데 걸리는 중앙값 시간 (평가 크기까지의 시간, TES)으로부터 계산된다. 이는 다음과 같이 계산하였다:
TGD = 중앙값 TES 치료군 - 중앙값 TES 대조군
여기서 대조군은 UT T 세포이다.
% 수명의 증가 (ILS) - %ILS는 군 종점이다. 이는 다음과 같이 계산하였다:
이들 실험으로부터의 데이터를 도 16-18에 제시한다. 비-형질도입된 T-세포는 항암 활성을 갖지 않았다. 0.1 x 106개의 세포의 스트레스 시험 용량에서, CD19 CAR 단독은 동물의 수명을 68.8% 증가시켰지만, 종양 성장 지연은 증가시키지 않았다. CD19 CAR + IL7RaCPT에 의한 치료는 비히클 치료에 비해 175% 수명의 증가, 및 >29.2일의 종양 성장 지연으로 가장 효과적이었다. CD19 CAR + IL7RaMCP 및 CD19 CAR + IL7RaPPT에 의한 치료는 둘 다 효과적이었고, 각각 >175%로 수명을 증가시켰고, 종양 성장 지연은 각각 >22.0 및 >17.9일이었다.
표 1.
실시예 9. GPC3 CAR + IL7RaCPT를 사용한 시험관내 연속 사멸 실험
동등한 수의 GPC3 CAR 양성 T 세포 및 GPC3 CAR + IL7Rα CPT 양성 T-세포를 아메리칸 타입 컬쳐 컴퍼니(American Type Culture Company) (ATCC, 버지니아주 마나사스)로부터의 Hep3B 표적 세포와 공동-배양하였다 (0.5 x 106개의 CAR T 세포를 0.5 x 106개의 Hep3B 표적 세포와 공동-배양함). IL7Ra CPT 단백질은 실시예 8에 기재된 것과 동일하다. 표적 세포를 35일 동안 3 내지 4일마다 1주에 2-회 (1:1 CAR T 세포 대 표적 Hep3B 세포 비로) 첨가하고, CAR T 세포의 수를 비드 카운팅 및 유동 세포측정법에 의해 측정하였다. 표적 세포를 제35일까지 첨가하고, 제35일 후의 CAR T 세포의 수를 1주 1회 측정하였다. CAR T 세포 수를 하기 표 2에 제시한다.
GPC3 CAR 및 GPC3 CAR + IL7RαCPT에 대한 단백질 및 DNA 서열을 하기 제시한다.
본 실험으로부터의 데이터를 도 19에 제시한다. GPC3 CAR T 세포는 제10일에 그의 확장에서 피크에 도달하였고, 출발 세포 밀도보다 최대 2.4-배 더 높았다. IL7Rα CPT를 또한 발현하는 GPC3 CAR T 세포는 제28일까지 기준선에 비해 40-배까지 확장되었고, 표적이 더 이상 첨가되지 않았을 때 제31일 후에만 확장이 정지되었다.
표 2
다른 실시양태
본 발명이 그의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 상기 설명은 예시를 위한 것이며, 첨부된 청구범위의 범주에 의해 정의되는 본 발명의 범주를 제한하지는 않는 것으로 의도됨을 이해하여야 한다. 다른 측면, 이점 및 변형은 하기 청구범위의 범주 내에 있다.
SEQUENCE LISTING
<110> KITE PHARMA, INC.
