KR20230137344A - 발현이 증가된 돌연변이 세포 내 도메인을 포함하는키메라 공동 자극 단백질 - Google Patents

발현이 증가된 돌연변이 세포 내 도메인을 포함하는키메라 공동 자극 단백질 Download PDF

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KR20230137344A
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윌리엄 에이 컴리
웬산 하오
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네오믹스 파마슈티컬즈 엘엘씨
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Abstract

본 출원은 선택적으로 세포 고유의 면역 체크포인트 억제 수용체 또는 면역 자극 수용체 또는 이의 일부와 조합된 기능적으로 최적화된 세포 내 공동 자극 도메인에 관한 것으로, 이는 인간 질환 및 장애를 치료하기 위한 입양 세포 요법에 사용될 수 있다.

Description

발현이 증가된 돌연변이 세포 내 도메인을 포함하는 키메라 공동 자극 단백질
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 3월 19일에 출원된 미국 가출원 제63/163,171호 및 2021년 1월 4일에 출원된 미국 가출원 제63/133,494호의 우선권 및 이익을 주장하며, 이들 각각의 내용은 이로써 그 전체가 참조로 포함된다.
배경
입양 세포 요법이 암 치료에 효능을 보이지만, 이러한 요법의 효과는 더 나은 확장과 지속성을 위해 T 세포의 유전 공학을 통해 더욱 향상될 수 있다. T 세포는 본격적인 활성화 및 지속적인 증식을 촉진하기 위해 항원 유발 TCR 신호전달과 함께 CD28 패밀리 및 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리의 기능적으로 중첩되지 않는 공동 자극 신호를 필요로 한다. 유전자 조작된 T 세포 치료제를 개발할 때, T 세포가 병리학적 항원과 결합할 때 국부적으로 활성화될 수 있는 키메라 T 세포 공동 자극 분자를 도입하여 치료 효능의 증가를 위해 T 세포 활성화를 강력하게 증가시킬 필요가 있다. 현재, CD28 패밀리 또는 TNFR 패밀리의 단백질로부터 하나의 공동 자극 신호전달 도메인을 포함하는 2세대 키메라 공동 자극 분자가 CAR T 세포 요법에 널리 채택되었다. 하나의 공동 자극 신호전달 도메인을 통합하는 키메라 항원 수용체(CAR: chimeric antigen receptor)는 활성화 및 공동 자극 신호를 통해 T 세포 기능을 증가시켜 항종양 효능 및 T 세포 지속성을 향상시킨다. T 세포가 확장할 수 있는 용량이 구조적 설계에 달려 있다는 점을 감안할 때, 현재의 2세대 공동 자극 단백질은 지속적인 종양 완화 유도에 최적이 아닐 수 있다. 따라서, CD28 패밀리 및 TNFR 패밀리 구성원으로부터의 2개의 공동 자극 신호전달 도메인을 결합하여 T 세포 치료 잠재력을 추가로 향상시키고, 공동 자극 분자의 두 패밀리의 중첩되지 않는 기능을 활용하는 3세대 키메라 분자를 개발하려는 노력이 필요하다. 또한, 이러한 3세대 키메라 공동 자극 분자는 항원에 의해 외인성으로 발현된 TCR이 활성화되는 동안 T 세포 활성화가 불충분한 공동 자극 신호로 인해 차선책으로 남아 있는 TCR T 요법에 통합될 수 있다. 그러나 기존의 재조합 DNA 전략은 종종 2개의 공동 자극 신호전달 도메인을 결합하는 키메라 단백질의 세포 표면 발현 감소로 인해 키메라 단백질의 기능적 잠재력 실현을 방해한다. 본 출원은 그러한 요구를 다룬다.
본 출원은 CD28 및 TNFR 패밀리로부터의 2개의 신호전달 도메인을 포함하고 강화된 T 세포 기능에 대해 종래에 보고된 것보다 상당히 개선된 수준으로 발현하는 3세대 키메라 T 세포 공동 자극 분자, 및 상기 공동 자극 분자를 제조하는 방법을 개시한다.
신규한 키메라 공동 자극 세포 내 도메인이 본원에 제공된다. 본원에서 제공되는 키메라 공동 자극 세포 내 도메인은 (a) CD28 패밀리 단백질의 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 제1 신호전달 도메인; 및 (b) 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD28 패밀리 단백질의 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 제1 신호전달 도메인은 CD28 단백질, ICOS 단백질 또는 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시 양태에서, 적어도 제2 신호전달 도메인은 CD137(4-1BB) 및 CD134(OX-40)로부터 선택되는 TNFR 패밀리 단백질의 세포 내 신호전달 도메인의 돌연변이체에 기반한다.
본원에서 제공되는 키메라 공동 자극 세포 내 도메인은 (a) CD28 단백질, ICOS 단백질 또는 이들의 조합의 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 제1 신호전달 도메인; 및 (b) 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인을 포함하는 적어도 제2 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인은 CD137 또는 CD134 세포 내 도메인의 막 근위 부분에서 하나 이상의 아미노산의 결실, 삽입 또는 치환을 포함한다. 이론에 결부되지 않고, 일부 실시 양태에서, 막 근위 부분의 하나 이상의 아미노산은 CD137 또는 CD134 단백질의 유비퀴틴화 및 분해에 관여하는 유비퀴틴화 부위일 수 있다.
또한, 혈액 및 고형 종양을 포함하는 인간 질환 및 장애를 치료하기 위해 개발된, 선택적으로 세포 고유 면역 체크포인트 억제 수용체 또는 면역 자극 수용체 또는 그의 일부와 조합된 신규 입양 세포 요법에 사용하기 위한 기능적으로 최적화된 세포 내 공동 자극 도메인이 본원에 개시된다. 또한, T 세포 수용체(TCR: T cell receptor), 예를 들어, 종양 관련 항원을 표적화하는 내인성 TCR 또는 친화력 강화 TCR이 본원에서 개시된다. 선택적으로, 세포 내 공동 자극 도메인은 표적 조직 또는 세포에 결합하도록 면역 세포의 이동을 지시하거나 PD-1 스위치 수용체(PD-1 기반 공동 자극 분자)와 같은 면역 세포의 활성화 및/또는 증식을 유도하여 PD-L1/PD-L2-발현 종양과 같은 종양에서 T 세포 기능을 증가시킬 수 있는 제2 성분(예를 들어, 세포 표면 수용체 또는 그의 일부)과 조합하여 사용된다. 또한, 자가면역 부작용을 최소화하고 증가된 종양 상 기능성을 제공하는 동시에 세포 고유 방식으로 PD-1 체크포인트 차단을 이용하는 요법이 본원에 개시된다. 본 출원은 본 출원의 기능적으로 최적화된 세포 내 공동 자극 도메인을 포함하는 T 세포 공수용체 또는 키메라 항원 수용체(CAR)에 기반한 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR: recombinant T cell co-stimulatory receptor)를 개시한다. 본 출원은 또한 기능적으로 최적화된 세포 내 공동 자극 도메인 및 PD-1 세포 외 도메인(즉, PD-1 스위치 수용체 또는 PD-1 기반 공동 자극 분자)을 포함하는 T 세포 공수용체를 개시한다. 본 출원은 또한 CD19 및 B 세포 성숙 Ag(BCMA) 결합 매개 T 세포 활성화, 증식 및 종양 살해를 촉진하는 기능적으로 최적화된 세포 내 공동 자극 도메인을 포함하는 CD19 및 BCMA 기반 CAR을 개시한다. 본 출원에 개시된 RTCR은 체크포인트 표적의 평가, 안전성 스크리닝, 및 임의의 TCR 또는 CAR과 본 출원의 기능적으로 최적화된 세포 내 공동 자극 도메인의 조합의 유효성을 평가하기 위한 전임상 동물 모델의 개발에 사용될 수 있다. 효과적인 TCR과 함께 추가적인 세포 고유 면역 체크포인트 억제제도 개발된다.
본 개시 내용은 (a) 세포 외 도메인; (b) 막 횡단 도메인; 및 (c) 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 세포 내 도메인을 포함하는, 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
본 개시 내용은 (a) 세포 외 도메인; (b) 막 횡단 도메인; 및 (c) 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 세포 내 도메인을 포함하는, 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인을 포함한다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 핵산 또는 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
본 개시 내용은 또한 (a) TCR을 코딩하는 내인성 서열의 변형으로 T 세포 수용체(TCR)의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 변형; 및 (b) 본원에 개시된 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 포함하는, 변형된 림프구(T 세포)를 제공한다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 변형된 T 세포를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산 또는 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 다수의 세포 집단을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 포함하는 세포 집단을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시 내용은 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 a) 본원에 개시된 다수의 1차 T 세포를 제공하는 단계; b) 본원에 개시된 RTCR, 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산, 또는 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 조성물을 제공하는 단계; 및 c) (b)의 조성물을 (a)의 다수의 1차 T 세포에 도입하여 다수의 변형된 T 세포 내에서 RTCR을 안정하게 발현하는 조건 하에서 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법은 내인성 T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열을 변형시키는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 변형은 내인성 TCR의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법은 내인성 서열을 변형시키는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 변형은 주요 조직적합성 복합체(MHC) I형(MHC-I)의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법은 d) 다수의 변형된 T 세포를 적합한 세포 배양 배지에서 유지하는 단계; 및 e) i) 다수의 변형된 T 세포를 적합한 세포 동결 배지에서 동결 보존하는 단계; 또는 ii) 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에게 투여하기 위해 다수의 변형된 T 세포를 준비하는 단계를 추가로 포함한다.
본 개시 내용은 또한 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산 또는 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 세포의 치료적 유효수, 본원에 개시된 변형된 T 세포 중 어느 하나의 치료적 유효수, 본원에 개시된 조성물 중 어느 하나의 치료적 유효량, 또는 본원에 개시된 방법에 의해 생산된 다수의 변형된 T 세포의 치료적 유효수를 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
본 개시 내용은 또한 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 공동 자극 세포 내 단백질(CIP: chimeric co-stimulatory intracellular protein)을 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다.
본 개시 내용은 또한 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 공동 자극 세포 내 단백질(CIP)을 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인을 포함한다.
명세서 전반에 걸쳐 용어 "포함하는", 또는 "포함한다" 또는 "포함하다"와 같은 변형은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소, 정수 또는 단계의 군의 포함을 의미하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소, 정수 또는 단계의 군의 배제를 의미하는 것은 아니라고 이해될 것이다.
명세서 전체에서 용어 "신호 도메인", "신호전달 도메인" 및 "신호 전달 도메인"은 문맥이 달리 지시하지 않는 한 상호교환적으로 사용된다.
본 개시 내용은 그의 상세한 설명과 함께 기술되었지만, 전술한 설명은 첨부된 청구 범위에 의해 정의되는 본 개시 내용의 범위를 예시하는 것이지 제한하지 않는 것으로 의도된다. 다른 측면, 장점, 및 변형은 하기 청구 범위 내에 있다.
본원에 언급된 특허 및 과학 문헌은 당업자가 이용할 수 있는 지식을 확립한다. 본원에 인용된 모든 미국 특허 및 공개 또는 미공개 미국 특허 출원은 참조로 포함된다. 본원에 인용된 모든 공개 외국 특허 및 특허 출원은 이로써 참조로 포함된다. 본원에 인용된 등록 번호로 표시된 Genbank 및 NCBI 제출물은 참조로 포함된다. 본원에 인용된 다른 모든 출판된 참고문헌, 문서, 원고 및 과학 문헌은 이로써 참조로 포함된다.
[도 1]은 본 출원의 T 세포 공동 자극 분자에 사용되는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원의 세포 내 꼬리의 정렬을 도시한다. 막 근위 다염기성 영역은 이탤릭체로 표시되어 있다. 잠재적인 PI3K 결합 부위는 굵은 체 및 밑줄 표시되어 있다. TRAF1/2 결합 모티프: 주 모티프 Px(Q/E)E 및 부 모티프 Px(Q/E)x는 밑줄로 표시되어 있다. 잠재적 유비퀴틴화 부위는 굵은 체로 표시되어 있다.
[도 2a-2b]는 2세대 및 3세대 공동 자극 분자의 모듈식 설계를 도시한다. [도 2a]는 신호 펩티드, 세포 외 도메인, 막 횡단 도메인, 및 세포 내 신호전달 도메인을 나타내는 공동 자극 분자의 모듈식 설계를 도시한다. [도 2b]는 제1 신호 전달 도메인: ICOS, CD28, 및 CD28 도메인의 일부가 삽입된 ICOS 세포 내 도메인의 구조 및 서열을 도시한다. 특정 결합 기능을 가진 ICOS 및 CD28 세포 내 도메인의 영역 및 알려진 결합 파트너가 표시되어 있다. 공동 자극 분자 및 세포 내 도메인의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 3]은 본 출원의 세포 외 이펙터 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인의 조합을 도시한다.
[도 4b-4b]는 다염기성 도메인 및 리신 잔기를 포함하는 4-1BB 신호전달 도메인의 N-말단 부분의 결실이 공동 자극 분자의 발현을 구조한다는 것을 도시한다. [도 4a]는 표시된 구축물로 렌티바이러스 형질도입 후 T 림프구의 표면 상의 인간 PD1 및 huEGFRt의 발현을 도시한다. [도 4b]는 표시된 바와 같이 야생형 또는 절단형 4-1BB 도메인 또는 OX-40 도메인을 포함하는 ICOS 또는 CD28 기반 키메라 세포 내 도메인을 갖는 상이한 공동 자극 분자를 발현하는 huEGFRt-발현 세포 상의 정규화된 PD1 표면 발현을 도시한다. 키메라 세포 내 도메인의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 5a-5d]는 야생형 또는 절단형 4-1BB 또는 OX-40 도메인을 포함하는 ICOS 기반 키메라 세포 내 도메인을 갖는 상이한 공동 자극 분자를 발현하는 T 세포의 사이토카인 생산 및 증식을 도시한다. [도 5a-5c]는 공동 자극 분자의 항체 매개 가교결합이 시험관 내에서 T 세포 사이토카인 생산을 증가시킨다는 것을 도시한다. IL-2(도 5a), TNF(도 5b) 및 IFNγ(도 5c)는 표시된 구축물로 형질도입된 T 세포를 플레이트-결합된 항-PD1[2 ㎍/mL] 및 표시된 양의 플레이트-결합된 항-CD3으로 18시간 자극 후 배양 상청액에서 비드 기반 다중 분석에 의해 측정되었다. x축은 상이한 공동 자극 분자를 나타내고 y축은 흡광도 단위(A.U.)로 표시되는 생산된 사이토카인의 양을 나타낸다. [도 5d]는 표시된 플레이트-결합된 항체로 96시간 동안 자극된 T 세포의 증식을 도시한다. 키메라 세포 내 도메인의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 6a-6c]는 공동 자극 분자의 PD-L1 결합이 시험관 내에서 T 세포 사이토카인 생산을 증가시킨다는 것을 도시한다. [도 6a]는 표시된 구축물로 형질도입된 T 세포의 18시간 자극 후 배양 상청액에서 비드 기반 다중 분석에 의해 측정된 IL-2(상부 패널), IFNγ(중간 패널) 및 TNF(하부 패널)를 도시한다. x축은 항-CD3 항체의 양(μg/ml)을 나타내고 y축은 대조군의 백분율로서 사이토카인 생산을 나타낸다. [도 6b-6c]는 각각 CD28 세포 내 도메인(도 6b, 상부, 중간 및 하부 패널) 및 ICOS 세포 내 도메인(도 6c, 상부, 중간 및 하부 패널)을 포함하는 표시된 공동 자극 분자로 형질도입되고 HLA-A2(좌측 패널) 또는 HLA-A2 및 PD-L1(우측 패널)을 발현하는 K562 세포의 존재 하에 표시된 농도의 가용성 항-CD3 항체로 자극된 T 세포에 의한 IL-2(상부 패널), IFNγ(중간 패널) 및 TNF(하부 패널) 생산을 도시한다. x축은 항-CD3 항체의 양(μg/ml)을 나타내고 y축은 대조군의 백분율로서 사이토카인 생산을 나타낸다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 7a-7c]는 공동 자극 분자의 PD-L1 결합이 시험관 내에서 T 세포 세포독성 및 증식을 증가시킨다는 것을 도시한다. 표시된 바와 같이 PD-1 구축물을 발현하는 T 세포 및 K562 세포를 혼합하고 [도 6]에서와 같이 자극하였다. [도 7a 및 7b]는 HLA-A2(좌측 패널) 또는 HLA-A2 및 PD-L1(우측 패널)을 발현하는 K562 세포의 존재 하에 표시된 농도의 가용성 항-CD3 항체로 자극 96시간 후 유세포 분석법에 의해 평가된 남아있는 K562 세포의 수(상부 패널) 및 T 세포의 수(하부 패널)를 도시한다. [도 7c]는 HLA-A2("X"로 표시) 또는 HLA-A2 및 PD-L1("*"로 표시)을 발현하는 K562 세포 및 0.3 μg/ml의 항-CD3과 함께 공동 배양된 다양한 PD1 구축물을 발현하는 T 세포의 증식을 도시하며, 이는 x-축에 표시된 바와 같이 Cell Trace violet 희석의 이동에 의해 측정된다. [도 7d]는 표시된 바와 같이 증가하는 양의 항-CD3 항체(μg/ml)의 존재 하에 공동 자극 분자를 발현하는 T 세포로 자극 96시간 후 유세포 분석법에 의해 평가된 남아있는 표적 세포(K562) 수를 나타내는 그래프이다. [도 7e]는 표시된 바와 같이 증가하는 양의 항-CD3 항체(μg/ml)의 존재 하에 공동 자극 분자를 발현하는 T 세포로 자극 96시간 후 유세포 분석법에 의해 평가된 T 세포의 수를 나타내는 그래프이다. x축은 CD3 항체의 양(μg/ml)을 나타내고 y축은 세포 수를 나타낸다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 8]은 공동 자극 분자의 결합이 시험관 내에서 T 세포 증식을 증가시킨다는 것을 도시한다. T 세포는 y축에 표시된 바와 같이 2 μg/mL 항-PD1 및 항-CD3의 농도[mg/mL]("*"로 표시) 또는 단독 항-CD3("X"로 표시)으로 플레이트-결합된 항체에서 96시간 동안 자극하고 다양한 PD1 구축물을 발현하는 T 세포의 증식은 x축에 표시된 바와 같이 크리스탈 바이올렛 추적의 이동으로 측정된 바와 같다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 9a-9c]는 ICOS 및 4-1BB 신호전달 도메인을 포함하는 공동 자극 분자의 발현 또는 기능에 대한 다염기성 및 리신 잔기의 돌연변이 효과를 도시한다. [도 9a]는 각 플롯의 상단에 라벨링하여 표시된 바와 같이 야생형 PD1 수용체("*"로 표시) 또는 상이한 PD1 기반 공동 자극 분자("X"로 표시)를 발현하는 T 세포의 증식을 나타내는 일련의 유세포 분석 플롯이다. 