CN112368298A - 嵌合跨膜蛋白及其用途 - Google Patents
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Abstract
本文中提供了嵌合跨膜蛋白和蛋白质、编码这些嵌合跨膜蛋白或蛋白质的核酸和含有这些核酸的哺乳动物细胞、以及制备和使用这些哺乳动物细胞的方法。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年6月22日提交的美国临时专利申请序列号62/688,810的优先权；其全部内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包含序列表，其表已经以ASCII格式电子提交，并通过引用整体并入本文。所述ASCII副本于2019年6月21日创建，名为CDL-700.PF-43159-0072WO1_SL.txt，大小为176,317字节。
技术领域
本公开内容涉及生物技术领域，并且更特别地，涉及嵌合跨膜蛋白及其用途。
背景技术
白细胞介素-7(IL-7)受体在各种细胞类型(包括初始T细胞和记忆T细胞)的细胞表面(临时或永久)上表达。当与IL-7结合时，IL-7受体通过活化Janus激酶-JAK1和JAK3将信号转导到细胞中(Palmer等,Cell.Mol.Immunol.5(2):79-89,2008)。
尽管已经做出了许多改进以在第二代嵌合抗原受体(CAR)T细胞中产生次级增殖信号(通过在嵌合抗原受体中包含共刺激信号传导结构域，例如CD28和4-1BB)，但是该信号仍然存在在具有低肿瘤相关抗原水平的实体瘤中，抗原依赖性经常不具有足够的共刺激活性。
在为了在CAR T细胞中提供足够的共刺激活性的另一种尝试中，已采用属于共同的γ(γc)链受体家族的细胞因子的共施用。然而，重组的促增殖细胞因子(例如IL-2)的长期使用经常带来严重的副作用，限制了施用的持续时间和剂量。鉴于上述情况，期望用于向CAR T细胞提供共刺激信号的替代的改进方法。
发明内容
本公开内容至少部分地基于以下发现：包含白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的蛋白质，该跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW(SEQ ID NO：1)的序列，其具有一个或更多个(例如2、3或4个)以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代；(ii)在SEQID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸，与包含白细胞介素-7受体的α链的野生型跨膜结构域的相应蛋白质或包含SEQ ID NO：1的序列的相应蛋白质相比，所述蛋白质显示出增加的下游信号传导。代表性的经修饰的跨膜结构域具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
本公开内容还至少部分地基于以下发现：嵌合跨膜蛋白，其包含细胞外白细胞介素-15结构域；来自白细胞介素-15受体α链的细胞外sushi结构域；和来自白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域，为嵌合抗原受体(CAR)T细胞提供抗原非依赖性共刺激。
鉴于该发现，本文中提供了嵌合跨膜蛋白，其包括细胞外IL-15结构域、白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域和白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域。还提供了包含白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的蛋白质，该跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW(SEQ ID NO：1)的序列，其具有一个或更多个(例如2、3或4个)以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代；(ii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。代表性的经修饰的跨膜结构域具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
还提供了编码这些嵌合跨膜蛋白或这些蛋白质的核酸、包含这些核酸中任一种的载体以及包含这些核酸或载体中任一种或的哺乳动物细胞。本文中还提供了治疗癌症的方法、在癌细胞中诱导细胞死亡(例如，细胞凋亡和/或坏死)的方法以及在有此需要的受试者中降低发展转移或另外的转移的风险的方法，这些方法包括向受试者施用本文所述的哺乳动物细胞中任一种。
在一些实施方案中，本文中提供了包含白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的蛋白质，其中该跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW(SEQ ID NO：1)的序列，其具有一个或更多个以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代；(ii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。代表性的经修饰的跨膜结构域具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
在一些实施方案中，该蛋白质还包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型α链，例如但不限于白细胞介素-7受体的野生型人α链)。在一些实施方案中，该蛋白质还包含细胞内结构域，其包含SEQ ID NO：45的序列或与白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQID NO：45)的序列至少80％相同的序列。在一些实施方案中，细胞内结构域与SEQ ID NO：45至少90％或95％相同。在一些实施方案中，该蛋白质还包含白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域，其具有以下中的一种或两种：(i)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQ ID NO：45)的序列的N-末端中缺失1至10个氨基酸和(ii)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQ ID NO：45)的序列的N-末端中缺失1至10个氨基酸。
在一些实施方案中，该蛋白质还包含白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型α链，例如但不限于白细胞介素-7受体的野生型人α链)。在一些实施方案中，该蛋白质还包含细胞外结构域，其包含SEQ ID NO：11的序列或与白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQ ID NO：11)的序列至少80％相同的序列。在一些实施方案中，细胞外结构域与SEQ IDNO：11至少90％或95％相同。在一些实施方案中，该蛋白质还包含白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域，其具有以下中的一种或两种：(i)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQ ID NO：11)的序列的N-末端中缺失1至10个氨基酸和(ii)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQ ID NO：11)的序列的N-末端中缺失1至10个氨基酸。
本文中还提供了编码本文所述的各种蛋白质中任一种的核酸。本文中还提供了包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的载体。在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的载体包含与该核酸可操作地连接的启动子，以及任选的与该核酸可操作地连接的增强子序列。在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的载体包含与该核酸可操作地连接的多聚(A)序列。在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的载体是慢病毒载体或腺病毒载体。
在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的载体包含编码嵌合抗原受体的序列。在一些实施方案中，嵌合抗原受体与肿瘤抗原特异性结合(例如，肿瘤抗原选自：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-甲胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125 CD200、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合蛋白α5β1、整合蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羟乙酰神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白)。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含一种或更多种选自以下的共刺激信号传导结构域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10和DAP-12。
本文中还提供了哺乳动物细胞，其包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的各种核酸中的任一种或包含本文所述的此类核酸的载体。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞选自：CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、调节T细胞和辅助性T细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的哺乳动物细胞的子细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是人细胞。
本文中还提供了包含各种载体中任一种和药学上可接受的载剂的药物组合物，该载体包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸。本文中还提供了包含各种哺乳动物细胞中任一种的药物组合物，该哺乳动物细胞包含含有编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的载体。
本文中还提供了包含第一载体和第二载体的载体组，该第一载体包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸，该第二载体包含编码嵌合抗原受体的序列。在此类载体组的一些实施方案中，嵌合抗原受体与肿瘤抗原特异性结合(例如，肿瘤抗原选自：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-甲胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125 CD200、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合蛋白α5β1、整合蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羟乙酰神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、SCH900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白)。在此类载体组的一些实施方案中，嵌合抗原受体包含一个或更多个选自以下的共刺激信号传导结构域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10和DAP-12。在此类载体组的一些实施方案中，第一载体和第二载体二者都是慢病毒载体或腺病毒载体。在本文中提供的此类载体组的一些实施方案中，第二载体还包含与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的启动子，以及任选的与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的增强子。在此类载体组的一些实施方案中，第二载体还包含与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的多聚(A)序列。
本文中还提供了哺乳动物细胞，其包含本文中提供的各种载体组中的任一种，该载体组包含第一载体和第二载体，该第一载体包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸，该第二载体包含编码嵌合抗原受体的序列。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞选自：CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、调节T细胞和辅助性T细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的哺乳动物细胞的子细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是人细胞。
本文中还提供了药物组合物，其包含本文中提供的各种载体组中的任一种(例如，包含第一载体和第二载体的载体组，该第一载体包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸，该第二载体包含编码嵌合抗原受体的序列)和药学上可接受的载剂。本文中还提供了药物组合物，其包含各种哺乳动物细胞中的任一种，该哺乳动物细胞包含此类载体组。
本文中还提供了嵌合跨膜蛋白，其包含：细胞外白细胞介素-15结构域；和来自白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域；和来自白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域。在一些实施方案中，细胞外白细胞介素-15结构域包含野生型白细胞介素-15蛋白的序列。在一些实施方案中，野生型白细胞介素-15蛋白是野生型人白细胞介素-15蛋白(例如，具有SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24的序列的野生型人白细胞介素-15蛋白)。在一些实施方案中，细胞外白细胞介素-15结构域包含与野生型白细胞介素-15蛋白(例如，野生型人白细胞介素-15蛋白，例如但不限于具有SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24的序列的野生型人白细胞介素-15蛋白)的序列至少80％相同的序列。在一些实施方案中，细胞外白细胞介素-15结构域包含与野生型白细胞介素-15蛋白(例如，野生型人白细胞介素-15蛋白，例如但不限于具有SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24的序列的野生型人白细胞介素-15蛋白)的序列至少95％相同的序列。在一些实施方案中，细胞外白细胞介素-15结构域是野生型白细胞介素-15蛋白的序列，其具有以下中的一种或两种：(i)从野生型白细胞介素-15蛋白(例如，野生型人白细胞介素-15蛋白，例如但不限于具有SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24的序列的野生型人白细胞介素-15蛋白)的序列的N-末端移除1至10个氨基酸，和(ii)从野生型白细胞介素-15蛋白(例如，野生型人白细胞介素-15蛋白，例如但不限于具有SEQ ID NO：22或SEQ IDNO：24的序列的野生型人白细胞介素-15蛋白)的序列的C-末端移除1至10个氨基酸。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白还包含位于细胞外白细胞介素-15结构域与细胞外sushi结构域之间的接头序列。在一些实施方案中，接头序列为约2个氨基酸至约50个氨基酸。在一些实施方案中，接头序列为约4个氨基酸至约40个氨基酸。在一些实施方案中，接头是天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头序列不是天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头序列包含SEQ ID NO：92的序列。在一些实施方案中，接头序列由SEQ ID NO：92的序列组成。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白还包含在细胞外sushi结构域与跨膜结构域之间的另外的接头序列。在一些实施方案中，另外的接头序列为约2个氨基酸至约50个氨基酸。在一些实施方案中，另外的接头序列为约4个氨基酸至约40个氨基酸。在一些实施方案中，另外的接头是天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，另外的接头序列不是天然存在的氨基酸序列。
在具有细胞外sushi结构域的嵌合跨膜蛋白的一些实施方案中，细胞外sushi结构域包含来自白细胞介素-15受体的野生型α链的sushi结构域。在一些实施方案中，白细胞介素-15受体的野生型α链是白细胞介素-15受体的野生型人α链。在一些实施方案中，白细胞介素-15受体的野生型人α链的细胞外sushi结构域包含SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：37。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域与白细胞介素-15受体的野生型α链(例如，白细胞介素-15受体的野生型人α链，例如但不限于具有SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：37的序列的白细胞介素-15受体的野生型人α链)的细胞外sushi结构域的序列至少80％相同。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域与白细胞介素-15受体的野生型α链(例如，白细胞介素-15受体的野生型人α链，例如但不限于具有SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：37的序列的白细胞介素-15受体的野生型人α链)的细胞外sushi结构域的序列至少95％相同。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域是白细胞介素-15受体的野生型α链的细胞外sushi结构域的序列，其具有以下中的一种或两种：(i)从白细胞介素-15受体的野生型α链(例如，白细胞介素-15受体的野生型人α链，例如但不限于具有SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：37的序列的白细胞介素-15受体的野生型人α链)的细胞外sushi结构域的序列的N-末端移除1至5个氨基酸，和(ii)从白细胞介素-15受体的野生型α链(例如，白细胞介素-15受体的野生型人α链，例如但不限于具有SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：37的序列的白细胞介素-15受体的野生型人α链)的细胞外sushi结构域的序列的C-末端移除1至5个氨基酸。
在具有来自白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的嵌合跨膜蛋白的一些实施例中，跨膜结构域包含来自白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的野生型α链是人白细胞介素-7受体的野生型α链。在一些实施方案中，人白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW的序列(SEQ ID NO：1)。在一些实施方案中，人白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW的序列(SEQ ID NO：1)，具有一个或更多个以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代；(ii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。代表性的经修饰的跨膜结构域具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。在一些实施方案中，跨膜结构域与白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域，例如但不限于具有SEQ ID NO：1的序列的人白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域)的序列至少80％相同。在一些实施方案中，跨膜结构域与白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域，例如但不限于具有SEQ ID NO：1的序列的人白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域)的序列至少95％相同。在一些实施方案中，跨膜结构域是白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域的序列，其具有以下中的一种或两种：(i)从白细胞介素-2受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，白细胞介素-2受体的野生型α链的跨膜结构域，例如但不限于具有SEQ ID NO：1的序列的人白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域)的序列的N-末端移除1至3个氨基酸，和(ii)从白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域，例如但不限于具有SEQ ID NO：1的序列的人白细胞介素-7受体的野生型α链的跨膜结构域)的序列的C-末端移除1至3个氨基酸。
在本文中提供的嵌合跨膜蛋白的一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白还包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链是白细胞介素-7受体的野生型α链。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的野生型α链是白细胞介素-7受体的野生型人α链。在一些实施方案中，细胞内结构域包含SEQ ID NO：45的序列。在一些实施方案中，细胞内结构域包含与白细胞介素-7的野生型α链的细胞内结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如SEQ ID NO：45)至少80％相同的序列。在一些实施方案中，细胞内结构域与SEQ ID NO：45至少90％或95％相同。在一些实施方案中，细胞内结构域是白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域的序列，其具有以下中的一种或两种：(i)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如，SEQ ID NO：45)的N-末端缺失1至10个氨基酸，和(ii)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链，例如，SEQ ID NO：45)的C-末端缺失1至10个氨基酸。
本文中还提供了编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的核酸。本文中还提供了包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸的载体。在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸的载体包含与该核酸可操作地连接的启动子，以及任选的与该核酸可操作地连接的增强子序列。在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸的载体包括与该核酸可操作地连接的多聚(A)序列。在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸的载体是慢病毒载体或腺病毒载体。
在一些实施方案中，包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸的载体包含编码嵌合抗原受体的序列。在一些实施方案中，嵌合抗原受体与肿瘤抗原特异性结合(例如，肿瘤抗原选自：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-甲胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125 CD200、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合蛋白α5β1、整合蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羟乙酰神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白)。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含一个或更多个选自以下的共刺激信号传导结构域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10和DAP-12。
本文还提供了哺乳动物细胞，其包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的各种核酸中的任一种，或包含本文所述的此类核酸中的载体。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞选自：CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、调节T细胞和辅助性T细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的哺乳动物细胞的子细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是人细胞。
本文中还提供了药物组合物，其包含包含各种载体中的任一种和药学上可接受的载剂，该载体包含编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸。本文中还提供了药物组合物，其包含包含各种哺乳动物细胞中的任一种，该哺乳动物细胞包含含有编码本文所述的各种嵌合跨膜蛋白中任一种的任何核酸的载体。
本文中还提供了包含第一载体和第二载体的载体组，该第一载体是包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸的任何载体，该第二载体包含编码嵌合抗原受体的序列。在此类载体组的一些实施方案中，嵌合抗原受体与肿瘤抗原特异性结合(例如，肿瘤抗原选自：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-甲胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125 CD200、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合蛋白α5β1、整合蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羟乙酰神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白)。在此类载体组的一些实施方案中，嵌合抗原受体包含一个或更多个选自以下的共刺激信号传导结构域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10和DAP-12。在此类载体组的一些实施方案中，第一载体和第二载体二者都是慢病毒载体或腺病毒载体。在此类载体组的一些实施方案中，第二载体还包含与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的启动子，以及任选的与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的增强子。在此类载体组的一些实施方案中，第二载体还包含与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的多聚(A)序列。
本文中还提供了哺乳动物细胞，其包含本文中提供的各种载体组中的任一种，该载体组包含第一载体和第二载体，该第一载体包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸，该第二载体包含编码嵌合抗原受体的序列。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，免免疫细胞选自：CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、调节T细胞和辅助性T细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的哺乳动物细胞的子细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是人细胞。
本文中还提供了药物组合物，其包含本文所述的各种载体组中的任一种(例如，包含第一载体和第二载体的载体组，该第一载体包含编码本文所述的各种蛋白质中任一种的任何核酸，该第二载体包含编码嵌合抗原受体的序列)和药学上可接受的载剂。本文中还提供了药物组合物，其包含各种哺乳动物细胞中的任一种，该哺乳动物细胞包括此类载体组。
本文中还提供了试剂盒，其包含本文所述的各种药物组合物中的任一种(例如，包含本文所述的各种载体或载体组中任一种的药物组合物)。
本文中还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括：施用治疗有效量的本文所述的各种哺乳动物细胞中的任一种(例如，包含本文所述的各种核酸、载体或载体组中任一种的哺乳动物细胞)。在一些实施方案中，受试者是人，并且哺乳动物细胞是人的。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的细胞的子细胞。
本文中还提供了在有此需要的受试者中减少实体瘤体积的方法，该方法包括：施用治疗有效量的本文所述的各种哺乳动物细胞中的任一种(例如，包含本文所述的各种核酸、载体或载体组中任一种的哺乳动物细胞)。在一些实施方案中，受试者是人，并且哺乳动物细胞是人的。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的细胞的子细胞。
本文中还提供了在有此需要的受试者中诱导癌细胞死亡的方法，该方法包括：施用治疗有效量的本文所述的各种哺乳动物细胞中的任一种(例如，包含本文所述的各种核酸、载体或载体组中任一种的哺乳动物细胞)。在一些实施方案中，受试者是人，并且哺乳动物细胞是人的。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的细胞的子细胞。
本文中还提供了在患有癌症的受试者中降低发展转移或另外的转移的风险的方法，该方法包括：施用治疗有效量的本文所述的各种哺乳动物细胞中的任一种(例如，包含本文所述的各种核酸、载体或载体组中任一种的哺乳动物细胞)。在一些实施方案中，受试者是人，并且哺乳动物细胞是人的。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者获得的，或者是先前从受试者获得的细胞的子细胞。
本文还提供了在免疫细胞中活化STAT5信号传导的方法，该方法包括将本文所述的各种核酸(例如，编码本文所述的各种蛋白质或嵌合跨膜蛋白中任一种的核酸)中任一种引入免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是从受试者获得的。在一些实施方案中，受试者已被鉴定为患有癌症。在一些实施方案中，免疫细胞选自：CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、调节T细胞和辅助性T细胞。
在名词之前使用术语“一个/一种”意指特定名词的“一个或更多个/一种或更多种”。例如，短语“哺乳动物细胞”意指“一个或更多个/一种或更多种哺乳动物细胞”。在一些实施例中，术语“一个/一种”可以意指特定名词的单个单元。
术语“嵌合抗原受体”和“CAR”在本文中可互换使用，并且是指能够触发或抑制免疫细胞活化的人工多模块分子，其通常但不排他地包含细胞外结构域(例如，配体/抗原结合结构域)、跨膜结构域和一种或更多种细胞内信号传导结构域。CAR分子及其衍生物(例如，CAR变体)描述于例如PCT申请号US2014/016527；Fedorov等,Sci Transl Med(2013)5(215):215ra172；Glienke等,Front Pharmacol(2015)6:21；Kakarla&Gottschalk,CancerJ(2014)20(2):151-5；Riddell等,Cancer J(2014)20(2):141-4；Pegram等,Cancer J(2014)20(2):127-33；Cheadle等,Immunol Rev(2014)257(1):91-106；Barrett等,AnnuRev Med(2014)65:333-47；Sadelain等,Cancer Discov(2013)3(4):388-98；Cartellieri等,J BiomedBiotechnol(2010)956304；其公开内容通过引用整体并入本文。CAR可以是单链嵌合抗原受体或多链嵌合抗原受体。
术语“跨膜结构域”意指包含至少一个连续氨基酸序列的多肽的结构域，当在哺乳动物细胞中表达时，其在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层。例如，跨膜结构域可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续的氨基酸序列，当在哺乳动物细胞中表达时，每个序列在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层。如本领域中已知的，跨膜结构域可以例如包含至少一个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)连续氨基酸序列(当在哺乳动物细胞中表达时，其在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层)，其在脂质双层中具有α-螺旋二级结构。在一些实施方案中，跨膜结构域可以包含两个或更多个连续氨基酸序列(当在哺乳动物细胞中表达时，每个序列在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层)，其在脂质双层中形成β-桶二级结构。跨膜结构域的非限制性实例在本文中描述。跨膜结构域的另外的实例是本领域已知的。
术语“抗原结合结构域”意指与靶抗原特异性结合的结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域可以由存在于单链多肽内的氨基酸形成。在另一些实例中，抗原结合结构域可以由存在于第一单链多肽内的氨基酸和存在于一种或更多种另外的单链多肽(例如，第二单链多肽)中的氨基酸形成。抗原结合结构域的非限制性实例在本文中描述，包括但不限于生长因子的scFv或配体结合结构域(LBD)。抗原结合结构域的其他实例是本领域已知的。
如本文所用，术语“抗原”通常是指被本文所述的抗原结合结构域特异性识别的结合伴侣。示例性抗原包括不同种类的分子，例如但不限于多肽和其肽片段、小分子、脂质、碳水化合物和核酸。可以通过抗原结合结构域中任一种特异性结合的一种或多种抗原的非限制性实例在本文中描述。可以通过抗原结合结构域中任一种特异性结合的一种或多种抗原的另外的他实例是本领域已知的。
术语“细胞内信号传导结构域”意指在免疫细胞(例如，T淋巴细胞)中表达的内源性信号传导跨膜多肽的细胞内信号传导结构域，其促进下游免疫细胞信号传导(例如，T细胞受体信号传导)和/或免疫细胞活化(例如，T细胞活化)。细胞内信号传导结构域的非限制性实例在本文中描述。细胞内信号传导结构域的另外的实例是本领域已知的。参见，例如Chen等,Nature Reviews Immunol.13:227-242,2013。
术语“基于免疫受体酪氨酸活化基序”或“ITAM”意指包含酪氨酸的4个氨基酸共有序列的氨基酸基序，酪氨酸被两个其他氨基酸(YxxL/I)与亮氨酸或异亮氨酸隔开。4个氨基酸共有序列中的酪氨酸残基在信号传导通路激酶(例如，淋巴细胞信号传导通路激酶)相互作用之后被磷酸化。ITAM的非限制性实例在本文中描述。ITAM的另外的实例是本领域已知的。
短语“癌症的治疗”意指在患有癌症的受试者中减少一种或更多种(例如，2、3、4或5种)癌症症状的数量、频率或严重性，减少受试者中存在的癌细胞和/或肿瘤的数量，和/或减少受试者中存在的一种或更多种实体瘤的大小。
如本文所用，“细胞外结构域”描述了当多肽在哺乳动物细胞(例如，人细胞)中表达时存在于细胞外空间中的多肽的一部分(例如，结构域)。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；另外，也可以使用本领域已知的合适方法和材料。材料、方法和实例仅是说明性的，并且不旨在限制。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献通过引用整体并入本文。在发生冲突的情况下，以本说明书包括定义为准。
根据以下详细描述和附图以及权利要求书，本发明的其他特征和优点将显而易见。
附图说明
图1是IL7Rα的示意图。ECD＝细胞外结构域。TMD＝跨膜结构域。ICD＝细胞内结构域。指示了相关区域、基序和氨基酸修饰。
图2是IL7Rα的示意图，其示出了相关基序和信号传导活化的机制。
图3是一组流式细胞术数据，其示出了经修饰的IL7Rα蛋白在原代T细胞表面的表达。所示数据来自活化后第6天。
图4是示例性嵌合跨膜蛋白的示意图。指示了相关基序以及信号传导活化的机制。IL15Rαsushi结构域由箭头指示。
图5是一组流式细胞术数据，其示出了嵌合跨膜蛋白在原代T细胞表面的表达。所示数据来自活化后第6天。
图6A是示出了当用慢病毒载体转导原代人T细胞以表达所示的一种特异性IL7Rα蛋白或一种特异性嵌合膜蛋白时，不同类型的CD8+T细胞的百分比的图。
图6B是一组两个流式细胞术数据图，其示出了在活化后第15天PD-1(左图)或CD25(右图)在原代人T细胞中的表达，在原代人T细胞中表达不同的IL7Rα突变蛋白和嵌合跨膜蛋白。
图7A是免疫印迹，其示出了未经转导或用编码所示的一种特异性IL7Rα蛋白或一种特异性嵌合膜蛋白的慢病毒转导的原代人T细胞中的磷酸化STAT5的水平。
图7B是一组两个柱状图，其示出了在活化后第15天在原代人T细胞中各种IL7Rα突变蛋白和嵌合跨膜蛋白的表达。
图8A示出了用于共感染原代T细胞的IL7Rα突变表达构建体和1928z嵌合抗原受体表达构建体的示意图。
图8B示意性地示出了1928z嵌合抗原受体与EKV或Ins_CPTIL7Rα突变蛋白、mbIL15-17RαIns_PPCL嵌合跨膜蛋白或mbIL15嵌合跨膜蛋白在T细胞表面共表达。
图8C是一组流式细胞术数据，其示出了1928z嵌合抗原受体、EKV或Ins_CPTIL7Rα突变蛋白、mbIL15-17RαIns_PPCL嵌合跨膜蛋白和mbIL15蛋白在原代T细胞表面的表达。所示数据来自活化后第6天。
图8D是一组两个图，其示出了表达mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL和mbIL15的细胞数量从培养的第6天到第14天减少，而在同一时期表达IL7Rα_EKV，IL7Rα_Ins_CPT和1928z嵌合抗原受体的细胞数量保持相对恒定。
图9是一组两个图，其示出了表达各种IL7Ra突变体和嵌合跨膜蛋白的CAR T细胞在活化后第14天保持较低的分化记忆表型。
图10是一组免疫印迹，其示出了在未转导或用编码具有或不具有CAR(1928z)的一种特异性IL7Rα蛋白或一种特异性嵌合跨膜蛋白的慢病毒载体转导的原代人T细胞中磷酸化STAT5和STAT3的水平以及BCL-XL的总蛋白水平。
图11A是示出了表达各种IL7Rα突变体的细胞的扩增的线形图，图11B是示出了在与Nalm6靶细胞连续接触21天后CAR-T细胞的倍数扩增的柱状图。图11A和11B一起示出了当以1:1比例的效应子与靶标(E:T)之比连续暴露于抗原时，与对照CAR相比，表达IL7Rα突变体的CAR T细胞显示优异的扩增。
图12A是示出了在基于荧光素酶的过夜杀伤测定中CD19+Nalm6 B细胞裂解百分比的线形图。
图12B是示出了在基于荧光素酶的过夜杀伤测定中CD19-K562细胞的裂解百分比的线形图。
图13是一组柱状图，其示出了表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在连续暴露于抗原后第14天保持较低的分化记忆表型。
图14A是示出了表达各种IL7Rα突变体的细胞的扩增的线形图，图14B是示出了在以1:3的E:T比单独与抗原接触21天后CAR-T细胞的倍数扩增的柱状图。图14A和14B一起示出了表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在单独暴露于靶标时显示出优于对照CAR的扩增。
图15是一组柱状图，其示出了表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在单独暴露于抗原后第14天保持较低的分化记忆表型。
图16是在IL2Rgammanull小鼠中随时间测量的通量(光子/秒)，该小鼠在第1天施用0.5x106Nalm6_luc细胞，然后施用0.1x106个细胞的未转导T细胞或携带仅CD19 CAR、CD19CAR+IL7RaCPT、CD19 CAR+IL7RaMCP或CD19 CAR+IL7RaPPCL的T细胞。所示数据为平均值+/-标准偏差。
图17是在NOD-SCID IL2Rgammanull小鼠中体重随时间的变化，该小鼠第1天施用0.5x106Nalm6_luc细胞，然后施用0.1x106个细胞的未转导T细胞或携带仅CD19 CAR、CD19CAR+IL7RaCPT、CD19 CAR+IL7RaMCP或CD19 CAR+IL7RaPPCL的T细胞。所示数据为平均值+/-标准偏差。
图18是在未转导T细胞或携带仅CD19 CAR、CD19 CAR+IL7RaCPT、CD19 CAR+IL7RaMCP或CD19 CAR+IL7RaPPCL的T细胞中pSTAT5a,b和pSTAT3的相对平均荧光强度(MFI)。将平均荧光不敏感数据与未转导T细胞中测量的平均荧光强度比较。
图19是示出了与来自美国模式培养物研究所(ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州)的Hep3B靶细胞共培养的GPC3 CAR阳性T细胞和GPC3 CAR+IL7Ra CPT阳性T细胞(T细胞与0.5x106Hep3B靶细胞共培养的0.5x106CAR T细胞)随时间的倍数扩增的图(如实施例9中所述)。
发明详述
本文中提供了包含白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的蛋白质，其中该跨膜结构域包含具有PILLTISILSFFSVALLVILACVLW的序列(SEQ ID NO：1)，具有一个或更多个(例如，2、3或4个)以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代；(ii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。代表性的经修饰的跨膜结构域具有SEQ IDNO：2、4、6或8的序列。
本文中还提供了嵌合跨膜蛋白，其包含细胞外IL-15结构域、来自白细胞介素-15受体α链的细胞外sushi结构域和白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域。
还提供了编码这些嵌合跨膜蛋白和蛋白质中任一种的核酸、包含这些核酸中任一种的载体以及包括这些核酸或载体中任一种的哺乳动物细胞。本文中还提供了治疗癌症的方法、在癌细胞中诱导细胞死亡(例如，细胞凋亡和/或坏死)的方法以及在有此需要的受试者中降低发展转移或另外的转移的风险的方法，这些方法包括向受试者施用本文所述的哺乳动物细胞中的任一种。
在没有外源细胞因子支持或抗原刺激的情况下，本文中提供的嵌合跨膜蛋白和蛋白质可用于维持CAR T细胞，从而提供T细胞刺激作用，而没有与长期施用细胞因子相关的剂量限制毒性，例如，可溶性重组IL-2。
本文中提供的嵌合跨膜蛋白、核酸、载体、哺乳动物细胞和方法的非限制性方面在下文描述，并且可以以任何组合使用而没有限制。这些嵌合跨膜蛋白、核酸、载体、哺乳动物细胞和方法的另外的方面是本领域已知的。包含白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的蛋白质
本文中提供了包含白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的蛋白质，其中该跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW(SEQ ID NO：1)的序列，其具有一个或更多个(例如2、3或4个)以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被被不同的3个氨基酸序列取代(例如，被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸)；(ii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入1至3个(例如1、2或3个)氨基酸(例如半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸)；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入1至4个(例如，1、2、3或4个)氨基酸(例如，脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸)。代表性的经修饰的跨膜结构域具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
在一些实施方案中，跨膜结构域包含SEQ ID NO：1的序列，其中在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代。在一些实施方案中，跨膜结构域包含SEQ ID NO：1的序列，其中在SEQ IDNO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸。在一些实施方案中，跨膜结构域包含SEQ ID NO：1的序列，其中在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。
在一些实施方案中，本文中提供的蛋白质(例如成熟蛋白或前体蛋白)可以为例如，约40个氨基酸至约800个氨基酸、约40个氨基酸至约750个氨基酸、约40个氨基酸至约700个氨基酸、约40个氨基酸至约650个氨基酸、约40个氨基酸至约600个氨基酸、约40个氨基酸至约550个氨基酸、约40个氨基酸至约500个氨基酸、约40个氨基酸至约450个氨基酸、约40个氨基酸至约400个氨基酸、约40个氨基酸至约350个氨基酸、约40个氨基酸至约300个氨基酸、约40个氨基酸至约250个氨基酸、约40个氨基酸至约200个氨基酸、约40个氨基酸至约180个氨基酸、约40个氨基酸至约160个氨基酸、约40个氨基酸至约140个氨基酸、约40个氨基酸至约120个氨基酸、约40个氨基酸至约100个氨基酸、约40个氨基酸至约80个氨基酸、约40个氨基酸至约60个氨基酸、约60个氨基酸至约800个氨基酸、约60个氨基酸至约750个氨基酸、约60个氨基酸至约700个氨基酸、约60个氨基酸至约650个氨基酸、约60个氨基酸至约600个氨基酸、约60个氨基酸至约550个氨基酸、约60个氨基酸至约500个氨基酸、约60个氨基酸至约450个氨基酸、约60个氨基酸至约400个氨基酸、约60个氨基酸至约350个氨基酸、约60个氨基酸至约300个氨基酸、约60个氨基酸至约250个氨基酸、约60个氨基酸至约200个氨基酸、约60个氨基酸至约180个氨基酸、约60个氨基酸至约160个氨基酸、约60个氨基酸至约140个氨基酸、约60个氨基酸至约120个氨基酸、约60个氨基酸至约100个氨基酸、约60个氨基酸至约80个氨基酸、约80个氨基酸至约800个氨基酸、约80个氨基酸至约750个氨基酸、约80个氨基酸至约700个氨基酸、约80个氨基酸至约650个氨基酸、约80个氨基酸至约600个氨基酸、约80个氨基酸至约550个氨基酸、约80个氨基酸至约500个氨基酸、约80个氨基酸至约450个氨基酸、约80个氨基酸至约400个氨基酸、约80个氨基酸至约350个氨基酸、约80个氨基酸至约300个氨基酸、约80个氨基酸至约250个氨基酸、约80个氨基酸至约200个氨基酸、约80个氨基酸至约180个氨基酸、约80个氨基酸至约160个氨基酸、约80个氨基酸至约140个氨基酸、约80个氨基酸至约120个氨基酸、约80个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约800个氨基酸、约100个氨基酸至约750个氨基酸、约100个氨基酸至约700个氨基酸、约100个氨基酸至约650个氨基酸、约100个氨基酸至约600个氨基酸、约100个氨基酸至约550个氨基酸、约100个氨基酸至约500个氨基酸、约100个氨基酸至约450个氨基酸、约100个氨基酸至约400个氨基酸、约100个氨基酸至约350个氨基酸、约100个氨基酸至约300个氨基酸、约100个氨基酸至约250个氨基酸、约100个氨基酸至约200个氨基酸、约100个氨基酸至约180个氨基酸、约100个氨基酸至约160个氨基酸、约100个氨基酸至约140个氨基酸、约100个氨基酸至约120个氨基酸、约120个氨基酸至约800个氨基酸、约120个氨基酸至约750个氨基酸、约120个氨基酸至约700个氨基酸、约120个氨基酸至约650个氨基酸、约120个氨基酸至约600个氨基酸、约120个氨基酸至约550个氨基酸、约120个氨基酸至约500个氨基酸、约120个氨基酸至约450个氨基酸、约120个氨基酸至约400个氨基酸、约120个氨基酸至约350个氨基酸、约120个氨基酸至约300个氨基酸、约120个氨基酸至约250个氨基酸、约120个氨基酸至约200个氨基酸、约120个氨基酸至约180个氨基酸、约120个氨基酸至约160个氨基酸、约120个氨基酸至约140个氨基酸、约140个氨基酸至约800个氨基酸、约140个氨基酸至约750个氨基酸、约140个氨基酸至约700个氨基酸、约140个氨基酸至约650个氨基酸、约140个氨基酸至约600个氨基酸、约140个氨基酸至约550个氨基酸、约140个氨基酸至约500个氨基酸、约140个氨基酸至约450个氨基酸、约140个氨基酸至约400个氨基酸、约140个氨基酸至约350个氨基酸、约140个氨基酸至约300个氨基酸、约140个氨基酸至约250个氨基酸、约140个氨基酸至约200个氨基酸、约140个氨基酸至约180个氨基酸、约140个氨基酸至约160个氨基酸、约160个氨基酸至约800个氨基酸、约160个氨基酸至约750个氨基酸、约160个氨基酸至约700个氨基酸、约160个氨基酸至约650个氨基酸、约160个氨基酸至约600个氨基酸、约160个氨基酸至约550个氨基酸、约160个氨基酸至约500个氨基酸、约160个氨基酸至约450个氨基酸、约160个氨基酸至约400个氨基酸、约160个氨基酸至约350个氨基酸、约160个氨基酸至约300个氨基酸、约160个氨基酸至约250个氨基酸、约160个氨基酸至约200个氨基酸、约160个氨基酸至约180个氨基酸、约180个氨基酸至约800个氨基酸、约180个氨基酸至约750个氨基酸、约180个氨基酸至约700个氨基酸、约180个氨基酸至约650个氨基酸、约180个氨基酸至约600个氨基酸、约180个氨基酸至约550个氨基酸、约180个氨基酸至约500个氨基酸、约180个氨基酸至约450个氨基酸、约180个氨基酸至约400个氨基酸、约180个氨基酸至约350个氨基酸、约180个氨基酸至约300个氨基酸、约180个氨基酸至约250个氨基酸、约180个氨基酸至约200个氨基酸、约200个氨基酸至约800个氨基酸、约200个氨基酸至约750个氨基酸、约200个氨基酸至约700个氨基酸、约200个氨基酸至约650个氨基酸、约200个氨基酸至约600个氨基酸、约200个氨基酸至约550个氨基酸、约200个氨基酸至约500个氨基酸、约200个氨基酸至约450个氨基酸、约200个氨基酸至约400个氨基酸、约200个氨基酸至约350个氨基酸、约200个氨基酸至约300个氨基酸、约200个氨基酸至约250个氨基酸、约250个氨基酸至约800个氨基酸、约250个氨基酸至约750个氨基酸、约250个氨基酸至约700个氨基酸、约250个氨基酸至约650个氨基酸、约250个氨基酸至约600个氨基酸、约250个氨基酸至约550个氨基酸、约250个氨基酸至约500个氨基酸、约250个氨基酸至约450个氨基酸、约250个氨基酸至约400个氨基酸、约250个氨基酸至约350个氨基酸、约250个氨基酸至约300个氨基酸、约300个氨基酸至约800个氨基酸、约300个氨基酸至约750个氨基酸、约300个氨基酸至约700个氨基酸、约300个氨基酸至约650个氨基酸、约300个氨基酸至约600个氨基酸、约300个氨基酸至约550个氨基酸、约300个氨基酸至约500个氨基酸、约300个氨基酸至约450个氨基酸、约300个氨基酸至约400个氨基酸、约300个氨基酸至约350个氨基酸、约350个氨基酸至约800个氨基酸、约350个氨基酸至约750个氨基酸、约350个氨基酸至约700个氨基酸、约350个氨基酸至约650个氨基酸、约350个氨基酸至约600个氨基酸、约350个氨基酸至约550个氨基酸、约350个氨基酸至约500个氨基酸、约350个氨基酸至约450个氨基酸、约350个氨基酸至约400个氨基酸、约400个氨基酸至约800个氨基酸、约400个氨基酸至约750个氨基酸、约400个氨基酸至约700个氨基酸、约400个氨基酸至约650个氨基酸、约400个氨基酸至约600个氨基酸、约400个氨基酸至约550个氨基酸、约400个氨基酸至约500个氨基酸、约400个氨基酸至约450个氨基酸、约450个氨基酸至约800个氨基酸、约450个氨基酸至约750个氨基酸、约450个氨基酸至约700个氨基酸、约450个氨基酸至约650个氨基酸、约450个氨基酸至约600个氨基酸、约450个氨基酸至约550个氨基酸、约450个氨基酸至约500个氨基酸、约500个氨基酸至约800个氨基酸、约500个氨基酸至约750个氨基酸、约500个氨基酸至约700个氨基酸、约500个氨基酸至约650个氨基酸、约500个氨基酸至约600个氨基酸、约500个氨基酸至约550个氨基酸、约550个氨基酸至约800个氨基酸、约550个氨基酸至约750个氨基酸、约550个氨基酸至约700个氨基酸、约550个氨基酸至约650个氨基酸、约550个氨基酸至约600个氨基酸、约600个氨基酸至约800个氨基酸、约600个氨基酸至约750个氨基酸、约600个氨基酸至约700个氨基酸、约600个氨基酸至约650个氨基酸、约650个氨基酸至约800个氨基酸、约650个氨基酸至约750个氨基酸、约650个氨基酸至约700个氨基酸、约700个氨基酸至约800个氨基酸、约700个氨基酸至约750个氨基酸或约750个氨基酸至约800个氨基酸。
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是SEQ ID NO：2(如下所示)。
示例性蛋白(SEQ ID NO：2)(IL7RA EKA蛋白，EKA序列加下划线)
PILLTISILSFFSVEKAVILACVLW
编码IL7RA EKA的核酸(SEQ ID NO：3，编码EKA序列的核酸序列加下划线)
cccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggtggtgatcctggcctgcgtgctgtgg
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是与SEQ ID NO：2至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，该蛋白质包含与SEQ ID NO：2相异1至20个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，本文中提供的蛋白质中的任一种还可以包含例如除了SEQ ID NO：2之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1个氨基酸至300个氨基酸、1个氨基酸至约250个氨基酸、1个氨基酸至约200个氨基酸、1个氨基酸至约150个氨基酸、1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约300个氨基酸、约5个氨基酸至约250个氨基酸、约5个氨基酸至约200个氨基酸、约5个氨基酸至约150个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约300个氨基酸、约10个氨基酸至约250个氨基酸、约10个氨基酸至约200个氨基酸、约10个氨基酸至约150个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸或约10个氨基酸至约50个氨基酸)。另外或可替代地，该蛋白质可以从SEQ ID NO：2的N-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)和/或从SEQ ID NO：2的C-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含或是与SEQ ID NO：3至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含与SEQ ID NO：3相异1至60个核苷酸的序列(例如，1至60个核苷酸、1至55个核苷酸、1至50个核苷酸、1至45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至35个核苷酸、1至30个核苷酸、1至25个核苷酸、1至20个核苷酸、1至15个核苷酸、1至10个核苷酸或1至5个核苷酸)。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸还可以包含例如除了SEQ ID NO：3之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码该蛋白质的核酸可以从SEQ ID NO：3的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：3的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是SEQ ID NO：4(如下所示)。
示例性蛋白质(SEQ ID NO：4)(IL7RA EKV蛋白，EKV序列加下划线)
PILLTISILSFFSVEKVVILACVLW
编码IL7RA EKV的核酸(SEQ ID NO：5，编码EKV序列的核酸序列加下划线)
cccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggtggtgatcctggcctgcgtgctgtgg
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是与SEQ ID NO：4至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，该蛋白质包含与SEQ ID NO：4相异1至20个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，本文中提供的蛋白质中的任一种还可以包含例如除了SEQ ID NO：4之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1个氨基酸至300个氨基酸、1个氨基酸至约250个氨基酸、1个氨基酸至约200个氨基酸、1个氨基酸至约150个氨基酸、1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约300个氨基酸、约5个氨基酸至约250个氨基酸、约5个氨基酸至约200个氨基酸、约5个氨基酸至约150个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约300个氨基酸、约10个氨基酸至约250个氨基酸、约10个氨基酸至约200个氨基酸、约10个氨基酸至约150个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸或约10个氨基酸至约50个氨基酸)。另外或可替代地，该蛋白质可以从SEQ ID NO：4的N-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)和/或从SEQ ID NO：4的C-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含或是与SEQ ID NO：5至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸与SEQID NO：5相异1至60个核苷酸(例如，1至60个核苷酸、1至55个核苷酸、1至50个核苷酸、1至45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至35个核苷酸、1至30个核苷酸、1至25个核苷酸、1至20个核苷酸、1至15个核苷酸、1至10个核苷酸或1至5个核苷酸)。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸还可以包含例如除了SEQ ID NO：5之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码该蛋白质的核酸可以从SEQ ID NO：5的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：5的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是SEQ ID NO：5(如下所示)。