<120> CHIMERIC TRANSMEMBRANE PROTEINS AND USES THEREOF
<130> CDL-700.PF - 43159-0072WO1
<140>
<141>
<150> 62/688,810
<151> 2018-06-22
<160> 111
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 2
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA EKA sequence"
<400> 2
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys
1 5 10 15
Ala Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 3
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA EKA sequence"
<400> 3
cccatcctgc tgaccatcag catcctgagc ttcttcagcg tggagaaggt ggtgatcctg 60
gcctgcgtgc tgtgg 75
<210> 4
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA EKV sequence"
<400> 4
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys
1 5 10 15
Val Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 5
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA EKV sequence"
<400> 5
cccatcctgc tgaccatcag catcctgagc ttcttcagcg tggagaaggt ggtgatcctg 60
gcctgcgtgc tgtgg 75
<210> 6
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA CPT insert sequence"
<400> 6
Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser
1 5 10 15
Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 7
<211> 84
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA CPT insert sequence"
<400> 7
cccatcctgc tgacctgccc caccatcagc atcctgagct tcttcagcgt ggccctgctg 60
gtgatcctgg cctgcgtgct gtgg 84
<210> 8
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA PPCL insert sequence"
<400> 8
Pro Ile Leu Leu Pro Pro Cys Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe
1 5 10 15
Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 9
<211> 87
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
IL7RA PPCL insert sequence"
<400> 9
cccatcctgc tgccaccctg tttaaccatc agcatcctga gcttcttcag cgtggccctg 60
ctggtgatcc tggcctgcgt gctgtgg 87
<210> 10
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 11
<211> 220
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Gly Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu
1 5 10 15
Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser
20 25 30
Gln His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Ile Thr
35 40 45
Asn Leu Glu Phe Glu Ile Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu
50 55 60
Asn Phe Arg Lys Leu Gln Glu Ile Tyr Phe Ile Glu Thr Lys Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Gly Lys Ser Asn Ile Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser
85 90 95
Leu Thr Cys Lys Lys Ile Asp Leu Thr Thr Ile Val Lys Pro Glu Ala
100 105 110
Pro Phe Asp Leu Ser Val Val Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val
115 120 125
Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu
130 135 140
Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr
145 150 155 160
His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu
165 170 175
Gln Pro Ala Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro Asp His
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg
195 200 205
Thr Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp
210 215 220
<210> 12
<211> 660
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
ggcgagagcg gctacgccca gaacggcgac ctggaggacg ccgagctgga cgactacagc 60
ttcagctgct acagccagct ggaggtgaac ggcagccagc acagcctgac ctgcgccttc 120
gaggaccccg acgtgaacat caccaacctg gagttcgaga tctgcggcgc cctggtggag 180
gtgaagtgcc tgaacttcag gaagctgcag gagatctact tcatcgagac caagaagttc 240
ctgctgatcg gcaagagcaa catctgcgtg aaggtgggcg agaagagcct gacctgcaag 300
aagatcgacc tgaccaccat cgtgaagccc gaggccccct tcgacctgag cgtggtgtac 360
agggagggcg ccaacgactt cgtggtgacc ttcaacacca gccacctgca gaagaagtac 420
gtgaaggtgc tgatgcacga cgtggcctac aggcaggaga aggacgagaa caagtggacc 480
cacgtgaacc tgagcagcac caagctgacc ctgctgcaga ggaagctgca gcccgccgcc 540
atgtacgaga tcaaggtgag gagcatcccc gaccactact tcaagggctt ctggagcgag 600
tggagcccca gctactactt caggaccccc gagatcaaca acagcagcgg cgagatggac 660
<210> 13
<211> 219
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 13
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
1 5 10 15
Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
20 25 30
His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
35 40 45
Leu Glu Phe Gln Ile Cys Gly Ala Leu Leu Arg Val Lys Cys Leu Thr
50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
His Asp Val Ala Tyr Arg Pro Ala Arg Gly Glu Ser Asn Trp Thr His
145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp
210 215
<210> 14
<211> 657
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 14
gaaagtggaa atgcccagga tggagaccta gaagatgcag acgcggacga tcactccttc 60
tggtgccaca gccagttgga agtggatgga agtcaacatt tattgacttg tgcttttaat 120
gactcagaca tcaacacagc taatctggaa tttcaaatat gtggggctct tttacgagtg 180
aaatgcctaa ctcttaacaa gctgcaagat atatatttta taaagacatc agaattctta 240
ctgattggta gcagcaatat atgtgtgaag cttggacaaa agaatttaac ttgcaaaaat 300
atggctataa acacaatagt taaagccgag gctccctctg acctgaaagt cgtttatcgc 360
aaagaagcaa atgatttttt ggtgacattt aatgcacctc acttgaaaaa gaaatattta 420
aaaaaagtaa agcatgatgt ggcctaccgc ccagcaaggg gtgaaagcaa ctggacgcat 480
gtatctttat tccacacaag aacaacaatc ccacagagaa aactacgacc aaaagcaatg 540
tatgaaatca aagtccgatc cattccccat aacgattact tcaaaggctt ctggagcgag 600
tggagtccaa gttctacctt cgaaactcca gaacccaaga atcaaggagg atgggat 657
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 15
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
1 5 10 15
Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
20 25 30
His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
35 40 45
Leu Glu Phe Gln Ile Cys Gly Ala Leu Leu Arg Val Lys Cys Leu Thr
50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
His Asp Val Ala Tyr Arg Pro Ala Arg Gly Glu Ser Asn Trp Thr His
145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp
210 215
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<212> DNA
<213> Mus musculus
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Exemplary chimeric transmembrane protein sequence"
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Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
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Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
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Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
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Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
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Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
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Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
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Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
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Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
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Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
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Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
435 440 445
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
450 455 460
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
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Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
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Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
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Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
515 520 525
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
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Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
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Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
