CN110291200B - 对哺乳动物细胞中转基因表达的药剂配体诱导具有增大的灵敏度的嵌合转录因子变异体 - Google Patents

对哺乳动物细胞中转基因表达的药剂配体诱导具有增大的灵敏度的嵌合转录因子变异体 Download PDF

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Abstract

本文中提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至编码嵌合抗原受体(所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域)的第一多核苷酸、第二多核苷酸(所述第二多核苷酸编码间隔区)、第三多核苷酸(所述第三多核苷酸编码跨膜结构域)、和第四多核苷酸(所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域)；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸。还提供了制造此类细胞的方法和使用这些细胞进行治疗的方法。

Description

对哺乳动物细胞中转基因表达的药剂配体诱导具有增大的灵 敏度的嵌合转录因子变异体
通过优先权申请而并入
本申请要求2016年12月12日提交的美国临时专利申请No.62/433,183的优先权的利益。以引用的方式在此将上述申请的全部公开以其整体明确地并入本文。
关于序列表、表格或计算机程序列表
本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表作为2017年12月6日创建的名为SCRI.118WO.txt的文件提供，其大小为297kb。所提供的信息为序列表的电子格式，并且明确地以引用的方式整体并入本文。
技术领域
本文公开了涉及促进细胞(例如哺乳动物细胞)中药剂调控的转基因表达的遗传系统的实施方式。本公开还涉及鉴别野生型HEA3嵌合转录因子和野生型HEA4嵌合转录因子的变异体(其用于遗传修饰的细胞(包括哺乳动物细胞)中转基因表达的调控)。
背景技术
可通过基因转移将人T淋巴细胞工程化，以表达对肿瘤细胞上表达的表面分子具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)。用于此目的的基因转移方法包括使用编码嵌合抗原受体的病毒载体的几种类型的病毒转导。然后可将表达嵌合抗原受体的细胞过继转移给患者，以治疗癌症和感染性疾病。嵌合抗原受体为合成受体。这些合成受体可包含连接至细胞内信号转导部件(例如单独的CD3ζ或与一个或多个共刺激结构域组合的CD3ζ)的细胞外配体结合结构域，例如单克隆抗体的单链可变片段(scFv)。嵌合受体设计的研究一直集中在明确靶向恶性细胞而不对正常组织造成严重毒性的scFv和其它配体结合元件，以及集中在明确细胞内信号转导模块的最佳构成以激活T细胞效应子功能。需要另外的促进嵌合抗原受体表达的遗传系统。
发明内容
本发明的方面涉及促进细胞中药剂调控的转基因表达的遗传系统。在一个可选方式中，经调控的转基因表达靶向细胞(例如淋巴细胞，优选人淋巴细胞，所述淋巴细胞被设计用于过继免疫疗法)。对于嵌合抗原受体(CAR)重定向的过继治疗策略，该系统提供了严格的安全性，而不牺牲允许实时临床控制体内CAR表达的治疗意图。通过对能够对CAR表达进行药剂响应性转录控制的载体进行工程化，可基于临床规定的药剂输入(其表现出临床上允许的药代动力学、组织分布以及淋巴细胞的细胞外间隙和胞浆间的分配)，将CAR和其它细胞介质的活性在体内转为“ON”和“OFF”。除腺病毒和慢病毒基因外，载体平台还可包含编码微环(minicircles)或piggy bac转座子的基因。本文所述的遗传系统提供药剂调控的转基因表达，以在缺乏药剂的情况中执行功能性“OFF”状态，并在药剂存在的情况中执行功能性“ON”状态转基因表达。
此类方法的一个可选方式利用药剂三苯氧胺。三苯氧胺为雌激素拮抗剂/部分激动剂，其是FDA批准并且商业上可获得的药剂。三苯氧胺为口服摄入，并且可在长时间内每天给予。三苯氧胺具有经证明的安全性记录、良好的药代动力学特征、优异的组织分布以及细胞外间隙与胞浆间的低分配系数。可基于安全性记录、良好的药代动力学特征、和优异的组织分布、以及细胞外间隙与胞浆间的低分配系数、和/或低毒性，选择在本文所述方法中有用的其它药剂。
然而，三苯氧胺可能具有多种副作用，例如白内障、月经期变化、便秘、腹泻、水肿(肿胀)、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐和体重减轻。因此，对于一些患者有必要以低血浆浓度的三苯氧胺来开启用于表达嵌合抗原受体的基因。
本公开的一个方面涉及可对转录激活剂实施的改变，从而调节转录因子的性质，包括但不限于：改变雌激素受体配体结合结构域中的一个或多个氨基酸，从而增加所述因子对雌激素类似物的亲和力；以及改变RelA(p65)反式激活结构域和/或p65反式激活结构域中的一个或多个氨基酸，其中改变p65反式激活结构域(RelA)中的氨基酸可增强响应于药剂的转录活性。RelA突变增强响应于药剂的转录活性，然而这些突变不影响药剂与受体的结合。只有ER-LBD中的突变影响药剂与受体的结合。在一些可选方式中，所述系统采用合成的转录调控子(transcriptional regulator)，所述合成的转录调控子在三苯氧胺存在的情况中结合转基因上游的合成启动子以诱导表达。三苯氧胺调控的转录因子(“TamR-tf”，也可指HEA3/HEA4转录因子)为由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域，其转而融合至NF-κB(p65)的p65激活结构域。HEA4为由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N-末端DNA结合结构域，其转而融合至NF-κB(p65)的p65激活结构域，所述突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域含有3个点突变(G400V、M543A、L544A)，并且所述突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域消除雌二醇结合但允许与三苯氧胺代谢物和其它雌激素类似物结合。示例性氨基酸序列示于SEQ ID NO：1中： SEQ ID NO：1包含ER-LBD中的1个点突变，该突变消除与内源性雌激素的结合，但赋予对三苯氧胺代谢物4-OHT氟维司群和其它雌激素类似物的纳摩尔级特异性。雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域位于TamR-tf的氨基酸282-595处并在第521位具有突变(G521R)，而且影响药剂与受体的结合。NF-κB(p65)的p65激活结构域位于SEQ ID NO：1的氨基酸596-862处：
在缺乏三苯氧胺的情况中，通过胞浆热休克蛋白90(HSP90)与三苯氧胺结合活性位点的结合将TamR-tf从核中排除，并且转基因表达处于“OFF”状态。纳摩尔级浓度的胞浆三苯氧胺在关于ER-LBD结合中主动竞争并超越了HSP90，导致TamR-tf转位至核。在核转位后，TamR-tf容易结合其限制性合成启动子(例如，如SEQ ID NO：23的核酸序列中所示的7xHBD/mE1B(tagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaagagctcagggtatataatg))。在三苯氧胺存在的情况中，TamR-tf与7xHBD/mE1B启动子的结合诱导了转基因表达的“ON”状态。在一些可选方式中，可对该转录调节因子进行修饰，以提供对转基因表达的不同水平的控制。TamR-tf的LBD中的氨基酸置换允许对三苯氧胺及其代谢物的选择性响应，这影响药剂与受体的结合，其中4-羟基三苯氧胺(4-OHT)为相对于TamR-tf活性最具药理学活性的代谢物，但缺乏与内源性雌激素的相互作用。
在一些可选方式中，借助于人雌激素受体配体结合结构域的置换，对具有增强的药剂灵敏度的野生型HEA3和野生型HEA4的变异体进行鉴别。RelA(p65)反式激活结构域中的突变增强响应于药剂或药剂配体的转录活性。在一些可选方式中，这些高亲和力形式通过人雌激素受体(其赋予与4-OHT和其它雌激素类似物(例如氟维司群)的选择性结合)内的氨基酸置换产生。当例如与以模拟磷酸化(phosphomimetics)和模拟乙酰化(acetyl-mimetics)起作用的HEA3 RelA结构域和HEA4 RelA结构域的氨基酸置换组合时，这些变化协同地增强了响应于药剂激活剂的转基因表达。本文还描述了怀所有三个修饰的优选变异体版本，该优选变异体版本在缺乏配体的情况下并未不利地影响“OFF”状态的严格性，但显著改善了转基因表达对激活雌激素类似物药剂输入的灵敏度和幅度。在另一方面，由于ER-LBD(L384M、M421G、G521R)中的突变(而非RelA突变)，使HEA3对药剂CMP8有相应。RelA突变可不影响对药剂的特异性。RelA突变可增强转录活性。这些增强的HEA3嵌合转录因子和HEA4嵌合转录因子使该调控系统响应于可以三苯氧胺、氟维司群或CMP8的低剂量无毒剂量容易地达到的输入药剂水平。
在第一方面，提供了用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码优化的间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；和第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的药剂量诱导，或者相比野生型HEA3嵌合转录因子而言，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂为HEA3或HEA4。在一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，所述至少一种突变影响药剂与受体的结合。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个的突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含与使用野生型HEA3的系统相比在给定浓度下使转录表达增加的至少一个突变。在一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ IDNO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽(self-cleaving peptide)的第七多核苷酸。在一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在一些可选方式中，在药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导比野生型HEA3嵌合转录因子高的嵌合抗原受体表达水平。在一些可选方式中，在小于10nM药剂但不为零的药剂的无毒剂量下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体表达。在一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体结合结构域为肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，任选地对所述间隔区进行优化；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素(mesothelin)、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白和/或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在一些可选方式中，所述配体结合结构域特异性结合CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性的序列或者与SEQ ID NO：120具有由上述值中任意两个所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。
在第二方面，提供了用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调控检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力(cytolytic capacity)的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，其中，将所述系统配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与野生型HEA3相比而言所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQID No：3和/或SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22和/或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在一些可选方式中，在所述药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子的嵌合抗原受体表达水平。在一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂的无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在一些可选方式中，相比用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，任选地对所述间隔区进行优化；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者与SEQ ID NO：120具有由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素(Survivin)。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ IDNO：123中所示的氨基酸序列。
在第三方面，由本文所述的任一可选系统中的系统中的第一核酸和/或第二核酸编码嵌合受体多肽。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码多肽间隔区，优选编码优化的间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的药剂量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22和/或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂的无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包括CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比于参比嵌合受体，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，该系统为用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂的无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，任选地对所述间隔区进行优化；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者与SEQ ID NO：120具有由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在本文所述的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第四方面，提供了包含本文所述的任一可选系统中的系统的宿主细胞。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的药剂量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ IDNo：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所不的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度或者由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。嵌合转录因子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ IDNO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQID NO：16、SEQ ID NO：17和/或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度或者由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ IDNO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ IDNO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在本文所述的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，例如前体T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下细胞所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+ T细胞(bulk CD8+ T cells)。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+T辅助淋巴细胞，所述CD4+T辅助淋巴细胞选自于由以下细胞所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞(bulk CD4+ T cells)。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第五方面，提供了包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一种或多种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞的宿主细胞的组合物。提供了包含本文所述的任一可选系统中的系统的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统小的药剂量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。嵌合转录因子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调控检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或/或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在本文所述的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的一些可选方式中，所述细胞为前体T细胞，其可为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第六方面，提供了用于制备本文所述的任一种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞的体外方法。所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文所述的任一种可选系统中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任意其它所选的分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相对参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂而的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ IDNo：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任意其它所选的分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区优选为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，例如前体T细胞。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ IDNO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ IDNO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在本文所述的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，用于制备任一种可选宿主细胞中的宿主细胞的体外方法包括：a)提供本文所提供的任一种可选系统中的系统；以及b)在体外将所述系统导入分离的T淋巴细胞群，并对每个T淋巴细胞群进行扩增。在所述方法的一些可选方式中，对所述T淋巴细胞进行扩增，并且其中，所述方法进一步包括在抗CD3和/或抗CD28以及至少一种稳态细胞因子存在的情况下对所述细胞进行培养，直至所述细胞充分扩增以用作细胞输注。在所述方法的一些可选方式中，所述分离的T淋巴细胞群包含前体T细胞。在所述方法的一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在所述方法的一些可选方式中，所述淋巴细胞为CD8+或CD4+。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第七方面，提供对有需要的受试者的疾病进行治疗、抑制或改善的方法。所述方法包括向受试者给予本文提供的任一种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞或本文提供的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合。所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一种或多种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞。所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文所述的任一种可选系统中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一核酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ IDNo：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ IDNo：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，和/或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在所述方法的一些可选方式中，所述疾病为癌症或病毒性疾病。在所述方法的一些可选方式中，对所述受试者进行鉴别或选择，以接受抗癌疗法。在所述方法的一些可选方式中，对所述受试者进行鉴别或选择，以接受抗病毒疗法。在所述方法的一些可选方式中，所述方法进一步包括测量或评价对所述疾病的抑制。在所述方法的一些可选方式中，所述方法进一步包括：给予本文提供的任一可选方式中的任一种或多种中的细胞或本文提供的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合之前、期间或之后，向所述受试者提供另外的抗癌疗法或抗病毒疗法。在所述方法的一些可选方式中，通过过继细胞转移，向所述受试者给予上述细胞或上述至少一种组合物或产品组合。在所述方法的一些可选方式中，在所述受试者已接受另一种形式的抗癌疗法或抗病毒疗法后，向所述受试者给予上述宿主细胞或上述至少一种组合物或产品组合。在所述方法的一些可选方式中，所述方法进一步包括给予诱导所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或组合物中的转基因表达的药剂，以用于癌症或病毒感染的治疗。在所述方法的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、氟维司群和/或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述方法的一些可选方式中，以10mg/剂、11mg/剂、12mg/剂、13mg/剂、14mg/剂、15mg/剂、16mg/剂、17mg/剂、18mg/剂、19mg/剂或20mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予三苯氧胺。在所述方法的一些可选方式中，以250mg/剂、300mg/剂、350mg/剂、400mg/剂、450mg/剂或500mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予氟维司群。在所述方法的一些可选方式中，以在血清中提供30nM、40nM或50nM药剂水平或者由上述值中任意两个所限定的范围内的药剂水平的剂量范围，给予所述CMP8。在所述方法的一些可选方式中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。在所述方法的一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第八方面，提供了对有需要的受试者的疾病进行治疗、抑制或减轻的方法。所述方法包括向所述受试者给予本文提供的任一可选方案中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或本文提供的任一种或多种可选组合物中的至少一种组合物或产品组合。在一些可选方式中，所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一种或多种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文所述的任一种可选系统中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一核酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ IDNo：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ IDNo：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3TCR，和/或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的一些可选方式中，所述细胞为前体T细胞，其为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在所述方法的一些可选方式中，所述疾病为癌症或病毒性疾病。在所述方法的一些可选方式中，对所述受试者进行鉴别或选择，以接受抗癌疗法。在所述方法的一些可选方式中，对所述受试者进行鉴别或选择，以接受抗病毒疗法。在所述方法的一些可选方式中，所述方法进一步包括测量或评价对所述疾病的抑制。在所述方法的一些可选方式中，所述方法进一步包括：给予本文所述的任一种或多种可选细胞中的细胞或本文所述的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合之前、期间或之后，向所述受试者提供另外的抗癌疗法或抗病毒疗法。在所述方法的一些可选方式中，通过过继细胞转移，向所述受试者给予本文所述的任一种或多种可选方式中的细胞或本文所述的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合。在所述方法的一些可选方式中，在所述受试者已接受另一种形式的抗癌疗法或抗病毒疗法之后，向所述受试者给予本文所述的任一种或多种可选方式中的宿主细胞或本文所述的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合。在所述方法的一些可选方式中，所述方法进一步包括给予诱导所述宿主细胞或组合物中的转基因表达的药剂，以用于癌症或病毒感染的治疗。在所述方法的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、氟维司群和/或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述方法的一些可选方式中，以10mg/剂、11mg/剂、12mg/剂、13mg/剂、14mg/剂、15mg/剂、16mg/剂、17mg/剂、18mg/剂、19mg/剂或20mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予三苯氧胺。在所述方法的一些可选方式中，以250mg/剂、300mg/剂、350mg/剂、400mg/剂、450mg/剂或500mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予氟维司群。在所述方法的一些可选方式中，以在血清中提供30nM、40nM或50nM药剂水平或者由上述值中任意两个所限定的范围内的药剂水平的剂量范围，给予所述CMP8。在所述方法的一些可选方式中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。在所述方法的一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第九方面，提供了本文所述的任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或本文所述的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合与诱导所述宿主细胞或组合物中的转基因表达的药剂的组合用于治疗癌症或病毒感染的用途。在一些可选方式中，所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一种或多种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文所述的任一种可选系统中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一核酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ IDNo：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3TCR，和/或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)为前体T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在所述用途的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、氟维司群和/或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述用途的一些可选方式中，以10mg/剂、11mg/剂、12mg/剂、13mg/剂、14mg/剂、15mg/剂、16mg/剂、17mg/剂、18mg/剂、19mg/剂或20mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予三苯氧胺。在所述用途的一些可选方式中，以250mg/剂、300mg/剂、350mg/剂、400mg/剂、450mg/剂或500mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予氟维司群。在所述方法的一些可选方式中，以在血清中提供30nM、40nM或50nM的药剂水平或者由上述值中任意两个所限定的范围内的药剂水平的剂量范围，给予所述CMP8。在所述用途的一些可选方式中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。在所述用途的一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第十方面，提供了在患有癌症或病毒感染的受试者中进行细胞免疫疗法的方法。所述方法包括向受试者给予本文提供的任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或本文提供的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合，并且给予诱导所述组合物或所述宿主细胞中的转基因表达的药剂。所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一种或多种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文所述的任一种可选系统中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一核酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，和/或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP 120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞，其为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在所述方法的一些可选方式中，所述癌症选自于实体瘤或血液恶性肿瘤。在所述方法的一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
在第十一方面，提供了本文所述的任一种或多种可选方式的宿主细胞或本文所述的任一种或多种可选方式的至少一种组合物或产品组合作为药物的用途。所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一种或多种可选宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的宿主细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文所述的任一种可选系统中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。在用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一核酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子相比，例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导所述嵌合抗原受体高表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。在一些可选方式中，所述用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂，并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增大的至少一个突变。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ IDNo：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在本文所述的系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在本文所述的系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，和/或它们的任意组合。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在本文所述的系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在所述宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在所述组合物的一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，或者其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及所述组合物包含宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞。在一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。
附图说明
图1A至图1F示出了HEA3(低亲和力)RelA单突变型变异体和HEA4(高亲和力)RelA单突变型变异体，以及当其被转导入细胞时，它们在给予4-OHT时的响应。图中示出了怀有组成型表达的药剂诱导型转录因子HEA3单突变型RelA变异体(图1A)或HEA4单突变型RelA变异体(图1B)(RelA蛋白结构域中的位置S536E或K310Q，分别对应于HEA3和HEA4中的位置S846E和K621Q)以及ZsGreen荧光报告子的双重包装的慢病毒构建体的示意图。在用500nM4-OHT培养24小时后，表达HEA3 RelA变异体(图1C)或HEA4 RelA变异体(图1D)的Jurkat细胞中的ZsGreen报告子表达。4-OHT剂量响应：表达HEA3 RelA变异体(图1E)或HEA4 RelA变异体(图1F)的Jurkat细胞的EGFRt+ZsGreen+细胞的百分比以及ZsGreen中位荧光强度。
图2A至图2E示出了HEA4(高亲和力)RelA双突变型变异体和CMP8响应性HEA3 RelA变异体，以及当其被转导入细胞时，它们在分别给予4-OHT和CMP8时的响应。图中示出了怀有组成型表达的药剂诱导型转录因子HEA4双突变型RelA变异体(RelA蛋白结构域中的位置S536E/K310Q，分别对应于HEA3和HEA4中的位置S846E和K621Q)(图2A)或CMP8响应性HEA3单突变型RelA变异体(S563E)(图2B)以及ZsGreen荧光报告子的双重包装的慢病毒构建体的示意图。在用500nM 4-OHT和CMP8培养24小时后，表达HEA4双突变型RelA变异体(图2C)或CMP8响应性HEA3 RelA变异体(图2D)的Jurkat细胞中的ZsGreen报告子表达。4-OHT和CMP8剂量响应：表达HEA4双突变型RelA变异体(图2E)或CMP8响应性HEA3单突变型RelA变异体(图2F)的Jurkat细胞的EGFRt+ZsGreen+细胞的百分比以及ZsGreen中位荧光强度。
图3A至图3C示出了当被转导入细胞时，编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型荧光报告子eGFP:ffluc的双重包装的慢病毒构建体的结果。如图3A所示，用编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型荧光报告子eGFP:ffluc的双重包装的慢病毒构建体转导CD4 T细胞和CD8 T细胞。在经转导的CD4 T细胞和CD8 T细胞的纯化和扩增后，使用抗p65抗体进行蛋白质印迹(Western blot)，以确认嵌合转录因子的表达(图3B)。通过流式细胞术在经分选的细胞中确认EGFRt表达，并确定在诱导配体缺乏的情况下eGFP表达的泄漏(图3C)。
图4A至图4B示出了编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型荧光报告子eGFP:ffluc的双重包装的慢病毒构建体，以及当所述慢病毒构建体被转导入细胞时的结果。用编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型荧光报告子eGFP:ffluc的双重包装的慢病毒构建体转导CD4 T细胞和CD8 T细胞(图4A)。在经转导的CD4 T细胞和CD8 T细胞的纯化和扩增后，在存在或缺乏aCD3/aCD28微珠(珠∶细胞比为2∶1)或PMA(2μM)/离子霉素(20ng/mL)的情况下，将T细胞与0nM、30nM或500nM 4-OHT一起孵育24小时。随后通过流式细胞术对eGFP表达进行量化(图4B)。
图5A至图5E示出了编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型荧光报告子eGFP:ffluc的双重包装的慢病毒构建体，以及当所述慢病毒构建体被转导入细胞时的结果。用编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型荧光报告子eGFP:ffluc的双重包装的慢病毒构建体转导CD4 T细胞和CD8 T细胞(图5A)。在经转导的CD4 T细胞和CD8 T细胞的纯化和扩增后，在存在或缺乏aCD3/aCD28微珠(珠:细胞比为2:1)或PMA(2μM)/离子霉素(20ng/mL)的情况下，将T细胞与渐增浓度的4-OHT一起孵育24小时。通过流式细胞术对eGFP表达进行量化。用4-OHT处理24小时后，％EGFRt+eGFP+CD4 T细胞(图5B)和％EGFRt+eGFP+CD8 T细胞(图5C)以及CD4 T细胞(图5D)和CD8 T细胞(图5E)中eGFP表达的MFI。
图6A至图6D示出了用慢病毒构建体转导的细胞的结果。用双重包装的慢病毒构建体转导Jurkat细胞，所述慢病毒构建体编码药剂调控的转录因子(HEA4(p65/S536E/K310Q))和诱导型嵌合细胞因子受体(CCR(CD122))(图6A)或通过可剪切的2A接头连接至Her2tG的生存素(图6B)的。通过Her2tG上调确定用500nM 4-OHT处理24小时后的CCR(CD122)(图6C)和生存素(图6D)的表达。
具体实施方式
在下面的描述中，当根据说明书阅读时，应给予术语其简单和普通的含义。本领域技术人员将根据整个说明书理解所用的术语。
当根据说明书阅读时，“约”具有其简单和普通的含义，并且可在例如涉及可测量的值时使用，并且可意为包括规定值的±20％或±10％、更优选±5％、甚至更优选±1％、并且进一步优选±0.1％的变化。
当根据说明书阅读时，“抗原”或“Ag”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如引起免疫应答的分子。该免疫应答可涉及抗体产生或特定免疫活性细胞(immunologically-competent cell)的激活，或两种皆有。显而易见的是，可生成、合成、重组生产抗原或者抗原可来源于生物样品。此类生物样品可包括但不限于组织样品、肿瘤样品、细胞或生物流体(例如血液、血浆或腹水液)。在本文提供的系统的一些可选方式中，所述被嵌合抗原受体识别的配体为能够引起免疫应答的抗原。
当根据说明书阅读时，“抗肿瘤作用”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如生物学作用，其可表现为肿瘤体积减少、肿瘤细胞数量减少、转移瘤数量减少、预期寿命增加或与癌状况相关的各种生理症状减少。“抗肿瘤作用”也可表现为复发减少或复发前时间增加。
当根据说明书阅读时，“嵌合受体”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如包含抗体或其它蛋白序列的配体结合结构域的合成设计的受体，所述配体结合结构域结合与疾病或紊乱相关的分子，并且通过间隔区结构域连接至T细胞受体或其它受体的一个或多个细胞内信号转导结构域(例如共刺激结构域)。嵌合受体也可被称为人工T细胞受体、嵌合T细胞受体、嵌合免疫受体和嵌合抗原受体(CAR)。这些CAR是可将任意特异性移植到免疫受体细胞上的工程化受体。一些研究人员还认为，术语嵌合抗原受体或“CAR”包含抗体或抗体片段、间隔区、信号转导结构域和跨膜区。由于对本文所述的CAR的不同组件或结构域(例如表位结合区(例如，抗体片段、scFv或其部分、间隔区、跨膜结构域和/或信号转导结构域))进行修饰的惊人效果，在独立的元件而言，CAR的组件在本公开中经常有所区别。CAR的不同元件的变化可例如导致对特定表位或抗原更强的结合亲和力。
当根据说明书阅读时，“单链可变片段(scFv)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如可具有用10至25个氨基酸的短接头肽连接的免疫球蛋白的重链(VH)可变区和轻链(VL)可变区的融合蛋白。所述接头通常富含甘氨酸(为了柔性)以及富含丝氨酸或苏氨酸(为了溶解性)，并且所述接头可将VH的N-末端与VL的C-末端连接，反之亦然。尽管移除了恒定区并且引入了接头，该蛋白保留了原始免疫球蛋白的特异性。scFv对于抗原而言可具有特异性。如本文所用的“抗原”或“Ag”是指引起免疫应答的分子。该免疫应答可涉及抗体产生或特定免疫活性细胞的激活，或者两者皆有。可生成、合成、重组生产抗原或者抗原可来源于生物样品。此类生物样品可包括但不限于组织样品、肿瘤样品、细胞或生物流体(例如血液、血浆或腹水)。在本文提供的CAR的一些可选方式中，所述CAR包含抗体片段、scFv或其部分，例如含有CDR结构域的多肽。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。这种特定的scFv被称为huCD19 scFv(G01S)并且由SEQ ID NO：40编码 在一些可选方式中，所述CAR包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由CD20(CD20(Leu16))核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：44中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述CD20(Leu 16)scFv包含SEQ ID NO：45中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：45的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由CD22(m971)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD22。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：46中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含CD22(m971)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：47中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：47的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。已知B7-H3受体在多种癌细胞上表达。不受限制地，这些癌细胞可包括胃癌细胞、卵巢癌细胞和/或非小细胞肺癌细胞。在一些可选方式中，所述CAR用于对癌症和/或炎症进行治疗或减轻。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：48中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：49中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：49的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对于L1CAM的表位CE7表位具有特异性。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR具有特异性。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR具有特异性。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：54中所示的核酸序列编码在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：55中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：55的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EphA2(2A4)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：57中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：57的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EpHA2(4H5)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：59中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：59的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含FITC(E2)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：61中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：61的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由GD2(hu3F8)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：62中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含GD2(hu3F8)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：63中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：63的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由Her2(赫塞汀(Herceptin))scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：64中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含Her2(赫塞汀)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：65中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：65的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由IL13R2a(hu08)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：66中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu08)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：67中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：67的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗-IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗-IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ IDNO：75的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ IDNO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33具有特异性。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列 )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：82中所示的序列编码：(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码(间皮素(P4)scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：85中所示的氨基酸序列(间皮素(P4)scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：85的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码(VAR2CSA(ID1-DBL2Xb)scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列(VAR2CSA(ID1-DBL2Xb)scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：87的核酸序列的核酸序列编码。
“间隔区(spacer)”也可被称为“接头”，当根据说明书阅读时所述间隔区具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如位于轻链和重链之间的残基。间隔区的长度可为10-20个氨基酸(例如，至少等于10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸或长度在由上述长度中任意两个所限定的范围内)。柔性间隔区允许scFv结构域定向于多个方向，以使优化的抗原结合特异性成为可能。在scFv结构域前面可为信号肽，以将新生蛋白引导至内质网并且随后表面表达，从而可发生切割。柔性间隔区还可允许scFv结构域定向于不同方向，以促进抗原结合。允许scFv结构域特异性结合的良好间隔区可根据经验确定，并且取决于scFv结构域抗原识别结构域。在一些可选方式中，所述接头包含优化的间隔区长度，以改善scFv结构域与靶细胞的结合(所述结合可增加细胞毒性效力)。在一些可选方式中，所述scFv结构域和跨膜结构域之间的接头或间隔区的长度可为25-55个氨基酸(例如，至少等于25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个或55个氨基酸或者长度在由上述长度中任意两个所限定的范围内)。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码(IgG4-CH2(L235D，N297Q)核苷酸序列： ).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：105中所示的氨基酸序列(IgG4-CH2(L235D，N297Q)氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：105的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：106中所示的核酸序列编码(IgG4-CH3核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：107中所示的氨基酸序列(IgG4 CH3氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：107的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：108中所示的核酸序列编码(CD8铰链/跨膜结构域核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：109中所示的氨基酸序列(CD8铰链/跨膜结构域氨基酸序列： 在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQID NO：109的核酸序列的核酸序列编码。
当根据说明书阅读时，“跨膜结构域”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如蛋白质的跨膜区。其可为单个α螺旋、跨膜β桶、β-螺旋或任何其它结构。在本文的一些可选方式中，所述跨膜结构域包含CD28tm。在一些可选方式中，所述跨膜结构域由SEQID NO：110中所示的序列编码(CD28跨膜结构域核苷酸序列：)。在一些可选方式中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO：111中所示的氨基酸序列(CD28跨膜结构域氨基酸序列：MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV).。在一些可选方式中，所述跨膜结构域由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：111的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述跨膜结构域由SEQ ID NO：112中所示的序列编码(CD8铰链/跨膜结构域核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO：113中所示的氨基酸序列(CD8铰链/跨膜结构域氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述跨膜结构域由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：113的核酸序列的核酸序列编码。
当根据说明书阅读时，“嵌合细胞因子受体”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如具有趋化因子或其部分的氨基酸序列并且为与另一蛋白的融合蛋白的蛋白。
当根据说明书阅读时，“细胞内信号转导结构域”或“共刺激结构域(co-stimulatory domain)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如向T细胞提供信号的信号转导部分，除了由例如TCR/CD3复合物的CD3ζ链提供的初级信号外，所述信号介导T细胞应答(包括但不限于激活、增殖、分化、细胞因子分泌等)。共刺激结构域可包括但不限于CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3或与CD83特异性结合的配体的整体或部分。在一些可选方式中，所述共刺激结构域为细胞内信号转导结构域，所述细胞内信号转导结构域与其它细胞内介质相互作用以介导细胞应答(包括激活、增殖、分化和细胞因子分泌等)。在本文所述的信号转导结构域的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD3ζ、CD28细胞质结构域和/或4-1BB。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域由SEQ ID NO：114中所示的核酸序列编码(CD3ζ核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含SEQ ID NO：115中所示的氨基酸序列(CD3ζ氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域由包含编码氨基酸序列SEQ IDNO：115的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域由SEQID NO：116中所示的核酸序列编码(4-1BB核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含SEQ ID NO：117中所示的氨基酸序列(4-1BB氨基酸序列：KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL)。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：117的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域由SEQ ID NO：118中所示的序列编码(CD28细胞质结构域核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含SEQ ID NO：119中所示的氨基酸序列(CD28细胞质结构域氨基酸序列：RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS)。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：119的核酸序列的核酸序列编码。
当根据说明书阅读时，如本文所用的“核酸”或“核酸分子”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于：例如，脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、通过聚合酶链式反应(PCR)产生的片段、以及通过连接、切断、核酸内切酶作用和核酸外切酶作用中任一种产生的片段。核酸分子可由单体组成，所述单体为天然存在的核苷酸(例如DNA和RNA)或天然存在的核苷酸的类似物(例如天然存在的核苷酸的对映体形式)，或两者的组合。经修饰的核苷酸可具有糖部分和/或嘧啶或嘌呤碱基部分的改变。糖修饰包括例如用卤素、烷基、胺类和叠氮基替换一个或多个羟基，或者可将糖官能化为醚或酯。此外，可用空间上和电子上相似的结构(例如氮杂糖和碳环糖类似物)替换整个糖部分。碱基部分中的修饰的实例包括烷基化嘌呤和嘧啶、酰化嘌呤或嘧啶或其它公知的杂环置换。核酸单体可通过磷酸二酯键或此类连接的类似物连接。磷酸二酯连接的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、硫代苯胺磷酸酯(phosphoroanilothioate)、phosphoranilidate或氨基磷酸酯等。术语“核酸分子”还包括所谓的“肽核酸”，其包含连接至聚酰胺骨架的天然存在的核酸碱基或经修饰的核酸碱基。核酸可为单链核酸或双链核酸。
当根据说明书阅读时，“DNA间隔区(spacer)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如包含核苷酸的间隔区。例如，DNA间隔区可位于启动子和在所述启动子控制下的待表达的基因之间。在一些可选方式中，DNA间隔区位于所述诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120：gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。
当根据说明书阅读时，“编码(Coding for/encoding)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如多核苷酸(例如基因、cDNA或mRNA)中特定核苷酸序列用作其它大分子(例如确定的氨基酸序列)合成的模板的性质。因此，如果对应于基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其它生物系统中产生蛋白质，则该基因编码该蛋白质。“编码多肽的核酸序列”包括为彼此简并的版本并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。
“生存素(survivin)”也称为含有凋亡重复5(apoptosis repeat-containing 5)或BIRC5的杆状病毒抑制剂，并且当根据说明书阅读时具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于凋亡家族抑制剂成员的蛋白质。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
当根据说明书阅读时，“条件性(conditional)”或“诱导型(inducible)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如包含在诱导物存在的情况下提供基因表达并且在诱导物缺乏的情况下实质上不提供基因表达的启动子的核酸构建体。
当根据说明书阅读时，“组成型(constitutive)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如包含组成型启动子(其组成型提供多肽的表达，所述多肽被连续生产)的核酸构建体。
当根据说明书阅读时，“特异的(specific)”或“特异性(specificity)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如结合伴侣的配体或者配体的结合伴侣的特性，并且可包括用于结合的互补形状、电荷和疏水特异性。结合的特异性可包括立体特异性、区域选择性和化学选择性。在一些可选方式中，提供了制造编码嵌合抗原受体的核酸的方法，以生成编码嵌合抗原受体的核酸，其中，所述嵌合抗原受体特异性结合期望的配体或选择的配体。
当根据说明书阅读时，“TamR-tf”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如三苯氧胺调控的转录因子。不受限制地，三苯氧胺调控的转录因子可包括野生型HEA3、野生型HEA4、突变型HEA3、突变型HEA4和/或RelA变异体。
当根据说明书阅读时，“HEA3”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域，所述肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域(所述三苯氧胺特异性配体结合结构域含有1个氨基酸置换(G521R)，其消除雌二醇的结合但赋予了纳摩尔级雌激素类似物的结合)，所述肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域继而融合至NF-κB(p65)的p65激活结构域。
HEA-3作为一种新型4-羟基三苯氧胺(4-OHT)依赖性调控子已由Roscilli等进行了描述(Molecular Therapy，Vol.6，Issue 5，pp.653-663(2002))，证实了其对小鼠骨骼肌中的基因表达具有长期控制(Roscilli等；以引用的方式将其整体包含在本文中)。
当根据说明书阅读时，“HEA4”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N-末端DNA结合结构域，所述肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N-末端DNA结合结构域框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的三苯氧胺特异性配体结合结构域(所述三苯氧胺特异性配体结合结构域含有3个氨基酸置换(G400V、M543A、L544A)，其消除雌二醇的结合但赋予对雌激素类似物的纳摩尔级灵敏度)，所述所述肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N-末端DNA结合结构域继而融合至NF-κB(p65)的p65激活结构域。
当根据说明书阅读时，“调控(regulate)”或“调节(modulate)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如控制生物过程的行为或者对生物或细胞过程或途径表现出修饰影响或控制影响。
当根据说明书阅读时，“细胞毒性T淋巴细胞”(CTL)具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如在其表面上表达CD8的T淋巴细胞(例如CD8+ T细胞)。在一些可选方式中，此类细胞优选为经抗原刺激过的“记忆”T细胞(TM细胞)。在一些可选方式中，包含本文提供的可选方式的宿主细胞为CTL细胞。
当根据说明书阅读时，“中央记忆(central memory)”T细胞(或“TCM”)具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如在其表面上表达CD62L、CCR-7和/或CD45RO并且相比初始细胞而言不表达CD45RA或具有降低的CD45RA表达的经抗原刺激过的CTL。在一些可选方式中，中央记忆细胞是CD62L、CCR7、CD28、CD127、CD45RO和/或CD95表达阳性的，并且相比初始细胞而言可具有降低的CD54RA表达。本文所用的“效应记忆(effector memory)”T细胞(或“TEM”)是指相比中央记忆细胞而言在其表面上不表达CD62L或具有降低的CD62L表达，并且相比初始细胞而言不表达CD45RA或具有降低的CD45RA的表达的经抗原刺激过的T细胞。在一些可选方式中，相比初始细胞或中央记忆细胞而言，效应记忆细胞对于CD62L和/或CCR7的表达呈现阴性，并且可具有可变的CD28和/或CD45RA表达。在一些可选方式中，包含本文提供的可选系统的宿主细胞为TCM细胞。在本文提供的宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为中央记忆T细胞。
当根据说明书阅读时，“初始”T细胞具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如相比中央记忆细胞或效应记忆细胞而言表达CD62L和/或CD45RA并且不表达CD45RO-的未经抗原刺激过的T淋巴细胞。在一些可选方式中，初始CD8+ T淋巴细胞的特征在于初始T细胞的表型标记(包括CD62L、CCR7、CD28、CD127和/或CD45RA)的表达。在一些可选方式中，包含本文提供的替代系统的宿主细胞为初始T细胞。
当根据说明书阅读时，“效应(effector)”“TE”T细胞具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如相比中央记忆T细胞或初始T细胞而言不表达CD62L、CCR7和/或CD28或具有降低的CD62L、CCR7和/或CD28表达，并且为颗粒酶B和/或穿孔素阳性的经抗原刺激过的细胞毒性T淋巴细胞。在一些可选方式中，包含本文提供的可选系统的宿主细胞为效应T细胞。
当根据说明书阅读时，“富集的(enriched)”和“耗尽的(depleted)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如混合物中细胞类型的量并使所述细胞的混合物经历工艺或步骤，导致“富集的”类型的数量增加和“耗尽的”细胞的数量降低。因此，取决于经历富集工艺的原始细胞群的来源，混合物或组合物可含有60％、70％、80％、90％、95％或99％或更多(以数量或计数计)的“富集的”细胞和/或40％、30％、20％、10％、5％或1％或更少(以数量或计数计)的“耗尽的”细胞。在一些可选方式中，本文提供了用于制备任一可选方式中的宿主细胞的体外方法。所述体外方法包括：a)提供本文所述的任一可选方式中的系统，以及b)将所述系统导入分离的T淋巴细胞群并在体外对各T淋巴细胞群进行扩增。对各T淋巴细胞群进行扩增的工艺是对T淋巴细胞群进行富集的工艺。
当根据说明书阅读时，“表位”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如被免疫系统(包括抗体、T细胞和/或B细胞)识别的抗原或分子的部分。表位通常具有至少7个氨基酸，并且可为线性表位或构象表位。在本文的一些可选方式中，可对抗体或配体结合结构域进行优化，以结合特定表位。本领域技术人员可理解用于对结合进行优化的技术。例如，可通过点突变对配体结合基序进行优化，以增加结合亲和力和/或表位识别。
当根据说明书阅读时，“分离的(isolated)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如已从其自然环境的组分中鉴别并分离和/或回收的各种多肽或核酸。优选地，分离的多肽或核酸与与之天然相关的所有组分无关。其天然环境的污染组分为典型地干扰多肽或核酸的诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。“分离的”也可用于描述细胞亚群的分离，例如在制造供使用的细胞的方法的过程中CD4+ T淋巴细胞和/或CD8+ T淋巴细胞的亚群的分离。
当根据说明书阅读时，“细胞内信号转导结构域”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如提供淋巴细胞的激活的分子(此处的嵌合受体分子)的一个或多个结构域的整体或部分。此类分子的细胞内结构域通过与细胞介质相互作用来介导信号，从而导致增殖、分化、激活和其它效应功能。在一些可选方式中，此类分子包括CD28、CD3或4-1BB的整体或部分，或它们的组合。