내인성 PD-1을 발현하는 T 세포를 대조군으로 사용하였다(표시 없는 선). [도 9b]는 [도 9a]의 FACS 플롯으로부터의 PD-1 발현(내인성 수준으로부터 배수 증가로 표시됨)을 도시하는 그래프이다. [도 9c]는 표시된 농도의 항-CD3(x축)로 자극되었을 때, K562 세포(상단 행) 및 K562-PDL1 발현 세포(중간 행)에 반응하여, 표시된 바와 같이 상이한 공동 자극 분자를 발현하는 T 세포에 의한 사이토카인 생산(IL-2, 좌측 패널; IFNy, 중간 패널; 및 TNF, 우측 패널)(y축)을 나타내는 그래프이다. K562 세포 및 K562-PDL1 발현 세포에 반응하는 T 세포 사이의 사이토카인 생산 수준 간의 차이는 맨 아래 행의 그래프에 도시되어 있다. [도 9d]는 표시된 농도의 항-CD3(x축)로 자극되었을 때 K562 세포(좌측 그래프) 또는 PD-L1 발현 K562 세포(중간 그래프)와 배양한 후 96시간에 T 세포의 증식을 나타내는 그래프이다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 10a-10d]는 ICOS 및 OX-40 신호전달 도메인을 포함하는 공동 자극 분자의 발현 및 기능을 도시한다. [도 10a]는 각 플롯의 상단에 라벨링하여 표시된 바와 같이, 야생형 PD1 수용체("*"로 표시) 또는 상이한 PD1-스위치 수용체(PD1 기반 공동 자극 분자)("X"로 표시)를 발현하는 T 세포의 증식을 나타내는 일련의 유세포 분석 플롯이다. 내인성 PD-1을 발현하는 T 세포를 대조군(표시 없음)으로 사용하였다. [도 10b]는 [도 10a]의 FACS 플롯으로부터의 PD-1 발현(내인성 발현의 배수)을 나타내는 그래프이다. [도 10c]는 표시된 농도의 항-CD3(x축)로 자극되었을 때, K562 세포(상단 행) 및 K562-PDL1 발현 세포(중간 행)에 반응하여, 표시된 바와 같이 상이한 공동 자극 분자를 발현하는 T 세포에 의한 사이토카인 생산(IL-2, 좌측 패널; IFNy, 중간 패널; 및 TNF, 우측 패널)(y축)을 나타내는 그래프이다. K562 세포 및 K562-PDL1 발현 세포에 반응하는 T 세포 사이의 사이토카인 생산 수준 간의 차이는 맨 아래 행의 그래프에 도시되어 있다. [도 10d]는 표시된 농도의 항-CD3(x축)으로 자극될 때 K562 세포(좌측 그래프) 또는 PD-L1 발현 K562 세포(중간 그래프)와 배양 96시간 후 T 세포 증식을 도시하는 그래프이다. 표적 세포 상에 PD-L1의 존재 또는 부재 하에서 T 세포 증식의 차이는 가장 우측 그래프에 도시되어 있다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 11a-11b]는 공동 자극 분자의 결합이 PD-L1 발현 세포와의 T 세포 접합을 증가시킨다는 것을 도시한다. [도 11a]는 CTV-표지된 K562 표적과 CFSE-표지된 T 세포의 30분 접합의 유세포 분석 게이팅 전략을 도시한다. [도 11b]는 [도 11a]에 도시된 2개의 실험으로부터의 결과의 대조군 접합에 정규화된 정량화를 도시한다. 신호전달 펩티드가 있거나 없는 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 12a-12c]는 공동 자극 분자와 PD-L1 발현 세포의 결합 시 T 세포 증식 및 기능의 증가를 도시한다. [도 12a]는 렌티바이러스 형질감염 후 72시간 K562 세포와 공동 배양될 때, 표시된 바와 같이 ICOS_4-1BB(절단형) 신호전달 도메인(PD-1_ICOS_BBt)을 포함하는 공동 자극 분자 구축물의 존재(하단 중간 및 우측 플롯) 및 부재(상단 중간 및 우측 플롯)에서 표시된 바와 같이 야생형 HLA-A2/NY-ESO-1 특이적 TCR 또는 돌연변이 NY-ESO TCR을 발현하는 T 세포에서 PD-1 및 TCR β 사슬의 표면 발현을 나타내는 유세포분석 플롯이다. [도 12b]는 x축에 표시된 바와 같은 T 세포:A375 세포 비율에서 HLA-A2 및 항원을 발현하는 A375 종양 세포와 함께 공동 배양될 때, 표시된 바와 같이 NY-ESO-1/PD1 기반 공동 자극 분자 조합을 발현하는 T 세포의 IL-2(상단 그래프) 및 IFN8(하단 그래프) 생산을 나타내는 그래프이다. [도 12c]는 표시된 바와 같이 ICOS_4-1BB(절단형) 신호전달 도메인(PD-1_ICOS_BBt)을 포함하는 공동 자극 분자 구축물의 존재/부재 시 표시된 바와 같이 야생형 NY-ESO TCR 또는 돌연변이, 고친화성(HA) NY-ESO TCR을 발현하는 T 세포에 의한 A375 세포의 용량 의존적 살해를 도시하는 그래프이다. x축은 용량(T 세포: A375 세포 비율)과 생존하는 총 입력 A375 세포의 백분율을 나타낸다. 신호전달 펩티드가 있거나 없는 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 13a-13b]는 3세대 꼬리의 돌연변이가 형질도입된 1차 T 세포에서 CD-19 CAR 수용체의 표면 발현을 증가시킨다는 것을 도시한다. [도 13a]는 형질도입되지 않은 T 세포(x로 표시) 또는 표시된 구축물로 형질도입된 T 세포(*로 표시)에 대한 CD-19Fc 결합의 히스토그램을 도시한다. [도 13b]는 [도 13a]에 도시된 히스토그램의 MFI 측정을 FMC63scFV_BB_Z에 대해 정규화하여 도시한다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 14a-14c]는 변형된 3세대 꼬리가 사이토카인 생산 및 종양 살해를 증가시킨다는 것을 도시한다. CAR-형질도입된 1차 T 세포에 의한 CD19 양성 세포의 시험관 내 살해가 나타나 있다. [도 14a]는 CD28 기반(좌측 패널) 및 ICOS 기반(우측 패널) 2세대 및 3세대 수용체를 발현하는 CAR-T 세포와의 96시간 공동 배양 후 B 세포주(Nalm6 세포)의 잔류 세포 수를 도시한다. [도 14b]는 CD28 기반(좌측 패널) 및 ICOS 기반(우측 패널) 2세대 및 3세대 수용체를 발현하는 CAR-T 세포와 96시간 공동 배양 후 B 세포주(Raji 세포)의 잔류 세포 수를 도시한다. y축은 x축에 표시된 CD19 양성 세포에 대한 T 세포의 비율에 해당하는 남아있는 CD19 양성 세포 수를 나타낸다. [도 14c]는 x축에 표시된 바와 같이 T 세포:표적 세포 비율에서 18시간 동안 CD19 양성 B 세포와의 인큐베이션에 반응하여 2세대 및 3세대 CD28 기반 수용체(좌측 패널) 및 ICOS 기반 수용체(우측 패널)를 발현하는 T 세포에 의한 y축에 표시된 바와 같은 18hr-IFNγ 생산을 도시한다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 15a-15e]는 변형된 3세대 신호전달 도메인이 원래의 3세대 신호전달 도메인과 비교하여 시험관 내에서 CD19-CAR 기능을 증가시킨다는 것을 도시한다. [도 15a]는 x축에 표시된 바와 같이 Nalm6 B 세포로 반복된 자극에 대해 표시된 바와 같이 a) CD28 기반 2세대 및 3세대 수용체(좌측 패널); 및 b) ICOS 기반 2세대 및 3세대 수용체(우측 패널)를 발현하는 누적 T 세포 수(T 세포 증식을 나타냄)(y축)을 나타내는 그래프이다. [도 15b]는 x축에 표시된 바와 같이 RAJI B 세포로 반복된 자극에 대해 표시된 바와 같이 a) CD28 기반 2세대 및 3세대 수용체(좌측 패널); 및 b) ICOS 기반 2세대 및 3세대 수용체(우측 패널)를 발현하는 T 세포의 누적 T 세포 수(T 세포 증식을 나타냄)를 나타내는 그래프이다. [도 15c]는 x축에 표시된 바와 같이 Nalm6 B 세포로 반복된 자극에 대해 표시된 바와 같이 a) CD28 기반 2세대 및 3세대 수용체(좌측 패널); 및 b) ICOS 기반 2세대 및 3세대 수용체(우측 패널)를 발현하는 T 세포의 누적 표적 세포(Nalm6) 수(표적 세포 살해를 나타냄)(y축)를 나타내는 그래프이다. [도 15d]는 x축에 표시된 바와 같이 Raji B 세포로 반복된 자극에 대해 표시된 바와 같이 a) CD28 기반 2세대 및 3세대 수용체(좌측 패널); 및 b) ICOS-기반 2세대 및 3세대 수용체(우측 패널)를 발현하는 T 세포의 누적 표적 세포(Raji) 수(표적 세포 살해를 나타냄)(y축)를 나타내는 그래프이다. [도 15e]는 RAJI B 세포 표적으로 시간 0에서 또는 5회 연속 자극 후 표시된 바와 같이 CAR-T 세포 상의 Tim3 및 PD-1 발현을 나타내는 일련의 유세포 분석 플롯이다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
[도 16a-16e]는 변형된 3세대 신호전달 도메인이 원래의 3세대 서열과 비교하여 시험관 내에서 BCMA-CAR 기능을 증가시킨다는 것을 도시한다. [도 16a]는 표시된 바와 같이 형질도입되지 않은 T 세포("X"로 표시) 또는 CD28 기반 및 ICOS 기반 2세대 및 3세대 공동 자극 분자를 포함하는 표시된 BCMA CAR-T 수용체로 형질도입된 T 세포("*"로 표시)에 대한 BCMA-Fc 결합의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다. [도 16b]는 [도 16a]의 FACS 플롯의 형질도입된 T 세포로부터의 BCMA-Fc 결합(MFI)(x축)을 나타내는 그래프이다. [도 16c]는 RPMI-8226 다발성 골수종 표적 세포로 반복된 자극에 대해 표시된 바와 같이 a) CD28 기반 2세대 및 3세대 수용체(좌측 패널); 및 b) ICOS 기반 2세대 및 3세대 수용체(우측 패널)를 발현하는 T 세포의 누적 T 세포 수(T 세포 증식을 나타냄)(y축)를 나타내는 그래프 세트이다. [도 16d]는 x축에 표시된 바와 같이 RPMI-8226 다발성 골수종 표적 세포로 반복된 자극에 대해 표시된 바와 같이 a) CD28 기반 2세대 및 3세대 수용체(좌측 패널); 및 b) ICOS 기반 2세대 및 3세대 수용체(우측 패널)를 발현하는 T 세포의 누적 표적 세포(RPMI-8226 세포) 수(표적 세포 살해를 나타냄)(y축)을 나타내는 그래프이다. [도 16e]는 18시간 동안 x축에 표시된, 표시된 이펙터 대 표적 비율로 인큐베이션된, 표시된 바와 같이 CD28 기반 또는 ICOS 기반 공동 자극 분자를 포함하는 표시된 BCMA CAR 구축물로 형질도입된 CAR-T 세포로 사이토카인 생산(IL-2, 좌측 패널, TNF, 중간 패널 및 IFNγ, 우측 패널)(y축)을 나타내는 그래프 세트이다. 공동 자극 분자의 아미노산/핵산 서열은 표시된 바와 같다.
신규한 키메라 공동 자극 세포 내 도메인이 본원에 제공된다. 본원에서 제공되는 키메라 공동 자극 세포 내 도메인은 (a) CD28 패밀리 단백질의 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 제1 신호전달 도메인; 및 (b) TNFR 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 적어도 제2 신호전달 도메인을 포함한다.
CD28 패밀리 단백질에는 단일 세포 외 면역글로불린 가변 유사(IgV) 도메인에 이어 짧은 세포질 꼬리가 있다. CD28 패밀리 단백질의 구성원에는 CD28, CD28H, 유도성 공동자극자(ICOS), 세포독성 T 림프구 관련 항원 4(CTLA-4, CD152), PD-1(program death-1), 및 BTLA(B- and T-lymphocyte attenuator)가 포함된다. CD28, CD28H 및 ICOS는 활성화, 높은 수준의 사이토카인/케모카인 발현, 아폽토시스에 대한 저항성 및 T 세포 증식을 촉진하는 T 세포 상에서 발현되는 공동 자극 단백질이다.
종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질에는 TNFR1(종양 괴사 인자 수용체 1/TNFRSF1A), TNFR2(종양 괴사 인자 수용체 2/TNFRSF1B), 림프독소 β수용체/TNFRSF3, OX40/TNFRSF4, CD40/TNFRSF5, Fas/TNFRSF6, 미끼 수용체 3/TNFRSF6B, CD27/TNFRSF7, CD30/TNFRSF8, 4-1BB/TNFRSF9, DR4(사멸 수용체 4/TNFRSF10A), DR5(사멸 수용체 5 / TNFRSF10B), 미끼 수용체 1/TNFRSF10C, 미끼 수용체 2/TNFRSF10D, RANK(NF-카파 B의 수용체 활성화인자/TNFRSF11A), OPG(오스테오프로테게린/TNFRSF11B), DR3(사멸 수용체 3/TNFRSF25), TWEAK 수용체/TNFRSF12A, TACI/TNFRSF13B, BAFF-R(BAFF 수용체/TNFRSF13C), HVEM(헤르페스 바이러스 진입 매개인자/TNFRSF14), 신경 성장 인자 수용체/TNFRSF16, BCMA(B 세포 성숙 항원/TNFRSF17, GITR(글루코코르티코이드-유도 TNF 수용체/TNFRSF18), TAJ(독성 및 JNK 유도인자/TNFRSF19), RELT/TNFRSF19L, DR6(사멸 수용체 6/TNFRSF21), TNFRSF22, TNFRSF23, 엑토디스플라신 A2 아이소형 수용체/TNFRS27 및 엑토디스플라신 1 지한성(anhidrotic) 수용체가 포함된다. TNFSF(종양 괴사 인자 슈퍼패밀리) 리간드와 TNF 수용체 슈퍼패밀리(TNFRSF) 수용체 간의 상호 작용은 면역 세포의 생존, 증식, 분화, 및 이펙터 기능을 제어하는 공동 자극 신호를 제공한다. TNFRSF 구성원에 의해 유도된 특정 세포 내 신호에 따라 이들은 세 그룹으로 분류될 수 있다. 즉, DD(사멸 도메인) 함유 수용체, 미끼 수용체 및 TNF 수용체 관련 인자(TRAF) 결합 수용체이다. TNFR-1, Fas, DR3, DR4, DR5, 및 DR6과 같은 일부 TNFRSF는 자체 DD를 포함하고/하거나 다른 세포질 DD 함유 어댑터 분자와 상호 작용한다. TNFR-2, CD27, CD30, CD40, 글루코코르티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(GITR), Fn1, 림프독소 베타-수용체(LTβR), OX40, NF-κB의 수용체 활성화인자(RANK), 및 XEDAR과 같은 일부 다른 TNFRSF에는 DD가 없고 TRAF 단백질을 동원하는 TRAF 상호작용 모티프(TIM)라고 하는 4 내지 6개의 아미노산을 갖는 모티프가 포함되어 있다. TRAF 단백질은 세포 생존, 증식 및 사이토카인 생산을 돕는 NF-κB Janus 키나아제(JNK), ERK, p38MAPK, 및 PI3K와 같은 여러 하류 신호전달 경로를 활성화하여 어댑터 분자이다. 일부 실시 양태에서, CD28 패밀리 단백질의 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 제1 신호전달 도메인은 CD28 단백질, ICOS 단백질 또는 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시 양태에서, 적어도 제2 신호전달 도메인은 CD137(4-1BB) 및 CD134(OX-40)로부터 선택되는 TNFR 패밀리 단백질의 세포 내 신호전달 도메인의 돌연변이체에 기반한다.
본원에서는 본 출원의 3세대 공동 자극 도메인에 기반한 신규한 키메라 공동 자극 세포 내 도메인을 제공한다. 감소된 표면 발현은 치료 목적을 위한 키메라 공동 자극 단백질의 개발에 있어 주요 장애이다. 본 개시 내용은 공동 자극 유도에 효과적인 현재의 2세대 및 3세대 키메라 수용체와 비교하여 고도로 발현되고 고도로 기능적인 본 출원의 3세대 공동 자극 도메인에서의 돌연변이를 통해 생성된 신규한 키메라 공동 자극 세포 내 도메인을 제공한다. 본원에서 제공되는 키메라 공동 자극 세포 내 도메인은 (a) CD28 단백질, ICOS 단백질 또는 이들의 조합의 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 제1 신호전달 도메인; 및 (b) 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인인 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인은 CD137 또는 CD134 세포 내 도메인의 막 근위 부분에서 하나 이상의 아미노산의 결실, 삽입 또는 치환을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 막 근위 부분의 하나 이상의 아미노산은 CD137 또는 CD134 단백질의 유비퀴틴화 및 분해에 관여하는 유비퀴틴화 부위이다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인은 CD137 또는 CD134 세포 내 도메인의 막 근위 부분에서 하나 이상의 리신 잔기의 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 리신 잔기는 CD137 또는 CD134 단백질의 유비퀴틴화 및 분해에 관여하는 유비퀴틴화 부위이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 키메라 공동 자극 세포 내 도메인은 제3 신호전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제3 신호전달 도메인은 CD3ζ 신호전달 도메인에 기반할 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 출원의 신규한 공동 자극 세포 내 도메인은 임의의 공지된 공동 자극 단백질, 세포 고유 면역 체크포인트 억제제, 키메라 항원 수용체, 항체 또는 이의 일부, 리간드 또는 이의 수용체, 사이토카인 또는 이의 수용체, 케모카인 또는 이의 수용체 또는 보체 수용체의 세포 외 도메인과 인 프레임으로 조합되거나 융합되어 기능적 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 형성할 수 있다. 일부 실시 양태에서, RTCR은 또 다른 T 세포 수용체(TCR), 키메라 항원 수용체 또는 공동 자극 단백질과 조합하여 세포에서 발현될 수 있다. 본원에 개시된 신규한 공동 자극 세포 내 도메인을 포함하는 RTCR은 T 세포에서 TCR과 함께 공동 발현될 때 RTCR의 세포 표면 발현 및/또는 T 세포의 세포 증식, 활성화, 지속성, 사이토카인 생산 및/또는 이펙터 기능을 2세대 공동 자극 수용체와 비교하여 상당히 증가시킨다.
공유되고 안전한 종양 관련 항원을 표적화하고 억제성 종양 미세환경을 견딜 수 있는 T 세포 고갈의 세포 고유 억제제를 포함하는 매우 효과적인 입양 세포 치료제가 본 출원에 기재되어 있다. PD-1의 세포 외 도메인 및 기능적으로 최적화된 키메라 세포 내 공동 자극 도메인을 발현하는 예시적인 키메라 분자가 본원에 개시되어 있다. 본 개시 내용의 키메라 분자를 발현하는 변형된 T 세포는 T 세포 자극, 활성화 및 증식을 향상시키는 데 있어 키메라 분자의 효능을 나타내도록 생성된다. 두 분자는 동일한 T 세포에서 발현되어 동족 MHC/펩티드 복합체와 높은 수준의 PD-L1//PD-L2를 모두 발현하는 종양 세포에 강력하게 반응하는 TCR-T 생성물을 생성한다.
예를 들어, T 세포 고갈의 세포 고유 억제제는 종양 관련 또는 특이적 항원을 표적화하는 T 세포 수용체와 결합된 3세대 키메라 PD-1 수용체의 공동 발현에 의해 개발되어 종양 세포의 T 세포 매개된 살해의 효능을 향상시킨다. 본원에 개시된 3세대 키메라 수용체는 임의의 내인성 또는 변형된 T 세포 수용체 뿐만 아니라 키메라 인공 수용체(CAR)와 함께 사용될 수 있다. 본원의 결과는 본원에 개시된 3세대 공동 자극 분자가 PD-1에 의한 음성 신호전달을 무효화하고 대신 PD-L1 풍부한 환경에서 공동 자극 신호를 전달하면서 높은 생리학적 결합력 및 지속적인 증식 잠재력을 갖는 T 세포를 생산한다는 것을 보여준다. 신규한 공동 자극 분자는 종양 관련 항원(TAA) 특이적 TCR과 공동 발현될 수 있으며 PD-L1/PD-L2 및 TAA 발현 종양을 표적화하는 데 사용될 수 있다. 이는 TCR 활성화와 공동 자극 분자 사이의 시너지 효과가 치료 범위를 상당히 증가시키고 임상 연구를 위한 잠재적으로 더 효과적인 후보를 생성한다는 것을 입증한다. 하기 기재된 개시 내용에서, 3세대 키메라 단백질의 설계는 개선된 항암 효능을 시험관 내에서 추가로 검증하고 생체 내 항종양 효능을 조사하기 위해 체계적으로 최적화된다.
PD-1의 세포 외 도메인을 CD28, ICOS, CD134 및 CD137 단독 및 다양한 조합의 세포 내 도메인과 통합하는 공동 자극 분자가 생성된다. 이러한 서열은 CD28과 TNF-수용체 패밀리 신호전달 도메인 사이의 접합부에 초점을 맞춰 키메라 수용체의 신호전달 도메인 내에 주요 돌연변이/결실을 포함시킴으로써 표면 발현 및 기능에 대해 최적화된다. 이러한 수용체의 기능은 PD-L1를 발현하는 K562 표적 세포 또는 A375 종양 세포와 가용성 및 플레이트-결합된 항체 자극의 조합을 사용하여 표면 발현, 시험관 내 신호전달, 시험관 내 T 세포 접합, 사이토카인 생산, 증식, 및 세포 독성을 기반으로 테스트된다.
본원의 개시 내용은 TCR-T 생성물이 재조합 TAA 특이적 TCR 또는 내인성 TCR과 함께 키메라 공동 자극 분자를 공동 발현하는 접근법을 제공한다. 이 접근법은 체크포인트 억제의 동시 길항작용 및 수혈된 T 세포 생성물에 대한 공동 자극 신호의 전달과 함께 종양 관련 항원의 표적화를 가능하게 한다. 이 접근 방식은 생성물을 훨씬 개선할 뿐만 아니라 추가 TCR-T 생성물을 위한 범용 기능 향상 플랫폼을 개발하는 데에도 도움이 된다.
두 도메인을 결합하는 3세대 CAR의 임상적 채택을 방해하는 주요 기술적 문제는 세포 표면에서 키메라 단백질의 비정상적으로 낮은 발현과 관련 기능 감소였다(Zhao, 2015, Guedan, 2018). 이것은 CD28 및 CD137 신호전달 도메인의 조합이 제대로 발현되지 않고 기능이 없는 수용체를 초래하는 공동 자극 분자에서 적용된다(Ankri, 2013). 본원에서는 ICOS/CD137 신호전달 도메인에 기반하고 CD28 신호전달 도메인만을 사용한 과거 시도에 비해 현저한 개선이 되는 표면 발현에 최적화된 스위치 수용체/공동 자극 분자가 개시되어 있으며, 이는 증가된 이펙터 기능 및 입양 전달된 세포의 지속성 모두를 매개한다. 본원에 기재된 결과는 본원에 개시된 3세대 공동 자극 분자가 PD-1에 의한 음성 신호전달을 무효화하고 대신 PD-L1 풍부 환경에서 공동 자극 신호를 전달하면서 높은 생리학적 결합력 및 지속적인 증식 잠재력을 갖는 T 세포를 생산함을 보여준다. 본원에 개시된 신규한 스위치 수용체/공동 자극 분자는 내인성 TCR 또는 TAA 특이적 TCR과 공동 발현될 수 있고 PD-L1/PD-L2 발현 종양을 표적화하는 데 사용될 수 있다. 이것은 TCR 활성화와 공동 자극 분자 사이의 시너지 효과가 임상 연구를 위한 잠재적으로 더 효과적인 후보에 대한 치료 범위를 상당히 증가시킨다는 것을 입증한다.