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Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
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Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
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Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
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Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
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275 280 285
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Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Pro
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Pro Cys Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu
325 330 335
Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val
340 345 350
Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys
355 360 365
Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu
370 375 380
Asp Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val
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Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu
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Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu
420 425 430
Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr
435 440 445
Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser
450 455 460
Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val
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Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro
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Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala
500 505 510
Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala
515 520 525
Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
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<212> DNA
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aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
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<213> Homo sapiens
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Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser
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<213> Homo sapiens
<400> 22
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
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<213> Homo sapiens
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aactgggtga atgtaataag tgatttgaaa aaaattgaag atcttattca atctatgcat 60
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<213> Homo sapiens
<400> 24
Met Val Leu Gly Thr Ile Asp Leu Cys Ser Cys Phe Ser Ala Gly Leu
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Pro Lys Thr Glu Ala Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys
20 25 30
Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr
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Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe
50 55 60
Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile
65 70 75 80
His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser
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Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu
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Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Mus musculus
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Asn Trp Ile Asp Val Arg Tyr Asp Leu Glu Lys Ile Glu Ser Leu Ile
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Gln Ser Ile His Ile Asp Thr Thr Leu Tyr Thr Asp Ser Asp Phe His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Asn Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Leu His Glu Tyr Ser Asn Met Thr Leu Asn Glu Thr Val Arg
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Asn Val Leu Tyr Leu Ala Asn Ser Thr Leu Ser Ser Asn Lys Asn Val
65 70 75 80
Ala Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Thr Phe
85 90 95
Thr Glu Phe Leu Gln Ser Phe Ile Arg Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
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Thr Ser
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<213> Mus musculus
<400> 27
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 28
Asn Trp Ile Asp Val Arg Tyr Asp Leu Glu Lys Ile Glu Ser Leu Ile
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Gln Ser Ile His Ile Asp Thr Thr Leu Tyr Thr Asp Ser Asp Phe His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Asn Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Leu His Glu Tyr Ser Asn Met Thr Leu Asn Glu Thr Val Arg
50 55 60
Asn Val Leu Tyr Leu Ala Asn Ser Thr Leu Ser Ser Asn Lys Asn Val
65 70 75 80
Ala Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Thr Phe
85 90 95
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Thr Ser
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<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 29
aactggatag atgtaagata tgacctggag aaaattgaaa gccttattca atctattcat 60
attgacacca ctttatacac tgacagtgac tttcatccca gttgcaaagt tactgcaatg 120
aactgctttc tcctggaatt gcaggttatt ttacatgagt acagtaacat gactcttaat 180
gaaacagtaa gaaacgtgct ctaccttgca aacagcactc tgtcttctaa caagaatgta 240
gcagaatctg gctgcaagga atgtgaggag ctggaggaga aaaccttcac agagtttttg 300
caaagcttta tacgcattgt ccaaatgttc atcaacacgt cc 342
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp
1 5 10 15
Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser Gln
20 25 30
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35 40 45
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100 105 110
Phe Asp Leu Ser Val Val Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val
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Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met
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His Asp Val Ala Tyr Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His
145 150 155 160
Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu Gln
165 170 175
Pro Ala Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro Asp His Tyr
180 185 190
Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr
195 200 205
Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro Ile Leu Leu Thr
210 215 220
Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala
225 230 235 240
Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
260 265 270
Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
275 280 285
His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu
290 295 300
Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
305 310 315 320
Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
325 330 335
Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
340 345 350
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
355 360 365
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
370 375 380
Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
385 390 395 400
Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
405 410 415
Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
420 425 430
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
435
<210> 31
<211> 1317
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 31
gaaagtggct atgctcaaaa tggagacttg gaagatgcag aactggatga ctactcattc 60
tcatgctata gccagttgga agtgaatgga tcgcagcact cactgacctg tgcttttgag 120
gacccagatg tcaacatcac caatctggaa tttgaaatat gtggggccct cgtggaggta 180
aagtgcctga atttcaggaa actacaagag atatatttca tcgagacaaa gaaattctta 240
ctgattggaa agagcaatat atgtgtgaag gttggagaaa agagtctaac ctgcaaaaaa 300
atagacctaa ccactatagt taaacctgag gctccttttg acctgagtgt cgtctatcgg 360
gaaggagcca atgactttgt ggtgacattt aatacatcac acttgcaaaa gaagtatgta 420
aaagttttaa tgcacgatgt agcttaccgc caggaaaagg atgaaaacaa atggacgcat 480