当根据说明书阅读时，“配体”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如特异性结合另一物质以形成复合物的物质。配体的实例包括抗原上的表位、结合受体的分子、底物、抑制剂、激素和/或激活剂。如本文所用的“配体结合结构域”是指结合配体的物质或物质的部分。配体结合结构域的实例包括抗体的抗原结合部分、受体的细胞外结构域和/或酶的活性位点。如本文所用的“可操作地连接”是指调控序列和异源核酸序列之间的功能性连接，导致后者的表达。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列处于功能性关系时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则所述启动子可操作地连接至所述编码序列。通常，可操作地连接的DNA序列是连续的，并且在有必要将两个蛋白质编码区连接时位于同一读码框中。
当根据说明书阅读时，“肿瘤特异性分子”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如由肿瘤表达的肿瘤典型的抗原、蛋白或分子。在本文所述的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子为CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2或MAGE A3 TCR，或它们的组合。
当根据说明书阅读时，“病毒分子”或“病毒特异性分子”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如由病毒RNA或DNA编码的蛋白质、或由对病毒感染起反应的细胞表达的分子。在本文所述的一些可选方式中，病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。
将关于本文所鉴别的嵌合受体多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列一致性”定义为对序列进行比对并且引入缺口(如果必要的话，以实现最大百分比序列一致性)后，候选序列中与配体结合结构域、间隔区、跨膜结构域和/或淋巴细胞激活结构域各自的参比序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，并且不考虑任何保守置换作为序列一致性的部分。用于确定百分比氨基酸序列一致性的比对可以本领域技术内的各种方式(例如使用公众可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件)实现。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。例如，使用WU-BLAST-2计算机程序[Altschul等，Methodsin Enzymology，266：460-480(1996)；以引用的方式并入本文]生成的％氨基酸序列一致性值使用几个搜索参数，其中大多数被设置为默认值。未设置为默认值的参数(即可调参数)用以下值设置：重叠跨度＝1，重叠分数＝0.125，字阈值(T)＝11以及评分矩阵＝BLOSMM62。通过将(a)由WU-BLAST-2确定的感兴趣的对照氨基酸序列与参比嵌合受体序列的多肽氨基酸序列的每个或全部之间的一致相同的氨基酸残基的数量除以(b)感兴趣的多肽的氨基酸残基总数，来确定％氨基酸序列一致性值。在一些可选方式中，所述氨基酸或核酸的序列一致性百分比由计算机软件确定。
“实质上纯化的”是指具有10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％或更少的其它分子类型或其它细胞类型的分子。实质上纯化的细胞也指已从通常在其天然存在状态下与之相关联的其它细胞类型中分离的细胞。在一些情况下，实质上纯化的细胞的群指同质的细胞群。
当用于提及正常细胞上肿瘤抗原或其它分子的存在时，“实质上未发现”是指具有所述抗原或分子的正常细胞类型的百分比，和/或细胞上所述抗原的密度。在一些可选方式中，实质上未发现意味着与在肿瘤细胞或其它疾病细胞上发现的细胞或抗原的量相比，以50％以下的密度和/或在低于50％的正常细胞类型上发现所述抗原或分子。
当根据说明书阅读时，“T细胞”或“T淋巴细胞”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如，可为来自任何哺乳动物(优选灵长类动物，物种，包括猴、狗和/或人)的T细胞。在本文提供的宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为T细胞，其中，所述T细胞为与接受受试者同种异体(来自相同物种但不同的供体)的T细胞；在一些可选方式中，所述T细胞是自体的T细胞(供体和接受者是同一个)；在一些可选方式中，所述T细胞是同基因的(syngeneic)(供体和接受者不同但为同卵双胞胎)。
当根据说明书阅读时，“载体(vector)”或“构建体(construct)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如，用于将异源核酸导入细胞的核酸，所述核酸具有调控元件以提供该异源核酸在细胞中的表达。载体包括但不限于质粒、微环(minicircles)、酵母、转座子和病毒基因组。在一些可选方式中，所述载体为质粒、微环、酵母、转座子或病毒基因组。在一些可选方式中，所述转座子为piggy bac转座子。在本文提供的系统的一些可选方式中，所述第一核酸和/或第二核酸位于载体上。在一些可选方式中，所述载体为病毒载体。
当根据说明书阅读时，“转基因(transgene)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如天然地或通过许多遗传工程技术中的任一种从一个有机体转移至另一有机体的基因或遗传物质。在本文所述的一些可选方式中，提供了用于转基因在细胞中的诱导型表达的系统，所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至编码所述转基因的第一多核苷酸，以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的药剂量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物。在一些可选方式中，所述转基因编码调控T细胞的蛋白。
病毒载体可用于将遗传物质递送至细胞中。载体的递送可通过转导进行，并且该技术是本领域技术人员已知的。在本文的一些可选方式中，用于将核酸导入细胞的载体是腺病毒病毒载体或慢病毒病毒载体。
当根据说明书阅读时，“微环”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如已从原核载体组分中释放或放出的小环状质粒衍生物。微环可用作表达载体，其中已将它们用作用于哺乳动物细胞的遗传修饰的转基因运载体，其优点在于，由于它们不含细菌DNA序列，因此不太可能被认为是外来的并加以破坏。因此，典型的转基因递送方法涉及含有外来DNA的质粒。较小尺寸的微环也扩展了其克隆能力并且促进其向细胞中的递送。不受限制地，微环的制备可遵循两步程序，其可包括在大肠杆菌(E.coli)中亲本质粒(具有真核插入物的细菌质粒)的产生，以及在该过程结束(但仍在细菌中)时位点特异性重组酶的诱导。这些步骤之后可通过在插入物两端处的两个重组酶-靶序列切除原核载体部分，并通过毛细管凝胶电泳(CGE)回收所产生的微环(用于受体细胞的高效修饰的运载工具)和极微质粒(miniplasmid)。
可通过转染、电穿孔或本领域技术人员已知的其它方法将纯化的微环转移至接受者细胞中。传统的微环可能缺乏复制起点，因此它们不能在靶细胞内复制，并且所编码的基因将随着细胞分裂而消失(这可能是优点也可能是缺点，取决于应用是否需要持续表达或瞬时表达)。一些可选方式利用基因递送多核苷酸以将核酸稳定插入基因中，其中，在所述基因递送多核苷酸中用于插入的核酸的两侧为反向末端重复基因序列，并且其中，所述基因递送多核苷酸为可选择的。在一些可选方式中，所述基因递送多核苷酸为微环。
含有转座子系统(如Sleeping Beauty(SB)或piggyBac)的质粒提供了非病毒方法，用于将基因稳定地导入T细胞。最近，piggyBac系统被用于通过多个转座子的递送来产生表达多种感兴趣的转基因的稳定转染的哺乳动物细胞。已将SB系统(其最先由Ivics和同事再激活以用于哺乳动物细胞用途)用作T细胞免疫疗法临床试验中的基因递送形式。与γ-逆转录病毒和慢病毒载体相比，通过SB进行的基因整合对转录单元以及其调控序列的偏好较弱，并且因此被认为更安全。在本文所述的一些可选方式中，考虑了通过包含Sleeping Beauty系统的微环进行的遗传修饰。在本文所述的一些可选方式中，考虑了通过包含piggyBac系统的微环进行的遗传修饰。在本文所述的一些可选方式中，考虑了通过包含Sleeping Beauty系统的微环进行的遗传修饰。
当根据说明书阅读时，“凋亡(apoptosis)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如可在多细胞有机体中发生的程序性细胞死亡(PCD)的过程。生物化学事件导致特征性细胞变化(形态学)和死亡。这些变化包括起泡(blebbing)、细胞收缩、核碎裂、染色质凝聚和染色体DNA片段化。在凋亡中，细胞响应于应激而启动细胞内凋亡信号转导，其可导致细胞自杀。糖皮质激素对核受体的结合、热、辐射、营养缺乏、病毒感染、缺氧以及增加的细胞内钙浓度(例如通过膜的损伤)都可通过受损的细胞触发细胞内凋亡信号的释放。许多细胞组分(如聚ADP核糖聚合酶)也可帮助调控凋亡。
在通过酶使细胞死亡的实际过程突然发生之前，凋亡信号必须使调控蛋白启动凋亡途径。该步骤允许凋亡信号导致细胞死亡或者使该过程停止(如果细胞不再需要死亡的话)。涉及几种蛋白质，但已鉴别出了两个主要的调控方法：靶向线粒体功能或经由衔接蛋白直接将信号转导至凋亡机制。在若干毒素研究中鉴别出的另一外在起始途径是由药剂活性引起的细胞内钙浓度的增加，其也可经由钙结合蛋白酶钙蛋白酶(calpain)引起凋亡。
可通过许多因子来调节凋亡。这些因子可包括但不限于可表达以下的基因：IL-2、IL-7、IL-15、趋化因子受体、Bcl2、CA-Akt、dn-TGFβRIII、dn-SHP1/2和/或PD-1CD28嵌合体。IL-15调控T细胞和自然杀伤细胞的激活和增殖。在啮齿动物淋巴细胞中，证实了IL-15通过诱导凋亡抑制剂BCL2L1/BCL-X(L)来防止凋亡。在患有乳糜泻的人中，IL-15通过诱导Bcl-2和/或BCL-xL类似地阻抑T淋巴细胞中的凋亡。Bcl-2(B细胞淋巴瘤2)(由BCL2基因在人中编码)是通过诱导其(促凋亡)或抑制其(抗凋亡)来调控细胞死亡(凋亡)的调控子蛋白Bcl-2家族的创始成员。Bcl-2被明确认为是重要的抗凋亡蛋白，因此被分类为癌基因(oncogene)。蛋白激酶B(PKB)(也称为Akt)是丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，其在多种细胞过程(例如葡萄糖代谢、凋亡、细胞增殖、转录和细胞迁移)中起关键作用。在一些可选方式中，提供了用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统，其中，所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述控凋亡或调节检查点信号转导的多肽包括IL-2、IL-7、IL-15，趋化因子受体、Bcl2、CA-Akt、dn-TGFβRIII、dn-SHP1/2或PD-1CD28嵌合体。
当根据说明书阅读时，“检查点信号转导(checkpoint signaling)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如在特定转变点(transition points)和/或检查点封阻细胞周期，以确保细胞周期事件以正确的顺序发生。检查点信号转导也可被激活。作为示例并且不受限地，检查点信号转导可通过DNA的损伤而发生，以使得细胞周期不必发生，直到损伤被修复。“细胞周期检查点”是真核细胞中的控制机制，其确保细胞适当的分裂。每个检查点用作沿细胞周期的潜在停止点，在此期间对细胞的状况进行评估，当满足有利状况时，通过细胞周期的各阶段而发生进展。目前有3个已知的检查点：G1检查点(也称为限制检查点或启动检查点)、G2/M检查点和中期检查点(也称为纺锤体检查点)。阻止细胞周期转变和/或在应激后诱导细胞死亡的生物化学途径称为细胞周期检查点。这些检查点保持DNA复制、修复和分裂的精确。可调控检查点信号转导的多肽可包括但不限于p53、p107、p130和转录抑制子Rb。在本文提供的系统的一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的多肽包括p53、p107、p130或转录抑制子Rb。
当根据说明书阅读时，“负向检查点调控子(negative checkpoint regulators)”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如可限制T细胞应答能力以有效攻击肿瘤的因子。它们也被称为负向检查点信号转导。在一些可选方式中，提供了用于转基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的多肽为包括PD-1、VISTA、LAG-3或TIM3在内的负向检查点调控子。在一些可选方式中，该系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。
在另一实例中，介导上游信号转导通路的生长抑制诱因的细胞周期抑制剂，Cip/Kip家族p21Cip1、p27Kip1和p57Kip2的细胞周期蛋白-CDK抑制剂已成为具有超出细胞周期调控的功能的多层面蛋白。除调控细胞周期外，Cip/Kip蛋白还可在凋亡、转录调控、细胞命运决定、细胞迁移和细胞骨架动力学中发挥重要作用。复杂的磷酸化网络通过改变它们的亚细胞定位、蛋白质-蛋白质相互作用和稳定性来调控Cip/Kip蛋白功能。在从胚胎发育到肿瘤阻抑的过程中，这些功能对于维持正常细胞和组织稳态是必要的。在一些可选方式中，提供了用于转基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，提供了用于转基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统。在用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统的一些可选方式中，所述多肽调节检查点信号转导。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的多肽抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
当根据说明书阅读时，“T细胞前体”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如可迁移至胸腺并成为T细胞前体(其不表达T细胞受体)的淋巴样前体细胞。所有T细胞起源于骨髓中的造血干细胞。来自造血干细胞的造血祖细胞(淋巴祖细胞)聚居于胸腺并通过细胞分裂扩增，以生成大群的未成熟胸腺细胞。最早的胸腺细胞既不表达CD4也不表达CD8，并且因此被归类为双阴性(CD4-CD8-)细胞。随着它们的发育进展，它们成为双阳性胸腺细胞(CD4+CD8+)，并最终成熟为单阳性(CD4+CD8-或CD4-CD8+)胸腺细胞，然后从胸腺释放到外周组织。
约98％的胸腺细胞在胸腺发育过程中因未通过阳性选择或阴性选择而死亡，而另外2％的胸腺细胞生存，并且离开胸腺而成为成熟的免疫活性T细胞。
前体T细胞的双阴性(DN)阶段集中于产生功能性β-链，而双阳性(DP)阶段集中于产生功能性α-链，最终产生功能性αβT细胞受体。随着发育中的胸腺细胞通过四个DN阶段(DN1、DN2、DN3和DN4)进展，T细胞表达不变的α-链，但对β-链基因座进行了重排。如果经重排的β-链与不变的α-链成功配对，产生停止β-链的重排(并且使可选的等位基因沉默)并引起细胞增殖的信号。尽管这些信号在细胞表面需要这种前TCR，它们依赖于结合前TCR的配体。然后这些胸腺细胞将同时表达CD4和CD8，并进展至双阳性(DP)阶段，其中发生α-链的选择。如果经重排的β-链不导致任何信号转导(例如由于不能与不变的α-链配对)，细胞可能因忽略(缺乏信号转导)而死亡。
当根据说明书阅读时，“造血干细胞”或“HSC”具有其简单和普通的含义，并且可包括但不限于例如可产生骨髓细胞(例如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、红细胞、巨核细胞/血小板、树突细胞和淋巴谱系(例如T细胞、B细胞、NK细胞))的前体细胞。HSC具有其中存在三类干细胞的异质群体，其通过它们在血液中的淋巴样后代与骨髓样后代的比(L/M)来区别。在本文所述的一些可选方式中，提供了包含本文所述任一可选方式的系统的宿主细胞。在本文提供的宿主细胞的一些可选方式中，所述宿主细胞为造血干细胞。
本公开提供了具有用于转基因表达的诱导型成分和用于转基因表达的组成型成分的系统。可对该系统进行定制，以提供一种或多种转基因的调控表达，从而在转导的细胞中提供功能特征。
尽管T细胞(CAR-T)过继疗法临床试验(表达嵌合抗原受体的T细胞)可现出强有力的抗肿瘤活性，但例如通过植入诱导的细胞因子风暴(细胞因子释放综合征)、肿瘤溶解综合征(TLS)以及持续存在的B细胞血细胞减少症(其中每一种都可归因于组成型表达的CAR的不受调控的功能性输出)可使显著的毒性产生。在一些患者中，此类毒性可能预示限制CAR-T细胞过继疗法的适用性。使用转基因修饰的过继T细胞免疫疗法的临床试验已对可组成性表达该转基因或总是处于“ON”状态的T细胞进行了测试，在很大程度上有助于转基因相关的副作用。消除CAR-T细胞的方法(例如自杀基因介导的CAR-T细胞的消除)例如可减轻此类毒性；然而，这种方法有抗肿瘤活性过早衰减的风险，并且可显著影响治疗潜力。
目前的小分子调控的转基因表达技术依赖于多种药剂输入，其包括例如大环内酯类、蜕皮激素类和雷帕霉素类似物。然而，由于毒性脱靶效应、不利的生物分布和药效学谱、有限的输出动态范围和/或作为FDA批准的商业上可获得的药品的有限的实用性，这些药剂的使用可能受到限制。此外，这些系统中的许多使用由异种(xenogeneic)组分构建的嵌合转录调控子，因此当将这些系统应用于人治疗学时导入了免疫原性的复杂化。
小分子调控的转基因表达是生物医学中(特别是在CAR T细胞免疫疗法中)特别寻求的技术。竞争系统通常使用目前尚未获得FDA批准的药剂诱导物和由异种结构域组成的嵌合转录因子。
因此，需要确定用于控制嵌合受体表达(其对于治疗活性是重要的)的方法以及将提供增强的体内功效和生存同时使诱导嵌合抗原受体表达的药剂的不良副作用最小化的细胞群。还需要对用于细胞疗法的细胞进行调节(例如用于对重组抗原受体(如CAR)和/或由此类细胞表达的其它分子的表达进行调节)的表达系统和方法，例如以改善治疗活性、增强体内功效和/或生存和/或使不良副作用最小化。本文面熟了令人惊讶地导致体内治疗功效和生存增强并具有最小化的不良副作用的方法。
在一些可选方式中，提供了在诱导型启动子控制下的转基因。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体(CAR)。诱导型启动子提供了终止细胞中CAR表达的能力，同时在稍后的日期(例如在复发的情况下)提供细胞的再激活。此外，CAR T细胞通过on和off期间的循环可使由于T细胞受体的慢性刺激引起的耗竭和/或失能最小化。
在一些可选方式中，基因在诱导型启动子的控制下。在一些可选方式中，所述基因编码嵌合细胞因子受体。
载体的设计还提供了另外的转基因，所述转基因可增强所转导的细胞的一种或多种功能特征，例如所转导的细胞的肿瘤效力、生存和增殖增强。在一些可选方式中，这些转基因在诱导型启动子的控制下。此类转基因不受限地包括促进生存和增殖的基因、防止凋亡的基因和调控检查点信号转导的基因。此类基因包括编码以下的基因：IL-2、IL-15、趋化因子受体、Bcl2、CA-Akt、dn-TGFβRIII、dn-SHP1/2和/或PD-1CD28嵌合体。在一些可选方式中，所述转基因为编码以下的基因：IL-2、IL-7、IL-15、趋化因子受体、Bcl2、嵌合细胞因子受体、CA-Akt、dn-TGFβRIII、dn-SHP1/2和/或PD-1CD28嵌合体。在一些可选方式中，调节检查点信号转导的基因编码抑制负向检查点调控子的多肽。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG一3和/或TIM3。在一些可选方式中，所述基因在诱导型启动子的控制下。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：88中所示的核酸序列(CCR(CD122)核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列编码SEQ ID NO：89中所示的氨基酸序列(CCR(CD122)氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：89的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：90中所示的核酸序列(PD1ECD-IFNα核苷酸序列核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列编码SEQ ID NO：91中所示的氨基酸序列(PD1ECD-IFNα氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：91的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：92中所示的核酸序列(STAT5a核苷酸序列： ).。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列编码SEQ ID NO：93中所示的氨基酸序列(STAT5a氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQ IDNO：93的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：94中所示的核酸序列(持续激活的-STAT5a核苷酸序列： )。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列编码SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列(持续激活的-STAT5a氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：95的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：96中所示的核酸序列(显性阴性TGFbRII核苷酸序列： ).。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列编码SEQ ID NO：97中所示的氨基酸序列(显性阴性TGFbRII氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：97的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：98中所示的核酸序列(显性阴性SHP1核苷酸序列： )
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列编码SEQ ID NO：99中所示的氨基酸序列：显性阴性SHP1氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：99的核酸序列的核酸序列编码。
在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因包含SEQ ID NO：100中所示的核酸序列(PD1TM-MyD88核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的基因编码SEQ ID NO：101中所示的氨基酸序列(PD1TM-MyD88氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述在诱导型启动子的控制下的序列由包含编码氨基酸序列SEQID NO：101的核酸序列的核酸序列编码。
本公开提供了包含第一核酸和第二核酸的系统，以及包含此类核酸的载体和宿主细胞。第一核酸和第二核酸中的每个包含许多模块化组分，所述模块化组分可被切除并且可用其它组分替换来定制用于特定靶细胞的系统。在一些可选方式中，所述第一核酸包含诱导型启动子，以用于根据需要以开启(on)和关闭(off)的方式控制所述基因(例如，编码嵌合抗原受体的多核苷酸)的表达，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在其它可选方式中，所述第二核酸包含提供转录激活剂的表达的组成型启动子。在一些可选方式中，所述基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，所述基因编码嵌合抗原受体和转录激活剂(由一个质粒编码)。
诱导系统
本公开提供了用于在细胞(例如哺乳动物细胞)中提供转基因的调控表达的系统。此类转基因包括但不限于T细胞受体、亲和力成熟的T细胞受体、嵌合抗原受体、趋化因子受体、嵌合趋化因子受体、细胞因子、抑制凋亡的基因和/或调节检查点信号转导的基因。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的多肽抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。在一些可选方式中，所述系统包含许多模块化组分，所述模块化组分提供容易的所述核酸的元件的置换。在所述系统的一些可选方式中，所述系统提供对细胞(例如哺乳动物细胞)中转基因表达的调控，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述转基因编码T细胞受体、亲和力成熟的T细胞受体、嵌合抗原受体、趋化因子受体、嵌合趋化因子受体、细胞因子、调控凋亡的基因和/或调节检查点信号转导的基因。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的基因编码抑制负向检查点调控子的多肽。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
在一些可选方式中，提供了用于转基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统包含：第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的任何其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子或诱导型启动子。
在一些可选方式中，编码嵌合抗原受体的多核苷酸包含：编码配体结合结构域的多核苷酸，其中，所述靶分子为肿瘤特异性抗原；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区任选地为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，如本文所述，表达载体包含第一核酸和/或第二核酸。本文还包括由嵌合受体核酸的整体或部分编码的多肽。
在其它可选方式中，第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至编码以下基因的多核苷酸：促进细胞生存和增殖的基因、调控凋亡的基因、和/或调节检查点信号转导的基因。此类基因包括编码以下的基因：IL-2、IL-7、IL-15、趋化因子受体、嵌合趋化因子受体、Bcl2、CA-Akt、dn-TGFβRIII、dn-SHP1/2和/或PD-1CD28嵌合体。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的基因编码抑制负向检查点调控子的多肽。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。
诱导型启动子
系统包含第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子。通过利用诱导型启动子，可开启和关闭转基因表达，以避免毒性副作用和/或使细胞在缓解期间休息。诱导型启动子系统的另一目的是通过开启使T细胞功能增强的基因来改善抗肿瘤功效。尽管已知几种诱导型启动子系统，由于毒性脱靶效应、不利的生物分布和药效学谱、有限的输出动态范围和/或作为FDA批准的商业上可获得的药品的有限的实用性，这些系统的临床适用性受到限制。此外，这些系统中的许多使用由异种组分构建的嵌合转录调控子，因此当将这些系统应用于人治疗学时导入了免疫原性的复杂性。在一些可选方式中，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码经优化的间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域。
在一些可选方式中，第一启动子可由药剂诱导。基于安全记录、有利的药代动力学谱、组织分布、细胞外间隙和胞浆间的低分配系数、低免疫原性、低毒性和/或在淋巴细胞中的高表达来选择所述药剂。在具体的可选方式中，选择经FDA批准的、提供在淋巴细胞中的转基因表达、不激活其它不期望的基因表达并诱导不含任何异种组分的启动子的药剂。在一些可选方式中，所述诱导型启动子由与药剂相互作用的转录激活剂激活。在所述药剂存在的情况下，所述转录激活剂被激活或者能够结合并激活诱导型启动子。
药剂的具体可选方式是结合转录激活剂的雌激素受体配体结合结构域的药剂。在一些可选方式中，所述药剂包括三苯氧胺、其代谢物、类似物、以及其药学上可接受的盐和/或水合物或溶剂合物。在一些可选方式中，所述药剂包括三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。
用于本文所述的一些方法的三苯氧胺(CAS RN：10540-29-1)也被称为2-(4-(1Z)-1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基)-N，N-二甲基-乙胺，或(Z)-2-(对-(1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基)-N，N-二甲胺(IUPAC)，具有分子式C26H29NO以及371.52g/mol的分子量(M.W.)。三苯氧胺是具有组织特异性活性的选择性雌激素受体调节子。三苯氧胺在乳房组织中作为抗雌激素剂(抑制试剂)起作用，但在胆固醇代谢、骨密度和子宫内膜中的细胞增殖中作为雌激素(刺激试剂)起作用。三苯氧胺经常作为药学上可接受的盐口服给予。例如，指出三苯氧胺柠檬酸盐(RN 54965-24-1，M.W.563.643)用于转移性乳腺癌的治疗，并且作为乳房腋下切除术和乳房照射后的女性乳腺癌治疗的辅助剂。还指出三苯氧胺柠檬酸盐用于减少乳腺癌高风险女性的乳腺癌发病率。
在本文所述的一些方法中有用的大鼠、小鼠和人乳腺癌患者中三苯氧胺的代谢物包括主要代谢物N-去甲基三苯氧胺(RN 31750-48-8，M.W.357.494)和4-羟基三苯氧胺(4-OHT)(RN 68392-35-8，M.W.387.52，阿非昔芬(Afimoxifene))，并且在Robinson等(Metabolites，pharmacodynamics，and pharmacokinetics of tamoxifen in rats andmice compared to the breast cancer patient.Drug Metab Dispos January 1991 19：36-43；以引用的方式整体并入本文)中公开。用于本文所述的一些方法中的另外的细胞色素P-450代谢物包括如Crewe等(Metabolism of Tamoxifen by recombinant humancytochrome P-450 enzymes：Formation of the 4-hydroxy，4’-hydroxy and N-desmethyl metabolites and isomerization of trans-4-hydroxytamoxifen，DrugMetab Dispos，30(8)：869-874，2002，FIG.1；以引用的方式整体并入本文)中公开的顺-4-羟基三苯氧胺(RN174592，M.W.387.52；阿非昔芬，E-异构体)和4′-羟基三苯氧胺((Z)-4-(1-(1-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)-1-苯基丁-1-烯-2-基)苯酚)。
用于本文所述的一些方法中的与三苯氧胺具有结构相似性的化合物包括但不限于：顺-三苯氧胺(RN 13002-65-8，M.W.371.521)；4-甲基三苯氧胺(RN 73717-95-5，M.W.385.548)；N-去甲基三苯氧胺(RN 31750-48-8，M.W.357.494)；(Z)-去甲基甲基三苯氧胺(RN 15917-50-7，M.W.357.494)；(E)-去甲基甲基三苯氧胺(RN 31750-45-5，M.W.357.494)；反-4-羟基三苯氧胺(RN 68047-06-3，M.W.387.52)；阿非昔芬(RN 68392-35-8，M.W.387.52，4-羟基三苯氧胺)；阿非昔芬，E-异构体(RN 174592-47-3，M.W.387.52)；4-氯三苯氧胺(RN 77588-46-6，M.W.405.966)；4-氟三苯氧胺(RN 73617-96-6，M.W.389.511)；托瑞米芬(RN 89778-26-7，M.W.405.966)；去乙基三苯氧胺(RN 19957-51-8，M.W.343.47)；(E)-去乙基三苯氧胺(RN 97151-10-5，M.W.343.47)；(Z)-去乙基三苯氧胺(RN 97151-11-6，M.W.343.47)；米泼昔芬(Miproxifene)(RN 129612-87-9，M.W.429.6)；2-(对-(β-乙基-α-苯基苯乙烯基)苯氧基)三乙胺(RN 749-86-0，M.W.399.575)；屈洛昔芬(Droloxifene)(RN 82413-20-5，M.W.387.52)；4-碘-三苯氧胺(RN 116057-68-2，M.W.497.413)；二氢三苯氧胺(RN 109640-20-2，M.W.373.537)；(E)-N，N-二甲基-2-(4-(1-(2-甲基苯基)-2-苯基-1-丁烯基)苯氧基)乙胺(RN 97150-96-4，M.W.385.548)或4-羟基托瑞米芬(RN 110503-62-3，M.W.421.965)；和/或它们药学上可接受的盐和/或水合物或溶剂合物。
例如，用于本文所述的一些方法中的三苯氧胺的柠檬酸盐或与三苯氧胺具有结构相似性的化合物的柠檬酸盐包括但不限于：三苯氧胺柠檬酸盐(RN 54965-24-1，MW563.64)；2-(对-(1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基)-N，N-二甲基乙胺柠檬酸盐(RN 7244-97-5，563.64)；(E)-三苯氧胺柠檬酸盐(RN 76487-65-5，M.W.563.64)；托瑞米芬柠檬酸盐(RN89778-27-8，MW 598.088)；屈洛昔芬柠檬酸盐(RN 97752-20-0，MW 579.64)；2-(对-(1，2-双(对甲氧基苯基)-1-丁烯基)苯氧基)三乙胺柠檬酸盐(RN 42920-39-8，M.W.651.748)；2-(4-(1，2-二苯基乙烯基)苯氧基)-N，N-二乙基乙胺2-羟基-1，2，3-丙烷三羧酸盐(RN40297-42-5，M.W.563.643)；2-(对-(α-苯基苯乙烯基)苯氧基)三乙胺柠檬酸盐(RN102433-95-4，M.W.563.64)；2-(对-(2-(对甲氧基苯基))-1-苯基-1-丁烯基)苯氧基)三乙胺柠檬酸盐(1：1)(RN 42824-34-0，M.W.637.72)；2-(对-(1-(对甲氧基苯基)-2-苯基丙烯基)苯氧基)三乙胺柠檬酸盐(RN 13554-24-0，M.W.607.696)；2-(对-(α-(对甲氧基苯基)苯乙烯基)苯氧基)三乙胺柠檬酸盐一水合物(RN 13542-71-7，M.W.593.669)；2-(对-(对甲氧基-α-苯基苯乙基)苯氧基)三乙胺柠檬酸盐(RN 16421-72-0，M.W.595.685)；α-(对-(2-(二乙基氨基)乙氧基)苯基)-β-乙基-对-甲氧基-α-苯基苯乙基醇柠檬酸盐(1∶1)(RN 35263-93-5，MW 639.737)；1-(对-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-2-(对甲氧基苯基)-1-苯基乙醇柠檬酸盐(MW 611.68)；α-对-(2-(二乙基氨基)乙氧基)苯基)-β-乙基-α-(对羟基苯基)-对甲氧基苯乙基醇柠檬酸盐(RN 35263-96-8，MW 655.737)；和/或2-(对-(对甲氧基-α-甲基苯乙基)苯氧基)-三乙胺柠檬酸盐(RN 15624-34-7，MW 533.614)。
在一些可选方式中，用于诱导表达的所述药剂的有效量是在未经诱导和/或基础表达水平上提供转基因表达增加的量。在一些可选方式中，使用所述药剂的已知剂量和药代动力学谱容易地确定该量。在本文提供的系统中，其中，所述系统可由药剂诱导，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导。
在一些可选方式中，所述诱导型启动子具有低水平的基础活性。当使用慢病毒载体时，相比对细胞进行诱导以表达基因时，未经诱导的细胞中的基础活性水平为20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％、1％或更低或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意水平的基础活性。基础活性水平可通过在缺乏诱导物(例如药剂)的情况下使用流式细胞术测量转基因(例如标记基因)的表达量来确定。
在一些可选方式中，与未经诱导的活性或基础活性相比，诱导型启动子提供高水平的诱导活性。在一些可选方式中，诱导状态下的活性水平为未经诱导状态下的活性水平的2倍、4倍、6倍、8倍或10倍或更高。在一些可选方式中，在缺乏反式激活剂的情况下，诱导型启动子的控制下的转基因表达在小于10天、8天、6天、4天、2天或1天(不包括0天)后关闭。
在一些可选方式中，可对诱导型启动子进行设计和/或修饰，以提供低水平的基础活性、高水平的诱导性和/或短时间的可逆性。在一些可选方式中，所述诱导型启动子为7xHBD/mE1b启动子。启动子的示例性序列示于SEQ ID NO：23中(SEQ ID NO：23；tagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaatagttaataatctacaagagctcagggtatataatg)。例如，在7xHBD/mE1b启动子中，可进行突变以增强转录激活剂的结合。在一些可选方式中，DNA间隔区位于所述诱导型启动子和所述转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。
在一些可选方式中，所述系统采用合成的转录激活剂，所述转录激活剂在药剂(例如三苯氧胺)存在的情况下结合转基因上游的合成启动子以诱导表达。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3。示例性氨基酸序列示于SEQ ID NO：1中 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：1的核酸序列的核酸。雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域存在于TamR-tf的氨基酸282-595处，并且在位置521处具有突变。NF-κB(p65或TAD)的p65激活结构域存在于氨基酸596-862处。SEQ ID NO：1包含ER-LBD中的一个点突变，该点突变消除与内源性雌激素的结合，但赋予对4-OHT、氟维司群和其它雌激素类似物的纳摩尔级特异性。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子包含至少一个点突变，所述至少一个点突变消除与内源性雌激素的结合，但赋予对三苯氧胺代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群和其它雌激素类似物的纳摩尔级特异性。在一些可选方式中，所述一个点突变位于野生型HEA3的序列的位置521处。在一些可选方式中，所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1中所示的序列 SEQ ID NO：1包含ER-LBD中的一个点突变，所述点突变消除与内源性雌激素的结合，但赋予对4-OHT、氟维司群和其它雌激素类似物的纳摩尔级特异性。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子在p65结构域中包含增强转录活性至少一个点突变。在一些可选方式中，所述点突变位于野生型HEA3的序列的位置846(RelA蛋白中的位置536，其对应于HEA3中的位置846)。在一些可选方式中，氨基酸序列包含SEQ ID NO：2中所示的序列(SEQ ID NO：2； )。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：2的核酸序列的核酸。SEQ IDNO：2包含HEA3中的点突变，在p65结构域中所述点突变增强转录活性，并且被称为HEA3(p65/S536E)。RelA蛋白中的位置p65/S536E对应于野生型HEA3和野生型HEA4中的位置846。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子在p65结构域中包含增强转录活性至少一个点突变。在一些可选方式中，所述点突变位于野生型HEA3的序列的位置621(这为WT RelA蛋白的位置310)。在一些可选方式中，所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：3中所示的序列(SEQID NO：3； ).。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：3的核酸序列的核酸。SEQ IDNO：3包含在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的K310Q位置)的HEA3序列。其被称为HEA3(p65/K310Q)。K310Q指RelA的位置310。因此，该位置对应于WTHEA3和WT HEA4的位置621。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子在雌激素受体配体结合结构域中包含至少3个点突变，所述至少3个点突变消除与内源性雌激素的结合，并赋予对CMP8和4-羟基三苯氧胺的纳摩尔级灵敏度。在一些可选方式中，所述点突变位于野生型HEA3的序列的位置384、421和521。在一些可选方式中，所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：8中所示的序列(SEQ ID NO：8； )。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：8的核酸序列的核酸。SEQ ID NO：8包含在ER-LBD中含有3个点突变(L384M、M421G、G521R)的HEA3序列，所述3个点突变消除与内源性雌激素的结合，并赋予对CMP8和4-羟基三苯氧胺的纳摩尔级灵敏度。其被称为CMP8-HEA3。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子为CMP8响应性HEA3转录因子。在一些可选方式中，所述CMP8响应性HEA3转录因子在p65结构域中包含增强转录活性的至少一个点突变。在一些可选方式中，所述点突变位于CMP8响应性HEA3的序列的位置846(RelA蛋白中的位置536，其对应于HEA3中的位置846)。在一些可选方式中，所述氨基酸序列包含SEQ IDNO：9中所示的序列(SEQ ID NO：9； )。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：9的核酸序列的核酸。SEQ ID NO：9为在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(S536E)的CMP8-HEA3序列。其被称为CMP8-HEA3(RelA蛋白中的位置p65/S536E，其对应于HEA3中的位置846)。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子为CMP8响应性HEA3转录因子。在一些可选方式中，所述CMP8响应性HEA3转录因子在p65结构域中包含增强转录活性的至少一个点突变。在一些可选方式中，所述点突变位于RelA蛋白的序列的位置310，其对应于野生型HEA3蛋白和野生型HEA4蛋白的位置621。在一些可选方式中，所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：10中所示的序列(SEQ ID NO：10； ).。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：10的核酸序列的核酸。SEQ ID NO：10为在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的K31OQ位置)的CMP8-HEA3序列。其被称为CMP8-HEA3(p65/K310Q)。RelA蛋白的位置310为野生型HEA3和野生型HEA4的位置621。
在一些可选方式中，所述HEA3转录因子为CMP8响应性HEA3转录因子。在一些可选方式中，所述CMP8响应性HEA3转录因子在p65结构域中包含增强转录活性的至少两个点突变。在一些可选方式中，所述点突变位于野生型HEA3的序列的位置621(RelA蛋白中的位置310对应于野生型HEA3中的位置621)。在一些可选方式中，所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：11中所示的序列(SEQ ID NO：11； ).。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：11的核酸序列的核酸。SEQ ID NO：11包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E是RelA蛋白中的位置，其对应于HEA3和HEA4二者中的位置621(RelA蛋白的K310A)和846(RelA蛋白的S536E))的CMP8-HEA3的序列。其被称为CMP8-HEA3(RelA蛋白中的位置p65/S536E/K310Q，其对应于HEA3和HEA4二者中的位置621和846)。
在一些可选方式中，所述系统采用合成的转录激活剂，所述合成的转录激活剂在药剂存在的情况下结合转基因上游的合成启动子，以诱导表达。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA4。HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和p65结构域。在一些可选方式中，所述HEA4进一步包含HNF1αDNA结合结构域。在一些可选方式中，所述HEA4在ER-LBD中包含至少3个点突变，所述至少3个点突变消除与内源性雌激素的结合，并且赋予了相比野生型HEA3而言对4-羟基三苯氧胺、氟维司群和雌激素类似物更高的灵敏度。在一些可选方式中，所述3个点突变的位置位于HEA4转录因子的位置400、543和544。在一些可选方式中，所述包含至少3个突变的HEA4的氨基酸序列包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列(SEQID NO：4； )。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：4的核酸序列的核酸。SEQ IDNO：4包含在ER-LBD中含有3个点突变(G400V、M543A、L544A)的野生型HEA4的序列，所述3个点突变消除了与内源性雌激素的结合并且赋予了相比野生型HEA3而言对4-羟基三苯氧胺、氟维司群和雌激素类似物更高的灵敏度。
在一些可选方式中，所述HEA4转录因子包含至少一个点突变。在一些可选方式中，所述至少一个突变位于所述p65结构域中并增强转录活性。在一些可选方式中，所述至少一个突变位于所述野生型HEA4转录因子的位置846。在一些可选方式中，所述包含至少一个突变的HEA4的氨基酸序列包含SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：5； ).。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：5的核酸序列的核酸。SEQ IDNO：5包含在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的位置S536E)的HEA4序列。其被称为HEA4(p65/S536E)。突变S536E是指WT RelA的位置536处的突变。该位置转换为HEA3的位置846。突变K310Q是指WT RelA的位置310处的突变。该位置转换为HEA3的位置621。
在一些可选方式中，所述HEA4转录因子包含至少一个点突变。在一些可选方式中，所述至少一个突变位于p65结构域中并增强转录活性。在一些可选方式中，所述至少一个突变位于HEA4转录因子的位置621。在一些可选方式中，所述包含至少一个突变的HEA4的氨基酸序列包含SEQ ID NO：6中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：6； ).。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：6的核酸序列的核酸。SEQ IDNO：6包含在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的K310Q位置)的HEA4序列。其被称为HEA4(p65/K31OQ)。K31OQ是指Re1A中的位置，其对应于WT HEA4中的位置621。
在一些可选方式中，所述HEA4转录因子包含至少两个点突变。在一些可选方式中，所述至少两个突变位于p65结构域中并增强转录活性。在一些可选方式中，所述至少两个突变位于HEA4转录因子的位置846和621。在一些可选方式中，所述包含至少两个突变的HEA4的氨基酸序列包含SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：7； ).。一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：7的核酸序列的核酸。SEQ ID NO：7包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(RelA蛋白中的位置K310Q和S536E)的HEA4序列。其被称为HEA4(RelA蛋白中的位置p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应于HEA4中的位置621；S536E对应于HEA4中的位置846。
本文还考虑了另外的嵌合转录因子。在一些可选方式中，所述HEA4转录因子包含HNF1α、与HEA4相同的ER-LBD、以及代替p65激活结构域核苷酸序列的VP64激活结构域(本文称为HEA4(VP64)，并且由SEQ ID NO：24编码 HEA(VP64))。在一些可选方式中，HEA4(VP64)包含SEQ ID NO：25中所示的氨基酸序列 一些可选方式包含编码SEQ ID NO：25中所示的氨基酸序列的核酸序列。在本文的一些可选方式中，所述嵌合转录因子为HEA4(VP64)，并且由SEQ ID NO：24编码。在一些可选方式中，HEA4(VP64)包含SEQ ID NO：25中所示的氨基酸序列。
在一些可选方式中，HEA4包含HNF1α、与HEA4相同的ER-LBD、以及代替p65激活结构域的HSF1激活结构域。HEA4(HSF-1)包含HNF1α、与HEA4相同的ER-LBD、以及代替p65激活结构域的HSF1激活结构域，并且由SEQ ID NO：26编码 在一些可选方式中，在本文中所述嵌合转录因子为HEA4(HSF-1)，并且由SEQ ID NO：26编码。在一些可选方式中，在本文中所述嵌合转录因子为HEA4(HSF-1)，并且包含SEQ ID NO：27中所示的氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：27的核酸序列的核酸。
在本文的一些可选方式中，所述嵌合转录因子为HEA4(Arnt)。HEA4(Arnt)包含HNF1α、与HEA4相同的ER-LBD以及代替p65激活结构域氨基酸序列的Arnt激活结构域。在一些可选方式中，HEA4(Arnt)由SEQ ID NO：28中所示的序列编码 在一些可选方式中，HEA4(Arnt)包含SEQ ID NO：29中所示的氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：29的核酸序列的核酸。
当根据说明书阅读时，“选择标记盒(selectable marker cassette)”具有其简单和普通的含义，并且可用于例如描述编码“选择标记”并被导入细胞或载体中以赋予人工选择特性的基因。选择标记盒可为可筛选标记(screenable marker)，以允许研究人员区分想要的细胞和不想要的细胞或者富集特定细胞类型。在一些可选方式中，提供了基因递送多核苷酸。在一些可选方式中，所述基因递送多核苷酸包含选择标记盒。如本文所述的选择标记盒编码蛋白质(选择标记)，所述蛋白质用于选择或跟踪蛋白质或具有感兴趣的蛋白质的细胞。在本文所述的可选方式中，本文提供的融合蛋白可包含可在实验(例如流式细胞术)中进行选择的标记序列。在一些可选方式中，所述标记为蛋白Her2tG。
在一些可选方式中，所述选择标记由EGFRt核苷酸序列编码，其中，所述选择标记由SEQ ID NO：30中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述选择标记包含SEQ ID NO：31中所示的EGFRt氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：31的核酸序列的核酸。
在一些可选方式中，所述选择标记由SEQ ID NO：32中所示的Her2t核苷酸序列编码 在一些可选方式中，所述选择标记包含SEQ ID NO：33中所示的Her2t氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：33的核酸序列的核酸。
在一些可选方式中，所述选择标记由SEQ ID NO：34中所示的Her2tG核苷酸序列编码 在一些可选方式中，所述选择标记包含SEQ ID NO：35所示的Her2tG氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：35的核酸序列的核酸。
在一些可选方式中，所述选择标记由SEQ ID NO：36中所示的CD19t核苷酸序列编码 在一些可选方式中，所述选择标记包含SEQ ID NO：37中所示的CD19t氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：37的核酸序列的核酸。
在一些可选方式中，所述选择标记由SEQ ID NO：38中所示的DHFRdm核苷酸序列编码 在一些可选方式中，所述选择标记包含SEQ ID NO：39中所示的DHFRdm氨基酸序列 一些可选方式包含含有编码SEQ ID NO：39的核酸序列的核酸。
在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体的诱导型表达的系统，其中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：编码嵌合抗原受体的第一多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子，其中，所述配体可通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区优选为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；和编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码由药剂诱导的第一启动子的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物。在一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子或诱导型启动子。在一些可选方式中，所述第一启动子包含核酸序列SEQ ID NO：23(SEQ ID NO：23； )。在一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在一些可选方式中，所述病毒载体为慢病毒。在一些可选方式中，所述第一核酸和第二核酸包含载体。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的核酸序列。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的核酸。在一些可选方式中，提供了用于诱导型表达的系统，其中，所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的突变。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少3个突变，其中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的至少一个突变。ER-LBD中的突变影响药剂与受体的结合。在一些可选方式中，所述HEA3进一步包含HNF1αDNA结合结构域。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变，其中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的突变。在一些可选方式中，所述HEA4进一步包含HNF1αDNA结合结构域。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4在ER-LBD中包含3个突变，所述3个突变使得与HEA3相比而言对药剂的灵敏度增强。在一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ IDNo：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子包含SEQ ID No：1中所示的氨基酸序列 SEQ ID NO：1包含在ER-LBD中的一个点突变，所述点突变消除与内源性雌激素的结合，但赋予对4-OHT、氟维司群和其它雌激素类似物的纳摩尔级特异性。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：2中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：2； ).。SEQ ID NO：2包含在HEA3中的点突变，所述点突变在p65结构域中增强转录活性，并被称为HEA3(RelA蛋白中的位置p65/S536E)。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：3； ).。SEQ ID NO：3包含在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的位置K310Q)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/K310Q)。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的至少一个或多个核酸序列编码。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQID NO：8中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：8； ).。SEQ ID NO：8包含在ER-LBD中含有3个点突变(L384M、M421G、G521R)的HEA3的序列，所述3个点突变消除与内源性雌激素的结合，并赋予对CMP8和4-羟基三苯氧胺的纳摩尔级灵敏度。其被称为CMP8-HEA3。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：9； )。SEQ ID NO：9为在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的S536E位置)的CMP8-HEA3的序列。其被称为CMP8-HEA3(RelA蛋白中的位置p65/S536E)。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：10； )。SEQ ID NO：10为在p65结构域中含有增强转录活性的一个点突变(RelA蛋白中的K310Q位置)的CMP8-HEA3的序列。其被称为CMP8-HEA3(RelA蛋白中的位置p65/K310Q)。在一些可选方式中，野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO：11； )。SEQ ID NO：11包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(RelA蛋白中的位置K310Q和S536E)的CMP8-HEA3的序列。其被称为CMP8-HEA3(RelA蛋白中的位置p65/S536E/K310Q)。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的多肽抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。在一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子或诱导型启动子。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，优选其结合片段。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子为CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2或MAGE A3 TCR，或它们的组合。在一些可选方式中，所述系统采用合成的转录激活剂，所述合成的转录激活剂在药剂存在的情况下结合转基因上游的合成的启动子以诱导表达。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺。在一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。
可对转录激活剂进行另外的改变以增加转录因子的性质，不受限地包括修改雌激素受体配体结合结构域中的一个或多个氨基酸和/或修改p65反式激活域中的一个或多个氨基酸。修改雌激素受体结合结构域中的氨基酸可提供更具特异性且灵敏度更高的药剂与转录激活剂的结合。在一些可选方式中，HEA4包含至少3个点突变。例如，突变可在氨基酸位置400、543和544处进行。在一些可选方式中，所述野生型HEA4包含SEQ ID NO：4中所示的序列(SEQ ID NO：4； ).。SEQ ID NO：4包含在ER-LBD中含有3个点突变(G400V、M543A、L544A)的野生型HEA4的序列，所述3个点突变消除至与源性雌激素的结合，并且赋予了相比野生型HEA3而言对4-羟基三苯氧胺、氟维司群和雌激素类似物更高的灵敏度。与野生型HEA3相比，具有修改的序列的转录激活剂对三苯氧胺或4-羟基三苯氧胺、氟维司群和雌激素类似物具有增加的亲和力。修改p65反式激活结构域中的氨基酸可在缺乏转导的细胞的激活的情况下提供增加的转基因表达(SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)。
在缺乏三苯氧胺的情况下，通过胞浆热休克蛋白90(HSP90)与三苯氧胺结合活性位点的结合将TamR-tf从核中排除，并且转基因表达处于“OFF”状态。纳摩尔级浓度的胞浆三苯氧胺在关于ER-LBD结合中主动竞争并超越了HSP90，导致TamR-tf转位至细胞核。核转位后，TamR-tf容易结合至其限制性合成启动子。在三苯氧胺存在的情况下，TamR-tf与7xHBD/mE1B启动子的结合诱导转基因表达的“ON”状态。在一些可选方式中，可对该转录调控子进行修饰，以提供对转基因表达的不同水平的控制。TamR-tf(HEA3)的LBD中的氨基酸置换允许对三苯氧胺及其代谢物的选择性响应性，其中，对于TamR-tf(HEA3)活性，4-羟基三苯氧胺(4-OHT)是最具药理学活性的代谢物，同时缺乏与内源性雌激素的相互作用。
在一些可选方式中，提供了用于转基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统，所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区、优选经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；和第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性且高灵敏度结合所述药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，所述HEA3进一步包含HNF1αDNA结合结构域。ER-LBD中的突变影响药剂与受体的结合。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性且高灵敏度结合所述药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在一些可选方式中，所述HEA4进一步包含HNF1αDNA结合结构域。在一些可选方式中，HEA4包含在ER-LBD中的3个突变，与HEA3相比，所述3个突变增强对药剂的灵敏度。ER-LBD中的突变影响药剂与受体的结合。在一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ IDNo：11和/或SEQ ID No：121中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述HEA3转录因子由SEQ ID NO：12中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：12； ).。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：13中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：13； ).。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQID NO：14中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：14； ).。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：19中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：19； ).。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQID NO：20中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：20； ).。一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：21中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：21； ).。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQID NO：22中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：22； ).。在一些可选方式中，野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ IDNo：4-SEQ ID No：7中所示的至少一个或多个氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：15； )。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ IDNO：16中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：16； ).。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQID NO：17中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：17； )。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ IDNO：18中所示的核酸序列编码(SEQ ID NO：18； ).。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。
在一些可选方式中，所述诱导型启动子在慢病毒构建体和/或淋巴细胞中起作用。
嵌合抗原受体
对药剂配体具有增强的灵敏度的用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统包含：由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区、优选经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统相比利用野生型HEA3的系统而言，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在其它可选方式中，编码嵌合抗原受体的另外的多核苷酸在组成型启动子的控制下。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。
配体结合结构域
在一些可选方式中，所述嵌合受体核酸包含编码配体结合结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述配体结合结构域特异性结合肿瘤、病毒分子或在靶标或者在靶细胞群或所选的细胞群上表达的其它分子，并且可对所述配体结合结构域进行人源化。在一些可选方式中，配体结合结构域不受限地包括受体或其部分、小肽、肽模拟物(peptidomimetics)、底物、细胞因子等。在一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体或其片段、优选其结合片段，可对其中任一种进行人源化。可容易地确定编码抗体或抗体片段的核酸序列。在具体的可选方式中，所述多核苷酸编码特异性结合CD19的scFv。在其它具体的可选方式中，所述多核苷酸编码特异性结合HER2、CE7、hB7H3或EGFR的单链Fv，并且任选地，所述多核苷酸编码其人源化形式。这些抗体及其结合结构域的序列是已知的或者可由本领域技术人员容易地确定。在一些可选方式中，所述多核苷酸编码特异性结合以下的单个scFv：CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC或VAR2CSA。
肿瘤抗原为由引发免疫应答的肿瘤细胞产生的蛋白质。本发明的配体结合结构域的选择将取决于待治疗的癌症的类型，并且可靶向肿瘤抗原或其它肿瘤细胞表面分子。可以某些生物标记物或细胞表面标记物的存在对来自受试者的肿瘤样品进行表征。例如，来自受试者的乳腺癌细胞对Her2Neu、雌激素受体和/或孕酮受体中的每一种而言可为阳性或阴性。对位于个体受试者的肿瘤细胞上的肿瘤抗原或细胞表面分子进行选择。肿瘤抗原和细胞表面分子在本领域中是公知的，并且包括例如癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原、PSMA、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、ephrinB2、CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、CE7、hB7H3、ROR1、间皮素、c-Met、GD-2和/或MAGE A3 TCR。在一些可选方式中，所述肿瘤抗原或肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，和/或它们的任意组合。在一些可选方式中，靶分子为存在于肿瘤细胞上并且实质上不存在于正常组织上或者其表达限于非重要的正常组织的细胞表面分子。
在一些可选方式中，所述靶标为CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、GD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA。
在一个可选方式中，所述肿瘤上的靶分子包含与恶性肿瘤相关的一个或多个表位。恶性肿瘤表达可作为T细胞受体或嵌合受体介导的识别的靶抗原的许多蛋白质。其它靶分子属于细胞转化相关分子的组，例如癌基因HER-2/Neu/ErbB2。在一些可选方式中，与相同组织类型的对照细胞相比，所述肿瘤抗原在肿瘤细胞上选择性表达或过表达。在其它可选方式中，所述肿瘤抗原为细胞表面多肽。