종양 관련 항원 및 종양 특이적 항원은 종양 외, 표적 상 부작용의 위험을 상대적으로 최소화하면서 종양의 면역학적 표적화를 가능하게 한다. 종양 세포는 이러한 항원을 상향 조절할 수 있고, 이는 그 후 인간 면역 반응 또는 ACT에 의해 표적화될 수 있다. 본원의 개시 내용은 CD28 기반 수용체에 비해 우수한 기능성을 나타내는 3세대 CAR에 기반한 공동 자극 분자를 TAA를 표적화하는 새로운 친화성 강화된 TCR과 결합하여 TME의 억제 기능에 저항하는 TCR-T 생성물을 생성한다.
본 개시 내용은 (a) 세포 외 도메인; (b) 막 횡단 도메인; 및 (c) 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 세포 내 도메인을 포함하는, 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시 양태에서, TNFR 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인 중 어느 하나이다.
본 개시 내용은 (a) 세포 외 도메인; (b) 막 횡단 도메인; 및 (c) 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 세포 내 도메인을 포함하는, 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인을 포함한다.
달리 지시하지 않는 한, 용어 "공동-자극 분자", "공동자극 분자", "공동 자극 분자", "공동-자극 단백질", "공동자극 단백질", "공동 자극 단백질", "공동-자극 수용체", "공동자극 수용체" "공동 자극 수용체" 및 "스위치 수용체"는 본 출원의 신규한 키메라 공동 자극 세포 내 도메인을 포함하는 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 한다. 이들 용어는 본 출원의 RTCR을 지칭하기 위해 "재조합 T 세포", "재조합", "키메라 T 세포" 및 "키메라"와 같은 용어와 조합하여 사용될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 본 개시 내용의 "재조합 T 세포 공동 자극 수용체" 또는 "스위치 수용체"는 세포 외 도메인을 본 개시 내용의 세포 내 키메라 세포 내 단백질에 작동 가능하게 연결함으로써 생성된 "공동 자극 분자" "공동 자극 수용체" 또는 "공동 자극 단백질"이다
본원에 기재된 바와 같은 "CD137"은 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 패밀리의 구성원이고, 또한 4-1BB, CD137, 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9(TNFRSF9)로 지칭되고 림프구 활성화(ILA)에 의해 유도된다. 본원에 기재된 바와 같이, 용어 "CD137", "4-1BB", "4-1BB wt", "4-1BB 야생형", "BB", "BB wt" 및 "BB 야생형"은 예를 들어 본 출원의 구축물 또는 공동 자극 분자를 기술할 때, 달리 지시하지 않는 한 전체적으로 상호교환적으로 사용된다.
일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 포유동물 CD137로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 포유동물 CD137은 인간 CD137, 마우스 CD137, 래트 CD137 또는 원숭이 CD137일 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 U03397, AAA62478, NP_001552, Q07011, AAH06196 및 XP_006710681에 따른 인간 CD137 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 인간 CD137, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_001070977.1, NP_001070976.1, NP_035742.1, NP_033430.1, P20334.1, XP_011248530.1, XP_011248530.1, ABI30213.1, BAE32724.1 및 AAH28507.1에 따른 마우스 CD137 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 마우스 CD137, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_852049.1, NP_001020944.1, BAD99404.1, XP_008762504.1, XP_006239534.1, EDL81196.1, AAH97483.1, EHB16663.1, EHB16663.1, KFO38282.1, XP_010618177.1, XP_029414155.1, XP_029414154.1, XP_021099219.1 및 XP_012888584.1에 따른 래트 CD137 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 래트 CD137, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 ABY47575.1, ABI30212.1, ABY47577.1, ABY47576.1 및 ABY47578.1에 따른 원숭이 CD137 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 원숭이 CD137, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD137 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 CD137 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 214로부터 시작하여 C-말단 끝의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD137 세포 내 도메인은 본원에 기재된 마우스 CD137 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 215로부터 시작하여 C-말단 끝의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 하나 이상의 돌연변이(들)을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD137 단백질 중 어느 하나로부터 유래되며, 여기서 돌연변이는 CD137 단백질의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산의 첨가/삽입, 결실/절단 또는 치환/대체일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 하나 이상의 돌연변이(들)을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD137 세포 내 도메인 서열 중 어느 하나이며, 여기서 돌연변이는 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산의 첨가/삽입, 결실/절단 또는 치환/대체일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 유비퀴틴화에 대한 표적이 될 수 있는 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산의 결실 또는 치환을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD137 세포 내 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 유비퀴틴화에 대한 표적이 될 수 있는 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 리신 잔기의 결실 또는 치환을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD137 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 유비퀴틴화에 대한 표적이 될 수 있는 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 1, 2, 3 또는 4개의 리신 잔기의 결실 또는 치환을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD137 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 결실 또는 치환될 수 있는 본원에 기재된 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 리신 잔기는 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 위치 214, 218, 219 및/또는 225에 있다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 절단형 CD137 세포 내 도메인일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본원에 기재된 바와 같은 CD137 단백질의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 50, 200개 이상의 아미노산 초과의 연속 스트레치가 결실된, 본원에 기재된 CD137 단백질 중 어느 하나일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본원에 기재된 바와 같은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산 초과의 연속 스트레치가 결실된, 본원에 기재된 CD137 세포 내 도메인 서열 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 결실된 아미노산은 CD137 세포 내 도메인의 하나 이상의 근위 다염기성 아미노산을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 절단형 CD137 세포 내 도메인일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 위치 13 내지 아미노산 위치 42에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1 내지 아미노산 위치 12의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 1에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 3에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 3과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본원에서 기재된 바와 같은 절단형 CD137 세포 내 도메인은 예를 들어 본 출원의 구축물 또는 공동 자극 분자를 기술할 때 달리 지시하지 않는 한 전체적으로 "절단형 CD137", "CD137t", "절단형 4-1BB", "4-1BBt", "절단형 BB" 또는 "BBt"로 상호교환적으로 지칭된다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1, 2, 3 또는 4개의 리신 잔기(들)의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 5, 6 및 12로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 리신 돌연변이(들)는 리신에서 알라닌으로의 돌연변이이다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 1에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본 개시 내용의 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)을 포함하는 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 리신 돌연변이는 리신에서 알라닌으로의 돌연변이이다. 일부 실시 양태에서, CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 1에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 "CD134"는 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 패밀리의 구성원이고, 또한 OX-40, ACT35, IMD16, TXGP1L 및 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 4(TNFRSF4)로 지칭된다. 본원에 기재된 바와 같이, 용어 "CD134", "OX-40", "OX40", "OX-40 야생형", "OX-40 wt", "OX40 야생형", "OX40 wt", "40", "40 야생형" 및 "40wt"는 예를 들어 본 출원의 구축물 또는 공동 자극 분자를 기술할 때 달리 지시하지 않는 한 전체적으로 상호교환적으로 사용된다.
일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 포유동물 CD134로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 포유동물 CD134는 인간 CD134, 마우스 CD134, 래트 CD134 또는 원숭이 CD134일 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_003318, AAI05071, AAI05073, XP_016857721.1, XP_016857720.1, XP_011540377.1, XP_011540379.1, XP_011540378.1, XP_011540376.1, P43489.1, NP_001284491.1, NP_003317.1, EAW56278.1 및 CAB96543.1에 따른 인간 CD134 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 인간 CD134, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_035789.1, AAI39267.1, AAI39240.1, NP_033478.1, XP_006538787.3, P47741.1, EDL15067.1, CAA79772.1, CAA59476.1, XP_021017102.2, 및 XP_021056714.1에 따른 마우스 CD134 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 마우스 CD134, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_035789.1, NP_037181.1, P15725.1, EDL81353.1, CAB96543.1, 및 CAA34897.1에 따른 래트 CD134 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 래트 CD134, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 XP_010375483.1, XP_001090870.1, XP_021523144.1, XP_017750744.1, XP_003939714.1, XP_026313229.1, XP_026313228.1, XP_003890998.2, XP_025242473.1, XP_011768627.1, XP_005545179.1, XP_011886513.1, XP_011886512.1, XP_011857387.1 및 XP_011811769.1에 따른 원숭이 CD134 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 원숭이 CD134, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD134 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 CD134 단백질 중 어느 하나의 아미노산 위치 241로부터 시작하여 아미노산 서열의 C-말단 끝의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD134 세포 내 도메인은 본원에 기재된 마우스 CD134 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 236로부터 시작하여 C-말단의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 하나 이상의 돌연변이(들)을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD134 단백질 중 어느 하나로부터 유래되며, 여기서 돌연변이는 CD134 단백질의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산의 첨가/삽입, 결실/절단 또는 치환/대체일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 하나 이상의 돌연변이(들)을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD134 세포 내 도메인 서열 중 어느 하나이며, 여기서 돌연변이는 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산의 첨가/삽입, 결실/절단 또는 치환/대체일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 유비퀴틴화에 대한 표적이 될 수 있는 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내에 하나 이상의 아미노산의 결실 또는 치환을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD134 세포 내 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 유비퀴틴화에 대한 표적이 될 수 있는 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 리신 잔기의 결실 또는 치환을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD134 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 유비퀴틴화에 대한 표적이 될 수 있는 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 1 또는 2개의 리신 잔기의 결실 또는 치환을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 CD134 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 결실 또는 치환될 수 있는 본원에 기재된 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 서열 내의 리신 잔기는 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 위치 252 및/또는 276에 있다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 절단형 CD134 세포 내 도메인일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본원에 기재된 바와 같은 CD137 단백질의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 50, 200개 이상의 아미노산 초과의 연속 스트레치가 결실된, 본원에 기재된 CD134 단백질 중 어느 하나일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본원에 기재된 바와 같은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개 이상의 아미노산 초과의 연속 스트레치가 결실된 본원에 기재된 CD134 세포 내 도메인 서열 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 결실된 아미노산은 CD134 세포 내 도메인의 하나 이상의 근위 다염기성 아미노산을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 위치 15 내지 아미노산 위치 37에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개 이상의 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1 내지 아미노산 위치 14의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 4에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 6에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 6과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 절단형 CD134 세포 내 도메인은 "절단형 CD134", "CD134t", "절단형 OX-40", "절단형 OX40", "OX-40t", "OX40t" 및 "40t"로 지칭되며, 예를 들어 본 출원의 구축물 또는 공동 자극 분자를 기술할 때 달리 지시하지 않는 한 전체적으로 상호교환적으로 사용된다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 리신 잔기의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 리신 돌연변이는 리신에서 알라닌으로의 돌연변이이다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 4에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2, 및 5로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 4에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
[표 1]
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 CD28 패밀리의 단백질로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 신호 전달 도메인은 CD28, CD28H, ICOS 또는 이들의 조합 중 어느 하나로부터 유래된다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 ICOS 단백질로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이, "ICOS 단백질"은 AILIM, CD278, CCLP, CRP-1, H4, Ly115 및 CVID1로도 지칭되는 유도성 T 세포 공동 자극 단백질이다. 일부 실시 양태에서, ICOS 세포 내 도메인은 포유동물 ICOS로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 포유동물 ICOS는 인간 ICOS, 마우스 ICOS, 래트 ICOS 또는 원숭이 ICOS일 수 있다. 일부 실시 양태에서, ICOS 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 AAH28006.1, NP_036224.1, AIC51287.1, AIC60036.1, NP_036224.1, Q9Y6W8.1, EAW70357.1, EAW70356.1, EAW70355.1, AAL40934.1, AAL40933.1, CAC06612.1, AAX93073.1, AAM00909.1, AAH28210.1 및 CAD59742.1에 따른 인간 ICOS 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 인간 ICOS, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, ICOS 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_059508.2, Q9WVS0.2, EDL00161.1, CAM13242.1, CAM13241.1, CAB71153.1, AAG48732.1, AAH34852.1, XP_006496203.1, XP_006496202.1, XP_006496201.1, ACX50464.1, ACX50463.1, AAH28006.1, XP_021052880.1, XP_029334968.1 및 XP_021030282.1에 따른 마우스 ICOS 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 마우스 ICOS, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, ICOS 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_072132.1, Q9R1T7.1, XP_008765358.1, XP_006245100.1, XP_006245099.1, EDL98922.1, EDL98921.1, XP_038940099.1, XP_032755449.1, XP_017457364.1, XP_006256324.1, XP_006256323.1, XP_006256322.1, XP_029425757.1, XP_029425757.1, XP_021119236.1, XP_012929934.1, XP_012867370.1 및 XP_012867363.1에 따른 래트 ICOS 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 래트 ICOS, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, ICOS 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 XP_007964137.1, NP_001253918.1, XP_010350939.1, XP_012301785.1, XP_012301784.1, XP_017739861.1, XP_010334714.1, XP_003925677.1, AFH29328.1, XP_008997520.1, XP_023075107.1, XP_023075099.1, XP_021779593.1, XP_003907887.1, XP_025260988.1, XP_025260987.1, XP_025260986.1, XP_011716287.1, XP_011716285.1, XP_005574075.1, XP_011903009.1, XP_011805288.1, XP_011805287.1, XP_011847867.1, XP_011847866.1, XP_017392362.1, XP_033086489.1, XP_032134414.1, XP_032134413.1, 및 XP_017802331.1에 따른 원숭이 ICOS 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 원숭이 ICOS, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 133으로부터 C-말단의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 133에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서의 아미노산 위치로부터 C-말단의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 133으로부터 C-말단의 마지막 아미노산에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서의 아미노산 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 133에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서의 아미노산 위치로부터 C-말단의 마지막 아미노산에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산 위치에서의 아미노산 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS(28) 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 133으로부터 아미노산 위치 183까지의 ICOS 도메인 아미노산 서열의 일부, 및 아미노산 위치 184로부터 C-말단의 마지막 아미노산까지의 ICOS 도메인 아미노산 서열의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS(28) 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 위치 133에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서의 아미노산 위치로부터 아미노산 위치 183까지의 ICOS 도메인 아미노산 서열의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS(28) 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 위치 133으로부터 아미노산 위치 183에 대해 C-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서 아미노산 위치까지의 ICOS 도메인 아미노산 서열의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 ICOS(28) 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 ICOS 단백질의 아미노산 위치 133에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서의 아미노산 위치로부터 아미노산 위치 183에 대해 C-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산에서의 아미노산 위치까지의 ICOS 도메인 아미노산 서열의 일부를 포함한다.
Tp44라고도 하는 "CD28 단백질"은 나이브() T 세포 상에서 CD80(B7.1) 및 CD86(B7.2) 단백질에 대해 구성적으로 발현되는 수용체이며 T 세포 활성화에 중요하다. 일부 실시 양태에서, CD28 세포 내 도메인은 포유동물 CD28로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 포유동물 CD28은 인간 CD28, 마우스 CD28, 래트 CD28 또는 원숭이 CD28일 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD28 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 P10747.1, NP_001230007.1, NP_001230006.1, NP_006130.1, EAW70350.1, EAW70349.1, EAW70348.1, EAW70347.1, AIC48451.1, CAC29237.1, AAA51945.1, AAA51944.1, AAL40931.1, AAF33794.1, AAF33793.1, AAF33792.1, XP_011510499.1, XP_011510497.1, XP_011510496.1, AAI12086.1, AAH93698.1, ABK41938.1, AAY24123.1, CAD57003.1 및 AAA60581에 따른 인간 CD28 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 인간 CD28, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD28 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 AAA37396.1, NP_031668.3, P31041.2, AAH64058.1, EDL00156.1, CAM13249.1, XP_036012281.1, XP_021054806.1, XP_021027481.1, XP_036015651.1, 및 XP_030104805에 따른 마우스 CD28 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 마우스 CD28, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD28 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 CAA39003.1, NP_037253.2, P31042.1, XP_008765300.1, EDL98926.1, XP_032755445.1, XP_034354910.1, XP_019061859.2, XP_008844474.1, XP_004851403.1 및 XP_012865504.1에 따른 래트 CD28 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 래트 CD28, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD28 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 ABH06891.1, ABH08508.1, ABH06892.1, ABH08509.1, ABQ09493.1, NP_001274262.1, NP_001036106.2, ABG77998.1, ABG77997.1 및 XP_014966207.1에 따른 원숭이 CD28 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 원숭이 CD28, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다.
CD28 상동체, 막 횡단 및 면역글로불린 도메인 함유 단백질 2로도 지칭되는 "CD28H 단백질"은 B7H7에 결합함으로써 T 세포에서 공동 자극 활성을 갖는다. CD28H는 처음에 세포-세포 상호작용, 세포 이동, 상피 및 내피 세포의 혈관신생에 관여하는 분자로 기술되었다(7, 8). CD28H는 단일 세포 외 면역글로불린 도메인 이어서 막 횡단 도메인 및 110개 아미노산 길이의 세포질 영역을 가지고 있다. 일부 실시 양태에서, CD28 세포 내 도메인은 포유동물 CD28H로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 포유동물 CD28은 인간 CD28H, 마우스 CD28H, 래트 CD28H 또는 원숭이 CD28H일 수 있다. 일부 실시 양태에서, CD28H 세포 내 도메인은 GenBank 등록 번호 NP_001295161.1, NP_001162597.1, Q96BF3.2, XP_024307127.1 및 XP_016881773.1에 따른 인간 CD28H 아미노산 서열 중 어느 하나와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 인간 CD28H, 또는 이의 아이소형 또는 변이체로부터 유래될 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 CD28 세포 내 도메인은 본원에 기재된 인간 CD28 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 145로부터 C-말단의 마지막 아미노산까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 CD28 세포 내 도메인의 일부는 본원에 기재된 인간 CD28 단백질의 아미노산 서열의 대략 아미노산 위치 195로부터 대략 아미노산 위치 212까지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간 CD28 세포 내 도메인의 일부는 본원에 기재된 인간 CD28 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치 195에 대해 N-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 아미노산 위치로부터 아미노산 위치 220에 대해 C-말단 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 아미노산 위치까지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시 양태에서, ICOS로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 9와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 단백질(ICOS(28) 도메인)과 결합된 CD28 세포 내 도메인의 일부를 포함하는 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 단백질의 PI-3K 결합 부위에 N-말단에 삽입된 CD28 세포 내 도메인의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 단백질의 PI-3K 결합 부위에 N-말단 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 위치 삽입된 CD28의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 단백질의 PI-3K 결합 부위에 C-말단에 삽입된 CD28의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 단백질의 PI-3K 결합 부위에 C-말단 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 위치에 삽입된 CD28의 일부를 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열의 ICOS 단백질 내의 아미노산 위치 48 앞의 임의의 아미노산 위치에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열의 ICOS 단백질 내의 아미노산 위치 1과 아미노산 위치 48 사이의 임의의 아미노산 위치에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 47과 아미노산 위치 48 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 46과 아미노산 위치 47 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 45와 아미노산 위치 46 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 44와 아미노산 위치 45 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 43과 아미노산 위치 44 사이에 삽입된다.
일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열의 ICOS 단백질 내의 아미노산 위치 51 뒤의 임의의 아미노산 위치에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열의 ICOS 단백질 내의 아미노산 위치 51과 아미노산 위치 67 사이의 임의의 아미노산 위치에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 51과 아미노산 위치 52 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 53과 아미노산 위치 54 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 54와 아미노산 위치 55 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 56과 아미노산 위치 57 사이에 삽입된다. 일부 실시 양태에서, CD28의 일부는 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 갖는 ICOS 단백질의 아미노산 위치 57과 아미노산 위치 58 사이에 삽입된다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 ICOS(28) 도메인의 CD28의 일부는 서열 번호 10에 따른 CD28 신호전달 도메인의 아미노산 위치 51 내지 아미노산 위치 68에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 ICOS(28) 도메인의 CD28의 일부는 서열 번호 10에 따른 전장 CD28 신호전달 도메인의 아미노산 위치 51 내지 아미노산 위치 76에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 ICOS(28) 도메인의 CD28의 일부는 서열 번호 10에 따른 CD28 신호전달 도메인의 아미노산 위치 45 내지 아미노산 위치 68에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인 내에 삽입된 CD28의 일부는 PRRP 모티프를 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인 내에 삽입된 CD28의 일부는 서열 번호 11에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인 내에 삽입된 CD28의 일부는 서열 번호 11과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, ICOS(28) 도메인은 서열 번호 12에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS(28)은 서열 번호 12와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 10에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 10과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 CD28로부터 유도된 신호 전달 도메인은 전체적으로 "CD28" 또는 "28"로 상호교환적으로 지칭된다.
[표 2]
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 13과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 14-17 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 14-17 중 어느 하나와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 14에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 14와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 15에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 15와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 16에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 16과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 17에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 17과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 120-129 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 120-129 중 어느 하나와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 120에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 120과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 121에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 121과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 122에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 122와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 123에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 123과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 124에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 124와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 125에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 125와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 126에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 126과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 127에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 127과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 128에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 128과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 129에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 129와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[표 3]
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 제3 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제3 신호 전달 도메인은 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인, 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인 중 어느 하나로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, CD3 신호전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래된다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 CD3ζ 단백질로부터 유래된 제3 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 18에 따른 아미노산 서열의 CD3ζ 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 18과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ이다.