gtgaatttat ccagcacaaa gctgacactc ctgcagagaa agctccaacc ggcagcaatg 540
tatgagatta aagttcgatc catccctgat cactatttta aaggcttctg gagtgaatgg 600
agtccaagtt attacttcag aactccagag atcaataata gctcagggga gatggatcct 660
atcttactaa ccatcagcat tttgagtttt ttctctgtcg ctctgttggt catcttggcc 720
tgtgtgttat ggaaaaaaag gattaagcct atcgtatggc ccagtctccc cgatcataag 780
aagactctgg aacatctttg taagaaacca agaaaaaatt taaatgtgag tttcaatcct 840
gaaagtttcc tggactgcca gattcatagg gtggatgaca ttcaagctag agatgaagtg 900
gaaggttttc tgcaagatac gtttcctcag caactagaag aatctgagaa gcagaggctt 960
ggaggggatg tgcagagccc caactgccca tctgaggatg tagtcatcac tccagaaagc 1020
tttggaagag attcatccct cacatgcctg gctgggaatg tcagtgcatg tgacgcccct 1080
attctctcct cttccaggtc cctagactgc agggagagtg gcaagaatgg gcctcatgtg 1140
taccaggacc tcctgcttag ccttgggact acaaacagca cgctgccccc tccattttct 1200
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<210> 32
<211> 439
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 32
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
1 5 10 15
Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
20 25 30
His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
35 40 45
Leu Glu Phe Gln Ile Cys Gly Ala Leu Leu Arg Val Lys Cys Leu Thr
50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
His Asp Val Ala Tyr Arg Pro Ala Arg Gly Glu Ser Asn Trp Thr His
145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp Pro Val Leu Pro Ser
210 215 220
Val Thr Ile Leu Ser Leu Phe Ser Val Phe Leu Leu Val Ile Leu Ala
225 230 235 240
His Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Val Val Trp Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu Gln Leu Cys Lys Lys Pro Lys Thr
260 265 270
Ser Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
275 280 285
His Glu Val Lys Gly Val Glu Ala Arg Asp Glu Val Glu Ser Phe Leu
290 295 300
Pro Asn Asp Leu Pro Ala Gln Pro Glu Glu Leu Glu Thr Gln Gly His
305 310 315 320
Arg Ala Ala Val His Ser Ala Asn Arg Ser Pro Glu Thr Ser Val Ser
325 330 335
Pro Pro Glu Thr Val Arg Arg Glu Ser Pro Leu Arg Cys Leu Ala Arg
340 345 350
Asn Leu Ser Thr Cys Asn Ala Pro Pro Leu Leu Ser Ser Arg Ser Pro
355 360 365
Asp Tyr Arg Asp Gly Asp Arg Asn Arg Pro Pro Val Tyr Gln Asp Leu
370 375 380
Leu Pro Asn Ser Gly Asn Thr Asn Val Pro Val Pro Val Pro Gln Pro
385 390 395 400
Leu Pro Phe Gln Ser Gly Ile Leu Ile Pro Val Ser Gln Arg Gln Pro
405 410 415
Ile Ser Thr Ser Ser Val Leu Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
420 425 430
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Lys
435
<210> 33
<211> 1317
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 33
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gactcagaca tcaacacagc taatctggaa tttcaaatat gtggggctct tttacgagtg 180
aaatgcctaa ctcttaacaa gctgcaagat atatatttta taaagacatc agaattctta 240
ctgattggta gcagcaatat atgtgtgaag cttggacaaa agaatttaac ttgcaaaaat 300
atggctataa acacaatagt taaagccgag gctccctctg acctgaaagt cgtttatcgc 360
aaagaagcaa atgatttttt ggtgacattt aatgcacctc acttgaaaaa gaaatattta 420
aaaaaagtaa agcatgatgt ggcctaccgc ccagcaaggg gtgaaagcaa ctggacgcat 480
gtatctttat tccacacaag aacaacaatc ccacagagaa aactacgacc aaaagcaatg 540
tatgaaatca aagtccgatc cattccccat aacgattact tcaaaggctt ctggagcgag 600
tggagtccaa gttctacctt cgaaactcca gaacccaaga atcaaggagg atgggatcct 660
gtcttgccaa gtgtcaccat tctgagtttg ttctctgtgt ttttgttggt catcttagcc 720
catgtgctat ggaaaaaaag gattaaacct gtcgtatggc ctagtctccc cgatcataag 780
aaaactctgg aacaactatg taagaagcca aaaacgagtc tgaatgtgag tttcaatccc 840
gaaagtttcc tggactgcca gattcatgag gtgaaaggcg ttgaagccag ggacgaggtg 900
gaaagttttc tgcccaatga tcttcctgca cagccagagg agttggagac acagggacac 960
agagccgctg tacacagtgc aaaccgctcg cctgagactt cagtcagccc accagaaaca 1020
gttagaagag agtcaccctt aagatgcctg gctagaaatc tgagtacctg caatgcccct 1080
ccactccttt cctctaggtc ccctgactac agagatggtg acagaaatag gcctcctgtg 1140
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ttgcctttcc agtcgggaat cctgatacca gtttctcaga gacagcccat ctccacttcc 1260
tcagtactga atcaagaaga agcgtatgtc accatgtcta gtttttacca aaacaaa 1317
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 34
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
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Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
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His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
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Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
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Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
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Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
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145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp Pro Val Leu Pro Ser
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Val Thr Ile Leu Ser Leu Phe Ser Val Phe Leu Leu Val Ile Leu Ala
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His Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Val Val Trp Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu Gln Leu
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<212> DNA
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<213> Homo sapiens
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Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
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<211> 62
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
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Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
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<212> PRT
<213> Mus musculus
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Cys Pro Pro Pro Val Ser Ile Glu His Ala Asp Ile Arg Val Lys Asn
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Tyr Ser Val Asn Ser Arg Glu Arg Tyr Val Cys Asn Ser Gly Phe Lys
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Arg Lys Ala Gly Thr Ser Thr Leu Ile Glu Cys Val Ile Asn Lys Asn
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Cys Pro Pro Pro Val Ser Ile Glu His Ala Asp Ile Arg Val Lys Asn
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Tyr Ser Val Asn Ser Arg Glu Arg Tyr Val Cys Asn Ser Gly Phe Lys
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Arg Lys Ala Gly Thr Ser Thr Leu Ile Glu Cys Val Ile Asn Lys Asn
35 40 45
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<212> PRT
<213> Gallus gallus
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Cys Pro Arg Leu Ser Thr Thr Glu Phe Ala Asp Val Ala Ala Glu Thr
1 5 10 15
Tyr Pro Leu Lys Thr Lys Leu Arg Tyr Glu Cys Asp Ser Gly Tyr Arg
20 25 30
Arg Arg Ser Gly Asn Thr Leu Thr Ile Arg Cys Gln Asn Val Ser Gly
35 40 45
Thr Ala Ser Trp Val His Asp Glu Leu Val Cys
50 55
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<211> 175
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 41
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val
65 70 75 80
Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly
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Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr
100 105 110
Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro
115 120 125
Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser
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His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr
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<211> 25
<212> PRT
<213> Mus musculus
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Pro Val Leu Pro Ser Val Thr Ile Leu Ser Leu Phe Ser Val Phe Leu