一旦鉴别出可用嵌合受体靶向的肿瘤细胞表面分子，对所述靶分子的表位进行选择并表征。可使用获得单克隆抗体的方法、噬菌体展示的方法、生成人抗体或人源化抗体的方法或使用工程化的转基因动物或植物以产生人抗体的方法来制备特异性结合肿瘤细胞表面分子的抗体。可获得部分或完全合成的抗体的噬菌体展示文库，并且可对可结合靶分子的抗体或其片段进行筛选。还可获得人抗体的噬菌体展示文库。在一些可选方式中，抗体特异性结合肿瘤细胞表面分子，并且不与非特异性组分(如牛血清白蛋白或其它无关抗原)交叉反应。一旦被鉴别，可对编码抗体的氨基酸序列或多核苷酸序列进行分离和/或确定。
抗体或抗原结合片段包括以下的整体或部分：多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、微抗体(minibody)和线性抗体。当根据说明书阅读时，“抗体片段”具有其简单和普通的含义，并且可用于例如描述完整抗体的部分(优选完整抗体的抗原结合区或可变区)，并且可容易地制备。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体(diabodies)；线性抗体；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些可选方式中，所述抗体片段为Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；或由抗体片段形成的多特异性抗体。可对此类上述抗体或抗体片段中的任一种进行人源化，并以本文所述的组合物和方法使用。
在一些可选方式中，可对结合特定肿瘤细胞表面分子的许多不同抗体进行分离和表征。在一些可选方式中，基于所述靶分子的表位特异性对所述抗体进行表征。另外，在一些情况下，可基于抗体对该表位的亲和力来选择结合同一表位的抗体。在一些可选方式中，抗体具有至少1mM，并优选＜50nM的亲和力。在一些可选方式中，所述抗体具有50nM、100nM、200nM、300nM、400nM、500nM、1μM、100μM、200μM、300μM、400μM、500μM、600μM、700μM、800μM、900μM或1mM的亲和力或者由上述值中任意两个所限定的范围内的亲和力。在一些可选方式中，选择相比其它抗体而言对所述表位具有较更高亲和力的抗体。例如，选择具有比结合相同表位的参比抗体高至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍或至少50倍的亲和力或者比参比抗体高由上述值中任意两个所限定的范围内的亲和力的抗体。
在一些可选方式中，靶分子为CD19、CD20、CD22、CD23、CE7、hB7H3、EGFR、CD123、CS-1、ROR1、间皮素、Her2、c-Met、PSMA、GD-2或MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在一些可选方式中，将对这些靶分子具有特异性的抗体或其结合片段人源化。
在具体的可选方式中，所述靶抗原为CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EphA2、IL13Ra2、oaGD2、GD2、CD33、间皮素、ROR-1和/或VS2CSA。对CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EphA2、IL13Ra2、oaGD2、GD2、CD33、间皮素、ROR-1和/或VAR2CSA具有特异性的许多抗体是本领域技术人员已知，并且可容易地对序列、表位结合和亲和力进行表征。本公开还考虑了与针对CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EphA2、IL13Ra2、oaGD2、GD2、CD33、间皮素、ROR-1和/或VAR2CSA的scFv的可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸序列一致性的可变区。
当根据说明书阅读时，“人源化抗体”具有其简单和普通的含义，并且可例如用于以及可指已对其蛋白序列进行修饰以增加其与人中自然产生的抗体变异体的相似性的来自非人物种的抗体。“人源化”工艺可应用于开发用于人给予的单克隆抗体(例如开发作为抗癌药剂的抗体)。当开发特异性抗体的工艺涉及利用非人免疫系统(例如小鼠中的免疫系统)时，人源化可为期望的。以此方式产生的抗体的蛋白序列部分不同于人中天然存在的同源抗体，因此当向人患者给予时具有潜在免疫原性。人源化抗体不同于嵌合抗体，因其具有与人抗体更相似但可携带交大一段非人蛋白的蛋白序列。人源化抗体的衍生物可指衍生自人源化抗体的序列或抗体的区段。在一些可选方式中，所述配体结合结构域包含人源化抗体或其部分。在一些可选方式中，所述配体结合结构域包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv为人源化scFv。
在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19、CD22、CD20、B7H3受体、L1CAM、EGFR、EGFRVIII、EphA2、FITC(E2)、GD2、Her2、IL13R2a(hu08)VlVh、IL13Ra2、IL13Ra2、oaGD2、ROR1、CD33、间皮素和/或VAR2CSA。
在一些可选方式中，可期望人源化以降低衍生自异种来源(例如啮齿动物)的单克隆抗体的免疫原性。在一些可选方式中，也期望人源化以改善抗体或其片段与人免疫系统的相互作用。由于杂交瘤技术的发展，许多异种抗体在人体中具有高度免疫原性，这最终可能限制其临床应用(尤其是在可能需要重复给予时)。另外，异种抗体可被迅速地从循环中移除，并且也可引起系统性炎性效应。因此在一些可选方式中，可期望人源化以避免这些情况。抗体人源化的技术对于本领域技术人员而言是已知的。
在一些可选方式中，编码配体结合结构域的多核苷酸可操作地连接至编码间隔区区域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述编码配体结合结构域的多核苷酸还可在所述编码序列的5’末端和/或3’末端具有一个或多个限制性酶位点，以提供容易的切除和所述多核苷酸与编码配体结合结构域、编码不同抗原或具有不同结合特征的的另一多核苷酸的替换。例如，限制性位点NheI在前导序列的上游编码；以及位于铰链区内的3’RsrII允许将任何期望的scFv亚克隆至嵌合受体载体中。在一些可选方式中，对所述多核苷酸进行密码子优化，以在哺乳动物(例如人)细胞中表达。亚克隆至期望的载体的限制性位点是本领域技术人员理解的技术。
在一些可选方式中，所述编码配体结合结构域的多核苷酸可操作地连接至信号肽。在一些可选方式中，所述信号肽为粒细胞集落刺激因子的信号肽。可利用编码其它信号肽(例如CD8α)的多核苷酸。在一些可选方式中，所述多核苷酸编码CD8α。
在一些可选方式中，所述编码配体结合结构域的多核苷酸可操作地连接至启动子。选择提供嵌合抗原受体在哺乳动物细胞(例如人细胞)中表达的启动子。在具体的可选方式中，所述启动子为诱导型启动子。
间隔区
在一些可选方式中，所述嵌合受体核酸包含编码间隔区区域的多核苷酸。通常，间隔区区域存在于嵌合受体的跨膜结构域和配体结合结构域之间。在一些可选方式中，间隔区区域提供所述配体结合结构域的柔性并且允许在淋巴细胞中的高表达水平。例如，相比具有仅由经修饰的IgG4铰链组成的短间隔区区域的CD19特异性嵌合受体，具有229个氨基酸的间隔区结构域的CD19-特异性嵌合受体具有较低的抗肿瘤活性。在一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。
在一些可选方式中，间隔区区域具有至少10个至229个氨基酸、10个至200个氨基酸、10个至175个氨基酸、10个至150个氨基酸、10个至125个氨基酸、10个至100个氨基酸、10个至75个氨基酸、10个至50个氨基酸、10个至40个氨基酸、10个至30个氨基酸、10个至20个氨基酸、或10个至15个氨基酸或者由上述长度中任意两个所限定的范围内的长度。在一些可选方式中，间隔区区域具有12个氨基酸以下、119个氨基酸以下、或229个氨基酸以下，但多于1个或2个的氨基酸。在一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。
在一些可选方式中，所述间隔区区域衍生自免疫球蛋白分子的铰链区。在一些可选方式中，间隔区区域包含来自人IgG1、人IgG2、人IgG3或人IgG4的铰链区的全部或部分，并且可含有一个或多个氨基酸置换。在一些可选方式中，所述铰链区的部分包括存在于可变重链和核心之间的上部铰链氨基酸，以及含有多脯氨酸区的核心铰链氨基酸。在一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。
在一些可选方式中，短间隔区区域具有12个氨基酸或更少，并且包含IgG4铰链区序列或其变异体的全部或部分；中间隔区区域具有119个氨基酸或更少，并且包含CH3区域或其变异体以及IgG4铰链区序列的全部或部分；并且长间隔区区域具有229个氨基酸或更少(但不为0)，并且包含CH2区域、CH3区域或其变异体、和IgG4铰链区域序列的全部或部分。在一些可选方式中，短间隔区区域具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个氨基酸或者由上述氨基酸长度中任意两个所限定的范围内的大小。在一些可选方式中，中间隔区区域具有13个、20个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个、100个、110个或119个氨基酸或者由上述氨基酸长度中任意两个所限定的范围内的大小。在一些可选方式中，间隔区区域具有120个、130个、140个、150个、160个、170个、180个、190个、200个、210个或219个氨基酸或者由上述氨基酸长度中任意两个所限定的范围内的大小。
可通过合成或重组方法由氨基酸序列容易地制备编码间隔区区域的多核苷酸。在一些可选方式中，编码间隔区区域的多核苷酸可操作地连接至编码跨膜区的多核苷酸。在一些可选方式中，所述编码间隔区区域的多核苷酸还可在所述编码序列的5’末端和/或3’末端具有一个或多个限制性酶位点，以提供容易的切除和所述多核苷酸与编码不同间隔区区域的另一多核苷酸的替换。在一些可选方式中，对所述编码间隔区区域的多核苷酸进行密码子优化，以在哺乳动物细胞(例如人细胞)中表达。
在可选方式中，所述间隔区区域为来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其部分的铰链区序列；来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的铰链区序列与CH2区域或其变异体的全部或部分的组合；来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的铰链区序列与CH3区域或其变异体的全部或部分的组合；以及来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的铰链区序列与CH2区域或其变异体和/或CH3区域或其变异体的全部或部分的组合。在一些可选方式中，短间隔区区域为具有12个氨基酸以下但多于1个或2个氨基酸的经修饰的IgG4铰链序列；中间序列为具有有119个氨基酸以下但多于1个或2个氨基酸的CH3序列的IgG4铰链序列；或具有有229个氨基酸以下但多于1个或2个氨基酸的CH2区域和CH3区域的IgG4铰链序列。
跨膜结构域
在一些可选方式中，所述嵌合受体核酸包含编码跨膜结构域的多核苷酸。所述跨膜结构域提供了嵌合受体在膜中的锚定。
在可选方式中，使用与所述嵌合受体中的结构域中的一个天然相关的跨膜结构域。在一些情况下，可通过氨基酸置换来对跨膜结构域进行选择或修饰，以避免此类结构域与相同或不同的表面膜蛋白的跨膜结构域结合，从而使与受体复合物的其它成员的相互作用最小化。
跨膜结构域可衍生白天然来源或合成来源。当来源为天然来源时，所述结构域可衍生自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。
在一些可选方式中，跨膜区域至少包含T细胞受体、CD28、CD3、CD45、CD4、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和/或CD154的α、β或ζ链的跨膜区域，。
跨膜结构域可为合成的跨膜结构域或天然存在的跨膜结构域的变异体。在一些可选方式中，合成的跨膜结构域或变异体跨膜结构域主要包含疏水残基(例如亮氨酸和缬氨酸)。在一些可选方式中，跨膜结构域可具有与如SEQ ID NO：110-SEQ ID NO：113中所示的跨膜结构域至少80％、85％、90％、95％或100％的氨基酸序列一致性或者由上述值中任意两个所限定的范围内的氨基酸序列一致性。变异体跨膜结构域优选具有根据KyteDoolittle计算的至少50的疏水性评分。
可通过合成或重组方法容易地制备编码跨膜结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述编码跨膜结构域的多核苷酸可操作地连接至编码细胞内信号转导区域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述编码跨膜结构域的多核苷酸还可在所述编码序列的5’末端和/或3’末端具有一个或多个限制性酶位点，以提供容易的切除和所述编码跨膜结构域的多核苷酸与编码不同跨膜结构域的另一多核苷酸的替换。在一些可选方式中，对所述编码跨膜结构域的多核苷酸进行密码子优化，以在哺乳动物细胞(例如人细胞)中表达。
细胞内信号转导结构域
在一些可选方式中，所述嵌合受体核酸包含编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在结合至肿瘤细胞上表达的配体后，所述细胞内信号转导结构域提供表达嵌合受体的经转导的细胞的一种功能的激活。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含一个或多个细胞内信号转导结构域。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域为提供经转导的细胞的至少一种功能的激活的细胞内信号转导结构域的部分和/或变异体。
用于本公开的嵌合受体的细胞内信号转导结构域的实例包括CD3ζ链的细胞质序列、和/或协同作用以在嵌合受体参与后启动信号转导的辅助受体、以及这些序列和具有相同功能的任何合成序列的任意衍生物或变异体。T细胞激活可以说是由两种不同类型的细胞质信号转导序列介导：启动抗原依赖性初级激活并且提供T细胞受体样信号的细胞质信号转导序列(初级细胞质信号转导序列)，以及以抗原非依赖性方式起作用以提供次级信号或共刺激信号的细胞质信号转导序列(次级细胞质信号转导序列)。以刺激性方式起作用的初级细胞质信号转导序列可含有信号转导基序，其被称为基于受体酪氨酸的激活基序或ITAM。含有适用于本文所述的可选方式的初级细胞质信号转导序列的ITAM的实例包括衍生自CD3ζ、FcRγ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和/或CD66d的ITAM。
在优选的可选方式中，可将所述嵌合受体的细胞内信号转导结构域设计为自身包含CD3-ζ信号转导结构域或与任何其它期望的细胞质结构域组合。例如，嵌合受体的细胞内信号转导结构域可包含CD3ζ链和共刺激信号转导区域。
共刺激信号转导区域是指嵌合受体的部分，其包含共刺激分子的细胞内结构域。共刺激分子为除抗原受体或其配体外的细胞表面分子，其为淋巴细胞对抗原的应答所需。适用于本文所述的可选方式的此类分子的实例包括CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、ζ链相关蛋白激酶(ZAP70)和/或与CD83特异性结合的配体。
嵌合受体的细胞内信号转导序列可以随机或特定的顺序与彼此连接。在一些可选方式中，短的寡肽或多肽接头(优选长度为2至10个氨基酸之间，例如长度为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸)可构成所述连接。在一个可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含CD3-ζ或其变异体的信号转导结构域的全部或部分，以及CD28或其变异体的信号转导结构域的全部或部分。在另一可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含CD3-ζ或其变异体的信号转导结构域的全部或部分以及4-1BB或其变异体的信号转导结构域的全部或部分。在又一可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含CD3-ζ或其变异体的信号转导结构域的全部或部分、CD28或其变异体的信号转导结构域的全部或部分、以及4-1BB或其变异体的信号转导结构域的全部或部分。在具体的可选方式中，所述细胞内信号转导结构域的氨基酸序列包含CD3ζ的变异体和4-1BB细胞内信号转导结构域的部分。
在可选方式中，编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸包含连接至CD3ζ结构域的部分的4-1BB细胞内结构域。在其它可选方式中，4-1BB细胞内结构域和CD28细胞内结构域连接至CD3ζ结构域的部分。
在一些可选方式中，所述细胞内结构域由SEQ ID NO：114中所示的序列编码。在一些可选方式中，所述细胞内结构域由SEQ ID NO：116中所示的序列编码。在一些可选方式中，所述细胞内结构域由SEQ ID NO：118中所示的序列编码。在一些可选方式中，所述细胞内结构域包含SEQ ID NO：115中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述细胞内结构域包含SEQ ID NO：117中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述细胞内结构域包含SEQID NO：119中所示的氨基酸序列。
可通过合成或重组方法从氨基酸序列容易地制备编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸还可在编码序列的5’末端和/或3’末端具有一个或多个限制性酶位点，以提供容易的切除以及所述编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸与编码不同的细胞内信号转导结构域的另一多核苷酸的替换。在一些可选方式中，对编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸进行密码子优化，以在哺乳动物细胞中表达。在一些可选方式中，所述哺乳动物细胞为人细胞。
标记序列
在一些可选方式中，所述系统进一步包含在诱导型启动子控制下的一个或多个标记序列。标记序列可提供对经转导的细胞的选择和/或对经转导的细胞的鉴别。在一些可选方式中，所述标记序列用于对经转导的细胞的选择和/或对经转导的细胞的鉴别。在一些可选方式中，所述标记序列可操作地连接至编码接头序列的多核苷酸序列。在一些可选方式中，所述接头序列为可切割的接头序列。在一些可选方式中，所述接头为2A接头，例如T2A、P2A或F2A。在一些可选方式中，所述接头是可切割的T2A接头。
可使用许多不同的标记序列。通常，标记序列具有允许对经转导的细胞的选择和/或对经转导的细胞的检测的功能特征。在一些可选方式中，所述标记序列与人淋巴细胞的转导相容。在一些可选方式中，所述标记序列允许允许对经转导的细胞的选择和/或对经转导的细胞的检测。
阳性选择标记可为基因，其在被导入宿主细胞后表达使携带该基因的细胞为阳性选择的显性表型。此类型的基因是本领域已知的，并且尤其包括赋予对潮霉素B的抗性的潮霉素-B磷酸转移酶基因(hph)，编码对抗生素G418的抗性的来自Tn5的氨基糖苷磷酸转移酶基因(neo或aph)，以及提供对甲氨蝶呤、DHFR dm的抗性的二氢叶酸还原酶(DHFR)基因的双突变体。在这些试剂的存在下培养的经转导的细胞将存活并被选择。
在可选方式中，第一核酸进一步包含编码标记序列的多核苷酸。在可选方式中，所述标记序列为截短的表皮生长因子受体(EGFRt)。在一些可选方式中，所述标记序列为截短的Her2序列(Her2t)。下面提供了可用于本公开中所示的可选方式的选择标记序列。
选择标记序列
EGFRt核苷酸序列：
EGFRt氨基酸序列：
Her2t核苷酸序列：
Her2t氨基酸序列：
Her2tG核苷酸序列：
Her2tG氨基酸序列：
CD19t核苷酸序列：
CD19t氨基酸序列：
DHFRdm核苷酸序列：
以及
DHFRdm氨基酸序列：
DNA间隔区序列：
也可将DNA间隔区序列描述为7xHBD/mE1B_DNA间隔区。
在本文的一些可选方式中，所述DNA间隔区(46碱基对序列)可位于7xHBD/mE1B启动子和诱导型转基因之间。包含SEQ ID NO：120的DNA间隔区允许转基因增强的基因表达。在本文的一些可选方式中，与具有启动子和转基因而无DNA间隔区的载体相比，包含位于所述启动子和所述转基因之间的DNA间隔区的载体构建体显示了转基因转录的增加。在本文的一些可选方式中，与不具有启动子和转基因之间的DNA间隔区的载体相比，所述DNA间隔区增强了转基因表达。在一些可选方式中，DNA间隔区位于mE1B启动子和所述转基因之间。
在一些可选方式中，所述编码标记序列的多核苷酸可操作地连接至编码接头序列的多核苷酸。在一些可选方式中，所述接头为2A接头，例如T2A、P2A、E2A或F2A。
可通过合成或重组方法从氨基酸序列容易地制备编码标记序列的多核苷酸。在一些可选方式中，编码标记序列的多核苷酸可操作地连接至编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，所述编码标记序列的多核苷酸还可在所述编码序列的5’末端和/或3’末端具有一个或多个限制性酶位点，以提供容易的切除以及所述编码标记序列的多核苷酸与编码不同标记序列的另一多核苷酸的替换。在一些可选方式中，对编码标记序列的多核苷酸进行密码子优化，以在哺乳动物细胞(优选人细胞)中表达。
在一些可选方式中，可使用两种以上标记序列。在一些可选方式中，第一标记序列在组成型启动子的控制下，并且提供经转导的细胞正在表达转基因的指示。在其它可选方式中，第二标记序列在诱导型启动子的控制下，并提供转基因表达已被诱导的指示。在一些可选方式中，通过选择诱导型启动子控制下具有较低的标记序列表达的细胞，可将诱导型启动子控制下的标记用于选择其中非诱导型表达或基础表达比其它细胞低得多的细胞，并且对这些细胞进行扩增以供进一步应用。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物、或调控细胞溶解能力的microRNA产物。在一些可选方式中，所述转基因编码调控T细胞的蛋白质。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。
诱导型启动子控制下的其它遗传组分
在一些可选方式中，所述第一核酸包含编码在诱导型启动子控制下的以下基因的多核苷酸序列：促进生存和增殖的基因、防止凋亡的基因和/或抑制负向检查点信号转导的基因。此类基因包括编码以下的基因：IL-2、IL-7、IL-15、趋化因子受体，Bcl2、CA-Akt、dn-TGFβRIII、dn-SHP1/2、PD-1-IFNα和/或PD-1CD28嵌合体。这些基因也处于如本文所述的诱导型启动子的控制下。在一些可选方式中，所述基因编码IL-2、IL-7、IL-15、趋化因子受体，嵌合细胞因子受体、Bcl2、CA-Akt、dn-TGFβRII、dn-SHP1/2、PD-1-IFNα和/或PD-1CD28嵌合体。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的基因编码抑制负向检查点调控子的多肽。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
在一些可选方式中，第一核酸包含第一诱导型启动子，所述第一诱导型启动子连接至编码细胞因子、趋化因子受体或嵌合细胞因子受体的多核苷酸。趋化因子(也称为趋化细胞因子)是一组结构相关的蛋白质，其调节淋巴细胞的细胞运输。在一些可选方式中，所述趋化因子为稳态趋化因子或炎性趋化因子。趋化因子受体包括CCR2、CCR7或CCR15。细胞因子包括白细胞介素(例如IL-2、IL-12、IL-7和/或IL-15)、干扰素(如干扰素δ)、肿瘤坏死因子和TLR4激动剂。嵌合细胞因子受体还可包括CCR(CD122)。在一些可选方式中，所述趋化因子受体包括CCR2、CCR7和/或CCR15。在一些可选方式中，所述趋化因子受体包括CCR2、CCR7或CCR15。在一些可选方式中，所述细胞因子包括白细胞介素(其中，所述白细胞介素为IL-2、IL-12、IL-7和/或IL-15)或干扰素(其中，所述干扰素包括干扰素δ)、肿瘤坏死因子或TLR4激动剂。
在一些可选方式中，第一核酸包含第一诱导型启动子，所述第一诱导型启动子连接至编码调控凋亡的多肽的多核苷酸。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，第一核酸包含第一诱导型启动子，所述第一诱导型启动子连接至编码调节检查点信号转导的多肽的多核苷酸。此类基因包括dn-TGFβRII、dn-SHP1/2、PD-1-IFNα和/或PD-1CD28嵌合体。在一些可选方式中，所述多肽为dn-TGFβRII、dn-SHP1/2、PD-1-IFNα和/或PD-1CD28嵌合体。在一些可选方式中，所述调节检查点信号转导的多肽抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
可将任何数量的核酸置于诱导型启动子的控制下，包括编码以下的核酸：嵌合抗原受体、标记序列、细胞因子、趋化因子、凋亡抑制剂和/或负向检查点信号转导抑制剂。在一些可选方式中，可利用一种或多种诱导型启动子来提供各核酸的足够的表达水平。在一些可选方式中，可用诱导型启动子控制下的基因(例如细胞因子)以及包含组成型启动子控制下的嵌合抗原受体的构建体制备构建体。此类构建体可用于提供经转导的细胞(例如表达嵌合抗原受体的淋巴细胞)的细胞生存和增殖。
在本文提供的系统中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更少的所述药剂的量诱导。
在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应于HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。
组成型启动子系统
在其它可选方式中，所述系统包含第二核酸，所述第二核酸包含连接至转录激活剂的第二诱导型启动子或组成型启动子。在其它可选方式中，所述系统包含第二核酸，所述第二核酸包含连接至转录激活剂的启动子。在一些可选方式中，所述启动子为组成型启动子或诱导型启动子。在一些可选方式中，组成型启动子包括EF1α启动子、肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。在一些可选方式中，排除了病毒启动子(如CMV启动子)。在一些可选方式中，所述组成型启动子可连接至如本文所述的编码嵌合抗原受体或标记的多核苷酸中的一种或多种。
组成型启动子
组成型启动子提供在所述启动子控制下的基因的连续基因表达。在一些可选方式中，所述组成型启动子为提供在慢病毒构建体中和/或在淋巴细胞中的基因表达的启动子。在一些可选方式中，所述启动子不是衍生自异种来源(例如植物或病毒)。
在具体的可选方式中，所述组成型启动子包括EF1α启动子、肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和/或肌酸激酶启动子。在一些可选方式中，排除了病毒启动子(如CMV启动子)。
转录激活剂
在一些可选方式中，所述组成型启动子可操作地连接至转录激活剂。在一些可选方式中，所述转录激活剂在诱导物(例如药剂)存在的情况下激活诱导型启动子。
在一些可选方式中，在转录激活剂存在的情况下对诱导型启动子进行诱导。在一些可选方式中，所述转录激活剂在药剂存在的情况下优先结合启动子。在一些可选方式中，所述转录激活剂为TamR-tf(HEA3或HEA4)。转录激活剂的修饰可在氨基酸序列中进行，该修饰可影响激活剂结合药剂、启动子或二者的能力。例如，ER配体结合结构域中的结合将影响药剂与转录激活剂的结合。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应于HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。
在一些可选方式中，所述系统采用合成的转录激活剂，其在药剂(例如三苯氧胺)存在的情况下结合转基因上游的合成启动子以诱导表达。在一些可选方式中，所述合成的转录激活剂为野生型“TamR-tf”HEA3转录因子的变异体。在一些可选方式中，所述合成的转录激活剂为野生型“TamR-tf”HEA4转录因子的变异体。示例性氨基酸序列在SEQ ID NO：1中提供 雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域位于HEA3的氨基酸282-595处，并且在位置521处具有突变(SEQ ID NO：1； )。NF-κB(p65或TAD)的p65激活结构域位于氨基酸596-862处。SEQ ID NO：1包含位于ER-LBD中的一个点突变，所述点突变消除与内源性雌激素的结合，但赋予对4-OHT、氟维司群和其它雌激素类似物的纳摩尔级特异性。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应于HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。
可对转录激活剂进行另外的改变以增加转录因子的性能，所述改变包括但不限于修改雌激素受体配体结合结构域中的一个或多个氨基酸和/或修改p65反式激活域中的一个或多个氨基酸。修改雌激素受体结合结构域中的氨基酸可提供更具特异性且更灵敏的药剂与转录激活剂的结合。例如，在SEQ ID NO：4的氨基酸位置400、543和544处进行突变(SEQ ID NO：4； )。SEQ ID NO：4包含在ER-LBD中含有3个点突变(G400V、M543A、L544A)的野生型HEA4的序列，所述3个点突变消除与内源性雌激素的结合，并且赋予与野生型HEA3相比对4-羟基三苯氧胺，氟维司群和雌激素类似物更高的灵敏度。具有改动的序列的转录激活剂对三苯氧胺或4-OHT具有增加的亲和力。修改p65反式激活结构域中的氨基酸可在缺乏经转导的细胞的激活的情况下提供转基因表达的增加。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物。在一些可选方式中，所述转基因编码调节T细胞的蛋白质。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。
标记
在一些可选方式中，所述组成型启动子可操作地连接至编码标记多肽的多核苷酸。此类标记多肽在本文中予以描述，并且包括EGFRt、Her2t和/或DHFRdm。
在一些可选方式中，所述标记由SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQID NO：36或SEQ ID NO：38中所示的序列编码。在一些可选方式中，所述标记包含SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37或SEQ ID NO：39中所示的氨基酸序列。
嵌合抗原受体
在一些可选方式中，所述组成型启动子可操作地连接至编码嵌合抗原受体的多核苷酸。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，其中，所述配体结合结构域对配体具有特异性，其中，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的任何其它分子，其中，所述配体可通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在一些可选方式中，对间隔区进行优化，以提供与参比嵌合受体相比，增加的响应于所述配体的T细胞增殖和/或细胞因子产生。
载体
可构建多种载体组合，以提供转导和转基因表达的效率。在一些可选方式中，所述载体为双重包装的病毒载体或单一的(整合式)病毒载体。在其它可选方式中，所述载体可包括病毒载体和质粒载体的组合。其它病毒载体包括泡沫病毒载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体和慢病毒载体。在一些可选方式中，所述载体为慢病毒载体。在一些可选方式中，所述载体为泡沫病毒载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体或慢病毒载体。
在一些可选方式中，质粒载体或病毒载体包含第一核酸，所述第一核酸包含连接至编码嵌合抗原受体的多核苷酸的诱导型启动子。在一些可选方式中，质粒载体或病毒载体包含第一核酸序列，所述第一核酸包含编码以下基因的多核苷酸：增强细胞生存或增殖的基因、调控凋亡的基因和/或调节检查点信号转导的基因。在一些可选方式中，检查点信号转导的调节抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。此类多核苷酸编码细胞因子、嵌合细胞因子受体或趋化因子受体。在一些可选方式中，质粒载体或病毒载体包含第一核酸，所述第一核酸包含连接至编码标记序列的多核苷酸的诱导型启动子。在一些可选方式中，所述标记序列与人淋巴细胞的转导相容。在一些可选方式中，所述标记序列允许对经转导的细胞的选择和/或对经转导的细胞的检测。在一些可选方式中，所述标记为尤其可包括以下的基因：赋予对潮霉素B的抗性的潮霉素-B磷酸转移酶基因(hph)，编码对抗生素G418的抗性的来自Tn5的氨基糖苷磷酸转移酶基因(neo或aph)，提供对甲氨蝶呤的抗性的突变型二氢叶酸还原酶(DHFR)基因DHFRdm，提供对嘌呤霉素的抗性的pac基因，使zeocin失活的Sh ble基因、腺苷脱氨酶基因(ADA)和/或多药剂抗性(MDR)基因。第一核酸可包括均在诱导型启动子控制下的许多不同的多核苷酸序列。例如，编码嵌合抗原受体的多核苷酸可连接至编码标记多肽的多核苷酸和/或编码细胞因子或趋化因子受体的多核苷酸。在一些可选方式中，基因在诱导型启动子的控制下。在一些可选方式中，所述基因编码嵌合细胞因子受体。
在一些可选方式中，慢病毒载体包含第二核酸，所述第二核酸包含组成型启动子，所述组成型启动子连接至编码转录激活剂的核酸序列，所述转录激活剂结合药剂并激活诱导型启动子的表达。在一些可选方式中，具有组成型启动子的慢病毒载体还可包括核酸序列，所述核酸序列包含标记基因、piggybac转座酶和/或编码嵌合抗原受体的多核苷酸。可用序列(例如T2A自剪切序列)将所述核酸的各元件彼此分开。在一些可选方式中，用序列自剪切序列将所述核酸的元件彼此分开。在一些可选方式中，所述自剪切序列为2A接头。在一些可选方式中，所述接头为T2A、P2A、E2A或F2A。
在其它可选方式中，异源(对载体例如慢病毒载体为异源)核酸序列受可包装在所述载体中的其它遗传组分的量限制。在一些可选方式中，构建体含有对病毒载体而言异源的至少2个基因。在一些可选方式中，所述构建体含有不超过4个对病毒载体而言异源的基因。通过检测一种或多种转基因的表达，并且选择提供在至少10％的细胞中的转导和/或在至少10％的细胞中具有转基因的可检测表达水平的载体构建体，可确定可包装在载体中的对病毒载体而言异源的基因的数量。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物。在一些可选方式中，所述转基因编码调节T细胞的蛋白质。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。
在一些可选方式中，慢病毒为双重包装的病毒。双重包装的病毒含有至少一种条件性构建体，所述条件性构建体包含可操作地连接至编码嵌合抗原受体的多核苷酸的诱导型启动子。任选地，条件性构建体包含标记基因、用于细胞因子的核酸、用于嵌合细胞因子受体的核酸、用于趋化因子受体的核酸。在一些可选方式中，双重包装的慢病毒包含含有组成型启动子的组成型构建体。在可选方式中，所述组成型构建体包含连接至用于诱导型启动子的转录激活剂的组成型启动子。在一些可选方式中，所述组成型构建体还包含编码细胞因子或趋化因子的多核苷酸和/或标记基因。在具有两种构建体的系统的一些可选方式中，各构建体可包装在单独的病毒载体中，并且所述病毒载体可混合在一起，用于在细胞群中的转导。
当组成型构建体和条件性构建体都含有标记基因时，每个构建体上的标记基因彼此相同或不同。在一些可选方式中，当组成型构建体和条件性构建体都含有编码嵌合抗原受体的多核苷酸时，可使嵌合抗原受体靶向相同的抗原但具有不同的配体结合域，可嵌合抗原受体靶向相同的抗原但不同的表位，或可使嵌合抗原受体靶向不同的抗原。
在一些可选方式中，所述载体为微环。微环为游离型DNA载体，其作为无任何细菌质粒DNA骨架的环状表达盒而产生。与仅起作用数天的标准质粒载体相比，微环较小的分子大小使得能更有效的转染，并且提供持续的表达数周。在一些可选方式中，微环含有连接至编码嵌合抗原受体的多核苷酸的药剂诱导型启动子。在一些可选方式中，所述诱导型启动子可连接至趋化因子受体、标记基因和/或细胞因子。可使用一个或多个微环。在一些可选方式中，微环包含连接至编码第一嵌合抗原受体的多核苷酸的诱导型启动子，另一微环包含连接至编码第二不同的嵌合抗原受体的多核苷酸，和/或微环包含连接至编码趋化因子受体、嵌合抗原受体和标记基因的多核苷酸的诱导型启动子。构建体的各元件被核酸(例如编码自剪切T2A序列的核酸)分开。在一些可选方式中，构建体的各元件被核酸(例如编码自剪切T2A序列的核酸)分开。在一些可选方式中，各微环在嵌合抗原受体方面彼此不同，包括但不限于间隔区长度和序列、细胞内信号转导结构域和/或标记序列。微环载体可与编码用于诱导型启动子的转录激活剂的组成型慢病毒载体一起使用。在一些可选方式中，所述微环载体与编码用于诱导型启动子的转录激活剂的组成型慢病毒载体一起使用。在本文提供的系统中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更少的所述药剂的量诱导。
在一些可选方式中，所述载体为piggy bac转座子。PiggyBac(PB)转座子是可动遗传元件，其通过“剪切和粘贴”机制在载体和染色体之间有效地转座。在转座期间，PB转座酶识别位于转座子载体两端的转座子特异性反向末端重复序列(ITR)，并且从原始位点有效地移动内容物并且将其有效地整合至TTAA染色体位点中。PiggyBac转座子系统的强大活性使PB载体中两个ITR之间的感兴趣的基因能够容易地移动到靶基因组中。
在一些可选方式中，PB含有连接至编码嵌合抗原受体的多核苷酸的药剂诱导型启动子。在一些可选方式中，所述诱导型启动子可连接至趋化因子受体、标记基因和/或细胞因子。可使用一种或多种PB转座子。在一些可选方式中，PB包含连接至编码第一嵌合抗原受体的多核苷酸的诱导型启动子，另一PB包含连接至编码第二不同的嵌合抗原受体的多核苷酸的诱导型启动子，和/或PB包含连接至编码趋化因子受体、嵌合抗原受体和标记基因的多核苷酸的诱导型启动子。构建体的各元件被核酸(例如编码自剪切T2A序列的核酸)分开。在一些可选方式中，各PB在嵌合抗原受体方面彼此不同，包括但不限于间隔区长度和序列、细胞内信号转导结构域和/或标记序列。PB载体可与以下一起使用：编码用于诱导型启动子的转录激活剂的组成型慢病毒载体，和包含连接至组成型启动子的piggyback转座酶的组成型载体。
一些可选方式涉及包含由药剂诱导的第一启动子的第一核酸，其中，所述第一核酸可操作地连接至：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，其中，所述配体结合结构域对配体具有特异性，其中，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的任何其它分子，其中，所述配体可通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；和编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸；以及第二核酸，所述第二核酸包含第二组成型启动子或诱导型启动子，所述第二组成型启动子或诱导型启动子可操作地连接至编码用于诱导型启动子的转录激活剂的核酸。在一些可选方式中，所述第一核酸和第二核酸在单个慢病毒载体中。在一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以与参比嵌合受体相比，使响应于所述配体的T细胞增殖和/或细胞因子产生增加。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含标记基因。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码第二不同的嵌合抗原受体的多核苷酸。第一嵌合抗原受体和第二嵌合抗原受体可在以下方面彼此不同：配体结合结构域、靶抗原、靶抗原的表位，间隔区结构域的长度和序列(短、中或长)以及细胞内信号转导结构域。在一些可选方式中，在单个慢病毒构建体中，可通过基因组绝缘子核酸(例如海胆绝缘子染色质结构域)将所述第一核酸和第二核酸分开。在其它可选方式中，所述第一核酸的诱导型启动子和所述第二核酸的组成型启动子处于相反的方向。这些载体中的一种或多种可彼此结合使用，以转导靶细胞并且提供嵌合抗原受体的诱导型表达。
宿主细胞和组合物：T淋巴细胞群
本文所述的组合物提供了具有如本文所述的载体和/或构建体的遗传修饰的宿主细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T淋巴细胞和/或CD8+ T淋巴细胞。
可根据已知技术收集T淋巴细胞，并通过已知技术(例如与抗体的亲和结合，例如流式细胞术和/或免疫磁性选择)进行富集或耗尽。在富集和/或耗尽步骤后，可根据本领域技术人员显而易见的已知技术或其变体进行期望的T淋巴细胞的体外扩增。在一些可选方式中，所述T细胞为从患者获得的自体T细胞。
例如，期望的T细胞群或亚群可通过以下方式进行扩增：在体外向培养基中添加初始T淋巴细胞群，然后向培养基中添加饲养细胞(例如非分裂的外周血单核细胞(PBMC))(例如，以使得所得的细胞群对于待扩增的初始群中的每个T淋巴细胞含有至少5个、10个、20个或40个或更多PBMC饲养细胞)；并对培养物进行孵育(例如足以扩增T细胞的数量的时间)。非分裂饲养细胞可包含γ照射的PBMC饲养细胞。在一些可选方式中，用3000rads至3600rads范围内的γ射线照射PBMC，以防止细胞分裂。在一些可选方式中，用3000rads、3100rads、3200rads、3300rads、3400rads、3500rads或3600rads或者任意所列值的任意两个端点之间的任意rad值的γ射线来照射PBMC，以防止细胞分裂。如果期望，可颠倒向培养基中添加T细胞和饲养细胞的顺序。通常可在适合T淋巴细胞生长的温度等条件下对培养物进行孵育。例如，对于人T淋巴细胞的生长，温度将通常为至少25摄氏度、优选至少30摄氏度、更优选37摄氏度。在一些可选方式中，人T淋巴细胞生长的温度为22摄氏度、24摄氏度、26摄氏度、28摄氏度、30摄氏度、32摄氏度、34摄氏度、36摄氏度、37摄氏度或由任意所列值的任意两个端点所限定的范围之间的任意其它温度。
经扩增的T淋巴细胞包括可对人肿瘤或病原体上存在的抗原具有特异性的CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和CD4+辅助T淋巴细胞。在一些可选方式中，所述细胞包括前体T细胞。在一些可选方式中，所述细胞为造血干细胞。
在一些可选方式中，所述扩增方法可进一步包括添加非分裂的EBV转化的淋巴母细胞样细胞(LCL)作为饲养细胞。可用6000rads至10,000rads范围内的γ射线照射LCL。在一些可选方式中，用6000rads、6500rads、7000rads、7500rads、8000rads、8500rads、9000rads、9500rads或10,000rads或者由任意所列值的任意两个端点所限定的范围之间的任意量的rad的γ射线照射LCL。可以任意合适的量提供LCL饲养细胞，例如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比为至少10：1。
在一些可选方式中，所述扩增方法可进一步包括向培养基中添加抗CD3抗体和/或抗CD28抗体(例如，以至少0.5ng/ml的浓度)。在一些可选方式中，所述扩增方法可进一步包括向培养基中添加IL-2和/或IL-7和/或IL-15(例如其中，所述IL-2的浓度为至少10单位/ml)。
在T淋巴细胞的分离后，可在扩增前或扩增后将细胞毒性T淋巴细胞和辅助T淋巴细胞分选为初始T细胞、记忆T细胞和效应T细胞亚群。
可通过使用标准方法获得CD8+细胞。在一些可选方式中，通过鉴别与这些类型的CD8+细胞中的各种相关的细胞表面抗原，将CD8+细胞进一步分选为初始细胞、中央记忆细胞和效应记忆细胞。在一些可选方式中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+子集和CD62L子集二者中。在用抗CD8抗体和抗CD62L抗体染色后，将PBMC分选为CD62L-CD8+级分和CD62L+CD8+级分。在一些可选方式中，所述中央记忆TCM的表型标记的表达包括CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD127，并且呈颗粒酶B阴性或具有低的颗粒酶B。在一些可选方式中，中央记忆T细胞为CD45RO+ T细胞、CD62L+ T细胞和/或CD8+ T细胞。在一些可选方式中，效应TE是CD62L、CCR7、CD28和/或CD127阴性的，并且对于颗粒酶B和/或穿孔素是阳性的。在一些可选方式中，初始CD8+ T淋巴细胞的特征在于表达初始T细胞的表型标记，包括CD62L、CCR7、CD28、CD3、CD127和/或CD45RA。
通过对具有细胞表面抗原的细胞群进行鉴别，将CD4+ T辅助细胞分选为初始细胞、中央记忆细胞和效应细胞。CD4+淋巴细胞可通过标准方法获得。在一些可选方式中，初始CD4+ T淋巴细胞为CD45RO-、CD45RA+、CD62L+和/或CD4+ T细胞。在一些可选方式中，中央记忆CD4+细胞为CD62L+和/或CD45RO+。在一些可选方式中，效应CD4+细胞为CD62L-和/或CD45RO-。
可使用针对表面标记的特异性抗体和同种型匹配的对照抗体的染色，通过流式细胞术来确定细胞或细胞群是否对特定细胞表面标记呈阳性。对标记呈阴性的细胞群是指缺乏超过同种型对照的关于特异性抗体的细胞群的显著染色，阳性是指超过同种型对照的细胞群的均匀染色。在一些可选方式中，一种或多种标记的表达的降低是指当与参比细胞群相比时，平均荧光强度的1log10的损失，和/或以下百分比的表达标记的细胞的降低：至少20％的细胞，25％的细胞、30％的细胞、35％的细胞、40％的细胞、45％的细胞、50％的细胞、55％的细胞、60％的细胞、65％的细胞、70％的细胞、75％的细胞、80％的细胞、85％的细胞、90％的细胞、95％的细胞和100％的细胞或者20％和100％之间任意％的细胞。在一些可选方式中，对一种或多种标记呈阳性的细胞群是指当与参比细胞群相比时，表达标记的细胞为以下百分比：至少50％的细胞、55％的细胞、60％的细胞、65％的细胞、70％的细胞、75％的细胞、80％的细胞、85％的细胞、90％的细胞、95％的细胞和100％的细胞或者50％和100％之间任意％的细胞。
可使用针对表面标记的特异性抗体和同种型匹配的对照抗体的染色，通过流式细胞术来确定细胞或细胞群是否对特定细胞表面标记呈阳性。对标记呈阴性的细胞群是指缺乏超过同种型对照的关于特异性抗体的细胞群的显著染色，阳性是指超过同种型对照的细胞群的均匀染色。在一些可选方式中，一种或多种标记的表达的降低是指当与参比细胞群相比时，平均荧光强度的1log10的损失，和/或以下百分比的表达标记的细胞的降低：至少20％的细胞，25％的细胞、30％的细胞、35％的细胞、40％的细胞、45％的细胞、50％的细胞、55％的细胞、60％的细胞、65％的细胞、70％的细胞、75％的细胞、80％的细胞、85％的细胞、90％的细胞、95％的细胞和100％的细胞或者20％和100％之间任意％的细胞。在一些可选方式中，增加是指例如当与参比细胞群比较时，平均荧光强度或中位荧光强度的增加，和/或对于一种标记或给定标记呈阳性的细胞群中细胞数量的增加，例如其中s是指以下百分比的表达标记的细胞表达所述标记：至少50％的细胞、55％的细胞、60％的细胞、65％的细胞、70％的细胞、75％的细胞、80％的细胞、85％的细胞、90％的细胞、95％的细胞和100％的细胞或者50％和100％之间任何％的细胞。
在一些可选方式中，可通过用抗原刺激初始T淋巴细胞或抗原特异性T淋巴细胞来获得抗原特异性的CD4+和CD8+的群。例如，通过从感染的受试者分离T细胞并用相同的抗原在体外刺激所述细胞，可将抗原特异性T细胞系或克隆生成至巨细胞病毒抗原。也可使用初始T细胞。可将来自肿瘤细胞的任意数量的抗原作为靶标，以引发T细胞应答。在一些可选方式中，所述过继细胞免疫治疗组合物可用于包括实体瘤、血液恶性肿瘤、乳腺癌或黑素瘤在内的疾病或紊乱的治疗。
T淋巴细胞群的修饰
在一些可选方式中，根据本发明，可期望将功能基因导入T细胞，以用于免疫疗法。例如，所导入的基因可通过促进转移的T细胞的活力和/或功能，来改善治疗的功效；或者它们可提供遗传标记以允许选择和/或评价体内生存或迁移；或者它们可使改善免疫疗法安全性的功能加入(例如通过使细胞易容许转基因的受控制表达)。基于本公开，这可根据对本领域技术人员而言显而易见的已知技术来实施。
在一些可选方式中，如本文所述，用编码药剂诱导型嵌合受体的载体对T细胞进行修饰。在一些可选方式中，用编码药剂诱导型转基因的载体对T细胞进行修饰。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物、或调控细胞溶解能力的microRNA产物。在一些可选方式中，所述转基因编码调节T细胞的蛋白质。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，用载体对细胞进行修饰，所述载体包含处于诱导型启动子控制下的编码嵌合抗原受体的多核苷酸。在其它可选方式中，用载体对细胞进行修饰，所述载体包含处于诱导型启动子控制下的编码细胞因子、嵌合细胞因子受体、趋化因子受体、调控凋亡的基因、或调节检查点信号转导的基因的多核苷酸。在一些可选方式中，所述T细胞从待治疗的受试者中获得，在其它可选方式中，所述淋巴细胞从同种异体人供体(优选健康人供体)中获得。在一些可选方式中，所述检查点信号转导的调节抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
通过利用例如抗体分子的抗体可变结构域或抗原结合片段，可构建对任意细胞表面标记具有特异性的嵌合受体。抗原结合分子可连接至一个或多个细胞信号转导模块。在一些可选方式中，细胞信号转导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号转导结构域和/或CD28跨膜结构域。在一些可选方式中，所述细胞内信号转导结构域包含连接至CD3ζ细胞内结构域的CD28跨膜和信号转导结构域。在一些可选方式中，嵌合受体还可包括转导标记(例如EGFRt)。
在一些可选方式中，可将相同或不同的嵌合受体导入各CD4+淋巴细胞群和/或CD8+T淋巴细胞群中。在一些可选方式中，这些群的各自中的嵌合受体具有配体结合结构域，所述配体结合结构域特异性结合感染的细胞或肿瘤上的相同配体或不同的抗原或表位。细胞信号转导模块可不同。在一些可选方式中，CD8+细胞毒性T细胞的细胞内信号转导结构域与CD4+辅助T细胞的细胞内信号转导结构域相同。在其它可选方式中，CD8+细胞毒性T细胞的细胞内信号转导结构域与CD4+辅助T细胞的细胞内信号转导结构域不同。
在一些可选方式中，如本文所述，可在转导前将CD4淋巴细胞或CD8T淋巴细胞各自分选为初始细胞、中央记忆细胞、效应记忆细胞或效应细胞。在一些可选方式中，可在转导后将CD4T淋巴细胞或CD8T淋巴细胞各自分选为初始细胞、中央记忆细胞、效应记忆细胞或效应细胞。
如本文所述，在一些可选方式中，初始CD4+细胞为CD45RO-、CD45RA+、CD62L+和/或CD4+阳性T细胞。在一些可选方式中，中央记忆CD4+细胞为CD62L阳性和/或CD45RO阳性。在一些可选方式中，效应CD4+细胞为CD62L阴性和/或CD45RO阳性。可用嵌合受体对这些群体中的各自进行独立地修饰。
如上所述，在一些可选方式中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+子集和CD62L-子集二者中。在用抗CD8抗体和抗CD62L抗体染色后，将PBMC分选为CD62L-CD8+级分和CD62L+CD8+级分。在一些可选方式中，中央记忆T细胞(TCM)的表型标记的表达包括CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD127，并且对颗粒酶B呈阴性或具有低的颗粒酶B。在一些可选方式中，中央记忆T细胞为CD45RO+、CD62L+和/或CD8+ T细胞。在一些可选方式中，效应T细胞(TE)呈CD62L、CCR7、CD28和/或CD127阴性，并且对于颗粒酶B和/或穿孔素呈现阳性。在一些可选方式中，初始CD8+ T淋巴细胞的特征在于CD8+、CD62L+、CD45RO+、CCR7+、CD28+CD127+和/或CD45RO+。可用嵌合受体这些群各自进行独立地修饰。
已开发了各种转导技术，所述转导技术利用重组感染性病毒颗粒，以用于基因递送。这代表了本发明目前优选的T淋巴细胞的转导方法。以此方式使用的病毒载体包括衍生自猿猴病毒40、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、慢病毒载体和/或逆转录病毒的病毒载体。因此，基因转移和表达方法很多，但实质上起到在哺乳动物细胞中导入和表达遗传物质的作用。已将上述技术中的几种用于转导造血细胞或淋巴细胞，包括磷酸钙转染，原生质体融合，电穿孔，以及用重组腺病毒、腺相关病毒和逆转录病毒载体感染。已通过电穿孔和通过逆转录病毒或慢病毒感染成功转导了原代T淋巴细胞。
逆转录病毒载体和慢病毒载体提供了用于将基因转移至真核细胞中的高效方法。此外，逆转录病毒整合或慢病毒整合以受控制的方式发生，并且导致每个细胞一个或几个拷贝新遗传信息的稳定整合。
考虑到刺激因子(例如淋巴因子或细胞因子)的过表达可能对所治疗的个体有毒。因此，导致本发明的T细胞在体内易受负选择影响的基因区段包括在本发明的范围内。当根据说明书阅读时，“负选择(negative selection)”具有其简单和普通的含义，并且可用于例如当由于个体的体内状况的改变而使输注的细胞被清除时。负选择表型可由赋予对所给予的药剂(例如化合物)的敏感性的基因的插入造成。负选择的基因是本领域已知的，并且尤其包括以下：赋予更昔洛韦敏感性的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-I TK)基因、细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因、细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)基因、和细菌胞嘧啶脱氨酶。
在一些可选方式中，在T细胞中包括阳性标记可能是有用的，所述阳性标记使负选择表型的细胞的体外选择成为可能。阳性选择标记可为基因，所述基因在被导入宿主细胞后表达允许携带该基因的细胞的阳性选择的显性表型。此类型的基因是本领域已知的，并且尤其包括：赋予对潮霉素B的抗性的潮霉素-B磷酸转移酶基因(hph)，编码对抗生素G418的抗性的来自Tn5的氨基糖苷磷酸转移酶基因(neo或aph)、提供对甲氨蝶呤的抗性的二氢叶酸还原酶(DHFRdm)基因的双突变体、腺苷脱氨酶基因(ADA)和/或多药剂抗性(MDR)基因。
如本领域所公知的，可采用多种方法来转导T淋巴细胞。在一些可选方式中，使用慢病毒载体进行转导。
在一些可选方式中，可用编码嵌合受体的表达载体对CD4+细胞和CD8+细胞各自分别进行修饰，以形成确定的群。在一些可选方式中，可用包含处于组成型启动子控制下的多核苷酸的载体以及包含处于诱导型启动子控制下的编码细胞因子受体或趋化因子受体的多核苷酸的载体，对细胞分别进行修饰。
在一些可选方式中，通过就对这些细胞群各自所特有的细胞表面抗原进行的分选，如上所述将这些细胞进一步分选为初始细胞、中央记忆细胞和效应细胞的亚群。另外，可通过其细胞因子谱或增殖活性，对CD4+或CD8+细胞群进行选择。例如，可选择与用经假转导的细胞或抗体刺激时的经转导的CD8+细胞相比具有增强的细胞因子(例如IL-2、IL-4、IL-10、TNFα和/或IFNγ)产生的CD4+ T淋巴细胞。在其它可选方式中，选择具有增强的IL-2和/或TNFα产生的初始CD4+ T细胞或中央记忆CD4+ T细胞。同样，选择相比经假转导的CD8+细胞而言具有增强的IFNγ产生的CD8+细胞。
在一些可选方式中，选择对携带抗原的细胞具有细胞毒性的CD4+细胞和CD8+细胞。在一些可选方式中，与CD8+细胞相比较，预期CD4+具有弱细胞毒性。在优选的可选方式中，使用针对特定类型的癌症建立的动物模型选择在体内提供肿瘤细胞杀伤的经转导的淋巴细胞(例如CD8+中央记忆细胞)。
在其它可选方式中，使用针对特定类型癌症建立的动物模型，选择可在体内持续存在的经转导的表达嵌合受体的T细胞。在一些可选方式中，已证实具有短间隔区区域的经转导的嵌合受体CD8+中央记忆细胞在导入动物3天以上、10天以上、20天以上、30天以上、40天以上、或50天以上后在体内持续存在。
本公开考虑将在组合物中利用CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的组合。在一个可选方式中，可将转导嵌合受体的CD4+细胞的组合与具有相同配体特异性的转导嵌合受体的CD8+细胞组合，或者与对不同肿瘤配体具有特异性的CD8+ T细胞组合。在其它可选方式中，将转导嵌合受体的CD8+细胞与对肿瘤上表达的不同配体具有特异性的转导嵌合受体的CD4+细胞组合。在另一可选方式中，将嵌合受体修饰的CD4+细胞和CD8+细胞组合。在一些可选方式中，可以不同的比将CD8+细胞和CD4+细胞组合，例如，CD8+和CD4+的比为1∶1、CD8+与CD4+的比为10∶1、或CD8+与CD4+的比例为100∶1，或CD8+与CD4+的比为由任意所列比例所限定的范围之间的任意其它比。在一些可选方式中，就体外和/或体内细胞增殖对组合的群进行测试，并选择提供细胞增殖的细胞的比。
在携带嵌合受体的细胞的转导和/或选择后，优选在体外对细胞群进行扩增，直至获得足够数量的细胞以向人受试者提供至少一个输注(通常约104细胞/kg至109细胞/kg)。在一些可选方式中，在携带抗原的细胞、抗CD3、抗CD28、以及IL2、IL-7、IL15或IL-21，或它们的任一组合存在的情况下培养所述经转导的细胞。
在一些可选方式中，选择在体外或体内响应于细胞因子刺激、抗原或肿瘤靶标而增殖的CD4+细胞和CD8+细胞。例如，选择在用抗CD3和/或抗CD28刺激时剧烈增殖的经转导的CD4+细胞或CD8+细胞。在一些可选方式中，在诱导型启动子控制下的那些转基因的诱导物(例如药剂)存在的情况下，经转导的细胞的刺激提供增强的转基因表达。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物、或调控细胞溶解能力的microRNA产物。在一些可选方式中，所述转基因编码调节T细胞的蛋白质。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。
可将CD4+细胞和CD8+细胞的亚群各自彼此组合。在具体的可选方式中，将经修饰的初始CD4+细胞或中央记忆CD4+细胞与经修饰的中央记忆CD8+ T细胞组合，以提供针对携带抗原的细胞(例如肿瘤细胞)的协同细胞毒作用。
组合物
本公开提供了过继细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含如本文所述的遗传修饰的T淋巴细胞制剂。在一些可选方式中，所述T淋巴细胞制剂包含CD4+ T细胞，所述CD4+ T细胞具有如本文所述的处于药剂诱导型启动子控制下的包含对疾病或紊乱相关的配体具有特异性的细胞外抗体可变结构域的嵌合受体、间隔区区域、跨膜结构域、以及T细胞受体或其它受体的细胞内信号转导结构域。在其它可选方式中，过继细胞免疫疗法组合物进一步包含提供细胞免疫应答的嵌合受体修饰的肿瘤特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞制剂，其中，所述细胞毒性T淋巴细胞制剂包含具有如下的CD8+ T细胞：如本文所述的处于药剂诱导型启动子控制下的包含对疾病或紊乱相关的配体具有特异性的细胞外单链抗体的嵌合受体、间隔区区域、跨膜结构域、以及T细胞受体的细胞内信号转导结构域。在一些可选方式中，本公开的嵌合受体修饰的T细胞群可在体内持续存在至少3天或更长。在可选方式中，这些群体各自可彼此组合或与其它细胞类型组合，以提供组合物。在一些可选方式中，所述T细胞群可表达调节T细胞功能的基因。在一些可选方式中，所述基因编码细胞因子、趋化因子受体和可调节T细胞功能的蛋白质。
在一些可选方式中，所述CD4+ T辅助淋巴细胞为初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+ T细胞或本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述CD4+辅助淋巴细胞为初始CD4+ T细胞，其中，所述初始CD4+ T细胞包含CD45RO-、CD45RA+ T细胞、和/或为CD62L+CD4+ T细胞。
在一些可选方式中，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞为初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和/或本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述CD8+细胞毒性T淋巴细胞为中央记忆T细胞，其中，所述中央记忆T细胞包括CD45RO+、CD62L+和/或CD8+ T细胞。在其它可选方式中，所述CD8+细胞毒性T淋巴细胞为中央记忆T细胞，并且所述CD4+辅助T淋巴细胞为初始CD4+ T细胞或中央记忆CD4+ T细胞。
在一些可选方式中，所述组合物包含T细胞前体。在一些可选方式中，所述组合物包含造血干细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含宿主细胞，其中所述宿主细胞为CD8+T细胞毒性淋巴细胞或CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞；所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞；以及第二宿主细胞，其中，所述第二宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。
方法
本公开提供了制造过继免疫疗法组合物的方法，以及使用这些组合物在患有疾病或紊乱的受试者中进行细胞免疫疗法的用途或方法。在一些可选方式中，制造组合物的方法包括获得修饰的初始CD4+ T辅助细胞或修饰的中央记忆CD4+ T辅助细胞，其中，所述修饰的辅助T淋巴细胞制剂包含具有以下的CD4+ T细胞：如本文所述的处于诱导型启动子控制下的包含对肿瘤细胞表面分子具有特异性的配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域。在其它可选方式中，CD4+细胞具有处于诱导型启动子的控制下的细胞因子或趋化因子受体。CD4+细胞可进一步具有处于诱导型启动子控制下的其它基因(控制凋亡、改变细胞外环境等的基因)。
在另一可选方式中，所述方法进一步包括获得修饰的CD8+中央记忆T细胞，其中，所述修饰的中央记忆CD8T淋巴细胞制剂包含具有以下的CD8+细胞：如本文所述的处于诱导型启动子控制下的包含对配体具有特异性的配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域，其中，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子，其中，所述配体可通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除。在其它可选方式中，CD8+细胞具有处于诱导型启动子的控制下的细胞因子或趋化因子受体。
在修饰的CD4+ T细胞和修饰的CD8+细胞毒性T细胞二者中的药剂诱导型启动子可相同或不同。在一些可选方式中，在一个细胞群中，所述连接至嵌合抗原受体的启动子为组成型启动子，并且在其它群中，其为诱导型启动子。例如，修饰的CD4+ T细胞具有处于组成型启动子控制下的包含对肿瘤细胞表面分子具有特异性的配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域，而所述CD8+细胞毒性T细胞包含具有以下的CD8+细胞：处于诱导型启动子控制下的处于诱导型启动子控制下的包含对肿瘤细胞表面分子具有特异性的配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域。在一些可选方式中，由组成型启动子或诱导型启动子控制的基因为编码细胞因子、趋化因子受体和凋亡调控子的基因。
在一些可选方式中，所述多核苷酸可编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体在CD4+与CD8+细胞群中不同。两种构建体之间的差异可包括配体结合结构域对抗原或表位的特异性或亲和力、间隔区区域的长度和序列以及细胞内信号转导组分。
在整个本公开中描述了用嵌合受体修饰的CD4+细胞和CD8+细胞的制备。抗原特异性T淋巴细胞可从患有该疾病或紊乱的患者中获得，或者可通过在抗原存在的情况下体外刺激T淋巴细胞来制备。也可如本文所述对未针对抗原特异性进行选择的CD4+ T淋巴细胞和/或CD8+ T淋巴细胞的亚群进行分离，并且在制造方法中组合。
在一些可选方式中，可通过至少两代增殖的能力对细胞群的组合的细胞表面标记的均一性进行评价，以具有均一的细胞分化状态。可通过将表达靶配体的细胞系与嵌合受体修饰的T细胞以及诱导嵌合抗原受体表达的药剂共培养，来进行质量控制，以在本领域已知的诱导物存在的情况下使用细胞毒性分析、增殖分析或细胞因子产生分析确定嵌合受体修饰的T细胞是否识别所述细胞系。可通过流式细胞术确定嵌合受体修饰的T细胞上的细胞表面标记和细胞分化状态。在一些可选方式中，所述CD8+细胞上的标记和细胞分化状态包括CD3、CD8、CD62L、CD28、CD27、CD69、D25、PD-1、CTLA-4、CD45RO和/或CD45RA。在一些可选方式中，所述CD4+细胞上的标记和细胞分化状态包括CD3、CD4、CD62L、CD28、CD27、CD69、CD25、PD-1、CTLA-4、CD45RO和/或CD45RA。
在一些可选方式中，如本文所述的嵌合受体修饰的T细胞能够在体内持续存在至少3天或至少10天。在一些可选方式中，如通过CFSE染料稀释测定的，如本文所述的嵌合受体修饰的T细胞可在体内增殖至少2代或至少3代。可通过使用疾病或紊乱的动物模型，以及给予细胞并确定经转移的细胞的持久性和/或增殖能力，对嵌合受体修饰的T细胞的增殖和持久性进行确定。在其它可选方式中，可通过经历携带抗原的细胞的多个激活循环在体外对增殖和激活进行测试。
本公开还提供了在患有疾病或紊乱的受试者中进行细胞免疫疗法的方法，所述方法包括：给予如本文所述在药剂诱导型启动子的控制下表达嵌合受体的淋巴细胞的组合物，以及给予所述药剂。
在一些可选方式中，所述药剂为如本文所述的三苯氧胺以及其变异体、衍生物、药用盐、溶剂合物和水合物。在一些可选方式中，在给予所述组合物前、给予所述组合物的同时或在给予所述组合物后的稍后时间点递送所述药剂。
在一些可选方式中，所述药剂与所述组合物一起给予，并且如果观察到组合物的毒性作用，则停用药剂直至毒性作用变小。毒性症状变小后再次给予所述药剂。在一些可选方式中，一旦毒性症状变小，可再次给予药剂。
在一些可选方式中，将所述药剂与组合物一起给予，但一旦受试者的肿瘤负荷或癌细胞降低，停用药剂一段时间，以允许修饰的细胞休息，并且如果修饰的细胞无活性，由于癌症的缓解而不需要所述修饰的细胞。
在其它可选方式中，所述方法包括向所述受试者给予遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂和/或遗传修饰的辅助T淋巴细胞制，所述遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂提供细胞免疫应答，其中，所述细胞毒性T淋巴细胞制剂包含CD8+ T细胞，所述CD8+ T细胞具有如本文所述的处于药剂诱导型启动子控制下的包含配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域，其中，所述配体结合结构域对所述配体具有特异性，其中，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的任何其它分子，其中，所述配体可通过淋巴细胞引发识别，调节，抑制和/或消除，所述遗传修饰的辅助T淋巴细胞制剂引发直接肿瘤识别并增强所述遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂介导细胞免疫应答的能力，其中，所述遗传修饰的辅助T淋巴细胞制剂包含CD4+ T细胞，所述CD4+ T细胞具有如本文所述的处于药剂诱导型启动子控制下的包含配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域，其中，所述配体结合结构域对所述配体具有特异性，其中，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒特异性分子或在靶细胞群上表达的任何其它分子，其中，所述配体可通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；以及给予诱导所述诱导型启动子的所述药剂。在一些可选方式中，在所述组合物或宿主细胞的给予后进行所述药剂的给予，其中，给予进行1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2周、4周或两个月或者所列时间中任意两个值之间的任意时间。在所述方法的一些可选方式中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导。
在其它可选方式中，所述方法包括向所述受试者给予遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂和/或遗传修饰的辅助T淋巴细胞制，所述遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂提供细胞免疫应答，其中，所述细胞毒性T淋巴细胞制剂包含CD8+ T细胞，所述CD8+ T细胞具有如本文所述的处于组成型启动子控制下的包含配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域，所述配体结合结构域对肿瘤细胞表面分子具有特异性，所述遗传修饰的辅助T淋巴细胞制剂引发直接肿瘤识别并增强所述遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂介导细胞免疫应答的能力，其中，所述辅助T淋巴细胞制剂包含CD4+ T细胞，所述CD4+ T细胞具有如本文所述的处于药剂诱导型启动子控制下的包含配体结合结构域的嵌合受体、间隔区结构域、跨膜结构域、以及细胞内信号转导结构域，其中，所述配体结合结构域对肿瘤细胞表面分子具有特异性；以及给予诱导所述诱导型启动子的所述药剂。在一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子为肿瘤表面分子。
在其它可选方式中，所述方法包括向所述受试者给予遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂和/或遗传修饰的辅助T淋巴细胞制，所述遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂提供细胞免疫应答，其中，所述细胞毒性T淋巴细胞制剂包含CD8+ T细胞，所述CD8+ T细胞如本文所述在诱导型启动子控制下表达细胞因子、趋化因子受体、调控凋亡的多肽，和/或调节检查点信号转导的多肽；所述遗传修饰的辅助T淋巴细胞制剂引发直接肿瘤识别并增强所述遗传修饰的细胞毒性T淋巴细胞制剂介导细胞免疫应答的能力，其中，所述辅助T淋巴细胞制剂包含CD4+ T细胞，所述CD4+ T细胞如本文所述在组成型启动子或药剂诱导型启动子控制下表达细胞因子、趋化因子受体、调控凋亡的多肽，和/或调节检查点信号转导的多肽；以及给予诱导所述诱导型启动子的所述药剂。在一些可选方式中，细胞群中的一种或多种在组成型启动子的控制下表达嵌合抗原受体。在一些可选方式中，所述检查点信号转导的调节抑制负向检查点调控子。在一些可选方式中，所述负向检查点调控子包括PD-1、VISTA、LAG-3和/或TIM3。
用于诱导的药剂的有效量为提供如本文所述的经转导的细胞中至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或由任意所列百分比的值所限定的范围之间的任意数量的嵌合抗原受体的诱导的所述药剂的量。在本文提供的方法中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导。
另一可选方式描述了在患有疾病或紊乱的受试者中进行细胞免疫疗法的方法，所述方法包括：就与所述疾病或紊乱相关的靶分子的存在对所述受试者的生物样品进行分析，以及给予本文所述的过继免疫疗法组合物并给予诱导所述诱导型启动子的所述药剂，其中，所述嵌合受体特异性结合所述靶分子。
可根据本文所述的可选方式治疗的受试者通常为人和其它灵长类动物受试者(例如用于兽医学目的的猴和猿)。受试者可为雄性或雌性，并且可为任意合适的年龄(包括幼儿、少年、青年、成人和老年受试者)。