示例性蛋白质(SEQ ID NO：6)(IL7RA CPT插入蛋白，CPT序列加下划线)
PILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLW
编码IL7RA CPT插入物的核酸(SEQ ID NO：7，编码CPT序列的核酸序列加下划线)
cccatcctgctgacctgccccaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtgg
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是与SEQ ID NO：6至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，该蛋白质包含与SEQ ID NO：6相异1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，本文中提供的蛋白质中的任一种还可以包含例如除了SEQ ID NO：6之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1个氨基酸至300个氨基酸、1个氨基酸至约250个氨基酸、1个氨基酸至约200个氨基酸、1个氨基酸至约150个氨基酸、1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约300个氨基酸、约5个氨基酸至约250个氨基酸、约5个氨基酸至约200个氨基酸、约5个氨基酸至约150个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约300个氨基酸、约10个氨基酸至约250个氨基酸、约10个氨基酸至约200个氨基酸、约10个氨基酸至约150个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸或约10个氨基酸至约50个氨基酸)。另外或可替代地，该蛋白质可以从SEQ ID NO：6的N-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)和/或可以从SEQ ID NO：6的C-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含或是与SEQ ID NO：7至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含与SEQ ID NO：7相异1至60个核苷酸(例如，1至60个核苷酸、1至55个核苷酸、1至50个核苷酸、1至45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至35个核苷酸、1至30个核苷酸、1至25个核苷酸、1至20个核苷酸、1至15个核苷酸、1至10个核苷酸或1至5个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸还可以包含例如除了SEQ ID NO：7之外的一个或更多个核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码该蛋白质的核酸可以从SEQ ID NO：7的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：7的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是SEQ ID NO：8(如下所示)。
示例性蛋白质(SEQ ID NO：8)(IL7RA PPCL插入蛋白，PPCL序列加下划线)
PILLPPCLTISILSFFSVALLVILACVLW
编码IL7RA PPCL插入物的核酸(SEQ ID NO：9，编码PPCL序列的核酸序列加下划线)
cccatcctgctgccaccctgtttaaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtgg
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是与SEQ ID NO：8至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，该蛋白质包含与SEQ ID NO：8相异1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，本文中提供的蛋白质中的任一种还可以包含例如除了SEQ ID NO：8之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1个氨基酸至300个氨基酸、1个氨基酸至约250个氨基酸、1个氨基酸至约200个氨基酸、1个氨基酸至约150个氨基酸、1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约300个氨基酸、约5个氨基酸至约250个氨基酸、约5个氨基酸至约200个氨基酸、约5个氨基酸至约150个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约300个氨基酸、约10个氨基酸至约250个氨基酸、约10个氨基酸至约200个氨基酸、约10个氨基酸至约150个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸或约10个氨基酸至约50个氨基酸)。另外或可替代地，该蛋白质可以从SEQ ID NO：8的N-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)和/或从SEQ ID NO：8的C-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含或是与SEQ ID NO：9至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含与SEQ ID NO：9相异1至60个核苷酸(例如，1至60个核苷酸、1至55个核苷酸、1至50个核苷酸、1至45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至35个核苷酸、1至30个核苷酸、1至25个核苷酸、1至20个核苷酸、1至15个核苷酸、1至10个核苷酸或1至5个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸还可以包含例如除了SEQ ID NO：9之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码该蛋白质的核酸可以从SEQ ID NO：9的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：9的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是SEQ ID NO：79(如下所示)。
示例性蛋白质(SEQ ID NO：79)(IL7RA MCP插入蛋白，MCP序列加下划线)
PILLTMCPISILSFFSVALLVILACVLW
编码IL7RA MCP插入物的核酸(SEQ ID NO：80，编码MCP序列的核酸序列加下划线)
cccatcctgctgaccatgtgccccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtgg
在一些实施方案中，该蛋白质包含或是与SEQ ID NO：79至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，该蛋白质包含与SEQ ID NO：79相异1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，本文中提供的蛋白质中的任一种还可以包含例如除了SEQ ID NO：79之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1个氨基酸至300个氨基酸、1个氨基酸至约250个氨基酸、1个氨基酸至约200个氨基酸、1个氨基酸至约150个氨基酸、1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约300个氨基酸、约5个氨基酸至约250个氨基酸、约5个氨基酸至约200个氨基酸、约5个氨基酸至约150个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约300个氨基酸、约10个氨基酸至约250个氨基酸、约10个氨基酸至约200个氨基酸、约10个氨基酸至约150个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸或约10个氨基酸至约50个氨基酸)。另外或可替代地，该蛋白质可以从SEQ ID NO：79的N-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)和/或从SEQ ID NO：79的C-末端缺少1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含或是与SEQ ID NO：80至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸包含与SEQ ID NO：80相异1至60个核苷酸(例如，1至60个核苷酸、1至55个核苷酸、1至50个核苷酸、1至45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至35个核苷酸、1至30个核苷酸、1至25个核苷酸、1至20个核苷酸、1至15个核苷酸、1至10个核苷酸或1至5个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码该蛋白质的核酸还可以包含例如除了SEQ ID NO：80之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码该蛋白质的核酸可以从SEQ ID NO：80的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：80的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
本文所述的蛋白质中的任一种的一些实施方案还可以包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域(例如，本文所述的或本领域已知的白细胞介素-7受体的α链的示例性细胞内结构域中的任一种)。
本文所述的蛋白质中任一种的一些实施方案还可以包含白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域(例如，本文所述或本领域已知的白细胞介素-7受体的α链的示例性细胞外结构域中的任一种)。
本文所述的蛋白质中任一种的一些实施方案还可以包含位于白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域与白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域(例如，本文所述或本领域已知的白细胞介素-7受体的α链的示例性细胞外结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。
本文所述的蛋白质中任一种的一些实施方案还可以包含位于白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域与所述蛋白之间的另外的接头序列(例如，本文所述的或本领域已知的示例性的另外的接头序列中的任一种)。白细胞介素-7受体的α链的胞内结构域(例如，本文所述或本领域已知的白细胞介素-7受体的α链的示例性胞内结构域中的任一种)。
在一些实施方案中，该蛋白质在其N-末端处还包含信号序列。在一些实施方案中，该信号序列包含序列或是序列MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP(SEQ ID NO：10)。在一些实施方案中，编码该信号序列的核酸包含或是序列atgctcctgctcgtgacttcacttcttctctgtgaactcccacaccccgcgtttttgcttatccct(SEQ ID NO：81)。信号序列的另外的实例是本领域已知的。例如，信号序列的长度可以为约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约28个氨基酸、约5个氨基酸至约26个氨基酸、约5个氨基酸至约24个氨基酸、约5个氨基酸至约22个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约18个氨基酸、约5个氨基酸至约16个氨基酸、约5个氨基酸至约14个氨基酸、约5个氨基酸至约12个氨基酸、约5个氨基酸至约10个氨基酸、约5个氨基酸至约8个氨基酸、约6个氨基酸至约30个氨基酸、约6个氨基酸至约28个氨基酸、约6个氨基酸至约26个氨基酸、约6个氨基酸至约24个氨基酸、约6个氨基酸至约22个氨基酸、约6个氨基酸至约20个氨基酸、约6个氨基酸至约18个氨基酸、约6个氨基酸至约16个氨基酸、约6个氨基酸至约14个氨基酸、约6个氨基酸至约12个氨基酸、约6个氨基酸至约10个氨基酸、约6个氨基酸至约8个氨基酸、约8个氨基酸至约30个氨基酸、约8个氨基酸至约28个氨基酸、约8个氨基酸至约26个氨基酸、约8个氨基酸至约24个氨基酸、约8个氨基酸至约22个氨基酸、约8个氨基酸至约20个氨基酸、约8个氨基酸至约18个氨基酸、约8个氨基酸至约16个氨基酸、约8个氨基酸至约14个氨基酸、约8个氨基酸至约12个氨基酸、约8个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约28个氨基酸、约10个氨基酸至约26个氨基酸、约10个氨基酸至约24个氨基酸、约10个氨基酸至约22个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约18个氨基酸、约10个氨基酸至约16个氨基酸、约10个氨基酸至约14个氨基酸、约10个氨基酸至约12个氨基酸、约12个氨基酸至约30个氨基酸、约12个氨基酸至约28个氨基酸、约12个氨基酸至约26个氨基酸、约12个氨基酸至约24个氨基酸、约12个氨基酸至约22个氨基酸、约12个氨基酸至约20个氨基酸、约12个氨基酸至约18个氨基酸、约12个氨基酸至约16个氨基酸、约12个氨基酸至约14个氨基酸、约14个氨基酸至约30个氨基酸、约14个氨基酸至约28个氨基酸、约14个氨基酸至约26个氨基酸、约14个氨基酸至约24个氨基酸、约14个氨基酸至约22个氨基酸、约14个氨基酸至约20个氨基酸、约14个氨基酸至约18个氨基酸、约14个氨基酸至约16个氨基酸、约16个氨基酸至约30个氨基酸、约16个氨基酸至约28个氨基酸、约16个氨基酸至约26个氨基酸、约16个氨基酸至约24个氨基酸、约16个氨基酸至约22个氨基酸、约16个氨基酸至约20个氨基酸、约16个氨基酸至约18个氨基酸、约18个氨基酸至约30个氨基酸、约18个氨基酸至约28个氨基酸、约18个氨基酸至约26个氨基酸、约18个氨基酸至约24个氨基酸、约18个氨基酸至约22个氨基酸、约18个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约28个氨基酸、约20个氨基酸至约26个氨基酸、约20个氨基酸至约24个氨基酸、约20个氨基酸至约22个氨基酸、约22个氨基酸至约30个氨基酸、约22个氨基酸至约28个氨基酸、约22个氨基酸至约26个氨基酸、约22个氨基酸至约24个氨基酸、约24个氨基酸至约30个氨基酸、约24个氨基酸至约28个氨基酸、约24个氨基酸至约26个氨基酸、约26个氨基酸至约30个氨基酸、约26个氨基酸至约28个氨基酸或约28个氨基酸至约30个氨基酸。
在一些实施方案中，该蛋白还可以包含肽标签。例如，标签可用于帮助促进嵌合跨膜蛋白的纯化、产生和/或鉴定。在一些实施方案中，标签是包含至少六个组氨酸残基的组氨酸标签。标签的另外的实例是本领域已知的。
下文描述了本文中提供的蛋白质中任一种的非限制性方面。
白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域
本文所述的蛋白质的一些实施方案还可以包含白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域(例如，本文所述的白细胞介素-7受体的α链的示例性结构域中的任一种)。例如，本文所述的蛋白质可以包含来自人、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、猪、狗、猫或任何其他合适物种的白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域。白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域的非限制性实例在下文描述。白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域的另外的实例是本领域已知的。
在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域为白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域或包含白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域。例如，白细胞介素-7受体的α链的胞外结构域包含或是白细胞介素-7受体的野生型人α链的细胞外结构域(例如，SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15)。
示例性的白细胞介素-7受体的野生型人α链的胞外结构域(SEQ ID NO：11)
GESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNITNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVVYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMD
编码白细胞介素-7受体的α链的野生型人胞外结构域的核酸(SEQ ID NO：12)
ggcgagagcggctacgcccagaacggcgacctggaggacgccgagctggacgactacagcttcagctgctacagccagctggaggtgaacggcagccagcacagcctgacctgcgccttcgaggaccccgacgtgaacatcaccaacctggagttcgagatctgcggcgccctggtggaggtgaagtgcctgaacttcaggaagctgcaggagatctacttcatcgagaccaagaagttcctgctgatcggcaagagcaacatctgcgtgaaggtgggcgagaagagcctgacctgcaagaagatcgacctgaccaccatcgtgaagcccgaggcccccttcgacctgagcgtggtgtacagggagggcgccaacgacttcgtggtgaccttcaacaccagccacctgcagaagaagtacgtgaaggtgctgatgcacgacgtggcctacaggcaggagaaggacgagaacaagtggacccacgtgaacctgagcagcaccaagctgaccctgctgcagaggaagctgcagcccgccgccatgtacgagatcaaggtgaggagcatccccgaccactacttcaagggcttctggagcgagtggagccccagctactacttcaggacccccgagatcaacaacagcagcggcgagatggac
在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的胞外结构域包含或是与白细胞介素-7受体的野生型α链的胞外结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链的胞外结构域的序列，例如，SEQ ID NO：11)至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的胞外结构域包含与SEQ ID NO：11相异1至40个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的胞外结构域还包含例如除了SEQ ID NO：11之外的1至约250个另外的氨基酸(例如，1至约200个氨基酸、1至约150个氨基酸、1至约100个氨基酸、1至约50个氨基酸、约5至约250个氨基酸、约5至约200个氨基酸、约5至约150个氨基酸、约5至约100个氨基酸、约5至约50个氨基酸、约10至约250个氨基酸、约10至约200个氨基酸、约10至约150个氨基酸、约10至约100个氨基酸或约10至约50个氨基酸)。另外或可替代地，白细胞介素-7受体的α链的胞外结构域为白细胞介素-7受体的野生型α链的胞外结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链的胞外结构域的序列，例如，SEQ ID NO：11)，其具有以下中的一种或两种：从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域的序列的N-末端中缺失1至10个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)和(ii)从白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域的序列的C-末端中缺失1至10个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)。
在一些实施方案中，编码白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的核酸包含或是与SEQ ID NO：12至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的核酸包含与SEQ ID NO：12相异1至60个核苷酸(例如，1至55个核苷酸、1至50个核苷酸、1至45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至35个核苷酸、1至30个核苷酸、1至25个核苷酸、1至20个核苷酸、1至15个核苷酸、1至10个核苷酸或1至5个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的核酸还可以包含例如除了SEQ ID NO：12之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的核酸可以从SEQ ID NO：12的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：12的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
另外的示例性白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞外结构域在下文提供。
示例性白细胞介素-7受体亚型1的α链的野生型小鼠细胞外结构域(SEQ ID NO：13)
ESGNAQDGDLEDADADDHSFWCHSQLEVDGSQHLLTCAFNDSDINTANLEFQICGALLRVKCLTLNKLQDIYFIKTSEFLLIGSSNICVKLGQKNLTCKNMAINTIVKAEAPSDLKVVYRKEANDFLVTFNAPHLKKKYLKKVKHDVAYRPARGESNWTHVSLFHTRTTIPQRKLRPKAMYEIKVRSIPHNDYFKGFWSEWSPSSTFETPEPKNQGGWD
编码白细胞介素-7受体亚型1的α链的野生型小鼠细胞外结构域的核酸(SEQ IDNO：14)
gaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccacagccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatctggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttataaagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaaaatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaatgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctaccgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaaaactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctggagcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggat
示例性白细胞介素-7受体亚型2的α链的野生型小鼠细胞外结构域(SEQ ID NO：15)
ESGNAQDGDLEDADADDHSFWCHSQLEVDGSQHLLTCAFNDSDINTANLEFQICGALLRVKCLTLNKLQDIYFIKTSEFLLIGSSNICVKLGQKNLTCKNMAINTIVKAEAPSDLKVVYRKEANDFLVTFNAPHLKKKYLKKVKHDVAYRPARGESNWTHVSLFHTRTTIPQRKLRPKAMYEIKVRSIPHNDYFKGFWSEWSPSSTFETPEPKNQGGWD
编码白细胞介素-7受体亚型2的α链的野生型小鼠细胞外结构域的核酸(SEQ IDNO：16)
Gaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccacagccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatctggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttataaagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaaaatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaatgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctaccgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaaaactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctggagcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggat
在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域为白细胞介素-7受体的α链的野生型细胞外结构域的序列(例如白细胞介素-7受体的α链的成熟野生型细胞外结构域，例如，本文所述的白细胞介素-7受体的α链的成熟野生型细胞外结构域中的任一种，例如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15)，其从白细胞介素-7受体α链的野生型细胞外结构域的序列的N-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域为白细胞介素-7受体的α链的野生型细胞外结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的α链的成熟野生型细胞外结构域，例如，本文所述的白细胞介素-7受体的α链的成熟野生型细胞外结构域中的任一种，例如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15)，其从白细胞介素-7受体α链的野生型细胞外结构域的序列的C-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域为白细胞介素-7受体的α链的野生型细胞外结构域的序列(例如，白细胞介素-7受体的α链的成熟野生型细胞外结构域，例如，本文所述的白细胞介素-7受体的α链的成熟野生型细胞外结构域中的任一种，例如SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15)，其从白细胞介素-7受体α链的野生型细胞外结构域的序列的N-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸并且从白细胞介素-7受体α链的野生型细胞外结构域的序列的C-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。
如本领域普通技术人员会理解的，当编码白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的核酸与SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、或SEQ ID NO：16相比包含或缺少一个或更多个另外的核苷酸时，仍维持翻译阅读框，使得不引入无义密码子并且可以翻译完整蛋白质(例如，编码白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的核酸可以包含或缺少3个核苷酸或其倍数)。
如本领域技术人员会理解的，当在来自不同物种的白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域之间不保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们不太可能引起白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的一种或更多种活性的水平降低。相反，当在来自不同物种的白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域之间保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们更可能引起引起白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域的一种或更多种活性的水平降低。鉴于该认知，本领域技术人员可以选择在不降低白细胞介素-7受体α链的细胞外结构域的活性的情况下白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域中的哪些氨基酸位置(例如，非保守氨基酸)可以被取代。
嵌合跨膜蛋白
本文中提供了嵌合跨膜蛋白，该嵌合跨膜蛋白包含细胞外IL-15结构域(例如，本文所述或本领域已知的示例性细胞外IL-15结构域中的任一种)、来自白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域(例如，来自本文所述或本领域已知的白细胞介素-15受体的α链的任何示例性细胞外sushi结构域中的一种或更多种)和白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域(例如，本文所述或本领域已知的白细胞介素-7受体α链的示例性跨膜结构域中的任一种)。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含位于细胞外IL-15结构域与来自白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域之间的接头序列(例如，本文所述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白还包含位于来自白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域与白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域之间的另外的接头(例如，本文所述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白还可以包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域(例如，本文所述或本领域已知的白细胞介素-7受体的α链的示例性胞内结构域中的任一种)。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含或是SEQ ID NO：17(如下所示)。
示例性嵌合跨膜蛋白(SEQ ID NO：17)
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTPILLTISLLSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
编码嵌合跨膜蛋白的核酸(SEQ ID NO：18)
aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgccaccctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcaggtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagcctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaaggagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggaggaggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctccaatgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacagcggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccactggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtgacaacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagctctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacaggcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctgacagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含或是与SEQ ID NO：17至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含与SEQ ID NO：17相异1至约100个氨基酸(例如，1至约95个氨基酸、1至约90个氨基酸、1至约80个氨基酸、1至约75个氨基酸、1至约70个氨基酸、1至约65个氨基酸、1至约60个氨基酸、1至约55个氨基酸、1至约50个氨基酸、1至约45个氨基酸、1至约40个氨基酸、1至约35个氨基酸、1至约30个氨基酸、1至约25个氨基酸、1至约20个氨基酸、1至约15个氨基酸、1至约10个氨基酸、1至约5个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约95个氨基酸、约5个氨基酸至约90个氨基酸、约5个氨基酸至约85个氨基酸、约5个氨基酸至约80个氨基酸、约5个氨基酸至约75个氨基酸、约5个氨基酸至约70个氨基酸、约5个氨基酸至约65个氨基酸、约5个氨基酸至约60个氨基酸、约5个氨基酸至约55个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约45个氨基酸、约5个氨基酸至约40个氨基酸、约5个氨基酸至约35个氨基酸、约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约25个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约15个氨基酸或约5个氨基酸至约10个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含例如除了SEQ IDNO：17之外的1至约300个另外的氨基酸(例如，1至约250个氨基酸、1至约200个氨基酸、1至约150个氨基酸、1至约100个氨基酸、1至约50个氨基酸、1至约25个氨基酸、约5至约300个氨基酸、约5至约250个氨基酸、约5至约200个氨基酸、约5至约150个氨基酸、约5至约100个氨基酸、约5至约50个氨基酸、约10至约300个氨基酸、约10至约250个氨基酸、约10至约200个氨基酸、约10至约150个氨基酸、约10至约100个氨基酸或约10至约50个氨基酸)。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含SEQ ID NO：17的序列，其从SEQ ID NO：17的N-末端移除1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)和/或从SEQ ID NO：17的C-末端移除1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)。
在一些实施方案中，编码嵌合跨膜蛋白的核酸包含或是与SEQ ID NO：18至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码嵌合跨膜蛋白的核酸包含与SEQ ID NO：18相异1至约300个核苷酸(例如，1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸、1至约50个核苷酸、约5个核苷酸至约300个核苷酸、约5个核苷酸至约250个核苷酸、约5个核苷酸至约200个核苷酸、约5个核苷酸至约150个核苷酸、约5个核苷酸至约100个核苷酸、约5个核苷酸至约50个核苷酸、约10个核苷酸至约300个核苷酸、约10个核苷酸至约250个核苷酸、约10个核苷酸至约200个核苷酸、约10个核苷酸至约150个核苷酸、约10个核苷酸至约100个核苷酸或约10个核苷酸至约50个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码嵌合跨膜蛋白的核酸包含例如除了SEQ ID NO：18之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码嵌合跨膜蛋白的核酸可以从SEQ ID NO：18的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：18的3’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含或是SEQ ID NO：19、83、85、87或89(如下所示)。
示例性嵌合跨膜蛋白(SEQ ID NO：19)
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTPILLPPCLTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
编码示例性嵌合跨膜蛋白的核酸(SEQ ID NO：20)
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示例性嵌合跨膜蛋白(SEQ ID NO：83)
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编码示例性嵌合跨膜蛋白的核酸(SEQ ID NO：84)
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示例性嵌合跨膜蛋白(SEQ ID NO：85)
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编码示例性嵌合跨膜蛋白的核酸(SEQ ID NO：86)
aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgccaccctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcaggtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagcctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaaggagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggaggaggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctccaatgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacagcggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccactggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtgacaacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagctctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacaggcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctgacagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgatgtgccccaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggccctgctggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
示例性嵌合跨膜蛋白(SEQ ID NO：87)
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编码示例性嵌合跨膜蛋白的核酸(SEQ ID NO：88)
aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgccaccctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcaggtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagcctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaaggagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggaggaggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctccaatgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacagcggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccactggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtgacaacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagctctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacaggcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctgacagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggccgtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
示例性嵌合跨膜蛋白(SEQ ID NO：89)
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTPILLTISILSFFSVEKVVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
编码示例性嵌合跨膜蛋白的核酸(SEQ ID NO：90)
aactgggtgaatgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggatctgatccagagcatgcacattgatgccaccctgtacacagaatctgatgtgcaccctagctgtaaagtgaccgccatgaagtgttttctgctggagctgcaggtgatttctctggaaagcggagatgcctctatccacgacacagtggagaatctgatcatcctggccaacaatagcctgagcagcaatggcaatgtgacagagtctggctgtaaggagtgtgaggagctggaggagaagaacatcaaggagtttctgcagagctttgtgcacatcgtgcagatgttcatcaatacaagcagcggtgggggctcaggcggaggaggctctggcggaggcggaagcgggggagggggctcaggcggcgggtccttgcagattacatgccctcctccaatgtctgtggagcacgccgatatttgggtgaagtcctacagcctgtacagcagagagagatacatctgcaacagcggctttaagagaaaggccggcacctcttctctgacagagtgcgtgctgaataaggccacaaatgtggcccactggacaacacctagcctgaagtgcattagagatcctgccctggtccaccagaggcctgcccctccatctacagtgacaacagccggagtgacacctcagcctgaatctctgagcccttctggaaaagaacctgccgccagctctcctagctctaataataccgccgccacaacagccgccattgtgcctggatctcagctgatgcctagcaagtctcctagcacaggcacaacagagatcagcagccacgaatcttctcacggaacaccttctcagaccaccgccaagaattgggagctgacagcctctgcctctcaccagcctccaggagtgtatcctcagggccactctgatacaacacccatcctgctgaccatcagcatcctgagcttcttcagcgtggagaaggtggtgatcctggcctgcgtgctgtggaagaagaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含或是与SEQ ID NO：19、83、85、87或89至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含与SEQ ID NO：19、83、85、87或89相异1至约100个氨基酸(例如，1至约95个氨基酸、1至约90个氨基酸、1至约80个氨基酸、1至约75个氨基酸、1至约70个氨基酸、1至约65个氨基酸、1至约60个氨基酸、1至约55个氨基酸、1至约50个氨基酸、1至约45个氨基酸、1至约40个氨基酸、1至约35个氨基酸、1至约30个氨基酸、1至约25个氨基酸、1至约20个氨基酸、1至约15个氨基酸、1至约10个氨基酸、1至约5个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约95个氨基酸、约5个氨基酸至约90个氨基酸、约5个氨基酸至约85个氨基酸、约5个氨基酸至约80个氨基酸、约5个氨基酸至约75个氨基酸、约5个氨基酸至约70个氨基酸、约5个氨基酸至约65个氨基酸、约5个氨基酸至约60个氨基酸、约5个氨基酸至约55个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约45个氨基酸、约5个氨基酸至约40个氨基酸、约5个氨基酸至约35个氨基酸、约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约25个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约15个氨基酸或约5个氨基酸至约10个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含例如除了SEQ ID NO：19、83、85、87或89之外的1至约300另外的氨基酸(例如，1至约250个氨基酸、1至约200个氨基酸、1至约150个氨基酸、1至约100个氨基酸、1至约50个氨基酸、1至约25个氨基酸、约5至约300个氨基酸、约5至约250个氨基酸、约5至约200个氨基酸、约5至约150个氨基酸、约5至约100个氨基酸、约5至约50个氨基酸、约10至约300个氨基酸、约10至约250个氨基酸、约10至约200个氨基酸、约10至约150个氨基酸、约10至约100个氨基酸或约10至约50个氨基酸)。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含SEQ ID NO：19、83、85、87或89的序列，其从SEQ ID NO：19、83、85、87或89的N-末端移除1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)和/或从SEQ ID NO：19、83、85、87或89的C-末端移除1至20个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)
在一些实施方案中，编码嵌合跨膜蛋白的核酸包含或是与SEQ ID NO：19、83、85、87或89至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码嵌合跨膜蛋白的核酸包含与SEQ ID NO：19、83、85、87或89相异1至约300个核苷酸(例如，1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸、1至约50个核苷酸、约5个核苷酸至约300个核苷酸、约5个核苷酸至约250个核苷酸、约5个核苷酸至约200个核苷酸、约5个核苷酸至约150个核苷酸、约5个核苷酸至约100个核苷酸、约5个核苷酸至约50个核苷酸、约10个核苷酸至约300个核苷酸、约10个核苷酸至约250个核苷酸、约10个核苷酸至约200个核苷酸、约10个核苷酸至约150个核苷酸、约10个核苷酸至约100个核苷酸或约10个核苷酸至约50个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码嵌合跨膜蛋白的核酸包含例如除了SEQ ID NO：19、83、85、87或89之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约900个核苷酸、1至约850个核苷酸、1至约800个核苷酸、1至约750个核苷酸、1至约700个核苷酸、1至约650个核苷酸、1至约600个核苷酸、1至约550个核苷酸、1至约500个核苷酸、1至约450个核苷酸、1至约400个核苷酸、1至约350个核苷酸、1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸或1至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码嵌合跨膜蛋白的核酸可以从SEQ ID NO：19、83、85、87或89的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：19、83、85、87或89的5’-端缺少1至60个核苷酸(例如，1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白(例如，成熟蛋白或前体蛋白)的长度可以为约210个氨基酸至约650个氨基酸、约210个氨基酸至约640个氨基酸、约210个氨基酸至约620个氨基酸、约210个氨基酸至约600个氨基酸、约210个氨基酸至约580个氨基酸、约210个氨基酸至约560个氨基酸、约210个氨基酸至约540个氨基酸、约210个氨基酸至约520个氨基酸、约210个氨基酸至约500个氨基酸、约210个氨基酸至约480个氨基酸、约210个氨基酸至约460个氨基酸、约210个氨基酸至约440个氨基酸、约210个氨基酸至约420个氨基酸、约210个氨基酸至约400个氨基酸、约210个氨基酸至约380个氨基酸、约210个氨基酸至约360个氨基酸、约210个氨基酸至约340个氨基酸、约210个氨基酸至约320个氨基酸、约210个氨基酸至约300个氨基酸、约210个氨基酸至约280个氨基酸、约210个氨基酸至约260个氨基酸、约210个氨基酸至约240个氨基酸、约220个氨基酸至约650个氨基酸、约220个氨基酸至约640个氨基酸、约220个氨基酸至约620个氨基酸、约220个氨基酸至约600个氨基酸、约220个氨基酸至约580个氨基酸、约220个氨基酸至约560个氨基酸、约220个氨基酸至约540个氨基酸、约220个氨基酸至约520个氨基酸、约220个氨基酸至约500个氨基酸、约220个氨基酸至约480个氨基酸、约220个氨基酸至约460个氨基酸、约220个氨基酸至约440个氨基酸、约220个氨基酸至约420个氨基酸、约220个氨基酸至约400个氨基酸、约220个氨基酸至约380个氨基酸、约220个氨基酸至约360个氨基酸、约220个氨基酸至约340个氨基酸、约220个氨基酸至约320个氨基酸、约220个氨基酸至约300个氨基酸、约220个氨基酸至约280个氨基酸、约220个氨基酸至约260个氨基酸、约220个氨基酸至约240个氨基酸、约240个氨基酸至约650个氨基酸、约240个氨基酸至约640个氨基酸、约240个氨基酸至约620个氨基酸、约240个氨基酸至约600个氨基酸、约240个氨基酸至约580个氨基酸、约240个氨基酸至约560个氨基酸、约240个氨基酸至约540个氨基酸、约240个氨基酸至约520个氨基酸、约240个氨基酸至约500个氨基酸、约240个氨基酸至约480个氨基酸、约240个氨基酸至约460个氨基酸、约240个氨基酸至约440个氨基酸、约240个氨基酸至约420个氨基酸、约240个氨基酸至约400个氨基酸、约240个氨基酸至约380个氨基酸、约240个氨基酸至约360个氨基酸、约240个氨基酸至约340个氨基酸、约240个氨基酸至约320个氨基酸、约240个氨基酸至约300个氨基酸、约240个氨基酸至约280个氨基酸、约240个氨基酸至约260个氨基酸、约260个氨基酸至约650个氨基酸、约260个氨基酸至约640个氨基酸、约260个氨基酸至约620个氨基酸、约260个氨基酸至约600个氨基酸、约260个氨基酸至约580个氨基酸、约260个氨基酸至约560个氨基酸、约260个氨基酸至约540个氨基酸、约260个氨基酸至约520个氨基酸、约260个氨基酸至约500个氨基酸、约260个氨基酸至约480个氨基酸、约260个氨基酸至约460个氨基酸、约260个氨基酸至约440个氨基酸、约260个氨基酸至约420个氨基酸、约260个氨基酸至约400个氨基酸、约260个氨基酸至约380个氨基酸、约260个氨基酸至约360个氨基酸、约260个氨基酸至约340个氨基酸、约260个氨基酸至约320个氨基酸、约260个氨基酸至约300个氨基酸、约260个氨基酸至约280个氨基酸、约280个氨基酸至约650个氨基酸、约280个氨基酸至约640个氨基酸、约280个氨基酸至约620个氨基酸、约280个氨基酸至约600个氨基酸、约280个氨基酸至约580个氨基酸、约280个氨基酸至约560个氨基酸、约280个氨基酸至约540个氨基酸、约280个氨基酸至约520个氨基酸、约280个氨基酸至约500个氨基酸、约280个氨基酸至约480个氨基酸、约280个氨基酸至约460个氨基酸、约280个氨基酸至约440个氨基酸、约280个氨基酸至约420个氨基酸、约280个氨基酸至约400个氨基酸、约280个氨基酸至约380个氨基酸、约280个氨基酸至约360个氨基酸、约280个氨基酸至约340个氨基酸、约280个氨基酸至约320个氨基酸、约280个氨基酸至约300个氨基酸、约300个氨基酸至约650个氨基酸、约300个氨基酸至约640个氨基酸、约300个氨基酸至约620个氨基酸、约300个氨基酸至约600个氨基酸、约300个氨基酸至约580个氨基酸、约300个氨基酸至约560个氨基酸、约300个氨基酸至约540个氨基酸、约300个氨基酸至约520个氨基酸、约300个氨基酸至约500个氨基酸、约300个氨基酸至约480个氨基酸、约300个氨基酸至约460个氨基酸、约300个氨基酸至约440个氨基酸、约300个氨基酸至约420个氨基酸、约300个氨基酸至约400个氨基酸、约300个氨基酸至约380个氨基酸、约300个氨基酸至约360个氨基酸、约300个氨基酸至约340个氨基酸、约300个氨基酸至约320个氨基酸、约320个氨基酸至约650个氨基酸、约320个氨基酸至约640个氨基酸、约320个氨基酸至约620个氨基酸、约320个氨基酸至约600个氨基酸、约320个氨基酸至约580个氨基酸、约320个氨基酸至约560个氨基酸、约320个氨基酸至约540个氨基酸、约320个氨基酸至约520个氨基酸、约320个氨基酸至约500个氨基酸、约320个氨基酸至约480个氨基酸、约320个氨基酸至约460个氨基酸、约320个氨基酸至约440个氨基酸、约320个氨基酸至约420个氨基酸、约320个氨基酸至约400个氨基酸、约320个氨基酸至约380个氨基酸、约320个氨基酸至约360个氨基酸、约320个氨基酸至约340个氨基酸、约340个氨基酸至约650个氨基酸、约340个氨基酸至约640个氨基酸、约340个氨基酸至约620个氨基酸、约340个氨基酸至约600个氨基酸、约340个氨基酸至约580个氨基酸、约340个氨基酸至约560个氨基酸、约340个氨基酸至约540个氨基酸、约340个氨基酸至约520个氨基酸、约340个氨基酸至约500个氨基酸、约340个氨基酸至约480个氨基酸、约340个氨基酸至约460个氨基酸、约340个氨基酸至约440个氨基酸、约340个氨基酸至约420个氨基酸、约340个氨基酸至约400个氨基酸、约340个氨基酸至约380个氨基酸、约340个氨基酸至约360个氨基酸、约360个氨基酸至约650个氨基酸、约360个氨基酸至约640个氨基酸、约360个氨基酸至约620个氨基酸、约360个氨基酸至约600个氨基酸、约360个氨基酸至约580个氨基酸、约360个氨基酸至约560个氨基酸、约360个氨基酸至约540个氨基酸、约360个氨基酸至约520个氨基酸、约360个氨基酸至约500个氨基酸、约360个氨基酸至约480个氨基酸、约360个氨基酸至约460个氨基酸、约360个氨基酸至约440个氨基酸、约360个氨基酸至约420个氨基酸、约360个氨基酸至约400个氨基酸、约360个氨基酸至约380个氨基酸、约380个氨基酸至约650个氨基酸、约380个氨基酸至约640个氨基酸、约380个氨基酸至约620个氨基酸、约380个氨基酸至约600个氨基酸、约380个氨基酸至约580个氨基酸、约380个氨基酸至约560个氨基酸、约380个氨基酸至约540个氨基酸、约380个氨基酸至约520个氨基酸、约380个氨基酸至约500个氨基酸、约380个氨基酸至约480个氨基酸、约380个氨基酸至约460个氨基酸、约380个氨基酸至约440个氨基酸、约380个氨基酸至约420个氨基酸、约380个氨基酸至约400个氨基酸、约400个氨基酸至约650个氨基酸、约400个氨基酸至约640个氨基酸、约400个氨基酸至约620个氨基酸、约400个氨基酸至约600个氨基酸、约400个氨基酸至约580个氨基酸、约400个氨基酸至约560个氨基酸、约400个氨基酸至约540个氨基酸、约400个氨基酸至约520个氨基酸、约400个氨基酸至约500个氨基酸、约400个氨基酸至约480个氨基酸、约400个氨基酸至约460个氨基酸、约400个氨基酸至约440个氨基酸、约400个氨基酸至约420个氨基酸、约420个氨基酸至约650个氨基酸、约420个氨基酸至约640个氨基酸、约420个氨基酸至约620个氨基酸、约420个氨基酸至约600个氨基酸、约420个氨基酸至约580个氨基酸、约420个氨基酸至约560个氨基酸、约420个氨基酸至约540个氨基酸、约420个氨基酸至约520个氨基酸、约420个氨基酸至约500个氨基酸、约420个氨基酸至约480个氨基酸、约420个氨基酸至约460个氨基酸、约420个氨基酸至约440个氨基酸、约440个氨基酸至约650个氨基酸、约440个氨基酸至约640个氨基酸、约440个氨基酸至约620个氨基酸、约440个氨基酸至约600个氨基酸、约440个氨基酸至约580个氨基酸、约440个氨基酸至约560个氨基酸、约440个氨基酸至约540个氨基酸、约440个氨基酸至约520个氨基酸、约440个氨基酸至约500个氨基酸、约440个氨基酸至约480个氨基酸、约440个氨基酸至约460个氨基酸、约460个氨基酸至约650个氨基酸、约460个氨基酸至约640个氨基酸、约460个氨基酸至约620个氨基酸、约460个氨基酸至约600个氨基酸、约460个氨基酸至约580个氨基酸、约460个氨基酸至约560个氨基酸、约460个氨基酸至约540个氨基酸、约460个氨基酸至约520个氨基酸、约460个氨基酸至约500个氨基酸、约460个氨基酸至约480个氨基酸、约480个氨基酸至约650个氨基酸、约480个氨基酸至约640个氨基酸、约480个氨基酸至约620个氨基酸、约480个氨基酸至约600个氨基酸、约480个氨基酸至约580个氨基酸、约480个氨基酸至约560个氨基酸、约480个氨基酸至约540个氨基酸、约480个氨基酸至约520个氨基酸、约480个氨基酸至约500个氨基酸、约500个氨基酸至约650个氨基酸、约500个氨基酸至约640个氨基酸、约500个氨基酸至约620个氨基酸、约500个氨基酸至约600个氨基酸、约500个氨基酸至约580个氨基酸、约500个氨基酸至约560个氨基酸、约500个氨基酸至约540个氨基酸、约500个氨基酸至约520个氨基酸、约520个氨基酸至约650个氨基酸、约520个氨基酸至约640个氨基酸、约520个氨基酸至约620个氨基酸、约520个氨基酸至约600个氨基酸、约520个氨基酸至约580个氨基酸、约520个氨基酸至约560个氨基酸、约520个氨基酸至约540个氨基酸、约540个氨基酸至约650个氨基酸、约540个氨基酸至约640个氨基酸、约540个氨基酸至约620个氨基酸、约540个氨基酸至约600个氨基酸、约540个氨基酸至约580个氨基酸、约540个氨基酸至约560个氨基酸、约560个氨基酸至约650个氨基酸、约560个氨基酸至约640个氨基酸、约560个氨基酸至约620个氨基酸、约560个氨基酸至约600个氨基酸、约560个氨基酸至约580个氨基酸、约580个氨基酸至约650个氨基酸、约580个氨基酸至约640个氨基酸、约580个氨基酸至约620个氨基酸、约580个氨基酸至约600个氨基酸、约600个氨基酸至约650个氨基酸、约600个氨基酸至约640个氨基酸、约600个氨基酸至约620个氨基酸、约620个氨基酸至约650个氨基酸、约620个氨基酸至约640个氨基酸或约630个氨基酸至约650个氨基酸。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白在其N-末端处还包含信号序列。在一些实施方案中，信号序列包含或是MDWTWILFLVAAATRVHS的序列(SEQ ID NO：21)。在一些实施方案中，编码信号序列的核酸包含或是序列atggattggacctggattctgtttctggtggccgctgccacaagagtgcacagc(SEQ ID NO：91)。信号序列的另外的实例是本领域已知的。例如，信号序列的长度可以为约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约28个氨基酸、约5个氨基酸至约26个氨基酸、约5个氨基酸至约24个氨基酸、约5个氨基酸至约22个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约18个氨基酸、约5个氨基酸至约16个氨基酸、约5个氨基酸至约14个氨基酸、约5个氨基酸至约12个氨基酸、约5个氨基酸至约10个氨基酸、约5个氨基酸至约8个氨基酸、约6个氨基酸至约30个氨基酸、约6个氨基酸至约28个氨基酸、约6个氨基酸至约26个氨基酸、约6个氨基酸至约24个氨基酸、约6个氨基酸至约22个氨基酸、约6个氨基酸至约20个氨基酸、约6个氨基酸至约18个氨基酸、约6个氨基酸至约16个氨基酸、约6个氨基酸至约14个氨基酸、约6个氨基酸至约12个氨基酸、约6个氨基酸至约10个氨基酸、约6个氨基酸至约8个氨基酸、约8个氨基酸至约30个氨基酸、约8个氨基酸至约28个氨基酸、约8个氨基酸至约26个氨基酸、约8个氨基酸至约24个氨基酸、约8个氨基酸至约22个氨基酸、约8个氨基酸至约20个氨基酸、约8个氨基酸至约18个氨基酸、约8个氨基酸至约16个氨基酸、约8个氨基酸至约14个氨基酸、约8个氨基酸至约12个氨基酸、约8个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约28个氨基酸、约10个氨基酸至约26个氨基酸、约10个氨基酸至约24个氨基酸、约10个氨基酸至约22个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约18个氨基酸、约10个氨基酸至约16个氨基酸、约10个氨基酸至约14个氨基酸、约10个氨基酸至约12个氨基酸、约12个氨基酸至约30个氨基酸、约12个氨基酸至约28个氨基酸、约12个氨基酸至约26个氨基酸、约12个氨基酸至约24个氨基酸、约12个氨基酸至约22个氨基酸、约12个氨基酸至约20个氨基酸、约12个氨基酸至约18个氨基酸、约12个氨基酸至约16个氨基酸、约12个氨基酸至约14个氨基酸、约14个氨基酸至约30个氨基酸、约14个氨基酸至约28个氨基酸、约14个氨基酸至约26个氨基酸、约14个氨基酸至约24个氨基酸、约14个氨基酸至约22个氨基酸、约14个氨基酸至约20个氨基酸、约14个氨基酸至约18个氨基酸、约14个氨基酸至约16个氨基酸、约16个氨基酸至约30个氨基酸、约16个氨基酸至约28个氨基酸、约16个氨基酸至约26个氨基酸、约16个氨基酸至约24个氨基酸、约16个氨基酸至约22个氨基酸、约16个氨基酸至约20个氨基酸、约16个氨基酸至约18个氨基酸、约18个氨基酸至约30个氨基酸、约18个氨基酸至约28个氨基酸、约18个氨基酸至约26个氨基酸、约18个氨基酸至约24个氨基酸、约18个氨基酸至约22个氨基酸、约18个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约28个氨基酸、约20个氨基酸至约26个氨基酸、约20个氨基酸至约24个氨基酸、约20个氨基酸至约22个氨基酸、约22个氨基酸至约30个氨基酸、约22个氨基酸至约28个氨基酸、约22个氨基酸至约26个氨基酸、约22个氨基酸至约24个氨基酸、约24个氨基酸至约30个氨基酸、约24个氨基酸至约28个氨基酸、约24个氨基酸至约26个氨基酸、约26个氨基酸至约30个氨基酸、约26个氨基酸至约28个氨基酸或约28个氨基酸至约30个氨基酸。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白可还以包含肽标签。例如，标签可用于帮助促进嵌合跨膜蛋白的纯化、产生和/或鉴定。在一些实施方案中，标签是包含至少六个组氨酸残基的组氨酸标签。标签的另外的实例是本领域已知的。