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Leu Val Ile Leu Ala His Val Leu Trp
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<400> 43
000
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<213> Macaca fascicularis
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys
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Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val
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Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Arg Val Asp
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Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe
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100 105 110
Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu
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Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu
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Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly
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Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser
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Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr
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Lys Lys Arg Ile Lys Pro Val Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys
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Lys Thr Leu Glu Gln Leu Cys Lys Lys Pro Lys Thr Ser Leu Asn Val
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Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Glu Val Lys
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Gly Val Glu Ala Arg Asp Glu Val Glu Ser Phe Leu Pro Asn Asp Leu
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Pro Ala Gln Pro Glu Glu Leu Glu Thr Gln Gly His Arg Ala Ala Val
65 70 75 80
His Ser Ala Asn Arg Ser Pro Glu Thr Ser Val Ser Pro Pro Glu Thr
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Gly Asp Arg Asn Arg Pro Pro Val Tyr Gln Asp Leu Leu Pro Asn Ser
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Gly Asn Thr Asn Val Pro Val Pro Val Pro Gln Pro Leu Pro Phe Gln
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Ser Gly Ile Leu Ile Pro Val Ser Gln Arg Gln Pro Ile Ser Thr Ser
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Ser Val Leu Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr
180 185 190
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Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
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Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Ser
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
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Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
20
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Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
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Lys Gly
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<400> 56
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
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<211> 75
<212> DNA
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ggcggtggtg gttctggagg cggtggcagc ggtggaggtg gctcaggagg aggaggtagc 60
ggcggcggag ggagt 75
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<213> Homo sapiens
<400> 58
Ala Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
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165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Lys Asp
225 230
<210> 59
<211> 46
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 59
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
35 40 45
<210> 60
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 60
Ala Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
Lys Asp Pro Lys
20
<210> 61
<211> 220
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 61
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 62
<211> 164
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
100 105 110
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
145 150 155 160
Leu Pro Pro Arg
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<211> 23
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 63
Leu Gly Leu Leu Val Ala Gly Val Leu Val Leu Leu Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Val Ala Ile His Leu Cys Cys
20
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<211> 26
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 64
Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro
1 5 10 15
Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
20 25
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 65
Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly
1 5 10 15
Leu Gly Ile Phe Phe Cys Val Arg Cys
20 25
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<211> 23
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu
1 5 10 15
Thr Ala Leu Phe Leu Arg Val
20
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<211> 26
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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1 5 10 15
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 68
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
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<211> 24
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 69
Ala Leu Pro Ala Ala Leu Ala Val Ile Ser Phe Leu Leu Gly Leu Gly
1 5 10 15
Leu Gly Val Ala Cys Val Leu Ala
20
<210> 70
<211> 220
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 70
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
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50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
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Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
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Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
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Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 71
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 71
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Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
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Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
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Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
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Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
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<211> 164
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 72
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
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Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
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Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
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Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
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Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
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Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
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Leu Pro Pro Arg
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 73
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
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65 70 75 80
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Arg
<210> 74
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 74
ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag 60
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 75