所述方法可用于例如血液恶性肿瘤、黑素瘤、乳腺癌、脑癌和其它上皮恶性肿瘤或实体瘤的治疗或抑制。在一些可选方式中，与所述疾病或紊乱相关的分子为孤儿酪氨酸激酶受体ROR1、Her2、EGFR、CE7、hB7H3、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA或乙型肝炎表面抗原。
可使用本文所述的方法处理的受试者包括被鉴别或选择为患有癌症(包括但不限于结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、卵巢癌、皮肤癌(包括黑素瘤)、骨癌和脑癌等)的受试者。可通过临床评价或诊断评价来进行此类鉴别和/或选择。在一些可选方式中，可选方式针对的肿瘤相关抗原或分子为与黑素瘤、乳腺癌、脑癌、鳞状细胞癌、结肠癌、白血病、骨髓瘤和/或前列腺癌相关的抗原。在其它可选方式中，可用表达工程化嵌合受体的遗传修饰的T细胞靶向所述肿瘤相关分子。实例包括但不限于B细胞淋巴瘤、乳腺癌、脑癌、前列腺癌和/或白血病。
可根据已知技术或其变化，将如上所述而制备的细胞用于过继免疫疗法的方法和组合物，基于本公开这对于本领域技术人员而言将是显而易见的。
在一些可选方式中，通过首先从其培养基中收获细胞，然后洗涤并以治疗有效量将所述细胞集中在适于给予的媒介和容器系统(“药学上可接受的”运载体)，对所述细胞进行配制。合适的输注媒介可为任意等渗媒介制剂，通常为生理盐水、Normosol R(Abbott)或Plasma-Lyte A(Baxter)，但也可利用处于水中的5％葡萄糖或Ringer′s乳酸盐。所述输注媒介可补充有人血清白蛋白、胎牛血清或其它人血清组分。
在一些可选方式中，组合物中的治疗有效量或抑制有效量的细胞为经转导的CD4或CD8细胞，或至少2个细胞子集(例如1个CD8+中央记忆T细胞子集和1个CD4+辅助T细胞子集)，或更通常地大于102个细胞，并且多至106个细胞、多至并包括108或109个细胞，并且可多于1010个细胞。细胞的数量将取决于组合物所计划的最终用途以及其中包含的细胞类型。例如，如果期望对特定抗原具有特异性的细胞，则该群将含有大于70％、通常大于80％、85％和90％-95％的此类细胞。对于本文提供的用途，所述细胞通常为1升或更少的体积，可为500ml或更少、甚至250ml或100ml或更少或者由任意两个所列体积值所限定的范围之间的体积。因此，期望的细胞密度通常大于104个细胞/ml，并且通常为大于107个细胞/ml、通常为108个细胞/ml或更大。可将临床相关数量的免疫细胞分配到累积等于或超过以下的多次输注中：106个细胞、107个细胞、108个细胞、108个细胞、109个细胞、1010个细胞或1011个细胞或者由任意所列值中的任意两个端点所限定的范围之间的任意量的细胞。
在一些可选方式中，本发明的淋巴细胞可用于赋予个体免疫力。当根据说明书阅读时，“免疫力(immunity)”具有其简单和普通的含义，并且可用于例如指减小与对淋巴细胞响应所针对的病原体感染或肿瘤的响应相关的一种或多种身体症状。给予的细胞的量通常在对病原体具有免疫力的正常个体中呈现的范围内。因此，通常通过输注给予细胞，每次输注为从2个细胞多至至少106至3×1010个细胞的范围内，优选在至少107至109个细胞的范围内。T细胞可通过单次输注或通过在一段时间内的多次输注来给予。然而，由于预期不同的个体有不同的响应性，输注的细胞的类型和数量以及输注的次数和给予多次输注的时间范围由主治医师确定，并且可通过常规检查确定。如本文所例示的，使用本发明的快速扩增方法可容易地实现足够水平的T淋巴细胞(包括细胞毒性T淋巴细胞和/或辅助T淋巴细胞)的生成。
在一些可选方式中，向所鉴别或选择的受试者(例如鉴别或选择为患有黑素瘤、乳腺癌、脑癌、鳞状细胞癌、结肠癌、白血病、骨髓瘤和/或前列腺癌的受试者)静脉内、腹膜内、瘤内、骨髓中、淋巴结中和/或脑脊髓液中给予如本文所述的组合物。在一些可选方式中，将所述嵌合受体工程化组合物递送至所述肿瘤部位。或者，可将如本文所述的组合物与使细胞靶向至肿瘤或免疫系统区室并且避免例如肺的部位的化合物组合。
在一些可选方式中，如本文所述的组合物与化学治疗剂和/或免疫抑制剂一起给予。在可选方式中，首先向患者给予抑制或破坏其它免疫细胞的化学治疗剂，然后给予本文所述的组合物。在一些情况下可完全避免化疗。
在一些可选方式中，所述方法包括将如本文所述的修饰的T细胞与诱导物(例如诱导药剂)组合给予直至肿瘤负荷变小。一旦肿瘤负荷变小，可停用诱导药剂以将嵌合抗原受体的表达转至关闭并且降低表达受体的T细胞的数量。在其它可选方式中，可在不同时间给予诱导药剂，以在肿瘤生长复发或增加的情况下开启所述嵌合抗原受体的表达。
在其它可选方式中，所述诱导药剂可以数天、数周或数月的时间段给予，然后停用数天、数周或数月，然后再次给予所述诱导药剂数天、数周或数月以允许所述嵌合抗原受体表达的循环，以避免由于所述细胞的慢性刺激引起的失能或无响应性。
更多可选方式
在一些可选方式中，提供了用于转基因的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述调控凋亡的多肽为生存素。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码。在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所示药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂的药剂药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43在所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗-IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ IDNO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列： ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列： 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ IDNO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ IDNO：18中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在一些供选择的实施方案中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者与SEQ ID NO：120具有由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。
在一些可选方式中，提供了用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达的系统。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ IDNo：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂的至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子的嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子处于与所述第二启动子相反的方向。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗-IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：82中所示的序列编码：(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，提供了用于转基因在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了由本文所述的任一可选方式中的系统的第一核酸或任一可选方式中的系统的第二核酸编码的嵌合受体多肽。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所示药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ IDNO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含氨基酸序列编码SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含氨基酸序列编码SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗-IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 编码。在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列； 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了包含本文所述的任一可选方式中的系统的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所示药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在一些可选方式中，所述系统用于转基因在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至编码转基因的第一多核苷酸，以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ IDNO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿，疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列(MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSALTQPRSVSGFPGQSVTISCTGTTSDDVSWYQQHPGKAPQLMLYDVSKRPSGVPHRFSGSRSGRAASLIISGLQTEDEADYFCSSYAGRYNSVLFGGGTKLTVL)。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗-IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文的任一或多个可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)的组合物。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文中任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包括：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导型表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ IDNO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的祖：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞的宿主细胞，以及其中所述宿主细胞为造血干细胞的宿主细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞的宿主细胞，以及其中所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞或CD4+ T细胞的宿主细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞，所述CD4+ T细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含氨基酸序列编码SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K31OQ和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了用于制备本文中的任一可选方式中的宿主细胞的体外方法。所述方法包括：a)提供本文中的任一可选方式中的系统；以及b)将所述系统导入分离的T淋巴细胞群，并且在体外对各T淋巴细胞群进行扩增。在一些可选方式中，对所述T淋巴细胞进行扩增，并且其中，所述方法进一步包括在抗CD3和/或抗CD28以及至少一种稳态细胞因子存在的情况下对所述细胞进行培养，直至所述细胞充分扩增以用作细胞输注。在一些可选方式中，所述分离的T淋巴细胞群包含前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述淋巴细胞为CD8+或CD4+。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所示药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43在所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2hu08VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了对有需要的受试者的疾病进行治疗、抑制或减轻的方法。所述方法包括向所述受试者给予本文的任一可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)，或本文的任一或多个可选方式中的至少一种组合物或产品组合。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文提供的任一个或多个可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ IDNo：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ IDNo：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体而言，使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ IDNo：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ IDNo：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞的宿主细胞，以及其中所述宿主细胞为造血干细胞的宿主细胞，。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞的宿主细胞，以及为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞或的CD4+ T细胞的宿主细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+T细胞所组成的组，所述CD4+ T细胞选自初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+T细胞。在一些可选方式中，所述疾病为癌症或病毒性疾病。在一些可选方式中，对所述受试者进行鉴别或选择，以接受抗癌疗法。在一些可选方式中，对所述受试者进行鉴别或选择，以接受抗病毒治疗。在一些可选方式中，所述方法进一步包括测量或评价对所述疾病的抑制。在一些可选方式中，所述方法进一步包括：给予本文的任一种或多种可选细胞中的细胞或本文的任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合之前、期间或之后，向所述受试者提供另外的抗癌疗法或抗病毒疗法。在一些可选方式中，通过过继细胞转移，向所述受试者给予任一种或多种上述可选方式中的细胞(例如，哺乳动物细胞)或任一种或多种上述可选方式中的至少一种组合物或产品组合。在一些可选方式中，在所述受试者已接受另一种形式的抗癌疗法或抗病毒疗法之后，向所述受试者给予任一种或多种上述可选方式中的宿主细胞或任一种或多种上述可选方式中的至少一种组合物或产品组合。在一些可选方式中，所述方法进一步包括给予诱导所述宿主细胞或组合物中的转基因表达的药剂，以用于癌症或病毒感染的治疗。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、氟维司群和/或其它雌激素类似物、或CMP8。在一些可选方式中，以10mg/剂、11mg/剂、12mg/剂、13mg/剂、14mg/剂、15mg/剂、16mg/剂、17mg/剂、18mg/剂、19mg/剂或20mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予三苯氧胺。在一些可选方式中，以250mg/剂、300mg/剂、350mg/剂、400mg/剂、450mg/剂或500mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围，给予氟维司群。在一些可选方式中，以在血清中提供30nM、40nM或50nM药剂水平或者由上述值中任意两个所限定的范围内的药剂水平的剂量范围，给予所述CMP8。在一些可选方式中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。在一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEO IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或者任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合与诱导所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或组合物中的转基因表达的药剂组合用于治疗癌症或病毒感染的用途。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ IDNo：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ IDNo：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性的序列或者与SEQ ID NO：120具有由上述值中任意两个所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ IDNo：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文的任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ IDNO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并且操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞的宿主细胞，以及其中所述宿主细胞为造血干细胞的宿主细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞的宿主细胞，以及为CD8+T细胞毒性淋巴细胞或CD4+ T细胞的宿主细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+T细胞所组成的组，所述CD4+ T细胞选自于由初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+T细胞所组成的组。在一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、氟维司群和/或其它雌激素类似物、或CMP8。在一些可选方式中，以10mg/剂、11mg/剂、12mg/剂、13mg/剂、14mg/剂、15mg/剂、16mg/剂、17mg/剂、18mg/剂、19mg/剂或20mg/剂或者由上述值中任意两个所限定的范围内的剂量范围给予三苯氧胺。在一些可选方式中，以250mg/剂、300mg/剂、350mg/剂、400mg/剂、450mg/剂或500mg/剂或者由上述值中任意两个所述限定的范围内的剂量范围给予氟维司群。在一些可选方式中，以在血清中提供30nM、40nM或50nM药剂水平或者由上述值中任意两个所限定的范围内的药剂水平的剂量范围，给予所述CMP8。在一些可选方式中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。在一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13 zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQID NO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEO ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了在患有癌症或病毒感染的受试者中进行细胞免疫疗法的方法。所述方法包括向受试者给予本文的任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或本文的任一种或多种可选方式的至少一种组合物或产品组合，以及给予诱导所述组合物或所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中的转基因表达的药剂。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ IDNO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性的序列或者与SEQ ID NO：120具有由上述值中任意两个所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文的任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF 1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并且操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ IDNO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段，例如结合片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞的宿主细胞，以及其中所述宿主细胞为造血干细胞的宿主细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞的宿主细胞，以及为CD8+T细胞毒性淋巴细胞或CD4+ T细胞的宿主细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞所组成的组，所述CD4+ T细胞选自于由初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞所组成的组。在一些可选方式中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。在一些可选方式中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQID NO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
在一些可选方式中，提供了本文的任一种或多种可选方式中的宿主细胞(例如哺乳动物细胞)或本文中任一种或多种可选方式中的至少一种组合物或产品组合作为药物的用途。在一些可选方式中，所述宿主细胞(例如哺乳动物细胞)包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞(例如哺乳动物细胞)中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的任何其它所选的分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EF1αp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性的序列或者与SEQ ID NO：120具有由上述值中任意两个所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ IDNO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CDl9、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含处于药学上可接受的赋形剂中的本文的任一种或多种可选方式中的宿主细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞包含本文的任一可选方式中的系统。在一些可选方式中，所述系统用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至：第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含对配体具有特异性的配体结合结构域，所述配体选自于由肿瘤特异性分子、病毒特异性分子和在靶细胞群上表达的其它分子所组成的组，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码间隔区，优选编码经优化的多肽间隔区；第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码跨膜结构域；以及第四多核苷酸，所述第四多核苷酸编码细胞内信号转导结构域；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂的核酸，其中，所述系统可由比利用野生型HEA3嵌合转录因子的同等系统更小的所述药剂的量诱导，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达，或者所述系统与利用野生型HEA3的系统相比，在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23中所示的核酸序列。在所述系统的一些可选方式中，相比野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子，所述药剂例如在至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下诱导所述嵌合抗原受体高表达。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述信号转导结构域包含CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为诱导型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为组成型启动子。在所述系统的一些可选方式中，所述第二启动子为EFlαp。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中所示的至少一个氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂由SEQ ID NO：12-SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的至少一个核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码选择标记的第五多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含编码选择标记的第六多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记为EGFRt和/或HER2t。在所述系统的一些可选方式中，所述选择标记赋予药剂抗性。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的第七多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。在所述系统的一些可选方式中，对所述间隔区进行优化，以相比参比嵌合受体使响应于所述配体的细胞因子产生和/或T细胞增殖增加。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并且操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在一些可选方式中，所述系统用于对T细胞功能进行调控的基因的诱导型表达。所述系统包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，其中，所述第一核酸可操作地连接至第一多核苷酸，所述第一多核苷酸编码细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、调节检查点信号转导的多肽、调控生长的microRNA产物、调控生存的microRNA产物或调控细胞溶解能力的microRNA产物；以及b)第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，其中，所述第二核酸可操作地连接至第三核酸，所述第三核酸编码用于所述由药剂诱导的第一启动子的转录激活剂；并且其中，所述系统被配置为响应于小于利用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的同等系统的所述药剂的量，或者与利用野生型HEA3的系统相比，所述系统在所述药剂的给定浓度下具有增强的转录表达。在所述系统的一些可选方式中，所述转录激活剂为HEA3或HEA4。在所述系统的一些可选方式中，HEA3为野生型HEA3转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA4为野生型HEA4转录因子的变异体。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA3包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，并且其中，所述雌激素受体配体结合结构域包含允许选择性结合所述药剂配体的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，HEA4包含雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)和RelA(p65)反式激活结构域，其中，所述RelA(p65)反式激活结构域包含使响应于药剂的转录活性增强的至少一个突变。在所述系统的一些可选方式中，所述HEA3嵌合转录因子或HEA4嵌合转录因子的变异体包含使响应于所述药剂配体的转录活性增强的p65模拟磷酸化氨基酸置换和/或模拟乙酰化氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体包含SEQ ID No：1-SEQ ID No：3、SEQ ID No：8-SEQ ID No：11和/或SEQ ID No：121中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA3转录因子的变异体由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：122中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体包含SEQ ID No：4-SEQ ID No：7中所示的氨基酸序列。在所述系统的一些可选方式中，所述野生型HEA4转录因子的变异体由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18中所示的核酸序列编码。在所述系统的一些可选方式中，所述转录调控子为HEA3嵌合转录因子的变异体，并且其中，所述变异体包含允许选择性结合所述药剂的氨基酸置换。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂为三苯氧胺和/或其代谢物、4-羟基三苯氧胺、氟维司群或其它雌激素类似物、或CMP8。在所述系统的一些可选方式中，在所述药剂至少4nM、6nM、8nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、200nM、300nM、400nM或500nM的药剂浓度下或者在由上述值中任意两个所限定的范围内的浓度下，所述药剂诱导高于野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子的所述嵌合抗原受体表达水平。在所述系统的一些可选方式中，所述药剂在小于10nM药剂但不为零的药剂无毒剂量下诱导所述嵌合抗原受体的表达。在所述系统的一些可选方式中，与用于使用野生型HEA3嵌合转录因子或野生型HEA4嵌合转录因子诱导表达的剂量相比，药剂的所述无毒剂量降低、消除或防止药剂副作用。在所述系统的一些可选方式中，所述副作用为白内障、便秘、腹泻、水肿、疲劳、液体潴留、潮红、头痛、潮热、高血压、肌肉疼痛、恶心、呼吸短促、呕吐或体重减轻。在所述系统的一些可选方式中，所述第二核酸进一步包含：编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域，所述配体为肿瘤特异性分子、病毒分子或在靶细胞群上表达的其它分子，其中，所述配体通过淋巴细胞引发识别、调节、抑制和/或消除；编码多肽间隔区的多核苷酸，其中，所述间隔区为经优化的间隔区；编码跨膜结构域的多核苷酸；以及编码细胞内信号转导结构域的多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述第一启动子的方向与所述第二启动子相反。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为抗体片段。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域为单链可变片段。在所述系统的一些可选方式中，所述肿瘤特异性分子选自于由以下所组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2和MAGE A3 TCR，或它们的任意组合。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒特异性分子为HIV包膜蛋白或HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白或Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。在所述系统的一些可选方式中，所述配体结合结构域与CD19、CD20、CD22、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、Her2、B7H3、CD33、间皮素、ROR-1、FITC和/或VAR2CSA特异性结合。在所述系统的一些可选方式中，所述间隔区包含IgG4、IgG4-CH2(L235D，N297Q)或IgG4-CH3。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述间隔区可操作地连接至所述第一启动子，并可操作地连接至编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和编码所述嵌合抗原受体的所述第一多核苷酸之间。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在所述系统的一些可选方式中，所述DNA间隔区增强所述嵌合抗原受体的基因表达。在所述系统的一些可选方式中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。在所述系统的一些可选方式中，两个载体都包装在病毒载体中。在所述系统的一些可选方式中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。在一些可选方式中，所述宿主细胞为前体T细胞。在一些可选方式中，所述前体T细胞为造血干细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD8+T细胞、中央记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和本体CD8+T细胞。在一些可选方式中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下所组成的组：初始CD4+T细胞、中央记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+T细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞的宿主细胞，以及其中所述宿主细胞为造血干细胞的宿主细胞。在一些可选方式中，所述组合物包含：其中所述宿主细胞为前体T细胞或造血干细胞的宿主细胞，以及为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞或CD4+ T细胞的宿主细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞所组成的组，所述CD4+ T细胞选自于由初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+T细胞和本体CD4+ T细胞所组成的组。在一些可选方式中，所述嵌合抗原受体包含scFv。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv包含huCD19 scFv(G01S)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：41的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由muCD19(FMC63)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合CD19。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：42中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：43的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含B7H3(hBRCA84D)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv特异性结合B7-H3受体。在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对L1CAM的表位CE7表位而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ IDNO：50中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含L1CAM(CE7)scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：51的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EGFR(西妥昔单抗)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：52中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含EGFR scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：53的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含EGFRVIII(806)scFv核苷酸序列。在一些可选方式中，所述scFv对EGFR而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv由EphA2(2A4)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：56中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由EpHA2(4H5)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：58中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由FITC(E2)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：60中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu08)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：68中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2 hu08 VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：69的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VlVh scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：70中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：71的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：72中所示的核酸序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含IL13Ra2(hu07)VhV1 scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：73的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由抗IL13Ra2(IL13zetakine)核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv由SEQ ID NO：74中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含抗IL13Ra2(IL13 zetakine)氨基酸序列。在一些可选方式中，所述抗体或其部分或scFv包含SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQID NO：75的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由oaGD2(8B6)VlVhscFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：76中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含oaGD2(8B6)VlVh scFv氨基酸序列。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列 在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：77的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由ROR1(R12)scFv核苷酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：78中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列(ROR1(R12)scFv氨基酸序列； ).。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：79的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv核苷酸序列 在一些可选方式中，所述scFv对CD33而言是特异性的。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VhV1 scFv氨基酸序列； )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：81的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQID NO：82中所示的序列编码(CD33(h2H12)VlVh scFv核苷酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列(CD33(h2H12)VlVh scFv氨基酸序列： )。在一些可选方式中，所述scFv由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：83的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：84中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv由SEQ ID NO：86中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述scFv包含SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码(IgG4铰链核苷酸序列：gagagcaagtacggaccgccctgccccccttgccct).。在一些可选方式中，所述间隔区包含SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列(IgG4铰链氨基酸序列：ESKYGPPCPPCP)。在一些可选方式中，所述间隔区由包含编码氨基酸序列SEQ ID NO：103的核酸序列的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述间隔区由SEQ ID NO：104中所示的核酸序列编码。在一些可选方式中，所述DNA间隔区位于诱导型启动子和转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，HEA3包含两个氨基酸突变，其中，所述序列由SEQ ID NO：122中所示的序列编码 在一些可选方式中，所述HEA3包含SEQ ID NO：121中所示的氨基酸序列 该序列包含在p65结构域中含有增强转录活性的两个点突变(K310Q和S536E，RelA蛋白中的位置)的HEA3的序列。其被称为HEA3(p65/S536E/K310Q)。RelA中的K310Q对应HEA3中的位置621；S536E对应于HEA3中的位置846。在一些可选方式中，提供了用于嵌合抗原受体在细胞中的诱导型表达的系统。在一些可选方式中，所述转基因编码调控凋亡的多肽。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如Bcl2和/或CA-Akt。在一些可选方式中，所述多肽为Bcl2或CA-Akt。在一些可选方式中，抑制凋亡的基因包括例如生存素、Bcl2、CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，所述多肽为生存素、Bcl2或CA-Akt和/或dnCaspase3。在一些可选方式中，生存素由SEQ ID NO：124中所示的序列编码 在一些可选方式中，生存素包含SEQ ID NO：123中所示的氨基酸序列
载体构建和双重包装慢病毒的制备
构建了诱导型慢病毒载体，所述诱导型慢病毒载体编码组成型表达的药剂诱导型转录因子。该构建体编码HEA3单RelA变异体、HEA4单RelA变异体、HEA4双RelA变异体(SEQID NO：12-SEQ ID NO：21)、野生型HEA3或野生型HEA4，以及ZsGreen荧光报告子。
构建了编码7xHBD/mE1B-ZsGreen-epHIV7的条件性慢病毒载体。通过将从人白蛋白启动子克隆的7个最小的肝细胞核因子1-α(Hepatocyte Nuclear Factor 1-alpha，HNF1α)结合位点和E1B TATA盒进行组合，构建了合成启动子7xHBD/mE1B。以这种方式，HEA3或HEA4与7xHBD/mE1B启动子的结合仅在三苯氧胺存在的情况下诱导转基因表达的“ON”状态。
转录调控子HEA3为由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域，其继而融合至NF-κβ的p65激活结构域(p65)。在缺乏三苯氧胺的情况下，通过胞浆热休克蛋白90(HSP90)与三苯氧胺结合活性位点的结合将HEA3从核排除，转基因表达处于“OFF”状态。纳摩尔级浓度的胞浆三苯氧胺在ER-LBD结合中主动竞争并超过了HSP90，导致HEA3转位至核。核转位后，HEA3可容易地结合HEA3限制性合成启动子。当转基因被置于HEA3响应性合成启动子(7xHBD/mE1B)后面时，实现了在三苯氧胺存在的情况下对HEA3的转录响应性。在一些可选方式中，DNA间隔区位于所述诱导型启动子和所述转基因之间。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ IDNO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。
转录调控子HEA4为由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域(含有消除对雌二醇的敏感性的3个氨基酸置换)的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域，其继而融合至NF-κβ(p65)的p65激活结构域。已构建了p65激活结构域中的单突变或双突变，以增强转录活性。在缺乏三苯氧胺的情况下，通过胞浆热休克蛋白90(HSP90)与三苯氧胺结合活性位点的结合将HEA4从核排除，转基因表达处于“OFF”状态。纳摩尔级浓度的胞浆三苯氧胺在ER-LBD结合中主动竞争并超过了HSP90，导致HEA4转位至核。核转位后，HEA4可容易地结合HEA4限制性合成启动子。当转基因被置于HEA4响应性合成启动子(7xHBD/mE1B)后面时，实现了在三苯氧胺存在的情况下对HEA4的转录响应性。在一些可选方式中，DNA间隔区位于所述诱导型启动子和所述转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。
合成的启动子7xHBD/mE1B由从人白蛋白启动子克隆的7个最小的肝细胞核因子-1(Hepatocyte Nuclear Factor-1，HNF-1α)结合位点和mE1B启动子TATA盒组成。以此方式，HEA3或HEA4与7xHBD/mE1B启动子的结合仅在三苯氧胺存在的情况下诱导转基因表达的“ON”状态。在一些可选方式中，DNA间隔区位于所述诱导型启动子和所述转基因之间。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列(SEQ ID NO：120；gctagcgtttaaacttaagcttggtaccgagctcggatccgccacc)。在一些可选方式中，所述DNA间隔区包含与SEQ ID NO：120具有95％、90％、85％或80％序列一致性或者由任意两个上述值所限定的范围之间的任意百分比序列一致性的序列。在一些可选方式中，所述转基因编码嵌合抗原受体。
构建了处于EF1a组成型启动子的控制下的编码嵌合转录因子的核酸序列。编码嵌合转录因子的核酸序列与编码自剪切T2A序列和标记序列EGFRt的序列连接，并且克隆至epHIV7.2慢病毒骨架中。
在使用Lipofectamine 2000(Life Technologies)用包装载体pCHGP-2、pCMV-Rev2和pCMV-G以1∶2(HEA3或HEA4∶7xHBD/mE1B)摩尔比共转染的293T细胞中生产怀有组成型嵌合转录因子和诱导型7xHBD/mE1B-ZsGreen的慢病毒。转染后16小时更换培养基，72小时后收集病毒。在4℃下将病毒在24,500rpm下浓缩1小时34分钟。
用三苯氧胺诱导时表达ZsGreen的Jurkat系的生成
用补充有1μg/mL硫酸鱼精蛋白(Seattle Children′s Hospital Pharmacy)的慢病毒上清液(MO1≥3)对Jurkat细胞进行转导。使经转导的Jurkat细胞在RPML、10％FBS和2mM L-谷氨酰胺中扩增。转导后10-30天，使用生物素化的西妥昔单抗和抗生物素磁性微珠(Miltenyi)对EGFRt+细胞进行富集。将细胞在RPML、10％FBS和2mM L-谷氨酰胺中培养，直至用于细胞分析。
怀有组成型表达的药剂诱导型转录因子的双重包装的慢病毒构建体的示意图
构建了表达HEA3(图1A)或HEA4(图1B)单突变型RelA突变体(S536E或K310Q或WT[野生型])以及ZsGreen荧光报告子载体的Jurkat细胞。
HEA3和HEA4单突变型RelA突变体的“ON”状态和“OFF”状态的特征
在500nM 4-OHT存在或缺乏的情况下，以5.0E5细胞/mL接种Jurkat细胞。24小时后，收集细胞，用处于含有2％FBS和0.1％NaN3的HBSS中的链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色，并固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和ZsGreen报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了用500nM 4-OHT培养24小时后，表达HEA3(图1C)或HEA4(图1D)单突变型RelA(S536E或K310Q)突变体的Jurkat细胞中的ZsGreen报告子表达。
HEA3和HEA4单突变型RelA突变体的4-OHT剂量响应的特征
将表达HEA3(图1A)或HEA4(图1B)单突变型RelA变异体(S536E或K310Q或WT[野生型])和ZsGreen荧光报告子载体的Jurkat细胞以5.0E5细胞/mL与建增的4-OHT剂量一起接种。24小时后，收集细胞，用处于含有2％FBS和0.1％的HBSS中的链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色，并固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和ZsGreen报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了4-OHT剂量响应：表达HEA3(图1E)或HEA4(图1F)RelA变异体的Jurkat细胞的EGFRt+ZsGreen+细胞百分比和ZsGreen中位荧光强度。
怀有组成型表达的药剂诱导型转录因子的双重包装的慢病毒构建体的示意图
构建了表达HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)突变体(图2A)或CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)突变体(图2B)以及ZsGreen荧光报告载体的Jurkat细胞。
HEA4双突变型RelA突变体和CMP8响应性HEA3单突变型RelA突变体的“ON”状态和“OFF”状态的特征。
在500nM 4-OHT(图2C)或CMP8(图2D)存在或缺乏的情况下，以5.0E5细胞/mL接种Jurkat细胞。24小时后，收集细胞，用处于含有2％FBS和0.1％NaN3的HBSS中的和链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色，并固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和ZsGreen报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了用500nM 4-OHT或500nM CMP8培养24小时后的表达HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)突变体(图2C)或CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)突变体(图2D)的Jurkat细胞中的ZsGreen报告子表达。
HEA4双突变型RelA变异体和CMP8响应性HEA3单突变型RelA变异体的4-OHT剂量响 应的特征
将表达HEA4双突变型RelA变异体(S536E/K310Q)(图2A)或CMP8响应性HEA3单突变型RelA变异体(图2B)以及ZsGreen荧光报告载体的Jurkat细胞以5.0E5细胞/mL与渐增的4-OHT或CMP8剂量一起接种。24小时后，收集细胞，用处于含有2％FBS和0.1％的HBSS中的链霉抗生物素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色，并固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和ZsGreen报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了4-OHT剂量响应：表达HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)变异体(图2E)或CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)变异体(图2F)的Jurkat细胞的EGFRt+ZsGreen+细胞百分比和ZsGreen中位荧光强度。
包含DNA间隔区的慢病毒载体
构建了表达HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)变异体或CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)变异体以及ZsGreen荧光报告载体的Jurkat细胞。为了比较表达水平，还构建了表达包含启动子和转基因之间的DNA间隔区的HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)变异体或包含启动子和转基因之间的DNA间隔区的CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)变异体以及ZsGreen荧光报告载体的Jurkat细胞。
在500nM 4-OHT(图2C)或CMP8存在或缺乏的情况下，以5.0E5细胞/mL接种Jurkat细胞。24小时后，收集细胞，用处于含有2％FBS和0.1％的HBSS中的链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色，并固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和ZsGreen报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。对以下二者进行比较：在用500nM 4-OHT或500nM CMP8培养24小时后表达HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)变异体或CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)变异体的Jurkat细胞中的ZsGreen报告子表达，和在用500nM 4-OHT或500nM CMP8培养24小时后表达具有DNA间隔区的HEA4双突变型RelA(S536E/K310Q)变异体和具有DNA间隔区的CMP8响应性HEA3单突变型RelA(S536E)变异体的Jurkat细胞中的表达。预期与缺乏启动子和转基因之间的DNA间隔区的载体相比，转基因的表达增加1.5至2.0倍。这也取决于转基因。所述DNA间隔区包含SEQ ID NO：120中所示的序列。
其它方法
载体构建和双重包装慢病毒的制备
构建了诱导型慢病毒载体，所述慢病毒载体编码组成型表达的药剂诱导型转录因子。所述构建体编码HEA4(p65/S536E/K310Q)双突变型RelA变异体(SEQ ID NO：7)和eGFP：ffluc报告子。在一些情况中，所述构建体编码HEA4(p65/S536E/K310Q)双突变型RelA变异体以及生存素或CCR(CD122)。
构建了条件性慢病毒载体(7xHBD/mE1B_eGFP:ffluc_epHIV7.2、7xHBD/mE1B_生存素-T2A-Her2tG_epHIV7.2和7xHBD/mE1B_CCR(CD122)-T2A-Her2tG_epHIV7.2)。通过对从人白蛋白启动子克隆的7个最小的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)结合位点和E1B TATA盒进行组合，构建了合成启动子7xHBD/mE1B。以此方式，HEA3或HEA4至7xHBD/mE1B启动子的结合仅在三苯氧胺存在的情况下诱导转基因表达的“ON”状态。
转录调控子HEA4(p65/S536E/K310Q)为由人亚基组成的嵌合转录因子，所述人亚基包括框内融合至雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)的突变型三苯氧胺特异性配体结合结构域(含有3个氨基酸置换，其消除对雌二醇的敏感性)的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)的N末端DNA结合结构域，其继而融合至NF-κβ(p65)的p65激活结构域。将两个突变(S536E/K310Q)引入p65激活结构域以增强转录活性。在缺乏三苯氧胺的情况下，通过胞浆热休克蛋白90(HSP90)与三苯氧胺结合活性位点的结合将HEA4(p65/S536E/K310Q)从核排除，转基因表达处于“OFF”状态。纳摩尔级浓度的胞浆三苯氧胺在ER-LBD结合中主动竞争并超过HSP90，导致HEA4(p65/S536E/K310Q)至核的转位。在核转位后，HEA4(p65/S536E/K310Q)可容易地结合HEA4(p65/S536E/K310Q)限制性合成启动子。当转基因被置于HEA4(p65/S536E/K310Q)响应性合成启动子(7xHBD/mE1B)后面时，实现了在三苯氧胺存在的情况下对HEA4(p65/S536E/K310Q)的转录响应性。合成启动子7xHBD/mE1B由从人白蛋白启动子克隆的7个最小的肝细胞核因子1-α(HNF-1α)结合位点和E1B启动子TATA盒组成。以这种方式，HEA4(p65/S536E/K310Q)与7xHBD/mE1B启动子的结合仅在三苯氧胺存在的情况下诱导转基因表达的“ON”状态。
构建了处于EF1a组成型启动子的控制下的编码嵌合转录因子的核酸序列。将编码嵌合转录因子的核酸序列与编码自剪切T2A序列和标记序列EGFRt的序列连接，并且克隆至epHIV7.2慢病毒骨架中。
将编码生存素或CCR(CD122)的核酸序列与编码自剪切T2A序列和标记序列Her2tG的序列连接，并且克隆至epHIV7.2慢病毒骨架中。
在使用Lipofectamine 2000(Life Technologies)用包装载体pCHGP-2、pCMV-Rev2和pCMV-G以1∶2(HEA4(p65/S536E/K310Q)∶7xHBD/mE1B)摩尔比共转染的293T细胞中生产怀有组成型嵌合转录因子和诱导型7xHBD/mE1B_eGFP:ffluc(图3A、图4A、图5A)、诱导型7xHBD/mE1B_生存素-T2A-Her2tG(图6A)或诱导型7xHBD/mE1B_CCR(CD122)-T2A-Her2tG(图6B)的慢病毒。转染后16小时更换培养基，72小时后收集病毒。在4℃下将病毒在24,500rpm下浓缩1小时34分钟。
用三苯氧胺诱导时表达eGFP:ffluc的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的生成
使用CD4微珠和CD8微珠(Miltenyi)从PBMC分离人CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。分别培养CD4+ T细胞和CD8+ T细胞，用于整个实验。分离后立即用用于T细胞扩增的DynabeadsHuman T-ActivatorCD3/CD28(Life Technologies)以1∶1的珠∶细胞比刺激CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。用RPML、10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、IL-7(5ng/mL)和IL-15(0.5ng/mL)培养CD4+ T细胞。用RPML、10％FBS和2mM L-谷氨酰胺、IL-2(50U/mL)和IL-15(0.5ng/mL)培养CD8+T细胞。分离后2天，用补充有1μg/mL硫酸鱼精蛋白(Seattle Children′s HospitalPharmacy)的慢病毒上清液(MOI 1.0)转导CD4+ T细胞和CD8+T细胞。转导后10-15天，使用生物素化的西妥昔单抗和抗生物素磁性微珠(Miltenyi)对EGFRt+细胞进行富集。培养开始后21天，使用经照射的TM-LCL、PBMC和抗CD3(OKT3)抗体(30ng/mL)通过快速扩增方案将T细胞扩增14天。在一些情况中，使用快速扩增方案使T细胞经历另外14天的第二扩增。
怀有组成型表达的药剂诱导型转录因子的双重包装的慢病毒构建体的示意图
构建了表达HEA4(p65/S536E/K310)和eGFP:ffluc报告子的CD4+T细胞和CD8+ T细胞(图3A、图4A和图5A)。
通过蛋白质印迹确认的药剂诱导型转录因子的表达
收集5.0e6转导的CD8+ T细胞和空白(mock)转导的CD8+T细胞。用补充有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。在NuPAGE 4％-12％Bis-Tris凝胶上跑10μg蛋白质，并转移到硝酸纤维素膜上。将膜在室温下封闭1小时，然后在4℃下用兔抗p65抗体(Cell Signaling)探测过夜。对膜进行洗涤，并用山羊抗兔IR Dye 800 CW(LiCor)探测。对膜进行洗涤，并使用Li-Cor Odyssey CLX Scanner进行成像，以确认HEA4(p65/S536E/K310Q)的表达(图3B)。
通过流式细胞术确认的eGFP的背景水平和药剂诱导型转录因子的表达
收集1.0e6的转导的CD8+ T细胞和空白转导的CD8+ T细胞，用处于含有2％FBS和0.1％NaN3的HBSS中的链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色，并固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和eGFP报告子表达(图3C)。
CD4+ T细胞和CD8+ T细胞中HEA4(p65/S536E/K310Q)双突变型RelA变异体的“ON” 状态和“OFF”状态的特征
在0-500nM 4-OHT存在或缺乏的情况下，将1.0e5转导的和空白转导的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞与或不与Dynabeads(2∶1的珠∶细胞比)或PMA(2μM)/离子霉素(20ng/mL)一起接种24小时。收获细胞并用处于含有2％FBS和0.1％NaN3的HBSS中的链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色。将细胞固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和eGFP报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了在用0、30nM或500nM 4-OHT培养24小时后表达HEA4(S536E/K310Q)变异体的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞中的eGFP报告子表达(图4B)。
HEA4(S536E/K310Q)双突变型RelA变异体在CD4+ T细胞和CD8+ T细胞中的4-OHT 剂量反应响应
在0-500nM 4-OHT存在或缺乏的情况下，将1.0e5转导的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞和空白对照T细胞与或不与Dynabeads(2∶1的珠∶细胞比)或PMA(2μM)/离子霉素(20ng/mL)一起接种24小时。收获细胞并用处于含有2％FBS和0.1％NaN3的HBSS中的链霉亲和素-APC和生物素化的西妥昔单抗进行染色。将细胞固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和eGFP报告子表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了用0-500nM 4-OHT培养24小时后的％EGFRt+eGFP+CD4+ T细胞(图5B)和CD8+ T细胞(图5C)以及eGFP中位荧光强度(图5D-图5E)。
怀有组成型表达的药剂诱导型转录因子的双重包装的慢病毒构建体的示意图
构建了表达HEA4(p65/S536E/K310)和诱导型7xHBD/mE1B_生存素-T2A-Her2tG(图6A)或诱导型7xHBD/mE1B_CCR(CD122)-T2A-Her2tG(图6B)的Jurkat细胞。
用三苯氧胺诱导时表达生存素或CCR(CD122)的Jurkat细胞系的生成
用补充有1.0μg/mL硫酸鱼精蛋白(Seattle Children′s Hospital Pharmacy)的慢病毒上清液(MOI≥3.0)转导Jurkat细胞。用RPML、10％FBS和2mM L-谷氨酰胺培养Jurkat细胞。
Jurkat细胞中诱导型生存素或诱导CCR(CD122)以及HEA4(p65/S536E/K310Q)双突 变型RelA变异体的“ON”状态转换
在500nM 4-OHT存在或缺乏的情况下，以5.0e5细胞/mL接种Jurkat细胞24小时。收获细胞并用处于含有2％FBS和0.1％NaN3的HBSS中的链霉亲和素-PE、西妥昔单抗-APC、和生物素化的赫塞汀进行染色。将细胞固定在具有多聚甲醛的PBS中。在MACSQuant(Miltenyi)上获得EGFRt和Her2tG表达。使用FlowJo版本10对数据进行分析。示出了在用500nM 4-OHT培养24小时后表达HEA4(S536E/K310Q)双突变型RelA变异体和诱导型生存素(图6C)或诱导型CCR(CD122)(图6D)的Jurkat细胞中的Her2tG表达。
以上参考具体可选方式对本发明进行了描述。然而，除上述外的其它可选方式同样可在本发明范围内。在本发明范围内可提供与上述所述方法步骤不同的方法步骤。除所描述的组合之外，本发明的不同特征和步骤可以其它组合进行组合。本发明的范围仅受所附专利权利要求限制。
关于本文中复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可根据上下文和/或应用适当地从复数转换为单数和/或从单数转换为复数。为清楚起见，此处可明确阐述各种单数/复数置换。
通常，本领域技术人员将理解本文使用的术语，尤其是所附权利要求(例如所附权利要求的主体)通常旨在作为“开放式”术语(例如，术语“包括/包含(including)”应解释为“包括/包含但不限于”，术语“具有(having)”应解释为“至少具有”，术语“包括/包含(includes)”应解释为“包括/包含但不限于”等)。
另外，在根据Markush群组描述本公开的方面或特征的情况下，本领域技术人员将认识到本公开也因此以Markush群组的任意个体成员或成员子群的形式描述。
第一方面至第十一方面的可选方式的特征中的任一种适用于本文所认定的所有方面和可选方式。此外，第一方面至第十一方面的可选方式的特征中的任一种可以任意方式部分或全部地与本文所述的其它可选方式独立组合(例如一个、两个或三个或更多可选方式可全部或部分地组合)。此外，第一方面至第十一方面的可选方式的特征中的任一个对于其它方面或可选方式可当作可选的。尽管以上关于各种示例可选方式和实施方式进行了描述，但应该理解在一个或多个个体可选方式中描述的各种特征、方面和功能并不将其适用性限于关于其进行描述的特定可选方式，而是可单独或以各种组合应用于本申请的一个或多个其它可选方式，无论是否描述了此类可选方式并且无论此类特征是否被呈现为所描述的可选方式的部分。因此，本申请的广度和范围不应受上述示例可选方式中任一种限制。
本文引用的所有参考文献都以引用的方式整体并入本文。如果以引用的方式并入的延伸出版物和专利或专利申请与本说明书中包含的公开相矛盾，则本说明书旨在取代和/或优先于任意此类矛盾材料。如果以引用的方式并入本文的延伸出版物和专利或专利申请与本说明书中包含的公开相矛盾，则本说明书旨在取代和/或优先于任何此类矛盾材料。
序列表
<110> Seattle Children's Research Institute
Jensen, Michael C.
Ooi, Tracy
Wei, Jia
<120> 对哺乳动物细胞中转基因表达的药剂配体诱导具有增大的灵敏度的嵌合转录因子变异体