인간 CD3ζ 전장( CD3Z 전장)(서열 번호 18 )
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 45에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 45와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 46에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 46과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 47에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ε이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 47과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ε이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 CD3ε과 절단형 CD3ζ 도메인의 조합(CD3ζε 도메인)이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 48에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 48과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε이다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 49와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD2 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 50과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인은 제4 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제4 신호 전달 도메인은 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인, 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인 또는 이들의 조합 중 어느 하나로부터 유래되며, 여기서 제3과 제4 신호 전달 도메인은 동일하지 않다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 45 에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 45와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 46에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 46과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 47에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ε이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 47과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ε이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 CD3ε과 절단형 CD3ζ 도메인의 조합(CD3ζε 도메인)이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 48 에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 48과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε이다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 49와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD2 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 50 에 따른 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 키메라 세포 내 도메인의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 50과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다.
용어 T 세포, T-세포, t 세포, t-세포, 및 T 림프구는 본 개시 내용에서 상호교환적으로 사용될 수 있다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 면역 세포의 활성화 및/또는 증식을 유도하기 위해 표적에 결합하는 단백질 또는 이의 일부를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 a) T 세포 수용체(TCR) 복합체의 구성요소; b) 키메라 항원 수용체(CAR)의 구성요소; c) T 세포 공동 자극 단백질 또는 T 세포 억제 단백질인 T 세포 공수용체의 구성요소; d) 세포 표면 수용체 또는 이의 구성요소에 결합하는 리간드; e) 사이토카인 수용체의 구성요소; e) 케모카인 수용체의 구성요소; g) 인테그린 수용체의 구성요소; h) 내피 세포 표면 단백질 수용체의 구성요소 또는 이의 단편; i) 신경 안내 단백질 수용체의 구성요소; 및 f) 보체 수용체의 구성요소 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 공수용체 또는 CAR의 구성요소는 PD1, CD28, CD2, OX-40, ICOS, CTLA-4, CD28, CD3, CD4, CD8, CD40L, Lag-3, Tim-3, 또는 TIGIT의 구성요소, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 양태에서, T 세포 공수용체 또는 CAR의 리간드 또는 구성요소는 CD19, B 세포 성숙 Ag(BCMA), PD-L1, PD-L2, IL-10, 증식 유도 리간드(APRIL), BAFF, OX-40L, ICOS-L, B7-1, B7-2, CD40, CD58, CD59, 넥틴, CD155, 또는 CD112, 또는 이들의 조합에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인 수용체는 IL-10, IL-27, TGF-β, IL-12, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, 또는 IFN-α/β, 또는 이들의 조합에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 보체 수용체의 구성요소는 단일 C3aR, C5aR, CD46/MCP, CD55, CD97, 또는 DAF의 구성요소, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 a) 케모카인 수용체; b) 사이토카인 수용체; c) 세포 표면 수용체에 대한 리간드; d) 인테그린 수용체; e) 세포 부착 분자 또는 이의 수용체; f) 내피 세포 표면 단백질 수용체 또는 이의 단편; g) 보체 수용체; 및 h) 신경 안내 단백질 수용체 중 어느 하나의 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 상피 성장 인자 수용체(EGFR), 혈관 내피 성장 인자(VEGFR), 케모카인 수용체(CCR) 4, CCR5, CCR7, CCR10, 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1), 백혈구 특이적 β2 인테그린(αLβ2, αMβ2, αXβ2, αDβ2), β7 인테그린(α4β7 및 αEβ7), 세포 외 기질(ECM) 결합 β1 인테그린(α1-α6β1), L-셀렉틴, 또는 시알릴 루이스x 중 어느 하나의 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 단백질, 펩티드, 당단백질, 항체 또는 이의 단편이다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 이의 단편은 Fab 단편, F(ab)2 단편, 디아바디, 나노바디, sdAb, Fv, VHH 단편, 또는 단일 사슬 Fv 단편이다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 2개 이상의 동일하지 않은 표적 항원을 표적화하기 위한 2개 이상의 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 표적 항원 상의 2개 이상의 동일하지 않은 부위를 표적화하기 위한 2개 이상의 결합 부위를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 이중특이적 항체의 2개의 항원 결합 도메인 또는 단편을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 이중특이적 항체의 F(ab)2 단편을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 다중특이적 항체의 2개 이상의 항원 결합 도메인 또는 단편을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 종양 항원, 병원체 관련 단백질, 또는 암, 자가면역 질환 또는 장애, 감염성 질환, 염증성 질환, 신장 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 간 질환 또는 장애, 심혈관 질환 또는 장애, 신경퇴행성 질환 또는 장애, 또는 대사 질환 또는 장애인 질환 또는 장애와 관련된 항원인 표적에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 종양 항원은 종양 관련 항원(TAA), 종양 분비 항원(TSA) 또는 비전형적 항원(UCA) 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, TAA는 암 생식계열 항원(CGA), 인간 내인성 레트로바이러스(HERV), 조직 분화 항원(TDA) 및 과발현된 종양 항원 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, TSA는 모자이크 단일 뉴클레오티드 변이(mSNV), 삽입-결실 돌연변이(INDEL), 유전자 융합 및 바이러스 종양단백질 중 어느 하나로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, UCA는 게놈의 비코딩 영역 또는 게놈의 코딩 영역으로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, UCA는 비정상적인 전사, 번역, 또는 번역 후 변형으로부터 유래된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 고형 종양 또는 암 또는 혈액암과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 고형 종양과 관련되거나 암은 육종, 암종 또는 고형 종양으로 나타나거나, 이에 이르거나, 이와 관련된 림프종으로부터 선택된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 연조직 육종 또는 골 육종(골육종)인 육종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 수포성 횡문근육종, 수포성 연조직 육종, 법랑모세포종, 혈관육종, 연골육종, 척색종, 밝은 조직 육종, 탈분화 지방육종, 결합 조직의 과형성 작은 원형 세포 종양, 배아 횡문근육종, 상피모양 섬유육종, 상피모양 혈관내피종, 상피모양 육종; 민감성 신경모세포종(비강 신경모세포종), 유잉 육종, 신외 횡문근육종, 골외 점액성 연골육종, 골외 골육종, 섬유육종, 거대 세포 종양, 혈관주위세포종, 영아 섬유육종, 염증성 근섬유모세포종, 카포시 육종, 뼈 평활근 육종, 지방육종, 골육종, 악성 섬유성 조직구종(MFH), 악성 섬유성 조직구종(MFH), 악성 중간엽 종양, 악성 말초 신경초 종양, 중간엽 연골육종, 점액성 지방육종, 점액성 염증성 섬유모세포 육종, 혈관주위 상피모양 세포 분화를 동반한 다발 종양, 골육종, 골막외 골육종, 혈관주위 상피세포 분화를 동반한 종양, 골막 골육종, 다형성 지방육종, 다형성 횡문근육종, PNET/골외 유잉 종양, 횡문근육종, 소세포 골육종, 단일 유섬유종, 윤활막 육종 또는 모세관 확장성 골육종으로부터 선택되는 육종과 관련된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 신장 세포 암종, 관 상피내 암종(DCIS), 침윤성 관 암종 또는 선암종으로부터 선택되는 암종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 선편평 암종, 역형성 암종, 대세포 암종, 결장직장 암종, 췌장 암종, 비인두 암종 또는 소세포 암종으로부터 선택되는 암종과 관련된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 항문암, 맹장암; 담관암종(즉, 담관암), 유방암, 방광암, 뇌종양, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 결장 용종, 미확인 원발암(cup), 식도암, 안암, 난관암, 신장암, 간암, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 구강암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 위암, 고환암, 후두암, 갑상선 암, 자궁암, 질암, 또는 외음부암으로부터 선택되는 고형 종양 또는 암과 관련된다.
일부 실시 양태에서, 유방암은 침윤성 유방관 암, 관의 제자리 암종, 침윤성 소엽 암종 또는 소엽 제자리 암종이다. 일부 실시 양태에서, 췌장암은 선암종 또는 섬 세포 암종이다. 일부 실시 양태에서, 결장직장암은 선암종이다. 일부 실시 양태에서, 결장 용종은 가족성 선종성 용종증과 관련된다. 일부 실시 양태에서, 방광암은 이행 세포 방광암, 편평 세포 방광암 또는 선암종이다. 일부 실시 양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 일부 실시 양태에서, 비소세포 폐암은 선암종, 편평 세포 폐암, 또는 대세포 폐암이다. 일부 실시 양태에서, 비소세포 폐암은 대세포 폐암이다. 일부 실시 양태에서, 폐암은 소세포 폐암이다. 일부 실시 양태에서, 전립선암은 선암종 또는 소세포 암종이다. 일부 실시 양태에서, 난소암은 상피성 난소암이다. 일부 실시 양태에서, 담관암종은 근위 담관암종 또는 원위 담관암종이다.
일부 실시 양태에서, TAA는 백혈병, 골수종 또는 림프종으로부터 선택되는 혈액암 중 어느 하나와 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 급성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 림프구성 백혈병, B 세포, T 세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 골수성 백혈병, 만성 골수구성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포 백혈병, 급성 전골수성 백혈병(APL), 혼합 계통 백혈병(MLL) 또는 골수이형성 증후군(MDS)으로부터 선택되는 백혈병과 관련된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 다발성 골수종인 골수종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 다발성 골수종의 과이배체(HMM) 또는 비-과이배체 또는 과소이배체 아형으로부터 선택되는 다발성 골수종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 경쇄 골수종, 비-분비성 골수종, 고립성 형질세포종, 골수외 형질세포종, 의미 불명의 단클론성 감마글로불린병증(MGUS), 무증상 다발성 골수종(SMM), 면역글로불린 D(IgD) 골수종 또는 면역글로불린 E(IgE) 골수종으로부터 선택되는 다발성 골수종과 관련된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 호지킨 림프종 또는 비호지킨 림프종인 림프종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 비호지킨 림프종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 소림프구성 림프종(SLL), 림프형질세포 림프종, 미만성 대세포 림프종, 여포 중심 세포 림프종, 버킷 림프종, 버킷 유사 림프종, 맨틀 세포 림프종 또는 변연부 B 세포 림프종으로부터 선택되는 비호지킨 림프종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 호지킨 림프종인 림프종과 관련된다. 일부 실시 양태에서, TAA는 결절 경화증 고전적 호지킨 림프종, 림프구 풍부 고전적 호지킨 림프종 또는 림프구 고갈 고전적 호지킨 림프종으로부터 선택되는 호지킨 림프종과 관련된다.
일부 실시 양태에서, TAA는 급성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 림프구성 백혈병, B 세포, T 세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 골수성 백혈병, 만성 골수구성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포 백혈병, 골수이형성 증후군(MDS), 호지킨 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 결장직장 암종, 췌장 암종, 비인두 암종, 악성 조직구증, 악성 종양의 부신생물 증후군/고칼슘혈증, 방광암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 두부암, 경부암, 유전성 비용종증암, 간암, 폐암, 비소세포폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포 암종, 고환암, 선암종, 육종, 악성 흑색종 및 혈관종 중 어느 하나인 암과 관련된다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 칼리크레인 4, 유두종바이러스 결합 인자(PBF), 우선적으로 발현되는 흑색종 항원(PRAME), 윌름스 종양-I(WTI), 히드록시스테로이드 탈수소효소 유사 I(HSDLI), 메조텔린, 암 고환 항원(NY-ES0-1), 암배아 항원(CEA), p53, 인간 표피 성장 인자 수용체 2/신경 수용체 티로신 키나아제(Her2/Neu), 암종 관련 상피 세포 부착 분자(EpCAM), 난소 및 자궁 암종 항원(CAI25), 엽산 수용체 a, 정자 단백질 17, 종양 관련 차별적으로 발현되는 유전자-12(TADG-12), 뮤신-16(MUC-16), LI 세포 부착 분자(LICAM), 만난-MUC-1, 인간 내인성 레트로바이러스 K(HERV-K-MEL), 키타큐슈 폐암 항원-I(KK-LC-1), 인간 암/고환 항원(KM-HN-1), 암 고환 항원(LAGE-I), 흑색종 항원-A1(MAGE-Al), 정자 표면 투명대 결합 단백질(Spl 7), 윤활막 육종, X 중단점 4(SSX-4), 일시적 축삭 당단백질-1(TAG-I), 일시적 축삭 당단백질-2(TAG-2), 활성 동족체(ENAH), 맘모글로빈 A, NY-BR-I, 유방암 항원(BAGE-1), B 흑색종 항원, 흑색종 항원-A1(MAGE-Al), 흑색종 항원-A2(MAGE-A2), 뮤신 k, 윤활막 육종, X 중단점 2(SSX-2), 탁솔 저항성 관련 유전자-3(TRAG-3), 조류 골수구종증 바이러스 종양유전자(c-myc), 사이클린 B 1, 뮤신 I (MUC I), p62, 서바이빈, 림프구 공통 항원(CD45), DickkopfWNT 신호전달 경로 억제제 I(DKKI), 텔로머라아제, 커스텐 쥐 육종 바이러스 종양유전자 동족체(K-ras), G250, 장 카르복실 에스테라아제, 알파-태아단백질, 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF), 전립선 특이 막 항원(PSMA), 카스파제 5(CASP-5), 시토크롬 C 산화효소 조립 인자 I 동족체(COA-1), 0-연결 β-N-아세틸글루코사민 전이 효소(OGT), 골육종 증폭 9, 소포체 렉틴(OS-9), 형질전환 성장 인자 베타 수용체 2(TGF-베타RII), 쥐 백혈병 당단백질 70(gp70), 칼시토닌 관련 폴리펩티드 알파(CALCA), 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1(CD274), 마우스 더블 미닛 2 동족체(mdm-2), 알파-액티닌-4, 신장 인자 2, 말산 효소 1(MEI), 핵 전사 인자 Y 서브유닛 C(NFYC), G 항원 1,3(GAGE-1,3), 흑색종 항원-A6(MAGE-A6), 암 고환 항원 XAGE-lb, 전립선의 6개 막 횡단 상피 항원 1(STEAP1), PAP, 전립선 특이 항원(PSA), 섬유모세포 성장 인자 5(FGF5), 열 충격 단백질 hsp70-2, 흑색종 항원-A9(MAGE-A9), Arg-특이 ADP-리보실트랜스퍼라제 패밀리 C(ARTCl), B-Raf 원종양유전자(B-RAF), 세린/트레오닌 키나아제, 베타-카테닌, 세포 분열 주기 27 동족체(Cdc27), 사이클린 의존성 키나아제 4(CDK4), 사이클린 의존성 키나아제 12(CDK12), 사이클린 의존성 키나아제 억제제 2A(CDKN2A), 카제인 키나아제 1 알파 1(CSNK1A1), 피브로넥틴 1(FN1), 성장 정지 특이적 7(GAS7), 당단백질 비전이성 흑색종 단백질 B(GPNMB), HAUS 오그민 유사 복합체 서브유닛 3(HAUS3), LDLR-푸코실트랜스퍼라제, T 세포에 의해 인식되는 흑색종 항원 2(MART2), 미오스타틴(MSTN), 흑색종 관련 항원(돌연변이) 1(MUM-1-2-3) , 폴리(A) 폴리머라제 감마(neo-PAP), 미오신 클래스 I, 단백질 포스파타제 1 조절 서브유닛 3B(PPP1R3B), 퍼옥시레독신-5(PRDX5), 수용체형 티로신-단백질 포스파타제 카파(PTPRK), 형질전환 단백질 N-Ras(N-ras), 망막모세포종 관련 인자 600(RBAF600), 시르투인-2(SIRT2), SNRPD1, 트리오스포스페이트 이소머라제, 안구 백색증 1형 단백질(OA1), 구성원 RAS 종양유전자 패밀리(RAB38), 티로시나제 관련 단백질 1-2(TRP-1-2), 흑색종 항원 Gp75(gp75), 티로시나제, 멜란-A(MART-1), 당단백질 100 흑색종 항원(gp100), N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 V 유전자(GnTVf), 림프구 항원 6 복합 유전자좌 K(LY6K), 흑색종 항원-AlO(MAGE-AlO), 흑색종 항원-Al2(MAGE-Al2), 흑색종 항원-C2(MAGE-C2), 흑색종 항원 NA88-A, 탁솔 저항성 단백질 3(TRAG-3), BDZ 결합 키나아제(pbk), 카스파제 8(CASP-8), 육종 항원 1(SAGE), 중단점 클러스터 영역-아벨슨 종양유전자(BCR-ABL), 백혈병의 융합 단백질, dek-can, 신장 인자 Tu GTP 결합 도메인 함유 2(EFTUD2), ETS 변이 유전자 6/급성 골수성 백혈병 융합 단백질(ETV6-AML1), FMS 유사 티로신 키나아제-3 내부 일렬 중복(FLT3-ITD), 사이클린-Al, 피브로넥틴 III형 도메인 함유 3B(FDNC3B,) 전골수구성 백혈병/레티노산 수용체 알파 융합 단백질(pml-RAR알파), 흑색종 항원-Cl(MAGE-Cl), 막 단백질 선택적 스플라이싱 아이소형(D393-CD20), 흑색종 항원-A4(MAGEA4), 또는 흑색종 항원-A3(MAGE-A3)으로부터 선택되는 TAA에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 자가면역 질환 또는 장애는 1형 당뇨병, 류마티스 관절염(RA), 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 다발성 경화증(MS), 셀리악병, 쇼그렌 증후군, 류마티스성 다발근통, 강직성 척추염, 원형 탈모증, 혈관염 및 측두 동맥염 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, 자가면역 질환 또는 장애와 관련된 종양 관련 항원(TAA)은 카르복시펩티다제 H, 크로모그라닌 A, 글루타메이트 데카르복실라제, 이모젠-38, 인슐린, 인슐린종 항원-2 및 2β 섬-특이적 글루코오스-6-포스파타제 촉매 서브유닛 관련 단백질(IGRP), 프로인슐린, α-에놀라제, 아쿠아포린-4,β 아레스틴, 미엘린 염기성 단백질, 미엘린 희소돌기 아교세포 당단백질, 프로테오리피드 단백질, S100-β 시트룰린화 단백질, 콜라겐 II, 열 충격 단백질, 인간 연골 당단백질, 이중 가닥 DNA, La 항원, 뉴클레오솜 히스톤 및 리보핵 단백질(snRNP), 인지질-β2 당단백질 I 복합체, 폴리(ADP-리보스) 중합효소, 및 U-1 작은 리보핵단백질 복합체의 Sm 항원 중 어느 하나로부터 유래된다.
일부 실시 양태에서, 병원체 관련 항원은 박테리아, 진균 또는 기생 단백질 또는 이의 단편으로부터의 항원이다. 일부 실시 양태에서, 병원체 관련 항원은 HIV 감염, 인간 사이토메갈로바이러스 감염, B형 간염 감염, C형 간염 감염, 에볼라 바이러스 감염, 뎅기열, 황열병, 리스테리아증, 결핵, 콜레라, 말라리아, 리슈만편모충증, 또는 트리파노소마 감염, 또는 이들의 조합과 관련된다.