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Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
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Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
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Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Lys Asp
225 230
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<211> 46
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<213> Homo sapiens
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Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
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<213> Homo sapiens
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gtgatcctgg cctgcgtgct gtgg 84
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<213> Homo sapiens
<400> 81
atgctcctgc tcgtgacttc acttcttctc tgtgaactcc cacaccccgc gtttttgctt 60
atccct 66
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 82
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cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg 120
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caggaggagg cctacgtgac catgagcagc ttctaccaga accags 586
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<221> source
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Exemplary chimeric transmembrane protein sequence"
<400> 83
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
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Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
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Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
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Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
305 310 315 320
Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val
325 330 335
Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp
340 345 350
Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys
355 360 365
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Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys
435 440 445
Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser
450 455 460
Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr
465 470 475 480
Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro
485 490 495
Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln
500 505 510
Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr
515 520 525
Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 84
<211> 1614
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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Exemplary chimeric transmembrane sequence"
<400> 84
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgacc 960
tgccccacca tcagcatcct gagcttcttc agcgtggccc tgctggtgat cctggcctgc 1020
gtgctgtgga agaagaggat caagcccatc gtgtggccca gcctgcccga ccacaagaag 1080
accctggagc acctgtgtaa gaagcccagg aagaacctga acgtgagctt caaccccgag 1140
agcttcctgg actgccagat ccacagggtg gacgacatcc aggccaggga cgaggtggag 1200
ggcttcctgc aggacacctt cccccagcag ctggaggaga gcgagaagca gaggctgggc 1260
ggcgacgtgc agagccccaa ctgccccagc gaggacgtgg tgatcacccc cgagagcttc 1320
ggcagggaca gcagcctgac ctgcctggcc ggcaacgtga gcgcctgcga cgcccccatc 1380
ctgagcagca gcaggagcct ggactgcagg gagagcggca agaacggccc ccacgtgtac 1440
caggacctgc tgctgagcct gggcaccacc aacagcaccc tgccaccccc cttcagcctg 1500
cagagcggca tcctgaccct gaaccccgtg gcccagggcc agcccatcct gaccagcctg 1560
ggcagcaacc aggaggaggc ctacgtgacc atgagcagct tctaccagaa ccag 1614
<210> 85
<211> 538
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Exemplary chimeric transmembrane protein sequence"
<400> 85
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Met
305 310 315 320
Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val
325 330 335
Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp
340 345 350
Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys
355 360 365
Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp
370 375 380
Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu
385 390 395 400
Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys
405 410 415
Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp
420 425 430
Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys
435 440 445
Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser
450 455 460
Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr
465 470 475 480
Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro
485 490 495
Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln
500 505 510
Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr
515 520 525
Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 86
<211> 1614
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Exemplary chimeric transmembrane sequence"
<400> 86
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
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gtgctgtgga agaagaggat caagcccatc gtgtggccca gcctgcccga ccacaagaag 1080
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ctgagcagca gcaggagcct ggactgcagg gagagcggca agaacggccc ccacgtgtac 1440
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Exemplary chimeric transmembrane protein sequence"
<400> 87
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
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20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
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305 310 315 320
Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys Ala Val Ile Leu Ala
325 330 335
Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
340 345 350
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
355 360 365
Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
370 375 380
His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu
385 390 395 400
Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
405 410 415
Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
420 425 430
Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
435 440 445
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
450 455 460
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
465 470 475 480
Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
485 490 495
Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
500 505 510
Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
515 520 525
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
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<211> 1605
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<221> source
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Exemplary chimeric transmembrane sequence"
<400> 88
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
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acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
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gactgccaga tccacagggt ggacgacatc caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg 1200
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atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac 1560
caggaggagg cctacgtgac catgagcagc ttctaccaga accag 1605
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<211> 535
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Exemplary chimeric transmembrane protein sequence"
<400> 89
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
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35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
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Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
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130 135 140
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Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