<130> SCRI.118WO
<160> 124
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 由人亚基组成的嵌合转录因子
<400> 1
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<223> 在p65结构域中含有一个点突变的HEA3
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 含有至少三个突变的HEA4
<400> 4
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
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35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
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Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
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165 170 175
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Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
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Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
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<220>
<223> 在p65结构域中含有一个点突变的HEA4
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在p65结构域中含有一个点突变的HEA4
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<210> 7
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在p65结构域中含有增强转录活性两个点突变的HEA4
<400> 7
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
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Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
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850 855 860
<210> 8
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在ER-LBD中含有三个点突变的HEA3
<400> 8
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
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Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
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145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
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195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
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420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser
450 455 460
Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr
485 490 495
Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser
500 505 510
His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Arg Met Glu His Leu Tyr Ser Met
515 520 525
Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Met Leu
530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser
565 570 575
His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro
580 585 590
Ala Thr Val Glu Phe Gln Tyr Leu Pro Asp Thr Asp Asp Arg His Arg
595 600 605
Ile Glu Glu Lys Arg Lys Arg Thr Tyr Glu Thr Phe Lys Ser Ile Met
610 615 620
Lys Lys Ser Pro Phe Ser Gly Pro Thr Asp Pro Arg Pro Pro Pro Arg
625 630 635 640
Arg Ile Ala Val Pro Ser Arg Ser Ser Ala Ser Val Pro Lys Pro Ala
645 650 655
Pro Gln Pro Tyr Pro Phe Thr Ser Ser Leu Ser Thr Ile Asn Tyr Asp
660 665 670
Glu Phe Pro Thr Met Val Phe Pro Ser Gly Gln Ile Ser Gln Ala Ser
675 680 685
Ala Leu Ala Pro Ala Pro Pro Gln Val Leu Pro Gln Ala Pro Ala Pro
690 695 700
Ala Pro Ala Pro Ala Met Val Ser Ala Leu Ala Gln Ala Pro Ala Pro
705 710 715 720
Val Pro Val Leu Ala Pro Gly Pro Pro Gln Ala Val Ala Pro Pro Ala
725 730 735
Pro Lys Pro Thr Gln Ala Gly Glu Gly Thr Leu Ser Glu Ala Leu Leu
740 745 750
Gln Leu Gln Phe Asp Asp Glu Asp Leu Gly Ala Leu Leu Gly Asn Ser
755 760 765
Thr Asp Pro Ala Val Phe Thr Asp Leu Ala Ser Val Asp Asn Ser Glu
770 775 780
Phe Gln Gln Leu Leu Asn Gln Gly Ile Pro Val Ala Pro His Thr Thr
785 790 795 800
Glu Pro Met Leu Met Glu Tyr Pro Glu Ala Ile Thr Arg Leu Val Thr
805 810 815
Gly Ala Gln Arg Pro Pro Asp Pro Ala Pro Ala Pro Leu Gly Ala Pro
820 825 830
Gly Leu Pro Asn Gly Leu Leu Ser Gly Asp Glu Asp Phe Ser Ser Ile
835 840 845
Ala Asp Met Asp Phe Ser Ala Leu Leu Ser Gln Ile Ser Ser
850 855 860
<210> 9
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在p65结构域中含有一个点突变的CMP8-HEA3
<400> 9
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
Phe Thr Pro Pro Ile Leu Lys Glu Leu Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu
85 90 95
Ala Ala His Gln Lys Ala Val Val Glu Thr Leu Leu Gln Glu Asp Pro
100 105 110
Trp Arg Val Ala Lys Met Val Lys Ser Tyr Leu Gln Gln His Asn Ile
115 120 125
Pro Gln Arg Glu Val Val Asp Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ser His Leu
130 135 140
Ser Gln His Leu Asn Lys Gly Thr Pro Met Lys Thr Gln Lys Arg Ala
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
Glu Leu Pro Thr Lys Lys Gly Arg Arg Asn Arg Phe Lys Trp Gly Pro
195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro
325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Met
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Gly
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
Cys Val Glu Gly Gly Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser
420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser
450 455 460
Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr
485 490 495
Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser
500 505 510
His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Arg Met Glu His Leu Tyr Ser Met
515 520 525
Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Met Leu
530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser
565 570 575
His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro
580 585 590
Ala Thr Val Glu Phe Gln Tyr Leu Pro Asp Thr Asp Asp Arg His Arg
595 600 605
Ile Glu Glu Lys Arg Lys Arg Thr Tyr Glu Thr Phe Lys Ser Ile Met
610 615 620
Lys Lys Ser Pro Phe Ser Gly Pro Thr Asp Pro Arg Pro Pro Pro Arg
625 630 635 640
Arg Ile Ala Val Pro Ser Arg Ser Ser Ala Ser Val Pro Lys Pro Ala
645 650 655
Pro Gln Pro Tyr Pro Phe Thr Ser Ser Leu Ser Thr Ile Asn Tyr Asp
660 665 670
Glu Phe Pro Thr Met Val Phe Pro Ser Gly Gln Ile Ser Gln Ala Ser
675 680 685
Ala Leu Ala Pro Ala Pro Pro Gln Val Leu Pro Gln Ala Pro Ala Pro
690 695 700
Ala Pro Ala Pro Ala Met Val Ser Ala Leu Ala Gln Ala Pro Ala Pro
705 710 715 720
Val Pro Val Leu Ala Pro Gly Pro Pro Gln Ala Val Ala Pro Pro Ala
725 730 735
Pro Lys Pro Thr Gln Ala Gly Glu Gly Thr Leu Ser Glu Ala Leu Leu
740 745 750
Gln Leu Gln Phe Asp Asp Glu Asp Leu Gly Ala Leu Leu Gly Asn Ser
755 760 765
Thr Asp Pro Ala Val Phe Thr Asp Leu Ala Ser Val Asp Asn Ser Glu
770 775 780
Phe Gln Gln Leu Leu Asn Gln Gly Ile Pro Val Ala Pro His Thr Thr
785 790 795 800
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805 810 815
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820 825 830
Gly Leu Pro Asn Gly Leu Leu Ser Gly Asp Glu Asp Phe Glu Ser Ile
835 840 845
Ala Asp Met Asp Phe Ser Ala Leu Leu Ser Gln Ile Ser Ser
850 855 860
<210> 10
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在p65结构域中含有一个点突变的CMP8-HEA3
<400> 10
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
Phe Thr Pro Pro Ile Leu Lys Glu Leu Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu
85 90 95
Ala Ala His Gln Lys Ala Val Val Glu Thr Leu Leu Gln Glu Asp Pro
100 105 110
Trp Arg Val Ala Lys Met Val Lys Ser Tyr Leu Gln Gln His Asn Ile
115 120 125
Pro Gln Arg Glu Val Val Asp Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ser His Leu
130 135 140
Ser Gln His Leu Asn Lys Gly Thr Pro Met Lys Thr Gln Lys Arg Ala
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
Glu Leu Pro Thr Lys Lys Gly Arg Arg Asn Arg Phe Lys Trp Gly Pro
195 200 205
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210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
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325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Met
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Gly
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
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420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
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Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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645 650 655
Pro Gln Pro Tyr Pro Phe Thr Ser Ser Leu Ser Thr Ile Asn Tyr Asp
660 665 670
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675 680 685
Ala Leu Ala Pro Ala Pro Pro Gln Val Leu Pro Gln Ala Pro Ala Pro
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Ala Pro Ala Pro Ala Met Val Ser Ala Leu Ala Gln Ala Pro Ala Pro
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Val Pro Val Leu Ala Pro Gly Pro Pro Gln Ala Val Ala Pro Pro Ala
725 730 735
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740 745 750
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755 760 765
Thr Asp Pro Ala Val Phe Thr Asp Leu Ala Ser Val Asp Asn Ser Glu
770 775 780
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785 790 795 800
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820 825 830
Gly Leu Pro Asn Gly Leu Leu Ser Gly Asp Glu Asp Phe Ser Ser Ile
835 840 845
Ala Asp Met Asp Phe Ser Ala Leu Leu Ser Gln Ile Ser Ser
850 855 860
<210> 11
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在p65结构域中含有两个点突变的CMP8-HEA3
<400> 11
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
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50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro
325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Met
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Gly
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
Cys Val Glu Gly Gly Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser
420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
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450 455 460
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485 490 495
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Arg Ile Ala Val Pro Ser Arg Ser Ser Ala Ser Val Pro Lys Pro Ala
645 650 655
Pro Gln Pro Tyr Pro Phe Thr Ser Ser Leu Ser Thr Ile Asn Tyr Asp
660 665 670
Glu Phe Pro Thr Met Val Phe Pro Ser Gly Gln Ile Ser Gln Ala Ser
675 680 685
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690 695 700
Ala Pro Ala Pro Ala Met Val Ser Ala Leu Ala Gln Ala Pro Ala Pro
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725 730 735
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770 775 780
Phe Gln Gln Leu Leu Asn Gln Gly Ile Pro Val Ala Pro His Thr Thr
785 790 795 800
Glu Pro Met Leu Met Glu Tyr Pro Glu Ala Ile Thr Arg Leu Val Thr
805 810 815
Gly Ala Gln Arg Pro Pro Asp Pro Ala Pro Ala Pro Leu Gly Ala Pro
820 825 830
Gly Leu Pro Asn Gly Leu Leu Ser Gly Asp Glu Asp Phe Glu Ser Ile
835 840 845
Ala Asp Met Asp Phe Ser Ala Leu Leu Ser Gln Ile Ser Ser
850 855 860
<210> 12
<211> 2586
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 野生型HEA3转录因子的变异体
<400> 12
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
gaaggccctc tggataaggg cgagagctgt ggcggaggaa gaggagagct ggccgagctg 180
cctaacggcc tgggcgagac aagaggcagc gaggacgaga cagacgacga cggcgaggac 240
ttcacccccc ccatcctgaa agagctggaa aacctgagcc ccgaggaagc cgcccaccag 300
aaagccgtgg tggagacact gctgcaggaa gatccctggc gggtcgccaa gatggtcaag 360
agctacctgc agcagcacaa catcccccag cgggaggtgg tggacaccac cggcctgaac 420
cagagccacc tgagccagca cctgaacaag ggcaccccca tgaaaaccca gaagagagcc 480
gccctgtaca cttggtacgt gcggaagcag agagaggtgg cccagcagtt tacacacgcc 540
ggccagggcg gcctgatcga ggaacctacc ggcgacgagc tgcccaccaa gaagggcaga 600
cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
ctgtctgctg gcgatatgag agccgccaac ctgtggccca gccccctgat gatcaagcgg 900
agcaagaaga acagcctggc cctgagcctg accgccgatc agatggtgtc cgctctgctg 960
gacgccgagc cccctatcct gtacagcgag tacgacccca ccagaccctt cagcgaggcc 1020
agcatgatgg gcctgctgac caacctggcc gaccgggagc tggtgcacat gatcaactgg 1080
gccaagcggg tgcccggctt cgtggacctg accctgcacg accaggtcca cctgctggaa 1140
tgtgcctggc tggaaatcct gatgatcggc ctcgtgtgga gaagcatgga acaccccggc 1200
aagctgctgt tcgcccccaa cctgctcctg gaccggaacc agggaaagtg cgtggagggc 1260
atggtggaga tcttcgacat gctgctggcc acctccagcc ggttccggat gatgaacctg 1320
cagggcgagg aattcgtgtg cctgaagtcc atcatcctgc tgaacagcgg cgtgtacacc 1380
ttcctgtcat ccaccctgaa gtccctggaa gagaaggacc acatccaccg ggtgctggac 1440
aagatcaccg acaccctgat ccacctgatg gccaaggctg gcctgacact ccagcagcag 1500
caccagagac tggcccagct gctgctgatc ctgagccaca tccggcacat gagcaacaag 1560
cggatggaac acctgtacag catgaagtgc aagaacgtgg tgcccctgta cgacctgctg 1620
ctcgagatgc tggatgccca cagactgcac gcccctacaa gcagaggcgg agccagcgtg 1680
gaggaaaccg accagtctca cctggccacc gccggcagca caagcagcca cagcctgcag 1740
aagtactaca tcaccggcga ggccgaggga ttccctgcca ccgtggagtt ccagtacctg 1800
cccgacaccg acgaccggca ccggatcgag gaaaagcgga agcggaccta cgagacattc 1860
aagagcatca tgaagaagtc ccccttcagc ggccccaccg atcccagacc cccccctaga 1920
agaatcgccg tgcccagcag atctagcgcc agcgtgccca agcctgcccc ccagccctac 1980
cctttcacca gcagcctgag caccatcaac tacgacgagt tccctaccat ggtgttcccc 2040
agcggccaga tctctcaggc ctctgctctg gcacctgctc cacctcaggt gctgcctcag 2100
gcccctgctc cagccccagc ccctgccatg gtgtctgcac tggcccaggc tccagctcct 2160
gtgcctgtgc tggcccctgg acctcctcag gctgtggccc ctcctgcccc taaacctacc 2220
caggccgggg agggaacact gtctgaggcc ctgctgcagc tccagttcga cgacgaggat 2280
ctgggagcac tgctgggcaa tagcaccgac cccgccgtgt ttaccgacct ggcctccgtg 2340
gacaacagcg agttccagca gctcctcaac cagggcatcc ctgtcgcccc acacaccacc 2400
gagcccatgc tgatggaata ccccgaggcc atcaccagac tggtcacagg cgcccagagg 2460
cctccagatc cagcaccagc tccactggga gcccctggcc tgcctaatgg gctgctgtct 2520
ggcgacgagg acttctccag cattgccgac atggacttca gcgccctgct gtcccagatc 2580
agcagc 2586
<210> 13
<211> 2586
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 野生型HEA3转录因子的变异体
<400> 13
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
gaaggccctc tggataaggg cgagagctgt ggcggaggaa gaggagagct ggccgagctg 180
cctaacggcc tgggcgagac aagaggcagc gaggacgaga cagacgacga cggcgaggac 240
ttcacccccc ccatcctgaa agagctggaa aacctgagcc ccgaggaagc cgcccaccag 300
aaagccgtgg tggagacact gctgcaggaa gatccctggc gggtcgccaa gatggtcaag 360
agctacctgc agcagcacaa catcccccag cgggaggtgg tggacaccac cggcctgaac 420
cagagccacc tgagccagca cctgaacaag ggcaccccca tgaaaaccca gaagagagcc 480
gccctgtaca cttggtacgt gcggaagcag agagaggtgg cccagcagtt tacacacgcc 540
ggccagggcg gcctgatcga ggaacctacc ggcgacgagc tgcccaccaa gaagggcaga 600
cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
ctgtctgctg gcgatatgag agccgccaac ctgtggccca gccccctgat gatcaagcgg 900
agcaagaaga acagcctggc cctgagcctg accgccgatc agatggtgtc cgctctgctg 960
gacgccgagc cccctatcct gtacagcgag tacgacccca ccagaccctt cagcgaggcc 1020
agcatgatgg gcctgctgac caacctggcc gaccgggagc tggtgcacat gatcaactgg 1080
gccaagcggg tgcccggctt cgtggacctg accctgcacg accaggtcca cctgctggaa 1140
tgtgcctggc tggaaatcct gatgatcggc ctcgtgtgga gaagcatgga acaccccggc 1200
aagctgctgt tcgcccccaa cctgctcctg gaccggaacc agggaaagtg cgtggagggc 1260
atggtggaga tcttcgacat gctgctggcc acctccagcc ggttccggat gatgaacctg 1320
cagggcgagg aattcgtgtg cctgaagtcc atcatcctgc tgaacagcgg cgtgtacacc 1380
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agcagc 2586
<210> 19
<211> 2586
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 野生型HEA3转录因子的变异体
<400> 19
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<210> 20
<211> 2586
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 野生型HEA3转录因子的变异体
<400> 20
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agcagc 2586
<210> 21
<211> 2586
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 野生型HEA3转录因子的变异体
<400> 21
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
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gtgcctgtgc tggcccctgg acctcctcag gctgtggccc ctcctgcccc taaacctacc 2220
caggccgggg agggaacact gtctgaggcc ctgctgcagc tccagttcga cgacgaggat 2280
ctgggagcac tgctgggcaa tagcaccgac cccgccgtgt ttaccgacct ggcctccgtg 2340
gacaacagcg agttccagca gctcctcaac cagggcatcc ctgtcgcccc acacaccacc 2400
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cctccagatc cagcaccagc tccactggga gcccctggcc tgcctaatgg gctgctgtct 2520
ggcgacgagg acttctccag cattgccgac atggacttca gcgccctgct gtcccagatc 2580
agcagc 2586
<210> 22
<211> 2586
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 野生型HEA3转录因子的变异体
<400> 22
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
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cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
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agcagc 2586
<210> 23
<211> 138
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 7xHBD/mE1B启动子
<400> 23
tagttaataa tctacaatag ttaataatct acaatagtta ataatctaca atagttaata 60
atctacaata gttaataatc tacaatagtt aataatctac aatagttaat aatctacaag 120
agctcagggt atataatg 138
<210> 24
<211> 1941
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> HEA4(VP64)嵌合转录因子
<400> 24
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
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cctaacggcc tgggcgagac aagaggcagc gaggacgaga cagacgacga cggcgaggac 240
ttcacccccc ccatcctgaa agagctggaa aacctgagcc ccgaggaagc cgcccaccag 300
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agctacctgc agcagcacaa catcccccag cgggaggtgg tggacaccac cggcctgaac 420
cagagccacc tgagccagca cctgaacaag ggcaccccca tgaaaaccca gaagagagcc 480
gccctgtaca cttggtacgt gcggaagcag agagaggtgg cccagcagtt tacacacgcc 540
ggccagggcg gcctgatcga ggaacctacc ggcgacgagc tgcccaccaa gaagggcaga 600
cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
ctgtctgctg gcgatatgag agccgccaac ctgtggccca gccccctgat gatcaagcgg 900
agcaagaaga acagcctggc cctgagcctg accgccgatc agatggtgtc cgctctgctg 960
gacgccgagc cccctatcct gtacagcgag tacgacccca ccagaccctt cagcgaggcc 1020
agcatgatgg gcctgctgac caacctggcc gaccgggagc tggtgcacat gatcaactgg 1080
gccaagcggg tgcccggctt cgtggacctg accctgcacg accaggtcca cctgctggaa 1140
tgtgcctggc tggaaatcct gatgatcggc ctcgtgtgga gaagcatgga acaccccgtg 1200
aagctgctgt tcgcccccaa cctgctcctg gaccggaacc agggaaagtg cgtggagggc 1260
atggtggaga tcttcgacat gctgctggcc acctccagcc ggttccggat gatgaacctg 1320
cagggcgagg aattcgtgtg cctgaagtcc atcatcctgc tgaacagcgg cgtgtacacc 1380
ttcctgtcat ccaccctgaa gtccctggaa gagaaggacc acatccaccg ggtgctggac 1440
aagatcaccg acaccctgat ccacctgatg gccaaggctg gcctgacact ccagcagcag 1500
caccagagac tggcccagct gctgctgatc ctgagccaca tccggcacat gagcaacaag 1560
ggaatggaac acctgtacag catgaagtgc aagaacgtgg tgcccctgta cgacctgctg 1620
ctcgaggctg ccgatgccca cagactgcac gcccctacaa gcagaggcgg agccagcgtg 1680
gaggaaaccg accagtctca cctggccacc gccggcagca caagcagcca cagcctgcag 1740
aagtactaca tcaccggcga ggccgaggga ttccctgcca ccgtggacgc tctggacgac 1800
ttcgaccttg acatgttggg ttccgacgcg ctggatgatt ttgatttgga catgctggga 1860
agcgacgcac tggatgactt tgatctcgat atgctcggct ctgacgcatt ggacgacttc 1920
gacttggata tgctgggttc t 1941
<210> 25
<211> 647
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HEA4(VP64)嵌合转录因子
<400> 25
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
Phe Thr Pro Pro Ile Leu Lys Glu Leu Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu
85 90 95
Ala Ala His Gln Lys Ala Val Val Glu Thr Leu Leu Gln Glu Asp Pro
100 105 110
Trp Arg Val Ala Lys Met Val Lys Ser Tyr Leu Gln Gln His Asn Ile
115 120 125
Pro Gln Arg Glu Val Val Asp Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ser His Leu
130 135 140
Ser Gln His Leu Asn Lys Gly Thr Pro Met Lys Thr Gln Lys Arg Ala
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
Glu Leu Pro Thr Lys Lys Gly Arg Arg Asn Arg Phe Lys Trp Gly Pro
195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro
325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Leu
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Val
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
Cys Val Glu Gly Met Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser
420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser
450 455 460
Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr
485 490 495
Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser
500 505 510
His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Gly Met Glu His Leu Tyr Ser Met
515 520 525
Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Ala Ala
530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser
565 570 575
His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro
580 585 590
Ala Thr Val Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser
595 600 605
Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser Asp Ala Leu
610 615 620
Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser Asp Ala Leu Asp Asp Phe
625 630 635 640
Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser
645
<210> 26
<211> 2262
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> HEA4(HSF-1)嵌合转录因子
<400> 26
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
gaaggccctc tggataaggg cgagagctgt ggcggaggaa gaggagagct ggccgagctg 180
cctaacggcc tgggcgagac aagaggcagc gaggacgaga cagacgacga cggcgaggac 240
ttcacccccc ccatcctgaa agagctggaa aacctgagcc ccgaggaagc cgcccaccag 300
aaagccgtgg tggagacact gctgcaggaa gatccctggc gggtcgccaa gatggtcaag 360
agctacctgc agcagcacaa catcccccag cgggaggtgg tggacaccac cggcctgaac 420
cagagccacc tgagccagca cctgaacaag ggcaccccca tgaaaaccca gaagagagcc 480
gccctgtaca cttggtacgt gcggaagcag agagaggtgg cccagcagtt tacacacgcc 540
ggccagggcg gcctgatcga ggaacctacc ggcgacgagc tgcccaccaa gaagggcaga 600
cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
ctgtctgctg gcgatatgag agccgccaac ctgtggccca gccccctgat gatcaagcgg 900
agcaagaaga acagcctggc cctgagcctg accgccgatc agatggtgtc cgctctgctg 960
gacgccgagc cccctatcct gtacagcgag tacgacccca ccagaccctt cagcgaggcc 1020
agcatgatgg gcctgctgac caacctggcc gaccgggagc tggtgcacat gatcaactgg 1080
gccaagcggg tgcccggctt cgtggacctg accctgcacg accaggtcca cctgctggaa 1140
tgtgcctggc tggaaatcct gatgatcggc ctcgtgtgga gaagcatgga acaccccgtg 1200
aagctgctgt tcgcccccaa cctgctcctg gaccggaacc agggaaagtg cgtggagggc 1260
atggtggaga tcttcgacat gctgctggcc acctccagcc ggttccggat gatgaacctg 1320
cagggcgagg aattcgtgtg cctgaagtcc atcatcctgc tgaacagcgg cgtgtacacc 1380
ttcctgtcat ccaccctgaa gtccctggaa gagaaggacc acatccaccg ggtgctggac 1440
aagatcaccg acaccctgat ccacctgatg gccaaggctg gcctgacact ccagcagcag 1500
caccagagac tggcccagct gctgctgatc ctgagccaca tccggcacat gagcaacaag 1560
ggaatggaac acctgtacag catgaagtgc aagaacgtgg tgcccctgta cgacctgctg 1620
ctcgaggctg ccgatgccca cagactgcac gcccctacaa gcagaggcgg agccagcgtg 1680
gaggaaaccg accagtctca cctggccacc gccggcagca caagcagcca cagcctgcag 1740
aagtactaca tcaccggcga ggccgaggga ttccctgcca ccgtggaaaa gtgcctcagc 1800
gtagcctgcc tggacaagaa tgagctcagt gaccacttgg atgctatgga ctccaacctg 1860
gataacctgc agaccatgct gagcagccac ggcttcagcg tggacaccag tgccctgctg 1920
gacctgttca gcccctcggt gaccgtgccc gacatgagcc tgcctgacct tgacagcagc 1980
ctggccagta tccaagagct cctgtctccc caggagcccc ccaggcctcc cgaggcagag 2040
aacagcagcc cggattcagg gaagcagctg gtgcactaca cagcgcagcc gctgttcctg 2100
ctggaccccg gctccgtgga caccgggagc aacgacctgc cggtgctgtt tgagctggga 2160
gagggctcct acttctccga aggggacggc ttcgccgagg accccaccat ctccctgctg 2220
acaggctcgg agcctcccaa agccaaggac cccactgtct cc 2262
<210> 27
<211> 754
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HEA4(HSF-1)嵌合转录因子
<400> 27
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
Phe Thr Pro Pro Ile Leu Lys Glu Leu Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu
85 90 95
Ala Ala His Gln Lys Ala Val Val Glu Thr Leu Leu Gln Glu Asp Pro
100 105 110
Trp Arg Val Ala Lys Met Val Lys Ser Tyr Leu Gln Gln His Asn Ile
115 120 125
Pro Gln Arg Glu Val Val Asp Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ser His Leu
130 135 140
Ser Gln His Leu Asn Lys Gly Thr Pro Met Lys Thr Gln Lys Arg Ala
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
Glu Leu Pro Thr Lys Lys Gly Arg Arg Asn Arg Phe Lys Trp Gly Pro
195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro
325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Leu
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Val
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
Cys Val Glu Gly Met Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser
420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser
450 455 460
Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr
485 490 495
Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser
500 505 510
His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Gly Met Glu His Leu Tyr Ser Met
515 520 525
Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Ala Ala
530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser
565 570 575
His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro
580 585 590
Ala Thr Val Glu Lys Cys Leu Ser Val Ala Cys Leu Asp Lys Asn Glu
595 600 605
Leu Ser Asp His Leu Asp Ala Met Asp Ser Asn Leu Asp Asn Leu Gln
610 615 620
Thr Met Leu Ser Ser His Gly Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Leu Leu
625 630 635 640
Asp Leu Phe Ser Pro Ser Val Thr Val Pro Asp Met Ser Leu Pro Asp
645 650 655
Leu Asp Ser Ser Leu Ala Ser Ile Gln Glu Leu Leu Ser Pro Gln Glu
660 665 670
Pro Pro Arg Pro Pro Glu Ala Glu Asn Ser Ser Pro Asp Ser Gly Lys
675 680 685
Gln Leu Val His Tyr Thr Ala Gln Pro Leu Phe Leu Leu Asp Pro Gly
690 695 700
Ser Val Asp Thr Gly Ser Asn Asp Leu Pro Val Leu Phe Glu Leu Gly
705 710 715 720
Glu Gly Ser Tyr Phe Ser Glu Gly Asp Gly Phe Ala Glu Asp Pro Thr
725 730 735
Ile Ser Leu Leu Thr Gly Ser Glu Pro Pro Lys Ala Lys Asp Pro Thr
740 745 750
Val Ser
<210> 28
<211> 1887
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> HEA4(Arnt)嵌合转录因子
<400> 28
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
gaaggccctc tggataaggg cgagagctgt ggcggaggaa gaggagagct ggccgagctg 180
cctaacggcc tgggcgagac aagaggcagc gaggacgaga cagacgacga cggcgaggac 240
ttcacccccc ccatcctgaa agagctggaa aacctgagcc ccgaggaagc cgcccaccag 300
aaagccgtgg tggagacact gctgcaggaa gatccctggc gggtcgccaa gatggtcaag 360
agctacctgc agcagcacaa catcccccag cgggaggtgg tggacaccac cggcctgaac 420
cagagccacc tgagccagca cctgaacaag ggcaccccca tgaaaaccca gaagagagcc 480
gccctgtaca cttggtacgt gcggaagcag agagaggtgg cccagcagtt tacacacgcc 540
ggccagggcg gcctgatcga ggaacctacc ggcgacgagc tgcccaccaa gaagggcaga 600
cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
ctgtctgctg gcgatatgag agccgccaac ctgtggccca gccccctgat gatcaagcgg 900
agcaagaaga acagcctggc cctgagcctg accgccgatc agatggtgtc cgctctgctg 960
gacgccgagc cccctatcct gtacagcgag tacgacccca ccagaccctt cagcgaggcc 1020
agcatgatgg gcctgctgac caacctggcc gaccgggagc tggtgcacat gatcaactgg 1080
gccaagcggg tgcccggctt cgtggacctg accctgcacg accaggtcca cctgctggaa 1140
tgtgcctggc tggaaatcct gatgatcggc ctcgtgtgga gaagcatgga acaccccgtg 1200
aagctgctgt tcgcccccaa cctgctcctg gaccggaacc agggaaagtg cgtggagggc 1260
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aagatcaccg acaccctgat ccacctgatg gccaaggctg gcctgacact ccagcagcag 1500
caccagagac tggcccagct gctgctgatc ctgagccaca tccggcacat gagcaacaag 1560
ggaatggaac acctgtacag catgaagtgc aagaacgtgg tgcccctgta cgacctgctg 1620
ctcgaggctg ccgatgccca cagactgcac gcccctacaa gcagaggcgg agccagcgtg 1680
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gagatgctgt ccatgctggg agatcagagc aacagctaca acaatgaaga attccctgat 1860
ctaactatgt ttcccccctt ttcagaa 1887
<210> 29
<211> 629
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HEA4(Arnt)嵌合转录因子
<400> 29
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
Phe Thr Pro Pro Ile Leu Lys Glu Leu Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu
85 90 95
Ala Ala His Gln Lys Ala Val Val Glu Thr Leu Leu Gln Glu Asp Pro
100 105 110
Trp Arg Val Ala Lys Met Val Lys Ser Tyr Leu Gln Gln His Asn Ile
115 120 125
Pro Gln Arg Glu Val Val Asp Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ser His Leu
130 135 140
Ser Gln His Leu Asn Lys Gly Thr Pro Met Lys Thr Gln Lys Arg Ala
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
Glu Leu Pro Thr Lys Lys Gly Arg Arg Asn Arg Phe Lys Trp Gly Pro
195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro
325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Leu
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Val
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
Cys Val Glu Gly Met Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser
420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser
450 455 460
Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr
485 490 495
Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser
500 505 510
His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Gly Met Glu His Leu Tyr Ser Met
515 520 525
Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Ala Ala
530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser
565 570 575
His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro
580 585 590
Ala Thr Val Pro Glu Val Phe Gln Glu Met Leu Ser Met Leu Gly Asp
595 600 605
Gln Ser Asn Ser Tyr Asn Asn Glu Glu Phe Pro Asp Leu Thr Met Phe
610 615 620
Pro Pro Phe Ser Glu
625
<210> 30
<211> 1074
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> EGFRt核苷酸序列
<400> 30
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacgca aagtgtgtaa cggaataggt attggtgaat ttaaagactc actctccata 120
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gcaaatacaa taaactggaa aaaactgttt gggacctccg gtcagaaaac caaaattata 540
agcaacagag gtgaaaacag ctgcaaggcc acaggccagg tctgccatgc cttgtgctcc 600
cccgagggct gctggggccc ggagcccagg gactgcgtct cttgccggaa tgtcagccga 660
ggcagggaat gcgtggacaa gtgcaacctt ctggagggtg agccaaggga gtttgtggag 720
aactctgagt gcatacagtg ccacccagag tgcctgcctc aggccatgaa catcacctgc 780
acaggacggg gaccagacaa ctgtatccag tgtgcccact acattgacgg cccccactgc 840
gtcaagacct gcccggcagg agtcatggga gaaaacaaca ccctggtctg gaagtacgca 900
gacgccggcc atgtgtgcca cctgtgccat ccaaactgca cctacggatg cactgggcca 960
ggtcttgaag gctgtccaac gaatgggcct aagatcccgt ccatcgccac tgggatggtg 1020
ggggccctcc tcttgctgct ggtggtggcc ctggggatcg gcctcttcat gtga 1074
<210> 31
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EGFRt氨基酸序列
<220>
<223> EGFRt氨基酸序列
<400> 31
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 32
<211> 408
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> Her2t
<400> 32
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccatgcc accctgagtg tcagccccag aatggctcag tgacctgttt tggaccggag 120
gctgaccagt gtgtggcctg tgcccactat aaggaccctc ccttctgcgt ggcccgctgc 180
cccagcggtg tgaaacctga cctctcctac atgcccatct ggaagtttcc agatgaggag 240
ggcgcatgcc agccttgccc catcaactgc acccactcct gtgtggacct ggatgacaag 300
ggctgccccg ccgagcagag agccagccct ctgacgtcca tcatctctgc ggtggttggc 360
attctgctgg tcgtggtctt gggggtggtc tttgggatcc tcatctga 408
<210> 33
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Her2t
<400> 33
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly
20 25 30
Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala
35 40 45
His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val
50 55 60
Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu
65 70 75 80
Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp
85 90 95
Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr
100 105 110
Ser Ile Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly
115 120 125
Val Val Phe Gly Ile Leu Ile
130 135
<210> 34
<211> 429
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> Her2tG
<400> 34
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccatgcc accctgagtg tcagccccag aatggctcag tgacctgttt tggaccggag 120
gctgaccagt gtgtggcctg tgcccactat aaggaccctc ccttctgcgt ggcccgctgc 180
cccagcggtg tgaaacctga cctctcctac atgcccatct ggaagtttcc agatgaggag 240
ggcgcatgcc agccttgccc catcaactgc acccactcct gtgtggacct ggatgacaag 300
ggctgccccg ccgagcagag agccagcccg ttaacgggtg gaggcagcgg aggtggctcc 360
atcatctctg cggtggttgg cattctgctg gtcgtggtct tgggggtggt ctttgggatc 420
ctcatctga 429
<210> 35
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Her2tG
<400> 35
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly
20 25 30
Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala
35 40 45
His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val
50 55 60
Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu
65 70 75 80
Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp
85 90 95
Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile Ile Ser Ala Val Val Gly Ile
115 120 125
Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly Ile Leu Ile
130 135 140
<210> 36
<211> 972
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD19t
<400> 36
atgccacctc ctcgcctcct cttcttcctc ctcttcctca cccccatgga agtcaggccc 60
gaggaacctc tagtggtgaa ggtggaagag ggagataacg ctgtgctgca gtgcctcaag 120
gggacctcag atggccccac tcagcagctg acctggtctc gggagtcccc gcttaaaccc 180
ttcttaaaac tcagcctggg gctgccaggc ctgggaatcc acatgaggcc cctggccatc 240
tggcttttca tcttcaacgt ctctcaacag atggggggct tctacctgtg ccagccgggg 300
cccccctctg agaaggcctg gcagcctggc tggacagtca atgtggaggg cagcggggag 360
ctgttccggt ggaatgtttc ggacctaggt ggcctgggct gtggcctgaa gaacaggtcc 420
tcagagggcc ccagctcccc ttccgggaag ctcatgagcc ccaagctgta tgtgtgggcc 480
aaagaccgcc ctgagatctg ggagggagag cctccgtgtg tcccaccgag ggacagcctg 540
aaccagagcc tcagccagga cctcaccatg gcccctggct ccacactctg gctgtcctgt 600
ggggtacccc ctgactctgt gtccaggggc cccctctcct ggacccatgt gcaccccaag 660
gggcctaagt cattgctgag cctagagctg aaggacgatc gcccggccag agatatgtgg 720
gtaatggaga cgggtctgtt gttgccccgg gccacagctc aagacgctgg aaagtattat 780