일부 실시 양태에서, 신경퇴행성 장애 또는 질환은 알츠하이머병(AD) 및 기타 치매, 파킨슨병(PD) 및 PD 관련 장애, 프리온병, 운동 뉴런 질환(MND), 헌팅턴병(HD), 척수소뇌성 운동실조증(SCA) 또는 척수성 근위축증(SMA) 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, 신경퇴행성 장애 또는 질환과 관련된 항원은 아밀로이드 β(Ab), 타우, 알파-시누클레인(α-syn), mHTT 또는 프리온 PrPsc 또는 이들의 조합 중 어느 하나이다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 1 fM 내지 100 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 1 pM 내지 100 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 1 pM 내지 10 pM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 10 pM 내지 50 pM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 10 pM 내지 100 pM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 100 pM 내지 500 pM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 500 pM 내지 1 nM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 1 nM 내지 10 nM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 10 nM 내지 100 nM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 100 nM 내지 500 nM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 500 nM 내지 1 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 1 μM 내지 10 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 1 μM 내지 5 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 5 μM 내지 7.5 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 7.5 μM 내지 10 μM의 결합 친화도로 표적에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 N-말단에 신호 펩티드를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 신호 펩티드는 표면 발현 단백질 또는 분비 단백질로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 신호 펩티드는 프레프로락틴, HIV pre-Env, HCV 다단백질, CB 바이러스 다단백질, 페스티바이러스 다단백질, 프레칼레티쿨린, pre-VSV-G, HLA I형 조직적합성 항원 또는 PD-1 신호 펩티드(PD-1 SP), 인터류킨 12(IL12), GM-CSF 또는 CD8 알파 사슬(CD8a)로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 신호 펩티드는 PD-1 신호 펩티드(PD-1 SP)이다. 일부 실시 양태에서, 신호 펩티드는 HLA I형 조직적합성 항원 또는 이의 일부이다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 PD1로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 19-21 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열의 위치 1 내지 163의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 19에 따른 아미노산 서열의 위치 1 내지 163의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 20에 따른 아미노산 서열의 위치 1 내지 163의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 21에 따른 아미노산 서열의 위치 1 내지 163의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 22-23 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 22에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 22와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 23에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 23과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[표 4]
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 24-44 및 130-132 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 24에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 24와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 25에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 25와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 26에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 26과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 27에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 27과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 28에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 28과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 29에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 29와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 30에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 30과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR의 세포 외 도메인은 서열 번호 31에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR의 세포 외 도메인은 서열 번호 31과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 32에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 32와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 33에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 33과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 34에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 34와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 35에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 35와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 36에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 36과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 37에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 37과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 38에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 38과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 39에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 39와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 40에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 40과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 41과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 42에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 42와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 43에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 43과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 44에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 44와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 130에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 130과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 131에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 131과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 132에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 서열 번호 132와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[표 5]
[표 6]
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 CD19 결합 단백질로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 단백질은 CD19 결합 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 51에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 서열 번호 51과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 52-69 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 52에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 52와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 53에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 53과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 54에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 54와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 55에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 55와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 56에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 56과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 57에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 57과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 58에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 58과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 59에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 59와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 60에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 60과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 61에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 61과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 62 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 62와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 63에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 63과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 64에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 64와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 65에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 65와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 66에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 66과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 67에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 67과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 68에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 68과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 69에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 69와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[표 7]
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 힌지 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 힌지 영역은 CD8, PD-1, CD28, ICOS 또는 IgG로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR의 막 횡단 도메인은 CD8, PD1, CD28, ICOS 또는 IgG로부터 유래된다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산은 서열 번호 75-86 및 92-110에 따른다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 핵산은 키메라 세포 내 도메인을 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 RTCR은 T 세포에서의 발현을 위한 것이며, 여기서 T 세포는 내인성 공동 자극 분자 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 공동 발현한다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 벡터는 바이러스 벡터, 플라스미드, 코스미드, 효모 인공 염색체, 박테리아 인공 염색체 또는 트랜스포존/트랜스포사제 시스템 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 실시 양태에서, 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 핵산 또는 벡터를 포함하는 세포를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 변형된 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 변형된 T 세포는 동종 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 변형된 T 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 변형된 T 세포는 나이브 T 세포, 초기 기억 T 세포, 줄기 세포 유사 T 세포, 줄기 기억 T 세포(TSCM), 중앙 기억 T 세포(TCM) 및 조절 T 세포(Treg) 중 어느 하나이다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 B 세포 성숙 Ag(BCMA) 결합 단백질이다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 단백질은 BCMA 특이적 T 세포 수용체(TCR)이다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 단백질은 BCMA 특이적 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 137-146 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 137에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 137과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 138에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 138과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 139에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 139와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 140에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 140과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 141에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 141과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 142에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 142와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 143에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 143과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 144에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 144와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 145에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 145와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 146에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 146과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인은 B 세포 성숙 Ag(BCMA) 결합 단백질이다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 단백질은 BCMA 특이적 T 세포 수용체(TCR)이다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 단백질은 BCMA 특이적 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 실시 양태에서, BCMA 결합 키메라 항원 수용체는 서열 번호 141, 142, 145 및 146 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
[표 8]
[표 9]
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 인공 항원 수용체, 치료용 폴리펩티드, 면역 세포 조절 단백질, 또는 이들의 조합을 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 재조합 T 세포 수용체(rTCR)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 향상된 친화성 TCR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 종양 관련 항원(TAA), 병원체 관련 단백질에 결합하거나, 질환 또는 장애와 관련된 항원은 암, 자가면역 질환 또는 장애, 감염성 질환, 염증성 질환, 신장 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 간 질환 또는 장애, 신경퇴행성 질환 또는 장애, 또는 대사 질환 또는 장애이다.
일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 고형 종양 또는 혈액암과 관련된 TAA에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 림프구성 백혈병, B 세포, T 세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포 백혈병, 골수이형성 증후군(MDS), 림프종, 호지킨병, 악성 림프종, 비호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성 골수종, 카포시 육종, 결장직장 암종, 췌장 암종, 비인두 암종, 악성 조직구증, 악성 종양의 부신생물 증후군/고칼슘혈증, 고형 종양, 방광암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 두부암, 경부암, 유전성 비용종증암, 호지킨 림프종, 간암, 폐암, 비소세포폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포 암종, 고환암, 선암종, 육종, 악성 흑색종, 및 혈관종 중 어느 하나로부터 선택되는 암과 관련된 TAA에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 칼리크레인 4, 유두종바이러스 결합 인자(PBF), 우선적으로 발현되는 흑색종 항원(PRAME), 윌름스 종양-I(WTI), 히드록시스테로이드 탈수소효소 유사 I(HSDLI), 메조텔린, 암 고환 항원(NY-ES0-1), 암배아 항원(CEA), p53, 인간 표피 성장 인자 수용체 2/신경 수용체 티로신 키나아제(Her2/Neu), 암종 관련 상피 세포 부착 분자(EpCAM), 난소 및 자궁 암종 항원(CAI25), 엽산 수용체 a, 정자 단백질 17, 종양 관련 차별적으로 발현되는 유전자-12(TADG-12), 뮤신-16(MUC-16), LI 세포 부착 분자(LICAM), 만난-MUC-1, 인간 내인성 레트로바이러스 K(HERV-K-MEL), 키타큐슈 폐암 항원-I(KK-LC-1), 인간 암/고환 항원(KM-HN-1), 암 고환 항원(LAGE-I), 흑색종 항원-A1(MAGE-Al), 정자 표면 투명대 결합 단백질(Spl 7), 윤활막 육종, X 중단점 4(SSX-4), 일시적 축삭 당단백질-1(TAG-I), 일시적 축삭 당단백질-2(TAG-2), 활성 동족체(ENAH), 맘모글로빈 A, NY-BR-I, 유방암 항원(BAGE-1), B 흑색종 항원, 흑색종 항원-A1(MAGE-Al), 흑색종 항원-A2(MAGE-A2), 뮤신 k, 윤활막 육종, X 중단점 2(SSX-2), 탁솔 저항성 관련 유전자-3(TRAG-3), 조류 골수구종증 바이러스 종양유전자(c-myc), 사이클린 B 1, 뮤신 I (MUC I), p62, 서바이빈, 림프구 공통 항원(CD45), DickkopfWNT 신호전달 경로 억제제 I(DKKI), 텔로머라아제, 커스텐 쥐 육종 바이러스 종양유전자 동족체(K-ras), G250, 장 카르복실 에스테라아제, 알파-태아단백질, 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF), 전립선 특이 막 항원(PSMA), 카스파제 5(CASP-5), 시토크롬 C 산화효소 조립 인자 I 동족체(COA-1), 0-연결 β-N-아세틸글루코사민 전이 효소(OGT), 골육종 증폭 9, 소포체 렉틴(OS-9), 형질전환 성장 인자 베타 수용체 2(TGF-베타RII), 쥐 백혈병 당단백질 70(gp70), 칼시토닌 관련 폴리펩티드 알파(CALCA), 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1(CD274), 마우스 더블 미닛 2 동족체(mdm-2), 알파-액티닌-4, 신장 인자 2, 말산 효소 1(MEI), 핵 전사 인자 Y 서브유닛 C(NFYC), G 항원 1,3(GAGE-1,3), 흑색종 항원-A6(MAGE-A6), 암 고환 항원 XAGE-lb, 전립선의 6개 막 횡단 상피 항원 1(STEAP1), PAP, 전립선 특이 항원(PSA), 섬유모세포 성장 인자 5(FGF5), 열 충격 단백질 hsp70-2, 흑색종 항원-A9(MAGE-A9), Arg-특이 ADP-리보실트랜스퍼라제 패밀리 C(ARTCl), B-Raf 원종양유전자(B-RAF), 세린/트레오닌 키나아제, 베타-카테닌, 세포 분열 주기 27 동족체(Cdc27), 사이클린 의존성 키나아제 4(CDK4), 사이클린 의존성 키나아제 12(CDK12), 사이클린 의존성 키나아제 억제제 2A(CDKN2A), 카제인 키나아제 1 알파 1(CSNK1A1), 피브로넥틴 1(FN1), 성장 정지 특이적 7(GAS7), 당단백질 비전이성 흑색종 단백질 B(GPNMB), HAUS 오그민 유사 복합체 서브유닛 3(HAUS3), LDLR-푸코실트랜스퍼라제, T 세포에 의해 인식되는 흑색종 항원 2(MART2), 미오스타틴(MSTN), 흑색종 관련 항원(돌연변이) 1(MUM-1-2-3), 폴리(A) 폴리머라제 감마(neo-PAP), 미오신 클래스 I, 단백질 포스파타제 1 조절 서브유닛 3B(PPP1R3B), 퍼옥시레독신-5(PRDX5), 수용체형 티로신-단백질 포스파타제 카파(PTPRK), 형질전환 단백질 N-Ras(N-ras), 망막모세포종 관련 인자 600(RBAF600), 시르투인-2(SIRT2), SNRPD1, 트리오스포스페이트 이소머라제, 안구 백색증 1형 단백질(OA1), 구성원 RAS 종양유전자 패밀리(RAB38), 티로시나제 관련 단백질 1-2(TRP-1-2), 흑색종 항원 Gp75(gp75), 티로시나제, 멜란-A(MART-1), 당단백질 100 흑색종 항원(gp100), N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 V 유전자(GnTVf), 림프구 항원 6 복합 유전자좌 K(LY6K), 흑색종 항원-AlO(MAGE-AlO), 흑색종 항원-Al2(MAGE-Al2), 흑색종 항원-C2(MAGE-C2), 흑색종 항원 NA88-A, 탁솔 저항성 단백질 3(TRAG-3), BDZ 결합 키나아제(pbk), 카스파제 8(CASP-8), 육종 항원 1(SAGE), 중단점 클러스터 영역-아벨슨 종양유전자(BCR-ABL), 백혈병의 융합 단백질, dek-can, 신장 인자 Tu GTP 결합 도메인 함유 2(EFTUD2), ETS 변이 유전자 6/급성 골수성 백혈병 융합 단백질(ETV6-AML1), FMS 유사 티로신 키나아제-3 내부 일렬 중복(FLT3-ITD), 사이클린-Al, 피브로넥틴 III형 도메인 함유 3B(FDNC3B,) 전골수구성 백혈병/레티노산 수용체 알파 융합 단백질(pml-RAR알파), 흑색종 항원-Cl(MAGE-Cl), 막 단백질 선택적 스플라이싱 아이소형(D393-CD20), 흑색종 항원-A4(MAGEA4), 및 흑색종 항원-A3(MAGE-A3)으로부터 선택되는 TAA에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 1형 당뇨병, 류마티스 관절염(RA), 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 또는 다발성 경화증(MS) 중 어느 하나로부터 선택되는 자가면역 질환 또는 장애와 관련된 항원에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 카르복시펩티다제 H, 크로모그라닌 A, 글루타메이트 데카르복실라제, 이모젠-38, 인슐린, 인슐린종 항원-2 및 2β 섬-특이적 글루코오스-6-포스파타제 촉매 서브유닛 관련 단백질(IGRP), 프로인슐린, α-에놀라제, 아쿠아포린-4,β 아레스틴, 미엘린 염기성 단백질, 미엘린 희소돌기 아교세포 당단백질, 프로테오리피드 단백질, S100-β 시트룰린화 단백질, 콜라겐 II, 열 충격 단백질, 인간 연골 당단백질, 이중 가닥 DNA, La 항원, 뉴클레오솜 히스톤 및 리보핵 단백질(snRNP), 인지질-β2 당단백질 I 복합체, 폴리(ADP-리보스) 중합효소, U-1 작은 리보핵단백질 복합체의 Sm 항원 중 어느 하나로부터 선택되는 자가면역 질환 또는 장애와 관련된 항원에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 인공항원 수용체는 박테리아, 진균 또는 기생 단백질 또는 이의 단편으로부터의 병원체 관련 항원에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 HIV 감염, 인간 사이토메갈로바이러스 감염, B형 간염 감염, C형 간염 감염, 에볼라 바이러스 감염, 뎅기열, 황열병, 리스테리아증, 결핵, 콜레라, 말라리아, 리슈만편모충증, 또는 트리파노소마 감염, 또는 이들의 조합과 관련된 항원에 결합한다.
일부 실시 양태에서, 인공 항원 수용체는 알츠하이머병(AD) 및 기타 치매, 파킨슨병(PD) 및 PD 관련 장애, 프리온병, 운동 뉴런 질환(MND), 헌팅턴병(HD), 척수소뇌성 운동실조증(SCA) 또는 척수성 근위축증(SMA)으로부터 선택되는 신경퇴행성 장애 또는 질환과 관련된 항원에 결합한다. 일부 실시 양태에서, 신경퇴행성 장애 또는 질환과 관련된 항원은 아밀로이드 β(Aβ), 타우, 알파-시누클레인(α-syn), mHTT 또는 프리온 PrPsc 또는 이들의 조합 중 어느 하나이다.
일부 실시 양태에서, 치료용 폴리펩티드는 사이토카인, 사이토카인 수용체, 케모카인, 케모카인 수용체, 면역원성 폴리펩티드, 또는 다른 세포 표면의 표적에 결합하는 세포 표면 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 면역 세포 조절 단백질은 사이토카인, 케모카인, 전사 인자, 단백질 키나아제, 프로테아제, 세포 신호전달 경로의 구성요소 또는 어댑터 단백질이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 본원에 개시된 RTCR을 발현한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 본원에 개시된 RTCR을 안정적으로 또는 일시적으로 발현한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 본원에 개시된 RTCR을 안정적으로 발현한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 본원에 개시된 RTCR을 일시적으로 발현한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포는 내인성 공동 자극 분자 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 공동 발현한다.
본 개시 내용은 (a) TCR을 코딩하는 내인성 서열의 변형으로 T 세포 수용체(TCR)의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 변형; 및 (b) 본원에 개시된 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)를 포함하는, 변형된 림프구(T 세포)를 제공한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 핵산 변형 시스템을 사용하여 수행된다. 일부 실시 양태에서, 핵산 변형 시스템은 CRISPR/Cas 단백질, 전사 활성화인자 유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN), 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN), 및 엔도뉴클레아제 중 하나 이상이다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 비상동성 말단 결합 복구에 의해 수행된다. 일부 실시 양태에서, 비상동성 말단 결합 복구는 물리적 수단, 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 벡터에 의해 세포에 도입되는 징크 핑거 뉴클레아제에 의해 생성된다. 일부 실시 양태에서, 비상동성 말단 결합 복구는 물리적 수단, 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 벡터에 의해 세포에 도입되는 TALE 뉴클레아제에 의해 생성된다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 TCR의 알파 사슬의 발현 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 TCR의 베타 사슬의 발현 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 TCR의 알파 사슬 및 베타 사슬 모두의 발현 수준을 감소시키거나 제거한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 변형된 T 세포는 내인성 공동 자극 분자 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 공동 발현한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 방법은 주요 조직적합성 복합체(MHC) I형(MHC-I)의 구성요소를 코딩하는 내인성 서열의 변형을 추가로 포함하며, 여기서 변형은 MHC-I의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, 변형은 β2-마크로글로불린의 발현 또는 활성을 감소시키거나 제거한다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 변형된 T 세포를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산 또는 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 다수의 세포를 포함하는 세포 집단을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시 내용은 또한 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 포함하는 세포 집단을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시 내용은 또한 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법으로서, a) 본원에 개시된 다수의 1차 T 세포를 제공하는 단계; b) 본원에 개시된 RTCR, 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산, 또는 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 조성물을 제공하는 단계; 및 c) (b)의 조성물을 (a)의 다수의 1차 T 세포에 도입하여 다수의 변형된 T 세포 내에서 RTCR을 안정하게 발현하는 조건 하에서 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법은 내인성 T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열을 변형시키는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 변형은 내인성 TCR의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법은 내인성 서열을 변형시키는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 변형은 주요 조직적합성 복합체(MHC) I형(MHC-I)의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거한다.
일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 핵산 변형 시스템을 사용하여 수행된다. 일부 실시 양태에서, 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 내인성 서열의 변형은 핵산 변형 시스템을 사용하여 수행된다. 일부 실시 양태에서, 핵산 변형 시스템은 CRISPR/Cas 단백질, 전사 활성화인자 유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN), 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN), 및 엔도뉴클레아제 중 하나 이상이다. 일부 실시 양태에서, 내인성 서열의 변형은 비상동성 말단 결합 복구에 의해 수행된다. 일부 실시 양태에서, 비상동성 말단 결합 복구는 물리적 수단, 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 벡터에 의해 세포에 도입되는 징크 핑거 뉴클레아제에 의해 생성된다. 일부 실시 양태에서, 비상동성 말단 결합 복구는 물리적 수단, 바이러스 벡터, 또는 비-바이러스 벡터에 의해 세포에 도입되는 TALE 뉴클레아제에 의해 생성된다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 TCR의 알파 사슬의 발현 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 TCR의 베타 사슬의 발현 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형은 TCR의 알파 사슬 및 베타 사슬 모두의 발현 수준을 감소시키거나 제거한다.
일부 실시 양태에서, 주요 조직적합성 복합체(MHC) I형(MHC-I)의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 내인성 서열의 변형, 여기서 내인성 서열의 변형은 MHC-I의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거한다. 일부 실시 양태에서, 내인성 서열의 변형은 β2-마크로글로불린의 발현 또는 활성을 감소시키거나 제거한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 방법은 d) 다수의 변형된 T 세포를 적합한 세포 배양 배지에서 유지 또는 증식하는 단계; 및 e) i) 다수의 변형된 T 세포를 적합한 세포 동결 배지에서 동결 보존하는 단계; 또는 ii) 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에게 투여하기 위해 다수의 변형된 T 세포를 준비하는 단계를 추가로 포함한다.
대상체에게 투여하기 위한 본 개시 내용의 세포 또는 변형된 T 세포를 포함하는 조성물, 및 본 개시 내용의 방법에 의해 생산된 다수의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 조성물이 약학 제품으로서 제제화 및/또는 대상체에 투여에 안전하고 효능이 있음을 나타내는 하나 이상의 "출하 기준"을 충족시킬 것이 요구될 수 있다. 출하 기준은 본 개시 내용의 조성물(예를 들어, 본 개시 내용의 세포 또는 변형된 T 세포)이 이들의 세포 표면 상에 본 개시 내용의 RTCR을 발현하는 특정 백분율의 세포 또는 변형된 T 세포를 포함한다는 요건을 포함할 수 있다. 확장 과정은 특정 기준이 충족될 때까지 계속되어야 한다(예를 들어, 본 개시 내용의 세포 또는 변형된 T 세포의 특정 총 수 또는 본 개시 내용의 RTCR을 발현하는 세포 또는 변형된 T 세포의 총 수의 특정 백분율 달성).
특정 기준은 확장 과정이 종료되어야 하는 지점을 나타낸다. 예를 들어, 세포가 300 fL의 세포 크기에 도달하면 세포를 제제화, 재활성화 또는 동결 보존해야 한다(그렇지 않으면 이 임계값 이상의 크기에 도달한 세포는 사멸하기 시작할 수 있음). 세포 집단이 300 fL 미만의 평균 세포 크기에 도달하면 즉시 동결 보존하는 것은 세포가 동결 보존 전에 아직 완전히 정지 상태에 도달하지 않았기 때문에 해동 및 배양 시 더 나은 세포 복구를 산출할 수 있다(완전히 정지된 크기는 약 180 fL임). 확장 전에, 본 개시 내용의 T 세포는 약 180 fL의 세포 크기를 가질 수 있지만, 확장 후 3일에 그들의 세포 크기를 약 900 fL로 4배 이상 증가시킬 수 있다. 다음 6-12일에 걸쳐 T 세포 집단은 세포 크기를 천천히 감소시켜 180 fL에서 완전히 정지할 것이다.
제제화를 위한 세포 집단을 준비하는 과정은 세포 집단의 세포를 농축하는 단계, 세포를 세척하는 단계, 및/또는 특정 표면 발현 마커에 대한 약물 내성 또는 자기 비드 분류를 통한 세포의 추가 선별 단계를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 제제화를 위한 세포 집단을 준비하는 과정은 최종 생성물의 안전성과 순도를 보장하기 위한 분류 단계를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 환자로부터의 종양 세포가 본 개시 내용의 변형된 T 세포를 자극하기 위해 사용되었거나 제제화를 위해 준비되고 있는 본 개시 내용 변형된 T 세포를 자극하기 위해 변형된 경우, 환자로부터의 종양 세포가 최종 생성물에 포함되지 않는 것이 중요하다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 세포 또는 본원에 개시된 변형된 T 세포는 본원에 개시된 돌연변이 CD137 또는 CD134 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 RTCR을 각각 야생형 CD137 또는 야생형 CD134 세포 내 도메인을 포함하는 공동 자극 분자의 발현 수준과 비교하여 적어도 약 2X, 3X, 4X, 5X, 6X, 7X, 8X, 9X, 10X 또는 20X 더 많은 수준으로 세포 표면 상에 발현한다.
약학 조성물 또는 제제
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 조성물, 및 본원에 개시된 방법을 사용하여 생산된 변형된 T 세포 집단은 약학 제제(또는 조성물)의 형태이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 약학 제제는 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본 개시 내용의 약학 제제는 주입, 동결 보존 및/또는 보관을 위해 백에 분배될 수 있다.