下文描述了本文中提供的嵌合跨膜蛋白中任一种的非限制性方面。
细胞外IL-15结构域
在本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案中，细胞外IL-15结构域包含或是野生型IL-15蛋白(例如，成熟的野生型IL-15蛋白)的序列。例如，野生型IL-15蛋白可以是野生型人IL-15蛋白(例如，成熟的野生型人IL-2蛋白)、野生型小鼠IL-15蛋白(例如，成熟的野生型小鼠IL-15蛋白)、野生型黑猩猩IL-15蛋白(例如成熟的野生型黑猩猩IL-15蛋白)或野生型猴子IL-15蛋白(例如成熟的野生型猴子IL-15蛋白)。下文提供了野生型IL-15蛋白序列和编码这些示例性IL-15蛋白序列的核酸的非限制性实例。
示例性人IL-15亚型1(SEQ ID NO：22)
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
编码示例性人IL-15亚型1的核酸(SEQ ID NO：23)
aactgggtgaatgtaataagtgatttgaaaaaaattgaagatcttattcaatctatgcatattgatgctactttatatacggaaagtgatgttcaccccagttgcaaagtaacagcaatgaagtgctttctcttggagttacaagttatttcacttgagtccggagatgcaagtattcatgatacagtagaaaatctgatcatcctagcaaacaacagtttgtcttctaatgggaatgtaacagaatctggatgcaaagaatgtgaggaactggaggaaaaaaatattaaagaatttttgcagagttttgtacatattgtccaaatgttcatcaacacttct
示例性人IL-15亚型2(SEQ ID NO：24)
MVLGTIDLCSCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
编码示例性人IL-15亚型2的核酸(SEQ ID NO：25)
atggtattgggaaccatagatttgtgcagctgtttcagtgcagggcttcctaaaacagaagccaactgggtgaatgtaataagtgatttgaaaaaaattgaagatcttattcaatctatgcatattgatgctactttatatacggaaagtgatgttcaccccagttgcaaagtaacagcaatgaagtgctttctcttggagttacaagttatttcacttgagtccggagatgcaagtattcatgatacagtagaaaatctgatcatcctagcaaacaacagtttgtcttctaatgggaatgtaacagaatctggatgcaaagaatgtgaggaactggaggaaaaaaatattaaagaatttttgcagagttttgtacatattgtccaaatgttcatcaacacttcttga
示例性小鼠IL-15变体A(SEQ ID NO：26)
NWIDVRYDLEKIESLIQSIHIDTTLYTDSDFHPSCKVTAMNCFLLELQVILHEYSNMTLNETVRNVLYLANSTLSSNKNVAESGCKECEELEEKTFTEFLQSFIRIVQMFINTS
编码示例性小鼠IL-15变体A的核酸(SEQ ID NO：27)
aactggatagatgtaagatatgacctggagaaaattgaaagccttattcaatctattcatattgacaccactttatacactgacagtgactttcatcccagttgcaaagttactgcaatgaactgctttctcctggaattgcaggttattttacatgagtacagtaacatgactcttaatgaaacagtaagaaacgtgctctaccttgcaaacagcactctgtcttctaacaagaatgtagcagaatctggctgcaaggaatgtgaggagctggaggagaaaaccttcacagagtttttgcaaagctttatacgcattgtccaaatgttcatcaacacgtcc
示例性小鼠IL-15变体B(SEQ ID NO：28)
NWIDVRYDLEKIESLIQSIHIDTTLYTDSDFHPSCKVTAMNCFLLELQVILHEYSNMTLNETVRNVLYLANSTLSSNKNVAESGCKECEELEEKTFTEFLQSFIRIVQMFINTS
编码示例性小鼠IL-15变体B的核酸(SEQ ID NO：29)
Aactggatagatgtaagatatgacctggagaaaattgaaagccttattcaatctattcatattgacaccactttatacactgacagtgactttcatcccagttgcaaagttactgcaatgaactgctttctcctggaattgcaggttattttacatgagtacagtaacatgactcttaatgaaacagtaagaaacgtgctctaccttgcaaacagcactctgtcttctaacaagaatgtagcagaatctggctgcaaggaatgtgaggagctggaggagaaaaccttcacagagtttttgcaaagctttatacgcattgtccaaatgttcatcaacacgtcc
在一些实施方案中，细胞外IL-15结构域包含或是与野生型IL-15蛋白(例如，野生型成熟IL-15蛋白，例如SEQ ID NO：22、24、26或28)至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，细胞外IL-15结构域包含与SEQ ID NO：22、24、26或28相异1至25个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，细胞外IL-15结构域包含例如除了SEQ IDNO：22、24、26或28之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1至约100个氨基酸、1至约80个氨基酸、1至约60个氨基酸、1至约40个氨基酸、1至约20个氨基酸、1至约10个氨基酸、约5至约100个氨基酸、约5至约80个氨基酸、约5至约60个氨基酸、约5至约40个氨基酸、约5至约20个氨基酸、约10至约100个氨基酸、约10至约80个氨基酸、约10至约60个氨基酸、约10至约40个氨基酸或约10至约20个氨基酸)。另外或替代地，与SEQ ID NO：22、24、26或28相比，细胞外IL-15结构域可以缺少1至约25个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸)。
在一些实施方案中，编码细胞外IL-15结构域的核酸包含或是与SEQ ID NO：23、25、27或29至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码细胞外IL-15结构域的核酸包含与SEQ ID NO：23、25、27或29相异1至约75个核苷酸(例如，1至约70个核苷酸、1至约60个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约40个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约10个核苷酸、约5个核苷酸至约75个核苷酸、约5个核苷酸至约70个核苷酸、约5个核苷酸至约60个核苷酸、约5个核苷酸至约50个核苷酸、约5个核苷酸至约40个核苷酸、约5个核苷酸至约30个核苷酸、约5个核苷酸至约20个核苷酸、约5个核苷酸至约10个核苷酸)的序列。在一些实施方案中，编码细胞外IL-15结构域的核酸包含例如除了SEQ ID NO：23、25、27或29之外的一个或更多个另外的核苷酸(例如，1至约300个核苷酸、1至约250个核苷酸、1至约200个核苷酸、1至约150个核苷酸、1至约100个核苷酸、1至约50个核苷酸、约5个核苷酸至约300个核苷酸、约5个核苷酸至约250个核苷酸、约5个核苷酸至约200个核苷酸、约5个核苷酸至约150个核苷酸、约5个核苷酸至约100个核苷酸或约5个核苷酸至约50个核苷酸)。另外或可替代地，编码细胞外IL-15结构域的核酸可以从SEQ ID NO：23、25、27或29的5’-端缺少1至75个核苷酸(例如，1至约70个核苷酸、1至约65个核苷酸、1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)和/或从SEQ ID NO：23、25、27或29的3’-端缺少1至75个核苷酸(例如，1至约70个核苷酸、1至约65个核苷酸、1至约60个核苷酸、1至约55个核苷酸、1至约50个核苷酸、1至约45个核苷酸、1至40个核苷酸、1至约35个核苷酸、1至约30个核苷酸、1至约25个核苷酸、1至约20个核苷酸、1至约15个核苷酸、1至约10个核苷酸或1至约5个核苷酸)。
如本领域技术人员会理解的，当来自不同物种的野生型IL-15蛋白之间不保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们不太可能引起IL-15蛋白的一种或更多种活性水平降低。相反，当来自不同物种的野生型IL-15蛋白之间保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们更可能引起IL-15蛋白的一种或更多种活性水平降低。鉴于该认知，本领域技术人员可以选择在不降低IL-15蛋白的活性的情况下野生型IL-15蛋白中的哪些氨基酸位置(例如，非保守氨基酸)可以被取代。
在一些实施方案中，细胞外IL-15结构域是野生型IL-15蛋白(例如成熟的野生型IL-15蛋白，例如本文所述的成熟的野生型IL-15蛋白中的任一种，例如SEQ ID NO：22、SEQID NO：24、SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：28)的序列，其从野生型IL-15蛋白序列的N-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。在一些实施方案中，细胞外IL-15结构域是野生型IL-15蛋白(例如成熟的野生型IL-15蛋白，例如本文所述的成熟的野生型IL-15蛋白中的任一种，例如SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：28)的序列，其从野生型IL-15蛋白序列的C-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。在一些实施方案中，细胞外IL-15结构域是野生型IL-15蛋白(例如成熟的野生型IL-15蛋白，例如本文所述的成熟的野生型IL-15蛋白中的任一种，例如SEQ ID NO：22、SEQID NO：24、SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：28)的序列，其从野生型IL-15蛋白序列的N-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸并且从野生型IL-15蛋白序列的C-末端移除1至10个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。
如本领域普通技术人员会理解的，当编码具有细胞外IL-15结构域的嵌合跨膜蛋白的核酸与SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27或SEQ ID NO：29相比包含或缺少一个或更多个另外的核苷酸时，仍应维持翻译阅读框，使得不引入无义密码子，并且可以翻译完整蛋白质(例如，编码具有细胞外IL-15结构域的嵌合跨膜蛋白的核酸可以包含或缺少在嵌合跨膜蛋白的细胞外IL-15部分内的3个核苷酸或其倍数)。
IL-7受体的α链
本文所述的嵌合跨膜蛋白的一些实施方案还可以包含IL-7受体蛋白的α链的序列或其一部分。例如，本文所述的嵌合跨膜蛋白可以包含来自人、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、猪、狗、猫或任何其他合适物种的IL-7受体蛋白的野生型α链的序列或其一部分。IL-7受体的野生型α链的非限制性实例在下文描述。IL-7受体的α链的另外的实例是本领域已知的。在一些实施方案中，包含IL-7受体的α链的序列或其一部分的嵌合跨膜蛋白包含IL-7受体的α链的跨膜结构域(例如，本文所述的IL-7受体的α链的跨膜结构域中的任一种)。
示例性野生型人IL-7受体α链(SEQ ID NO：30)
ESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNITNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVVYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMDPILLTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
编码野生型人IL-7受体α链的核酸(SEQ ID NO：31)
gaaagtggctatgctcaaaatggagacttggaagatgcagaactggatgactactcattctcatgctatagccagttggaagtgaatggatcgcagcactcactgacctgtgcttttgaggacccagatgtcaacatcaccaatctggaatttgaaatatgtggggccctcgtggaggtaaagtgcctgaatttcaggaaactacaagagatatatttcatcgagacaaagaaattcttactgattggaaagagcaatatatgtgtgaaggttggagaaaagagtctaacctgcaaaaaaatagacctaaccactatagttaaacctgaggctccttttgacctgagtgtcgtctatcgggaaggagccaatgactttgtggtgacatttaatacatcacacttgcaaaagaagtatgtaaaagttttaatgcacgatgtagcttaccgccaggaaaaggatgaaaacaaatggacgcatgtgaatttatccagcacaaagctgacactcctgcagagaaagctccaaccggcagcaatgtatgagattaaagttcgatccatccctgatcactattttaaaggcttctggagtgaatggagtccaagttattacttcagaactccagagatcaataatagctcaggggagatggatcctatcttactaaccatcagcattttgagttttttctctgtcgctctgttggtcatcttggcctgtgtgttatggaaaaaaaggattaagcctatcgtatggcccagtctccccgatcataagaagactctggaacatctttgtaagaaaccaagaaaaaatttaaatgtgagtttcaatcctgaaagtttcctggactgccagattcatagggtggatgacattcaagctagagatgaagtggaaggttttctgcaagatacgtttcctcagcaactagaagaatctgagaagcagaggcttggaggggatgtgcagagccccaactgcccatctgaggatgtagtcatcactccagaaagctttggaagagattcatccctcacatgcctggctgggaatgtcagtgcatgtgacgcccctattctctcctcttccaggtccctagactgcagggagagtggcaagaatgggcctcatgtgtaccaggacctcctgcttagccttgggactacaaacagcacgctgccccctccattttctctccaatctggaatcctgacattgaacccagttgctcagggtcagcccattcttacttccctgggatcaaatcaagaagaagcatatgtcaccatgtccagcttctaccaaaaccag
示例性野生型小鼠IL-7受体α链变体1(SEQ ID NO：32)
ESGNAQDGDLEDADADDHSFWCHSQLEVDGSQHLLTCAFNDSDINTANLEFQICGALLRVKCLTLNKLQDIYFIKTSEFLLIGSSNICVKLGQKNLTCKNMAINTIVKAEAPSDLKVVYRKEANDFLVTFNAPHLKKKYLKKVKHDVAYRPARGESNWTHVSLFHTRTTIPQRKLRPKAMYEIKVRSIPHNDYFKGFWSEWSPSSTFETPEPKNQGGWDPVLPSVTILSLFSVFLLVILAHVLWKKRIKPVVWPSLPDHKKTLEQLCKKPKTSLNVSFNPESFLDCQIHEVKGVEARDEVESFLPNDLPAQPEELETQGHRAAVHSANRSPETSVSPPETVRRESPLRCLARNLSTCNAPPLLSSRSPDYRDGDRNRPPVYQDLLPNSGNTNVPVPVPQPLPFQSGILIPVSQRQPISTSSVLNQEEAYVTMSSFYQNK
编码野生型小鼠IL-7受体α链变体1的核酸(SEQ ID NO：33)
gaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccacagccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatctggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttataaagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaaaatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaatgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctaccgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaaaactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctggagcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggatcctgtcttgccaagtgtcaccattctgagtttgttctctgtgtttttgttggtcatcttagcccatgtgctatggaaaaaaaggattaaacctgtcgtatggcctagtctccccgatcataagaaaactctggaacaactatgtaagaagccaaaaacgagtctgaatgtgagtttcaatcccgaaagtttcctggactgccagattcatgaggtgaaaggcgttgaagccagggacgaggtggaaagttttctgcccaatgatcttcctgcacagccagaggagttggagacacagggacacagagccgctgtacacagtgcaaaccgctcgcctgagacttcagtcagcccaccagaaacagttagaagagagtcacccttaagatgcctggctagaaatctgagtacctgcaatgcccctccactcctttcctctaggtcccctgactacagagatggtgacagaaataggcctcctgtgtatcaagacttgctgccaaactctggaaacacaaatgtccctgtccctgtccctcaaccattgcctttccagtcgggaatcctgataccagtttctcagagacagcccatctccacttcctcagtactgaatcaagaagaagcgtatgtcaccatgtctagtttttaccaaaacaaa
示例性野生型小鼠IL-7受体α链变体2(SEQ ID NO：34)
ESGNAQDGDLEDADADDHSFWCHSQLEVDGSQHLLTCAFNDSDINTANLEFQICGALLRVKCLTLNKLQDIYFIKTSEFLLIGSSNICVKLGQKNLTCKNMAINTIVKAEAPSDLKVVYRKEANDFLVTFNAPHLKKKYLKKVKHDVAYRPARGESNWTHVSLFHTRTTIPQRKLRPKAMYEIKVRSIPHNDYFKGFWSEWSPSSTFETPEPKNQGGWDPVLPSVTILSLFSVFLLVILAHVLWKKRIKPVVWPSLPDHKKTLEQL
编码野生型小鼠IL-7受体α链变体2的核酸(SEQ ID NO：35)
Atgatggctctgggtagagctttcgctatagttttctgcttaattcaagctgtttctggagaaagtggaaatgcccaggatggagacctagaagatgcagacgcggacgatcactccttctggtgccacagccagttggaagtggatggaagtcaacatttattgacttgtgcttttaatgactcagacatcaacacagctaatctggaatttcaaatatgtggggctcttttacgagtgaaatgcctaactcttaacaagctgcaagatatatattttataaagacatcagaattcttactgattggtagcagcaatatatgtgtgaagcttggacaaaagaatttaacttgcaaaaatatggctataaacacaatagttaaagccgaggctccctctgacctgaaagtcgtttatcgcaaagaagcaaatgattttttggtgacatttaatgcacctcacttgaaaaagaaatatttaaaaaaagtaaagcatgatgtggcctaccgcccagcaaggggtgaaagcaactggacgcatgtatctttattccacacaagaacaacaatcccacagagaaaactacgaccaaaagcaatgtatgaaatcaaagtccgatccattccccataacgattacttcaaaggcttctggagcgagtggagtccaagttctaccttcgaaactccagaacccaagaatcaaggaggatgggatcctgtcttgccaagtgtcaccattctgagtttgttctctgtgtttttgttggtcatcttagcccatgtgctatggaaaaaaaggattaaacctgtcgtatggcctagtctccccgatcataagaaaactctggaacaactatag
本文中提供的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案可以包含例如，与SEQ IDNO：30、32或34至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列或其一部分。本文中提供的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案可以包含例如，与SEQ ID NO：30、32或34相异1至60个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸)的序列。本文中提供的任何嵌合跨膜蛋白的一些实施方案还可以包含例如，通过缺少1至60个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸)与SEQ ID NO：30、32或34不同的序列。
在一些实施方案中，编码IL-7受体的α链的核酸包含或是与SEQ ID NO：31、33或35至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码IL-7受体的α链的核酸包含与SEQ ID NO：31、33或35相异一个或更多个核苷酸(例如，1至约180个核苷酸、1至约160个核苷酸、1至约140个核苷酸、1至约120个核苷酸、1至约100个核苷酸、1至约80个核苷酸、1至约60个核苷酸、1至约40个核苷酸、1至约20个核苷酸、约5至约180个核苷酸、约5至约180个核苷酸、约5至约160个核苷酸、约5至约160个核苷酸、约5至约140个核苷酸、约5至约120个核苷酸、约5至约100个核苷酸、约5至约80个核苷酸、约5至约60个核苷酸、约5至约40个核苷酸或约5至约20个核苷酸)的序列。另外或可替代地，与SEQ ID NO：31、33或35的序列相比，编码IL-7受体的α链的核酸可以缺少一个或更多个核苷酸(例如，1至约180个核苷酸、1至约160个核苷酸、1至约140个核苷酸、1至约120个核苷酸、1至约100个核苷酸、1至约80个核苷酸、1至约60个核苷酸、1至约40个核苷酸、1至约20个核苷酸、约5至约180个核苷酸、约5至约180个核苷酸、约5至约160个核苷酸、约5至约160个核苷酸、约5至约140个核苷酸、约5至约120个核苷酸、约5至约100个核苷酸、约5至约80个核苷酸、约5至约60个核苷酸、约5至约40个核苷酸或约5至约20个核苷酸)。
如本领域技术人员可以理解的，当来自不同物种的IL-7受体蛋白的野生型α链之间不保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们不太可能引起IL-7受体蛋白的α链的一种或更多种活性水平降低。相反，当来自不同物种的IL-7受体蛋白α链的野生型α链之间保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们更可能引起IL-7受体蛋白的α链的一种或更多种活性水平降低。鉴于该认知，本领域技术人员可以选择在不降低IL-7受体蛋白α链的α链的活性的情况下IL-7受体蛋白α链的野生型α链中的哪些氨基酸位置(例如，非保守氨基酸)可以被取代。
本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案可以保护IL-7受体蛋白的野生型α链(例如，IL-7受体蛋白的成熟的野生型α链，例如本文所述的IL-7受体的成熟野生型α链中的任一种，例如IL-7受体的成熟的野生型人α链，例如SEQ ID NO：30)的序列，其从IL-7受体蛋白的野生型α链序列的N-末端移除1至10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案可以保护IL-7受体蛋白的野生型α链(例如，IL-7受体蛋白的成熟的野生型α链，例如本文所述的IL-7受体的成熟野生型α链中任一种，例如IL-7受体的成熟的野生型人α链，例如SEQ ID NO：30)的序列，其从IL-7受体蛋白的野生型α链序列的C-末端移除1至10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案可以保护IL-7受体蛋白的野生型α链(例如，IL-7受体蛋白的成熟的野生型α链，例如本文所述的IL-7受体的成熟野生型α链中的任一种，例如IL-7受体的成熟野生型人α链，例如SEQ ID NO：30)的序列，其从IL-7受体蛋白的野生型α链序列的N-末端移除1至10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸并且从IL-7受体蛋白的野生型α链序列的C-末端移除1至10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。
如本领域普通技术人员会理解的，当编码具有IL-7受体蛋白结构域的α链的嵌合跨膜蛋白的核酸与SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33或SEQ ID NO：35相比包含或缺少一个或更多个另外的核苷酸时，仍应维持翻译阅读框，以使使得不引入无义密码子，并且可以翻译完整蛋白质(例如，具有编码IL-7受体蛋白α链的结构域的编码嵌合跨膜蛋白的核酸可以包含或缺少在编码IL-7受体α链的结构域内的3个核苷酸或其倍数。
IL-15受体的α链的胞外sushi结构域
在一些实施方案中，本文所述的嵌合跨膜受体可以包含来自IL-15受体的α链的一个或更多个(例如，1、2、3或4个)sushi结构域。例如，本文所述的嵌合跨膜蛋白可以包含来自IL-15受体的野生型α链(例如，IL-15受体的野生型人α链、IL-15受体的野生型小鼠α链、IL-15受体的野生型大鼠α链、IL-15受体的野生型猴子α链、IL-15受体的野生型黑猩猩α链、IL-15受体的野生型猪α链、IL-15受体的野生型狗α链或IL-15受体的野生型猫α链)的sushi结构域。来自IL-15受体的sushi结构域的非限制性实例在下文描述。来自IL-15受体的sushi结构域的另外的实例是本领域已知的。
sushi结构域，也称为短共有重复序列或1型糖蛋白基序，是蛋白质-蛋白质相互作用中的常见基序。已经在许多蛋白质结合分子上鉴定了Sushi结构域，包括补体成分C1r、C1s、因子H和C2m，以及非免疫分子XIII和β2-糖蛋白。典型的Sushi结构域具有约60个氨基酸残基，并且含有4个半胱氨酸(Ranganathan,Pac.Symp Biocomput.2000:155-67)。第一半胱氨酸可以与第三半胱氨酸形成二硫键，并且第二半胱氨酸可以与第四半胱氨酸形成二硫键。
在一些实施方案中，sushi结构域的长度可以为约25个氨基酸至约90个氨基酸、约25个氨基酸至约85个氨基酸、约25个氨基酸至约80个氨基酸、约25个氨基酸至约75个氨基酸、约25个氨基酸至约70个氨基酸、约25个氨基酸至约65个氨基酸、约25个氨基酸至约60个氨基酸、约25个氨基酸至约55个氨基酸、约25个氨基酸至约50个氨基酸、约25个氨基酸至约45个氨基酸、约25个氨基酸至约40个氨基酸、约25个氨基酸至约35个氨基酸、约25个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约90个氨基酸、约30个氨基酸至约85个氨基酸、约30个氨基酸至约80个氨基酸、约30个氨基酸至约75个氨基酸、约30个氨基酸至约70个氨基酸、约30个氨基酸至约65个氨基酸、约30个氨基酸至约60个氨基酸、约30个氨基酸至约55个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约45个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约35个氨基酸、约35个氨基酸至约90个氨基酸、约35个氨基酸至约85个氨基酸、约35个氨基酸至约80个氨基酸、约35个氨基酸至约75个氨基酸、约35个氨基酸至约70个氨基酸、约35个氨基酸至约65个氨基酸、约35个氨基酸至约60个氨基酸、约35个氨基酸至约55个氨基酸、约35个氨基酸至约50个氨基酸、约35个氨基酸至约45个氨基酸、约35个氨基酸至约40个氨基酸、约40个氨基酸至约90个氨基酸、约40个氨基酸至约85个氨基酸、约40个氨基酸至约80个氨基酸、约40个氨基酸至约75个氨基酸、约40个氨基酸至约70个氨基酸、约40个氨基酸至约65个氨基酸、约40个氨基酸至约60个氨基酸、约40个氨基酸至约55个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约45个氨基酸、约45个氨基酸至约90个氨基酸、约45个氨基酸至约85个氨基酸、约45个氨基酸至约80个氨基酸、约45个氨基酸至约75个氨基酸、约45个氨基酸至约70个氨基酸、约45个氨基酸至约65个氨基酸、约45个氨基酸至约60个氨基酸、约45个氨基酸至约55个氨基酸、约45个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约90个氨基酸、约50个氨基酸至约85个氨基酸、约50个氨基酸至约80个氨基酸、约50个氨基酸至约75个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、约50个氨基酸至约65个氨基酸、约50个氨基酸至约60个氨基酸、约50个氨基酸至约55个氨基酸、约55个氨基酸至约90个氨基酸、约55个氨基酸至约85个氨基酸、约55个氨基酸至约80个氨基酸、约55个氨基酸至约75个氨基酸、约55个氨基酸至约70个氨基酸、约55个氨基酸至约65个氨基酸、约55个氨基酸至约60个氨基酸、约60个氨基酸至约90个氨基酸、约60个氨基酸至约85个氨基酸、约60个氨基酸至约80个氨基酸、约60个氨基酸至约75个氨基酸、约60个氨基酸至约70个氨基酸、约60个氨基酸至约65个氨基酸、约65个氨基酸至约90个氨基酸、约65个氨基酸至约85个氨基酸、约65个氨基酸至约80个氨基酸、约65个氨基酸至约75个氨基酸、约65个氨基酸至约70个氨基酸、约70个氨基酸至约90个氨基酸、约70个氨基酸至约85个氨基酸、约70个氨基酸至约80个氨基酸、约70个氨基酸至约75个氨基酸、约75个氨基酸至约90个氨基酸、约75个氨基酸至约85个氨基酸、约75个氨基酸至约80个氨基酸、约80个氨基酸至约90个氨基酸、约80个氨基酸至约85个氨基酸或约85个氨基酸至约90个氨基酸。
在一些实施方案中，细胞外sushi结构域包含或是与IL-2受体的成熟的野生型α链的细胞外部分(例如，IL-2受体的成熟的野生型人α链，例如SEQ ID NO：36或37)至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。
来自IL-15亚型1的野生型人α链的Sushi结构域(SEQ ID NO：36)
CPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCI
来自IL-15亚型2的野生型人α链的Sushi结构域(SEQ ID NO：37)
CPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCI
来自IL-15亚型1的野生型小鼠α链的Sushi结构域(SEQ ID NO：38)
CPPPVSIEHADIRVKNYSVNSRERYVCNSGFKRKAGTSTLIECVINKNTNVAHWTTPSLKCI
来自IL-15亚型4的野生型小鼠α链的Sushi结构域(SEQ ID NO：39)
CPPPVSIEHADIRVKNYSVNSRERYVCNSGFKRKAGTSTLIECVINKNTNVAHWTTPSLKCI
来自IL-15蛋白的野生型鸡α链的Sushi结构域(SEQ ID NO：40)
CPRLSTTEFADVAAETYPLKTKLRYECDSGYRRRSGNTLTIRCQNVSGTASWVHDELVC
来自IL-15亚型1的野生型人α链的细胞外部分(SEQ ID NO：41)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT
在一些实施方案中，细胞外sushi结构域是IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分(例如，IL-15受体的成熟的野生型人α链的细胞外部分，例如SEQ ID NO：41)。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域为与IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分(例如SEQ ID NO：41)至少80％、至少82％、至少84％、至少85％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列(例如SEQ ID NO：41)，其从为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列的N-末端移除1至20个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)氨基酸。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列(例如SEQ ID NO：41)，其从为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列的C-末端移除1至20个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)氨基酸。在一些实施方案中，细胞外sushi结构域为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列(例如SEQ ID NO：41)，其从为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列的N-末端移除1至20个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)氨基酸并且从为IL-15受体的成熟的野生型α链的细胞外部分的序列的C-末端移除1至20个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)氨基酸。
在一些实施方案中，细胞外sushi结构域包含或是来自IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的序列(例如，本文所述的来自IL-15受体的野生型α链的sushi结构域中的任一种，例如来自IL-15受体的野生型人α链的sushi结构域，例如包含SEQ ID NO：36或37中的一种或两种的序列)。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白的细胞外sushi结构域包含与IL-15受体的野生型α链的Sushi结构域(例如，SEQ ID NO：36、37、38、39或40)至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。
如本领域技术人员可以理解的，当来自不同物种的IL-15受体蛋白的野生型α链的sushi结构域之间不保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们不太可能引起IL-15受体蛋白的α链的sushi结构域的IL-15结合活性水平降低。相反，当来自不同物种的IL-15受体蛋白的野生型α链的sushi结构域之间保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们更可能引起IL-15受体蛋白的α链的sushi结构域的IL-15结合活性水平降低。来自IL-15受体蛋白的α链的sushi结构域的IL-15结合活性。鉴于该认知，本领域技术人员可以选择在不降低IL-15受体蛋白的α链的Sushi结构域活性的情况下IL-15受体蛋白的α链的sushi结构域中的哪些氨基酸位置(例如，非保守氨基酸)可以被取代。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白的细胞外sushi结构域为来自IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的序列(例如，SEQ ID NO：36、37、38、39或40中的任一种)，其从IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的N-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白的细胞外sushi结构域为来自IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的序列(例如，SEQ ID NO：36、37、38、39或40中的任一种)，其从IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的C-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白的细胞外sushi结构域为来自IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的序列(例如，SEQ ID NO：36、37、38、39或40中的任一种)，其从IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的N-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸并且从IL-15受体的野生型α链的sushi结构域的C-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸。
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含两个sushi结构域。在一些实施例中，各个sushi结构域可以独立地为本文所述的sushi结构域中的任一种。
IL-7受体的α链的跨膜结构域
本文所述的嵌合跨膜蛋白可以包含来自人、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、猪、狗、猫或任何其他合适物种的IL-7受体的野生型α链的跨膜结构域。IL-7受体的野生型α链的跨膜结构域的非限制性实例在下文描述。IL-7受体的野生型α链的跨膜结构域的另外的实例是本领域已知的。
IL-7受体的野生型人α链的跨膜结构域(SEQ ID NO：1)
PILLTISILSFFSVALLVILACVLW
IL-7受体亚型1的野生型小鼠α链的跨膜结构域(SEQ ID NO：42)
PVLPSVTILSLFSVFLLVILAHVLW
IL-7受体亚型2的野生型小鼠α链的跨膜结构域(SEQ ID NO：42)
PVLPSVTILSLFSVFLLVILAHVLW
IL-7受体的野生型食蟹猴α链的跨膜结构域(SEQ ID NO：44)
PILLTISLLSFFSVALLVILACVLW
在一些实施方案中，来自IL-2受体蛋白的α链跨膜结构域的长度可以为约10个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约45个氨基酸、约10个氨基酸至约40个氨基酸、约10个氨基酸至约35个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约25个氨基酸、约10个氨基酸至约22个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约18个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约15个氨基酸至约50个氨基酸、约15个氨基酸至约45个氨基酸、约15个氨基酸至约40个氨基酸、约15个氨基酸至约35个氨基酸、约15个氨基酸至约30个氨基酸、约15个氨基酸至约25个氨基酸、约15个氨基酸至约22个氨基酸、约15个氨基酸至约20个氨基酸、约15个氨基酸至约18个氨基酸、约18个氨基酸至约50个氨基酸、约18个氨基酸至约45个氨基酸、约18个氨基酸至约40个氨基酸、约18个氨基酸至约35个氨基酸、约18个氨基酸至约30个氨基酸、约18个氨基酸至约25个氨基酸、约18个氨基酸至约22个氨基酸、约18个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约50个氨基酸、约20个氨基酸至约45个氨基酸、约20个氨基酸至约40个氨基酸、约20个氨基酸至约35个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约25个氨基酸、约20个氨基酸至约22个氨基酸、约22个氨基酸至约50个氨基酸、约22个氨基酸至约45个氨基酸、约22个氨基酸至约40个氨基酸、约22个氨基酸至约35个氨基酸、约22个氨基酸至约30个氨基酸、约22个氨基酸至约25个氨基酸、约25个氨基酸至约50个氨基酸、约25个氨基酸至约45个氨基酸、约25个氨基酸至约40个氨基酸、约25个氨基酸至约35个氨基酸、约25个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约45个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约35个氨基酸、约35个氨基酸至约50个氨基酸、约35个氨基酸至约45个氨基酸、约35个氨基酸至约40个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约45个氨基酸或约45个氨基酸至约50个氨基酸。
在本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案中，IL-7受体的α链的跨膜结构域可以为来自IL-7受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，IL-7受体的野生型人α链的跨膜结构域，例如SEQ ID NO：1)(例如，下文所列或本领域已知的IL-7受体的野生型α链的示例性跨膜结构域中的任一种，例如SEQ ID号：1、42、43或44)。
在一些实施方案中，IL-7受体的α链的跨膜结构域包含或是来自与IL-7受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，SEQ ID NO：1、42、43或44中的任一种)至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，IL-7受体的α链的跨膜结构域包含与IL-7受体的野生型α链的跨膜结构域(例如，SEQ ID NO：1、42、43或44中的任一种)相异1至5个氨基酸(例如，1、2、3、4或5个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，IL-7受体的α链的跨膜结构域包含例如除了1、2、3、4或5个氨基酸的序列之外的1至20个另外的氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、15、16、17、18、19或20个氨基酸)。在一些实施方案中，IL-7受体的α链的跨膜结构域可以具有SEQ ID NO：1、42、43或44中的任一种的序列，但缺少1至5个氨基酸(例如，1、2、3、4或5个氨基酸)。
如本领域技术人员可以理解的，当在来自不同物种的IL-7受体蛋白的野生型α链的跨膜结构域之间不保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们不太可能引起IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域的活性降低。相反，当在来自不同物种的IL-7受体蛋白的野生型α链的跨膜结构域之间保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们更可能引起引起IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域的活性降低。鉴于该认知，本领域技术人员可以选择在不降低IL-7受体蛋白α链的跨膜结构域的活性的情况下IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域中的哪些氨基酸位置(例如，非保守氨基酸)可以被取代。
在一些实施方案中，IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域为IL-7受体蛋白的野生型α链的跨膜结构域的序列(例如，SEQ ID NO：1、42、43或44)，其从IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域的N-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸。在一些实施方案中，IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域为IL-7受体蛋白的野生型α链的跨膜结构域的序列(例如，SEQ IDNO：1、42、43或44)，其从IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域的C-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸。在一些实施方案中，IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域为IL-7受体蛋白的野生型α链的跨膜结构域的序列(例如，IL-7受体蛋白的野生型人α链的跨膜结构域，例如SEQ ID NO：1、42、43或44)，其从IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域的N-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸并且从IL-7受体蛋白的α链的跨膜结构域的C-末端移除1至5个(例如，1、2、3、4或5个)氨基酸。
在本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种的一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域包含PILLTISILSFFSVALLVILACVLW(SEQ ID NO：1)的序列，其具有一个或更多个(例如，1、2、3或4个)以下修饰：(i)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被不同的3个氨基酸序列取代(例如，被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代)；(ii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置5与6之间插入1至3个(例如1个、2个或3个)氨基酸(例如半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸)；(iii)在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入1至4个(例如，1、2、3或4个)氨基酸(例如，脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸)。在一些实施方案中，跨膜结构域被修饰为具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
在一些实施方案中，跨膜结构域包含SEQ ID NO：1的序列，其中在SEQ ID NO：1的氨基酸位置15至17处的丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸被谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸或谷氨酸-赖氨酸-丙氨酸取代。在一些实施方案中，跨膜结构域包含SEQ ID NO：1的序列，其中在SEQ IDNO：1的氨基酸位置5与6之间插入半胱氨酸-脯氨酸-苏氨酸。在一些实施方案中，跨膜结构域包含SEQ ID NO：1的序列，其中在SEQ ID NO：1的氨基酸位置4与5之间插入脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。在一些实施方案中，跨膜结构域被修饰为具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
IL-7受体的α链的细胞内结构域
本文所述的嵌合跨膜蛋白的一些实施方案还可以包含IL-7受体的α链的细胞内结构域或其一部分。例如，本文所述的嵌合跨膜蛋白可以包含来自人、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、猪、狗、猫或任何其他合适物种的IL-7受体的野生型α链的细胞内结构域。IL-7受体的α链的细胞内结构域的非限制性实例在下文描述。IL-7受体的α链的细胞内结构域的另外的实例是本领域已知的。
本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种可以包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域(例如，本文所述的白细胞介素-7受体的α链中的任一种)。在一些实施方案中，白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域的长度可以为约100个氨基酸至约225个氨基酸、约100个氨基酸至约200个氨基酸、约100个氨基酸至约180个氨基酸、约100个氨基酸至约160个氨基酸、约100个氨基酸至约140个氨基酸、约100个氨基酸至约120个氨基酸、约120个氨基酸至约225个氨基酸、约120个氨基酸至约200个氨基酸、约120个氨基酸至约180个氨基酸、约120个氨基酸至约160个氨基酸、约120个氨基酸至约140个氨基酸、约140个氨基酸至约225个氨基酸、约140个氨基酸至约200个氨基酸、约140个氨基酸至约180个氨基酸、约140个氨基酸至约160个氨基酸、约160个氨基酸至约225个氨基酸、约160个氨基酸至约200个氨基酸、约160个氨基酸至约180个氨基酸、约180个氨基酸至约225个氨基酸、约180个氨基酸至约200个氨基酸或约200个氨基酸至约225个氨基酸。
本文所述的嵌合跨膜蛋白中的任一种可以包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如，白细胞介素-7受体的野生型人α链的细胞内结构域，例如SEQ ID NO：45)(例如，SEQ ID NO：46的白细胞介素-7的野生型人α链的细胞内结构域)。
IL-7受体的野生型人α链的胞内结构域(SEQ ID NO：45，BOX1基序加下划线，磷酸化的酪氨酸以加大粗体显示)
编码IL-7受体的野生型人α链的胞内结构域的核酸(SEQ ID NO：82，编码BOX1基序的核酸序列加下划线)
aagaagaggatcaagcccatcgtgtggcccagcctgcccgaccacaagaagaccctggagcacctgtgtaagaagcccaggaagaacctgaacgtgagcttcaaccccgagagcttcctggactgccagatccacagggtggacgacatccaggccagggacgaggtggagggcttcctgcaggacaccttcccccagcagctggaggagagcgagaagcagaggctgggcggcgacgtgcagagccccaactgccccagcgaggacgtggtgatcacccccgagagcttcggcagggacagcagcctgacctgcctggccggcaacgtgagcgcctgcgacgcccccatcctgagcagcagcaggagcctggactgcagggagagcggcaagaacggcccccacgtgtaccaggacctgctgctgagcctgggcaccaccaacagcaccctgccaccccccttcagcctgcagagcggcatcctgaccctgaaccccgtggcccagggccagcccatcctgaccagcctgggcagcaaccaggaggaggcctacgtgaccatgagcagcttctaccagaaccag
IL-7受体亚型1的野生型小鼠α链的胞内结构域(SEQ ID NO：46)