tgtcaccgtg gcaacctgac catgtcattc cacctggaga tcactgctcg gccagtacta 840
tggcactggc tgctgaggac tggtggctgg aaggtctcag ctgtgacttt ggcttatctg 900
atcttctgcc tgtgttccct tgtgggcatt cttcatcttc aaagagccct ggtcctgagg 960
aggaaaagat aa 972
<210> 37
<211> 323
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD19t
<400> 37
Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met
1 5 10 15
Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp
20 25 30
Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln
35 40 45
Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile
65 70 75 80
Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu
85 90 95
Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr
100 105 110
Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp
115 120 125
Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro
130 135 140
Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala
145 150 155 160
Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Val Pro Pro
165 170 175
Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro
180 185 190
Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser
195 200 205
Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser
210 215 220
Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp
225 230 235 240
Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala
245 250 255
Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly
275 280 285
Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu
290 295 300
Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg
305 310 315 320
Arg Lys Arg
<210> 38
<211> 561
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> DHFRdm
<400> 38
atggttggtt cgctaaactg catcgtcgct gtgtcccaga acatgggcat cggcaagaac 60
ggggacttcc cctggccacc gctcaggaat gaatccagat atttccagag aatgaccaca 120
acctcttcag tagaaggtaa acagaatctg gtgattatgg gtaagaagac ctggttctcc 180
attcctgaga agaatcgacc tttaaagggt agaattaatt tagttctcag cagagaactc 240
aaggaacctc cacaaggagc tcattttctt tccagaagtc tagatgatgc cttaaaactt 300
actgaacaac cagaattagc aaataaagta gacatggtct ggatagttgg tggcagttct 360
gtttataagg aagccatgaa tcacccaggc catcttaaac tatttgtgac aaggatcatg 420
caagactttg aaagtgacac gttttttcca gaaattgatt tggagaaata taaacttctg 480
ccagaatacc caggtgttct ctctgatgtc caggaggaga aaggcattaa gtacaaattt 540
gaagtatatg agaagaatga t 561
<210> 39
<211> 186
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> DHFRdm
<400> 39
Val Gly Ser Leu Asn Cys Ile Val Ala Val Ser Gln Asn Met Gly Ile
1 5 10 15
Gly Lys Asn Gly Asp Phe Pro Trp Pro Pro Leu Arg Asn Glu Ser Arg
20 25 30
Tyr Phe Gln Arg Met Thr Thr Thr Ser Ser Val Glu Gly Lys Gln Asn
35 40 45
Leu Val Ile Met Gly Lys Lys Thr Trp Phe Ser Ile Pro Glu Lys Asn
50 55 60
Arg Pro Leu Lys Gly Arg Ile Asn Leu Val Leu Ser Arg Glu Leu Lys
65 70 75 80
Glu Pro Pro Gln Gly Ala His Phe Leu Ser Arg Ser Leu Asp Asp Ala
85 90 95
Leu Lys Leu Thr Glu Gln Pro Glu Leu Ala Asn Lys Val Asp Met Val
100 105 110
Trp Ile Val Gly Gly Ser Ser Val Tyr Lys Glu Ala Met Asn His Pro
115 120 125
Gly His Leu Lys Leu Phe Val Thr Arg Ile Met Gln Asp Phe Glu Ser
130 135 140
Asp Thr Phe Phe Pro Glu Ile Asp Leu Glu Lys Tyr Lys Leu Leu Pro
145 150 155 160
Glu Tyr Pro Gly Val Leu Ser Asp Val Gln Glu Glu Lys Gly Ile Lys
165 170 175
Tyr Lys Phe Glu Val Tyr Glu Lys Asn Asp
180 185
<210> 40
<211> 804
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> huCD19 scFv (G01S)
<400> 40
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagagg tgcagctggt cgaatccgga ggaggactgg tccagcccgg ccggagcctg 120
agactgagct gtgccgcttc cggattcact tttgacgatt acgcaatgca ttgggtgagg 180
caggcccctg gcaaggggct ggaatgggtc tccggaatct cttggaacag tgggcgcatt 240
ggatatgccg attctgtgaa gggccgattc actatctctc gggacaacgc taaaaatagt 300
ctgtttctgc agatgaattc cctgcgcgcc gaggataccg ccgtgtacta ttgcgcccga 360
gaccagggct accactacta tgatagcgcc gaacatgcat tcgacatttg gggacaggga 420
actgtggtca ccgtgagctc cggaggagga ggaagcggag gaggagggtc cggaggcggg 480
ggatcacaga gcgcactgac ccagccacgg agcgtgagcg gatttcctgg gcagtctgtc 540
accattagtt gcacaggcac cacatcagac gatgtgagct ggtaccagca gcacccaggg 600
aaggctcccc agctgatgct gtatgacgtg tccaaaagac cttctggcgt cccacatagg 660
tttagtggaa gccggagcgg ccgggcagcc agtctgatca tttcagggct gcagacagag 720
gacgaagctg attatttctg ttctagttac gcaggcagat ataactctgt gctgtttggc 780
gggggaacaa agctgactgt cctg 804
<210> 41
<211> 268
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huCD19 scFv (G01S)
<400> 41
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile
65 70 75 80
Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
85 90 95
Ala Lys Asn Ser Leu Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Gly Tyr His Tyr Tyr Asp
115 120 125
Ser Ala Glu His Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Val Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Phe Pro
165 170 175
Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Thr Ser Asp Asp Val
180 185 190
Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Met Leu Tyr
195 200 205
Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro His Arg Phe Ser Gly Ser
210 215 220
Arg Ser Gly Arg Ala Ala Ser Leu Ile Ile Ser Gly Leu Gln Thr Glu
225 230 235 240
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Arg Tyr Asn Ser
245 250 255
Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
260 265
<210> 42
<211> 801
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> muCD19 (FMC63) scFv
<400> 42
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgcgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atccccgaca tccagatgac ccagaccacc tccagcctga gcgccagcct gggcgaccgg 120
gtgaccatca gctgccgggc cagccaggac atcagcaagt acctgaactg gtatcagcag 180
aagcccgacg gcaccgtcaa gctgctgatc taccacacca gccggctgca cagcggcgtg 240
cccagccggt ttagcggcag cggctccggc accgactaca gcctgaccat ctccaacctg 300
gaacaggaag atatcgccac ctacttttgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttt 360
ggcggcggaa caaagctgga aatcaccggc agcacctccg gcagcggcaa gcctggcagc 420
ggcgagggca gcaccaaggg cgaggtgaag ctgcaggaaa gcggccctgg cctggtggcc 480
cccagccaga gcctgagcgt gacctgcacc gtgagcggcg tgagcctgcc cgactacggc 540
gtgagctgga tccggcagcc ccccaggaag ggcctggaat ggctgggcgt gatctggggc 600
agcgagacca cctactacaa cagcgccctg aagagccggc tgaccatcat caaggacaac 660
agcaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga ccgacgacac cgccatctac 720
tactgcgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca tggactactg gggccagggc 780
accagcgtga ccgtgagcag c 801
<210> 43
<211> 267
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> muCD19 (FMC63) scFv
<400> 43
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly
50 55 60
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
145 150 155 160
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu
165 170 175
Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser
195 200 205
Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
210 215 220
Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 44
<211> 798
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD20 (Leu16) scFv
<400> 44
atggagacag acacactcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ttccacaggt 60
gacattgtgc tgacccaatc tccagctatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 120
atgacttgca gggccagctc aagtgtaaat tacatggact ggtaccagaa gaagccagga 180
tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 240
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgaa 300
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agttttaatc cacccacgtt cggagggggg 360
accaagctgg aaataaaagg cagtactagc ggtggtggct ccgggggcgg ttccggtggg 420
ggcggcagca gcgaggtgca gctgcagcag tctggggctg agctggtgaa gcctggggcc 480
tcagtgaaga tgtcctgcaa ggcttctggc tacacattta ccagttacaa tatgcactgg 540
gtaaagcaga cacctggaca gggcctggaa tggattggag ctatttatcc aggaaatggt 600
gatacttcct acaatcagaa gttcaaaggc aaggccacat tgactgcaga caaatcctcc 660
agcacagcct acatgcagct cagcagcctg acatctgagg actctgcgga ctattactgt 720
gcaagatcta attattacgg tagtagctac tggttcttcg atgtctgggg cgcagggacc 780
acggtcaccg tctcctca 798
<210> 45
<211> 266
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD20 (Leu16) scFv
<400> 45
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Asn Tyr Met Asp Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys
50 55 60
Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg
85 90 95
Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe
100 105 110
Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
130 135 140
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
145 150 155 160
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
165 170 175
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
180 185 190
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
195 200 205
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
210 215 220
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Asp Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Arg Ser Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp
245 250 255
Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 46
<211> 810
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD22 (m971) scFv
<400> 46
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacagg tacagctgca gcagtcaggt ccaggactgg tgaagccctc gcagaccctc 120
tcactcacct gtgccatctc cggggacagt gtctctagca acagtgctgc ttggaactgg 180
atcaggcagt ccccatcgag aggccttgag tggctgggaa ggacatacta caggtccaag 240
tggtataatg attatgcagt atctgtgaaa agtcgaataa ccatcaaccc agacacatcc 300
aagaaccagt tctccctgca gctgaactct gtgactcccg aggacacggc tgtgtattac 360
tgtgcaagag aagtgactgg ggatctcgag gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca 420
atggtcaccg tctcctcagg cggagggggc tctggcggcg gaggatctgg gggagggggc 480
agcgacatcc agatgaccca gtctccatcg tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 540
accatcactt gccgggcaag ccagaccatt tggagctact taaattggta tcagcagaga 600
ccagggaaag cccctaacct cctgatctat gctgcatcca gtttgcaaag tggggtccca 660
tcaaggttca gtggcagggg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagtctgcaa 720
gctgaagatt ttgcaactta ctactgtcaa cagagttaca gtatccctca gacttttggc 780
caggggacca agctggagat caaacgaact 810
<210> 47
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD22 (m971) scFv
<400> 47
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly
20 25 30
Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly
35 40 45
Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser
50 55 60
Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys
65 70 75 80
Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn
85 90 95
Pro Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr
100 105 110
Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp
115 120 125
Leu Glu Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
165 170 175
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Trp Ser
180 185 190
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu
195 200 205
Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
210 215 220
Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
225 230 235 240
Ala Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro
245 250 255
Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
260 265 270
<210> 48
<211> 948
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> B7H3 (hBRCA84D) scFv
<400> 48
atgctgcgtc ggcggggcag ccctggcatg ggtgtgcatg tgggtgcagc cctgggagca 60
ctgtggttct gcctcacagg agccctggag gtccaggtcc ctgaagaccc agtggtggca 120
ctggtgggca ccgatgccac cctgtgctgc tccttctccc ctgagcctgg cttcagcctg 180
gcacagctca acctcatctg gcagctgaca gataccaaac agctggtgca cagctttgct 240
gagggccagg accagggcag cgcctatgcc aaccgcacgg ccctcttccc ggacctgctg 300
gcacagggca acgcatccct gaggctgcag cgcgtgcgtg tggcggacga gggcagcttc 360
acctgcttcg tgagcatccg ggatttcggc agcgctgccg tcagcctgca ggtggccgct 420
ccctactcga agcccagcat gaccctggag cccaacaagg acctgcggcc aggggacacg 480
gtgaccatca cgtgctccag ctaccagggc taccctgagg ctgaggtgtt ctggcaggat 540
gggcagggtg tgcccctgac tggcaacgtg accacgtcgc agatggccaa cgagcagggc 600
ttgtttgatg tgcacagcat cctgcgggtg gtgctgggtg caaatggcac ctacagctgc 660
ctggtgcgca accccgtgct gcagcaggat gcgcacagct ctgtcaccat cacagggcag 720
cctatgacat tccccccaga ggccctgtgg gtgaccgtgg ggctgtctgt ctgtctcatt 780
gcactgctgg tggccctggc tttcgtgtgc tggagaaaga tcaaacagag ctgtgaggag 840
gagaatgcag gagctgagga ccaggatggg gagggagaag gctccaagac agccctgcag 900
cctctgaaac actctgacag caaagaagat gatggacaag aaatagcc 948
<210> 49
<211> 316
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B7H3 (hBRCA84D) scFv
<400> 49
Met Leu Arg Arg Arg Gly Ser Pro Gly Met Gly Val His Val Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ala Leu Trp Phe Cys Leu Thr Gly Ala Leu Glu Val Gln
20 25 30
Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu
35 40 45
Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn
50 55 60
Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Ala
65 70 75 80
Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe
85 90 95
Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val
100 105 110
Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp
115 120 125
Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys
130 135 140
Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr
145 150 155 160
Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val
165 170 175
Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr
180 185 190
Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Ile Leu
195 200 205
Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn
210 215 220
Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln
225 230 235 240
Pro Met Thr Phe Pro Pro Glu Ala Leu Trp Val Thr Val Gly Leu Ser
245 250 255
Val Cys Leu Ile Ala Leu Leu Val Ala Leu Ala Phe Val Cys Trp Arg
260 265 270
Lys Ile Lys Gln Ser Cys Glu Glu Glu Asn Ala Gly Ala Glu Asp Gln
275 280 285
Asp Gly Glu Gly Glu Gly Ser Lys Thr Ala Leu Gln Pro Leu Lys His
290 295 300
Ser Asp Ser Lys Glu Asp Asp Gly Gln Glu Ile Ala
305 310 315
<210> 50
<211> 792
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> L1CAM (CE7) scFv
<400> 50
atgctgctgc tggtgaccag cctgctgctg tgcgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atcccccagg tgcagctgca gcagcctggc gccgagctgg tgaagccagg cgccagcgtg 120
aagctgtcct gcaaggccag cggctacacc ttcaccggct actggatgca ctgggtgaag 180
cagagacccg gccacggcct ggaatggatc ggcgagatca accccagcaa cggccggacc 240
aactacaacg agcggttcaa gagcaaggcc accctgaccg tggacaagag cagcaccacc 300
gccttcatgc agctgtccgg cctgaccagc gaggacagcg ccgtgtactt ctgcgccagg 360
gactactacg gcaccagcta caacttcgac tactggggcc agggcaccac actgaccgtg 420
agcagcggcg gagggggctc tggcggcgga ggatctgggg gagggggcag cgacatccag 480
atgacccaga gcagcagcag cttcagcgtg agcctgggcg accgggtgac catcacctgt 540
aaggccaacg aggacatcaa caaccggctg gcctggtatc agcagacccc cggcaacagc 600
cccaggctgc tgatcagcgg cgccaccaac ctggtgaccg gcgtgcccag ccggtttagc 660
ggcagcggct ccggcaagga ctacaccctg accatcacaa gcctgcaggc cgaggacttc 720
gccacctact actgccagca gtactggtcc acccccttca ccttcggcag cggcaccgag 780
ctggaaatca aa 792
<210> 51
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> L1CAM (CE7) scFv
<400> 51
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu
20 25 30
Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly
35 40 45
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly
50 55 60
His Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr
65 70 75 80
Asn Tyr Asn Glu Arg Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys
85 90 95
Ser Ser Thr Thr Ala Phe Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp
100 105 110
Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Tyr Asn
115 120 125
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln
145 150 155 160
Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly Asp Arg Val
165 170 175
Thr Ile Thr Cys Lys Ala Asn Glu Asp Ile Asn Asn Arg Leu Ala Trp
180 185 190
Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Asn Ser Pro Arg Leu Leu Ile Ser Gly Ala
195 200 205
Thr Asn Leu Val Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ala Glu Asp Phe
225 230 235 240
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly
245 250 255
Ser Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys
260
<210> 52
<211> 795
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> EGFR (西妥昔单抗) scFv
<400> 52
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacagg tgcagctgaa acagagcggc ccgggcctgg tgcagccgag ccagagcctg 120
agcattacct gcaccgtgag cggctttagc ctgaccaact atggcgtgca ttgggtgcgc 180
cagagcccgg gcaaaggcct ggaatggctg ggcgtgattt ggagcggcgg caacaccgat 240
tataacaccc cgtttaccag ccgcctgagc attaacaaag ataacagcaa aagccaggtg 300
ttttttaaaa tgaacagcct gcagagcaac gataccgcga tttattattg cgcgcgcgcg 360
ctgacctatt atgattatga atttgcgtat tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 420
gcgggcggcg gcggcagcgg cggcggcggc agcggcggcg gcggcagcga tattctgctg 480
acccagagcc cggtgattct gagcgtgagc ccgggcgaac gcgtgagctt tagctgccgc 540
gcgagccaga gcattggcac caacattcat tggtatcagc agcgcaccaa cggcagcccg 600
cgcctgctga ttaaatatgc gagcgaaagc attagcggca ttccgagccg ctttagcggc 660
agcggcagcg gcaccgattt taccctgagc attaacagcg tggaaagcga agatattgcg 720
gattattatt gccagcagaa caacaactgg ccgaccacct ttggcgcggg caccaaactg 780
gaactgaaac gcacc 795
<210> 53
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EGFR scFv
<400> 53
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly
35 40 45
Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp
65 70 75 80
Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Ser Gln Val Phe Phe Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr
100 105 110
Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe
115 120 125
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Leu Leu
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser
165 170 175
Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn Ile His Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser
195 200 205
Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser Glu Asp Ile Ala
225 230 235 240
Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr Thr Phe Gly Ala
245 250 255
Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr
260 265
<210> 54
<211> 792
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> EGFRVIII (806) scFv
<400> 54
atgctgctgc tggtgacaag cctgctgctg tgcgagctgc cacaccctgc tttcctgctg 60
atccctgatg tgcagctgca ggaatcaggc ccaagcctgg tcaaaccctc ccagtctctg 120
agtctgacct gtacagtgac tgggtactcc atcacatctg atttcgcatg gaactggatt 180
aggcagtttc caggcaataa gctggagtgg atgggctaca tctcatatag cgggaacact 240
cgctataatc ccagtctgaa atcacggatc agcattacta gagacaccag caagaaccag 300
ttctttctgc agctgaattc cgtgaccatt gaggataccg ccacatacta ttgcgtcaca 360
gctggcagag gctttccata ctggggacag ggcacactgg tgactgtcag cgccggctcc 420
acctctggga gtggaaaacc tggctccggg gaaggatcta caaagggaga catcctgatg 480
actcagtccc caagctccat gtcagtgagc ctgggcgaca ccgtctctat tacatgtcac 540
tctagtcagg atatcaacag taatattggc tggctgcagc agcgacccgg caagtctttc 600
aaagggctga tctatcatgg aactaacctg gacgatgaag tgcctagcag attttccggc 660
tctgggagtg gagctgatta cagtctgacc atttcaagcc tggagtcaga agacttcgca 720
gattactatt gcgtccagta tgcccagttc ccctggactt ttggcggggg aaccaagctg 780
gagatcaaac gg 792
<210> 55
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EGFRVIII (806) scFv
<400> 55
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser
20 25 30
Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly
35 40 45
Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro
50 55 60
Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr
65 70 75 80
Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr
85 90 95
Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ile Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Thr Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Ser Thr Ser Gly Ser
130 135 140
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Leu Met
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly Asp Thr Val Ser
165 170 175
Ile Thr Cys His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn Ile Gly Trp Leu
180 185 190
Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ser Phe Lys Gly Leu Ile Tyr His Gly Thr
195 200 205
Asn Leu Asp Asp Glu Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Ala Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala
225 230 235 240
Asp Tyr Tyr Cys Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly
245 250 255
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
260
<210> 56
<211> 777
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> EphA2 (2A4) scFv
<400> 56
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacagg tgcagctgtt ggagtctggg ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg 120
agactctcct gtgcagcctc tggattcacc tttagcagct ataccatgtc ttgggtgcga 180
caggcccctg gacaagcgct tgagtggatg ggaaccatta gtagtcgtgg tacttacacc 240
tactatccag acagtgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaactca 300
ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgaga 360
gaagctatct ttactcactg gggccgtggc accctggtca ccgtctcctc aggtggtggt 420
ggttctggcg gcggcggctc cggtggtggt ggttctgaca tccagttgac ccagtctcca 480
tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga gtcaccatca cttgcaaggc gagtcaggac 540
attaataact atcacagctg gtaccagcag aaacctggcc aggctcccag gctcctcatc 600
tatcgtgcaa acagattggt cgatggggtc ccagacaggt tcagtggcag cgggtatgga 660
acagatttta ccctcacaat taataacata gaatctgagg atgctgcata ttacttctgt 720
ctgaaatata atgtgtttcc gtacacgttc ggccaaggga ccaaggtgga gatcaaa 777
<210> 57
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EphA2 (2A4) scFv
<400> 57
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Gln Ala Leu Glu Trp Met Gly Thr Ile Ser Ser Arg Gly Thr Tyr Thr
65 70 75 80
Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
85 90 95
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ala Ile Phe Thr His Trp Gly
115 120 125
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro
145 150 155 160
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
165 170 175
Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr His Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
180 185 190
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
195 200 205
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr
210 215 220
Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys
225 230 235 240
Leu Lys Tyr Asn Val Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
245 250 255
Glu Ile Lys
<210> 58
<211> 777
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> EpHA2 (4H5) scFv
<400> 58
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacagg tgcagctgtt ggagtctggg ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg 120
agactctcct gtgcagcctc tggattcacc tttagcagct ataccatgtc ttgggtgcga 180
caggcccctg gacaagcgct tgagtggatg ggaaccatta gtagtggtgg tacttacacc 240
tactatccag acagtgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaactca 300
ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgaga 360
gaagctatct ttacttactg gggccgtggc accctggtca ccgtctcctc aggtggtggt 420
ggttctggcg gcggcggctc cggtggtggt ggttctgaca tccagttgac ccagtctcca 480
tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga gtcaccatca cttgcaaggc gagtcaggac 540
attaataact atttaagctg gtaccagcag aaacctggcc aggctcccag gctcctcatc 600
tatcgtgcaa acagattggt agatggggtc ccagacaggt tcagtggcag cgggtatgga 660
acagatttta ccctcacaat taataacata gaatctgagg atgctgcata ttacttctgt 720
ctgaaatatg atgtgtttcc gtacacgttc ggccaaggga ccaaggtgga gatcaaa 777
<210> 59
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EpHA2 (4H5) scFv
<400> 59
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Gln Ala Leu Glu Trp Met Gly Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr
65 70 75 80
Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
85 90 95
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ala Ile Phe Thr Tyr Trp Gly
115 120 125
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro
145 150 155 160
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
165 170 175
Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
180 185 190
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
195 200 205
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr
210 215 220
Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys
225 230 235 240
Leu Lys Tyr Asp Val Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
245 250 255
Glu Ile Lys
<210> 60
<211> 819
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> FITC (E2) scFv
<400> 60
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccaagcg tgctgacaca gcctagctcc gtgtctgccg cccctggcca gaaagtgacc 120
atcagctgta gcggcagcac cagcaacatc ggcaacaact acgtgtcctg gtatcagcag 180
caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacgacgtgt ccaagcggcc cagcggcgtg 240
cccgatagat tttccggcag caagagcggc aacagcgcca gcctggatat cagcggcctg 300
cagtctgagg acgaggccga ctactattgc gccgcctggg acgatagcct gagcgagttc 360
ctgtttggca ccggcaccaa gctgacagtg ctgggcggag gcggaggatc tggcggcgga 420
ggaagtggcg gagggggatc tcaggtgcag ctggtggaaa gcggcggcaa cctggtgcag 480
cctggcggat ctctgagact gagctgtgcc gccagcggct tcaccttcgg cagcttcagc 540
atgagctggg tgcgccaggc tcctggggga ggactggaat gggtggcagg actgagcgcc 600
agaagcagcc tgacccacta cgccgatagc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac 660
aacgccaaga acagcgtgta cctgcagatg aacagcctgc gggtggaaga taccgccgtg 720
tactactgcg ccagacggtc ctacgacagc agcggctact ggggccactt ctacagctac 780
atggacgtgt ggggccaggg caccctcgtg acagtgtct 819
<210> 61
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> FITC (E2) scFv
<400> 61
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Ser Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser
20 25 30
Ala Ala Pro Gly Gln Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser
35 40 45
Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Ser Ala Ser Leu Asp
85 90 95
Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala
100 105 110
Trp Asp Asp Ser Leu Ser Glu Phe Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln
145 150 155 160
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
165 170 175
Gly Ser Phe Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gly Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Val Ala Gly Leu Ser Ala Arg Ser Ser Leu Thr His Tyr Ala
195 200 205
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
210 215 220
Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val
225 230 235 240
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Ser Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Trp Gly His
245 250 255
Phe Tyr Ser Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
260 265 270
Ser
<210> 62
<211> 381
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> GD2 (hu3F8) scFv
<400> 62
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccaagca tcgtgatgac ccagaccccc aagttcctgc tggtgagcgc cggcgacagg 120
gtgaccatca cctgcaaggc cagccagagc gtgagcaacg acgtgacctg gtaccagcag 180
aaggccggcc agagccccaa gctgctgatc tacagcgcca gcaacaggta cagcggcgtg 240
cccgacaggt tcaccggcag cggctacggc accgccttca ccttcaccat cagcaccgtg 300
caggccgagg acctggccgt gtacttctgc cagcaggact acagcagctt cggcggcggc 360
accaagctgg agatcaagag g 381
<210> 63
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> GD2 (hu3F8) scFv
<400> 63
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe
20 25 30
Leu Leu Val Ser Ala Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln
50 55 60
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Ala Phe Thr Phe Thr
85 90 95
Ile Ser Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Asp Tyr Ser Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
<210> 64
<211> 801
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> Her2 (赫塞汀) scFv
<400> 64
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagata tccagatgac ccagtccccg agctccctgt ccgcctctgt gggcgatagg 120
gtcaccatca cctgccgtgc cagtcaggat gtgaatactg ctgtagcctg gtatcaacag 180
aaaccaggaa aagctccgaa actactgatt tactcggcat ccttcctcta ctctggagtc 240
ccttctcgct tctctggttc cagatctggg acggatttca ctctgaccat cagcagtctg 300
cagccggaag acttcgcaac ttattactgt cagcaacatt atactactcc tcccacgttc 360
ggacagggta ccaaggtgga gatcaaaggc agtactagcg gcggtggctc cgggggcgga 420
tccggtgggg gcggcagcag cgaggttcag ctggtggagt ctggcggtgg cctggtgcag 480
ccagggggct cactccgttt gtcctgtgca gcttctggct tcaacattaa agacacctat 540
atacactggg tgcgtcaggc cccgggtaag ggcctggaat gggttgcaag gatttatcct 600
acgaatggtt atactagata tgccgatagc gtcaagggcc gtttcactat aagcgcagac 660
acatccaaaa acacagccta cctgcagatg aacagcctgc gtgctgagga cactgccgtc 720
tattattgtt ctagatgggg aggggacggc ttctatgcta tggactactg gggtcaagga 780
accctggtca ccgtctcgag t 801
<210> 65
<211> 267
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Her2 (赫塞汀)scFv
<400> 65
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110
His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
145 150 155 160
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile
165 170 175
Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala
195 200 205
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn
210 215 220
Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
225 230 235 240
Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 66
<211> 722
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IL13R2a (hu08) VlVh scFv
<400> 66
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagaca tccagatgac ccagtccccc tcttctctgt ctgcctctgt gggcgacaga 120
gtgaccatca cctgtaaggc cagtcaggat gtaggtactg ctgtagcctg gtatcagcag 180
aagcctggca aggctcccaa gctgctgatc tactcggcat cctaccggtc cactggcgtg 240
ccttccagat tctccggctc tggctctggc accgatttca ccctgaccat ctcctccctc 300
cagcctgagg atttcgccac ctactactgc cagcaccatt atagtgctcc gtggacgttt 360
ggcggcggaa caaaggtgga gatcaagggt ggtggtggtt ctggcggcgg cggctccggt 420
ggtggtggtt ctgaggtgca gctggtggag tctggcggcg gactggtgca gcctggcggc 480
tctctgagac tgtcttgtgc cgcctccggc ttcaccttca gtaggaatgg catgtcttgg 540
gtgaggcagg cccctggcaa gggcctggag tgggtggcca ccgttagtag tggtggtagt 600
tacatctact atgcagacag tgtgaagggg cggttcacca tctccaggga caacgccaag 660
aactccctgt acctccagat gaactccctg agggccgagg ataccgccgt gtactactgt 720
gc 722
<210> 67
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL13RA2 (HU08) VlVh scFv
<400> 67
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Ser Thr Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His
100 105 110
His Tyr Ser Ala Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
145 150 155 160
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
165 170 175
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
180 185 190
Ala Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
195 200 205
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
210 215 220
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
<210> 68
<211> 809
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IL13RA2 (HU08) VlVh scFv
<400> 68
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagagg tgcagctggt ggagtctggc ggcggactgg tgcagcctgg cggctctctg 120
agactgtctt gtgccgcctc cggcttcacc ttcagtagga atggcatgtc ttgggtgagg 180
caggcccctg gcaagggcct ggagtgggtg gccaccgtta gtagtggtgg tagttacatc 240
tactatgcag acagtgtgaa ggggcggttc accatctcca gggacaacgc caagaactcc 300
ctgtacctcc agatgaactc cctgagggcc gaggataccg ccgtgtacta ctgtgccaga 360
caagggacta cggcactagc tacgaggttc ttcgatgtct ggggccaggg caccctggtg 420
accgtgtcct ctggtggtgg tggttctggc ggcggcggct ccggtggtgg tggttctgac 480
atccagatga cccagtcccc ctcttctctg tctgcctctg tgggcgacag agtgaccatc 540
acctgtaagg ccagtcagga tgtaggtact gctgtagcct ggtatcagca gaagcctggc 600
aaggctccca agctgctgat ctactcggca tcctaccggt ccactggcgt gccttccaga 660
ttctccggct ctggctctgg caccgatttc accctgacca tctcctccct ccagcctgag 720
gatttcgcca cctactactg ccagcaccat tatagtgctc cgtggacgtt tggcggcgga 780
acaaaggtgg agatcaagga atctaagta 809
<210> 69
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL13RA2 (HU08) VlVh scFv
<400> 69
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Ser Arg Asn Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile
65 70 75 80
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
85 90 95
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Thr Thr Ala Leu Ala Thr
115 120 125
Arg Phe Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
145 150 155 160
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
165 170 175
Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val
180 185 190
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
195 200 205
Ser Ala Ser Tyr Arg Ser Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
225 230 235 240
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Ser Ala Pro Trp Thr
245 250 255
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys
260 265
<210> 70
<211> 794
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IL13RA2 (HU07) VlVh scFv
<400> 70
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagata ttcagatgac ccagagcccg agcagcctga gcgcgagcgt gggcgatcgc 120
gtgaccatta cctgcaccgc gagcctgagc gtgagcagca cctatctgca ttggtatcag 180