본 개시 내용의 약학 제제는 표준 프로토콜 및 선택적으로 주입가능한 동결 보존 매질을 사용하여 동결 보존될 수 있다. 예를 들어, 동결 관련 독성을 줄이기 위해 DMSO 무함유 동결 보존제(예를 들어, CryoSOfree™ DMSO 무함유 동결 보존 매질)를 사용할 수 있다. 본 개시 내용의 동결 보존된 약학 제제는 나중에 환자에게 주입하기 위해 보관될 수 있다. 효과적인 치료는 본 개시 내용의 약학 제제의 다중 투여를 필요로 할 수 있고, 따라서 제약 제제는 냉동 보관될 수 있지만 개별 용량의 해동을 위해 분리될 수 있는 미리 분취된 "용량"으로 포장될 수 있다.
본 개시 내용의 약학 제제는 실온에서 보관될 수 있다. 효과적인 치료는 본 개시 내용의 약학 제제의 다중 투여를 필요로 할 수 있고, 따라서 약학 제제는 함께 보관될 수 있지만 개별 용량의 투여를 위해 분리될 수 있는 미리 분취된 "용량"으로 포장될 수 있다.
본 개시 내용의 약학 제제는, 예를 들어 병태의 관해 및 재발 후에 미래 날짜에 투여를 필요로 할 수 있는 동종 요법의 경우에 동일한 환자에 대한 추가 용량의 생성을 위한 후속 재확장 및/또는 선택을 위해 보관될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, 본 개시 내용은 바람직하게는, 약학적으로 허용 가능한 제제에 적어도 하나의 변형된 세포를 포함하는, 식염수 또는 선택된 염을 이용한 인산염 완충제를 포함하는 안정한 제제, 뿐만 아니라 보존제를 함유하는 보존 용액 및 제제 뿐만 아니라 약학 또는 수의학 용도에 적합한 다용도 보존 제제를 제공한다. 보존 제제는 적어도 하나의 공지된 방부제를 함유하거나 선택적으로 수성 희석제 중 적어도 하나의 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 페닐수은 아질산염, 페녹시에탄올, 포름알데히드, 클로로부탄올, 염화마그네슘(예를 들어, 6수화물), 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 소듐 데히드로아세테이트 및 티메로살, 중합체, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 방부제를 함유한다. 약 0.0015%, 또는 임의의 범위, 값, 또는 그 안의 분수와 같은 임의의 적합한 농도 또는 혼합물이 당업계에 공지된 바와 같이 사용될 수 있다. 비제한적 예는 방부제 없음, 약 0.1-2% m-크레졸(예를 들어, 0.2, 0.3.0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 약 0.1-3% 벤질 알코올(예를 들어, 0.5, 0.9, 1.1, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 약 0.0 01-0.5% 티메로살(예를 들어, 0.005, 0.01), 약 0.001-2.0% 페놀(예를 들어, 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005-1.0% 알킬파라벤(들)(예를 들어, 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01, 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%) 등을 포함한다.
상기 언급된 바와 같이, 본 개시 내용은 선택적으로 수성 희석제에 처방된 완충제 및/또는 보존제와 함께 적어도 하나의 변형된 세포의 용액을 포함하는 적어도 하나의 바이알과 포장재를 포함하는 제조품을 제공하며, 여기서 상기 포장재는 상기 용액이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72시간 이상의 기간에 걸쳐 유지될 수 있음을 나타내는 라벨을 포함한다.
본 개시 내용의 제조품은 즉시 내지 24시간 이상의 기간에 걸친 투여에 유용하다. 따라서, 현재 청구된 제조품은 환자에게 상당한 이점을 제공한다. 본 개시 내용의 제제는 선택적으로 약 2℃ 내지 약 40℃의 온도에서 안전하게 보관될 수 있고 연장된 기간 동안 단백질의 생물학적 활성을 유지할 수 있어, 용액이 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 또는 96시간 이상의 기간에 걸쳐 유지 및/또는 사용될 수 있음을 나타내는 포장 라벨을 허용한다.
본 개시 내용의 제품은 포장재를 포함한다. 포장재는 규제 기관에서 요구하는 정보 외에 제품을 사용할 수 있는 조건을 제공한다.
본 개시 내용은 또한 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 RTCR을 코딩하는 핵산 또는 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 세포의 치료적 유효수, 본원에 개시된 변형된 T 세포 중 어느 하나의 치료적 유효수, 본원에 개시된 조성물 중 어느 하나의 치료적 유효량, 또는 본원에 개시된 방법에 의해 생산된 다수의 변형된 T 세포의 치료적 유효수를 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
일부 실시 양태에서, 대상체는 포유동물이다. 일부 실시 양태에서, 포유동물은 인간, 영장류, 설치류, 개, 고양이, 유제류, 말 및 돼지 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, 포유동물은 인간이다. 일부 실시 양태에서, 질환 또는 장애는 암, 자가면역 질환, 감염성 질환, 염증성 질환 또는 병태, 신장 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 간 질환 또는 장애, 심혈관계 질환 또는 장애, 신경퇴행성 장애 또는 질환, 또는 대사 장애 또는 질환 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, 암은 고형 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시 양태에서, 감염성 질환은 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물, 또는 기생충에 의해 유발된다. 일부 실시 양태에서, 신경퇴행성 장애 또는 질환은 알츠하이머병(AD) 및 기타 치매, 파킨슨병(PD) 및 PD 관련 장애, 프리온병, 운동 뉴런 질환(MND), 헌팅턴병(HD), 척수소뇌성 운동실조증(SCA) 또는 척수성 근위축증(SMA) 중 어느 하나이다.
본 개시 내용은 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 공동 자극 세포 내 단백질(CIP)을 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
본 개시 내용은 또한 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 공동 자극 세포 내 단백질(CIP)을 제공하며, 여기서 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고; 적어도 제2 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인을 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, TNFR 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인 중 어느 하나이다. 일부 실시 양태에서, CIP는 막 횡단 도메인을 추가로 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 절단형 CD137 세포 내 도메인이다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 위치 13 내지 아미노산 위치 42에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 1에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 3에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1, 2, 3 또는 4개의 리신 잔기(들)의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 5, 6 및 12로부터 선택된 아미노산 위치에 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 절단형 CD134 세포 내 도메인이다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 위치 15 내지 아미노산 위치 37에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개 이상의 아미노산의 결실을 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 6에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 리신 잔기의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 포함한다.
본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 본 개시 내용의 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2, 및 5로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 CD28 패밀리의 단백질로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 CD28, CD28H, ICOS 또는 이들의 조합 중 어느 하나로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 ICOS로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, ICOS로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 서열 번호 9에 따른 ICOS 도메인과 결합된 CD28 세포 내 도메인의 일부를 포함하는 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 12 또는 109 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 10에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 본원에 개시된 CIP의 일부 실시 양태에서, CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 121-122 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CIP는 서열 번호 14-17 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 제3 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인 또는 이들의 조합 중 어느 하나로부터 유래된 제3 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 CD3 신호전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 CD3 신호전달 도메인은 서열 번호 18, 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 18에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 18과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 45에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 45와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 46에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 46과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD38ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 47에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ε 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 47과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ε 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 CD3ε과 절단형 CD3ζ 도메인의 조합(CD3ζε 도메인)이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 48에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 48과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이 CD2 신호전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 49와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD2 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제3 신호 전달 도메인은 서열 번호 50과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 제4 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인 또는 이들의 조합 중 어느 하나로부터 유래된 제4 신호 전달 도메인을 추가로 포함하며, 여기서 제3 및 제4 신호 전달 도메인은 동일하지 않다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 18, 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 18에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 18과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 45에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 45와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 46에 따른 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 46과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 절단형 CD3ζ 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 47에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ε 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 47과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ε 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 CD3ε과 절단형 CD3ζ 도메인의 조합(CD3ζε 도메인)이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 48에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 48과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζε 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 돌연변이CD2 신호전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 CD2 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 49와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD2 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP의 제4 신호 전달 도메인은 서열 번호 50과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 IL-2RB 단백질 신호전달 도메인이다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 T 세포에서의 발현을 위한 것이며, 여기서 T 세포는 내인성 공동 자극 분자 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 공동 발현한다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 T 세포에서 T 세포 수용체(TCR)와 공동 발현된다. 일부 실시 양태에서, TCR은 내인성 TCR이다. 일부 실시 양태에서, TCR은 인공 TCR이다. 일부 실시 양태에서, 인공 TCR은 친화성 강화 TCR이다. 일부 실시 양태에서, CIP는 T 세포에서 TCR과 공동 발현될 때 T 세포의 활성화 및 증식을 유도하기 위한 제2 활성화 신호를 제공하고, 여기서 제1 활성화 신호는 TCR에 의한 항원 결합에 의해 제공된다.
일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 표적에 대한 인공 수용체의 구성요소로서 T 세포에서 발현된다. 일부 실시 양태에서, 인공 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR), 리간드 또는 이의 구성요소에 대한 수용체, 항체 또는 이의 단편이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 CAR의 구성요소로서 발현된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 CIP는 항체 또는 이의 단편의 구성요소로서 발현된다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 이의 단편은 Fab 단편, F(ab)2 단편, 디아바디, 나노바디, sdAb, Fv, VHH 단편, 또는 단일 사슬 Fv 단편이다. 일부 실시 양태에서, 본원에 개시된 바와 같이 T 세포에서 인공 수용체의 구성요소로서 발현된 CIP는 인공 수용체에 의한 표적 결합 시 T 세포의 활성화 및 증식을 유도한다.
용어 "약" 또는 "대략"은 명시된 값의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 또는 0.01% 이내로 이해될 수 있다. 일부 실시 양태에서, "약" 또는 "대략"은 명시된 값의 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 이내로 이해될 수 있다. 일부 실시 양태에서, "약" 또는 "대략"은 명시된 값의 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 또는 0.01% 이내로 이해될 수 있다. 일부 실시 양태에서, "약" 또는 "대략"은 명시된 값의 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 또는 0.01% 이내로 이해될 수 있다.
하기 실시예는 본 개시 내용을 더 잘 설명하기 위해 제공되며 본 개시 내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 특정 물질을 언급될 경우 이는 예시에 불과하며, 본 개시 내용을 제한하려는 의도는 아니다. 당업자는 발명 능력을 발휘하지 않고 본 개시 내용의 범위를 벗어나지 않고 동등한 수단 또는 반응물을 개발할 수 있다.
실시예
재료 및 방법
배지 및 세포주
DMEM에 Penn/Strep/글루타민, 20mM HEPES, 10㎍/mL 젠타마이신 및 10% FBS를 보충하여 완전 DMEM을 만들었다. RPMI에 Penn/Strep/글루타민, 20mM HEPES, 10㎍/mL 젠타마이신, 10% FBS 및 50uM 2-ME를 보충하여 완전 RPMI를 만들었다. 완전 RPMI에 50ng/ml IL2, 10ng/ml IL7, 및 10ng/mL IL15(Peprotech)를 보충하여 T 세포 성장 배지를 만들었다. X-Vivo15에 1% 인간 혈청, 20mM HEPES, Penn/Strep/글루타민, 및 10㎍/mL 젠타마이신을 보충하여 사이토카인 배지를 만들었다. 인간 PBMC는 iSpecimen에서 구입하여 완전 RPMI에서 배양하였다. 293FT는 Invitrogen에서 구입하였다. K562 및 A375 세포는 ATCC에서 구입하여 완전 DMEM에서 배양하였다.
플라스미드 및 클로닝
절단형 인간 EGFR 수용체(huEGFRt)를 유도하는 PGK 프로모터에 이어서 GFP를 유도하는 MSCV 프로모터 및 후속 WPRE 서열을 함유하는 렌티바이러스 플라스미드를 vector builder 로부터 주문하였다. 공동 자극 분자에 이은 P2A 서열을 단일 유전자 블록(Invitrogen)으로 주문하고 NEB builder 상동성 기반 재조합을 사용하여 huEGFRt 서열과 인 프레임으로 배치하였다. CAR 및 TCR 서열은 3개의 유전자 블록 단편(Invitrogen)으로부터 구성하였고 GFP 절제 후 MSCV 프로모터의 하류에 NEB builder로 클로닝하였다. PD-L1_P2A 및 HLA-A2는 각각 huEGFRt와 인 프레임으로 GFP 대신 클로닝하였다.
P2A 아미노산 서열 (서열 번호 111)
GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
인간 EGFRt 아미노산 서열 (다른 명칭: huEGFRt (AA112)) (서열 번호 112)
HLA-A2 신호 펩티드 (서열 번호 113)
MAVMAPRTLVLLLSGALALTQTWA
huGMCSF 신호 펩티드, 아미노산 서열 (서열 번호 119)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP
P2A 핵산 서열 (서열 번호 114)
인간 EGFRt 핵산 서열 (서열 번호 115)
HLA-A2 신호 펩티드 핵산 서열 (서열 번호 116)
CD8a 신호 펩티드 핵산 서열 (서열 번호 148)
CD8a 힌지 (서열 번호 149)
huGMCSF 신호 펩티드, 핵산 서열 (서열 번호 150)
렌티바이러스 생산 및 Retronectin 플레이트의 준비
VSV 슈도타입 렌티바이러스는 6웰 플레이트에서 생산하였다. 간략하게, 293FT를 각각 0.9x106 또는 1.4x106 세포/웰에서 전날 밤 또는 당일에 시딩하였다. 세포가 부착되고 적어도 80% 컨플루언시(confluency)에 도달하면 제조업체의 프로토콜에 따라 렌티바이러스 플라스미드, 패키징 벡터(psPAX2) 및 VSV-G 엔벨로프 발현 플라스미드(PMD2.G)의 혼합을 리포펙타민 3000(Invitrogen)을 사용하여 형질감염시켰다. 18시간 후, 배지를 3mL의 새로운 DMEM으로 교체하였다. 배지를 교체하고 48시간 후에 바이러스 상청액을 수거하고 1500RPM에서 회전시켜 293FT 세포/파편을 제거하였다. Retronectin을 37℃에서 2시간 동안 또는 4℃에서 밤새 PBS-/-에서 20㎍/웰로 24웰 비조직 배양 처리된 플레이트에 코팅하였다. Retronectin을 제거하고 PBS로 1회 세척한 후 렌티바이러스 SN(2mL)을 첨가하였다. 그런 다음 플레이트를 32℃에서 90분 동안 1500G에서 회전시켜 Retronectin에 바이러스 입자를 농축하였다. 렌티바이러스 SN은 1차 T 세포 또는 종양 세포의 형질도입 직전에 제거하였다. 대안적으로, T 세포를 32℃에서 2시간 동안 800G의 스핀펙션으로 8ug/mL의 폴리브렌으로 형질도입하였다.
T 세포 배양, 형질도입, 및 단리
인간 PBMC를 T 세포 성장 배지에서 완전 RPMI 중 CD3/28 마이크로비드(Invitrogen)로 활성화시켰다(100ul 비드/50x106 PBMC). 활성화 48시간 후, 활성화된 PBMC를 48시간 동안 렌티바이러스-코팅된 Retronectin 플레이트로 옮긴 후 새로운 T 세포 성장 배지가 들어있는 6웰 플레이트로 옮겼다. 추가 24시간 후 배양물에서 세포 형질도입을 유세포 분석법으로 측정하고 형질도입된 세포를 huEGFRt 발현에 기초하여 농축하였다. EGFR 발현을 기반으로 세포를 단리하기 위해 T 세포 배양물을 수집하고 활성화 비드를 제거하였다. 그런 다음 세포를 4℃에서 30분 동안 MACS 완충액에서 1:100 항-EGFR-APC 항체로 염색하였다. 그런 다음 세포를 세척하고 4℃에서 15-30분 동안 항-APC 마이크로비드(Miltenyi)와 함께 인큐베이션하였다. 이어서 결합되지 않은 마이크로비드를 원심분리에 의해 제거하고 huEGFRt 세포를 mini-MACS 컬럼 상에서 양성 선별에 의해 단리하였다. mini-MACS 컬럼에서 세포를 용출하고 다시 T 세포 성장 배지에서 배양하여 2주 이내에 실험에 사용하였다. 안정적인 세포주를 생성하기 위해 세포를 수집하고 1차 T 세포와 마찬가지로 형질도입하였다. EGFR 선별을 2주 간격으로 2회 수행하였다.
T 세포 자극
플레이트 결합된 항체로 T 세포를 자극한 경우, maxisorp 편평 바닥 플레이트(Invitrogen)를 PBS-/-에서 표시된 양의 항-인간 CD3 항체(HIT3a-Biolegend)로 37℃에서 2시간 동안 코팅하였다. 플레이트를 사용하기 전에 기본 RPMI에서 2회 세척하였다. K562 자극을 위해 K562 세포를 수집하고 사이토카인 배지에 재현탁하고 U-바닥 플레이트에 분취하였다. 유사하게, A375 세포는 96웰 편평 바닥 플레이트에서 DMEM에 T 세포를 첨가하기 1일 전에 플레이팅하였다. 동족 T 세포를 첨가하기 전에 배지를 교환하였다. EGFR+ 선별 후, T 세포를 수집하고, 계수하고, 사이토카인 배지에서 적절한 농도로 재현탁하고 항체 또는 APC 함유 웰에 분배하였다. K562 실험을 위해 37℃에서 1-2시간의 K562/T 세포 상호작용 후 항-CD3(HIT3a/Biolegend)를 표시된 용량으로 첨가하였다. T 세포 증식을 추적해야 하는 경우 자극 플레이트에 추가하기 전에 Biolegend의 프로토콜에 따라 T 세포를 Violet Tracking Dye(CTV)로 표지하였다. 자극 후 18-36시간에 상청액을 수집하여 사이토카인 분비를 평가하고 자극 96시간 후에 증식/T 세포 살해를 평가하였다.
사이토카인 다중 분석
T 세포 상층액 수집 후 사이토카인은 인간 Th 또는 Th1 사이토카인을 위한 Legendplex Multi-Analyte Flow Assay Kit(Biolegend)로 측정하였다. 다음을 제외하고 제조 프로토콜을 따랐다: 75uL T 세포 SN을 사용하여 사이토카인을 측정하고 웰당 2uL의 각 시약을 사용하였다. 분비된 사이토카인을 유세포 분석법으로 측정하고 값을 대조군의 최대 반응에 정규화하여 여러 실험을 결합 및 분석하고 실험과 공여자 사이의 변동성에 대해 정규화하였다.
접합 분석
표적 세포에 대한 T 세포의 접합을 평가하기 위해, 제조업체의 프로토콜에 따라 T 세포를 CFSE(Biolegend)로 표지하고 K562_HLA-A2 또는 K562_HLA-A2_PD-L1 세포를 CTV로 표지하였다. T 세포와 APC를 1:2 비율로 혼합하고 접합을 조장하기 위해 1.5mL 에펜도르프 튜브에서 잠시 원심분리하였다. 세포 펠렛을 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 다음 p200 및 컷오프 피펫 팁을 사용하여 반복 피펫팅(20x)하여 세포 펠렛을 부드럽게 재현탁하고 유세포 분석법으로 즉시 평가하였다.
유세포분석
세포를 수집하고 MACS 완충액(PBS-/-, 1%FBS, 1mM EDTA)에서 세척한 후 관련 항체를 포함하는 MACS 완충액에서 염색하였다. 항-EGFR-APC, 항-마우스 TCR베타-FITC, 항-인간 PD1-PE, 항-CD3 APC-Cy7, 항-CD8 PE-Cy7은 모두 biolegend에서 구입하였다. 항체를 첨가한 후, 세포를 4℃에서 30-60분 동안 염색하였다. CD-19 CAR 발현 세포의 검출을 위해 MACS 완충액에서 CD-19Fc 재조합 단백질과 1㎍/mL로 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 세척하고 1:100 희석으로 항-인간 FC 항체와 인큐베이션하였다. 그런 다음 세포를 MACS 완충액에서 3회 세척하고 Acea NovoCyte 유세포 분석기에서 분석하였다. 일정한 부피로 세포를 수집하여 정확한 세포 수를 얻을 수 있었다.
실시예 1: 키메라 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 공동 자극 분자의 설계
본원의 개시 내용은 [도 1]에 도시된 바와 같은 CD137/4-1BB 또는 CD134/OX-40 수용체를 포함하거나 그로부터 유래된 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 공동 자극 분자의 설계를 제공한다. 세포질 꼬리의 CD137 패밀리의 서열을 조사한 결과(도 1) 공통의 막 근위 다염기성 도메인뿐만 아니라 유비퀴틴화 부위로 작용할 수 있는 여러 리신 잔기, 및 수용체 결찰 후 NF-kB 신호전달 경로를 활성화시키는 역할을 하는 TRAF 결합 도메인을 보여주었다. 이론에 구속되지 않고, 보존된 리신 잔기는 CD134/CD137의 유비퀴틴화 및 분해를 제어할 수 있는 유비퀴틴화 부위로서 기능을 할 수 있고 잠재적인 CD28/ICOS-CD137 CAR 또는 CD28/ICOS-CD134 CAR 수용체 각각에서 CD137 또는 CD134 세포질 꼬리의 파괴된 위치는 다염기성 도메인 또는 보존된 리신 잔기를 통해 생성된 분자의 국소화 또는 반감기에 영향을 주고 있을 수 있다. ICOS/CD28 세포 내 도메인과 다염기성 서열 및 보존된 리신 잔기가 결여된 CD137 또는 OX-40의 세포질 도메인의 새로운 융합 도메인, 뿐만 아니라 이들의 야생형(WT) 대응물을 생성하였다(도 2a 및 2b). 자극을 강화할 수 있는 Lck 및 Vav3의 결합을 담당하는 CD28의 세포질 도메인의 일부도 포함시켰다. PD-1의 세포 외 도메인을 사용하여 세포 내 꼬리의 생략에 의한 우성-음성(DN) 버전 또는 음성 조절 신호를 양성 신호로 변경하여 세포 고유의 PD-1 차단을 제공하는 억제 스위치 수용체를 생성하였다. 본원에 기재된 세포질 꼬리, 즉, 세포 내 공동 자극 도메인을 관심 있는 다른 신호 단백질의 세포질 꼬리의 사용을 통해 확장하여 [도 3]에 상세히 설명된 바와 같이 새로운 CAR 수용체 또는 상이한 억제 스위치 수용체를 생성하거나 다른 면역조절 세포 외 도메인을 발현할 수 있다.