KKRIKPVVWPSLPDHKKTLEQLCKKPKTSLNVSFNPESFLDCQIHEVKGVEARDEVESFLPNDLPAQPEELETQGHRAAVHSANRSPETSVSPPETVRRESPLRCLARNLSTCNAPPLLSSRSPDYRDGDRNRPPVYQDLLPNSGNTNVPVPVPQPLPFQSGILIPVSQRQPISTSSVLNQEEAYVTMSSFYQNK
在一些实施方案中，IL-7受体的α链的细胞内结构域包含或是与IL-7受体的野生型α链的细胞内结构域(例如，SEQ ID NO：45或46)至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同。在一些实施方案中，IL-7受体的α链的细胞内结构域包含与IL-7受体的野生型α链的细胞内结构域的序列(例如，SEQ ID NO：45或46)相异1至40个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸)的序列。在一些实施方案中，IL-7受体的α链的细胞内结构域包含例如除了SEQ ID NO：45或46的序列之外的一个或更多个另外的氨基酸(例如，1至约100个氨基酸、1至约95个氨基酸、1至约90个氨基酸、1至约85个氨基酸、1至约80个氨基酸、1至约75个氨基酸、1至约70个氨基酸、1至约65个氨基酸、1至约60个氨基酸、1至约55个氨基酸1至约50个氨基酸、1至约45个氨基酸、1至约40个氨基酸、1至约35个氨基酸、1至约30个氨基酸、1至约25个氨基酸、1至约20个氨基酸、1至约15个氨基酸、1至约10个氨基酸或1至约5个氨基酸)。在一些实施方案中，IL-7受体的α链的细胞内结构域可以具有SEQ IDNO：45或46中任一种的序列，但缺少1至40个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸)。
如本领域技术人员可以理解的，当来自不同物种的IL-7受体蛋白的野生型α链的细胞内结构域之间不保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们不太可能引起来自IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的活性降低。相反，当来自不同物种的IL-7受体蛋白α链的野生型α链的细胞内结构域之间保守的氨基酸突变(例如，被不同的氨基酸取代)时，它们更可能引起来自IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的活性降低。鉴于该认知，本领域技术人员可以选择在不降低来自IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的活性的情况下IL-7受体蛋白α链的细胞内结构域中的哪些氨基酸位置(例如，非保守氨基酸)可以被取代。
在一些实施方案中，IL-7受体蛋白的α链的胞内结构域为IL-7受体蛋白的野生型α链的胞内结构域的序列(例如，SEQ ID NO：45或46)，其从IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的N-末端移除1至3个(例如，1、2或3个)氨基酸。在一些实施方案中，IL-7受体蛋白的α链的胞内结构域为IL-7受体蛋白的野生型α链的胞内结构域的序列(例如，SEQ ID NO：45或46)，其从IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的C-末端移除1至3个(例如，1、2或3个)氨基酸。在一些实施方案中，IL-7受体蛋白的α链的胞内结构域为IL-7受体蛋白的野生型α链的胞内结构域的序列(例如，SEQ ID NO：45或46)，其从IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的N-末端移除1至3个(例如，1、2或3个)氨基酸并且从IL-7受体蛋白的α链的细胞内结构域的C-末端移除1至3个(例如，1、2或3个)氨基酸。
接头序列
在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含位于细胞外IL-15结构域与细胞外sushi结构域之间的接头序列。在一些实施方案中，嵌合跨膜蛋白包含位于IL-15受体的α链的细胞外sushi结构域与跨膜结构域之间的另外的接头序列。当嵌合跨膜蛋白包含接头序列和另外的接头序列时，各接头序列可以彼此相同或不同。
在一些实施方案中，接头序列和另外的接头序列为1个氨基酸至约50个氨基酸、1个氨基酸至约48个氨基酸、1个氨基酸至约46个氨基酸、1个氨基酸至约44个氨基酸、1个氨基酸至约42个氨基酸、1个氨基酸至约40个氨基酸、1个氨基酸至约38个氨基酸、1个氨基酸至约36个氨基酸、1个氨基酸至约34个氨基酸、1个氨基酸至约32个氨基酸、1个氨基酸至约30个氨基酸、1个氨基酸至约28个氨基酸、1个氨基酸至约26个氨基酸、1个氨基酸至约24个氨基酸、1个氨基酸至约22个氨基酸、1个氨基酸至约20个氨基酸、1个氨基酸至约18个氨基酸、1个氨基酸至约16个氨基酸、1个氨基酸至约14个氨基酸、1个氨基酸至约12个氨基酸、1个氨基酸至约10个氨基酸、1个氨基酸至约8个氨基酸、1个氨基酸至约6个氨基酸、1个氨基酸至约4个氨基酸、1个氨基酸至约3个氨基酸、约2个氨基酸至约50个氨基酸、约2个氨基酸至约48个氨基酸、约2个氨基酸至约46个氨基酸、约2个氨基酸至约44个氨基酸、约2个氨基酸至约42个氨基酸、约2个氨基酸至约40个氨基酸、约2个氨基酸至约38个氨基酸、约2个氨基酸至约36个氨基酸、约2个氨基酸至约34个氨基酸、约2个氨基酸至约32个氨基酸、约2个氨基酸至约30个氨基酸、约2个氨基酸至约28个氨基酸、约2个氨基酸至约26个氨基酸、约2个氨基酸至约24个氨基酸、约2个氨基酸至约22个氨基酸、约2个氨基酸至约20个氨基酸、约2个氨基酸至约18个氨基酸、约2个氨基酸至约16个氨基酸、约2个氨基酸至约14个氨基酸、约2个氨基酸至约12个氨基酸、约2个氨基酸至约10个氨基酸、约2个氨基酸至约8个氨基酸、约2个氨基酸至约6个氨基酸、约2个氨基酸至约4个氨基酸、约4个氨基酸至约50个氨基酸、约4个氨基酸至约48个氨基酸、约4个氨基酸至约46个氨基酸、约4个氨基酸至约44个氨基酸、约4个氨基酸至约42个氨基酸、约4个氨基酸至约40个氨基酸、约4个氨基酸至约38个氨基酸、约4个氨基酸至约36个氨基酸、约4个氨基酸至约34个氨基酸、约4个氨基酸至约32个氨基酸、约4个氨基酸至约30个氨基酸、约4个氨基酸至约28个氨基酸、约4个氨基酸至约26个氨基酸、约4个氨基酸至约24个氨基酸、约4个氨基酸至约22个氨基酸、约4个氨基酸至约20个氨基酸、约4个氨基酸至约18个氨基酸、约4个氨基酸至约16个氨基酸、约4个氨基酸至约14个氨基酸、约4个氨基酸至约12个氨基酸、约4个氨基酸至约10个氨基酸、约4个氨基酸至约8个氨基酸、约4个氨基酸至约6个氨基酸、约6个氨基酸至约50个氨基酸、约6个氨基酸至约48个氨基酸、约6个氨基酸至约46个氨基酸、约6个氨基酸至约44个氨基酸、约6个氨基酸至约42个氨基酸、约6个氨基酸至约40个氨基酸、约6个氨基酸至约38个氨基酸、约6个氨基酸至约36个氨基酸、约6个氨基酸至约34个氨基酸、约6个氨基酸至约32个氨基酸、约6个氨基酸至约30个氨基酸、约6个氨基酸至约28个氨基酸、约6个氨基酸至约26个氨基酸、约6个氨基酸至约24个氨基酸、约6个氨基酸至约22个氨基酸、约6个氨基酸至约20个氨基酸、约6个氨基酸至约18个氨基酸、约6个氨基酸至约16个氨基酸、约6个氨基酸至约14个氨基酸、约6个氨基酸至约12个氨基酸、约6个氨基酸至约10个氨基酸、约6个氨基酸至约8个氨基酸、约8个氨基酸至约50个氨基酸、约8个氨基酸至约48个氨基酸、约8个氨基酸至约46个氨基酸、约8个氨基酸至约44个氨基酸、约8个氨基酸至约42个氨基酸、约8个氨基酸至约40个氨基酸、约8个氨基酸至约38个氨基酸、约8个氨基酸至约36个氨基酸、约8个氨基酸至约34个氨基酸、约8个氨基酸至约32个氨基酸、约8个氨基酸至约30个氨基酸、约8个氨基酸至约28个氨基酸、约8个氨基酸至约26个氨基酸、约8个氨基酸至约24个氨基酸、约8个氨基酸至约22个氨基酸、约8个氨基酸至约20个氨基酸、约8个氨基酸至约18个氨基酸、约8个氨基酸至约16个氨基酸、约8个氨基酸至约14个氨基酸、约8个氨基酸至约12个氨基酸、约8个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约48个氨基酸、约10个氨基酸至约46个氨基酸、约10个氨基酸至约44个氨基酸、约10个氨基酸至约42个氨基酸、约10个氨基酸至约40个氨基酸、约10个氨基酸至约38个氨基酸、约10个氨基酸至约36个氨基酸、约10个氨基酸至约34个氨基酸、约10个氨基酸至约32个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约28个氨基酸、约10个氨基酸至约26个氨基酸、约10个氨基酸至约24个氨基酸、约10个氨基酸至约22个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约18个氨基酸、约10个氨基酸至约16个氨基酸、约10个氨基酸至约14个氨基酸、约10个氨基酸至约12个氨基酸、约12个氨基酸至约50个氨基酸、约12个氨基酸至约48个氨基酸、约12个氨基酸至约46个氨基酸、约12个氨基酸至约44个氨基酸、约12个氨基酸至约42个氨基酸、约12个氨基酸至约40个氨基酸、约12个氨基酸至约38个氨基酸、约12个氨基酸至约36个氨基酸、约12个氨基酸至约34个氨基酸、约12个氨基酸至约32个氨基酸、约12个氨基酸至约30个氨基酸、约12个氨基酸至约28个氨基酸、约12个氨基酸至约26个氨基酸、约12个氨基酸至约24个氨基酸、约12个氨基酸至约22个氨基酸、约12个氨基酸至约20个氨基酸、约12个氨基酸至约18个氨基酸、约12个氨基酸至约16个氨基酸、约12个氨基酸至约14个氨基酸、约14个氨基酸至约50个氨基酸、约14个氨基酸至约48个氨基酸、约14个氨基酸至约46个氨基酸、约14个氨基酸至约44个氨基酸、约14个氨基酸至约42个氨基酸、约14个氨基酸至约40个氨基酸、约14个氨基酸至约38个氨基酸、约14个氨基酸至约36个氨基酸、约14个氨基酸至约34个氨基酸、约14个氨基酸至约32个氨基酸、约14个氨基酸至约30个氨基酸、约14个氨基酸至约28个氨基酸、约14个氨基酸至约26个氨基酸、约14个氨基酸至约24个氨基酸、约14个氨基酸至约22个氨基酸、约14个氨基酸至约20个氨基酸、约14个氨基酸至约18个氨基酸、约14个氨基酸至约16个氨基酸、约16个氨基酸至约50个氨基酸、约16个氨基酸至约48个氨基酸、约16个氨基酸至约46个氨基酸、约16个氨基酸至约44个氨基酸、约16个氨基酸至约42个氨基酸、约16个氨基酸至约40个氨基酸、约16个氨基酸至约38个氨基酸、约16个氨基酸至约36个氨基酸、约16个氨基酸至约34个氨基酸、约16个氨基酸至约32个氨基酸、约16个氨基酸至约30个氨基酸、约16个氨基酸至约28个氨基酸、约16个氨基酸至约26个氨基酸、约16个氨基酸至约24个氨基酸、约16个氨基酸至约22个氨基酸、约16个氨基酸至约20个氨基酸、约16个氨基酸至约18个氨基酸、约18个氨基酸至约50个氨基酸、约18个氨基酸至约48个氨基酸、约18个氨基酸至约46个氨基酸、约18个氨基酸至约44个氨基酸、约18个氨基酸至约42个氨基酸、约18个氨基酸至约40个氨基酸、约18个氨基酸至约38个氨基酸、约18个氨基酸至约36个氨基酸、约18个氨基酸至约34个氨基酸、约18个氨基酸至约32个氨基酸、约18个氨基酸至约30个氨基酸、约18个氨基酸至约28个氨基酸、约18个氨基酸至约26个氨基酸、约18个氨基酸至约24个氨基酸、约18个氨基酸至约22个氨基酸、约18个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约50个氨基酸、约20个氨基酸至约48个氨基酸、约20个氨基酸至约46个氨基酸、约20个氨基酸至约44个氨基酸、约20个氨基酸至约42个氨基酸、约20个氨基酸至约40个氨基酸、约20个氨基酸至约38个氨基酸、约20个氨基酸至约36个氨基酸、约20个氨基酸至约34个氨基酸、约20个氨基酸至约32个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约28个氨基酸、约20个氨基酸至约26个氨基酸、约20个氨基酸至约24个氨基酸、约20个氨基酸至约22个氨基酸、约22个氨基酸至约50个氨基酸、约22个氨基酸至约48个氨基酸、约22个氨基酸至约46个氨基酸、约22个氨基酸至约44个氨基酸、约22个氨基酸至约42个氨基酸、约22个氨基酸至约40个氨基酸、约22个氨基酸至约38个氨基酸、约22个氨基酸至约36个氨基酸、约22个氨基酸至约34个氨基酸、约22个氨基酸至约32个氨基酸、约22个氨基酸至约30个氨基酸、约22个氨基酸至约28个氨基酸、约22个氨基酸至约26个氨基酸、约22个氨基酸至约24个氨基酸、约24个氨基酸至约50个氨基酸、约24个氨基酸至约48个氨基酸、约24个氨基酸至约46个氨基酸、约24个氨基酸至约44个氨基酸、约24个氨基酸至约42个氨基酸、约24个氨基酸至约40个氨基酸、约24个氨基酸至约38个氨基酸、约24个氨基酸至约36个氨基酸、约24个氨基酸至约34个氨基酸、约24个氨基酸至约32个氨基酸、约24个氨基酸至约30个氨基酸、约24个氨基酸至约28个氨基酸、约24个氨基酸至约26个氨基酸、约26个氨基酸至约50个氨基酸、约26个氨基酸至约48个氨基酸、约26个氨基酸至约46个氨基酸、约26个氨基酸至约44个氨基酸、约26个氨基酸至约42个氨基酸、约26个氨基酸至约40个氨基酸、约26个氨基酸至约38个氨基酸、约26个氨基酸至约36个氨基酸、约26个氨基酸至约34个氨基酸、约26个氨基酸至约32个氨基酸、约26个氨基酸至约30个氨基酸、约26个氨基酸至约28个氨基酸、约28个氨基酸至约50个氨基酸、约28个氨基酸至约48个氨基酸、约28个氨基酸至约46个氨基酸、约28个氨基酸至约44个氨基酸、约28个氨基酸至约42个氨基酸、约28个氨基酸至约40个氨基酸、约28个氨基酸至约38个氨基酸、约28个氨基酸至约36个氨基酸、约28个氨基酸至约34个氨基酸、约28个氨基酸至约32个氨基酸、约28个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约48个氨基酸、约30个氨基酸至约46个氨基酸、约30个氨基酸至约44个氨基酸、约30个氨基酸至约42个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约38个氨基酸、约30个氨基酸至约36个氨基酸、约30个氨基酸至约34个氨基酸、约30个氨基酸至约32个氨基酸、约32个氨基酸至约50个氨基酸、约32个氨基酸至约48个氨基酸、约32个氨基酸至约46个氨基酸、约32个氨基酸至约44个氨基酸、约32个氨基酸至约42个氨基酸、约32个氨基酸至约40个氨基酸、约32个氨基酸至约38个氨基酸、约32个氨基酸至约36个氨基酸、约32个氨基酸至约34个氨基酸、约34个氨基酸至约50个氨基酸、约34个氨基酸至约48个氨基酸、约34个氨基酸至约46个氨基酸、约34个氨基酸至约44个氨基酸、约34个氨基酸至约42个氨基酸、约34个氨基酸至约40个氨基酸、约34个氨基酸至约38个氨基酸、约34个氨基酸至约36个氨基酸、约36个氨基酸至约50个氨基酸、约36个氨基酸至约48个氨基酸、约36个氨基酸至约46个氨基酸、约36个氨基酸至约44个氨基酸、约36个氨基酸至约42个氨基酸、约36个氨基酸至约40个氨基酸、约36个氨基酸至约38个氨基酸、约38个氨基酸至约50个氨基酸、约38个氨基酸至约48个氨基酸、约38个氨基酸至约46个氨基酸、约38个氨基酸至约44个氨基酸、约38个氨基酸至约42个氨基酸、约38个氨基酸至约40个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约48个氨基酸、约40个氨基酸至约46个氨基酸、约40个氨基酸至约44个氨基酸、约40个氨基酸至约42个氨基酸、约42个氨基酸至约50个氨基酸、约42个氨基酸至约48个氨基酸、约42个氨基酸至约46个氨基酸、约42个氨基酸至约44个氨基酸、约44个氨基酸至约50个氨基酸、约44个氨基酸至约48个氨基酸、约44个氨基酸至约46个氨基酸、约46个氨基酸至约50个氨基酸、约46个氨基酸至约48个氨基酸或约48个氨基酸至约50个氨基酸。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列包含(SG)n的序列，其中n可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列包含(GS)n的序列，其中n可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列包含(SGGS)n[SGGS＝SEQ IDNO:47]的序列，其中n可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列包含(SGGGS)n[SGGGS＝SEQ ID NO:48]的序列，其中n可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列包含(SGGGGS)n[SGGGGS＝SEQ ID NO:49]的序列，其中n可以为1、2、3、4、5、6、7、8或9。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含SGGGGSGGGGSGGGG的序列(SEQ ID NO：50)。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含ASTKGPSVFPLAPSSSGSG的序列(SEQ ID NO：51)。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含GGGGSGGGGSGGGGS的序列(SEQ ID NO：52)。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含GGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGS的序列(SEQ ID NO：53)。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ(SEQ ID NO：92)的序列。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以为Whitlow接头。在一些实施方案中，Whitlow接头具有GSTSGSGKPGSGEGSTKG的氨基酸序列(SEQ ID NO：54)，或者编码Whitlow接头序列的核苷酸序列为ggcagcaccagcggcagcggcaaaccgggcagcggcgaaggcagcaccaaaggc(SEQ ID NO：55)。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以为(G4S)5接头。在一些实施方案中，(G4S)5接头具有GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS的氨基酸序列(SEQ ID NO：56)，或者编码((G4S)5接头序列的核苷酸序列为ggcggtggtggttctggaggcggtggcagcggtggaggtggctcaggaggaggaggtagcggcggcggagggagt(SEQ ID NO：57)。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以为或可以包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 CH1、CH2和CH3结构域中的一个或更多个。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以为或可以包含CH2-CH3人IgG1结构域。在一些实施方案中，CH2-CH3人IgG1结构域具有以下序列：AEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD(SEQ ID NO：58)。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含与人CD8跨膜结构域接近的人CD8细胞外序列的一部分。例如，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含以下的人CD8序列：
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI(SEQ ID NO：59)。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列可以是或包含人IgG1铰链序列。在一些实施方案中，人IgG1铰链序列为
AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK(SEQ ID NO：60)。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列具有α螺旋结构。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列为卷曲的螺旋结构域。
在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列是天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列不是天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列包含SEQ ID NO：92的序列。在一些实施方案中，接头序列和/或另外的接头序列由SEQ ID NO：92的序列组成。接头的方面和实例是本领域已知的。
嵌合抗原受体
嵌合抗原受体(CAR)是一种包含以下的蛋白质：细胞外抗原结合结构域(例如，本文所述或本领域已知的抗原结合结构域中的任一种)、跨膜结构域(例如，本文所述或本领域已知的跨膜结构域中的任一种)、共刺激结构域(例如，本文所述或本领域已知的共刺激结构域中的任一种)和免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。在一些实施方案中，CAR包含另外的序列，例如但不限于细胞外茎序列(例如，CD28茎序列)。在包含细胞外茎序列(例如，CD28茎序列)的CAR的一些实施方案中，茎序列与跨膜结构域共末端。在包含细胞外茎序列(例如，CD28茎序列)的CAR的一些实施方案中，细胞外茎序列来自与跨膜结构域相同的蛋白质。在包含细胞外茎序列(例如，CD28茎序列)的CAR的一些实施方案中，细胞外茎序列来自与跨膜结构域不同的蛋白质。嵌合抗原受体的非限制性方面在例如Kershaw等,Nature ReviewsImmunol.5(12):928-940,2005；Eshhar等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90(2):720-724,1993；Sadelain等,Curr.Opin.Immunol.21(2):215-223,2009；WO 2015/142675；WO 2015/150526和WO 2014/134165进行了描述，其每一个的公开内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体可以包含一个或更多个(例如，2、3、4或5个)共刺激结构域(例如，本文所述或本领域已知的任何示例性共刺激结构域的任何组合)。这些嵌合抗原受体的一些实施方案包含4-1BB共刺激结构域和CD28共刺激结构域中的一种或两种。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体可以包含一个或更多个(例如，2、3、4或5个)ITAM(例如，本文所述或本领域已知的ITAM中的任一种)。在这些嵌合抗原受体的一些实施方案中，ITAM包含来自CD3ζ(例如人CD3ζ)的细胞质信号传导序列。
在一些实施方案中，在细胞外抗原结合结构域与跨膜结构域之间的一个或更多个氨基酸为来自同一内源性单链多肽的序列，跨膜结构域源自该多肽。在一些实施方案中，在细胞外抗原结合结构域与跨膜结构域之间的一个或更多个氨基酸是或包含抗体的铰链区序列，该抗体例如但不限于人抗体(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。在一些实施方案中，在细胞外抗原结合结构域与跨膜结构域之间的一个或更多个氨基酸是或包含接头序列(例如，非天然存在的接头序列，例如GS或本文所述的其他接头序列中的任一种)。
在本文所述的CAR中任一种的一些实例中，沿着N-末端至C-末端方向，CAR的细胞内部分包含共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。在本文所述的CAR中任一种的一些实例中，沿着N-末端至C-末端方向，CAR的细胞内部分包含细胞内信号传导结构域和共刺激结构域。
在本文所述的CAR中任一种的一些实例中，沿着C-末端至N-末端方向，CAR的细胞内部分包含共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。在本文所述的CAR中任一种的一些实例中，沿着C-末端至N-末端方向，CAR的细胞内部分包括细胞内信号传导结构域和共刺激结构域。
在本文所述的CAR中任一种的一些实施方案中，跨膜结构域是或包含CD28、CD3epsilon、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154的跨膜结构域。本文描述了跨膜结构域的其他实例和方面。
在本文所述的CAR中任一种的一些实施方案中，共刺激结构域是或包含4-1BB、CD28、CD2、CD4或CD8的共刺激结构域。本文描述了共刺激结构域的其他实例和方面。
在本文所述的CAR中任一种的一些实施方案中，CAR由CAR前体产生，该CAR前体包含用于使CAR靶向细胞膜的信号肽序列。在一些实施方案中，CAR信号肽包含或是SEQ IDNO：93的序列：
示例性CAR信号序列肽(SEQ ID NO：93)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP
编码示例性CAR信号序列肽的示例性核酸序列(SEQ ID NO：94)
atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgattcct
在一些实施方案中，CAR信号肽包含与SEQ ID NO：93的肽序列至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码CAR信号肽的核酸序列包含与SEQID NO：94的核酸序列至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。
可以用于确定本文所述CAR中任一种的KD值的各种方法是本领域已知的(例如，电泳迁移率漂移测定、滤膜结合测定、表面等离振子共振和生物分子结合动力学测定等)。
本文所述的嵌合抗原受体中任一种的一些实施方案还可以包含二聚化结构域和/或肽标签。
抗原结合结构域
在嵌合抗原受体的一些实施方案中，抗原结合结构域可以选自scFv、scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2和BiTE。可以与本文所述的嵌合抗原受体一起使用的抗原结合结构域的另外的实例是本领域已知的。
单链Fv或scFv片段在单多肽链中包含VH结构域和VL结构域。VH和VL通常通过肽接头连接。在其他实例中，接头可以是单个氨基酸。在一些实例中，接头可以为化学键。参见，例如，Pluckthun,Antibodies fromE.coli.在Rosenberg M.&Moore G.P.(编辑)中,ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,第269-315页,Spinger-Verlag,纽约,1994。
ScFv-Fc片段包含连接至Fc结构域的scFv。例如，Fc结构域可以连接至例如scFv的C-末端。根据scFv中可变结构域的方向，Fc结构域可以跟随VL或VH。Fc结构域可以是本领域已知的Fc结构域中的任一种。在一些实例中，Fc结构域是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc结构域(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc结构域)。
BiTE是抗原结合结构域，在单个多肽中包含两个VL和两个VH，它们共一起形成两个scFv，每个scFv可以与同一抗原上的不同表位结合，也可以与不同抗原结合。参见，例如，Baeuerle等,Curr.Opin.Mol.Ther.11:22-30,2009；Wolf等,Drug Discovery Today 10:1237-1244,2005和Huehls等,Immunol.Cell Biol.93:290-296,2015。
VHH结构域是在骆驼中发现的单个单体可变抗体结构域，并且VNAR结构域是在软骨鱼中发现的单个单体可变抗体结构域。VHH结构域和VNAR结构域在例如Van Audenhove等,EBioMedicine 8:40-48,2016；Krah等,Immunopharmacol.Immunotoxicol.38:21-28,2016；Cromie等,Curr.Top.Med.Chem.15:2543-2557,2016；Kijanka等,Nanomedicine 10:161-174,2015；Kovaleva等,Expert.Opin.Biol.Ther.14:1527-1539,2014；De Meyer等,TrendsBiotechnol.32:263-270,2014；Mujic-Delic等,Trends Pharmacol.Sci.35:247-255,2014；Muyldermans,Ann.Rev.Biochem.82:775-797,2013；Vincke等,MethodsMol.Biol.911:15-26,2012；Rahbarizadeh等,Immunol.Invest.40:299-338,2011；VanBockstaele等,Curr.Opin.Investig.Drugs 10:1212-1224,2009；Wesolowski等,Med.Microbiol.Immunol.198:157-174,2009；De Genst等,Dev.Comp.Immunol.30:187-198,2006；Muyldermans,J.Biotechnol.74:277-302,2001和Muyldermans等,TrendsBiochem.Sci.26:230-235,2001中进行了描述。
在一些实施方案中，CAR的抗原结合结构域是包含或是SEQ ID NO：95的序列：
示例性抗-CD19抗原结合结构域(SEQ ID NO：95)
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
编码示例性抗-CD19抗原结合结构域的核酸(SEQ ID NO：96)
Gacatccagatgacccagaccaccagcagcctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacaggcggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctggcctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcctggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactacaacagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagc
在一些实施方案中，抗原结合结构域包含与SEQ ID NO：95的多肽序列至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施方案中，编码抗原结合结构域的核酸序列包含与SEQ ID NO：96的核酸序列至少60％相同、至少65％相同、至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少85％、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同发序列。
本文所述的抗原结合结构域中的任一种可以与解离平衡常数(KD)小于l 1x10-7M、小于1x10-8M、小于1x10-9M、小于1x10-10M、小于1x10-11M、小于1x10-12M或小于1x10-13M的抗原结合。在一些实施方案中，本文中提供的抗原结合蛋白复合物可以与KD为约1x10-4M至约1x10-6M、约1x10-5M至约1x10-7M、约1x10-6M至约1x10-8M、约1x10-7M至约1x10-9M、约1x10-8M至约1x10-10M,or about 1x10-9M至约1x10-11M(包括端值)的第一和/或第二抗原结合。可以使用本领域中已知的各种不同方法来确定抗原结合结构域的KD值(例如，电泳迁移率漂移测定、滤膜结合测定、表面等离振子共振和生物分子结合动力学测定等)。
抗原
在一些实施方案中，本文所述的嵌合抗原受体可以与单一抗原(例如，本文所述或本领域已知的示例性抗原中的任一种)结合。在一些实施方案中，本文所述的抗原结合结构域可以与两种或更多种不同的抗原(例如，本文所述或本领域已知的任何示例性抗原中的两种或更多种)结合。抗原的非限制性实例包括：glypican-3、HER2、A33抗原、9-O-乙酰基-GD3、CA19-9标志物、BhCG、CA-125标志物、碳酸酐酶IX(MN/CA IX)、钙网蛋白、CCR5、CCR8、CD2、CD3、CD5、CD16、CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD27、CD28、CD30、CD33、CD38、CD40L、CD44、CD44V6、CD63、CD70、CD84、CD96、CD100、CC123、CD133、CD137、CD138、CD150、CD152(CTLA-4)、CD160、CRTAM、CS1(CD319)、DNAM-1(CD226)、CD229、CD244、CD272(BTLA)、CD274(PDL-1、B7H1)、CD279(PD-1)、CD319、CD352、CRTAM(CD355)、CD358、DR3、GITR(TNFRSF 18)、HVEM、ICOS、LIGHT、LTBR、OX40、KIR的活化形式、NKG2C、NKG2D、NKG2E、一种或更多种天然细胞毒性受体、NTB-A、PEN-5、胚胎癌抗原(CEA；CD66e)、桥粒芯糖蛋白4、上皮-钙粘蛋白新表位、内皮唾液酸蛋白、肝配蛋白A2(EphA2)、表皮生长因子受体(EGFR)、上皮细胞粘着分子(EpCAM)、岩藻糖基GM1、GD2、GD3、GM2、神经节苷脂GM3、Globo H、糖蛋白100、HER2/neu、HER3、HER4、胰岛素样生长因子受体1、Lewis-Y、LG、Ly-6、黑色素瘤特异性硫酸软骨素－蛋白聚糖(MCSCP)、间皮素、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5b、MUC7、MUC16、穆勒抑制物(MIS)受体II型、浆细胞抗原、聚SA、PSCA、PSMA、音猬因子(SHH)、SAS、STEAP、sTn抗原、TNF-α前体、2B4(CD244)、β2-整合蛋白、KIR、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR3DL2、KIR-L、KLRGI、LAIR-1、NKG2A、NKR-P IA、Siglec-3、Siglec-7、Siglec-9、TCRa、TCRB、TCR5K、TIM1、LAG3、LAIR1、PD-1H、TIGIT、TIM2和TIM3。抗原的另外的实例是本领域已知的。
CAR跨膜结构域
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自内源性多肽的跨膜结构域或其部分，其中内源性多肽选自：T细胞受体的α链、T细胞受体的β链、T细胞受体的ζ链、CD28(也称为Tp44)、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37(也称为GP52-40或TSPAN26)、CD64(也称为FCGR1A)、CD80(也称为如B7、B7-1、B7.1、BB1、CD28LG、CD28LG1和LAB7)、CD45(也称为PTPRC、B220、CD45R、GP180、L-CA、LCA、LY5、T200和蛋白酪氨酸磷酸酶，受体C型)、CD4、CD5(也称为LEU1和T1)、CD8α(也称为Leu2、MAL和p32)、CD9(也称为BTCC-1、DRAP-27、MIC3、MRP-1、TSPAN-29和TSPAN29)、CD16(也称为FCGR3和FCG3)、CD22(也称为SIGLEC-2和SIGLEC2)、CD86(也称为B7-2、B7.2、B70、CD28LG2和LAB72)、CD134(也称为TNFRSF4、ACT35、RP5-902P8.3、IMD16、OX40、TXGP1L和肿瘤坏死因子受体超家族成员4)、CD137(也称为TNFRSF9、4-1BB、CDw137、ILA和肿瘤坏死因子受体超家族成员9)、CD27(也称为S152、S152.LPFS2、T14、TNFRSF7和Tp55)、CD152(也称为CTLA4、ALPS5、CELIAC3、CTLA-4、GRD4、GSE、IDDM12和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)、PD1(也称为PDCD1、CD279、PD-1、SLEB2、hPD-1、hPD-1、hSLE1和程序性细胞死亡1)、ICOS(也称为AILIM、CD278和CVID1)、CD272(也称为BTLA和BTLA1)、CD30(也称为TNFRSF8、D1S166E和Ki-1)、GITR(也称为TNFRSF18、RP5-902P8.2、AITR、CD357和GITR-D)、HVEM(也称为TNFRSF14、RP3-395M20.6、ATAR、CD270、HVEA、HVEM、LIGHTR和TR2)、DAP10和CD154(也称为CD40LG、CD40L、HIGM1、IGM、IMD3、T-BAM、TNFSF5、TRAP、gp39、hCD40L和CD40配体)。字母“CD”是代表“分化簇”的前一句。例如，CD3代表“分化簇3”。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自内源性哺乳动物(例如人)多肽(例如，上文所列的任何多肽的哺乳动物或人同源物)的跨膜结构域或其部分。
用于将内源性多肽锚定在哺乳动物细胞的脂质双层(例如，质膜)中的任何跨膜结构域或其部分适合于根据本文公开的组合物和方法使用。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自人CD28的跨膜结构域或其部分，例如GenBank登录号P01747，例如SEQ ID NO：61的氨基酸153至179。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含与SEQ ID NO：61的氨基酸153至179至少80％相同(例如，至少82％、至少84％、至少85％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％相同)的跨膜结构域或其部分。
SEQ ID NO：61
MLRLLLALNLFPSIQVTGNKILVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKYPYPVKVLPKVLPKVLPKVLPKVLPKVLPKPVLPGKVLPKVLPKVLA
在一些实施方案中，CAR包含具有SEQ ID NO：97的序列的跨膜结构域和细胞外茎结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含跨膜结构域和细胞外茎结构域，该跨膜结构域和细胞外茎结构域是或包含与SEQ ID NO：97至少80％(例如，至少82％、至少84％、至少85％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％相同)的序列。
CD28茎和TMD的示例性多肽序列(SEQ ID NO：97)
LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
在一些实施方案中，编码CAR的核酸包含编码具有SEQ ID NO：98的序列的跨膜结构域和细胞外茎结构域的核酸序列。在一些实施方案中，编码嵌合抗原受体的核酸包含编码跨膜结构域和细胞外茎结构域的核酸，该核酸是或包含与SEQ ID NO：98至少80％(例如，至少82％、至少84％、至少85％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％相同)的序列。
编码CD28茎和TMD的多肽序列的示例性核酸序列(SEQ ID NO：98)
Ctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtg
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自人CD3的跨膜结构域或其部分，例如GenBank登录号P20963，例如SEQ ID NO：62的氨基酸31至51。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含跨膜结构域，该跨膜结构域是或包含与SEQ ID NO：62的氨基酸31至51至少80％(例如，至少82％、至少84％、至少85％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％相同)的序列。
SEQ ID NO：62
MKWKALFTAAILQAQLPITEAQSFGLLDPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含SEQ ID NO.63-69中任一种的跨膜结构域或其部分。
LGLLVAGVLVLLVSLGVAIHLCC(SEQ ID NO：63)；
VAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLL(SEQ ID NO：64)；
ALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFCVRC(SEQ ID NO：65)；
LCYLLDGILFIYGVILTALFLRV(SEQ ID NO：66)；
WVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(SEQ ID NO：67)；
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC(SEQ ID NO：68)；和
ALPAALAVISFLLGLGLGVACVLA(SEQ ID NO：69)。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含跨膜结构域，该跨膜结构域是或包含与SEQID NO.63-69中任一种至少80％(例如，至少82％、至少84％、至少85％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％相同)。
如本领域普通技术人员会理解的，某些内源性多肽具有至少在其初级多肽序列上不同的两种或更多种亚型。本文中公开的嵌合抗原受体可以包含跨膜结构域，该跨膜结构域包含来自内源性跨膜蛋白(例如，内源性哺乳动物，例如人，跨膜蛋白)的亚型中任一种的氨基酸序列，包括例如以下的亚型(例如，人亚型)：T细胞受体的α链、T细胞受体的β链、T细胞受体的ζ链、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1或CD154。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体的跨膜结构域或其部分包含表现出与来自一种或更多种以下内源性哺乳动物(例如人)跨膜蛋白的跨膜结构域至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列：T细胞受体的α链、T细胞受体的β链、T细胞受体的ζ链、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1或CD154。在一些实施方案中，嵌合抗原受体的跨膜结构域或其部分包含与内源性哺乳动物(例如人)跨膜蛋白：T细胞受体的α链、T细胞受体的β链、T细胞受体的ζ链、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1或CD154的跨膜结构域相比，具有一个或更多个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含合成跨膜结构域。在一些情况下，合成跨膜结构域可以主要包含疏水性残基，例如但不限于亮氨酸和缬氨酸。在一些实施方案中，合成跨膜结构域在结构域的每个末端包含苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含跨膜结构域，该跨膜结构域是嵌合跨膜结构域，其具有来自两种或多种内源性哺乳动物(例如人)跨膜多肽的跨膜结构域的部分，例如但不限于T细胞受体的α链、T细胞受体的β链、T细胞受体的ζ链、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1和CD154，使得跨膜结构域的两个或更多个部分共同构成功能性跨膜结构域。在一些实施方案中，嵌合跨膜结构域的此部分与野生型跨膜结构域的对应部分相比可以包含一个或更多个氨基酸取代、缺失或添加。
跨膜结构域可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续的氨基酸序列，当在哺乳动物细胞中表达时，其在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层。如本领域已知的，跨膜结构域可以例如包含至少一个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)连续的氨基酸序列(当在哺乳动物细胞中表达时，其在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层)，其具有α-螺旋二级结构。在一些实施方案中，跨膜结构域可以包含两个或多个连续的氨基酸序列(当在哺乳动物细胞中表达时，每个序列在存在于相应的内源性多肽中时横跨脂质双层)，这些序列在脂质双层中形成β-桶二级结构。跨膜结构域的另外的实例和特征是本领域已知的。
共刺激结构域
在正常淋巴细胞中，T细胞活化是由两类细胞内信号传导结构域介导的。通过T细胞受体(例如TCR/CD3复合物)经由MHC介导的抗原依赖性活化启动初级信号转导。次级或共刺激信号由不同受体提供，该受体包含以抗原非依赖性方式起作用的共刺激信号传导结构域。仅通过TCR信号传导结构域产生的信号不足以完全活化T细胞。还需要共刺激信号。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自内源性哺乳动物(例如人)跨膜多肽的共刺激结构域或其部分，该跨膜多肽选自：CD27(也称为S152，S152.LPFS2、T14、TNFRSF7和Tp55)、CD28(也称为Tp44)、4-1BB(也称为TNFRSF9、CD137、CDw137、ILA和肿瘤坏死因子受体超家族成员9)、OX40(也称为TNFRSF4、ACT35、RP5-902P8.3、IMD16、CD134、TXGP1L和肿瘤坏死因子受体超家族成员4)、CD30(也称为TNFRSF8、D1S166E和Ki-1)、CD40L(也称为CD40LG、CD154、HIGM1、IGM、IMD3、T-BAM、TNFSF5、TRAP、gp39、hCD40L和CD40配体)、CD40(也称为Bp50、CDW40、TNFRSF5、p50、CD40(蛋白质)和CD40分子)、PD-1(也称为PDCD1、CD279、PD-1、SLEB2、hPD-1、hPD-1、hSLE1和程序性细胞死亡1)、PD-L1(也称为CD274、B7-H、B7H1、PD-L1、PDCD1L1、PDCD1LG1、PDL1、CD274分子和程序性细胞死亡1配体1)、ICOS(也称为AILIM、CD278和CVID1)、LFA-1(也称为淋巴细胞功能相关抗原1)、CD2(也称为LFA-2、SRBC、T11和CD2分子)、CD7(也称为GP40、LEU-9、TP41、Tp40和CD7分子)、CD160(也称为BY55、NK1、NK28和CD160分子)、LIGHT(也称为TNFSF14、CD258、HVEML、LIGHT、LTg、TR2、TNLG1D和肿瘤坏死因子超家族成员14)、BTLA(也称为CD272和BTLA1)、TIM3(也称为HAVCR2、HAVcr-2、KIM-3、TIM3、TIMD-3、TIMD3、Tim-3、CD366和A型肝炎病毒细胞受体2)、CD244(也称为2B4、NAIL、NKR2B4、Nmrk、SLAMF4和CD244分子)、CD80(也称为B7、B7-1、B7.1、BB1、CD28LG、CD28LG1、LAB7和CD80分子)、LAG3(也称为CD223和活化淋巴细胞3)、NKG2C(也称为CD314、D12S2489E、KLR、NKG2-D、NKG2D和杀伤细胞凝集素如受体K1)、GITR(也称为TNFRSF18、RP5-902P8.2、AITR、CD357和GITR-D)、HVEM(也称为TNFRSF14、RP3-395M20.6、ATAR、CD270、HVEA、HVEM、LIGHTR和TR2)、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、CARD11、CD54(ICAM)、CD83、DAP10、LAT、SLP76、TRIM、ZAP70和B7-H3(也称为CD276、4Ig-B7-H3、B7H3、B7RP-2和CD276分子)。在一些实施方案中，单链嵌合多肽、单链嵌合抗原受体或多链嵌合抗原受体包含来自内源性哺乳动物(例如，人)跨膜多肽(例如，上文所列的任何多肽的哺乳动物或人同源物)。
用于提供共刺激信号的任何共刺激结构域或其部分都适合于根据本文公开的组合物和方法使用。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自人CD28的共刺激结构域或其部分(例如，GenBank登录号P01747，例如，来自SEQ ID NO：70的氨基酸180至220)。在一些实施方案中，共刺激结构域是或包含与SEQ ID NO：70的氨基酸180至220或其片段至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同(或与SEQ ID NO：70的氨基酸180至220或其片段相同)。
SEQ ID NO：70(氨基酸180至220加下划线)
MLRLLLALNLFPSIQVTGNKILVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
编码人CD28共刺激结构域氨基酸的示例性核酸(SEQ ID NO：99)
aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcc
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自人4-1BB的共刺激结构域或其部分(例如，GenBank登录号Q07011，例如来自SEQ ID NO：71的氨基酸214至255)。在一些实施方案中，共刺激结构域是或包含与SEQ ID NO：75的氨基酸214至255或其部分至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同。
SEQ ID NO：71
MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
本文中公开的嵌合抗原受体可以包含共刺激结构域，该共刺激结构域包含来自具有共刺激结构域的内源性哺乳动物(例如，人)跨膜多肽的亚型中任一种的氨基酸序列，该亚型包括例如CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3的亚型(包括但不限于，这些多肽中任一种的哺乳动物或人同源物)。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体的共刺激结构域或其部分包含表现出与来自一种或更多种哺乳动物(例如人)CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3的共刺激结构域至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，嵌合抗原受体的共刺激结构域或其部分包含与一种或更多种以下内源性哺乳动物(例如，人)跨膜多肽的共刺激结构域相比具有一个或更多个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列：T细胞受体的α链、T细胞受体的β链、T细胞受体的ζ链、CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3(包括但不限于这些多肽中任一种的哺乳动物或人同源物)。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含共刺激结构域，该共刺激结构域是具有来自两种或更多种以下内源性哺乳动物(例如，人)跨膜多肽的共刺激结构域的部分的嵌合共刺激结构域：包括但不限于CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3(包括但不限于这些多肽中任一种的哺乳动物或人同源物)，使得跨膜结构域的两个或更多个部分共同构成功能性共刺激结构域。在一些实施方案中，，嵌合共刺激结构域的此部分与野生型共刺激结构域的相应部分相比可以包含一个或更多个氨基酸取代、缺失或添加。
本文中公开的嵌合抗原受体的共刺激结构域可以为任何合适的长度。例如，共刺激结构域的长度可以为约20个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸、约55个氨基酸、约50个氨基酸、约45个氨基酸、约40个氨基酸、约35个氨基酸、约30个氨基酸或约25个氨基酸(包括端值)；约25个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸、约55个氨基酸、约50个氨基酸、约45个氨基酸、约40个氨基酸、约35个氨基酸或约30个氨基酸(包括端值)；约30个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸、约55个氨基酸、约50个氨基酸、约45个氨基酸、约40个氨基酸或约35个氨基酸(包括端值)；约35个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸、约55个氨基酸、约50个氨基酸、约45个氨基酸或约40个氨基酸(包括端值)；约40个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸、约55个氨基酸、约50个氨基酸或约45个氨基酸(包括端值)；约45个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸、约55个氨基酸或约50个氨基酸(包括端值)；约50个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸、约60个氨基酸或约55个氨基酸(包括端值)；约55个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸、约65个氨基酸或约60个氨基酸(包括端值)；约60个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸、约70个氨基酸或约65个氨基酸(包括端值)；约65个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸、约80个氨基酸、约75个氨基酸或约70个氨基酸(包括端值)；约70个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸、约90个氨基酸、约85个氨基酸或约80个氨基酸(包括端值)；约80个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸、约100个氨基酸、约95个氨基酸或约90个氨基酸(包括端值)；约90个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸、约110个氨基酸或约100个氨基酸(包括端值)；约100个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸、约120个氨基酸或约110个氨基酸(包括端值)；约110个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸、约130个氨基酸或约120个氨基酸(包括端值)；约120个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸、约140个氨基酸或约130个氨基酸(包括端值)；约130个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸、约150个氨基酸或约140个氨基酸(包括端值)；约140个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸、约160个氨基酸或约150个氨基酸(包括端值)；约150个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸、约170个氨基酸或约160个氨基酸(包括端值)；约160个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸、约180个氨基酸或约170个氨基酸(包括端值)；约170个氨基酸至约200个氨基酸、约190个氨基酸或约180个氨基酸(包括端值)；约180个氨基酸至约200个氨基酸或约190个氨基酸(包括端值)；或约190个氨基酸至约200个氨基酸(包括端值)。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含两个或更多个共刺激结构域，例如2、3、4、5个或更多个共刺激结构域。在一些实施方案中，两个或更多个共刺激结构域是相同的(例如，它们具有相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，共刺激结构域是不同的。例如，共刺激结构域可以选自不同的内源性哺乳动物(例如人)跨膜多肽，包括但不限于CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3(包括但不限于这些多肽中任一种的哺乳动物或人同源物)。在一些实施方案中，两个或更多个共刺激结构域可以通过一个或更多个(例如，2、3、4或5个)氨基酸取代、缺失或添加而彼此不同。在一些实施方案中，两个或更多个共刺激结构域表现出彼此至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)
ITAM通常在免疫系统的某些细胞表面蛋白的细胞质尾区中重复(例如两次或更多次)，并且通常被6至8个氨基酸隔开。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自内源性哺乳动物(例如，人)多肽的ITAM或其部分，其中内源性哺乳动物(例如，人)多肽选自：CD3ζ(也称为CD3ζ)、CD3δ(CD3δ)、CD3ε(CD3ε)、CD3γ(CD3γ)、DAP12、FCεR1γ(Fcε受体Iγ链)、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A(抗原受体复合物相关蛋白α链)、CD79B(抗原受体复合物相关蛋白β链)和CD66d。
用于介导适合于根据本文中公开的组合物和方法使用的内源性哺乳动物(例如，人)跨膜蛋白中的信号传导的任何ITAM或其部分。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含来自人CD3ζ的ITAM或其部分(例如GenBank登录号P20963，例如存在于SEQ ID NO：72的氨基酸52-164或其部分或者SEQ ID NO：73或其部分中的ITAM)。在一些实施方案中，ITAM包含与SEQ ID NO：72的氨基酸52-164的序列(或其部分)或者SEQ ID NO：73的序列(或其部分)至少80％(例如，至少82％、至少84％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少96％、至少98％、至少99％或100％相同)相同的序列。
SEQ ID NO：72
MKWKALFTAAILQAQLPITEAQSFGLLDPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID NO：73(人CD3ζ信号传导结构域)
LRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID NO：74(编码SEQ ID NO：73的人CD3ζ信号传导结构域的cDNA)
Ctgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc
如本领域普通技术人员会理解的，某些多肽具有至少在其初级多肽序列上不同的两种或更多种亚型。例如，作为选择性剪接的结果可以产生不同的亚型。本文中公开的嵌合抗原受体可以包含ITAM，该ITAM包含来自以下具有ITAM的内源性哺乳动物跨膜多肽的亚型中任一种的氨基酸序列，包括例如CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B或CD66d哺乳动物(例如，人)亚型。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体的ITAM或其部分包含氨基酸序列，该氨基酸序列与内源性哺乳动物(例如，人)跨膜蛋白(例如CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B或CD66d)中的一种或更多种ITAM的ITAM相比具有一个或更多个(例如，2、3、4或5个)氨基酸取代、缺失或添加。例如，可以保留ITAM的酪氨酸和亮氨酸或异亮氨酸，而将它们隔开的两个氨基酸可以被不同氨基酸取代。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含ITAM，其是具有来自两种或更多种以下内源性哺乳动物(例如，人)跨膜多肽的ITAM的部分的嵌合ITAM，包括但不限于CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B或CD66d(包括但不限于这些多肽中任一种的哺乳动物或人同源物)，使得两个或更多个ITAM部分共同构成功能性ITAM。在一些实施方案中，嵌合ITAM的此部分与野生型ITAM的相应部分相比可以包含一个或更多个氨基酸取代、缺失或添加。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含两个或更多个ITAM，例如2、3、4、5个或更多个ITAM。在一些实施方案中，两个或更多个ITAM是相同的(例如，它们具有相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，两个或更多个ITAM是不相同的。例如，ITAM可以选自不同的内源性哺乳动物(例如，人)跨膜多肽，包括但不限于CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B(包括但不限于，这些多肽中任一种的哺乳动物或人同源物)。在一些实施方案中，两个或更多个ITAM可以通过一个或更多个氨基酸取代、缺失或添加而彼此不同。
CAR-接头序列
嵌合抗原受体的任两个相邻结构域可以通过接头序列(例如，本文所述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)隔开。
在一些实施方案中，抗原结合结构域与跨膜结构域之间的接头序列可以为1个氨基酸至约250个氨基酸、1个氨基酸至约240个氨基酸、1个氨基酸至约230个氨基酸、1个氨基酸至约220个氨基酸、1个氨基酸至约210个氨基酸、1个氨基酸至约200个氨基酸、1个氨基酸至约190个氨基酸、1个氨基酸至约180个氨基酸、1个氨基酸至约170个氨基酸、1个氨基酸至约160个氨基酸、1个氨基酸至约150个氨基酸、1个氨基酸至约140个氨基酸、1个氨基酸至约130个氨基酸、1个氨基酸至约120个氨基酸、1个氨基酸至约110个氨基酸、1个氨基酸至约100个氨基酸、1个氨基酸至约95个氨基酸、1个氨基酸至约90个氨基酸、1个氨基酸至约85个氨基酸、1个氨基酸至约80个氨基酸、1个氨基酸至约75个氨基酸、1个氨基酸至约70个氨基酸、1个氨基酸至约65个氨基酸、1个氨基酸至约60个氨基酸、1个氨基酸至约55个氨基酸、1个氨基酸至约50个氨基酸、1个氨基酸至约45个氨基酸、1个氨基酸至约40个氨基酸、1个氨基酸至约35个氨基酸、1个氨基酸至约30个氨基酸、1个氨基酸至约25个氨基酸、1个氨基酸至约20个氨基酸、1个氨基酸至约15个氨基酸、1个氨基酸至约10个氨基酸、1个氨基酸至约5个氨基酸、约5个氨基酸至约250个氨基酸、约5个氨基酸至约240个氨基酸、约5个氨基酸至约230个氨基酸、约5个氨基酸至约220个氨基酸、约5个氨基酸至约210个氨基酸、约5个氨基酸至约200个氨基酸、约5个氨基酸至约190个氨基酸、约5个氨基酸至约180个氨基酸、约5个氨基酸至约170个氨基酸、约5个氨基酸至约160个氨基酸、约5个氨基酸至约150个氨基酸、约5个氨基酸至约140个氨基酸、约5个氨基酸至约130个氨基酸、约5个氨基酸至约120个氨基酸、约5个氨基酸至约110个氨基酸、约5个氨基酸至约100个氨基酸、约5个氨基酸至约95个氨基酸、约5个氨基酸至约90个氨基酸、约5个氨基酸至约85个氨基酸、约5个氨基酸至约80个氨基酸、约5个氨基酸至约75个氨基酸、约5个氨基酸至约70个氨基酸、约5个氨基酸至约65个氨基酸、约5个氨基酸至约60个氨基酸、约5个氨基酸至约55个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约45个氨基酸、约5个氨基酸至约40个氨基酸、约5个氨基酸至约35个氨基酸、约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约25个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约15个氨基酸、约5个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约250个氨基酸、约10个氨基酸至约240个氨基酸、约10个氨基酸至约230个氨基酸、约10个氨基酸至约220个氨基酸、约10个氨基酸至约210个氨基酸、约10个氨基酸至约200个氨基酸、约10个氨基酸至约190个氨基酸、约10个氨基酸至约180个氨基酸、约10个氨基酸至约170个氨基酸、约10个氨基酸至约160个氨基酸、约10个氨基酸至约150个氨基酸、约10个氨基酸至约140个氨基酸、约10个氨基酸至约130个氨基酸、约10个氨基酸至约120个氨基酸、约10个氨基酸至约110个氨基酸、约10个氨基酸至约100个氨基酸、约10个氨基酸至约95个氨基酸、约10个氨基酸至约90个氨基酸、约10个氨基酸至约85个氨基酸、约10个氨基酸至约80个氨基酸、约10个氨基酸至约75个氨基酸、约10个氨基酸至约70个氨基酸、约10个氨基酸至约65个氨基酸、约10个氨基酸至约60个氨基酸、约10个氨基酸至约55个氨基酸、约10个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约45个氨基酸、约10个氨基酸至约40个氨基酸、约10个氨基酸至约35个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约25个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约15个氨基酸至约250个氨基酸、约15个氨基酸至约240个氨基酸、约15个氨基酸至约230个氨基酸、约15个氨基酸至约220个氨基酸、约15个氨基酸至约210个氨基酸、约15个氨基酸至约200个氨基酸、约15个氨基酸至约190个氨基酸、约15个氨基酸至约180个氨基酸、约15个氨基酸至约170个氨基酸、约15个氨基酸至约160个氨基酸、约15个氨基酸至约150个氨基酸、约15个氨基酸至约140个氨基酸、约15个氨基酸至约130个氨基酸、约15个氨基酸至约120个氨基酸、约15个氨基酸至约110个氨基酸、约15个氨基酸至约100个氨基酸、约15个氨基酸至约95个氨基酸、约15个氨基酸至约90个氨基酸、约15个氨基酸至约85个氨基酸、约15个氨基酸至约80个氨基酸、约15个氨基酸至约75个氨基酸、约15个氨基酸至约70个氨基酸、约15个氨基酸至约65个氨基酸、约15个氨基酸至约60个氨基酸、约15个氨基酸至约55个氨基酸、约15个氨基酸至约50个氨基酸、约15个氨基酸至约45个氨基酸、约15个氨基酸至约40个氨基酸、约15个氨基酸至约35个氨基酸、约15个氨基酸至约30个氨基酸、约15个氨基酸至约25个氨基酸、约15个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约250个氨基酸、约20个氨基酸至约240个氨基酸、约20个氨基酸至约230个氨基酸、约20个氨基酸至220个氨基酸、约20个氨基酸至约210个氨基酸、约20个氨基酸至约200个氨基酸、约20个氨基酸至约190个氨基酸、约20个氨基酸至约180个氨基酸、约20个氨基酸至约170个氨基酸、约20个氨基酸至约160个氨基酸、约20个氨基酸至约150个氨基酸、约20个氨基酸至约140个氨基酸、约20个氨基酸至约130个氨基酸、约20个氨基酸至约120个氨基酸、约20个氨基酸至约110个氨基酸、约20个氨基酸至约100个氨基酸、约20个氨基酸至约95个氨基酸、约20个氨基酸至约90个氨基酸、约20个氨基酸至约85个氨基酸、约20个氨基酸至约80个氨基酸、约20个氨基酸至约75个氨基酸、约20个氨基酸至约70个氨基酸、约20个氨基酸至约65个氨基酸、约20个氨基酸至约60个氨基酸、约20个氨基酸至约55个氨基酸、约20个氨基酸至约50个氨基酸、约20个氨基酸至约45个氨基酸、约20个氨基酸至约40个氨基酸、约20个氨基酸至约35个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约25个氨基酸、约25个氨基酸至约250个氨基酸、约25个氨基酸至约240个氨基酸、约25个氨基酸至约230个氨基酸、约25个氨基酸至约220个氨基酸、约25个氨基酸至约210个氨基酸、约25个氨基酸至约200个氨基酸、约25个氨基酸至约190个氨基酸、约25个氨基酸至约180个氨基酸、约25个氨基酸至约170个氨基酸、约25个氨基酸至约160个氨基酸、约25个氨基酸至约150个氨基酸、约25个氨基酸至约140个氨基酸、约25个氨基酸至约130个氨基酸、约25个氨基酸至约120个氨基酸、约25个氨基酸至约110个氨基酸、约25个氨基酸至约100个氨基酸、约25个氨基酸至约95个氨基酸、约25个氨基酸至约90个氨基酸、约25个氨基酸至约85个氨基酸、约25个氨基酸至约80个氨基酸、约25个氨基酸至约75个氨基酸、约25个氨基酸至约70个氨基酸、约25个氨基酸至约65个氨基酸、约25个氨基酸至约60个氨基酸、约25个氨基酸至约55个氨基酸、约25个氨基酸至约50个氨基酸、约25个氨基酸至约45个氨基酸、约25个氨基酸至约40个氨基酸、约25个氨基酸至约35个氨基酸、约25个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约250个氨基酸、约30个氨基酸至约240个氨基酸、约30个氨基酸至约230个氨基酸、约30个氨基酸至约220个氨基酸、约30个氨基酸至约210个氨基酸、约30个氨基酸至约200个氨基酸、约30个氨基酸至约190个氨基酸、约30个氨基酸至约180个氨基酸、约30个氨基酸至约170个氨基酸、约30个氨基酸至约160个氨基酸、约30个氨基酸至约150个氨基酸、约30个氨基酸至约140个氨基酸、约30个氨基酸至约130个氨基酸、约30个氨基酸至约120个氨基酸、约30个氨基酸至约110个氨基酸、约30个氨基酸至约100个氨基酸、约30个氨基酸至约95个氨基酸、约30个氨基酸至约90个氨基酸、约30个氨基酸至约85个氨基酸、约30个氨基酸至约80个氨基酸、约30个氨基酸至约75个氨基酸、约30个氨基酸至约70个氨基酸、约30个氨基酸至约65个氨基酸、约30个氨基酸至约60个氨基酸、约30个氨基酸至约55个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约45个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约35个氨基酸、约35个氨基酸至约250个氨基酸、约35个氨基酸至约240个氨基酸、约35个氨基酸至约230个氨基酸、约35个氨基酸至约220个氨基酸、约35个氨基酸至约210个氨基酸、约35个氨基酸至约200个氨基酸、约35个氨基酸至约190个氨基酸、约35个氨基酸至约180个氨基酸、约35个氨基酸至约170个氨基酸、约35个氨基酸至约160个氨基酸、约35个氨基酸至约150个氨基酸、约35个氨基酸至约140个氨基酸、约35个氨基酸至约130个氨基酸、约35个氨基酸至约120个氨基酸、约35个氨基酸至约110个氨基酸、约35个氨基酸至约100个氨基酸、约35个氨基酸至约95个氨基酸、约35个氨基酸至约90个氨基酸、约35个氨基酸至约85个氨基酸、约35个氨基酸至约80个氨基酸、约35个氨基酸至约75个氨基酸、约35个氨基酸至约70个氨基酸、约35个氨基酸至约65个氨基酸、约35个氨基酸至约60个氨基酸、约35个氨基酸至约55个氨基酸、约35个氨基酸至约50个氨基酸、约35个氨基酸至约45个氨基酸、约35个氨基酸至约40个氨基酸、约40个氨基酸至约250个氨基酸、约40个氨基酸至约240个氨基酸、约40个氨基酸至约230个氨基酸、约40个氨基酸至约220个氨基酸、约40个氨基酸至约210个氨基酸、约40个氨基酸至约200个氨基酸、约40个氨基酸至约190个氨基酸、约40个氨基酸至约180个氨基酸、约40个氨基酸至约170个氨基酸、约40个氨基酸至约160个氨基酸、约40个氨基酸至约150个氨基酸、约40个氨基酸至约140个氨基酸、约40个氨基酸至约130个氨基酸、约40个氨基酸至约120个氨基酸、约40个氨基酸至约110个氨基酸、约40个氨基酸至约100个氨基酸、约40个氨基酸至约95个氨基酸、约40个氨基酸至约90个氨基酸、约40个氨基酸至约85个氨基酸、约40个氨基酸至约80个氨基酸、约40个氨基酸至约75个氨基酸、约40个氨基酸至约70个氨基酸、约40个氨基酸至约65个氨基酸、约40个氨基酸至约60个氨基酸、约40个氨基酸至约55个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约45个氨基酸、约45个氨基酸至约250个氨基酸、约45个氨基酸至约240个氨基酸、约45个氨基酸至约230个氨基酸、约45个氨基酸至约220个氨基酸、约45个氨基酸至约210个氨基酸、约45个氨基酸至约200个氨基酸、约45个氨基酸至约190个氨基酸、约45个氨基酸至约180个氨基酸、约45个氨基酸至约170个氨基酸、约45个氨基酸至约160个氨基酸、约45个氨基酸至约150个氨基酸、约45个氨基酸至约140个氨基酸、约45个氨基酸至约130个氨基酸、约45个氨基酸至约120个氨基酸、约45个氨基酸至约110个氨基酸、约45个氨基酸至约100个氨基酸、约45个氨基酸至约95个氨基酸、约45个氨基酸至约90个氨基酸、约45个氨基酸至约85个氨基酸、约45个氨基酸至约80个氨基酸、约45个氨基酸至约75个氨基酸、约45个氨基酸至约70个氨基酸、约45个氨基酸至约65个氨基酸、约45个氨基酸至约60个氨基酸、约45个氨基酸至约55个氨基酸、约45个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约250个氨基酸、约50个氨基酸至约240个氨基酸、约50个氨基酸至约230个氨基酸、约50个氨基酸至约220个氨基酸、约50个氨基酸至约210个氨基酸、约50个氨基酸至约200个氨基酸、约50个氨基酸至约190个氨基酸、约50个氨基酸至约180个氨基酸、约50个氨基酸至约170个氨基酸、约50个氨基酸至约160个氨基酸、约50个氨基酸至约150个氨基酸、约50个氨基酸至约140个氨基酸、约50个氨基酸至约130个氨基酸、约50个氨基酸至约120个氨基酸、约50个氨基酸至约110个氨基酸、约50个氨基酸至约100个氨基酸、约50个氨基酸至约95个氨基酸、约50个氨基酸至约90个氨基酸、约50个氨基酸至约85个氨基酸、约50个氨基酸至约80个氨基酸、约50个氨基酸至约75个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、约50个氨基酸至约65个氨基酸、约50个氨基酸至约60个氨基酸、约50个氨基酸至约55个氨基酸、约55个氨基酸至约250个氨基酸、约55个氨基酸至约240个氨基酸、约55个氨基酸至约230个氨基酸、约55个氨基酸至约220个氨基酸、约55个氨基酸至约210个氨基酸、约55个氨基酸至约200个氨基酸、约55个氨基酸至约190个氨基酸、约55个氨基酸至约180个氨基酸、约55个氨基酸至约170个氨基酸、约55个氨基酸至约160个氨基酸、约55个氨基酸至约150个氨基酸、约55个氨基酸至约140个氨基酸、约55个氨基酸至约130个氨基酸、约55个氨基酸至约120个氨基酸、约55个氨基酸至约110个氨基酸、约55个氨基酸至约100个氨基酸、约55个氨基酸至约95个氨基酸、约55个氨基酸至约90个氨基酸、约55个氨基酸至约85个氨基酸、约55个氨基酸至约80个氨基酸、约55个氨基酸至约75个氨基酸、约55个氨基酸至约70个氨基酸、约55个氨基酸至约65个氨基酸、约55个氨基酸至约60个氨基酸、约60个氨基酸至约250个氨基酸、约60个氨基酸至约240个氨基酸、约60个氨基酸至约230个氨基酸、约60个氨基酸至约220个氨基酸、约60个氨基酸至约210个氨基酸、约60个氨基酸至约200个氨基酸、约60个氨基酸至约190个氨基酸、约60个氨基酸至约180个氨基酸、约60个氨基酸至约170个氨基酸、约60个氨基酸至约160个氨基酸、约60个氨基酸至约150个氨基酸、约60个氨基酸至约140个氨基酸、约60个氨基酸至约130个氨基酸、约60个氨基酸至约120个氨基酸、约60个氨基酸至约110个氨基酸、约60个氨基酸至约100个氨基酸、约60个氨基酸至约95个氨基酸、约60个氨基酸至约90个氨基酸、约60个氨基酸至约85个氨基酸、约60个氨基酸至约80个氨基酸、约60个氨基酸至约75个氨基酸、约60个氨基酸至约70个氨基酸、约60个氨基酸至约65个氨基酸、约65个氨基酸至约250个氨基酸、约65个氨基酸至约240个氨基酸、约65个氨基酸至约230个氨基酸、约65个氨基酸至约220个氨基酸、约65个氨基酸至约210个氨基酸、约65个氨基酸至约200个氨基酸、约65个氨基酸至约190个氨基酸、约65个氨基酸至约180个氨基酸、约65个氨基酸至约170个氨基酸、约65个氨基酸至约160个氨基酸、约65个氨基酸至约150个氨基酸、约65个氨基酸至约140个氨基酸、约65个氨基酸至约130个氨基酸、约65个氨基酸至约120个氨基酸、约65个氨基酸至约110个氨基酸、约65个氨基酸至约100个氨基酸、约65个氨基酸至约95个氨基酸、约65个氨基酸至约90个氨基酸、约65个氨基酸至约85个氨基酸、约65个氨基酸至约80个氨基酸、约65个氨基酸至约75个氨基酸、约65个氨基酸至约70个氨基酸、约70个氨基酸至约250个氨基酸、约70个氨基酸至约240个氨基酸、约70个氨基酸至约230个氨基酸、约70个氨基酸至约220个氨基酸、约70个氨基酸至约210个氨基酸、约70个氨基酸至约200个氨基酸、约70个氨基酸至约190个氨基酸、约70个氨基酸至约180个氨基酸、约70个氨基酸至约170个氨基酸、约70个氨基酸至约160个氨基酸、约70个氨基酸至约150个氨基酸、约70个氨基酸至约140个氨基酸、约70个氨基酸至约130个氨基酸、约70个氨基酸至约120个氨基酸、约70个氨基酸至约110个氨基酸、约70个氨基酸至约100个氨基酸、约70个氨基酸至约95个氨基酸、约70个氨基酸至约90个氨基酸、约70个氨基酸至约85个氨基酸、约70个氨基酸至约80个氨基酸、约70个氨基酸至约75个氨基酸、约75个氨基酸至约250个氨基酸、约75个氨基酸至约240个氨基酸、约75个氨基酸至约230个氨基酸、约75个氨基酸至约220个氨基酸、约75个氨基酸至约210个氨基酸、约75个氨基酸至约200个氨基酸、约75个氨基酸至约190个氨基酸、约75个氨基酸至约180个氨基酸、约75个氨基酸至约170个氨基酸、约75个氨基酸至约160个氨基酸、约75个氨基酸至约150个氨基酸、约75个氨基酸至约140个氨基酸、约75个氨基酸至约130个氨基酸、约75个氨基酸至约120个氨基酸、约75个氨基酸至约110个氨基酸、约75个氨基酸至约100个氨基酸、约75个氨基酸至约95个氨基酸、约75个氨基酸至约90个氨基酸、约75个氨基酸至约85个氨基酸、约75个氨基酸至约80个氨基酸、约80个氨基酸至约250个氨基酸、约80个氨基酸至约240个氨基酸、约80个氨基酸至约230个氨基酸、约80个氨基酸至约220个氨基酸、约80个氨基酸至约210个氨基酸、约80个氨基酸至约200个氨基酸、约80个氨基酸至约190个氨基酸、约80个氨基酸至约180个氨基酸、约80个氨基酸至约170个氨基酸、约80个氨基酸至约160个氨基酸、约80个氨基酸至约150个氨基酸、约80个氨基酸至约140个氨基酸、约80个氨基酸至约130个氨基酸、约80个氨基酸至约120个氨基酸、约80个氨基酸至约110个氨基酸、约80个氨基酸至约100个氨基酸、约80个氨基酸至约95个氨基酸、约80个氨基酸至约90个氨基酸、约80个氨基酸至约85个氨基酸、约85个氨基酸至约250个氨基酸、约85个氨基酸至约240个氨基酸、约85个氨基酸至约230个氨基酸、约85个氨基酸至约220个氨基酸、约85个氨基酸至约210个氨基酸、约85个氨基酸至约200个氨基酸、约85个氨基酸至约190个氨基酸、约85个氨基酸至约180个氨基酸、约85个氨基酸至约170个氨基酸、约85个氨基酸至约160个氨基酸、约85个氨基酸至约150个氨基酸、约85个氨基酸至约140个氨基酸、约85个氨基酸至约130个氨基酸、约85个氨基酸至约120个氨基酸、约85个氨基酸至约110个氨基酸、约85个氨基酸至约100个氨基酸、约85个氨基酸至约95个氨基酸、约85个氨基酸至约90个氨基酸、约90个氨基酸至约250个氨基酸、约90个氨基酸至约240个氨基酸、约90个氨基酸至约230个氨基酸、约90个氨基酸至约220个氨基酸、约90个氨基酸至约210个氨基酸、约90个氨基酸至约200个氨基酸、约90个氨基酸至约190个氨基酸、约90个氨基酸至约180个氨基酸、约90个氨基酸至约170个氨基酸、约90个氨基酸至约160个氨基酸、约90个氨基酸至约150个氨基酸、约90个氨基酸至约140个氨基酸、约90个氨基酸至约130个氨基酸、约90个氨基酸至约120个氨基酸、约90个氨基酸至约110个氨基酸、约90个氨基酸至约100个氨基酸、约90个氨基酸至约95个氨基酸、约95个氨基酸至约250个氨基酸、约95个氨基酸至约240个氨基酸、约95个氨基酸至约230个氨基酸、约95个氨基酸至约220个氨基酸、约95个氨基酸至约210个氨基酸、约95个氨基酸至约200个氨基酸、约95个氨基酸至约190个氨基酸、约95个氨基酸至约180个氨基酸、约95个氨基酸至约170个氨基酸、约95个氨基酸至约160个氨基酸、约95个氨基酸至约150个氨基酸、约95个氨基酸至约140个氨基酸、约95个氨基酸至约130个氨基酸、约95个氨基酸至约120个氨基酸、约95个氨基酸至约110个氨基酸、约95个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约250个氨基酸、约100个氨基酸至约240个氨基酸、约100个氨基酸至约230个氨基酸、约100个氨基酸至约220个氨基酸、约100个氨基酸至约210个氨基酸、约100个氨基酸至约200个氨基酸、约100个氨基酸至约190个氨基酸、约100个氨基酸至约180个氨基酸、约100个氨基酸至约170个氨基酸、约100个氨基酸至约160个氨基酸、约100个氨基酸至约150个氨基酸、约100个氨基酸至约140个氨基酸、约100个氨基酸至约130个氨基酸、约100个氨基酸至约120个氨基酸、约100个氨基酸至约110个氨基酸、约120个氨基酸至约250个氨基酸、约120个氨基酸至约240个氨基酸、约120个氨基酸至约230个氨基酸、约120个氨基酸至约220个氨基酸、约120个氨基酸至约210个氨基酸、约120个氨基酸至约200个氨基酸、约120个氨基酸至约190个氨基酸、约120个氨基酸至约180个氨基酸、约120个氨基酸至约170个氨基酸、约120个氨基酸至约160个氨基酸、约120个氨基酸至约150个氨基酸、约120个氨基酸至约140个氨基酸、约120个氨基酸至约130个氨基酸、约130个氨基酸至约250个氨基酸、约130个氨基酸至约240个氨基酸、约130个氨基酸至约230个氨基酸、约130个氨基酸至约220个氨基酸、约130个氨基酸至约210个氨基酸、约130个氨基酸至约200个氨基酸、约130个氨基酸至约190个氨基酸、约130个氨基酸至约180个氨基酸、约130个氨基酸至约170个氨基酸、约130个氨基酸至约160个氨基酸、约130个氨基酸至约150个氨基酸、约130个氨基酸至约140个氨基酸、约140个氨基酸至约250个氨基酸、约140个氨基酸至约240个氨基酸、约140个氨基酸至约230个氨基酸、约140个氨基酸至约220个氨基酸、约140个氨基酸至约210个氨基酸、约140个氨基酸至约200个氨基酸、约140个氨基酸至约190个氨基酸、约140个氨基酸至约180个氨基酸、约140个氨基酸至约170个氨基酸、约140个氨基酸至约160个氨基酸、约140个氨基酸至约150个氨基酸、约150个氨基酸至约250个氨基酸、约150个氨基酸至约240个氨基酸、约150个氨基酸至约230个氨基酸、约150个氨基酸至约220个氨基酸、约150个氨基酸至约210个氨基酸、约150个氨基酸至约200个氨基酸、约150个氨基酸至约190个氨基酸、约150个氨基酸至约180个氨基酸、约150个氨基酸至约170个氨基酸、约150个氨基酸至约160个氨基酸、约160个氨基酸至约250个氨基酸、约160个氨基酸至约240个氨基酸、约160个氨基酸至约230个氨基酸、约160个氨基酸至约220个氨基酸、约160个氨基酸至约210个氨基酸、约160个氨基酸至约200个氨基酸、约160个氨基酸至约190个氨基酸、约160个氨基酸至约180个氨基酸、约160个氨基酸至约170个氨基酸、约170个氨基酸至约250个氨基酸、约170个氨基酸至约240个氨基酸、约170个氨基酸至约230个氨基酸、约170个氨基酸至约220个氨基酸、约170个氨基酸至约210个氨基酸、约170个氨基酸至约200个氨基酸、约170个氨基酸至约190个氨基酸、约170个氨基酸至约180个氨基酸、约180个氨基酸至约250个氨基酸、约180个氨基酸至约240个氨基酸、约180个氨基酸至约230个氨基酸、约180个氨基酸至约220个氨基酸、约180个氨基酸至约210个氨基酸、约180个氨基酸至约200个氨基酸、约180个氨基酸至约190个氨基酸、约190个氨基酸至约250个氨基酸、约190个氨基酸至约240个氨基酸、约190个氨基酸至约230个氨基酸、约190个氨基酸至约220个氨基酸、约190个氨基酸至约210个氨基酸、约190个氨基酸至约200个氨基酸、约200个氨基酸至约250个氨基酸、约200个氨基酸至约240个氨基酸、约200个氨基酸至约230个氨基酸、约200个氨基酸至220个氨基酸、约200个氨基酸至约210个氨基酸、约210个氨基酸至约250个氨基酸、约210个氨基酸至约240个氨基酸、约210个氨基酸至约230个氨基酸、约210个氨基酸至约220个氨基酸、约220个氨基酸至约250个氨基酸、约220个氨基酸至约240个氨基酸、约220个氨基酸至约230个氨基酸、约230个氨基酸至约250个氨基酸、约230个氨基酸至约240个氨基酸或约240个氨基酸至约250个氨基酸。
在一些实施方案中，抗原结合结构域与跨膜结构域之间的接头序列可以是或可以包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 CH1、CH2和CH3结构域中的一种或更多种。在一些实施方案中，抗原结合结构域与跨膜结构域之间的接头可以是或可以包含CH2-CH3人IgG1结构域。在一些实施方案中，CH2-CH3人IgG1结构域具有以下序列：
AEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD(SEQ ID NO：75)
在一些实施方案中，抗原结合结构域与跨膜结构域之间的接头序列可以是或包含与人CD8跨膜结构域接近的人CD8细胞外序列的部分。例如，抗原结合结构域与跨膜结构域之间的接头序列可以是或包含TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI的人CD8序列(SEQ ID NO：76)。
在一些实施方案中，抗原结合结构域与跨膜结构域之间的接头序列可以是或包含人IgG1铰链序列。在一些实施方案中，人IgG1铰链序列是AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK(SEQ IDNO：77)。
在一些实施方案中，接头序列(例如，本文所述或本领域已知的接头序列中的任一种)可以存在于跨膜结构域与共刺激结构域之间。在一些实施方案中，接头序列(例如，本文所述或本领域已知的接头序列中的任一种)可以存在于共刺激结构域与ITAM之间。
核酸
本文中还提供了编码各种具有白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的多肽、各种嵌合跨膜蛋白或本文所述的各种其他蛋白中任一种的核酸，该白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域具有一个或更多个氨基酸修饰。
载体
本文中提供了载体，该载体包含编码各种具有白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的多肽、各种嵌合跨膜蛋白或本文所述的各种其他蛋白中任一种的核酸，该白细胞介素-7受体具有一个或更多个氨基酸修饰。根据本公开内容的“载体”是能够在哺乳动物细胞中诱导重组蛋白(例如，嵌合跨膜蛋白、蛋白质和/或嵌合抗原受体)表达的多核苷酸。本文中提供的载体可以是例如环形或线性化形式。载体的非限制性实例包括质粒、SV40载体、腺病毒载体和腺相关病毒(AAV)载体。载体的非限制性实例包括慢病毒载体或逆转录病毒载体，例如γ-逆转录病毒载体。参见，例如Carlens等,Exp.Hematol.28(10:1137-1146,2000；Park等,Trends Biotechnol.29(11):550-557,2011；和Alonso-Camino等,Mol.Ther.Nucleic Acids 2:e93,2013。逆转录病毒载体的限制性实例包括衍生自莫洛尼氏鼠白血病病毒、骨髓增生性肉瘤病毒、鼠胚胎干细胞病毒、鼠源干细胞病毒、脾脏形成灶病毒或腺相关病毒的那些。莫洛尼氏鼠白血病病毒的非限制性实例在例如U.S.PatentNo.5,219,740和6,207,453；Miller等,BioTechniques 7:980-990,1989；Miller,HumanGene Therapy 1:5-14,1990；Scarpa等,Virology 180:849-852,1991；Burns等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:8033-8037,1993；和Boris-Lawrie等,Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109,1993中进行了描述。示例性慢病毒载体在例如Wang等,J.Immunother.35(9):689-701,2003；Cooper等,Blood 101:1637-1644,2003；Verhoeyen等,Methods Mol.Biol.506:97-114,2009；和Cavalieri等,Blood102(2):497-505,2003中进行了描述。
可在其中插入本文中提供的核酸中任一种的示例性载体在例如Ausubel等,Eds.“Current Protocols in Molecular Biology”Current Protocols,1993；和Sambrook等,Eds.“Molecular Cloning:A Laboratory Manual,”第二版,Cold Spring Harbor Press,1989中进行了描述。
在一些实施方案中，载体还包含与本文所述的核酸中任一种可操作连接的启动子序列和/或增强子序列。启动子的非限制性实例包括来自人巨细胞病毒(CMV)、小鼠磷酸甘油酸激酶1、多瘤腺病毒、甲状腺刺激激素α、波形蛋白、猿猴病毒40(SV40)、肿瘤坏死因子、β-球蛋白、α-甲胎蛋白、γ-球蛋白、β-干扰素、γ-谷氨酰转移酶、人泛素C(UBC)、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、劳斯肉瘤病毒、甘油三磷酸脱氢酶、β-肌动蛋白、金属硫蛋白II(MT II)、淀粉酶、人EF1α、组织蛋白酶、MI毒蕈碱受体、逆转录病毒LTR(例如人T细胞白血病病毒HTLV)、AAV ITR、白细胞介素2、胶原酶、血小板衍生的生长因子、腺病毒E2、基质溶解素、鼠MX、大鼠胰岛素、葡萄糖调节蛋白78、人免疫缺陷病毒、葡萄糖调节蛋白94、α-2-巨球蛋白、MHC I类、HSP70、增殖蛋白、免疫球蛋白轻链、T细胞受体、HLADQα、HLADQβ、白细胞介素-2受体、MHC II类、前白蛋白(转甲状腺素蛋白)、弹性蛋白酶I、白蛋白、c-fos、神经细胞粘附分子(NCAM)、H2B组蛋白、大鼠生长激素、人血清淀粉样蛋白(SAA)、肌肉肌酸酐激酶、肌钙蛋白I(TN I)和长臂猿白血病病毒(GALV)的启动子。在一些实施方案中，启动子可以是诱导型启动子或组成型启动子。启动子的另外的实例是本领域已知的。
在一些实施例中，本文中提供的载体还包含多聚(A)序列，该多聚(A)序列可操作地连接并定位于编码嵌合跨膜蛋白、蛋白质或嵌合抗原受体的序列的3’。多聚(A)序列的非限制性实例包括衍生自牛生长激素(Woychik等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81(13):3944-3948,1984和U.S.Patent No.5,122,458)、小鼠-β-球蛋白、小鼠-α-球蛋白(Orkin等,EMBO J.4(2):453-456,1985)、人胶原蛋白、多瘤病毒(Batt等,Mol.Cell Biol.15(9):4783-4790,1995)、单疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)，IgG重链基因聚腺苷酸化信号(美国专利申请公开号2006/0040354)、人生长激素(hGH)(Szymanski等,Mol.Therapy 15(7):1340-1347,2007)、SV40多聚(A)位点例如SV40晚期和早期多聚(A)位点(Schek等,Mol.CellBiol.12(12):5386-5393,1992)的那些。在一些实施方案中，多聚(A)序列包含高度保守的上游元件(AATAAA)。该AATAAA序列可以例如被与AATAAA具有同源性的其他六核苷酸序列取代，该六核苷酸序列能够信号传导聚腺苷酸化，包括例如ATTAAA、AGTAAA、CATAAA、TATAAA、GATAAA、ACTAAA、AATATA、AAGAAA、AATAAT、AAAAAA、AATGAA、AATCAA、AACAAA、AATCAA、AATAAC、AATAGA、AATTAA和AATAAG。参见，例如WO 06012414A2)。
多聚(A)序列可以例如是合成的聚腺苷酸化位点。参见，例如，Levitt等,GenesDev.3(7):1019-1025,1989)。在一些实施例中，多聚(A)序列可以是可溶性神经菌毛素-1：AAATAAAATACGAAATG(SEQ ID NO：78)的聚腺苷酸化信号。多聚(A)序列的另外的实例是本领域已知的。载体的另外的实例和方面也是本领域已知的。
在本文所述的载体中任一种的一些实施方案中，载体还可以包含编码嵌合抗原受体的序列。在一些实施方案中，嵌合抗原受体可以与肿瘤抗原特异性结合(例如，肿瘤抗原选自磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-甲胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125 CD200、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合蛋白α5β1、整合蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羟乙酰神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白)。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含选自以下的一种或更多种共刺激信号传导结构域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10和DAP-12。在本文所述的载体中任一种的一些实施例中，载体是慢病毒载体或腺病毒载体。
本文中还提供了包含第一载体和第二载体的载体组，该第一载体包括编码本文所述的任何嵌合跨膜蛋白的序列(例如，包含编码本文所述的任何嵌合跨膜蛋白的序列的任何载体)，该第二载体包含编码嵌合抗原受体(例如，本文所述的嵌合抗原受体中的任一种)的序列。在一些实施方案中，第一载体和第二载体中的一种或两种是慢病毒载体或腺病毒载体。在一些实施方案中，第二载体还包含与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的启动子序列和/或增强子序列。在一些实施方案中，第二载体还包含与编码嵌合抗原受体的序列可操作地连接的多聚(A)序列。
用于将核酸或载体引入哺乳动物细胞的方法
可以使用本领域已知的各种不同方法将本文中公开的核酸和载体中任一种引入哺乳动物细胞(例如，本文所述的哺乳动物细胞中的任一种，例如本文所述的任何T细胞中的任一种，例如人T细胞)中。可以用于将核酸或载体引入哺乳动物细胞中的方法的非限制性实例包括脂质转染、转染、电穿孔、显微注射、磷酸钙转染、基于树状聚合物的转染、阳离子聚合物转染、细胞挤压、超声穿孔、光学转染、撞击、流体动力传递、磁转染、病毒转导(例如腺病毒转导和慢病毒转导)和纳米颗粒转染。用于将核酸或载体引入哺乳动物细胞中的另外的方法是本领域已知的。
哺乳动物细胞
本文中还提供了包含本文所述的核酸或载体中任一种的哺乳动物细胞。本文中还提供了包含本文所述的载体组中任一种的哺乳动物细胞。
在一些实施方案中，哺乳动物细胞是先前从受试者(例如，人受试者，例如被鉴定或诊断为患有癌症的人受试者)获得的，或者是先前从受试者(例如，人受试者，例如被鉴定或诊断为患有癌症的人受试者)获得的哺乳动物细胞的子细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是人细胞。
免疫细胞的非限制性实例包括T细胞(例如人T细胞)。T细胞(例如人T细胞)的非限制性实例包括例如未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、辅助T细胞、幼稚T细胞、多能TH细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、TH17细胞、TH22细胞、TH9细胞、TH2细胞、TH1细胞、TH3细胞、γδT细胞、αβT细胞、调节性T细胞(Treg细胞)和肿瘤浸润性T细胞。T细胞(例如人T细胞)的另外的实例包括CD8+T细胞、CD4+T细胞、记忆T细胞、Treg细胞、天然杀伤细胞、B细胞和单核细胞。哺乳动物细胞的另外的实例包括肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和天然杀伤细胞。
组合物和试剂盒
本文中还提供了包含本文所述的核酸、载体、核酸组、载体组或哺乳动物细胞中任一种的组合物(例如，药物组合物)。例如，本文中提供了包含本文所述的核酸或核酸组中任一种、或本文中提供的载体或载体组中任一种、以及药学上可接受的溶剂或载剂的组合物。
在一些实施方案中，组合物可以是本文所述的哺乳动物细胞中的任一种(例如，先前从受试者(例如，被鉴定或诊断为患有癌症的受试者)获得的本文所述的哺乳动物细胞中的任一种)，其包含编码本文所述的嵌合跨膜蛋白中任一种和/或嵌合抗原受体中任一种的核酸。在包含本文所述的哺乳动物细胞中任一种的组合物中，组合物还可以包含细胞培养基或药学上可接受的缓冲液(例如，磷酸盐缓冲盐水)。包含本文所述的哺乳动物细胞中任一种的组合物可以被配制以用于静脉内或动脉内施用。
还提供了试剂盒，其包含本文所述的任何组合物(例如，药物组合物)中的一种或更多种。在一些实施方案中，试剂盒还可以包含用于执行本文所述的方法中任一种的说明书。
用于在受试者中治疗癌症的方法
本文中还提供了用于在受试者(例如，人、小鼠、兔、大鼠、马、狗、猴子或类人猿)中治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的哺乳动物细胞中任一种，其包含编码具有白细胞介素-7受体的α链的跨膜结构域的多肽、本文所述的嵌合跨膜蛋白或两者的核酸(和任选地包含本文所述的嵌合抗原受体中任一种的核酸)，该跨膜结构域具有本文所述的一个或更多个氨基酸修饰。在这些方法的一些实施例中，哺乳动物细胞是T细胞(例如，CD8+T细胞、CD4+T细胞、记忆T细胞、Treg细胞和天然杀伤T细胞)。在一些实施例中，哺乳动物细胞(例如，本文所述的哺乳动物细胞中任一种)是先前从受试者(例如，已经被鉴定或诊断为患有癌症，例如，本文所述的癌症中的任一种)获得的哺乳动物细胞。这些方法的一些实施方案还包括从受试者获得哺乳动物细胞。
这些方法的一些实施方案还包括将编码本文所述的单链嵌合抗原受体或本文所述的多链嵌合抗原受体的核酸引入哺乳动物细胞(例如本文所述或本领域已知的哺乳动物细胞中的任一种)中以产生施用到受试者的哺乳动物细胞。
可以使用本文中提供的方法中任一种治疗的癌症的非限制性实例包括：肝细胞癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、肾上腺皮质癌、卡波济肉瘤、淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、畸胎类肿瘤/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、支气管肿瘤、类癌、心脏肿瘤、宫颈癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓增生性肿瘤、结肠癌、大肠癌、颅咽管瘤、胆管癌、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、嗅神经母细胞瘤、尤因肉瘤、眼癌、输卵管癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤、生殖细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝癌、下咽癌、胰腺癌、肾癌、喉癌、慢性粒细胞白血病、唇和口腔癌、肺癌、黑素瘤、默克尔细胞癌、间皮瘤、嘴癌、口癌、骨肉瘤、卵巢癌、阴茎癌、咽癌、前列腺癌、直肠癌、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌和外阴癌。
在这些方法中任一种的一些实施方案中，所述方法导致受试者中的肿瘤负担下降(例如，肿瘤质量和/或实体瘤体积下降)。例如，本文所述的方法中的任一种可以导致受试者中的肿瘤负担(例如，与治疗前受试者中的肿瘤负担相比)减少至少约1％至约99％(例如，约1％至约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约2％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约3％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约5％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％或约10％(包括端值)；约10％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％或约15％(包括端值)；约15％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％或约20％(包括端值)；约20％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％或约25％(包括端值)；约25％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％或约30％(包括端值)；约30％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％或约35％(包括端值)；约35％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％或约40％(包括端值)；约40％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％或约45％(包括端值)；约45％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％或约50％(包括端值)；约50％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％或约55％(包括端值)；约55％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％或约60％(包括端值)；约60％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％或约65％(包括端值)；约65％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％或约70％(包括端值)；约70％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％或约72％(包括端值)；约72％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％或约74％(包括端值)；约74％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％或约76％(包括端值)；约76％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％或约78％(包括端值)；约78％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％或约80％(包括端值)；约80％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％或约82％(包括端值)；约82％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％或约84％(包括端值)；约84％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％或约86％(包括端值)；约86％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％或约88％(包括端值)；约88％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％或约90％(包括端值)；约90％至约99％、约98％、约96％、约94％或约92％(包括端值)；约92％至约99％、约98％、约96％或约94％(包括端值)；约94％至约99％、约98％或约96％(包括端值)；or约96％至约99％or约98％(包括端值))。
在一些实施方案中，所述方法导致受试者中的癌症进展速率下降。例如，本文所述的方法中的任一种可以导致受试者中的癌症进展速率(例如，与治疗前的受试者中的癌症进展速率或者患有相同癌症且未施用或施用不同治疗方案的对照受试者或对照受试者群体中的癌症进展速率相比)降低至少约1％至约99％(例如，约1％至约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约2％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约3％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约5％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％或约10％(包括端值)；约10％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％或约15％(包括端值)；约15％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％或约20％(包括端值)；约20％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％或约25％(包括端值)；约25％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％或约30％(包括端值)；约30％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％或约35％(包括端值)；约35％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％或约40％(包括端值)；约40％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％或约45％(包括端值)；约45％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％或约50％(包括端值)；约50％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％或约55％(包括端值)；约55％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％或约60％(包括端值)；约60％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％或约65％(包括端值)；约65％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％或约70％(包括端值)；约70％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％或约72％(包括端值)；约72％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％或约74％(包括端值)；约74％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％或约76％(包括端值)；约76％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％或约78％(包括端值)；约78％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％或约80％(包括端值)；约80％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％或约82％(包括端值)；约82％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％或约84％(包括端值)；约84％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％或约86％(包括端值)；约86％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％或约88％(包括端值)；约88％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％或约90％(包括端值)；约90％至约99％、约98％、约96％、约94％或约92％(包括端值)；约92％至约99％、约98％、约96％或约94％(包括端值)；约94％至约99％、约98％或约96％(包括端值)；或约96％至约99％或约98％(包括端值))。
在这些方法中任一种的一些实施方案中，所述方法导致受试者的癌症存活期增加。例如，本文所述的方法中的任一种可以导致受试者的癌症存活期(例如，与患有相同癌症且未施用或施用不同治疗方案的对照受试者或对照受试者群体的癌症存活期相比)增加约1％至约800％(例如，约1％至约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％、约100％、约80％、约60％、约40％、约20％、约10％或约5％(包括端值)；约5％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％、约100％、约80％、约60％、约40％、约20％或约10％(包括端值)；约10％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％、约100％、约80％、约60％、约40％或约20％(包括端值)；约20％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％、约100％、约80％、约60％或约40％(包括端值)；约40％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％、约100％、约80％或约60％(包括端值)；约60％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％、约100％、约80％(包括端值)；约80％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％、约150％或约100％(包括端值)；约100％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％、约200％或约150％(包括端值)；约150％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％、约250％或约200％(包括端值)；约200％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％、约300％或约250％(包括端值)；约250％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％、约350％或约300％(包括端值)；约300％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％、约400％或约350％(包括端值)；约350％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％、约450％或约400％(包括端值)；约400％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％、约500％或约450％(包括端值)；约450％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％、约550％或约500％(包括端值)；约500％至约800％、约750％、约700％、约650％、约600％或约550％(包括端值)；约550％至约800％、约750％、约700％、约650％或约600％(包括端值)；约600％至约800％、约750％、约700％或约650％(包括端值)；约650％至约800％、约750％或约700％(包括端值)；约700％至约800％or约750％(包括端值)；或约750％至约800％(包括端值))。
本文中还提供了用于在有此需要的受试者中诱导癌细胞细胞死亡的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的哺乳动物细胞中的任一种。
本文中还提供了用于在患有癌症的受试者中降低发展转移或另外的转移的风险的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的哺乳动物细胞中的任一种。例如，本文所述的方法中的任一种可以导致受试者中发展转移或另外的转移的风险(例如，，与患有相同癌症且未施用或施用不同治疗方案的对照受试者或对照受试者群体的发展转移或另外的转移的风险相比)降低至少约1％至约99％(例如，约1％至约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约2％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约3％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％(包括端值)；约5％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％或约10％(包括端值)；约10％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％或约15％(包括端值)；约15％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％或约20％(包括端值)；约20％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％或约25％(包括端值)；约25％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％或约30％(包括端值)；约30％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％或约35％(包括端值)；约35％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％或约40％(包括端值)；约40％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％或约45％(包括端值)；约45％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％、约55％或约50％(包括端值)；约50％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％、约60％或约55％(包括端值)；约55％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％、约65％或约60％(包括端值)；约60％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％、约70％或约65％(包括端值)；约65％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％、约72％或约70％(包括端值)；约70％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％、约74％或约72％(包括端值)；约72％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％、约76％或约74％(包括端值)；约74％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％、约78％或约76％(包括端值)；约76％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％、约80％或约78％(包括端值)；约78％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％、约82％或约80％(包括端值)；约80％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％、约84％或约82％(包括端值)；约82％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％、约86％或约84％(包括端值)；约84％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％、约88％或约86％(包括端值)；约86％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％、约90％或约88％(包括端值)；约88％至约99％、约98％、约96％、约94％、约92％或约90％(包括端值)；约90％至约99％、约98％、约96％、约94％或约92％(包括端值)；约92％至约99％、约98％、约96％或约94％(包括端值)；约94％至约99％、约98％或约96％(包括端值)；或约96％至约99％or约98％(包括端值))。
实施例
本发明进一步在以下实施例中进行描述，这些实施例不限制权利要求书所述的本发明的范围。
实施例1.经修饰的IL7Rα蛋白在原代T细胞表面表达
用针对N-末端His标签的荧光染料偶联抗体对原代T细胞进行染色以检测突变的IL7Rα蛋白的表面表达。简而言之，在用慢病毒载体转导后72小时，收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-His(APC；1:100)在4℃下孵育30分钟。使用BDLSRII Fortessa仪器进行流式细胞术，并使用FlowJo V10软件进行分析(图3，所示数据来自活化后第6天)。通过流式细胞术检测GFP(FITC)用作表达的替代物，因为GFP基因在与IL7Ra突变蛋白相同的转基因中编码，并且被T2A自切割肽序列隔开。GFP的检测和His标签的表面检测是线性的。
实施例2.嵌合跨膜蛋白在原代T细胞的表面表达
mbIL15-IL17Rα-WT是一种嵌合跨膜蛋白，其具有野生型IL7Rα跨膜和细胞内结构域、IL15Rα细胞外结构域(包含sushi结构域)、接头和IL15多肽结构域(参见图4中所示的构建体的示意图)。mbIL15-IL17Rα-Ins_PPCL是一种嵌合跨膜蛋白，其具有野生型IL7Rα细胞内结构域、在成熟野生型IL7Rα的氨基酸位置4与5之间插入了PPCL序列的IL7Rα跨膜结构域、IL15Rα细胞外结构域(包含sushi结构域)、接头和IL15多肽结构域。
用针对IL15Rα的荧光染料偶联抗体对原代T细胞进行染色以检测嵌合mbIL15蛋白的表面表达。简而言之，在用慢病毒载体转导后72小时，收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-IL15Rα(APC；1:100)在4℃下孵育30分钟。使用BD LSRIIFortessa仪器进行流式细胞术，并使用FlowJo V10软件进行分析(图5，所示数据来自活化后第6天)。通过流式细胞术检测GFP(FITC)用作表达的替代物，因为GFP基因在与IL7Rα突变体和嵌合mbIL15蛋白相同的转基因中编码，并且被T2A自切割肽序列隔开。GFP的检测和IL15Rα的表面表达是线性的。
实施例3.表达IL7突变受体的T细胞维持CD62L(Tscm和Tcm群体)的高表达和CD25的可变表达
用慢病毒载体转导原代人T细胞以表达图6A的x轴所示的一种特异性IL7Rα蛋白或一种特异性嵌合跨膜蛋白。简而言之，每个时间点收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-Myc(PE；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)和抗-CD62L(BV605；1:200)抗体在4℃下孵育30分钟。CD45RO和CD62L的相对表达水平用于确定细胞的分化状态。Teff＝效应T细胞。Tem＝效应记忆T细胞。Tcm＝中央记忆T细胞。Tscm＝干细胞记忆T细胞。图6A示出了当用指示的蛋白质转导原代人T细胞时，不同类型的CD8+T细胞的百分比。