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180 185 190
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Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
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Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
305 310 315 320
Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys Val Val Ile Leu Ala
325 330 335
Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
340 345 350
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
355 360 365
Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
370 375 380
His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu
385 390 395 400
Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
405 410 415
Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
420 425 430
Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
435 440 445
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
450 455 460
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
465 470 475 480
Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
485 490 495
Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
500 505 510
Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
515 520 525
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 90
<211> 1605
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Exemplary chimeric transmembrane sequence"
<400> 90
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
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caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgacc 960
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<211> 26
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<213> Artificial Sequence
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<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Linker sequence"
<400> 92
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln
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<210> 93
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 93
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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Anti-CD19 scFv sequence"
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
195 200 205
Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
210 215 220
Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210> 96
<211> 726
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Anti-CD19 scFv sequence"
<400> 96
gacatccaga tgacccagac caccagcagc ctgagcgcca gcctgggcga tagagtgacc 60
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agattttctg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
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ggcaccaagc tggaaatcac aggcggcgga ggatctggcg gaggcggaag tggcggaggg 360
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cagcccccca gaaagggcct ggaatggctg ggagtgatct ggggcagcga gacaacctac 540
tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc atcatcaagg acaactccaa gagccaggtg 600
ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac gacaccgcca tctactactg cgccaagcac 660
tactactacg gcggcagcta cgccatggac tactggggcc agggcacaag cgtgaccgtg 720
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<213> Homo sapiens
<400> 97
Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys
1 5 10 15
His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp
20 25 30
Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val
35 40 45
Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
50 55
<210> 98
<211> 171
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 98
ctagacaatg agaagagcaa tggaaccatt atccatgtga aagggaaaca cctttgtcca 60
agtcccctat ttcccggacc ttctaagccc ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc 120
ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg gcctttatta ttttctgggt g 171
<210> 99
<211> 123
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 99
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 100
<211> 1396
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
CD19 CAR DNA sequence"
<400> 100
gaacagaagc tgataagtga ggaggacttg gacatccaga tgacccagac caccagcagc 60
ctgagcgcca gcctgggcga tagagtgacc atcagctgca gagccagcca ggacatcagc 120
aagtacctga actggtatca gcagaaaccc gacggcaccg tgaagctgct gatctaccac 180
accagcagac tgcacagcgg cgtgcccagc agattttctg gcagcggctc cggcaccgac 240
tacagcctga ccatctccaa cctggaacag gaagatatcg ctacctactt ctgtcagcaa 300
ggcaacaccc tgccctacac cttcggcgga ggcaccaagc tggaaatcac aggcggcgga 360
ggatctggcg gaggcggaag tggcggaggg ggatctgaag tgaaactgca ggaaagcggc 420
cctggcctgg tggccccatc tcagtctctg agcgtgacct gtaccgtgtc cggcgtgtcc 480
ctgcctgact atggcgtgtc ctggatcaga cagcccccca gaaagggcct ggaatggctg 540
ggagtgatct ggggcagcga gacaacctac tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc 600
atcatcaagg acaactccaa gagccaggtg ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac 660
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tactggggcc agggcacaag cgtgaccgtg tctagcgggt ccctagacaa tgagaagagc 780
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Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro His
515 520 525
His His His His His Gly Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu
530 535 540
Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser Gln Leu
545 550 555 560
Glu Val Asn Gly Ser Gln His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro
565 570 575
Asp Val Asn Ile Thr Asn Leu Glu Phe Glu Ile Cys Gly Ala Leu Val
580 585 590
Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu Gln Glu Ile Tyr Phe Ile
595 600 605
Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu Ile Gly Lys Ser Asn Ile Cys Val Lys
610 615 620
Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys Ile Asp Leu Thr Thr Ile
625 630 635 640
Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val Val Tyr Arg Glu Gly
645 650 655
Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gln Lys Lys
660 665 670
Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gln Glu Lys Asp
675 680 685
Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu
690 695 700
Leu Gln Arg Lys Leu Gln Pro Ala Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg
705 710 715 720
Ser Ile Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro
725 730 735
Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met
740 745 750
Asp Pro Ile Leu Leu Met Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe
755 760 765
Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg
770 775 780
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785 790 795 800
Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn
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820 825 830
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Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro
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Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
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Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Leu Asp
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260 265 270
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275 280 285
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340 345 350
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485 490 495
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500 505 510
Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro His
515 520 525
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530 535 540
Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser Gln Leu
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Glu Val Asn Gly Ser Gln His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro
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Asp Val Asn Ile Thr Asn Leu Glu Phe Glu Ile Cys Gly Ala Leu Val