실시예 2: 체크포인트 공동 자극 분자의 시험관 내 기능의 생성 및 테스트
본원의 개시 내용은 공동 자극 분자의 설계 및 고친화성 TCR의 기능에 대한 이들의 효과 검증을 제공한다. 본원에 기재된 공동 자극 분자는 [도 2a 및 도 2b]에 도시된 바와 같이 설계하였다. 모든 재조합 수용체에서 PD1 신호 펩티드(SP)를 수용체의 표면 발현을 증가시키는 HLA-A2의 신호 펩티드로 교환하였다. 대조군으로서, PD1-WT 및 ITIM-함유 세포 내 꼬리(TL)가 결여된 절단형 PD-1를 포함하였다. CD28 또는 ICOS의 막 횡단 및 세포 내 도메인을 함유하는 2개의 2세대 수용체를 2세대 대조군 수용체로 포함하였다. 추가로, TNF-수용체 슈퍼패밀리 구성원의 세포 내 신호전달 도메인에 연결된 ICOS 및/또는 CD28로부터 유래된 막 횡단 및 세포 내 도메인을 함유하는 15개의 3세대 수용체를 생성하였다. 첫 번째는 야생형 CD137/4-1BB의 세포 내 도메인을 함유(HLA A2-SP_PD1_ ICOS_BB: 서열 번호 26)한 반면, 두 번째 및 세 번째는 표면 발현을 증가시키도록 포함된 주요 돌연변이를 갖는 CD137/4-1BB 도메인 또는 CD134/OX-40 세포 내 도메인을 함유하였다(HLA A2-SP_PD1_ICOS_BBt: 서열 번호 27 및 HLA A2-SP_PD1_ ICOS_OX40t: 서열 번호 28, 각각). 본원에 기재된 추가의 3세대 수용체는 돌연변이 CD137(ICOS4BBt) 또는 돌연변이 CD134/OX40(ICOS-OX40t) 도메인에 추가로 연결된 ICOS 세포 내 도메인 내에 삽입된 CD28 세포 내 도메인의 일부를 포함하는 키메라 세포 내 도메인을 함유한다(HLA A2-SP_PD1_ICOS(28)_BBt: 서열 번호 29 및 HLA A2-SP_PD1_ICOS(28) _OX40t: 서열 번호 30). 돌연변이 CD137(28_BBt) 또는 돌연변이 CD134/OX40(28_OX40t) 도메인에 연결된 CD28 세포 내 도메인을 함유(HLA A2-SP_PD1_28_BBt: 서열 번호 131 및 HLA A2-SP_PD_28_OX40t: 서열 번호 132)하는 2개 이상의 3세대 수용체를 본원에 기재된 바와 같이 생성하였다(도 2a). 이들 벡터를 렌티바이러스 벡터에 클로닝하고, 형질도입된 세포의 추적 및 자기 선별을 위해 절단형 huEGFR 수용체(huEGFRt)에 자가 절단 펩티드에 의해 융합시켰다. 이들 수용체가 1차 T 세포에 렌티바이러스 형질도입에 의해 발현되었을 때, 각각의 수용체는 내인성 PD-1 수준 이상으로 상당히 발현되었다(도 4a). 2세대 공동 자극 분자가 잘 발현되는 반면, CD137(4-1BB) 세포 내 도메인의 포함은 재조합 수용체의 표면 발현을 상당히 감소시키는 결과를 낳았다. 본원의 개시 내용은 TRAF-결합 도메인을 유지하는 돌연변이형 세포 내 도메인의 포함이 이들 최적화된 3세대 수용체의 표면 발현을 구조한다는 것을 보여준다. huEGFRt 및 공동 자극 분자의 표면 발현은 비절단형 버전(ICOS_BBwt)과 비교하여 절단형 CD137(4-1BB) 설계(ICOS_BBt)의 증가된 발현을 입증한다. CD134(OX-40)의 세포질 도메인에서 유사한 돌연변이는 또한 공동 자극 분자의 높은 표면 발현을 초래하였다(도 4b).
형질도입 후, huEGFRt의 발현에 기초하여 T 세포를 >90% 순도로 단리하고, 재자극 실험에 사용하였다. 본원에 개시된 결과는 공동 자극 분자의 시험관 내 결합이 특히 더 낮은 용량의 항-CD3 항체에서 T 세포 사이토카인 생산 및 증식을 향상시켰음을 입증한다(도 5a-5d). 더 많은 생리학적 시스템을 만들기 위해, HLA-A2 단독 또는 PD-L1과 함께 HLA-A2를 K562 세포에서 과발현시키고 공동 자극 수용체-형질도입 T 세포 및 표시된 용량의 항-CD3와 함께 인큐베이션하였다. K562: PD-L1 세포와 인큐베이션은 특히 PD1_WT를 과발현하는 T 세포에서 분비된 사이토카인의 양을 감소시켰다(도 6a). PD1_TL 또는 PD1_ICOS_BBwt의 발현은 IL-2, TNF 또는 IFNγ의 분비에 거의 영향을 미치지 않았지만, PD1_28 또는 PD1_ICOS의 발현은 PD-L1 발현 K562 세포의 존재 하에서 GFP 대조군에 비해 이펙터 사이토카인 분비를 3-4배 증가시켰다. 특히, PD1_ICOS_BBt 및 PD1_ICOS_OX40t 공동 자극 분자 둘 다 이 효과를 더욱 개선하여, PD-L1의 존재 하에 PD1_ICOS 발현 세포에 비해 이펙터 사이토카인 분비를 2배 내지 3배 증가시켰다(도 6c). PD1_28, PD1_28_BBt 및 PD1_28_OX40t의 발현은 유사한 이펙터 사이토카인 분비를 초래하였다(도 6b). 구축물 중 어느 것도 구성적으로 활성이 아니었으며 PD-L1 또는 항-CD3의 부재 시 사이토카인 분비에 최소한의 영향을 미쳤으며, 이는 T 세포 반응을 개시하기 위해 PD-1 및 항원 모두의 필요성을 나타낸다. 사이토카인 데이터에 따라, a) PD1_28, PD1_28_BBt 및 PD1_28_OX40t(도 7a, 하부 패널, 및 도 7C), 및 b) PD1_ICOS_BBt 및 PD1:ICOS_OX40t(도 7b, 하부 패널 및 도 7c)를 발현하는 T 세포는 PD-L1을 발현하는 K562 세포에 대한 반응하여 가장 잘 증식하였고 PD-L1 발현 K562 세포를 가장 잘 사멸시킬 수 있었다(도 7a-7b, 상부 패널). 사이토카인 데이터에 따라, PD1_ICOS_BBt 및 PD1_ICOS_OX40t를 발현하는 T 세포는 PD-L1을 발현하는 K562 세포에 반응하여 가장 잘 증식하였고 PD-L1 발현 K562 세포를 가장 잘 사멸시킬 수 있었다(도 7c-7e). 역시, 이 반응에는 항-CD3 및 PD-L1 발현이 모두 필요하였다. 공동 자극 분자는 세포가 항-CD3 및 항-PD1로 코팅된 96웰 플레이트에서 자극되었을 때 그들의 발현이 T 세포 증식을 증가시켰기 때문에 공동 자극 능력을 입증하였다(도 8).
다염기성 및 리신 잔기의 돌연변이를 갖는 수용체의 효과는 공동 자극 분자의 표면 발현(도 9a-9b), 항-CD3 항체를 사용한 자극에 반응하는 이펙터 사이토카인 생산(도 9c) 및 PD-L1을 발현하는 표적 세포를 사용한 자극에 반응하는 T 세포 증식(도 9d)의 측면에서 PD1_ICOS_BBt 공동 자극 분자보다 작다. PD1_ICOS_OX40t 수용체(절단형 OX40 세포 내 도메인을 가짐)공동 자극 분자의 표면 발현(도 10a-10b), 항-CD3 항체를 사용한 자극에 반응하는 이펙터 사이토카인 생산(도 10c), 및 PD-L1을 발현하는 표적 세포를 사용한 자극에 반응하는 T 세포 증식(도 10d) 모두의 측면에서 야생형 PD1_ICOS_OX40wt 수용체(야생형 OX40 세포 내 도메인을 가짐)의 효과와 비슷한 효과를 보였다.
또한, ICOS 기반 공동 자극 분자는 흐름 기반 접합 분석에서 T 세포: PD-L1 발현(PD-L1+) 표적 세포 상호작용을 조장하였으며, 이는 이들 수용체가 동족 항원을 스캐닝하는 동안 연장된 T 세포-APC 상호작용을 조장함을 시사하며, 이는 TME에서 낮은 존재비 항원을 스캐닝할 때 유용한 특성이다(도 11a-11b).
본원의 개시 내용은 본원에 개시된 변형된 3세대 세포 내 신호전달 도메인에 기반한 공동 자극 분자가 PD-L1+ 표적 세포에 반응할 때 T 세포 이펙터 기능을 향상시키는 데 있어서 현재 존재하는 PD1_28 공동 자극 분자보다 우수함을 보여준다. 여기에는 증가된 T 세포 증식, 사이토카인 분비 및 표적 세포 살해가 포함된다. 본원에 개시된 3세대 세포 내 신호전달 도메인은 TAA를 표적화하는 TCR-T 요법과 성공적으로 조합될 수 있다.
실시예 3: 시험관 내 전임상 연구
특정 HLA-A2/NY-ESO 특정 TCR만을 발현하는 T 세포와 비교하여 T 세포 표면 상의 공동 자극 분자의 발현(도 12a), 이펙터 사이토카인 생산(도 12b), 및 NY-ESO를 발현하는 표적 세포의 살해(도 12c)를 증가시키는 특정 HLA-A2/NY-ESO 특이적 TCR 및 ICOS 및 돌연변이 CD137 신호전달 도메인을 포함하는 공동 자극 분자를 발현하는 T 세포를 본원에서 개시한다.
본원에 개시된 변형된 3세대 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 CD-19 CAR 구축물이 본원에 기재된다. 본원에 기재된 3세대 세포 내 신호전달 구축물을 갖는 CD-19(FMC63scFV) CAR은 세포 내 키메라 도메인을 포함하는 다음의 구축물을 포함한다: CD28-CD137-CD3ζ(28_BBwt_z) CD28-CD137돌연변이-CD3ζ(28_BBt_z) CD28-CD134돌연변이-CD3ζ(28_ OX40t_Z) ICOS-CD137-CD3ζ(ICOS_BB_z) ICOS-CD137돌연변이-CD3ζ(ICOS_BBt_z), 및 ICOS-CD134돌연변이-CD3ζ(ICOS_OX40t_z). 또한 ICOS 도메인 내에 CD28의 일부가 삽입된 다음의 3세대 세포 내 신호전달 구축물을 갖는 CD-19 CAR을 제공한다: ICOS(28)-CD137-CD3ζ(ICOS(28)_BBwt_z) ICOS(28)-CD137돌연변이-CD3ζ(ICOS(28)_BBt_z), 및 ICOS(28)-CD134돌연변이-CD38ζ(ICOS(28)_OX40t_z). CD137-CD3ζ(BBwt_z) CD28-CD3ζ(28_z) 및 ICOS- CD3ζ(ICOS_z)를 포함하는 2세대 구축물을 대조군으로 사용한다. PD-1 3세대 세포 내 신호전달 구축물을 사용하는 본원에 기재된 연구와 유사하게, CD137 및 CD134 돌연변이 도메인을 갖는 CD19 CAR 구축물은 야생형 CD137 및 CD134 도메인을 갖는 상응하는 구축물(각각 28_BBwt_z 및 ICOS_BBwt_z)과 비교하여 더 높은 발현을 나타냈다(도 13a-13b). 본원에 기재된 시험관 내 연구는 3세대 CD28 기반 및 ICOS 기반 CD19로 형질도입된 1차 T 세포에 의해 CD19 CAR 발현 세포(CD19+)의 증가된 살해(도 14a-14b 및 도 15c-15d), 증가된 이펙터 사이토카인 생산(도 14c, 우측 패널) 및 증가된 T 세포 증식 및 지속성(도 15a-15b 및 15e)을 보여준다.
본 개시 내용은 또한 돌연변이 CD134/CD137 신호전달 도메인을 포함하는 CD28 기반 수용체 및 돌연변이 CD134/CD137 신호전달 도메인을 포함하는 ICOS 기반 수용체의 발현이 BCMA 특이적 T 세포(BCMA CAR T 세포)의 표적 항원(BCMA-Fc)에 대한 결합을 증가시켰음을 보여준다(도 16a-16b). 또한, 본 개시 내용은 돌연변이 CD134/CD137 신호전달 도메인을 포함하는 CD28 기반 수용체 및 돌연변이 CD134/CD137 신호전달 도메인을 포함하는 ICOS 기반 수용체의 발현이 BCMA를 발현하는 골수종 세포주에 반응하여 BCMA 특이적 T 세포에 의한 증가된 증식 및 이펙터 사이토카인 생산(도 16c 및 16d) 및 표적 세포 살해(도 16d)를 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> Neomics Pharmaceuticals LLC <120> Chimeric co-stimulatory proteins comprising mutant intracellular domains with increased expression <130> NEOM-003/001US 336906.2008 <140> 17/568,189 <141> 2022-01-04 <150> US63/133,494 <151> 2021-01-04 <150> US63/163,171 <151> 2021-03-19 <160> 198 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 1 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 2 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 2 Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr 1 5 10 15 Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu 20 25 30 Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu 35 40 <210> 3 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized 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Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 10 Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly 1 5 10 15 Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile 20 25 30 Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met 35 40 45 Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro 50 55 60 Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 65 70 75 <210> 11 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 11 Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala 1 5 10 15 Pro Pro <210> 12 <211> 85 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 12 Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro Ile Gly Cys Ala 1 5 10 15 Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu Ile Cys Trp Leu 20 25 30 Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr 35 40 45 Met Phe Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln 50 55 60 Pro Tyr Ala Pro Pro Arg 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Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 18 Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu 1 5 10 15 Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys 20 25 30 Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala 35 40 45 Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 50 55 60 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 65 70 75 80 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 85 90 95 Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 100 105 110 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 115 120 125 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 130 135 140 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 145 150 155 160 Leu Pro Pro Arg <210> 19 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 19 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly 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acaacgccaa gaacaccgtg 300 tacctccaga tgaacagcct gagagccgag gataccgccg tgtacttctg tgccagcaga 360 ggaatcgccg acggcagcga ttttggctct tatggccagg gcacccaagt gaccgtgtcc 420 agcacaacaa cccctgctcc tagacctcct acaccagctc ctacaatcgc cagccagcct 480 ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga 540 ctggatttcg cctgcagcca gctgtgctgc cagctgaagt tctggctgcc tattggctgc 600 gccgccttcg tggttgtgtg tatcctgggc tgcatcctga tctgctggct gaccaagaaa 660 aagtacagca gcagcgtgca cgaccccaac ggcgagtaca tgttcatgag agccgtgaac 720 accgccaaga agtccagact gaccgacgtg acactgagag tgaagttcag cagatccgcc 780 gacgctcctg cctatcagca gggccaaaac cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga 840 agagaagagt acgacgtgct ggacaagcgg agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag 900 ccccagcgga gaaagaatcc tcaagagggc ctgtataatg agctgcaaaa ggacaagatg 960 gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag ggcgagcgca gaagaggcaa gggacacgat 1020 ggactgtacc agggcctgag caccgccacc aaggatacct atgatgccct gcacatgcag 1080 gccctgcctc caaga 1095 <210> 190 <211> 1221 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 190 atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga 60 cctgaagtgc agttgcaggc ttctggcgga ggacttgctc aacctggcgg aagcctgaga 120 ctgtcttgtg ccgcctctgg cagaaccttc agcacctact tcatggcctg gttcagacag 180 cctcctggca aaggcctgga atacgttggc ggaatccgtt ggagtgatgg cgtgccacac 240 tacgccgata gcgtgaaggg cagattcacc atcagccggg acaacgccaa gaacaccgtg 300 tacctccaga tgaacagcct gagagccgag gataccgccg tgtacttctg tgccagcaga 360 ggaatcgccg acggcagcga ttttggctct tatggccagg gcacccaagt gaccgtgtcc 420 agcacaacaa cccctgctcc tagacctcct acaccagctc ctacaatcgc cagccagcct 480 ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga 540 ctggatttcg cctgcagcca gctgtgctgc cagctgaagt tctggctgcc tattggctgc 600 gccgccttcg tggttgtgtg tatcctgggc tgcatcctga tctgctggct gaccaagaaa 660 aagtacagca gcagcgtgca cgaccccaac ggcgagtaca tgttcatgag agccgtgaac 720 accgccaaga agtccagact gaccgacgtg accctgaagc ggggcagaaa gaagctgctg 780 tatatcttca agcagccctt catgcggccc gtgcagacca cacaagagga agatggctgc 840 tcctgtcggt tccccgagga agaagaaggc ggttgcgaac tgagagtgaa gttcagcaga 900 tccgccgacg ctcctgccta tcagcagggc caaaaccagc tgtacaacga gctgaacctg 960 gggagaagag aagagtacga cgtgctggac aagcggagag gcagagatcc tgaaatgggc 1020 ggcaagcccc agcggagaaa gaatcctcaa gagggcctgt ataatgagct gcaaaaggac 1080 aagatggccg aggcctacag cgagatcgga atgaagggcg agcgcagaag aggcaaggga 1140 cacgatggac tgtaccaggg cctgagcacc gccaccaagg atacctatga tgccctgcac 1200 atgcaggccc tgcctccaag a 1221 <210> 191 <211> 1185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 191 atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga 60 cctgaagtgc agttgcaggc ttctggcgga ggacttgctc aacctggcgg aagcctgaga 120 ctgtcttgtg ccgcctctgg cagaaccttc agcacctact tcatggcctg gttcagacag 180 cctcctggca aaggcctgga atacgttggc ggaatccgtt ggagtgatgg cgtgccacac 240 tacgccgata gcgtgaaggg cagattcacc atcagccggg acaacgccaa gaacaccgtg 300 tacctccaga tgaacagcct gagagccgag gataccgccg tgtacttctg tgccagcaga 360 ggaatcgccg acggcagcga ttttggctct tatggccagg gcacccaagt gaccgtgtcc 420 agcacaacaa cccctgctcc tagacctcct acaccagctc ctacaatcgc cagccagcct 480 ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga 540 ctggatttcg cctgcagcca gctgtgctgc cagctgaagt tctggctgcc tattggctgc 600 gccgccttcg tggttgtgtg tatcctgggc tgcatcctga tctgctggct gaccaagaaa 660 aagtacagca gcagcgtgca cgaccccaac ggcgagtaca tgttcatgag agccgtgaac 720 accgccaaga agtccagact gaccgacgtg accctccagc ctttcatgag gcctgtgcag 780 accacacaag aagaggacgg ctgctcctgt cggttccccg aggaagagga aggcggttgc 840 gaacttagag tgaagttcag cagatccgcc gacgctcctg cctatcagca gggccaaaac 900 cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggacaagcgg 960 agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag ccccagcgga gaaagaatcc tcaagagggc 1020 ctgtataatg agctgcaaaa ggacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag 1080 ggcgagcgca gaagaggcaa gggacacgat ggactgtacc agggcctgag caccgccacc 1140 aaggatacct atgatgccct gcacatgcag gccctgcctc caaga 1185 <210> 192 <211> 1158 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 192 atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga 60 cctgaagtgc agttgcaggc ttctggcgga ggacttgctc aacctggcgg aagcctgaga 120 ctgtcttgtg ccgcctctgg cagaaccttc agcacctact tcatggcctg gttcagacag 180 cctcctggca aaggcctgga atacgttggc ggaatccgtt ggagtgatgg cgtgccacac 240 tacgccgata gcgtgaaggg cagattcacc atcagccggg acaacgccaa gaacaccgtg 300 tacctccaga tgaacagcct gagagccgag gataccgccg tgtacttctg tgccagcaga 360 ggaatcgccg acggcagcga ttttggctct tatggccagg gcacccaagt gaccgtgtcc 420 agcacaacaa cccctgctcc tagacctcct acaccagctc ctacaatcgc cagccagcct 480 ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga 540 ctggatttcg cctgcagcca gctgtgctgc cagctgaagt tctggctgcc tattggctgc 600 gccgccttcg tggttgtgtg tatcctgggc tgcatcctga tctgctggct gaccaagaaa 660 aagtacagca gcagcgtgca cgaccccaac ggcgagtaca tgttcatgag agccgtgaac 720 accgccaaga agtccagact gaccgacgtg acactcggcg gaggcagctt tagaacccct 780 atccaagagg aacaggccga cgctcactct acactggcta gagtgaagtt cagcagatcc 840 gccgacgctc ctgcctatca gcagggccaa aaccagctgt acaacgagct gaacctgggg 900 agaagagaag agtacgacgt gctggacaag cggagaggca gagatcctga aatgggcggc 960 aagccccagc ggagaaagaa tcctcaagag ggcctgtata atgagctgca aaaggacaag 1020 atggccgagg cctacagcga gatcggaatg aagggcgagc gcagaagagg caagggacac 1080 gatggactgt accagggcct gagcaccgcc accaaggata cctatgatgc cctgcacatg 1140 caggccctgc ctccaaga 1158 <210> 193 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 193 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 194 <211> 228 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 194 ctgttccccg gacctagcaa gcccttttgg gtgctcgttg ttgttggcgg cgtgctggcc 60 tgttatagcc tgctggttac cgtggccttc atcatctttt gggtccgaag caagcggagc 120 cggctgctgc acagcgacta catgaacatg acccctagac ggcccggacc aaccagaaag 180 cactaccagc cttacgctcc tcctagagac ttcgccgcct acagatct 228 <210> 195 <211> 126 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 195 aagcggggca gaaagaaact gctgtacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 60 accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 120 gaactt 126 <210> 196 <211> 111 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 196 aggagagacc agcgtctgcc accagatgca cataagccac ctggcggcgg aagctttaga 60 acccctatcc aagaggaaca ggccgacgct cactctacac tggctaaaat c 111 <210> 197 <211> 90 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 197 cagcctttca tgaggcccgt gcagaccaca caagaagagg acggctgctc ctgcagattc 60 cccgaggaag aggaaggcgg ttgcgaactt 90 <210> 198 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 198 ggcggcggaa gctttagaac ccctatccaa gaggaacagg ccgacgctca ctctacactg 60 gct 63

Claims (159)

  1. (a) 세포 외 도메인;
    (b) 막 횡단 도메인; 및
    (c) 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 세포 내 도메인
    을 포함하는 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR: recombinant T cell co-stimulatory receptor)로서,
    제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고;
    적어도 제2 신호 전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인을 포함하는 것인
    RTCR.