cagaaaccgg gcaaagcgcc gaaactgctg atttatagca ccagcaacct ggcgagcggc 240
gtgccgagcc gctttagcgg cagcggcagc ggcaccgatt ttaccctgac cattagcagc 300
ctgcagccgg aagattttgc gacctattat tgccatcagt atcatcgcag cccgctgacc 360
tttggcggcg gcaccaaagt ggaaattaaa ggtggtggtg gttctggcgg cggcggctcc 420
ggtggtggtg gttctgaagt gcagctggtg gaaagcggcg gcggcctggt gcagccgggc 480
ggcagcctgc gcctgagctg cgcggcgagc ggctttacct ttaccaaata tggcgtgcat 540
tgggtgcgcc aggcgccggg caaaggcctg gaatgggtgg cggtgaaatg ggcgggcggc 600
agcaccgatt ataacagcgc gctgatgagc cgctttacca ttagccgcga taacgcgaaa 660
aacagcctgt atctgcagat gaacagcctg cgcgcggaag ataccgcggt gtattattgc 720
gcgcgcgatc atcgcgatgc gatggattat tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 780
agcgaatcta agta 794
<210> 71
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL13RA2 (HU07) VlVh scFv
<400> 71
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser
35 40 45
Leu Ser Val Ser Ser Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
65 70 75 80
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His
100 105 110
Gln Tyr His Arg Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys
165 170 175
Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Val Ala Val Lys Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu
195 200 205
Met Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
210 215 220
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Arg Asp His Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
245 250 255
Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys
260
<210> 72
<211> 794
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IL13RA2 (HU07) VlVh scFv
<400> 72
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagaag tgcagctggt ggaaagcggc ggcggcctgg tgcagccggg cggcagcctg 120
cgcctgagct gcgcggcgag cggctttacc tttaccaaat atggcgtgca ttgggtgcgc 180
caggcgccgg gcaaaggcct ggaatgggtg gcggtgaaat gggcgggcgg cagcaccgat 240
tataacagcg cgctgatgag ccgctttacc attagccgcg ataacgcgaa aaacagcctg 300
tatctgcaga tgaacagcct gcgcgcggaa gataccgcgg tgtattattg cgcgcgcgat 360
catcgcgatg cgatggatta ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagcggtggt 420
ggtggttctg gcggcggcgg ctccggtggt ggtggttctg atattcagat gacccagagc 480
ccgagcagcc tgagcgcgag cgtgggcgat cgcgtgacca ttacctgcac cgcgagcctg 540
agcgtgagca gcacctatct gcattggtat cagcagaaac cgggcaaagc gccgaaactg 600
ctgatttata gcaccagcaa cctggcgagc ggcgtgccga gccgctttag cggcagcggc 660
agcggcaccg attttaccct gaccattagc agcctgcagc cggaagattt tgcgacctat 720
tattgccatc agtatcatcg cagcccgctg acctttggcg gcggcaccaa agtggaaatt 780
aaagaatcta agta 794
<210> 73
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL13RA2 (HU07) VlVh
<400> 73
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Thr Lys Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Lys Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asp
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
85 90 95
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp His Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
165 170 175
Thr Ala Ser Leu Ser Val Ser Ser Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln
180 185 190
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu
195 200 205
Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
210 215 220
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
245 250 255
Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys
260
<210> 74
<211> 401
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 抗-IL13RA2 (IL13 ZETAKINE)
<400> 74
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccaggcc ctgtgcctcc ctctacagcc ctcaggtacc tcattgagga gctggtcaac 120
atcacccaga accagaaggc tccgctctgc aatggcagca tggtatggag catcaacctg 180
acagctggca tgtactgtgc agccctggaa tccctgatca acgtgtcagg ctgcagtgcc 240
atcgagaaga cccagaggat gctgagcgga ttctgcccgc acaaggtctc agctgggcag 300
ttttccagct tgcatgtccg agacaccaaa atcgaggtgg cccagtttgt aaaggacctg 360
ctcttacatt taaagaaact ttttcgcgag ggacggttca a 401
<210> 75
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗-IL13RA2 (IL13 ZETAKINE) A
<400> 75
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe
130
<210> 76
<211> 807
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> OAGD2 (8B6) VLVH SCFV核苷酸序列
<400> 76
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagatg ttgtgatgac ccaaactcca ctctccctgc ctgtcagtct tggagatcaa 120
gcctcaatct cttgcagatc tagtcagagc cttctaaaaa ataatggaaa caccttttta 180
cattggtacc tgcagaagtc aggccagtct ccaaagctcc ttatctacaa agtttccaac 240
cgactttctg gggtcccaga caggttcagt ggcagtggat cagggacata tttcacactc 300
aagatcagca gagtggaggc tgaggatctg ggagtttatt tctgctctca aagtacacat 360
attccgtaca cattcggagg ggggaccaag ctcgagctga aacgaggcgg agggggctct 420
ggcggcggag gatctggggg agggggcagc gaggtgaaac tggtggagtc tggaggaggc 480
ttggtgctgc ctggggattc tctgagactc tcctgtgcaa cttctgagtt caccttcact 540
gattactaca tgacttgggt ccgccagcct ccaagaaagg cacttgagtg gttgggtttt 600
attagaaaca gagctaatgg ttacacaaca gagtacaatc catctgtgaa gggtcggttc 660
accatttcca gagataattc ccaaagcatc ctctatcttc aaatgaacac cctgagaact 720
gaggacagtg ccacttatta ctgtgcaaga gtctctaact gggcctttga ctactggggc 780
caaggcacca ctctcacagt ctcctca 807
<210> 77
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OAGD2 (8B6) VlVh scFv
<400> 77
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
35 40 45
Gln Ser Leu Leu Lys Asn Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu
50 55 60
Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn
65 70 75 80
Arg Leu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
85 90 95
Tyr Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Leu Val Leu Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Glu
165 170 175
Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Arg
180 185 190
Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr
195 200 205
Thr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
210 215 220
Asp Asn Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr
225 230 235 240
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe
245 250 255
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 78
<211> 810
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> ROR1 (R12) scFv
<400> 78
atgctgctgc tggtgacaag cctgctgctg tgcgagctgc cccaccccgc ctttctgctg 60
atcccccagg aacagctcgt cgaaagcggc ggcagactgg tgacacctgg cggcagcctg 120
accctgagct gcaaggccag cggcttcgac ttcagcgcct actacatgag ctgggtccgc 180
caggcccctg gcaagggact ggaatggatc gccaccatct accccagcag cggcaagacc 240
tactacgcca cctgggtgaa cggacggttc accatctcca gcgacaacgc ccagaacacc 300
gtggacctgc agatgaacag cctgacagcc gccgaccggg ccacctactt ttgcgccaga 360
gacagctacg ccgacgacgg cgccctgttc aacatctggg gccctggcac cctggtgaca 420
atctctagcg gcggaggcgg atctggtggc ggaggaagtg gcggcggagg atctgagctg 480
gtgctgaccc agagcccctc tgtgtctgct gccctgggaa gccctgccaa gatcacctgt 540
accctgagca gcgcccacaa gaccgacacc atcgactggt atcagcagct gcagggcgag 600
gcccccagat acctgatgca ggtgcagagc gacggcagct acaccaagag gccaggcgtg 660
cccgaccggt tcagcggatc tagctctggc gccgaccgct acctgatcat ccccagcgtg 720
caggccgatg acgaggccga ttactactgt ggcgccgact acatcggcgg ctacgtgttc 780
ggcggaggca cccagctgac cgtgaccggc 810
<210> 79
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ROR1 (R12) scFv
<400> 79
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg
20 25 30
Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser Leu Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Asp Phe Ser Ala Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala Thr Ile Tyr Pro Ser Ser Gly Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Tyr Ala Thr Trp Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn
85 90 95
Ala Gln Asn Thr Val Asp Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp
100 105 110
Arg Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Ser Tyr Ala Asp Asp Gly Ala
115 120 125
Leu Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Ile Ser Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu
145 150 155 160
Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Ser Ala Ala Leu Gly Ser Pro Ala
165 170 175
Lys Ile Thr Cys Thr Leu Ser Ser Ala His Lys Thr Asp Thr Ile Asp
180 185 190
Trp Tyr Gln Gln Leu Gln Gly Glu Ala Pro Arg Tyr Leu Met Gln Val
195 200 205
Gln Ser Asp Gly Ser Tyr Thr Lys Arg Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe
210 215 220
Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ile Ile Pro Ser Val
225 230 235 240
Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Asp Tyr Ile Gly
245 250 255
Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr Gly
260 265 270
<210> 80
<211> 417
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD33 (H2H12) VlVh scFv
<400> 80
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacagg ttcagctggt gcagtctgga gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg 120
aaggtctcct gcaaggcttc tggttacacc tttaccaatt atgatataaa ttgggtgaga 180
caggcccctg gacaagggct tgagtggatt ggatggattt atcctggaga tggtagtacc 240
aaatataatg agaaattcaa ggccaaggct accctgacag ctgacacatc caccagcaca 300
gcctacatgg agctgaggag cctgagatct gatgacacag ctgtgtatta ctgtgcttct 360
ggatatgaag atgctatgga ctactggggg caagggacca cagtcacagt ctcctca 417
<210> 81
<211> 139
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD33 (H2H12) VlVh scFv
<400> 81
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
20 25 30
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
35 40 45
Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr
65 70 75 80
Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr
85 90 95
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 82
<211> 387
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD33 (H2H12) VlVh scFv
<400> 82
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagaca tccagatgac ccagtctcca tcctcactgt ctgcatctgt aggagacaga 120
gtcaccatca attgtaaggc tagtcaggac attaatagct atttgagctg gtttcagcag 180
aaaccaggga aagcccctaa gaccctgatc tatagagcaa atagattggt agatggggtc 240
ccatcaaggt tctctggcag tggatctggg caagattata ctctcaccat cagcagcctg 300
cagcctgaag attttgcaac ttattactgc ttgcagtatg atgagtttcc tctcacattt 360
ggaggaggga ccaaggtgga gatcaaa 387
<210> 83
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD33 (H2H12) VlVh scFv
<400> 83
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
100 105 110
Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys
<210> 84
<211> 450
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 间皮素(P4) scFv
<400> 84
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacagg tacagctgca gcagtcaggt ccaggactcg tgacgccctc gcagaccctc 120
tcactcacct gtgccatctc cggggacagt gtctctagca acagtgctac ttggaactgg 180
atcaggcagt ccccatcgag aggccttgag tggctgggaa ggacatacta caggtccaag 240
tggtataacg actatgcagt atctgtgaaa agtcgaatga gcatcaaccc agacacatcc 300
aagaaccagt tctccctgca gctgaactct gtgactcccg aggacacggc tgtgtattac 360
tgtgcaagag gaatgatgac ttactattac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 420
gtcaccgtct cctcaggaat tctaggatcc 450
<210> 85
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 间皮素(P4) scFv
<400> 85
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly
20 25 30
Leu Val Thr Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly
35 40 45
Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Thr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser
50 55 60
Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys
65 70 75 80
Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Val Ser Val Lys Ser Arg Met Ser Ile Asn
85 90 95
Pro Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr
100 105 110
Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Met Met Thr Tyr
115 120 125
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
130 135 140
Ser Gly Ile Leu Gly Ser
145 150
<210> 86
<211> 1344
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> VAR2CSA (ID1-DBL2XB) scFv
<400> 86
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccaagtc tcacgaatgg gtataagtgc gacaaatgca aatcaggcac atcccggtcc 120
aaaaaaaaat ggatctggaa aaagagcagc gggaatgagg agggcctgca ggaagaatac 180
gctaacacaa tcggactgcc ccctcgaact caatctctgt accttgggaa cttgcctaaa 240
ctggaaaacg tctgtgaaga cgtcaaggac ataaacttcg atacgaaaga gaagttcctg 300
gctggatgcc ttatcgtgag ctttcacgag ggaaagaatc tgaagaaaag gtacccacag 360
aataaaaact ctggcaataa agagaatttg tgcaaggccc tggagtactc ttttgcggac 420
tatggcgatc tcataaaggg cacaagcatc tgggataatg agtataccaa ggatctggag 480
ctgaatctgc agaataactt tgggaaattg tttgggaagt atattaaaaa aaataatacc 540
gccgagcagg acacatccta ctcttccctc gacgagctgc gggagtcatg gtggaacacc 600
aacaaaaagt atatctggac ggcaatgaaa catggcgcgg aaatgaatat caccacttgt 660
aatgcagacg gctctgtcac cgggtccggt tcttcttgcg atgatatacc aaccatcgat 720
ttgattccgc agtatctgag atttctccaa gagtgggtgg aaaatttttg cgagcagagg 780
caagctaagg tcaaggacgt gatcaccaat tgtaaaagtt gcaaagaatc agggaacaag 840
tgcaaaaccg agtgtaagac gaagtgcaag gacgaatgcg agaaatataa aaaattcatc 900
gaggcttgtg gaacagccgg gggtgggatt gggaccgcag gcagcccatg gagcaagcgg 960
tgggaccaaa tctataaacg atacagcaag cacatcgaag atgccaagcg gaaccgcaaa 1020
gctggcacaa aaaactgtgg gactagcagc acgactaatg ccgcggcaag cactgatgaa 1080
aataaatgcg tgcaaagtga catcgactct ttcttcaaac acctgatcga tatcggtctt 1140
actacgccaa gcagctacct cagtaatgtt ctggatgata atatttgtgg ggcggacaaa 1200
gcaccttgga ctacctacac cacctatacc acaacagaga agtgtaataa agagagagac 1260
aaatcaaagt ctcagagctc tgatacactg gtcgttgtga atgtgccaag ccctttgggg 1320
aatacgccct acagatataa atac 1344
<210> 87
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VAR2CSA (ID1-DBL2XB) scFv
<400> 87
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Ser Leu Thr Asn Gly Tyr Lys Cys Asp Lys
20 25 30
Cys Lys Ser Gly Thr Ser Arg Ser Lys Lys Lys Trp Ile Trp Lys Lys
35 40 45
Ser Ser Gly Asn Glu Glu Gly Leu Gln Glu Glu Tyr Ala Asn Thr Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Pro Arg Thr Gln Ser Leu Tyr Leu Gly Asn Leu Pro Lys
65 70 75 80
Leu Glu Asn Val Cys Glu Asp Val Lys Asp Ile Asn Phe Asp Thr Lys
85 90 95
Glu Lys Phe Leu Ala Gly Cys Leu Ile Val Ser Phe His Glu Gly Lys
100 105 110
Asn Leu Lys Lys Arg Tyr Pro Gln Asn Lys Asn Ser Gly Asn Lys Glu
115 120 125
Asn Leu Cys Lys Ala Leu Glu Tyr Ser Phe Ala Asp Tyr Gly Asp Leu
130 135 140
Ile Lys Gly Thr Ser Ile Trp Asp Asn Glu Tyr Thr Lys Asp Leu Glu
145 150 155 160
Leu Asn Leu Gln Asn Asn Phe Gly Lys Leu Phe Gly Lys Tyr Ile Lys
165 170 175
Lys Asn Asn Thr Ala Glu Gln Asp Thr Ser Tyr Ser Ser Leu Asp Glu
180 185 190
Leu Arg Glu Ser Trp Trp Asn Thr Asn Lys Lys Tyr Ile Trp Thr Ala
195 200 205
Met Lys His Gly Ala Glu Met Asn Ile Thr Thr Cys Asn Ala Asp Gly
210 215 220
Ser Val Thr Gly Ser Gly Ser Ser Cys Asp Asp Ile Pro Thr Ile Asp
225 230 235 240
Leu Ile Pro Gln Tyr Leu Arg Phe Leu Gln Glu Trp Val Glu Asn Phe
245 250 255
Cys Glu Gln Arg Gln Ala Lys Val Lys Asp Val Ile Thr Asn Cys Lys
260 265 270
Ser Cys Lys Glu Ser Gly Asn Lys Cys Lys Thr Glu Cys Lys Thr Lys
275 280 285
Cys Lys Asp Glu Cys Glu Lys Tyr Lys Lys Phe Ile Glu Ala Cys Gly
290 295 300
Thr Ala Gly Gly Gly Ile Gly Thr Ala Gly Ser Pro Trp Ser Lys Arg
305 310 315 320
Trp Asp Gln Ile Tyr Lys Arg Tyr Ser Lys His Ile Glu Asp Ala Lys
325 330 335
Arg Asn Arg Lys Ala Gly Thr Lys Asn Cys Gly Thr Ser Ser Thr Thr
340 345 350
Asn Ala Ala Ala Ser Thr Asp Glu Asn Lys Cys Val Gln Ser Asp Ile
355 360 365
Asp Ser Phe Phe Lys His Leu Ile Asp Ile Gly Leu Thr Thr Pro Ser
370 375 380
Ser Tyr Leu Ser Asn Val Leu Asp Asp Asn Ile Cys Gly Ala Asp Lys
385 390 395 400
Ala Pro Trp Thr Thr Tyr Thr Thr Tyr Thr Thr Thr Glu Lys Cys Asn
405 410 415
Lys Glu Arg Asp Lys Ser Lys Ser Gln Ser Ser Asp Thr Leu Val Val
420 425 430
Val Asn Val Pro Ser Pro Leu Gly Asn Thr Pro Tyr Arg Tyr Lys Tyr
435 440 445
<210> 88
<211> 2202
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CCR(CD122)
<400> 88
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccagatt gtgatattga aggtaaagat ggcaaacaat atgagagtgt tctaatggtc 120
agcatcgatc aattattgga cagcatgaaa gaaattggta gcaattgcct gaataatgaa 180
tttaactttt ttaaaagaca tatctgtgat gctaataagg aaggtatgtt tttattccgt 240
gctgctcgca agttgaggca atttcttaaa atgaatagca ctggtgattt tgatctccac 300
ttattaaaag tttcagaagg cacaacaata ctgttgaact gcactggcca ggttaaagga 360
agaaaaccag ctgccctggg tgaagcccaa ccaacaaaga gtttggaaga aaataaatct 420
ttaaaggaac agaaaaaact gaatgacttg tgtttcctaa agagactatt acaagagata 480
aaaacttgtt ggaataaaat tttgatgggc actaaagaac acggaggcgg tgggagcgga 540
ggcggtggga gcatgacaat tctaggtaca acttttggca tggttttttc tttacttcaa 600
gtcgtttctg gagaaagtgg ctatgctcaa aatggagact tggaagatgc agaactggat 660
gactactcat tctcatgcta tagccagttg gaagtgaatg gatcgcagca ctcactgacc 720
tgtgcttttg aggacccaga tgtcaacatc accaatctgg aatttgaaat atgtggggcc 780
ctcgtggagg taaagtgcct gaatttcagg aaactacaag agatatattt catcgagaca 840
aagaaattct tactgattgg aaagagcaat atatgtgtga aggttggaga aaagagtcta 900
acctgcaaaa aaatagacct aaccactata gttaaacctg aggctccttt tgacctgagt 960
gtcatctatc gggaaggagc caatgacttt gtggtgacat ttaatacatc acacttgcaa 1020
aagaagtatg taaaagtttt aatgcacgat gtagcttacc gccaggaaaa ggatgaaaac 1080
aaatggacgc atgtgaattt atccagcaca aaactgacac tcctgcagag aaagctccaa 1140
ccggcagcaa tgtatgagat taaagttcga tccatccctg atcactattt taaaggcttc 1200
tggagtgaat ggagtccaag ttattacttc agaactccag agatcaataa tagctcaggg 1260
gagatggatc ctatcttact aaccatcagc attttgagtt ttttctctgt cgctctgttg 1320
gtcatcttgg cctgtgtgtt atggaactgc aggaacaccg ggccatggct gaagaaggtc 1380
ctgaagtgta acaccccaga cccctcgaag ttcttttccc agctgagctc agagcatgga 1440
ggagacgtcc agaagtggct ctcttcgccc ttcccctcat cgtccttcag ccctggcggc 1500
ctggcacctg agatctcgcc actagaagtg ctggagaggg acaaggtgac gcagctgctc 1560
ctgcagcagg acaaggtgcc tgagcccgca tccttaagca gcaaccactc gctgaccagc 1620
tgcttcacca accagggtta cttcttcttc cacctcccgg atgccttgga gatagaggcc 1680
tgccaggtgt actttactta cgacccctac tcagaggaag accctgatga gggtgtggcc 1740
ggggcaccca cagggtcttc cccccaaccc ctgcagcctc tgtcagggga ggacgacgcc 1800
tactgcacct tcccctccag ggatgacctg ctgctcttct cccccagtct cctcggtggc 1860
cccagccccc caagcactgc ccctgggggc agtggggccg gtgaagagag gatgccccct 1920
tctttgcaag aaagagtccc cagagactgg gacccccagc ccctggggcc tcccacccca 1980
ggagtcccag acctggtgga ttttcagcca ccccctgagc tggtgctgcg agaggctggg 2040
gaggaggtcc ctgacgctgg ccccagggag ggagtcagtt tcccctggtc caggcctcct 2100
gggcaggggg agttcagggc ccttaatgct cgcctgcccc tgaacactga tgcctacttg 2160
tccctccaag aactccaggg tcaggaccca actcacttgg tg 2202
<210> 89
<211> 734
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CCR(CD122)
<400> 89
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys
20 25 30
Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser
35 40 45
Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe
50 55 60
Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg
65 70 75 80
Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp
85 90 95
Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu
100 105 110
Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu
115 120 125
Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln
130 135 140
Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile
145 150 155 160
Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Gly Gly
165 170 175
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Thr Ile Leu Gly Thr Thr Phe
180 185 190
Gly Met Val Phe Ser Leu Leu Gln Val Val Ser Gly Glu Ser Gly Tyr
195 200 205
Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe
210 215 220
Ser Cys Tyr Ser Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser Gln His Ser Leu Thr
225 230 235 240
Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Ile Thr Asn Leu Glu Phe Glu
245 250 255
Ile Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu
260 265 270
Gln Glu Ile Tyr Phe Ile Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu Ile Gly Lys
275 280 285
Ser Asn Ile Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys
290 295 300
Ile Asp Leu Thr Thr Ile Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser
305 310 315 320
Val Ile Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr
325 330 335
Ser His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val Ala
340 345 350
Tyr Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser
355 360 365
Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys Leu Gln Pro Ala Ala Met
370 375 380
Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe
385 390 395 400
Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu Ile Asn
405 410 415
Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro Ile Leu Leu Thr Ile Ser Ile Leu
420 425 430
Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp
435 440 445
Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn
450 455 460
Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly
465 470 475 480
Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe
485 490 495
Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu
500 505 510
Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu
515 520 525
Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn
530 535 540
Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala
545 550 555 560
Cys Gln Val Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp
565 570 575
Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln
580 585 590
Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp
595 600 605
Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro
610 615 620
Ser Thr Ala Pro Gly Gly Ser Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro
625 630 635 640
Ser Leu Gln Glu Arg Val Pro Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly
645 650 655
Pro Pro Thr Pro Gly Val Pro Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro
660 665 670
Glu Leu Val Leu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro
675 680 685
Arg Glu Gly Val Ser Phe Pro Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu
690 695 700
Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu
705 710 715 720
Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val
725 730
<210> 90
<211> 1014
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> PD1ECD-IFNALPHA
<400> 90
atgcagatcc ctcaggcccc ttggcctgtc gtgtgggctg tgctgcagct gggatggcgg 60
cctggctggt ttctggacag ccccgacaga ccctggaacc cccctacatt ttcccctgcc 120
ctgctggtcg tgaccgaggg cgacaatgcc accttcacct gtagcttcag caacaccagc 180
gagagcttcg tgctgaactg gtacagaatg agccccagca accagaccga caagctggcc 240
gccttccccg aggatagatc tcagcccggc caggactgcc ggttcagagt gacccagctg 300
cccaacggcc gggacttcca catgtctgtc gtgcgggcca gacggaacga cagcggcaca 360
tatctgtgcg gcgccatcag cctggccccc aaggcccaga tcaaagagag cctgagagcc 420
gagctgagag tgaccgagag aagggccgaa gtgcctaccg cccaccctag cccatctcca 480
agacctgccg gccagttcca gacactcgtg ggcggaggat gcgacctgcc tcagacacac 540
agcctgggca gcagacggac cctgatgctg ctggcccaga tgcggaagat cagcctgttc 600
agctgcctga aggaccggca cgacttcggc ttccctcagg aagagttcgg caaccagttt 660
cagaaggccg agacaatccc cgtgctgcac gagatgatcc agcagatctt caacctgttc 720
tccaccaagg acagcagcgc cgcctgggac gagacactgc tggacaagtt ctacaccgag 780
ctgtaccagc agctgaatga cctggaagcc tgcgtgatcc agggcgtggg cgtgacagag 840
acacccctga tgaaggaaga tagcatcctg gccgtgcgca agtacttcca gcggatcacc 900
ctgtacctga aagagaagaa gtacagcccc tgcgcctggg aggtcgtgcg cgccgagatc 960
atgagaagct tcagcctgag caccaacctg caggaaagcc tgcggagcaa agaa 1014
<210> 91
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD1ECD-IFNALPHA
<400> 91
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Gly Gly Cys Asp Leu
165 170 175
Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala
180 185 190
Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp
195 200 205
Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu
210 215 220
Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe
225 230 235 240
Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys
245 250 255
Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val
260 265 270
Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser
275 280 285
Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys
290 295 300
Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile
305 310 315 320
Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser
325 330 335
Lys Glu
<210> 92
<211> 2382
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> STAT5A
<400> 92
atggcgggct ggatccaggc ccagcagctg cagggagacg cgctgcgcca gatgcaggtg 60
ctgtacggcc agcacttccc catcgaggtc cggcactact tggcccagtg gattgagagc 120
cagccatggg atgccattga cttggacaat ccccaggaca gagcccaagc cacccagctc 180
ctggagggcc tggtgcagga gctgcagaag aaggcggagc accaggtggg ggaagatggg 240
tttttactga agatcaagct ggggcactac gccacgcagc tccagaaaac atatgaccgc 300
tgccccctgg agctggtccg ctgcatccgg cacattctgt acaatgaaca gaggctggtc 360
cgagaagcca acaattgcag ctctccggct gggatcctgg ttgacgccat gtcccagaag 420
caccttcaga tcaaccagac atttgaggag ctgcgactgg tcacgcagga cacagagaat 480
gagctgaaga aactgcagca gactcaggag tacttcatca tccagtacca ggagagcctg 540
aggatccaag ctcagtttgc ccagctggcc cagctgagcc cccaggagcg tctgagccgg 600
gagacggccc tccagcagaa gcaggtgtct ctggaggcct ggttgcagcg tgaggcacag 660
acactgcagc agtaccgcgt ggagctggcc gagaagcacc agaagaccct gcagctgctg 720
cggaagcagc agaccatcat cctggatgac gagctgatcc agtggaagcg gcggcagcag 780
ctggccggga acggcgggcc ccccgagggc agcctggacg tgctacagtc ctggtgtgag 840
aagttggccg agatcatctg gcagaaccgg cagcagatcc gcagggctga gcacctctgc 900
cagcagctgc ccatccccgg cccagtggag gagatgctgg ccgaggtcaa cgccaccatc 960
acggacatta tctcagccct ggtgaccagc acattcatca ttgagaagca gcctcctcag 1020
gtcctgaaga cccagaccaa gtttgcagcc accgtacgcc tgctggtggg cgggaagctg 1080
aacgtgcaca tgaatccccc ccaggtgaag gccaccatca tcagtgagca gcaggccaag 1140
tctctgctta aaaatgagaa cacccgcaac gagtgcagtg gtgagatcct gaacaactgc 1200
tgcgtgatgg agtaccacca agccacgggc accctcagtg cccacttcag gaacatgtca 1260
ctgaagagga tcaagcgtgc tgaccggcgg ggtgcagagt ccgtgacaga ggagaagttc 1320
acagtcctgt ttgagtctca gttcagtgtt ggcagcaatg agcttgtgtt ccaggtgaag 1380
actctgtccc tacctgtggt tgtcatcgtc cacggcagcc aggaccacaa tgccacggct 1440
actgtgctgt gggacaatgc ctttgctgag ccgggcaggg tgccatttgc cgtgcctgac 1500
aaagtgctgt ggccgcagct gtgtgaggcg ctcaacatga aattcaaggc cgaagtgcag 1560
agcaaccggg gcctgaccaa ggagaacctc gtgttcctgg cgcagaaact gttcaacaac 1620
agcagcagcc acctggagga ctacagtggc ctgtccgtgt cctggtccca gttcaacagg 1680
gagaacttgc cgggctggaa ctacaccttc tggcagtggt ttgacggggt gatggaggtg 1740
ttgaagaagc accacaagcc ccactggaat gatggggcca tcctaggttt tgtgaataag 1800
caacaggccc acgacctgct catcaacaag cccgacggga ccttcttgtt gcgctttagt 1860
gactcagaaa tcgggggcat caccatcgcc tggaagtttg attccccgga acgcaacctg 1920
tggaacctga aaccattcac cacgcgggat ttctccatca ggtccctggc tgaccggctg 1980
ggggacctga gctatctcat ctatgtgttt cctgaccgcc ccaaggatga ggtcttctcc 2040
aagtactaca ctcctgtgct ggctaaagct gttgatggat atgtgaaacc acagatcaag 2100
caagtggtcc ctgagtttgt gaatgcatct gcagatgctg ggggcagcag cgccacgtac 2160
atggaccagg ccccctcccc agctgtgtgc ccccaggctc cctataacat gtacccacag 2220
aaccctgacc atgtactcga tcaggatgga gaattcgacc tggatgagac catggatgtg 2280
gccaggcacg tggaggaact cttacgccga ccaatggaca gtcttgactc ccgcctctcg 2340
ccccctgccg gtcttttcac ctctgccaga ggctccctct ca 2382
<210> 93
<211> 794
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> STAT5A
<400> 93
Met Ala Gly Trp Ile Gln Ala Gln Gln Leu Gln Gly Asp Ala Leu Arg
1 5 10 15
Gln Met Gln Val Leu Tyr Gly Gln His Phe Pro Ile Glu Val Arg His
20 25 30
Tyr Leu Ala Gln Trp Ile Glu Ser Gln Pro Trp Asp Ala Ile Asp Leu
35 40 45
Asp Asn Pro Gln Asp Arg Ala Gln Ala Thr Gln Leu Leu Glu Gly Leu
50 55 60
Val Gln Glu Leu Gln Lys Lys Ala Glu His Gln Val Gly Glu Asp Gly
65 70 75 80
Phe Leu Leu Lys Ile Lys Leu Gly His Tyr Ala Thr Gln Leu Gln Lys
85 90 95
Thr Tyr Asp Arg Cys Pro Leu Glu Leu Val Arg Cys Ile Arg His Ile
100 105 110
Leu Tyr Asn Glu Gln Arg Leu Val Arg Glu Ala Asn Asn Cys Ser Ser
115 120 125
Pro Ala Gly Ile Leu Val Asp Ala Met Ser Gln Lys His Leu Gln Ile
130 135 140
Asn Gln Thr Phe Glu Glu Leu Arg Leu Val Thr Gln Asp Thr Glu Asn
145 150 155 160
Glu Leu Lys Lys Leu Gln Gln Thr Gln Glu Tyr Phe Ile Ile Gln Tyr
165 170 175
Gln Glu Ser Leu Arg Ile Gln Ala Gln Phe Ala Gln Leu Ala Gln Leu
180 185 190
Ser Pro Gln Glu Arg Leu Ser Arg Glu Thr Ala Leu Gln Gln Lys Gln
195 200 205
Val Ser Leu Glu Ala Trp Leu Gln Arg Glu Ala Gln Thr Leu Gln Gln
210 215 220
Tyr Arg Val Glu Leu Ala Glu Lys His Gln Lys Thr Leu Gln Leu Leu
225 230 235 240
Arg Lys Gln Gln Thr Ile Ile Leu Asp Asp Glu Leu Ile Gln Trp Lys
245 250 255
Arg Arg Gln Gln Leu Ala Gly Asn Gly Gly Pro Pro Glu Gly Ser Leu
260 265 270
Asp Val Leu Gln Ser Trp Cys Glu Lys Leu Ala Glu Ile Ile Trp Gln
275 280 285
Asn Arg Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu His Leu Cys Gln Gln Leu Pro
290 295 300
Ile Pro Gly Pro Val Glu Glu Met Leu Ala Glu Val Asn Ala Thr Ile
305 310 315 320
Thr Asp Ile Ile Ser Ala Leu Val Thr Ser Thr Phe Ile Ile Glu Lys
325 330 335
Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys Phe Ala Ala Thr Val
340 345 350
Arg Leu Leu Val Gly Gly Lys Leu Asn Val His Met Asn Pro Pro Gln
355 360 365
Val Lys Ala Thr Ile Ile Ser Glu Gln Gln Ala Lys Ser Leu Leu Lys
370 375 380
Asn Glu Asn Thr Arg Asn Glu Cys Ser Gly Glu Ile Leu Asn Asn Cys
385 390 395 400
Cys Val Met Glu Tyr His Gln Ala Thr Gly Thr Leu Ser Ala His Phe
405 410 415
Arg Asn Met Ser Leu Lys Arg Ile Lys Arg Ala Asp Arg Arg Gly Ala
420 425 430
Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Phe Thr Val Leu Phe Glu Ser Gln Phe
435 440 445
Ser Val Gly Ser Asn Glu Leu Val Phe Gln Val Lys Thr Leu Ser Leu
450 455 460
Pro Val Val Val Ile Val His Gly Ser Gln Asp His Asn Ala Thr Ala
465 470 475 480
Thr Val Leu Trp Asp Asn Ala Phe Ala Glu Pro Gly Arg Val Pro Phe
485 490 495
Ala Val Pro Asp Lys Val Leu Trp Pro Gln Leu Cys Glu Ala Leu Asn
500 505 510
Met Lys Phe Lys Ala Glu Val Gln Ser Asn Arg Gly Leu Thr Lys Glu
515 520 525
Asn Leu Val Phe Leu Ala Gln Lys Leu Phe Asn Asn Ser Ser Ser His
530 535 540
Leu Glu Asp Tyr Ser Gly Leu Ser Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Arg
545 550 555 560
Glu Asn Leu Pro Gly Trp Asn Tyr Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly
565 570 575
Val Met Glu Val Leu Lys Lys His His Lys Pro His Trp Asn Asp Gly
580 585 590
Ala Ile Leu Gly Phe Val Asn Lys Gln Gln Ala His Asp Leu Leu Ile
595 600 605
Asn Lys Pro Asp Gly Thr Phe Leu Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile
610 615 620
Gly Gly Ile Thr Ile Ala Trp Lys Phe Asp Ser Pro Glu Arg Asn Leu
625 630 635 640
Trp Asn Leu Lys Pro Phe Thr Thr Arg Asp Phe Ser Ile Arg Ser Leu
645 650 655
Ala Asp Arg Leu Gly Asp Leu Ser Tyr Leu Ile Tyr Val Phe Pro Asp
660 665 670
Arg Pro Lys Asp Glu Val Phe Ser Lys Tyr Tyr Thr Pro Val Leu Ala
675 680 685
Lys Ala Val Asp Gly Tyr Val Lys Pro Gln Ile Lys Gln Val Val Pro
690 695 700
Glu Phe Val Asn Ala Ser Ala Asp Ala Gly Gly Ser Ser Ala Thr Tyr
705 710 715 720
Met Asp Gln Ala Pro Ser Pro Ala Val Cys Pro Gln Ala Pro Tyr Asn
725 730 735
Met Tyr Pro Gln Asn Pro Asp His Val Leu Asp Gln Asp Gly Glu Phe
740 745 750
Asp Leu Asp Glu Thr Met Asp Val Ala Arg His Val Glu Glu Leu Leu
755 760 765
Arg Arg Pro Met Asp Ser Leu Asp Ser Arg Leu Ser Pro Pro Ala Gly
770 775 780
Leu Phe Thr Ser Ala Arg Gly Ser Leu Ser
785 790
<210> 94
<211> 2382
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 组成型激活的-STAT5A
<400> 94
atggcgggct ggatccaggc ccagcagctg cagggagacg cgctgcgcca gatgcaggtg 60
ctgtacggcc agcacttccc catcgaggtc cggcactact tggcccagtg gattgagagc 120
cagccatggg atgccattga cttggacaat ccccaggaca gagcccaagc cacccagctc 180
ctggagggcc tggtgcagga gctgcagaag aaggcggagc accaggtggg ggaagatggg 240
tttttactga agatcaagct ggggcactac gccacgcagc tccagaaaac atatgaccgc 300
tgccccctgg agctggtccg ctgcatccgg cacattctgt acaatgaaca gaggctggtc 360
cgagaagcca acaattgcag ctctccggct gggatcctgg ttgacgccat gtcccagaag 420
caccttcaga tcaaccagac atttgaggag ctgcgactgg tcacgcagga cacagagaat 480
gagctgaaga aactgcagca gactcaggag tacttcatca tccagtacca ggagagcctg 540
aggatccaag ctcagtttgc ccagctggcc cagctgagcc cccaggagcg tctgagccgg 600
gagacggccc tccagcagaa gcaggtgtct ctggaggcct ggttgcagcg tgaggcacag 660
acactgcagc agtaccgcgt ggagctggcc gagaagcacc agaagaccct gcagctgctg 720
cggaagcagc agaccatcat cctggatgac gagctgatcc agtggaagcg gcggcagcag 780
ctggccggga acggcgggcc ccccgagggc agcctggacg tgctacagtc ctggtgtgag 840
aagttggccg agatcatctg gcagaaccgg cagcagatcc gcagggctga gcgcctctgc 900
cagcagctgc ccatccccgg cccagtggag gagatgctgg ccgaggtcaa cgccaccatc 960
acggacatta tctcagccct ggtgaccagc acattcatca ttgagaagca gcctcctcag 1020
gtcctgaaga cccagaccaa gtttgcagcc accgtacgcc tgctggtggg cgggaagctg 1080
aacgtgcaca tgaatccccc ccaggtgaag gccaccatca tcagtgagca gcaggccaag 1140
tctctgctta aaaatgagaa cacccgcaac gagtgcagtg gtgagatcct gaacaactgc 1200
tgcgtgatgg agtaccacca agccacgggc accctcagtg cccacttcag gaacatgtca 1260
ctgaagagga tcaagcgtgc tgaccggcgg ggtgcagagt ccgtgacaga ggagaagttc 1320
acagtcctgt ttgagtctca gttcagtgtt ggcagcaatg agcttgtgtt ccaggtgaag 1380
actctgtccc tacctgtggt tgtcatcgtc cacggcagcc aggaccacaa tgccacggct 1440
actgtgctgt gggacaatgc ctttgctgag ccgggcaggg tgccatttgc cgtgcctgac 1500
aaagtgctgt ggccgcagct gtgtgaggcg ctcaacatga aattcaaggc cgaagtgcag 1560