在活化后15天评估在表达不同IL7Rα突变蛋白和嵌合跨膜蛋白的原代人T细胞中PD-1(图6B，左图)或CD25(图6B，右图)的表达。简而言之，每个时间点收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的的抗-Myc(PE；1:100)、抗-CD25(BV421；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)、抗CD62L(BV605；1:200)和抗-PD1(PE-Cy7；1:200)在4℃下孵育30分钟。未转导(“UT”)对照T细胞提供PD-1和CD25表达的基本水平。
实施例4.IL7Rα跨膜结构域突变体在原代T细胞中诱导STAT5的磷酸化
通过蛋白质印迹(顶部蛋白质印迹)评估在未转导(“UT”)或用编码图7A中所示的一种特异性IL7Rα蛋白或一种特异性嵌合膜蛋白的慢病毒转导的原代人T细胞中磷酸化STAT5的水平。活化后14天，在血清/细胞因子饥饿条件下16至20小时后由T细胞制备全细胞裂解物。用100ng/ml可溶性IL2刺激15分钟的UT T细胞用作阳性对照(+刺激)，而未刺激的UT细胞(-刺激)提供基本磷酸/蛋白质水平。还通过蛋白质印迹(底部蛋白质印迹)评估了对照蛋白质(α微管蛋白)。
在活化后第15天评估了原代人T细胞中各种IL7Rα突变蛋白和嵌合跨膜蛋白的表达(图7B)。GFP数据显示为表达％(顶部柱状图)和平均荧光强度(底部柱状图)。通过流式细胞术检测GFP表达用于在14天的培养期内(活化后第1天转导细胞)追踪表达各种IL7Rα突变体或嵌合跨膜蛋白的细胞的相对数量。
实施例5.IL7Rα跨膜结构域突变与CD19 CAR共感染原代T细胞
评估了CD19 CAR(1928z嵌合抗原受体)、EKV或Ins_CPTIL7Rα突变蛋白、mbIL15-17RαIns_PPCL嵌合跨膜蛋白和mbIL15蛋白在原代T细胞表面的表达。图8A和8B示意性地示出了构建体及其在原代T细胞上的共表达。
用分别针对存在于IL7Rα突变体和CAR的N-端上的His和Myc标签的荧光染料偶联抗体对原代T细胞进行染色，或用抗-IL15Rα抗体染色以检测嵌合mbIL15蛋白的表面表达。简而言之，在用慢病毒载体转导后72小时，收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-His(APC；1:100)或抗-IL15Rα(APC；1:100)和抗-Myc(PE；1:100)在4℃下孵育30分钟。使用BD LSRII Fortessa仪器进行流式细胞术，并使用FlowJo V10软件进行分析(图8C，所示数据来自活化后第6天)。GFP在与IL7Ra突变体和嵌合mbIL15蛋白相同的转基因中表达，通过流式细胞术检测GFP(FITC)可用作表达的替代物。双阳性(Myc-PE+，FITC)群体证明两种蛋白质在原代人T细胞上共表达。
从培养第6天到第14天，表达mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL和mbIL15的细胞数量下降(图8D)。相反，表达IL7Rα_EKV、IL7Rα_Ins_CPT和1928z嵌合抗原受体的细胞数量在同一时期保持相对恒定。通过流式细胞术检测GFP表达和N-末端Myc标签(Myc-PE；在FACS缓冲液中1:100，缓冲30分钟)，用于在14天的培养期内(活化后第1天转导细胞)分别追踪表达各种IL7Rα突变体或嵌合跨膜蛋白和CD19 CAR的细胞的相对数量。
表达各种IL7Ra突变体和嵌合跨膜蛋白的CAR T细胞在活化后第14天维持较少的分化记忆表型(图9)。简而言之，在活化后14天收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-Myc(FITC；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)和抗CD62L(BV605；1:200)抗体在4℃下孵育30分钟。使用BD LSRIIFortessa仪器进行流式细胞术，并使用FlowJo V10软件进行分析。对T细胞记忆亚群(CD62L相对于CD45RO)根据Myc+、CD8+群体分门。Teff＝效应T细胞。Tem＝效应记忆T细胞。Tcm＝中央记忆T细胞。Tscm＝干细胞记忆T细胞。
评估了在未转导或用编码所示一种IL7Rα蛋白或所示一种嵌合跨膜蛋白(具有或不具有CAR)的慢病毒载体转导的原代人T细胞中磷酸化STAT5和STAT3水平以及BCL-XL的总蛋白水平。活化后14天，在血清/细胞因子饥饿条件下16至20小时后由T细胞制备全细胞裂解物。用100ng/ml可溶性IL2刺激15分钟的UT T细胞用作阳性对照(+刺激)，而未刺激的UT细胞(-刺激)提供基本磷酸/蛋白质水平。
实施例6.表达IL7Rα突变体的CAR-T细胞在连续暴露于抗原后表现出比对照CAR-T细胞优异的扩增
评估了与对照CAR相比，表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在以1:1效应子与靶标(E:T)之比连续暴露于抗原后的扩增。在活化后第14天，在第0天，将5x105 CAR+T细胞与5x105Nalm6 B细胞铺板于GRex 24孔板的每个孔中。将细胞铺板重复三次。将Nalm6 B细胞和新鲜细胞培养基在第4、7、11、14和17天基于通过流式细胞术计算出的每个孔中CAR+细胞数量以1:1比例添加回培养板。相对于未转导的和单独的肿瘤对照，所有表达IL7R5突变体的细胞在整个21天的测定中都维持100％的肿瘤细胞裂解。在第4、7、11、17和21天通过流式细胞术分析确定CAR+T细胞的倍数扩增。简而言之，每个时间点收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-Myc(PE；1:100)、抗-CD3(BV421；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)、抗-CD62L(BV605；1:200)和抗-PD1(PE-Cy7；1:200)抗体在4℃下孵育30分钟。在流式细胞术分析之前，将计数珠(50ml，123countTM eBeads，Thermo Fisher Scientific)直接添加到每个试管中，以定量化每种条件下的细胞数。这些数用于跟踪CAR+扩增速率，并确定以1:1E:T比添加回每个孔的Nalm6靶细胞的数量。这些数据表明，与对照CAR相比，表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在以1:1比例的效应子与靶标(E：T)之比连续暴露于抗原时表现出优异的扩增(图11A和11B)。
评估了CD19+Nalm6 B细胞(图12A)和CD19-K562细胞(图12B)在基于荧光素酶的过夜杀伤测定中的裂解百分比。从21天连续杀伤测定(如本文所述)结束时获取的T细胞和经基因工程以表达萤火虫荧光素酶(fLuc+)的Nalm6或CD19-K562细胞系。每孔铺板1x104Nalm6或K562细胞，并根据％CAR+在各种E:T比下铺板T细胞。基于活Nalm6 B-或K652细胞的相对光单位(RLU)强度测量细胞裂解，并标准化为Nalm6 K562单独对照。
表达IL7Rα突变体的T细胞在22天连续抗原接触后以低E:T比表现出比对照CD19CAR优异的CD19+Nalm6 B细胞杀伤(图12A)。如预期的，供体和年龄相匹配的(活化后第35天)UT T细胞无法在21天连续杀伤测定中存活，因此在此未进行分析。
表达IL7Rα_EKV的CAR T细胞在高E:T比(20:1和6:1)下表现出对CD19-K562的脱靶细胞毒性增加，而表达其他细胞因子受体变体的CAR-T细胞表现出与对照CAR相当的脱靶细胞毒性(图12B)。
在连续暴露于抗原后第14天，评估了表达IL7Rα突变体的CAR-T细胞的记忆类型分化(图13)。在第0、4、7、11、14、17和21天，将Nalm6 B细胞添加到细胞培养物中。Teff＝效应T细胞。Tem＝效应记忆T细胞。Tcm＝中央记忆T细胞。Tscm＝干细胞记忆T细胞。简而言之，每个时间点收集多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-Myc(PE；1:100)、抗-CD3(BV421；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)、抗-CD62L(BV605；1:200)和抗-PD1(PE-Cy7；1:200)抗体在4℃下孵育30分钟。这些数据表明，在连续暴露于抗原后第14天，表达IL7Rα突变体的CAR T细胞维持较低分化的记忆表型。
实施例7.表达IL7Rα突变体的CAR-T细胞在单独暴露于抗原时表现出比对照CAR-T细胞优异的扩增
评估了以1:3E:T比单独暴露于靶标后与对照CAR相比表达IL7Rα突变体的CAR T细胞的扩增(图14A和14B)。在活化后第14天，在第0天，将5x105 CAR+T细胞与1.5x106 Nalm6 B细胞铺板在GRex 24孔板的每个孔中。将细胞铺板重复三次。相对于未转导的和单独的肿瘤对照，所有细胞在整个21天的测定中都维持100％的肿瘤细胞裂解。在第4、7、11、17和21天通过流式细胞术分析确定CAR+T细胞的倍数扩增。简而言之，每个时间点收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-Myc(PE；1:100)、抗-CD3(BV421；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)、抗-CD62L(BV605；1:200)和抗-PD1(PE-Cy7；1：200)抗体在4℃孵育30分钟。在分析之前，将计数珠(50ml，123countTMeBeads)直接添加到每个试管中，以定量化每种条件下的细胞数。这些数据表明，表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在单次暴露于靶标时表现出比对照CAR优异的扩增。
在连续暴露于抗原后第14天，评估了表达IL7Rα突变体的CAR-T细胞的记忆类型分化(图15)。在第0天将Nalm6 B细胞添加到细胞培养物中。简而言之，每个时间点收获多达1x106个细胞，并与在PBS+2％FBS(FACS缓冲液)中的抗-Myc(PE；1:100)、抗-CD3(BV421；1:100)、抗-CD4(BV785；1:200)、抗-CD8(PE；1:200)、抗-CD45RO(APC；1:200)、抗-CD62L(BV605；1:200)和抗-PD1(PE-Cy7；1:200)抗体在4℃孵育30分钟。这些数据表明，表达IL7Rα突变体的CAR T细胞在单独暴露于抗原后第14天维持较低分化的记忆表型。Teff＝效应T细胞。Tem＝效应记忆T细胞。Tcm＝中央记忆T细胞。Tscm＝干细胞记忆T细胞。
实施例8.用Nalm6肿瘤的CD19 CAR+IL7Ra CPT、MCP或PPCL体内测试。
CD19+急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞系Nalm6购自ATCC，并用萤光素酶转导以允许进行生物发光成像。在实验的第一天，将0.5x106个Nalm6_luc细胞植入NOD-SCIDIL2Rgammanull(NSG)小鼠中。在第6天(此后每三到四天)给动物腹膜内注射D-荧光素(150mg/kg的15mg/mL底物，来自Promega)，并在IVIS S5 Lumina(PerkinElmer，MA)成像器上测量生物发光(BLI)。使用Living Image 4.3.1(PerkinElmer，MA)对图像进行分析以定量化全身，固定体积的ROI，并计算总通量(光子/秒)，并示于下表1中。在实验的第6天，还将动物分为六个动物组(不包括仅三只动物的载剂组)，并用未转导的T细胞或仅携带CD19CAR、CD19 CAR+IL7RαCPT、CD19 CAR+IL7RαMCP或CD19 CAR+IL7RαPPCL的T细胞进行给药。所有接受CAR T细胞的动物接受0.1x106CAR T细胞的压力测试剂量，并且所有动物接受相同总数的T细胞。
在这些实验中使用的CD19 CAR、CD19 CAR+IL7RαCPT、CD19 CAR+IL7RαMCP或CD19CAR+IL7RαPPCL中的每一个的蛋白质和DNA序列如下所示。
CD19 CAR DNA(SEQ ID NO：100)
GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcagcctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacaggcggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctggcctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcctggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactacaacagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCT
CD19 CAR蛋白(SEQ ID NO：101)
EQKLISEEDLDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSGSLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
CD19 CAR+IL7RA_CPT DNA(SEQ ID NO：102)
GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcagcctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacaggcggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctggcctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcctggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactacaacagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCCGGAAGAGAAGAGGCAAGCCCATCCCCAACCCACTGCTGGGCCTGGATAGCACCTCCGGAAGCGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTGCTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatcatcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAGCTGGACGACTACAGCTTCAGCTGCTACAGCCAGCTGGAGGTGAACGGCAGCCAGCACAGCCTGACCTGCGCCTTCGAGGACCCCGACGTGAACATCACCAACCTGGAGTTCGAGATCTGCGGCGCCCTGGTGGAGGTGAAGTGCCTGAACTTCAGGAAGCTGCAGGAGATCTACTTCATCGAGACCAAGAAGTTCCTGCTGATCGGCAAGAGCAACATCTGCGTGAAGGTGGGCGAGAAGAGCCTGACCTGCAAGAAGATCGACCTGACCACCATCGTGAAGCCCGAGGCCCCCTTCGACCTGAGCGTGGTGTACAGGGAGGGCGCCAACGACTTCGTGGTGACCTTCAACACCAGCCACCTGCAGAAGAAGTACGTGAAGGTGCTGATGCACGACGTGGCCTACAGGCAGGAGAAGGACGAGAACAAGTGGACCCACGTGAACCTGAGCAGCACCAAGCTGACCCTGCTGCAGAGGAAGCTGCAGCCCGCCGCCATGTACGAGATCAAGGTGAGGAGCATCCCCGACCACTACTTCAAGGGCTTCTGGAGCGAGTGGAGCCCCAGCTACTACTTCAGGACCCCCGAGATCAACAACAGCAGCGGCGAGATGGACCCCATCCTGCTGACCTGCCCCACCATCAGCATCCTGAGCTTCTTCAGCGTGGCCCTGCTGGTGATCCTGGCCTGCGTGCTGTGGAAGAAGAGGATCAAGCCCATCGTGTGGCCCAGCCTGCCCGACCACAAGAAGACCCTGGAGCACCTGTGTAAGAAGCCCAGGAAGAACCTGAACGTGAGCTTCAACCCCGAGAGCTTCCTGGACTGCCAGATCCACAGGGTGGACGACATCCAGGCCAGGGACGAGGTGGAGGGCTTCCTGCAGGACACCTTCCCCCAGCAGCTGGAGGAGAGCGAGAAGCAGAGGCTGGGCGGCGACGTGCAGAGCCCCAACTGCCCCAGCGAGGACGTGGTGATCACCCCCGAGAGCTTCGGCAGGGACAGCAGCCTGACCTGCCTGGCCGGCAACGTGAGCGCCTGCGACGCCCCCATCCTGAGCAGCAGCAGGAGCCTGGACTGCAGGGAGAGCGGCAAGAACGGCCCCCACGTGTACCAGGACCTGCTGCTGAGCCTGGGCACCACCAACAGCACCCTGCCACCCCCCTTCAGCCTGCAGAGCGGCATCCTGACCCTGAACCCCGTGGCCCAGGGCCAGCCCATCCTGACCAGCCTGGGCAGCAACCAGGAGGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG
CD19 CAR+IL7RA_CPT蛋白(SEQ ID NO：103)
EQKLISEEDLDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSGSLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRKRRGKPIPNPLLGLDSTSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPHHHHHHGESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNITNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVVYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMDPILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
CD19CAR+IL7RaMCP DNA(SEQ ID NO：104)
GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcagcctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacaggcggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctggcctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcctggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactacaacagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCCGGAAGAGAAGAGGCAAGCCCATCCCCAACCCACTGCTGGGCCTGGATAGCACCTCCGGAAGCGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTGCTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatcatcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAGCTGGACGACTACAGCTTCAGCTGCTACAGCCAGCTGGAGGTGAACGGCAGCCAGCACAGCCTGACCTGCGCCTTCGAGGACCCCGACGTGAACATCACCAACCTGGAGTTCGAGATCTGCGGCGCCCTGGTGGAGGTGAAGTGCCTGAACTTCAGGAAGCTGCAGGAGATCTACTTCATCGAGACCAAGAAGTTCCTGCTGATCGGCAAGAGCAACATCTGCGTGAAGGTGGGCGAGAAGAGCCTGACCTGCAAGAAGATCGACCTGACCACCATCGTGAAGCCCGAGGCCCCCTTCGACCTGAGCGTGGTGTACAGGGAGGGCGCCAACGACTTCGTGGTGACCTTCAACACCAGCCACCTGCAGAAGAAGTACGTGAAGGTGCTGATGCACGACGTGGCCTACAGGCAGGAGAAGGACGAGAACAAGTGGACCCACGTGAACCTGAGCAGCACCAAGCTGACCCTGCTGCAGAGGAAGCTGCAGCCCGCCGCCATGTACGAGATCAAGGTGAGGAGCATCCCCGACCACTACTTCAAGGGCTTCTGGAGCGAGTGGAGCCCCAGCTACTACTTCAGGACCCCCGAGATCAACAACAGCAGCGGCGAGATGGACCCCATCCTGCTGATGTGCCCCACCATCAGCATCCTGAGCTTCTTCAGCGTGGCCCTGCTGGTGATCCTGGCCTGCGTGCTGTGGAAGAAGAGGATCAAGCCCATCGTGTGGCCCAGCCTGCCCGACCACAAGAAGACCCTGGAGCACCTGTGTAAGAAGCCCAGGAAGAACCTGAACGTGAGCTTCAACCCCGAGAGCTTCCTGGACTGCCAGATCCACAGGGTGGACGACATCCAGGCCAGGGACGAGGTGGAGGGCTTCCTGCAGGACACCTTCCCCCAGCAGCTGGAGGAGAGCGAGAAGCAGAGGCTGGGCGGCGACGTGCAGAGCCCCAACTGCCCCAGCGAGGACGTGGTGATCACCCCCGAGAGCTTCGGCAGGGACAGCAGCCTGACCTGCCTGGCCGGCAACGTGAGCGCCTGCGACGCCCCCATCCTGAGCAGCAGCAGGAGCCTGGACTGCAGGGAGAGCGGCAAGAACGGCCCCCACGTGTACCAGGACCTGCTGCTGAGCCTGGGCACCACCAACAGCACCCTGCCACCCCCCTTCAGCCTGCAGAGCGGCATCCTGACCCTGAACCCCGTGGCCCAGGGCCAGCCCATCCTGACCAGCCTGGGCAGCAACCAGGAGGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG
CD19CAR+IL7RaMCP蛋白(SEQ ID NO：105)
EQKLISEEDLDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSGSLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRKRRGKPIPNPLLGLDSTSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPHHHHHHGESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNITNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVVYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMDPILLMCPTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
CD19CAR+IL7RaPPCL DNA(SEQ ID NO：106)
GAACAGAAGCTGATAAGTGAGGAGGACTTGgacatccagatgacccagaccaccagcagcctgagcgccagcctgggcgatagagtgaccatcagctgcagagccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaaacccgacggcaccgtgaagctgctgatctaccacaccagcagactgcacagcggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgctacctacttctgtcagcaaggcaacaccctgccctacaccttcggcggaggcaccaagctggaaatcacaggcggcggaggatctggcggaggcggaagtggcggagggggatctgaagtgaaactgcaggaaagcggccctggcctggtggccccatctcagtctctgagcgtgacctgtaccgtgtccggcgtgtccctgcctgactatggcgtgtcctggatcagacagccccccagaaagggcctggaatggctgggagtgatctggggcagcgagacaacctactacaacagcgccctgaagtcccggctgaccatcatcaaggacaactccaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcacaagcgtgaccgtgtctagcgggtccCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCCGGAAGAGAAGAGGCAAGCCCATCCCCAACCCACTGCTGGGCCTGGATAGCACCTCCGGAAGCGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTGCTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatcatcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAGCTGGACGACTACAGCTTCAGCTGCTACAGCCAGCTGGAGGTGAACGGCAGCCAGCACAGCCTGACCTGCGCCTTCGAGGACCCCGACGTGAACATCACCAACCTGGAGTTCGAGATCTGCGGCGCCCTGGTGGAGGTGAAGTGCCTGAACTTCAGGAAGCTGCAGGAGATCTACTTCATCGAGACCAAGAAGTTCCTGCTGATCGGCAAGAGCAACATCTGCGTGAAGGTGGGCGAGAAGAGCCTGACCTGCAAGAAGATCGACCTGACCACCATCGTGAAGCCCGAGGCCCCCTTCGACCTGAGCGTGGTGTACAGGGAGGGCGCCAACGACTTCGTGGTGACCTTCAACACCAGCCACCTGCAGAAGAAGTACGTGAAGGTGCTGATGCACGACGTGGCCTACAGGCAGGAGAAGGACGAGAACAAGTGGACCCACGTGAACCTGAGCAGCACCAAGCTGACCCTGCTGCAGAGGAAGCTGCAGCCCGCCGCCATGTACGAGATCAAGGTGAGGAGCATCCCCGACCACTACTTCAAGGGCTTCTGGAGCGAGTGGAGCCCCAGCTACTACTTCAGGACCCCCGAGATCAACAACAGCAGCGGCGAGATGGACCCCATCCTGCTGCCACCCTGTTTAACCATCAGCATCCTGAGCTTCTTCAGCGTGGCCCTGCTGGTGATCCTGGCCTGCGTGCTGTGGAAGAAGAGGATCAAGCCCATCGTGTGGCCCAGCCTGCCCGACCACAAGAAGACCCTGGAGCACCTGTGTAAGAAGCCCAGGAAGAACCTGAACGTGAGCTTCAACCCCGAGAGCTTCCTGGACTGCCAGATCCACAGGGTGGACGACATCCAGGCCAGGGACGAGGTGGAGGGCTTCCTGCAGGACACCTTCCCCCAGCAGCTGGAGGAGAGCGAGAAGCAGAGGCTGGGCGGCGACGTGCAGAGCCCCAACTGCCCCAGCGAGGACGTGGTGATCACCCCCGAGAGCTTCGGCAGGGACAGCAGCCTGACCTGCCTGGCCGGCAACGTGAGCGCCTGCGACGCCCCCATCCTGAGCAGCAGCAGGAGCCTGGACTGCAGGGAGAGCGGCAAGAACGGCCCCCACGTGTACCAGGACCTGCTGCTGAGCCTGGGCACCACCAACAGCACCCTGCCACCCCCCTTCAGCCTGCAGAGCGGCATCCTGACCCTGAACCCCGTGGCCCAGGGCCAGCCCATCCTGACCAGCCTGGGCAGCAACCAGGAGGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG
CD19CAR+IL7RaPPCL蛋白(SEQ ID NO：107)
EQKLISEEDLDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSGSLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRKRRGKPIPNPLLGLDSTSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPHHHHHHGESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNITNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVVYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMDPILLPPCLTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
如下所述计算肿瘤生长延迟和寿命增加百分比。
肿瘤生长延迟(TGD或T-C)–TGD是一个组终点。肿瘤生长延迟以天为单位表示，并根据一组小鼠达到指定的肿瘤负担所花费的中位时间(达到评估大小的时间，TES)计算出。它计算如下：
TGD＝中位经治疗的TES–中位对照TES
其中对照是UT T细胞。
寿命增加百分比(ILS)-ILS％是一个组终点。它计算如下：
这些实验的数据示于图16-18中。未转导的T细胞没有抗癌活性。在0.1x106个细胞的压力测试剂量下，仅CD19 CAR使动物的寿命增加68.8％，但不增加肿瘤生长延迟。与载剂治疗相比，用CD19 CAR+IL7RaCPT治疗最有效，寿命增加了175％，肿瘤生长延迟>29.2天。用CD19 CAR+IL7RaMCP和CD19 CAR+IL7RaPPT的治疗都有效，寿命增加>175％，各自肿瘤生长延迟分别>22.0和>17.9天。
表1
实施例9.用GPC3 CAR+IL7RaCPT的体外连续杀伤实验
将等量的GPC3 CAR阳性T细胞和GPC3 CAR+IL7Rα CPT阳性T细胞与美国典型培养公司(ATCC,Manassas,VA)的Hep3B靶标细胞共培养(0.5x106CAR T细胞与0.5x106Hep3B靶细胞共培养)。IL7Ra CPT蛋白与实施例8中所述相同。每周每三到四天两次添加靶细胞(以1:1CAR T细胞与靶Hep3B细胞之比)持续35天，并通过计数珠和流式细胞术测量CAR T细胞的数量。添加靶细胞直到第35天，并且每周一次测量第35天后的CAR T细胞的数量。CAR T细胞数示于下表2中。
GPC3 CAR和GPC3 CAR+IL7RαCPT的蛋白质和DNA序列如下所示。
GPC3 CAR DNA(SEQ ID NO：108)
GATATCGTGATGACCCAGAGCCCCGACTCTTTAGCTGTGTCTTTAGGAGAGAGGGCCACAATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTCCTCTACAGCAGCAACCAGAAGAACTATTTAGCTTGGTACCAGCAAAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCAGCAGAGAGAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGAAGCGGCTCCGGCACAGATTTCACCCTCACCATTAGCTCTTTACAAGCTGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAACTACCCTTTAACCTTCGGCCAAGGTACCAAGCTGGAGATCAAGGGCTCCACATCCGGATCCGGCAAGCCCGGTAGCGGAGAAGGCAGCACAAAGGGAGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGCGGACTGGTCCAGCCCGGTGGATCTTTAAGGCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTTACCTTTAACAAGAACGCTATGAACTGGGTGAGGCAAGCTCCCGGTAAGGGTTTAGAGTGGGTGGGTCGTATTCGTAATAAGACCAACAACTACGCCACCTACTATGCCGACTCCGTGAAGGCTCGTTTCACCATCTCTCGTGACGACAGCAAGAACAGCCTCTATTTACAGATGAACTCTTTAAAGACCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGTGGCTGGCAACTCCTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACTTTAGTGACCGTGAGCTCCgggtccACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAgcggcggggggcgcagTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC
GPC3 CAR蛋白(SEQ ID NO：109)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYNYPLTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNKNAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRNKTNNYATYYADSVKARFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVAGNSFAYWGQGTLVTVSSGSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
GPC3CAR+IL7RaCPT(SEQ ID NO：110)
GATATCGTGATGACCCAGAGCCCCGACTCTTTAGCTGTGTCTTTAGGAGAGAGGGCCACAATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTCCTCTACAGCAGCAACCAGAAGAACTATTTAGCTTGGTACCAGCAAAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCAGCAGAGAGAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGAAGCGGCTCCGGCACAGATTTCACCCTCACCATTAGCTCTTTACAAGCTGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAACTACCCTTTAACCTTCGGCCAAGGTACCAAGCTGGAGATCAAGGGCTCCACATCCGGATCCGGCAAGCCCGGTAGCGGAGAAGGCAGCACAAAGGGAGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGCGGACTGGTCCAGCCCGGTGGATCTTTAAGGCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTTACCTTTAACAAGAACGCTATGAACTGGGTGAGGCAAGCTCCCGGTAAGGGTTTAGAGTGGGTGGGTCGTATTCGTAATAAGACCAACAACTACGCCACCTACTATGCCGACTCCGTGAAGGCTCGTTTCACCATCTCTCGTGACGACAGCAAGAACAGCCTCTATTTACAGATGAACTCTTTAAAGACCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGTGGCTGGCAACTCCTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACTTTAGTGACCGTGAGCTCCgggtccACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAgcggcggggggcgcagTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGgCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCgggtcCGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGgCCCATGCTCCTGCTCGTGACTTCACTTCTTCTCTGTGAACTCCCACACCCCGCGTTTTTGCTTATCCCTcatcatcaccatcaccacGGCGAGAGCGGCTACGCCCAGAACGGCGACCTGGAGGACGCCGAGCTGGACGACTACAGCTTCAGCTGCTACAGCCAGCTGGAGGTGAACGGCAGCCAGCACAGCCTGACCTGCGCCTTCGAGGACCCCGACGTGAACATCACCAACCTGGAGTTCGAGATCTGCGGCGCCCTGGTGGAGGTGAAGTGCCTGAACTTCAGGAAGCTGCAGGAGATCTACTTCATCGAGACCAAGAAGTTCCTGCTGATCGGCAAGAGCAACATCTGCGTGAAGGTGGGCGAGAAGAGCCTGACCTGCAAGAAGATCGACCTGACCACCATCGTGAAGCCCGAGGCCCCCTTCGACCTGAGCGTGGTGTACAGGGAGGGCGCCAACGACTTCGTGGTGACCTTCAACACCAGCCACCTGCAGAAGAAGTACGTGAAGGTGCTGATGCACGACGTGGCCTACAGGCAGGAGAAGGACGAGAACAAGTGGACCCACGTGAACCTGAGCAGCACCAAGCTGACCCTGCTGCAGAGGAAGCTGCAGCCCGCCGCCATGTACGAGATCAAGGTGAGGAGCATCCCCGACCACTACTTCAAGGGCTTCTGGAGCGAGTGGAGCCCCAGCTACTACTTCAGGACCCCCGAGATCAACAACAGCAGCGGCGAGATGGACCCCATCCTGCTGACCTGCCCCACCATCAGCATCCTGAGCTTCTTCAGCGTGGCCCTGCTGGTGATCCTGGCCTGCGTGCTGTGGAAGAAGAGGATCAAGCCCATCGTGTGGCCCAGCCTGCCCGACCACAAGAAGACCCTGGAGCACCTGTGTAAGAAGCCCAGGAAGAACCTGAACGTGAGCTTCAACCCCGAGAGCTTCCTGGACTGCCAGATCCACAGGGTGGACGACATCCAGGCCAGGGACGAGGTGGAGGGCTTCCTGCAGGACACCTTCCCCCAGCAGCTGGAGGAGAGCGAGAAGCAGAGGCTGGGCGGCGACGTGCAGAGCCCCAACTGCCCCAGCGAGGACGTGGTGATCACCCCCGAGAGCTTCGGCAGGGACAGCAGCCTGACCTGCCTGGCCGGCAACGTGAGCGCCTGCGACGCCCCCATCCTGAGCAGCAGCAGGAGCCTGGACTGCAGGGAGAGCGGCAAGAACGGCCCCCACGTGTACCAGGACCTGCTGCTGAGCCTGGGCACCACCAACAGCACCCTGCCACCCCCCTTCAGCCTGCAGAGCGGCATCCTGACCCTGAACCCCGTGGCCCAGGGCCAGCCCATCCTGACCAGCCTGGGCAGCAACCAGGAGGAGGCCTACGTGACCATGAGCAGCTTCTACCAGAACCAG
GPC3CAR+IL7RaCPT蛋白(SEQ ID NO：111)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYNYPLTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNKNAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRNKTNNYATYYADSVKARFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVAGNSFAYWGQGTLVTVSSGSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPHHHHHHGESGYAQNGDLEDAELDDYSFSCYSQLEVNGSQHSLTCAFEDPDVNITNLEFEICGALVEVKCLNFRKLQEIYFIETKKFLLIGKSNICVKVGEKSLTCKKIDLTTIVKPEAPFDLSVVYREGANDFVVTFNTSHLQKKYVKVLMHDVAYRQEKDENKWTHVNLSSTKLTLLQRKLQPAAMYEIKVRSIPDHYFKGFWSEWSPSYYFRTPEINNSSGEMDPILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLWKKRIKPIVWPSLPDHKKTLEHLCKKPRKNLNVSFNPESFLDCQIHRVDDIQARDEVEGFLQDTFPQQLEESEKQRLGGDVQSPNCPSEDVVITPESFGRDSSLTCLAGNVSACDAPILSSSRSLDCRESGKNGPHVYQDLLLSLGTTNSTLPPPFSLQSGILTLNPVAQGQPILTSLGSNQEEAYVTMSSFYQNQ
该实验的数据示于图19中。GPC3 CAR T细胞在第10天的扩增达到峰值，比起始细胞密度高最大2.4倍。在第28天时，也表达IL7Rα CPT的GPC3CAR T细胞比基线扩增了40倍，并且在第31天后不再添加靶标时才停止扩增。
表2
其他实施方式
应理解，尽管已经结合本发明的详细描述描述了本发明，但是前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其他方面、优点和修改在所附权利要求书的范围内。
序列表
<110> 凯德药业股份有限公司
<120> 嵌合跨膜蛋白及其用途
<130> CDL-700.PF - 43159-0072WO1
<140>
<141>
<150> 62/688,810
<151> 2018-06-22
<160> 111
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 2
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
IL7RA EKA序列"
<400> 2
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys
1 5 10 15
Ala Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 3
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA EKA序列"
<400> 3
cccatcctgc tgaccatcag catcctgagc ttcttcagcg tggagaaggt ggtgatcctg 60
gcctgcgtgc tgtgg 75
<210> 4
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA EKV序列"
<400> 4
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys
1 5 10 15
Val Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 5
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA EKV序列"
<400> 5
cccatcctgc tgaccatcag catcctgagc ttcttcagcg tggagaaggt ggtgatcctg 60
gcctgcgtgc tgtgg 75
<210> 6
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA CPT插入序列"
<400> 6
Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser
1 5 10 15
Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 7
<211> 84
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA CPT插入序列"
<400> 7
cccatcctgc tgacctgccc caccatcagc atcctgagct tcttcagcgt ggccctgctg 60
gtgatcctgg cctgcgtgct gtgg 84
<210> 8
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA PPCL插入序列"
<400> 8
Pro Ile Leu Leu Pro Pro Cys Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe
1 5 10 15
Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 9
<211> 87
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA PPCL插入序列"
<400> 9
cccatcctgc tgccaccctg tttaaccatc agcatcctga gcttcttcag cgtggccctg 60
ctggtgatcc tggcctgcgt gctgtgg 87
<210> 10
<211> 22
<212> PRT
<213> 智人
<400> 10
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 11
<211> 220
<212> PRT
<213> 智人
<400> 11
Gly Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu
1 5 10 15
Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser
20 25 30
Gln His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Ile Thr
35 40 45
Asn Leu Glu Phe Glu Ile Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu
50 55 60
Asn Phe Arg Lys Leu Gln Glu Ile Tyr Phe Ile Glu Thr Lys Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Gly Lys Ser Asn Ile Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser
85 90 95
Leu Thr Cys Lys Lys Ile Asp Leu Thr Thr Ile Val Lys Pro Glu Ala
100 105 110
Pro Phe Asp Leu Ser Val Val Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val
115 120 125
Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu
130 135 140
Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr
145 150 155 160
His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu
165 170 175
Gln Pro Ala Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro Asp His
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg
195 200 205
Thr Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp
210 215 220
<210> 12
<211> 660
<212> DNA
<213> 智人
<400> 12
ggcgagagcg gctacgccca gaacggcgac ctggaggacg ccgagctgga cgactacagc 60
ttcagctgct acagccagct ggaggtgaac ggcagccagc acagcctgac ctgcgccttc 120
gaggaccccg acgtgaacat caccaacctg gagttcgaga tctgcggcgc cctggtggag 180
gtgaagtgcc tgaacttcag gaagctgcag gagatctact tcatcgagac caagaagttc 240
ctgctgatcg gcaagagcaa catctgcgtg aaggtgggcg agaagagcct gacctgcaag 300
aagatcgacc tgaccaccat cgtgaagccc gaggccccct tcgacctgag cgtggtgtac 360
agggagggcg ccaacgactt cgtggtgacc ttcaacacca gccacctgca gaagaagtac 420
gtgaaggtgc tgatgcacga cgtggcctac aggcaggaga aggacgagaa caagtggacc 480
cacgtgaacc tgagcagcac caagctgacc ctgctgcaga ggaagctgca gcccgccgcc 540
atgtacgaga tcaaggtgag gagcatcccc gaccactact tcaagggctt ctggagcgag 600
tggagcccca gctactactt caggaccccc gagatcaaca acagcagcgg cgagatggac 660
<210> 13
<211> 219
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 13
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
1 5 10 15
Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
20 25 30
His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
35 40 45
Leu Glu Phe Gln Ile Cys Gly Ala Leu Leu Arg Val Lys Cys Leu Thr
50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
His Asp Val Ala Tyr Arg Pro Ala Arg Gly Glu Ser Asn Trp Thr His
145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp
210 215
<210> 14
<211> 657
<212> DNA
<213> 小白鼠
<400> 14
gaaagtggaa atgcccagga tggagaccta gaagatgcag acgcggacga tcactccttc 60
tggtgccaca gccagttgga agtggatgga agtcaacatt tattgacttg tgcttttaat 120
gactcagaca tcaacacagc taatctggaa tttcaaatat gtggggctct tttacgagtg 180
aaatgcctaa ctcttaacaa gctgcaagat atatatttta taaagacatc agaattctta 240
ctgattggta gcagcaatat atgtgtgaag cttggacaaa agaatttaac ttgcaaaaat 300
atggctataa acacaatagt taaagccgag gctccctctg acctgaaagt cgtttatcgc 360
aaagaagcaa atgatttttt ggtgacattt aatgcacctc acttgaaaaa gaaatattta 420
aaaaaagtaa agcatgatgt ggcctaccgc ccagcaaggg gtgaaagcaa ctggacgcat 480
gtatctttat tccacacaag aacaacaatc ccacagagaa aactacgacc aaaagcaatg 540
tatgaaatca aagtccgatc cattccccat aacgattact tcaaaggctt ctggagcgag 600
tggagtccaa gttctacctt cgaaactcca gaacccaaga atcaaggagg atgggat 657
<210> 15
<211> 219
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 15
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
1 5 10 15
Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
20 25 30
His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
35 40 45
Leu Glu Phe Gln Ile Cys Gly Ala Leu Leu Arg Val Lys Cys Leu Thr
50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
His Asp Val Ala Tyr Arg Pro Ala Arg Gly Glu Ser Asn Trp Thr His
145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp
210 215
<210> 16
<211> 657
<212> DNA
<213> 小白鼠
<400> 16
gaaagtggaa atgcccagga tggagaccta gaagatgcag acgcggacga tcactccttc 60
tggtgccaca gccagttgga agtggatgga agtcaacatt tattgacttg tgcttttaat 120
gactcagaca tcaacacagc taatctggaa tttcaaatat gtggggctct tttacgagtg 180
aaatgcctaa ctcttaacaa gctgcaagat atatatttta taaagacatc agaattctta 240
ctgattggta gcagcaatat atgtgtgaag cttggacaaa agaatttaac ttgcaaaaat 300
atggctataa acacaatagt taaagccgag gctccctctg acctgaaagt cgtttatcgc 360
aaagaagcaa atgatttttt ggtgacattt aatgcacctc acttgaaaaa gaaatattta 420
aaaaaagtaa agcatgatgt ggcctaccgc ccagcaaggg gtgaaagcaa ctggacgcat 480
gtatctttat tccacacaag aacaacaatc ccacagagaa aactacgacc aaaagcaatg 540
tatgaaatca aagtccgatc cattccccat aacgattact tcaaaggctt ctggagcgag 600
tggagtccaa gttctacctt cgaaactcca gaacccaaga atcaaggagg atgggat 657
<210> 17
<211> 535
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜蛋白序列"
<400> 17
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
305 310 315 320
Ile Ser Leu Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala
325 330 335
Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
340 345 350
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
355 360 365
Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
370 375 380
His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu
385 390 395 400
Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
405 410 415
Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
420 425 430
Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
435 440 445
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
450 455 460
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
465 470 475 480
Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
485 490 495
Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
500 505 510
Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
515 520 525
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 18
<211> 1605
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜序列"
<400> 18
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgacc 960
atcagcatcc tgagcttctt cagcgtggcc ctgctggtga tcctggcctg cgtgctgtgg 1020
aagaagagga tcaagcccat cgtgtggccc agcctgcccg accacaagaa gaccctggag 1080
cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg 1140
gactgccaga tccacagggt ggacgacatc caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg 1200
caggacacct tcccccagca gctggaggag agcgagaagc agaggctggg cggcgacgtg 1260