  2. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 절단형 CD137 세포 내 도메인인 RTCR.
  3. 제2항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 위치 13 내지 아미노산 위치 42에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  4. 제2항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  5. 제2항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  6. 제2항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 3에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  7. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1개, 2개, 3개 또는 4개의 리신 잔기(들)의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  8. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함하는 것인 RTCR.
  9. 제8항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 5, 6 및 12로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함하는 것인 RTCR.
  10. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  11. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 RTCR.
  12. 제11항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 RTCR.
  13. 제12항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함하는 것인 RTCR.
  14. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 절단형 CD134 세포 내 도메인인 RTCR.
  15. 제14항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 위치 15 내지 아미노산 위치 37에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  16. 제14항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개 또는 그 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  17. 제14항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개 또는 그 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  18. 제14항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 6에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  19. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 리신 잔기의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  20. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 포함하는 것인 RTCR.
  21. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함하는 것인 RTCR.
  22. 제1항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 RTCR.
  23. 제22항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2 및 5로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 RTCR.
  24. 제23항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함하는 것인 RTCR.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 CD28 패밀리의 단백질로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 RTCR.
  26. 제25항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 CD28, CD28H, ICOS 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 RTCR.
  27. 제26항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 ICOS로부터 유래되는 것인 RTCR.
  28. 제19항에 있어서, ICOS로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  29. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 도메인과 조합된 CD28 세포 내 도메인의 일부를 포함하는 제1 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 RTCR.
  30. 제29항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 12 및 109 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  31. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 RTCR.
  32. 제31항에 있어서, CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 10에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 121-122 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  34. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 14-17 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 제3 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 RTCR.
  36. 제35항에 있어서, 제3 신호 전달 도메인은 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 RTCR.
  37. 제36항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 RTCR.
  38. 제37항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 서열 번호 18, 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  39. 제36항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인인 RTCR.
  40. 제39항에 있어서, 돌연변이 CD2 신호전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인인 RTCR.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  42. 제36항에 있어서, IL-2RB 단백질 신호전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 제4 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 RTCR.
  44. 제43항에 있어서, 제4 신호 전달 도메인은 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래되며, 제3 및 제4 신호 전달 도메인은 동일하지 않은 것인 RTCR.
  45. 제44항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 RTCR.
  46. 제45항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 서열 번호 18, 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  47. 제44항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인인 RTCR.
  48. 제47항에 있어서, 돌연변이 CD2 신호전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인인 RTCR.
  49. 제47항 또는 제48항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  50. 제44항에 있어서, IL-2RB 단백질 신호전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 외 도메인은 면역 세포의 활성화 및/또는 증식을 유도하는 단백질 또는 이의 일부를 포함하는 것인 RTCR.
  52. 제51항에 있어서, 세포 외 도메인은 다음 중 어느 하나를 포함하는 것인 RTCR:
    a) T 세포 수용체(TCR: T cell receptor) 복합체의 구성요소;
    b) 키메라 항원 수용체(CAR: chimeric antigen receptor)의 구성요소;
    c) T 세포 공동 자극 단백질 또는 T 세포 억제 단백질인 T 세포 공수용체의 구성요소;
    d) 세포 표면 수용체 또는 이의 구성요소에 결합하는 리간드;
    e) 사이토카인 수용체의 구성요소;
    f) 케모카인 수용체의 구성요소;
    g) 인테그린 수용체의 구성요소;
    h) 내피 세포 표면 단백질 수용체의 구성요소 또는 이의 단편;
    i) 신경 안내 단백질 수용체의 구성요소; 및
    j) 보체 수용체의 구성요소.
  53. 제52항에 있어서, T 세포 공수용체 또는 CAR의 구성요소는 PD1, CD28, CD2, OX-40, ICOS, CTLA-4, CD28, CD3, CD4, CD8, CD40L, Lag-3, Tim-3 또는 TIGIT의 구성요소, 또는 이들의 조합인 RTCR.
  54. 제52항에 있어서, T 세포 공수용체 또는 CAR의 구성요소는 CD19, B 세포 성숙 Ag(BCMA), PD-L1, PD-L2, IL-10, 증식 유도 리간드(APRIL), BAFF, OX-40L, ICOS-L, B7-1, B7-2, CD40, CD58, CD59, 넥틴, CD155 또는 CD112, 또는 이들의 조합에 결합하는 것인 RTCR.
  55. 제52항에 있어서, 사이토카인 수용체는 IL-10, IL-27, TGF-β, IL-12, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ 또는 IFN-α/β, 또는 이들의 조합에 결합하는 것인 RTCR.
  56. 제52항에 있어서, 보체 수용체의 구성요소는 C3aR, C5aR, CD46/MCP, CD55, CD97 또는 DAF의 구성요소, 또는 이들의 조합인 RTCR.
  57. 제52항에 있어서, 세포 외 도메인은 상피 성장 인자 수용체(EGFR), 혈관 내피 성장 인자(VEGFR), 케모카인 수용체(CCR) 4, CCR5, CCR7, CCR10, 넥틴-1 수용체, 세마포린 수용체, 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1), 백혈구 특이적 β2 인테그린(αLβ2, αMβ2, αXβ2 또는 αDβ2), β7 인테그린(α4β7 또는 αEβ7), 세포 외 기질(ECM) 결합 β1 인테그린(α1-α6β1), L-셀렉틴, 또는 시알릴 루이스x의 구성요소의 아미노산 서열을 포함하는 것인 RTCR.
  58. 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 외 도메인은 폴리펩티드, 당단백질, 또는 항체 또는 이의 단편인 RTCR.
  59. 제58항에 있어서, 항체 또는 이의 단편은 Fab 단편, F(ab)2 단편, 디아바디, 나노바디, sdAb, Fv, VHH 단편 또는 단일 사슬 Fv 단편인 RTCR.
  60. 제51항 내지 제54항, 제58항 및 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 외 도메인은 종양 항원, 병원체 관련 단백질, 및 자가면역, 염증, 대사 또는 신경퇴행성 질환 또는 장애와 관련된 항원으로부터 선택되는 표적에 결합하는 것인 RTCR.
  61. 제60항에 있어서, 종양 항원은 종양 관련 항원(TAA), 종양 분비 항원(TSA) 또는 비전형적 항원(UCA)인 RTCR.
  62. 제51항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 외 도메인은 1 fM 내지 100 μM의 결합 친화도로 표적에 결합하는 것인 RTCR.
  63. 제62항에 있어서, 세포 외 도메인은 1 μM 내지 10 μM의 결합 친화도로 표적에 결합하는 것인 RTCR.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 외 도메인은 N-말단에 신호 펩티드를 포함하며, 신호 펩티드는 표면 또는 분비 단백질로부터 유래되는 것인 RTCR.
  65. 제64항에 있어서, 신호 펩티드는 PD-1 신호 펩티드(PD-1 SP)인 RTCR.
  66. 제64항에 있어서, 신호 펩티드는 HLA I형 조직적합성 항원 또는 이의 일부인 RTCR.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 외 도메인은 힌지 영역을 포함하는 것인 RTCR.
  68. 제68항에 있어서, 힌지 영역은 CD8, PD-1, CD28, ICOS 또는 IgG로부터 유래되는 것인 RTCR.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 막 횡단 도메인은 CD8, PD1, CD28, COS 또는 IgG로부터 유래되는 것인 RTCR.
  70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, RTCR은 T 세포에서의 발현을 위한 것이며, T 세포는 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L로부터 선택된 내인성 공동 자극 분자, 및 이들의 조합 중 적어도 하나를 공동 발현하는 것인 RTCR.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항의 RTCR을 코딩하는 핵산.
  72. 제71항의 핵산을 포함하는 벡터.
  73. 제71항의 핵산 또는 제72항의 벡터를 포함하는 세포.
  74. 제73항에 있어서, 세포는 변형된 T 세포인 세포.
  75. 제73항에 있어서, 세포는 변형된 자연 살해 T 세포(NK-T 세포)인 세포.
  76. 제74항에 있어서, 변형된 T 세포는 동종 T 세포인 세포.
  77. 제74항에 있어서, 변형된 T 세포는 자가 T 세포인 세포.
  78. 제74항에 있어서, 변형된 T 세포는 나이브() T 세포, 초기 기억 T 세포, 줄기 세포 유사 T 세포, 줄기 기억 T 세포(TSCM), 중앙 기억 T 세포(TCM) 또는 조절 T 세포(Treg)인 세포.
  79. 제73항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 세포는 인공 항원 수용체, 치료용 폴리펩티드 또는 면역 세포 조절 단백질, 또는 이들의 조합을 코딩하는 서열을 추가로 포함하는 것인 세포.
  80. 제79항에 있어서, 인공 항원 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 것인 세포.
  81. 제73항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 세포는 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항의 RTCR을 일시적으로 또는 안정적으로 발현하는 것인 세포.
  82. 제73항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 세포는 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L로부터 선택된 내인성 공동 자극 분자, 및 이들의 조합 중 적어도 하나 이상을 RTCR과 함께 공동 발현하는 것인 세포.
  83. (a) T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열의 변형으로서, 변형은 TCR의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 것인 변형; 및
    (b) 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 따른 재조합 T 세포 공동 자극 수용체(RTCR)
    를 포함하는 변형된 T 림프구(T 세포).
  84. 제83항에 있어서, 주요 조직적합성 복합체(MHC) I형(MHC-I)의 구성요소를 코딩하는 내인성 서열의 변형을 추가로 포함하며, 변형은 MHC-I의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 것인 변형된 T 세포.
  85. 제83항 또는 제84항에 있어서, 변형된 T 세포는 내인성 공동 자극 분자 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 RTCR과 함께 공동 발현하는 것인 변형된 T 세포.
  86. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항의 RTCR을 포함하는 조성물.
  87. 제71항의 핵산을 포함하는 조성물.
  88. 제72항의 벡터를 포함하는 조성물.
  89. 제73항 내지 제82항 중 어느 한 항의 세포를 포함하는 조성물.
  90. 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
  91. 제73항 내지 제82항 중 어느 한 항의 다수의 세포를 포함하거나 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항의 다수의 변형된 T 세포를 포함하는 세포 집단을 포함하는 조성물.
  92. 다수의 변형된 T 세포의 제조 방법으로서,
    a) 다수의 1차 T 세포를 제공하는 단계;
    b) 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항의 RTCR, 제71항의 핵산 또는 제72항의 벡터를 포함하는 조성물을 제공하는 단계; 및
    c) (b)의 조성물을 (a)의 다수의 1차 T 세포에 도입하여, 다수의 변형된 T 세포 내에서 RTCR을 안정하게 발현하는 조건 하에서 다수의 변형된 T 세포를 생산하는 단계
    를 포함하는 제조 방법.
  93. 제92항에 있어서, 내인성 T 세포 수용체(TCR)를 코딩하는 내인성 서열을 변형시키는 단계를 추가로 포함하며, 변형은 내인성 TCR의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 것인 제조 방법.
  94. 제92항 또는 제93항에 있어서, 다수의 1차 T 세포의 내인성 서열을 변형시키는 단계를 추가로 포함하며, 변형은 주요 조직적합성 복합체(MHC) I형(MHC-I)의 발현 또는 활성 수준을 감소시키거나 제거하는 것인 제조 방법.
  95. 제92항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    d) 다수의 변형된 T 세포를 적합한 세포 배양 배지에서 유지하거나 또는 증식시키는 단계;
    e) i) 다수의 변형된 T 세포를 적합한 세포 동결 배지에서 동결 보존하는 단계; 또는
    ii) 다수의 변형된 T 세포를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위해 준비하는 단계
    를 추가로 포함하는 제조 방법.
  96. 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효수의 제73항 내지 제82항 중 어느 한 항의 세포, 치료적 유효수의 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포, 치료적 유효량의 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항의 조성물, 또는 치료적 유효수의 제92항 내지 제95항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 다수의 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  97. 제96항에 있어서, 대상체는 포유동물인 방법.
  98. 제97항에 있어서, 포유동물은 인간인 방법.
  99. 제96항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 장애는 암, 자가면역 질환 또는 장애, 감염성 질환, 염증성 질환, 신장 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 간 질환 또는 장애, 심혈관계 질환 또는 장애, 신경퇴행성 질환 또는 장애, 또는 대사성 질환 또는 장애인 방법.
  100. 제99항에 있어서, 암은 고형 종양 또는 혈액암인 방법.
  101. 제100항에 있어서, 고형암은 육종, 암종 또는 흑색종인 방법.
  102. 제100항에 있어서, 혈액암은 백혈병, 림프종 또는 골수종인 방법.
  103. 제99항에 있어서, 암은 급성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 림프구성 백혈병, B 세포, T 세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병(AML: acute myeloid leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukemia), 만성 골수구성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포 백혈병, 골수이형성 증후군(MDS), 호지킨 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 결장직장 암종, 췌장 암종, 비인두 암종, 악성 조직구증, 악성 종양의 부신생물 증후군/고칼슘혈증, 방광암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 두부암, 경부암, 유전성 비용종증암, 간암, 폐암, 비소세포폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포 암종, 고환암, 선암종, 육종, 악성 흑색종 및 혈관종으로부터 선택되는 것인 방법.
  104. 제99항에 있어서, 감염성 질환은 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물 또는 기생충에 의해 유발되는 것인 방법.
  105. 제99항에 있어서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병(AD) 및 기타 치매, 파킨슨병(PD) 및 PD 관련 장애, 프리온병, 운동 뉴런 질환(MND), 헌팅턴병(HD), 척수소뇌성 운동실조증(SCA), 또는 척수성 근위축증(SMA)인 방법.
  106. 제99항에 있어서, 염증성 질환은 전신성 홍반성 루푸스, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 또는 다발성 경화증인 방법.
  107. 제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인을 포함하는 키메라 공동 자극 세포 내 단백질(CIP: chimeric co-stimulatory intracellular protein)로서,
    제1 및 적어도 제2 신호 전달 도메인은 동일하지 않고;
    적어도 제2 신호 전달 도메인은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것인
    CIP.
  108. 제107항에 있어서, TNFR 패밀리 단백질의 돌연변이 세포 내 신호전달 도메인은 돌연변이 CD137(4-1BB) 세포 내 도메인 또는 돌연변이 CD134(OX-40) 세포 내 도메인인 CIP.
  109. 제107항 또는 제108항에 있어서, CIP는 막 횡단 도메인을 추가로 포함하는 것인 CIP.
  110. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 절단형 CD137 세포 내 도메인인 CIP.
  111. 제110항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 아미노산 위치 13 내지 아미노산 위치 42에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  112. 제110항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  113. 제110항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  114. 제110항에 있어서, 절단형 CD137 세포 내 도메인은 서열 번호 3에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  115. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 1개, 2개, 3개 또는 4개의 리신 잔기(들)의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  116. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함하는 것인 CIP.
  117. 제116항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 5, 6 및 12로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 리신 돌연변이(들)를 포함하는 것인 CIP.
  118. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  119. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 12까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 CIP.
  120. 제119항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 CIP.
  121. 제120항에 있어서, 돌연변이 CD137 세포 내 도메인은 CD137 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함하는 것인 CIP.
  122. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 절단형 CD134 세포 내 도메인인 CIP.
  123. 제122항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 아미노산 위치 15 내지 아미노산 위치 37에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  124. 제122항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개 또는 그 이상의 아미노산의 연속 스트레치의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  125. 제122항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개 또는 그 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  126. 제122항에 있어서, 절단형 CD134 세포 내 도메인은 서열 번호 6에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  127. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 리신 잔기의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  128. 제127항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 포함하는 것인 CIP.
  129. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산의 결실을 포함하는 것인 CIP.
  130. 제108항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1에서 아미노산 위치 14까지 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 CIP.
  131. 제130항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 1, 2 및 5로부터 선택된 아미노산 위치에서 하나 이상의 근위 염기성 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 것인 CIP.
  132. 제131항에 있어서, 돌연변이 CD134 세포 내 도메인은 CD134 세포 내 도메인의 N-말단의 아미노산 위치 12에서 리신 돌연변이를 추가로 포함하는 것인 CIP.
  133. 제107항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 CD28 패밀리의 단백질로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 CIP.
  134. 제133항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 CD28, CD28H, ICOS 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 CIP.
  135. 제134항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 ICOS로부터 유래되는 것인 CIP.
  136. 제135항에 있어서, ICOS로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 9에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  137. 제107항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 서열 번호 9에 따른 ICOS 도메인과 조합된 CD28 세포 내 도메인의 일부를 포함하는 제1 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 CIP.
  138. 제137항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 12 또는 109 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  139. 제107항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 CD28로부터 유래된 것인 CIP.
  140. 제139항에 있어서, CD28로부터 유래된 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 10에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  141. 제139항 또는 제140항에 있어서, 제1 신호 전달 도메인은 서열 번호 121-122 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  142. 제107항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, CIP는 서열 번호 14-17 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  143. 제107항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, CIP는 제3 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 CIP.
  144. 제143항에 있어서, 제3 신호 전달 도메인은 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인, 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 CIP.
  145. 제144항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인, 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 CIP.
  146. 제145항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 서열 번호 18, 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  147. 제144항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인인 CIP.
  148. 제147항에 있어서, 돌연변이 CD2 신호전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인인 CIP.
  149. 제147항 또는 제148항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  150. 제144항에 있어서, IL-2RB 단백질 신호전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  151. 제107항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 세포 내 도메인은 제4 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 CIP.
  152. 제135항에 있어서, 제4 신호 전달 도메인은 CD3 신호전달 도메인, CD2 신호전달 도메인 또는 인터류킨 2 수용체 결합(IL-2RB) 단백질 신호전달 도메인, 또는 이들의 조합으로부터 유래되며, 제3 및 제4 신호 전달 도메인은 동일하지 않은 것인 CIP.
  153. 제152항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 CD3ζ 또는 CD3ε 도메인, 또는 이들의 조합으로부터 유래되는 것인 CIP.
  154. 제153항에 있어서, CD3 신호전달 도메인은 서열 번호 18, 45, 46, 47 및 48 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  155. 제152항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 돌연변이 CD2 신호전달 도메인인 CIP.
  156. 제155항에 있어서, 돌연변이 CD2 신호전달 도메인은 절단형 CD2 신호전달 도메인인 CIP.
  157. 제155항 또는 제156항에 있어서, CD2 신호전달 도메인은 서열 번호 49에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  158. 제152항에 있어서, IL-2RB 단백질 신호전달 도메인은 서열 번호 50에 따른 아미노산 서열을 포함하는 것인 CIP.
  159. 제107항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, CIP는 T 세포에서의 발현을 위한 것이며, T 세포는 CD28, CD2, OX-40, ICOS, CD28, CD3, CD4, CD8 및 CD40L로부터 선택된 내인성 공동 자극 분자, 및 이들의 조합 중 적어도 하나를 공동 발현하는 것인 CIP.
KR1020237025943A 2021-01-04 2022-01-04 발현이 증가된 돌연변이 세포 내 도메인을 포함하는키메라 공동 자극 단백질 KR20230137344A (ko)

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