580 585 590
Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu Gln Glu Ile Tyr Phe Ile
595 600 605
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610 615 620
Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys Ile Asp Leu Thr Thr Ile
625 630 635 640
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675 680 685
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Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met
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885 890 895
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Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn
965 970 975
Gln
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atcaactgca agagcagcca gagcctcctc tacagcagca accagaagaa ctatttagct 120
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gagagcggcg tgcccgatag attcagcgga agcggctccg gcacagattt caccctcacc 240
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cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa 960
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ctgctggtga tcctggcctg cgtgctgtgg aagaagagga tcaagcccat cgtgtggccc 2340
agcctgcccg accacaagaa gaccctggag cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg 2400
aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg gactgccaga tccacagggt ggacgacatc 2460
caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg caggacacct tcccccagca gctggaggag 2520
agcgagaagc agaggctggg cggcgacgtg cagagcccca actgccccag cgaggacgtg 2580
gtgatcaccc ccgagagctt cggcagggac agcagcctga cctgcctggc cggcaacgtg 2640
agcgcctgcg acgcccccat cctgagcagc agcaggagcc tggactgcag ggagagcggc 2700
aagaacggcc cccacgtgta ccaggacctg ctgctgagcc tgggcaccac caacagcacc 2760
ctgccacccc ccttcagcct gcagagcggc atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc 2820
cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac caggaggagg cctacgtgac catgagcagc 2880
ttctaccaga accag 2895
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
145 150 155 160
Asn Lys Asn Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Asn Lys Thr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
195 200 205
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ala Gly Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro
245 250 255
Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
260 265 270
Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
275 280 285
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
290 295 300
Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys
305 310 315 320
Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
325 330 335
Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
340 345 350
Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
355 360 365
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
370 375 380
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
385 390 395 400
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
405 410 415
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
420 425 430
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
450 455 460
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly
465 470 475 480
Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Leu
485 490 495
Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe
500 505 510
Leu Leu Ile Pro His His His His His His Gly Glu Ser Gly Tyr Ala
515 520 525
Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser
530 535 540
Cys Tyr Ser Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser Gln His Ser Leu Thr Cys
545 550 555 560
Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Ile Thr Asn Leu Glu Phe Glu Ile
565 570 575
Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu Gln
580 585 590
Glu Ile Tyr Phe Ile Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu Ile Gly Lys Ser
595 600 605
Asn Ile Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys Ile
610 615 620
Asp Leu Thr Thr Ile Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val
625 630 635 640
Val Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser
645 650 655
His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr
660 665 670
Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser
675 680 685
Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu Gln Pro Ala Ala Met Tyr
690 695 700
Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp
705 710 715 720
Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu Ile Asn Asn
725 730 735
Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser
740 745 750
Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val
755 760 765
Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp
770 775 780
His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys Asn Leu
785 790 795 800
Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Arg
805 810 815
Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp
820 825 830
Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly
835 840 845
Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro
850 855 860
Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val
865 870 875 880
Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys
885 890 895
Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu
900 905 910
Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln
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Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu
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Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser
945 950 955 960
Phe Tyr Gln Asn Gln
965
Claims (20)
1개 이상의 변형을 갖는 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 막횡단 도메인을 포함하는 단백질이며, 여기서 1개 이상의 변형을 갖는 막횡단 도메인은 서열식별번호: 2, 4, 6 또는 8의 서열을 갖는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포내 도메인을 추가로 포함하는 단백질.
제2항에 있어서, 세포내 도메인이 서열식별번호: 45의 서열을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 인터류킨-7 수용체의 알파 쇄의 세포외 도메인을 추가로 포함하는 단백질.
제4항에 있어서, 세포외 도메인이 서열식별번호: 11의 서열을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서,
세포외 인터류킨-15 도메인; 및
인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인
을 추가로 포함하는 단백질.
세포외 인터류킨-15 도메인; 및
인터류킨-15 수용체의 알파 쇄로부터의 세포외 스시 도메인
을 추가로 포함하는 단백질.
제6항에 있어서, 세포외 인터류킨-15 도메인이 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 24의 서열을 포함하는 것인 단백질.
제6항에 있어서, 인터류킨-15 수용체의 알파 쇄의 세포외 스시 도메인이 서열식별번호: 36 또는 서열식별번호: 37을 포함하는 것인 단백질.
제1항의 단백질을 코딩하는 핵산.
제9항의 핵산을 포함하는 벡터.
제10항에 있어서, 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터, 및 임의로, 핵산에 작동가능하게 연결된 인핸서 서열을 추가로 포함하는 벡터.
제10항에 있어서, 종양 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는 벡터.
제12항에 있어서, 종양 항원이 글리피칸-3, BCMA, MAGE, MUC16, CD19, WT-1, CD22, LI-CAM, ROR-1, CEA, 4-1BB, ETA, 5T4, 선암종 항원, 알파-태아단백질 (AFP), BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 탄산 안히드라제 9 (CA- IX), C-MET, CCR4, CD152, CD20, CD125 CD200, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNT0888, CTLA-4, DR5, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오시드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 ανβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 벡터.
제10항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 4-1BB, CD27, OX40, CD40, CD28, GITR, CD2, CD5, ICAM-1, CD11a, Lck, TNFR-I, TNFR-II, FasR, CD30, ICOS, LIGHT, NKG2C, B7-H3, DAP-10, 및 DAP-12로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 벡터.
제10항에 있어서, 렌티바이러스 또는 아데노바이러스 벡터인 벡터.
제10항의 벡터를 포함하는 포유동물 세포.
제16항에 있어서, 면역 세포인 포유동물 세포.
제17항에 있어서, 면역 세포가 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 단핵구, 자연 킬러 세포, 수지상 세포, 대식세포, 조절 T 세포, 및 헬퍼 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 포유동물 세포.
제10항의 벡터 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
제16항의 포유동물 세포를 포함하는 제약 조성물.
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