cagagcccca actgccccag cgaggacgtg gtgatcaccc ccgagagctt cggcagggac 1320
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agcaggagcc tggactgcag ggagagcggc aagaacggcc cccacgtgta ccaggacctg 1440
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atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac 1560
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<210> 19
<211> 539
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜蛋白序列"
<400> 19
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
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Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Pro
305 310 315 320
Pro Cys Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu
325 330 335
Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val
340 345 350
Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys
355 360 365
Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu
370 375 380
Asp Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val
385 390 395 400
Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu
405 410 415
Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu
420 425 430
Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr
435 440 445
Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser
450 455 460
Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val
465 470 475 480
Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro
485 490 495
Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala
500 505 510
Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala
515 520 525
Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 20
<211> 1617
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜序列"
<400> 20
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
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acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
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cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
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<211> 18
<212> PRT
<213> 智人
<400> 21
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser
<210> 22
<211> 114
<212> PRT
<213> 智人
<400> 22
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 23
aactgggtga atgtaataag tgatttgaaa aaaattgaag atcttattca atctatgcat 60
attgatgcta ctttatatac ggaaagtgat gttcacccca gttgcaaagt aacagcaatg 120
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 24
Met Val Leu Gly Thr Ile Asp Leu Cys Ser Cys Phe Ser Ala Gly Leu
1 5 10 15
Pro Lys Thr Glu Ala Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys
20 25 30
Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr
35 40 45
Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe
50 55 60
Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile
65 70 75 80
His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser
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Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu
100 105 110
Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val
115 120 125
Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 25
atggtattgg gaaccataga tttgtgcagc tgtttcagtg cagggcttcc taaaacagaa 60
gccaactggg tgaatgtaat aagtgatttg aaaaaaattg aagatcttat tcaatctatg 120
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<210> 26
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<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 26
Asn Trp Ile Asp Val Arg Tyr Asp Leu Glu Lys Ile Glu Ser Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Ile His Ile Asp Thr Thr Leu Tyr Thr Asp Ser Asp Phe His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Asn Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Leu His Glu Tyr Ser Asn Met Thr Leu Asn Glu Thr Val Arg
50 55 60
Asn Val Leu Tyr Leu Ala Asn Ser Thr Leu Ser Ser Asn Lys Asn Val
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Ala Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Thr Phe
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Thr Ser
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<211> 342
<212> DNA
<213> 小白鼠
<400> 27
aactggatag atgtaagata tgacctggag aaaattgaaa gccttattca atctattcat 60
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<213> 小白鼠
<400> 28
Asn Trp Ile Asp Val Arg Tyr Asp Leu Glu Lys Ile Glu Ser Leu Ile
1 5 10 15
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Asn Val Leu Tyr Leu Ala Asn Ser Thr Leu Ser Ser Asn Lys Asn Val
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<212> DNA
<213> 小白鼠
<400> 29
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<212> PRT
<213> 智人
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Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu Gln
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Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr
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Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro Ile Leu Leu Thr
210 215 220
Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala
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Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
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Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
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Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
275 280 285
His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu
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Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
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Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
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340 345 350
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
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Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
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Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
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Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
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Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
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<210> 31
<211> 1317
<212> DNA
<213> 智人
<400> 31
gaaagtggct atgctcaaaa tggagacttg gaagatgcag aactggatga ctactcattc 60
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taccaggacc tcctgcttag ccttgggact acaaacagca cgctgccccc tccattttct 1200
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<210> 32
<211> 439
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 32
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
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Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
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50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp Pro Val Leu Pro Ser
210 215 220
Val Thr Ile Leu Ser Leu Phe Ser Val Phe Leu Leu Val Ile Leu Ala
225 230 235 240
His Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Val Val Trp Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu Gln Leu Cys Lys Lys Pro Lys Thr
260 265 270
Ser Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
275 280 285
His Glu Val Lys Gly Val Glu Ala Arg Asp Glu Val Glu Ser Phe Leu
290 295 300
Pro Asn Asp Leu Pro Ala Gln Pro Glu Glu Leu Glu Thr Gln Gly His
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355 360 365
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<213> 小白鼠
<400> 33
gaaagtggaa atgcccagga tggagaccta gaagatgcag acgcggacga tcactccttc 60
tggtgccaca gccagttgga agtggatgga agtcaacatt tattgacttg tgcttttaat 120
gactcagaca tcaacacagc taatctggaa tttcaaatat gtggggctct tttacgagtg 180
aaatgcctaa ctcttaacaa gctgcaagat atatatttta taaagacatc agaattctta 240
ctgattggta gcagcaatat atgtgtgaag cttggacaaa agaatttaac ttgcaaaaat 300
atggctataa acacaatagt taaagccgag gctccctctg acctgaaagt cgtttatcgc 360
aaagaagcaa atgatttttt ggtgacattt aatgcacctc acttgaaaaa gaaatattta 420
aaaaaagtaa agcatgatgt ggcctaccgc ccagcaaggg gtgaaagcaa ctggacgcat 480
gtatctttat tccacacaag aacaacaatc ccacagagaa aactacgacc aaaagcaatg 540
tatgaaatca aagtccgatc cattccccat aacgattact tcaaaggctt ctggagcgag 600
tggagtccaa gttctacctt cgaaactcca gaacccaaga atcaaggagg atgggatcct 660
gtcttgccaa gtgtcaccat tctgagtttg ttctctgtgt ttttgttggt catcttagcc 720
catgtgctat ggaaaaaaag gattaaacct gtcgtatggc ctagtctccc cgatcataag 780
aaaactctgg aacaactatg taagaagcca aaaacgagtc tgaatgtgag tttcaatccc 840
gaaagtttcc tggactgcca gattcatgag gtgaaaggcg ttgaagccag ggacgaggtg 900
gaaagttttc tgcccaatga tcttcctgca cagccagagg agttggagac acagggacac 960
agagccgctg tacacagtgc aaaccgctcg cctgagactt cagtcagccc accagaaaca 1020
gttagaagag agtcaccctt aagatgcctg gctagaaatc tgagtacctg caatgcccct 1080
ccactccttt cctctaggtc ccctgactac agagatggtg acagaaatag gcctcctgtg 1140
tatcaagact tgctgccaaa ctctggaaac acaaatgtcc ctgtccctgt ccctcaacca 1200
ttgcctttcc agtcgggaat cctgatacca gtttctcaga gacagcccat ctccacttcc 1260
tcagtactga atcaagaaga agcgtatgtc accatgtcta gtttttacca aaacaaa 1317
<210> 34
<211> 266
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 34
Glu Ser Gly Asn Ala Gln Asp Gly Asp Leu Glu Asp Ala Asp Ala Asp
1 5 10 15
Asp His Ser Phe Trp Cys His Ser Gln Leu Glu Val Asp Gly Ser Gln
20 25 30
His Leu Leu Thr Cys Ala Phe Asn Asp Ser Asp Ile Asn Thr Ala Asn
35 40 45
Leu Glu Phe Gln Ile Cys Gly Ala Leu Leu Arg Val Lys Cys Leu Thr
50 55 60
Leu Asn Lys Leu Gln Asp Ile Tyr Phe Ile Lys Thr Ser Glu Phe Leu
65 70 75 80
Leu Ile Gly Ser Ser Asn Ile Cys Val Lys Leu Gly Gln Lys Asn Leu
85 90 95
Thr Cys Lys Asn Met Ala Ile Asn Thr Ile Val Lys Ala Glu Ala Pro
100 105 110
Ser Asp Leu Lys Val Val Tyr Arg Lys Glu Ala Asn Asp Phe Leu Val
115 120 125
Thr Phe Asn Ala Pro His Leu Lys Lys Lys Tyr Leu Lys Lys Val Lys
130 135 140
His Asp Val Ala Tyr Arg Pro Ala Arg Gly Glu Ser Asn Trp Thr His
145 150 155 160
Val Ser Leu Phe His Thr Arg Thr Thr Ile Pro Gln Arg Lys Leu Arg
165 170 175
Pro Lys Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro His Asn Asp
180 185 190
Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ser Thr Phe Glu
195 200 205
Thr Pro Glu Pro Lys Asn Gln Gly Gly Trp Asp Pro Val Leu Pro Ser
210 215 220
Val Thr Ile Leu Ser Leu Phe Ser Val Phe Leu Leu Val Ile Leu Ala
225 230 235 240
His Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Val Val Trp Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu Gln Leu
260 265
<210> 35
<211> 861
<212> DNA
<213> 小白鼠
<400> 35
atgatggctc tgggtagagc tttcgctata gttttctgct taattcaagc tgtttctgga 60
gaaagtggaa atgcccagga tggagaccta gaagatgcag acgcggacga tcactccttc 120
tggtgccaca gccagttgga agtggatgga agtcaacatt tattgacttg tgcttttaat 180
gactcagaca tcaacacagc taatctggaa tttcaaatat gtggggctct tttacgagtg 240
aaatgcctaa ctcttaacaa gctgcaagat atatatttta taaagacatc agaattctta 300
ctgattggta gcagcaatat atgtgtgaag cttggacaaa agaatttaac ttgcaaaaat 360
atggctataa acacaatagt taaagccgag gctccctctg acctgaaagt cgtttatcgc 420
aaagaagcaa atgatttttt ggtgacattt aatgcacctc acttgaaaaa gaaatattta 480
aaaaaagtaa agcatgatgt ggcctaccgc ccagcaaggg gtgaaagcaa ctggacgcat 540
gtatctttat tccacacaag aacaacaatc ccacagagaa aactacgacc aaaagcaatg 600
tatgaaatca aagtccgatc cattccccat aacgattact tcaaaggctt ctggagcgag 660
tggagtccaa gttctacctt cgaaactcca gaacccaaga atcaaggagg atgggatcct 720
gtcttgccaa gtgtcaccat tctgagtttg ttctctgtgt ttttgttggt catcttagcc 780
catgtgctat ggaaaaaaag gattaaacct gtcgtatggc ctagtctccc cgatcataag 840
aaaactctgg aacaactata g 861
<210> 36
<211> 62
<212> PRT
<213> 智人
<400> 36
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
35 40 45
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
<210> 37
<211> 62
<212> PRT
<213> 智人
<400> 37
Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala
35 40 45
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
<210> 38
<211> 62
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 38
Cys Pro Pro Pro Val Ser Ile Glu His Ala Asp Ile Arg Val Lys Asn
1 5 10 15
Tyr Ser Val Asn Ser Arg Glu Arg Tyr Val Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Thr Leu Ile Glu Cys Val Ile Asn Lys Asn
35 40 45
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
<210> 39
<211> 62
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 39
Cys Pro Pro Pro Val Ser Ile Glu His Ala Asp Ile Arg Val Lys Asn
1 5 10 15
Tyr Ser Val Asn Ser Arg Glu Arg Tyr Val Cys Asn Ser Gly Phe Lys
20 25 30
Arg Lys Ala Gly Thr Ser Thr Leu Ile Glu Cys Val Ile Asn Lys Asn
35 40 45
Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
<210> 40
<211> 59
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 40
Cys Pro Arg Leu Ser Thr Thr Glu Phe Ala Asp Val Ala Ala Glu Thr
1 5 10 15
Tyr Pro Leu Lys Thr Lys Leu Arg Tyr Glu Cys Asp Ser Gly Tyr Arg
20 25 30
Arg Arg Ser Gly Asn Thr Leu Thr Ile Arg Cys Gln Asn Val Ser Gly
35 40 45
Thr Ala Ser Trp Val His Asp Glu Leu Val Cys
50 55
<210> 41
<211> 175
<212> PRT
<213> 智人
<400> 41
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val
65 70 75 80
Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly
85 90 95
Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr
100 105 110
Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro
115 120 125
Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser
145 150 155 160
His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr
165 170 175
<210> 42
<211> 25
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 42
Pro Val Leu Pro Ser Val Thr Ile Leu Ser Leu Phe Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Leu Val Ile Leu Ala His Val Leu Trp
20 25
<210> 43
<400> 43
000
<210> 44
<211> 25
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 44
Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Leu Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 45
<211> 195
<212> PRT
<213> 智人
<400> 45
Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys
1 5 10 15
Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val
20 25 30
Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Arg Val Asp
35 40 45
Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe
50 55 60
Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val
65 70 75 80
Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser
85 90 95
Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala
100 105 110
Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu
115 120 125
Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu
130 135 140
Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser
165 170 175
Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr
180 185 190
Gln Asn Gln
195
<210> 46
<211> 195
<212> PRT
<213> 小白鼠
<400> 46
Lys Lys Arg Ile Lys Pro Val Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys
1 5 10 15
Lys Thr Leu Glu Gln Leu Cys Lys Lys Pro Lys Thr Ser Leu Asn Val
20 25 30
Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Glu Val Lys
35 40 45
Gly Val Glu Ala Arg Asp Glu Val Glu Ser Phe Leu Pro Asn Asp Leu
50 55 60
Pro Ala Gln Pro Glu Glu Leu Glu Thr Gln Gly His Arg Ala Ala Val
65 70 75 80
His Ser Ala Asn Arg Ser Pro Glu Thr Ser Val Ser Pro Pro Glu Thr
85 90 95
Val Arg Arg Glu Ser Pro Leu Arg Cys Leu Ala Arg Asn Leu Ser Thr
100 105 110
Cys Asn Ala Pro Pro Leu Leu Ser Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Arg Asp
115 120 125
Gly Asp Arg Asn Arg Pro Pro Val Tyr Gln Asp Leu Leu Pro Asn Ser
130 135 140
Gly Asn Thr Asn Val Pro Val Pro Val Pro Gln Pro Leu Pro Phe Gln
145 150 155 160
Ser Gly Ile Leu Ile Pro Val Ser Gln Arg Gln Pro Ile Ser Thr Ser
165 170 175
Ser Val Leu Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr
180 185 190
Gln Asn Lys
195
<210> 47
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 47
Ser Gly Gly Ser
1
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 48
Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 49
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 49
Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 50
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 50
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
<210> 51
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 51
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 53
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
20
<210> 54
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 54
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 55
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 55
ggcagcacca gcggcagcgg caaaccgggc agcggcgaag gcagcaccaa aggc 54
<210> 56
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 56
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 57
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 57
ggcggtggtg gttctggagg cggtggcagc ggtggaggtg gctcaggagg aggaggtagc 60
ggcggcggag ggagt 75
<210> 58
<211> 233
<212> PRT
<213> 智人
<400> 58
Ala Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Trp Val
35 40 45
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Lys Asp
225 230
<210> 59
<211> 46
<212> PRT
<213> 智人
<400> 59
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
35 40 45
<210> 60
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 60
Ala Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
Lys Asp Pro Lys
20
<210> 61
<211> 220
<212> PRT
<213> 智人
<400> 61
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 62
<211> 164
<212> PRT
<213> 智人
<400> 62
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
100 105 110
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
145 150 155 160
Leu Pro Pro Arg
<210> 63
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人
<400> 63
Leu Gly Leu Leu Val Ala Gly Val Leu Val Leu Leu Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Val Ala Ile His Leu Cys Cys
20
<210> 64
<211> 26
<212> PRT
<213> 智人
<400> 64
Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro
1 5 10 15
Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
20 25
<210> 65
<211> 25
<212> PRT
<213> 智人
<400> 65
Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly
1 5 10 15
Leu Gly Ile Phe Phe Cys Val Arg Cys
20 25
<210> 66
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人
<400> 66
Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu
1 5 10 15
Thr Ala Leu Phe Leu Arg Val
20
<210> 67
<211> 26
<212> PRT
<213> 智人
<400> 67
Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
1 5 10 15
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 68
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人
<400> 68
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 69
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人
<400> 69
Ala Leu Pro Ala Ala Leu Ala Val Ile Ser Phe Leu Leu Gly Leu Gly
1 5 10 15
Leu Gly Val Ala Cys Val Leu Ala
20
<210> 70
<211> 220
<212> PRT
<213> 智人
<400> 70
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 71
<211> 255
<212> PRT
<213> 智人
<400> 71
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 72
<211> 164
<212> PRT
<213> 智人
<400> 72
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
100 105 110
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
145 150 155 160
Leu Pro Pro Arg
<210> 73
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人
<400> 73
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
1 5 10 15
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
20 25 30
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
35 40 45
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
50 55 60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
100 105 110
Arg
<210> 74
<211> 339
<212> DNA
<213> 智人
<400> 74
ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag 60
ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt 120
ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 180
aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 240
cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 300
acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgc 339
<210> 75
<211> 233
<212> PRT
<213> 智人
<400> 75
Ala Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Trp Val
35 40 45
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
85 90 95
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
115 120 125
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
130 135 140
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
165 170 175
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
180 185 190
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
195 200 205
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Lys Asp
225 230
<210> 76
<211> 46
<212> PRT
<213> 智人
<400> 76
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
35 40 45
<210> 77
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 77
Ala Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
Lys Asp Pro Lys
20
<210> 78
<211> 17
<212> DNA
<213> 智人
<400> 78
aaataaaata cgaaatg 17
<210> 79
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA MCP插入序列"
<400> 79
Pro Ile Leu Leu Thr Met Cys Pro Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser
1 5 10 15
Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
20 25
<210> 80
<211> 84
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
IL7RA MCP插入序列"
<400> 80
cccatcctgc tgaccatgtg ccccatcagc atcctgagct tcttcagcgt ggccctgctg 60
gtgatcctgg cctgcgtgct gtgg 84
<210> 81
<211> 66
<212> DNA
<213> 智人
<400> 81
atgctcctgc tcgtgacttc acttcttctc tgtgaactcc cacaccccgc gtttttgctt 60
atccct 66
<210> 82
<211> 586
<212> DNA
<213> 智人
<400> 82
aagaagagga tcaagcccat cgtgtggccc agcctgcccg accacaagaa gaccctggag 60
cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg 120
gactgccaga tccacagggt ggacgacatc caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg 180
caggacacct tcccccagca gctggaggag agcgagaagc agaggctggg cggcgacgtg 240
cagagcccca actgccccag cgaggacgtg gtgatcaccc ccgagagctt cggcagggac 300
agcagcctga cctgcctggc cggcaacgtg agcgcctgcg acgcccccat cctgagcagc 360
agcaggagcc tggactgcag ggagagcggc aagaacggcc cccacgtgta ccaggacctg 420
ctgctgagcc tgggcaccac caacagcacc ctgccacccc ccttcagcct gcagagcggc 480
atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac 540
caggaggagg cctacgtgac catgagcagc ttctaccaga accags 586
<210> 83
<211> 538
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜蛋白序列"
<400> 83
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
305 310 315 320
Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val
325 330 335
Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp
340 345 350
Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys
355 360 365
Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp
370 375 380
Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu
385 390 395 400
Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys
405 410 415
Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp
420 425 430
Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys
435 440 445
Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser
450 455 460
Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr
465 470 475 480
Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro
485 490 495
Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln
500 505 510
Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr
515 520 525
Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 84
<211> 1614
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜序列"
<400> 84
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgacc 960
tgccccacca tcagcatcct gagcttcttc agcgtggccc tgctggtgat cctggcctgc 1020
gtgctgtgga agaagaggat caagcccatc gtgtggccca gcctgcccga ccacaagaag 1080
accctggagc acctgtgtaa gaagcccagg aagaacctga acgtgagctt caaccccgag 1140
agcttcctgg actgccagat ccacagggtg gacgacatcc aggccaggga cgaggtggag 1200
ggcttcctgc aggacacctt cccccagcag ctggaggaga gcgagaagca gaggctgggc 1260
ggcgacgtgc agagccccaa ctgccccagc gaggacgtgg tgatcacccc cgagagcttc 1320
ggcagggaca gcagcctgac ctgcctggcc ggcaacgtga gcgcctgcga cgcccccatc 1380
ctgagcagca gcaggagcct ggactgcagg gagagcggca agaacggccc ccacgtgtac 1440
caggacctgc tgctgagcct gggcaccacc aacagcaccc tgccaccccc cttcagcctg 1500
cagagcggca tcctgaccct gaaccccgtg gcccagggcc agcccatcct gaccagcctg 1560
ggcagcaacc aggaggaggc ctacgtgacc atgagcagct tctaccagaa ccag 1614
<210> 85
<211> 538
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜蛋白序列"
<400> 85
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Met
305 310 315 320
Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val
325 330 335
Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp
340 345 350
Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys
355 360 365
Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp
370 375 380
Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu
385 390 395 400
Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys
405 410 415
Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp
420 425 430
Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys
435 440 445
Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser
450 455 460
Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr
465 470 475 480
Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro
485 490 495
Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln
500 505 510
Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr
515 520 525
Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 86
<211> 1614
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜序列"
<400> 86
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
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cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
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caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgatg 960
tgccccacca tcagcatcct gagcttcttc agcgtggccc tgctggtgat cctggcctgc 1020
gtgctgtgga agaagaggat caagcccatc gtgtggccca gcctgcccga ccacaagaag 1080
accctggagc acctgtgtaa gaagcccagg aagaacctga acgtgagctt caaccccgag 1140
agcttcctgg actgccagat ccacagggtg gacgacatcc aggccaggga cgaggtggag 1200
ggcttcctgc aggacacctt cccccagcag ctggaggaga gcgagaagca gaggctgggc 1260
ggcgacgtgc agagccccaa ctgccccagc gaggacgtgg tgatcacccc cgagagcttc 1320
ggcagggaca gcagcctgac ctgcctggcc ggcaacgtga gcgcctgcga cgcccccatc 1380
ctgagcagca gcaggagcct ggactgcagg gagagcggca agaacggccc ccacgtgtac 1440
caggacctgc tgctgagcct gggcaccacc aacagcaccc tgccaccccc cttcagcctg 1500
cagagcggca tcctgaccct gaaccccgtg gcccagggcc agcccatcct gaccagcctg 1560
ggcagcaacc aggaggaggc ctacgtgacc atgagcagct tctaccagaa ccag 1614
<210> 87
<211> 535
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜蛋白序列"
<400> 87
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
305 310 315 320
Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys Ala Val Ile Leu Ala
325 330 335
Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
340 345 350
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
355 360 365
Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
370 375 380
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385 390 395 400
Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
405 410 415
Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
420 425 430
Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
435 440 445
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
450 455 460
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
465 470 475 480
Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
485 490 495
Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
500 505 510
Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
515 520 525
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 88
<211> 1605
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜序列"
<400> 88
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgacc 960
atcagcatcc tgagcttctt cagcgtggag aaggccgtga tcctggcctg cgtgctgtgg 1020
aagaagagga tcaagcccat cgtgtggccc agcctgcccg accacaagaa gaccctggag 1080
cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg 1140