agcaaccggg gcctgaccaa ggagaacctc gtgttcctgg cgcagaaact gttcaacaac 1620
agcagcagcc acctggagga ctacagtggc ctgtccgtgt cctggtccca gttcaacagg 1680
gagaacttgc cgggctggaa ctacaccttc tggcagtggt ttgacggggt gatggaggtg 1740
ttgaagaagc accacaagcc ccactggaat gatggggcca tcctaggttt tgtgaataag 1800
caacaggccc acgacctgct catcaacaag cccgacggga ccttcttgtt gcgctttagt 1860
gactcagaaa tcgggggcat caccatcgcc tggaagtttg attccccgga acgcaacctg 1920
tggaacctga aaccattcac cacgcgggat ttctccatca ggtccctggc tgaccggctg 1980
ggggacctga gctatctcat ctatgtgttt cctgaccgcc ccaaggatga ggtcttctcc 2040
aagtactaca ctcctgtgct ggctaaagct gttgatggat atgtgaaacc acagatcaag 2100
caagtggtcc ctgagtttgt gaatgcattt gcagatgctg ggggcagcag cgccacgtac 2160
atggaccagg ccccctcccc agctgtgtgc ccccaggctc cctataacat gtacccacag 2220
aaccctgacc atgtactcga tcaggatgga gaattcgacc tggatgagac catggatgtg 2280
gccaggcacg tggaggaact cttacgccga ccaatggaca gtcttgactc ccgcctctcg 2340
ccccctgccg gtcttttcac ctctgccaga ggctccctct ca 2382
<210> 95
<211> 794
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 组成型激活的-STAT5A
<220>
<223> 组成型激活的-STAT5A
<400> 95
Met Ala Gly Trp Ile Gln Ala Gln Gln Leu Gln Gly Asp Ala Leu Arg
1 5 10 15
Gln Met Gln Val Leu Tyr Gly Gln His Phe Pro Ile Glu Val Arg His
20 25 30
Tyr Leu Ala Gln Trp Ile Glu Ser Gln Pro Trp Asp Ala Ile Asp Leu
35 40 45
Asp Asn Pro Gln Asp Arg Ala Gln Ala Thr Gln Leu Leu Glu Gly Leu
50 55 60
Val Gln Glu Leu Gln Lys Lys Ala Glu His Gln Val Gly Glu Asp Gly
65 70 75 80
Phe Leu Leu Lys Ile Lys Leu Gly His Tyr Ala Thr Gln Leu Gln Lys
85 90 95
Thr Tyr Asp Arg Cys Pro Leu Glu Leu Val Arg Cys Ile Arg His Ile
100 105 110
Leu Tyr Asn Glu Gln Arg Leu Val Arg Glu Ala Asn Asn Cys Ser Ser
115 120 125
Pro Ala Gly Ile Leu Val Asp Ala Met Ser Gln Lys His Leu Gln Ile
130 135 140
Asn Gln Thr Phe Glu Glu Leu Arg Leu Val Thr Gln Asp Thr Glu Asn
145 150 155 160
Glu Leu Lys Lys Leu Gln Gln Thr Gln Glu Tyr Phe Ile Ile Gln Tyr
165 170 175
Gln Glu Ser Leu Arg Ile Gln Ala Gln Phe Ala Gln Leu Ala Gln Leu
180 185 190
Ser Pro Gln Glu Arg Leu Ser Arg Glu Thr Ala Leu Gln Gln Lys Gln
195 200 205
Val Ser Leu Glu Ala Trp Leu Gln Arg Glu Ala Gln Thr Leu Gln Gln
210 215 220
Tyr Arg Val Glu Leu Ala Glu Lys His Gln Lys Thr Leu Gln Leu Leu
225 230 235 240
Arg Lys Gln Gln Thr Ile Ile Leu Asp Asp Glu Leu Ile Gln Trp Lys
245 250 255
Arg Arg Gln Gln Leu Ala Gly Asn Gly Gly Pro Pro Glu Gly Ser Leu
260 265 270
Asp Val Leu Gln Ser Trp Cys Glu Lys Leu Ala Glu Ile Ile Trp Gln
275 280 285
Asn Arg Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Arg Leu Cys Gln Gln Leu Pro
290 295 300
Ile Pro Gly Pro Val Glu Glu Met Leu Ala Glu Val Asn Ala Thr Ile
305 310 315 320
Thr Asp Ile Ile Ser Ala Leu Val Thr Ser Thr Phe Ile Ile Glu Lys
325 330 335
Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys Phe Ala Ala Thr Val
340 345 350
Arg Leu Leu Val Gly Gly Lys Leu Asn Val His Met Asn Pro Pro Gln
355 360 365
Val Lys Ala Thr Ile Ile Ser Glu Gln Gln Ala Lys Ser Leu Leu Lys
370 375 380
Asn Glu Asn Thr Arg Asn Glu Cys Ser Gly Glu Ile Leu Asn Asn Cys
385 390 395 400
Cys Val Met Glu Tyr His Gln Ala Thr Gly Thr Leu Ser Ala His Phe
405 410 415
Arg Asn Met Ser Leu Lys Arg Ile Lys Arg Ala Asp Arg Arg Gly Ala
420 425 430
Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Phe Thr Val Leu Phe Glu Ser Gln Phe
435 440 445
Ser Val Gly Ser Asn Glu Leu Val Phe Gln Val Lys Thr Leu Ser Leu
450 455 460
Pro Val Val Val Ile Val His Gly Ser Gln Asp His Asn Ala Thr Ala
465 470 475 480
Thr Val Leu Trp Asp Asn Ala Phe Ala Glu Pro Gly Arg Val Pro Phe
485 490 495
Ala Val Pro Asp Lys Val Leu Trp Pro Gln Leu Cys Glu Ala Leu Asn
500 505 510
Met Lys Phe Lys Ala Glu Val Gln Ser Asn Arg Gly Leu Thr Lys Glu
515 520 525
Asn Leu Val Phe Leu Ala Gln Lys Leu Phe Asn Asn Ser Ser Ser His
530 535 540
Leu Glu Asp Tyr Ser Gly Leu Ser Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Arg
545 550 555 560
Glu Asn Leu Pro Gly Trp Asn Tyr Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly
565 570 575
Val Met Glu Val Leu Lys Lys His His Lys Pro His Trp Asn Asp Gly
580 585 590
Ala Ile Leu Gly Phe Val Asn Lys Gln Gln Ala His Asp Leu Leu Ile
595 600 605
Asn Lys Pro Asp Gly Thr Phe Leu Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile
610 615 620
Gly Gly Ile Thr Ile Ala Trp Lys Phe Asp Ser Pro Glu Arg Asn Leu
625 630 635 640
Trp Asn Leu Lys Pro Phe Thr Thr Arg Asp Phe Ser Ile Arg Ser Leu
645 650 655
Ala Asp Arg Leu Gly Asp Leu Ser Tyr Leu Ile Tyr Val Phe Pro Asp
660 665 670
Arg Pro Lys Asp Glu Val Phe Ser Lys Tyr Tyr Thr Pro Val Leu Ala
675 680 685
Lys Ala Val Asp Gly Tyr Val Lys Pro Gln Ile Lys Gln Val Val Pro
690 695 700
Glu Phe Val Asn Ala Phe Ala Asp Ala Gly Gly Ser Ser Ala Thr Tyr
705 710 715 720
Met Asp Gln Ala Pro Ser Pro Ala Val Cys Pro Gln Ala Pro Tyr Asn
725 730 735
Met Tyr Pro Gln Asn Pro Asp His Val Leu Asp Gln Asp Gly Glu Phe
740 745 750
Asp Leu Asp Glu Thr Met Asp Val Ala Arg His Val Glu Glu Leu Leu
755 760 765
Arg Arg Pro Met Asp Ser Leu Asp Ser Arg Leu Ser Pro Pro Ala Gly
770 775 780
Leu Phe Thr Ser Ala Arg Gly Ser Leu Ser
785 790
<210> 96
<211> 837
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 显性阴性TGFB-RII
<400> 96
atgggtcggg ggctgctcag gggcctgtgg ccgctgcaca tcgtcctgtg gacgcgtatc 60
gccagcacga tcccaccgca cgttcagaag tcggttaata acgacatgat agtcactgac 120
aacaacggtg cagtcaagtt tccacaactg tgtaaatttt gtgatgtgag attttccacc 180
tgtgacaacc agaaatcctg catgagcaac tgcagcatca cctccatctg tgagaagcca 240
caggaagtct gtgtggctgt atggagaaag aatgacgaga acataacact agagacagtt 300
tgccatgacc ccaagctccc ctaccatgac tttattctgg aagatgctgc ttctccaaag 360
tgcattatga aggaaaaaaa aaagcctggt gagactttct tcatgtgttc ctgtagctct 420
gatgagtgca atgacaacat catcttctca gaagaatata acaccagcaa tcctgacttg 480
ttgctagtca tatttcaagt gacaggcatc agcctcctgc caccactggg agttgccata 540
tctgtcatca tcatcttcta ctgctaccgc gttaaccggc agcagaagct gagttcaacc 600
tgggaaaccg gcaagacgcg gaagctcatg gagttcagcg agcactgtgc catcatcctg 660
gaagatgacc gctctgacat cagctccacg tgtgccaaca acatcaacca caacacagag 720
ctgctgccca ttgagctgga caccctggtg gggaaaggtc gctttgctga ggtctataag 780
gccaagctga agcagaacac ttcagagcag tttgagacag tggcagtcaa gatcttt 837
<210> 97
<211> 279
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 显性阴性TGFBRII
<400> 97
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
20 25 30
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
115 120 125
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
130 135 140
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu
145 150 155 160
Leu Leu Val Ile Phe Gln Val Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu
165 170 175
Gly Val Ala Ile Ser Val Ile Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn
180 185 190
Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys
195 200 205
Leu Met Glu Phe Ser Glu His Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg
210 215 220
Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu
225 230 235 240
Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala
245 250 255
Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu
260 265 270
Thr Val Ala Val Lys Ile Phe
275
<210> 98
<211> 1788
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 显性阴性SHP1
<400> 98
atggtgaggt ggtttcaccg agacctcagt gggctggatg cagagaccct gctcaagggc 60
cgaggtgtcc acggtagctt cctggctcgg cccagtcgca agaaccaggg tgacttctcg 120
ctctccgtca gggtggggga tcaggtgacc catattcgga tccagaactc aggggatttc 180
tatgacctgt atggagggga gaagtttgcg actctgacag agctggtgga gtactacact 240
cagcagcagg gtgtcctgca ggaccgcgac ggcaccatca tccacctcaa gtacccgctg 300
aactgctccg atcccactag tgagaggtgg taccatggcc acatgtctgg cgggcaggca 360
gagacgctgc tgcaggccaa gggcgagccc tggacgtttc ttgtgcgtga gagcctcagc 420
cagcctggag acttcgtgct ttctgtgctc agtgaccagc ccaaggctgg cccaggctcc 480
ccgctcaggg tcacccacat caaggtcatg tgcgagggtg gacgctacac agtgggtggt 540
ttggagacct tcgacagcct cacggacctg gtggagcatt tcaagaagac ggggattgag 600
gaggcctcag gcgcctttgt ctacctgcgg cagccgtact atgccacgag ggtgaatgcg 660
gctgacattg agaaccgagt gttggaactg aacaagaagc aggagtccga ggatacagcc 720
aaggctggct tctgggagga gtttgagagt ttgcagaagc aggaggtgaa gaacttgcac 780
cagcgtctgg aagggcagcg gccagagaac aagggcaaga accgctacaa gaacattctc 840
ccctttgacc acagccgagt gatcctgcag ggacgggaca gtaacatccc cgggtccgac 900
tacatcaatg ccaactacat caagaaccag ctgctaggcc ctgatgagaa cgctaagacc 960
tacatcgcca gccagggctg tctggaggcc acggtcaatg acttctggca gatggcgtgg 1020
caggagaaca gccgtgtcat cgtcatgacc acccgagagg tggagaaagg ccggaacaaa 1080
tgcgtcccat actggcccga ggtgggcatg cagcgtgctt atgggcccta ctctgtgacc 1140
aactgcgggg agcatgacac aaccgaatac aaactccgta ccttacaggt ctccccgctg 1200
gacaatggag acctgattcg ggagatctgg cattaccagt acctgagctg gcccgaccat 1260
ggggtcccca gtgagcctgg gggtgtcctc agcttcctgg accagatcaa ccagcggcag 1320
gaaagtctgc ctcacgcagg gcccatcatc gtgcactcca gcgccggcat cggccgcaca 1380
ggcaccatca ttgtcatcga catgctcatg gagaacatct ccaccaaggg cctggactgt 1440
gacattgaca tccagaagac catccagatg gtgcgggcgc agcgctcggg catggtgcag 1500
acggaggcgc agtacaagtt catctacgtg gccatcgccc agttcattga aaccactaag 1560
aagaagctgg aggtcctgca gtcgcagaag ggccaggagt cggagtacgg gaacatcacc 1620
tatcccccag ccatgaagaa tgcccatgcc aaggcctccc gcacctcgtc caaacacaag 1680
gaggatgtgt atgagaacct gcacactaag aacaagaggg aggagaaagt gaagaagcag 1740
cggtcagcag acaaggagaa gagcaagggt tccctcaaga ggaagtga 1788
<210> 99
<211> 595
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 显性阴性SHP1
<400> 99
Met Val Arg Trp Phe His Arg Asp Leu Ser Gly Leu Asp Ala Glu Thr
1 5 10 15
Leu Leu Lys Gly Arg Gly Val His Gly Ser Phe Leu Ala Arg Pro Ser
20 25 30
Arg Lys Asn Gln Gly Asp Phe Ser Leu Ser Val Arg Val Gly Asp Gln
35 40 45
Val Thr His Ile Arg Ile Gln Asn Ser Gly Asp Phe Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Gly Gly Glu Lys Phe Ala Thr Leu Thr Glu Leu Val Glu Tyr Tyr Thr
65 70 75 80
Gln Gln Gln Gly Val Leu Gln Asp Arg Asp Gly Thr Ile Ile His Leu
85 90 95
Lys Tyr Pro Leu Asn Cys Ser Asp Pro Thr Ser Glu Arg Trp Tyr His
100 105 110
Gly His Met Ser Gly Gly Gln Ala Glu Thr Leu Leu Gln Ala Lys Gly
115 120 125
Glu Pro Trp Thr Phe Leu Val Arg Glu Ser Leu Ser Gln Pro Gly Asp
130 135 140
Phe Val Leu Ser Val Leu Ser Asp Gln Pro Lys Ala Gly Pro Gly Ser
145 150 155 160
Pro Leu Arg Val Thr His Ile Lys Val Met Cys Glu Gly Gly Arg Tyr
165 170 175
Thr Val Gly Gly Leu Glu Thr Phe Asp Ser Leu Thr Asp Leu Val Glu
180 185 190
His Phe Lys Lys Thr Gly Ile Glu Glu Ala Ser Gly Ala Phe Val Tyr
195 200 205
Leu Arg Gln Pro Tyr Tyr Ala Thr Arg Val Asn Ala Ala Asp Ile Glu
210 215 220
Asn Arg Val Leu Glu Leu Asn Lys Lys Gln Glu Ser Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Lys Ala Gly Phe Trp Glu Glu Phe Glu Ser Leu Gln Lys Gln Glu Val
245 250 255
Lys Asn Leu His Gln Arg Leu Glu Gly Gln Arg Pro Glu Asn Lys Gly
260 265 270
Lys Asn Arg Tyr Lys Asn Ile Leu Pro Phe Asp His Ser Arg Val Ile
275 280 285
Leu Gln Gly Arg Asp Ser Asn Ile Pro Gly Ser Asp Tyr Ile Asn Ala
290 295 300
Asn Tyr Ile Lys Asn Gln Leu Leu Gly Pro Asp Glu Asn Ala Lys Thr
305 310 315 320
Tyr Ile Ala Ser Gln Gly Cys Leu Glu Ala Thr Val Asn Asp Phe Trp
325 330 335
Gln Met Ala Trp Gln Glu Asn Ser Arg Val Ile Val Met Thr Thr Arg
340 345 350
Glu Val Glu Lys Gly Arg Asn Lys Cys Val Pro Tyr Trp Pro Glu Val
355 360 365
Gly Met Gln Arg Ala Tyr Gly Pro Tyr Ser Val Thr Asn Cys Gly Glu
370 375 380
His Asp Thr Thr Glu Tyr Lys Leu Arg Thr Leu Gln Val Ser Pro Leu
385 390 395 400
Asp Asn Gly Asp Leu Ile Arg Glu Ile Trp His Tyr Gln Tyr Leu Ser
405 410 415
Trp Pro Asp His Gly Val Pro Ser Glu Pro Gly Gly Val Leu Ser Phe
420 425 430
Leu Asp Gln Ile Asn Gln Arg Gln Glu Ser Leu Pro His Ala Gly Pro
435 440 445
Ile Ile Val His Ser Ser Ala Gly Ile Gly Arg Thr Gly Thr Ile Ile
450 455 460
Val Ile Asp Met Leu Met Glu Asn Ile Ser Thr Lys Gly Leu Asp Cys
465 470 475 480
Asp Ile Asp Ile Gln Lys Thr Ile Gln Met Val Arg Ala Gln Arg Ser
485 490 495
Gly Met Val Gln Thr Glu Ala Gln Tyr Lys Phe Ile Tyr Val Ala Ile
500 505 510
Ala Gln Phe Ile Glu Thr Thr Lys Lys Lys Leu Glu Val Leu Gln Ser
515 520 525
Gln Lys Gly Gln Glu Ser Glu Tyr Gly Asn Ile Thr Tyr Pro Pro Ala
530 535 540
Met Lys Asn Ala His Ala Lys Ala Ser Arg Thr Ser Ser Lys His Lys
545 550 555 560
Glu Asp Val Tyr Glu Asn Leu His Thr Lys Asn Lys Arg Glu Glu Lys
565 570 575
Val Lys Lys Gln Arg Ser Ala Asp Lys Glu Lys Ser Lys Gly Ser Leu
580 585 590
Lys Arg Lys
595
<210> 100
<211> 1035
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> PD1TM-MYD88
<400> 100
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccaggcg gaggagtggg agtcgtgggc ggactgctgg gatctctggt gctgctcgtg 120
tgggtgctgg ccgtgattgg cggaggaatg gctgctggcg gacctggcgc tggatctgct 180
gctcctgtgt ctagcaccag cagcctgcct ctggccgccc tgaatatgag agtgcggcgg 240
agactgagcc tgttcctgaa cgtgcggaca caggtggccg ccgattggac agctctggcc 300
gaggaaatgg acttcgagta cctggaaatc cggcagctgg aaacccaggc cgaccctaca 360
ggacgcctgc tggatgcttg gcagggcaga ccaggcgctt ctgtggggag actgctggaa 420
ctgctgacca agctgggccg ggacgacgtg ctgctggaac tgggccctag catcgaagag 480
gactgccaga agtacatcct gaagcagcag caggaagagg ccgagaagcc tctgcaggtg 540
gcagccgtgg atagcagcgt gccaagaaca gctgagctgg ccggaatcac caccctggac 600
gatcctctgg gccacatgcc cgagagattc gacgccttca tctgctactg ccccagcgac 660
atccagttcg tgcaggaaat gatcagacag ctggaacaga ccaactaccg gctgaagctg 720
tgcgtgtccg accgggatgt gctgcctggc acctgtgtgt ggtctatcgc cagcgagctg 780
atcgagaagc ggtgcagacg gatggtcgtg gtggtgtccg acgactacct gcagtccaaa 840
gagtgcgact tccagaccaa gttcgccctg agcctgagcc ctggcgccca ccagaagaga 900
ctgatcccca tcaagtacaa ggccatgaag aaagagttcc ccagcatcct gcggttcatc 960
accgtgtgcg actacaccaa cccctgcacc aagtcctggt tctggaccag actggccaag 1020
gccctgtctc tgcct 1035
<210> 101
<211> 345
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD1TM-MYD88
<400> 101
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Gly Gly Val Gly Val Val Gly Gly Leu
20 25 30
Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Gly Gly
35 40 45
Gly Met Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Ala Ala Pro Val Ser
50 55 60
Ser Thr Ser Ser Leu Pro Leu Ala Ala Leu Asn Met Arg Val Arg Arg
65 70 75 80
Arg Leu Ser Leu Phe Leu Asn Val Arg Thr Gln Val Ala Ala Asp Trp
85 90 95
Thr Ala Leu Ala Glu Glu Met Asp Phe Glu Tyr Leu Glu Ile Arg Gln
100 105 110
Leu Glu Thr Gln Ala Asp Pro Thr Gly Arg Leu Leu Asp Ala Trp Gln
115 120 125
Gly Arg Pro Gly Ala Ser Val Gly Arg Leu Leu Glu Leu Leu Thr Lys
130 135 140
Leu Gly Arg Asp Asp Val Leu Leu Glu Leu Gly Pro Ser Ile Glu Glu
145 150 155 160
Asp Cys Gln Lys Tyr Ile Leu Lys Gln Gln Gln Glu Glu Ala Glu Lys
165 170 175
Pro Leu Gln Val Ala Ala Val Asp Ser Ser Val Pro Arg Thr Ala Glu
180 185 190
Leu Ala Gly Ile Thr Thr Leu Asp Asp Pro Leu Gly His Met Pro Glu
195 200 205
Arg Phe Asp Ala Phe Ile Cys Tyr Cys Pro Ser Asp Ile Gln Phe Val
210 215 220
Gln Glu Met Ile Arg Gln Leu Glu Gln Thr Asn Tyr Arg Leu Lys Leu
225 230 235 240
Cys Val Ser Asp Arg Asp Val Leu Pro Gly Thr Cys Val Trp Ser Ile
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Glu Lys Arg Cys Arg Arg Met Val Val Val Val
260 265 270
Ser Asp Asp Tyr Leu Gln Ser Lys Glu Cys Asp Phe Gln Thr Lys Phe
275 280 285
Ala Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala His Gln Lys Arg Leu Ile Pro Ile
290 295 300
Lys Tyr Lys Ala Met Lys Lys Glu Phe Pro Ser Ile Leu Arg Phe Ile
305 310 315 320
Thr Val Cys Asp Tyr Thr Asn Pro Cys Thr Lys Ser Trp Phe Trp Thr
325 330 335
Arg Leu Ala Lys Ala Leu Ser Leu Pro
340 345
<210> 102
<211> 36
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IGG4铰链
<400> 102
gagagcaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 103
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IGG4铰链
<400> 103
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 104
<211> 330
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IGG4-CH2(L235D, N297Q)
<400> 104
gcccccgagt tcgacggcgg acccagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc 60
ctgatgatca gccggacccc cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagat 120
cccgaggtcc agttcaattg gtacgtggac ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag 180
cccagagagg aacagttcca gagcacctac cgggtggtgt ctgtgctgac cgtgctgcac 240
caggactggc tgaacggcaa agaatacaag tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc 300
agcatcgaaa agaccatcag caaggccaag 330
<210> 105
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IGG4-CH2(L235D, N297Q)
<400> 105
Ala Pro Glu Phe Asp Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 106
<211> 321
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> IGG4-CH3
<400> 106
ggccagcctc gcgagcccca ggtgtacacc ctgcctccct cccaggaaga gatgaccaag 60
aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 120
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca cccctcccgt gctggacagc 180
gacggcagct tcttcctgta cagccggctg accgtggaca agagccggtg gcaggaaggc 240
aacgtcttta gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagagc 300
ctgagcctgt ccctgggcaa g 321
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IGG4-CH3
<400> 107
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 108
<211> 225
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD8铰链/跨膜结构域
<400> 108
gaatctaagt acggaccggc caagcctacc accacccctg cccctagacc tccaacaccc 60
gccccaacaa tcgccagcca gcctctgtct ctgaggcccg aggcttgtag accagctgct 120
ggcggagccg tgcacaccag aggactggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct 180
ctggccggca catgtggcgt gctgctgctg agcctcgtga tcacc 225
<210> 109
<211> 75
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD8铰链/跨膜结构域
<400> 109
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
1 5 10 15
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
20 25 30
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
35 40 45
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
50 55 60
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
65 70 75
<210> 110
<211> 84
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 110
atgttctggg tgctggtggt ggtcggaggc gtgctggcct gctacagcct gctggtcacc 60
gtggccttca tcatcttttg ggtg 84
<210> 111
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 111
Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 112
<211> 225
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD8铰链/跨膜结构域
<400> 112
gaatctaagt acggaccggc caagcctacc accacccctg cccctagacc tccaacaccc 60
gccccaacaa tcgccagcca gcctctgtct ctgaggcccg aggcttgtag accagctgct 120
ggcggagccg tgcacaccag aggactggat ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct 180
ctggccggca catgtggcgt gctgctgctg agcctcgtga tcacc 225
<210> 113
<211> 75
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD8铰链/跨膜结构域
<400> 113
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
1 5 10 15
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
20 25 30
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
35 40 45
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
50 55 60
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
65 70 75
<210> 114
<211> 336
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD3 Zeta
<400> 114
cgggtgaagt tcagcagaag cgccgacgcc cctgcctacc agcagggcca gaatcagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg cagaagggaa gagtacgacg tcctggataa gcggagaggc 120
cgggaccctg agatgggcgg caagcctcgg cggaagaacc cccaggaagg cctgtataac 180
gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 240
aggcggggca agggccacga cggcctgtat cagggcctgt ccaccgccac caaggatacc 300
tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc ccaagg 336
<210> 115
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD3 Zeta
<400> 115
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 116
<211> 126
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 4-1BB
<400> 116
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 117
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4-1BB
<400> 117
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 118
<211> 123
<212> DNA
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> CD28细胞质结构域
<400> 118
cgcagcaagc ggagcagagg cggccacagc gactacatga acatgacccc tagacggcct 60
ggccccacca gaaagcacta ccagccctac gcccctcccc gggactttgc cgcctacaga 120
agc 123
<210> 119
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD28细胞质结构域
<400> 119
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 120
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> DNA间隔区
<400> 120
gctagcgttt aaacttaagc ttggtaccga gctcggatcc gccacc 46
<210> 121
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HEA3(p65/S536E/K310Q)氨基酸序列变异体
<400> 121
Met Val Ser Lys Leu Ser Gln Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ser Gly Leu Ser Lys Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Ala Gly Glu Gly Pro Leu Asp Lys Gly Glu
35 40 45
Ser Cys Gly Gly Gly Arg Gly Glu Leu Ala Glu Leu Pro Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Glu Thr Arg Gly Ser Glu Asp Glu Thr Asp Asp Asp Gly Glu Asp
65 70 75 80
Phe Thr Pro Pro Ile Leu Lys Glu Leu Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu
85 90 95
Ala Ala His Gln Lys Ala Val Val Glu Thr Leu Leu Gln Glu Asp Pro
100 105 110
Trp Arg Val Ala Lys Met Val Lys Ser Tyr Leu Gln Gln His Asn Ile
115 120 125
Pro Gln Arg Glu Val Val Asp Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ser His Leu
130 135 140
Ser Gln His Leu Asn Lys Gly Thr Pro Met Lys Thr Gln Lys Arg Ala
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Thr Trp Tyr Val Arg Lys Gln Arg Glu Val Ala Gln Gln
165 170 175
Phe Thr His Ala Gly Gln Gly Gly Leu Ile Glu Glu Pro Thr Gly Asp
180 185 190
Glu Leu Pro Thr Lys Lys Gly Arg Arg Asn Arg Phe Lys Trp Gly Pro
195 200 205
Ala Ser Gln Gln Ile Leu Phe Gln Ala Tyr Glu Arg Gln Lys Asn Pro
210 215 220
Ser Lys Glu Glu Arg Glu Thr Leu Val Glu Glu Cys Asn Arg Ala Glu
225 230 235 240
Cys Ile Gln Arg Gly Val Ser Pro Ser Gln Ala Gln Gly Leu Gly Ser
245 250 255
Asn Leu Val Thr Glu Val Arg Val Tyr Asn Trp Phe Ala Asn Arg Arg
260 265 270
Lys Glu Glu Ala Phe Arg His Lys Leu Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala
275 280 285
Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn
290 295 300
Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu
305 310 315 320
Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro
325 330 335
Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg
340 345 350
Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val
355 360 365
Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Leu
370 375 380
Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Gly
385 390 395 400
Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys
405 410 415
Cys Val Glu Gly Met Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser
420 425 430
Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu
435 440 445
Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser
450 455 460
Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp
465 470 475 480
Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr
485 490 495
Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser
500 505 510
His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Arg Met Glu His Leu Tyr Ser Met
515 520 525
Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Met Leu
530 535 540
Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val
545 550 555 560
Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser
565 570 575
His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro
580 585 590
Ala Thr Val Glu Phe Gln Tyr Leu Pro Asp Thr Asp Asp Arg His Arg
595 600 605
Ile Glu Glu Lys Arg Lys Arg Thr Tyr Glu Thr Phe Gln Ser Ile Met
610 615 620
Lys Lys Ser Pro Phe Ser Gly Pro Thr Asp Pro Arg Pro Pro Pro Arg
625 630 635 640
Arg Ile Ala Val Pro Ser Arg Ser Ser Ala Ser Val Pro Lys Pro Ala
645 650 655
Pro Gln Pro Tyr Pro Phe Thr Ser Ser Leu Ser Thr Ile Asn Tyr Asp
660 665 670
Glu Phe Pro Thr Met Val Phe Pro Ser Gly Gln Ile Ser Gln Ala Ser
675 680 685
Ala Leu Ala Pro Ala Pro Pro Gln Val Leu Pro Gln Ala Pro Ala Pro
690 695 700
Ala Pro Ala Pro Ala Met Val Ser Ala Leu Ala Gln Ala Pro Ala Pro
705 710 715 720
Val Pro Val Leu Ala Pro Gly Pro Pro Gln Ala Val Ala Pro Pro Ala
725 730 735
Pro Lys Pro Thr Gln Ala Gly Glu Gly Thr Leu Ser Glu Ala Leu Leu
740 745 750
Gln Leu Gln Phe Asp Asp Glu Asp Leu Gly Ala Leu Leu Gly Asn Ser
755 760 765
Thr Asp Pro Ala Val Phe Thr Asp Leu Ala Ser Val Asp Asn Ser Glu
770 775 780
Phe Gln Gln Leu Leu Asn Gln Gly Ile Pro Val Ala Pro His Thr Thr
785 790 795 800
Glu Pro Met Leu Met Glu Tyr Pro Glu Ala Ile Thr Arg Leu Val Thr
805 810 815
Gly Ala Gln Arg Pro Pro Asp Pro Ala Pro Ala Pro Leu Gly Ala Pro
820 825 830
Gly Leu Pro Asn Gly Leu Leu Ser Gly Asp Glu Asp Phe Glu Ser Ile
835 840 845
Ala Asp Met Asp Phe Ser Ala Leu Leu Ser Gln Ile Ser Ser
850 855 860
<210> 122
<211> 2586
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HEA3(p65/S536E/K310Q)变异体核苷酸序列
<400> 122
atggtgtcca agctgtccca gctgcagaca gaactgctgg cagcactgct ggaaagcggc 60
ctgagcaaag aggccctgat tcaggcactc ggcgaacctg gaccttatct gctcgctggc 120
gaaggccctc tggataaggg cgagagctgt ggcggaggaa gaggagagct ggccgagctg 180
cctaacggcc tgggcgagac aagaggcagc gaggacgaga cagacgacga cggcgaggac 240
ttcacccccc ccatcctgaa agagctggaa aacctgagcc ccgaggaagc cgcccaccag 300
aaagccgtgg tggagacact gctgcaggaa gatccctggc gggtcgccaa gatggtcaag 360
agctacctgc agcagcacaa catcccccag cgggaggtgg tggacaccac cggcctgaac 420
cagagccacc tgagccagca cctgaacaag ggcaccccca tgaaaaccca gaagagagcc 480
gccctgtaca cttggtacgt gcggaagcag agagaggtgg cccagcagtt tacacacgcc 540
ggccagggcg gcctgatcga ggaacctacc ggcgacgagc tgcccaccaa gaagggcaga 600
cggaaccggt ttaagtgggg ccctgcatct cagcagatcc tgttccaggc ctacgagcgg 660
cagaagaacc ccagcaaaga ggaacgggag acactggtgg aagagtgcaa ccgggccgag 720
tgcatccaga gaggcgtgag cccttctcag gctcagggcc tcggcagcaa tctggtcacc 780
gaagtgcggg tgtacaattg gttcgccaac cggcggaaag aggaagcctt ccggcacaag 840
ctgtctgctg gcgatatgag agccgccaac ctgtggccca gccccctgat gatcaagcgg 900
agcaagaaga acagcctggc cctgagcctg accgccgatc agatggtgtc cgctctgctg 960
gacgccgagc cccctatcct gtacagcgag tacgacccca ccagaccctt cagcgaggcc 1020
agcatgatgg gcctgctgac caacctggcc gaccgggagc tggtgcacat gatcaactgg 1080
gccaagcggg tgcccggctt cgtggacctg accctgcacg accaggtcca cctgctggaa 1140
tgtgcctggc tggaaatcct gatgatcggc ctcgtgtgga gaagcatgga acaccccggc 1200
aagctgctgt tcgcccccaa cctgctcctg gaccggaacc agggaaagtg cgtggagggc 1260
atggtggaga tcttcgacat gctgctggcc acctccagcc ggttccggat gatgaacctg 1320
cagggcgagg aattcgtgtg cctgaagtcc atcatcctgc tgaacagcgg cgtgtacacc 1380
ttcctgtcat ccaccctgaa gtccctggaa gagaaggacc acatccaccg ggtgctggac 1440
aagatcaccg acaccctgat ccacctgatg gccaaggctg gcctgacact ccagcagcag 1500
caccagagac tggcccagct gctgctgatc ctgagccaca tccggcacat gagcaacaag 1560
cggatggaac acctgtacag catgaagtgc aagaacgtgg tgcccctgta cgacctgctg 1620
ctcgagatgc tggatgccca cagactgcac gcccctacaa gcagaggcgg agccagcgtg 1680
gaggaaaccg accagtctca cctggccacc gccggcagca caagcagcca cagcctgcag 1740
aagtactaca tcaccggcga ggccgaggga ttccctgcca ccgtggagtt ccagtacctg 1800
cccgacaccg acgaccggca ccggatcgag gaaaagcgga agcggaccta cgagacattc 1860
cagagcatca tgaagaagtc ccccttcagc ggccccaccg atcccagacc cccccctaga 1920
agaatcgccg tgcccagcag atctagcgcc agcgtgccca agcctgcccc ccagccctac 1980
cctttcacca gcagcctgag caccatcaac tacgacgagt tccctaccat ggtgttcccc 2040
agcggccaga tctctcaggc ctctgctctg gcacctgctc cacctcaggt gctgcctcag 2100
gcccctgctc cagccccagc ccctgccatg gtgtctgcac tggcccaggc tccagctcct 2160
gtgcctgtgc tggcccctgg acctcctcag gctgtggccc ctcctgcccc taaacctacc 2220
caggccgggg agggaacact gtctgaggcc ctgctgcagc tccagttcga cgacgaggat 2280
ctgggagcac tgctgggcaa tagcaccgac cccgccgtgt ttaccgacct ggcctccgtg 2340
gacaacagcg agttccagca gctcctcaac cagggcatcc ctgtcgcccc acacaccacc 2400
gagcccatgc tgatggaata ccccgaggcc atcaccagac tggtcacagg cgcccagagg 2460
cctccagatc cagcaccagc tccactggga gcccctggcc tgcctaatgg gctgctgtct 2520
ggcgacgagg acttcgagag cattgccgac atggacttca gcgccctgct gtcccagatc 2580
agcagc 2586
<210> 123
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 生存素氨基酸序列
<400> 123
Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp
1 5 10 15
His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala
20 25 30
Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr
35 40 45
Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu
50 55 60
Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His
65 70 75 80
Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu
85 90 95
Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys
100 105 110
Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Val
115 120 125
Lys Lys Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp
130 135 140
<210> 124
<211> 426
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 生存素核苷酸序列
<400> 124
atgggtgccc cgacgttgcc ccctgcctgg cagccctttc tcaaggacca ccgcatctct 60
acattcaaga actggccctt cttggagggc tgcgcctgca ccccggagcg gatggccgag 120
gctggcttca tccactgccc cactgagaac gagccagact tggcccagtg tttcttctgc 180
ttcaaggagc tggaaggctg ggagccagat gacgacccca tagaggaaca taaaaagcat 240
tcgtccggtt gcgctttcct ttctgtcaag aagcagtttg aagaattaac ccttggtgaa 300
tttttgaaac tggacagaga aagagccaag aacaaaattg caaaggaaac caacaataag 360
aagaaagaat ttgaggaaac tgtgaagaaa gtgcgccgtg ccatcgagca gctggctgca 420
atggat 426

Claims (47)

1.一种用于蛋白在细胞中的诱导表达的系统，该系统包含：
a）第一核酸，所述第一核酸包含由药剂诱导的第一启动子，并且其中所述第一启动子可操作地连接至编码所述蛋白的第一多核苷酸；
b）第二核酸，所述第二核酸包含第二启动子，所述第二启动子可操作地连接至编码用于所述第一启动子的转录激活剂的第二多核苷酸，其中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中任一个所示的氨基酸序列；以及
c）包含佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA）和离子霉素的刺激试剂；
其中，所述系统由比其中所述转录激活剂为HEA3的系统中的药剂量少的药剂量诱导，或者在所述药剂的给定浓度下，所述系统相比其中所述转录激活剂为HEA3的系统而言具有增强水平的所述蛋白的转录表达。
2.如权利要求1所述的系统，其中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：8-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中任一个所示的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的系统，其中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：8-SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：121中任一个所示的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的系统，其中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的系统，其中，所述转录激活剂包含SEQ ID NO：4-SEQ ID NO：7中任一个所示的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的系统，所述系统进一步包含激活刺激试剂，所述激活刺激试剂包含抗CD3抗体或抗CD28抗体；以及所述药剂。
7.如权利要求1所述的系统，其中，所述药剂选自于由以下所组成的组：三苯氧胺、4-羟基三苯氧胺、氟维司群和CMP8。
8.如权利要求1所述的系统，其中，在所述药剂的浓度小于10nM下诱导所述蛋白表达。
9.如权利要求1所述的系统，其中，所述第一启动子包含SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列。
10.如权利要求1所述的系统，其中，所述第二启动子为诱导型启动子。
11.如权利要求1所述的系统，其中，所述第二启动子为组成型启动子。
12.如权利要求11所述的系统，其中，所述第二启动子为EF1α启动子。
13.如权利要求1所述的系统，其中，所述第一启动子与所述第二启动子处于相反的方向。
14.如权利要求1所述的系统，其中，所述第一核酸进一步包含第一载体，并且所述第二核酸进一步包含第二载体。
15.如权利要求14所述的系统，其中，所述第一载体和第二载体包装在病毒载体中。
16.如权利要求15所述的系统，其中，所述病毒载体为腺相关病毒或慢病毒。
17.如权利要求1所述的系统，其中，所述第一核酸或所述第二核酸进一步包含编码选择标记的多核苷酸。
18.如权利要求17所述的系统，其中，所述选择标记包括选自于SEQ ID NO：31、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：37中任一个的氨基酸序列。
19.如权利要求17所述的系统，其中，所述选择标记赋予细胞药剂抗性。
20.如权利要求1所述的系统，其中，所述第一核酸进一步包含编码自剪切肽的多核苷酸。
21.如权利要求20所述的系统，其中，所述自剪切肽包括P2A肽、T2A肽、E2A肽或F2A肽。
22.如权利要求1所述的系统，其中，所述第一核酸进一步包含DNA间隔区，其中，所述DNA间隔区位于所述第一启动子和所述第一多核苷酸之间。
23.如权利要求1所述的系统，其中，所述蛋白选自于由以下蛋白所组成的组：
细胞因子、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体、调控凋亡的多肽、调节细胞外环境的多肽、和调节检查点信号转导的多肽。
24.如权利要求1所述的系统，其中，所述蛋白包含第一嵌合抗原受体，所述第一嵌合抗原受体包含：配体结合结构域、多肽间隔区、跨膜结构域和细胞内信号转导结构域。
25.如权利要求1所述的系统，其中，所述第二核酸进一步包含：
编码第二嵌合抗原受体的多核苷酸，所述第二嵌合抗原受体包含配体结合结构域、多肽间隔区、跨膜结构域和细胞内信号转导结构域。
26.如权利要求24所述的系统，其中，所述信号转导结构域包括CD28结构域、4-1BB结构域和/或CD3ζ结构域。
27.如权利要求24所述的系统，其中，所述配体结合结构域为抗体片段。
28.如权利要求24所述的系统，其中，所述配体结合结构域特异性结合选自于由以下配体所组成的组中的配体：CD19、CD20、CD22、CD23、CD123、CS-1、ROR1、CE7、EGFR、hB7H3、间皮素、c-Met、PSMA、Her2、GD-2、MAGE A3 TCR、EGFRvIII、EGFR、EphA2、IL13Ra2、L1CAM、oaGD2、B7H3、CD33、ROR-1、VAR2CSA、HIV包膜蛋白、HIV包膜蛋白复合物、丙型肝炎病毒NS3蛋白、HbcAg蛋白、HIV-1 GP120蛋白、和Epstein-Barr病毒早期抗原蛋白。
29.如权利要求24所述的系统，其中，所述多肽间隔区包含IgG4多肽、IgG4-CH2(L235D，N297Q)多肽或IgG4-CH3多肽。
30.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求1-29中任一项所述的系统。
31.如权利要求30所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为前体T细胞。
32.如权利要求31所述的宿主细胞，其中，所述前体T细胞为造血干细胞。
33.如权利要求30所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD8+ T细胞毒性淋巴细胞，所述CD8+ T细胞毒性淋巴细胞选自于由以下细胞所组成的组：初始CD8+ T细胞、中央记忆CD8+ T细胞、效应记忆CD8+ T细胞和本体CD8+ T细胞。
34.如权利要求30所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CD4+ T辅助淋巴细胞，所述CD4+ T辅助淋巴细胞选自于由以下细胞所组成的组：初始CD4+ T细胞、中央记忆CD4+ T细胞、效应记忆CD4+ T细胞和本体CD4+ T细胞。
35.一种组合物，所述组合物包含如权利要求30所述的宿主细胞，和药学上可接受的赋形剂。
36.一种用于制备宿主细胞的体外方法，所述方法包括：
a）提供如权利要求1-29中任一项所述的系统；
b）将所述第一核酸和所述第二核酸引入分离的T淋巴细胞群；以及
c）在体外对所述T淋巴细胞群进行扩增。
37.如权利要求36所述的方法，所述方法进一步包括：d）在存在抗CD3和/或抗CD28以及至少一种稳态细胞因子的情况下对所述T淋巴细胞群进行培养，直至所述T淋巴细胞群扩增充分以用作细胞输注。
38.如权利要求36所述的方法，其中，所述T淋巴细胞群包含前体T细胞。
39.如权利要求38所述的方法，其中，所述前体T细胞为造血干细胞。
40.如权利要求36所述的方法，其中，所述T淋巴细胞群包含CD8+ T细胞和/或CD4+ T细胞。
41.如权利要求30-34中任一项或多项所述的宿主细胞与由第一启动子诱导表达的药剂的组合在制造用于治疗癌症或病毒感染的药物中的用途。
42.如权利要求41所述的用途，其中，所述药剂选自于由以下所组成的组：三苯氧胺、4-羟基三苯氧胺、氟维司群和CMP8。
43.如权利要求42所述的用途，其中，以10mg/剂至20mg/剂的剂量给予三苯氧胺。
44.如权利要求42所述的用途，其中，以250mg/剂至500mg/剂的剂量给予氟维司群。
45.如权利要求42所述的用途，其中，以足以在血清中提供30nM至50nM的水平的剂量给予CMP8。
46.如权利要求41的用途，其中，所述癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。
47.如权利要求46的用途，其中，所述实体瘤选自于由乳腺癌、脑癌、肺癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌所组成的组。
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