gactgccaga tccacagggt ggacgacatc caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg 1200
caggacacct tcccccagca gctggaggag agcgagaagc agaggctggg cggcgacgtg 1260
cagagcccca actgccccag cgaggacgtg gtgatcaccc ccgagagctt cggcagggac 1320
agcagcctga cctgcctggc cggcaacgtg agcgcctgcg acgcccccat cctgagcagc 1380
agcaggagcc tggactgcag ggagagcggc aagaacggcc cccacgtgta ccaggacctg 1440
ctgctgagcc tgggcaccac caacagcacc ctgccacccc ccttcagcct gcagagcggc 1500
atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac 1560
caggaggagg cctacgtgac catgagcagc ttctaccaga accag 1605
<210> 89
<211> 535
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜蛋白序列"
<400> 89
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln Ile Thr Cys Pro
130 135 140
Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn
180 185 190
Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly
210 215 220
Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala
225 230 235 240
Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile
245 250 255
Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr
260 265 270
Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr
275 280 285
Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro
290 295 300
Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Pro Ile Leu Leu Thr
305 310 315 320
Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Glu Lys Val Val Ile Leu Ala
325 330 335
Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu
340 345 350
Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys
355 360 365
Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile
370 375 380
His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu
385 390 395 400
Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu
405 410 415
Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile
420 425 430
Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly
435 440 445
Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu
450 455 460
Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu
465 470 475 480
Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser
485 490 495
Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro
500 505 510
Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met
515 520 525
Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln
530 535
<210> 90
<211> 1605
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
示例性嵌合跨膜序列"
<400> 90
aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60
attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta gctgtaaagt gaccgccatg 120
aagtgttttc tgctggagct gcaggtgatt tctctggaaa gcggagatgc ctctatccac 180
gacacagtgg agaatctgat catcctggcc aacaatagcc tgagcagcaa tggcaatgtg 240
acagagtctg gctgtaagga gtgtgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300
cagagctttg tgcacatcgt gcagatgttc atcaatacaa gcagcggtgg gggctcaggc 360
ggaggaggct ctggcggagg cggaagcggg ggagggggct caggcggcgg gtccttgcag 420
attacatgcc ctcctccaat gtctgtggag cacgccgata tttgggtgaa gtcctacagc 480
ctgtacagca gagagagata catctgcaac agcggcttta agagaaaggc cggcacctct 540
tctctgacag agtgcgtgct gaataaggcc acaaatgtgg cccactggac aacacctagc 600
ctgaagtgca ttagagatcc tgccctggtc caccagaggc ctgcccctcc atctacagtg 660
acaacagccg gagtgacacc tcagcctgaa tctctgagcc cttctggaaa agaacctgcc 720
gccagctctc ctagctctaa taataccgcc gccacaacag ccgccattgt gcctggatct 780
cagctgatgc ctagcaagtc tcctagcaca ggcacaacag agatcagcag ccacgaatct 840
tctcacggaa caccttctca gaccaccgcc aagaattggg agctgacagc ctctgcctct 900
caccagcctc caggagtgta tcctcagggc cactctgata caacacccat cctgctgacc 960
atcagcatcc tgagcttctt cagcgtggag aaggtggtga tcctggcctg cgtgctgtgg 1020
aagaagagga tcaagcccat cgtgtggccc agcctgcccg accacaagaa gaccctggag 1080
cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg 1140
gactgccaga tccacagggt ggacgacatc caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg 1200
caggacacct tcccccagca gctggaggag agcgagaagc agaggctggg cggcgacgtg 1260
cagagcccca actgccccag cgaggacgtg gtgatcaccc ccgagagctt cggcagggac 1320
agcagcctga cctgcctggc cggcaacgtg agcgcctgcg acgcccccat cctgagcagc 1380
agcaggagcc tggactgcag ggagagcggc aagaacggcc cccacgtgta ccaggacctg 1440
ctgctgagcc tgggcaccac caacagcacc ctgccacccc ccttcagcct gcagagcggc 1500
atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac 1560
caggaggagg cctacgtgac catgagcagc ttctaccaga accag 1605
<210> 91
<211> 54
<212> DNA
<213> 智人
<400> 91
atggattgga cctggattct gtttctggtg gccgctgcca caagagtgca cagc 54
<210> 92
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
接头序列"
<400> 92
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gln
20 25
<210> 93
<211> 22
<212> PRT
<213> 智人
<400> 93
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 94
<211> 66
<212> DNA
<213> 智人
<400> 94
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
attcct 66
<210> 95
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
抗-CD19 scFv序列"
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
195 200 205
Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
210 215 220
Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210> 96
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
抗-CD19 scFv序列"
<400> 96
gacatccaga tgacccagac caccagcagc ctgagcgcca gcctgggcga tagagtgacc 60
atcagctgca gagccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaaaccc 120
gacggcaccg tgaagctgct gatctaccac accagcagac tgcacagcgg cgtgcccagc 180
agattttctg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ctacctactt ctgtcagcaa ggcaacaccc tgccctacac cttcggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcac aggcggcgga ggatctggcg gaggcggaag tggcggaggg 360
ggatctgaag tgaaactgca ggaaagcggc cctggcctgg tggccccatc tcagtctctg 420
agcgtgacct gtaccgtgtc cggcgtgtcc ctgcctgact atggcgtgtc ctggatcaga 480
cagcccccca gaaagggcct ggaatggctg ggagtgatct ggggcagcga gacaacctac 540
tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc atcatcaagg acaactccaa gagccaggtg 600
ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac gacaccgcca tctactactg cgccaagcac 660
tactactacg gcggcagcta cgccatggac tactggggcc agggcacaag cgtgaccgtg 720
tctagc 726
<210> 97
<211> 57
<212> PRT
<213> 智人
<400> 97
Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys
1 5 10 15
His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp
20 25 30
Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val
35 40 45
Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
50 55
<210> 98
<211> 171
<212> DNA
<213> 智人
<400> 98
ctagacaatg agaagagcaa tggaaccatt atccatgtga aagggaaaca cctttgtcca 60
agtcccctat ttcccggacc ttctaagccc ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc 120
ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg gcctttatta ttttctgggt g 171
<210> 99
<211> 123
<212> DNA
<213> 智人
<400> 99
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 100
<211> 1396
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
CD19 CAR DNA 序列"
<400> 100
gaacagaagc tgataagtga ggaggacttg gacatccaga tgacccagac caccagcagc 60
ctgagcgcca gcctgggcga tagagtgacc atcagctgca gagccagcca ggacatcagc 120
aagtacctga actggtatca gcagaaaccc gacggcaccg tgaagctgct gatctaccac 180
accagcagac tgcacagcgg cgtgcccagc agattttctg gcagcggctc cggcaccgac 240
tacagcctga ccatctccaa cctggaacag gaagatatcg ctacctactt ctgtcagcaa 300
ggcaacaccc tgccctacac cttcggcgga ggcaccaagc tggaaatcac aggcggcgga 360
ggatctggcg gaggcggaag tggcggaggg ggatctgaag tgaaactgca ggaaagcggc 420
cctggcctgg tggccccatc tcagtctctg agcgtgacct gtaccgtgtc cggcgtgtcc 480
ctgcctgact atggcgtgtc ctggatcaga cagcccccca gaaagggcct ggaatggctg 540
ggagtgatct ggggcagcga gacaacctac tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc 600
atcatcaagg acaactccaa gagccaggtg ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac 660
gacaccgcca tctactactg cgccaagcac tactactacg gcggcagcta cgccatggac 720
tactggggcc agggcacaag cgtgaccgtg tctagcgggt ccctagacaa tgagaagagc 780
aatggaacca ttatccatgt gaaagggaaa cacctttgtc caagtcccct atttcccgga 840
ccttctaagc ccttttgggt gctggtggtg gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg 900
ctagtaacag tggcctttat tattttctgg gtgaggagta agaggagcag gctcctgcac 960
agtgactaca tgaacatgac tccccgccgc cccgggccca cccgcaagca ttaccagccc 1020
tatgccccac cacgcgactt cgcagcctat cgctccctga gagtgaagtt cagcaggagc 1080
gcagacgccc ccgcgtacca gcagggccag aaccagctct ataacgagct caatctagga 1140
cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag aggcgtggcc gggaccctga gatgggggga 1200
aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg 1260
gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat 1320
ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct acgacgccct tcacatgcag 1380
gccctgcccc ctcgct 1396
<210> 101
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
CD19 CAR DNA序列"
<400> 101
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln
1 5 10 15
Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser
20 25 30
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
35 40 45
Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu
50 55 60
His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
65 70 75 80
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr
85 90 95
Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
100 105 110
Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val
130 135 140
Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser
145 150 155 160
Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn
180 185 190
Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser
195 200 205
Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp
225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Leu Asp
245 250 255
Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu
260 265 270
Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu
275 280 285
Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val
290 295 300
Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His
305 310 315 320
Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys
325 330 335
His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
340 345 350
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
355 360 365
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
370 375 380
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
385 390 395 400
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
405 410 415
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
420 425 430
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
435 440 445
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
450 455 460
Arg
465
<210> 102
<211> 2928
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
CD19 CAR + IL7A_CPT序列"
<400> 102
gaacagaagc tgataagtga ggaggacttg gacatccaga tgacccagac caccagcagc 60
ctgagcgcca gcctgggcga tagagtgacc atcagctgca gagccagcca ggacatcagc 120
aagtacctga actggtatca gcagaaaccc gacggcaccg tgaagctgct gatctaccac 180
accagcagac tgcacagcgg cgtgcccagc agattttctg gcagcggctc cggcaccgac 240
tacagcctga ccatctccaa cctggaacag gaagatatcg ctacctactt ctgtcagcaa 300
ggcaacaccc tgccctacac cttcggcgga ggcaccaagc tggaaatcac aggcggcgga 360
ggatctggcg gaggcggaag tggcggaggg ggatctgaag tgaaactgca ggaaagcggc 420
cctggcctgg tggccccatc tcagtctctg agcgtgacct gtaccgtgtc cggcgtgtcc 480
ctgcctgact atggcgtgtc ctggatcaga cagcccccca gaaagggcct ggaatggctg 540
ggagtgatct ggggcagcga gacaacctac tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc 600
atcatcaagg acaactccaa gagccaggtg ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac 660
gacaccgcca tctactactg cgccaagcac tactactacg gcggcagcta cgccatggac 720
tactggggcc agggcacaag cgtgaccgtg tctagcgggt ccctagacaa tgagaagagc 780
aatggaacca ttatccatgt gaaagggaaa cacctttgtc caagtcccct atttcccgga 840
ccttctaagc ccttttgggt gctggtggtg gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg 900
ctagtaacag tggcctttat tattttctgg gtgaggagta agaggagcag gctcctgcac 960
agtgactaca tgaacatgac tccccgccgc cccgggccca cccgcaagca ttaccagccc 1020
tatgccccac cacgcgactt cgcagcctat cgctccctga gagtgaagtt cagcaggagc 1080
gcagacgccc ccgcgtacca gcagggccag aaccagctct ataacgagct caatctagga 1140
cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag aggcgtggcc gggaccctga gatgggggga 1200
aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg 1260
gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat 1320
ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct acgacgccct tcacatgcag 1380
gccctgcccc ctcgccggaa gagaagaggc aagcccatcc ccaacccact gctgggcctg 1440
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<213> 人工序列
<220>
<221> 源
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CD19 CAR + IL7A_CPT序列"
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Leu Asp
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<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
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CD19 CAR + IL7RaMCP序列"
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aagctgaccc tgctgcagag gaagctgcag cccgccgcca tgtacgagat caaggtgagg 2160
agcatccccg accactactt caagggcttc tggagcgagt ggagccccag ctactacttc 2220
aggacccccg agatcaacaa cagcagcggc gagatggacc ccatcctgct gccaccctgt 2280
ttaaccatca gcatcctgag cttcttcagc gtggccctgc tggtgatcct ggcctgcgtg 2340
ctgtggaaga agaggatcaa gcccatcgtg tggcccagcc tgcccgacca caagaagacc 2400
ctggagcacc tgtgtaagaa gcccaggaag aacctgaacg tgagcttcaa ccccgagagc 2460
ttcctggact gccagatcca cagggtggac gacatccagg ccagggacga ggtggagggc 2520
ttcctgcagg acaccttccc ccagcagctg gaggagagcg agaagcagag gctgggcggc 2580
gacgtgcaga gccccaactg ccccagcgag gacgtggtga tcacccccga gagcttcggc 2640
agggacagca gcctgacctg cctggccggc aacgtgagcg cctgcgacgc ccccatcctg 2700
agcagcagca ggagcctgga ctgcagggag agcggcaaga acggccccca cgtgtaccag 2760
gacctgctgc tgagcctggg caccaccaac agcaccctgc cacccccctt cagcctgcag 2820
agcggcatcc tgaccctgaa ccccgtggcc cagggccagc ccatcctgac cagcctgggc 2880
agcaaccagg aggaggccta cgtgaccatg agcagcttct accagaacca g 2931
<210> 107
<211> 977
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
CD19 CAR + IL7RaPPCL序列"
<400> 107
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln
1 5 10 15
Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser
20 25 30
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
35 40 45
Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu
50 55 60
His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
65 70 75 80
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr
85 90 95
Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
100 105 110
Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val
130 135 140
Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser
145 150 155 160
Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn
180 185 190
Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser
195 200 205
Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp
225 230 235 240
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Leu Asp
245 250 255
Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu
260 265 270
Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu
275 280 285
Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val
290 295 300
Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His
305 310 315 320
Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys
325 330 335
His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
340 345 350
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
355 360 365
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
370 375 380
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
385 390 395 400
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
405 410 415
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
420 425 430
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
435 440 445
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
450 455 460
Arg Arg Lys Arg Arg Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu
465 470 475 480
Asp Ser Thr Ser Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys
485 490 495
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Leu Leu Leu Val Thr Ser
500 505 510
Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro His
515 520 525
His His His His His Gly Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu
530 535 540
Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser Gln Leu
545 550 555 560
Glu Val Asn Gly Ser Gln His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro
565 570 575
Asp Val Asn Ile Thr Asn Leu Glu Phe Glu Ile Cys Gly Ala Leu Val
580 585 590
Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu Gln Glu Ile Tyr Phe Ile
595 600 605
Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu Ile Gly Lys Ser Asn Ile Cys Val Lys
610 615 620
Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys Ile Asp Leu Thr Thr Ile
625 630 635 640
Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val Val Tyr Arg Glu Gly
645 650 655
Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gln Lys Lys
660 665 670
Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gln Glu Lys Asp
675 680 685
Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu
690 695 700
Leu Gln Arg Lys Leu Gln Pro Ala Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg
705 710 715 720
Ser Ile Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro
725 730 735
Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met
740 745 750
Asp Pro Ile Leu Leu Pro Pro Cys Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe
755 760 765
Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys
770 775 780
Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr
785 790 795 800
Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe
805 810 815
Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Arg Val Asp Asp Ile
820 825 830
Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln
835 840 845
Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser
850 855 860
Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly
865 870 875 880
Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp
885 890 895
Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly
900 905 910
Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr
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Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu
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Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly
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Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn
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Gln
<210> 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
GPC3 CAR序列"
<400> 108
gatatcgtga tgacccagag ccccgactct ttagctgtgt ctttaggaga gagggccaca 60
atcaactgca agagcagcca gagcctcctc tacagcagca accagaagaa ctatttagct 120
tggtaccagc aaaagcccgg ccagcccccc aagctgctga tctactgggc cagcagcaga 180
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attagctctt tacaagctga ggacgtggcc gtgtactact gccagcagta ctacaactac 300
cctttaacct tcggccaagg taccaagctg gagatcaagg gctccacatc cggatccggc 360
aagcccggta gcggagaagg cagcacaaag ggagaggtgc agctggtgga gagcggaggc 420
ggactggtcc agcccggtgg atctttaagg ctgtcttgtg ccgccagcgg ctttaccttt 480
aacaagaacg ctatgaactg ggtgaggcaa gctcccggta agggtttaga gtgggtgggt 540
cgtattcgta ataagaccaa caactacgcc acctactatg ccgactccgt gaaggctcgt 600
ttcaccatct ctcgtgacga cagcaagaac agcctctatt tacagatgaa ctctttaaag 660
accgaggaca ccgccgtgta ctattgcgtg gctggcaact ccttcgccta ctggggccaa 720
ggcactttag tgaccgtgag ctccgggtcc accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca 780
ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg 840
gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgatatcta catctgggcg 900
cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa 960
cggggcagaa agaaactcct gtatatattc aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact 1020
actcaagagg aagatggctg tagctgccga tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa 1080
ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag 1140
ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagaggcgt 1200
ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 1260
aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 1320
cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 1380
acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgc 1419
<210> 109
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
GPC3 CAR序列"
<400> 109
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
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115 120 125
Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
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Asn Lys Asn Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
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Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Asn Lys Thr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
195 200 205
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Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ala Gly Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro
245 250 255
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Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
275 280 285
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
290 295 300
Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys
305 310 315 320
Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
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Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
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Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
355 360 365
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
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Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
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Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
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Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
450 455 460
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 110
<211> 2895
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
GPC3 CAR + IL7aCPT序列"
<400> 110
gatatcgtga tgacccagag ccccgactct ttagctgtgt ctttaggaga gagggccaca 60
atcaactgca agagcagcca gagcctcctc tacagcagca accagaagaa ctatttagct 120
tggtaccagc aaaagcccgg ccagcccccc aagctgctga tctactgggc cagcagcaga 180
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atggacccca tcctgctgac ctgccccacc atcagcatcc tgagcttctt cagcgtggcc 2280
ctgctggtga tcctggcctg cgtgctgtgg aagaagagga tcaagcccat cgtgtggccc 2340
agcctgcccg accacaagaa gaccctggag cacctgtgta agaagcccag gaagaacctg 2400
aacgtgagct tcaaccccga gagcttcctg gactgccaga tccacagggt ggacgacatc 2460
caggccaggg acgaggtgga gggcttcctg caggacacct tcccccagca gctggaggag 2520
agcgagaagc agaggctggg cggcgacgtg cagagcccca actgccccag cgaggacgtg 2580
gtgatcaccc ccgagagctt cggcagggac agcagcctga cctgcctggc cggcaacgtg 2640
agcgcctgcg acgcccccat cctgagcagc agcaggagcc tggactgcag ggagagcggc 2700
aagaacggcc cccacgtgta ccaggacctg ctgctgagcc tgggcaccac caacagcacc 2760
ctgccacccc ccttcagcct gcagagcggc atcctgaccc tgaaccccgt ggcccagggc 2820
cagcccatcc tgaccagcct gggcagcaac caggaggagg cctacgtgac catgagcagc 2880
ttctaccaga accag 2895
<210> 111
<211> 965
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
GPC3 CAR + IL7aCPT序列"
<400> 111
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
145 150 155 160
Asn Lys Asn Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Asn Lys Thr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
195 200 205
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
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Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ala Gly Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro
245 250 255
Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
260 265 270
Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
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Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
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Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys
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Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
340 345 350
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Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
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Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
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Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
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Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe
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Leu Leu Ile Pro His His His His His His Gly Glu Ser Gly Tyr Ala
515 520 525
Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser
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Cys Tyr Ser Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser Gln His Ser Leu Thr Cys
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Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Ile Thr Asn Leu Glu Phe Glu Ile
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580 585 590
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595 600 605
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Asp Leu Thr Thr Ile Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val
625 630 635 640
Val Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser
645 650 655
His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr
660 665 670
Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser
675 680 685
Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu Gln Pro Ala Ala Met Tyr
690 695 700
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Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu Ile Asn Asn
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Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser
740 745 750
Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val
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885 890 895
Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu
900 905 910
Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln
915 920 925
Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu
930 935 940
Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser
945 950 955 960
Phe Tyr Gln Asn Gln
965
Claims (20)
1.蛋白质，其包含白细胞介素-7受体的α链的具有一个或更多个修饰的跨膜结构域，其中所述具有一个或更多个修饰的跨膜结构域具有SEQ ID NO：2、4、6或8的序列。
2.权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质还包含白细胞介素-7受体的α链的细胞内结构域。
3.权利要求2所述的蛋白质，其中所述细胞内结构域包含SEQ ID NO：45的序列。
4.权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质还包含白细胞介素-7受体的α链的细胞外结构域。
5.权利要求4所述的蛋白质，其中所述细胞外结构域包含SEQ ID NO：11的序列。
6.权利要求1所述的蛋白质，其还包含
细胞外白细胞介素-15结构域；和
来自白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域。
7.权利要求6所述的蛋白质，其中所述细胞外白细胞介素-15结构域包含SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：24的序列。
8.权利要求6所述的蛋白质，其中所述白细胞介素-15受体的α链的细胞外sushi结构域包含SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：37。
9.编码权利要求1所述的蛋白质的核酸。
10.载体，其包含权利要求9所述的核酸。
11.权利要求10所述的载体，其还包含与所述核酸可操作地连接的启动子，以及任选的与所述核酸可操作地连接的增强子序列。
12.权利要求10所述的载体，其还包含编码与肿瘤抗原特异性结合的嵌合抗原受体的序列。
13.权利要求12所述的载体，其中所述肿瘤抗原选自：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、甲胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125 CD200、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合蛋白α5β1、整合蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羟乙酰神经氨酸、NPC-1C、PDGF-Ra、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白。
14.权利要求10所述的载体，其中所述嵌合抗原受体包含一种或更多种选自以下的共刺激信号传导结构域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10和DAP-12。
15.权利要求10所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体或腺病毒载体。
16.哺乳动物细胞，其包含权利要求10所述的载体。
17.权利要求16所述的哺乳动物细胞，其中所述哺乳动物细胞是免疫细胞。
18.权利要求17所述的哺乳动物细胞，其中所述免疫细胞选自：CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、调节T细胞和辅助性T细胞。
19.药物组合物，其包含权利要求10所述的载体和药学上可接受的载剂。
20.药物组合物，其包含权利要求16所述的哺乳动物细胞。
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