JP2024504048A - 発現が増加した変異細胞内ドメインを含むキメラ共刺激タンパク質 - Google Patents

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Abstract

本出願は、ヒト疾患及び障害を治療するための養子細胞療法において使用することができる、任意選択で細胞内因性免疫チェックポイント阻害受容体若しくは免疫刺激受容体又はその一部分と組み合わせた、機能的に最適化された細胞内共刺激ドメインに関する。【選択図】図３

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１９日に出願された米国仮出願第６３／１６３，１７１号及び２０２１年１月４日に出願された米国仮出願第６３／１３３，４９４号の優先権及び利益を主張するものであり、これらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
養子細胞療法は癌治療において有効性を示すが、これらの療法の有効性は、より良好な増殖及び持続性のためのＴ細胞の遺伝子操作によって更に改善することができる。Ｔ細胞は、本格的な活性化及び持続的な増殖を促進するために、抗原誘発ＴＣＲシグナル伝達とともに、ＣＤ２８ファミリー及び腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーからの機能的に重複しない共刺激シグナルを必要とする。遺伝子操作されたＴ細胞治療剤の開発において、Ｔ細胞が病理学的抗原とエンゲージする際に局所的に活性化されて、治療有効性の増加のためにＴ細胞活性化を強力に増強することができるキメラＴ細胞共刺激分子を導入する必要がある。現在、ＣＤ２８ファミリー又はＴＮＦＲファミリーのいずれかのタンパク質由来の１つの共刺激シグナル伝達ドメインを組み込む第２世代のキメラ共刺激分子が、ＣＡＲ Ｔ細胞療法において広く採用されている。１つの共刺激シグナル伝達ドメインを組み込むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、活性化シグナル及び共刺激シグナルの両方を介してＴ細胞機能を増大させ、したがって、抗腫瘍効力及びＴ細胞持続性の増強をもたらす。Ｔ細胞が増殖する能力が構造設計に依存することを考慮すると、現在の第２世代共刺激タンパク質は、永続的な腫瘍寛解の誘導に最適ではない場合がある。したがって、ＣＤ２８ファミリー及びＴＮＦＲファミリーメンバー由来の２つの共刺激シグナル伝達ドメインを組み合わせて、共刺激分子の２つのファミリーの重複しない機能を利用して、Ｔ細胞治療能力を更に増強する第３世代キメラ分子を開発するための取り組みが望まれている。加えて、そのような第３世代キメラ共刺激分子は、抗原による外因的に発現されたＴＣＲの活性化中の不十分な共刺激シグナルに起因してＴ細胞活性化が準最適のままであるＴＣＲ Ｔ療法に組み込むことができる。しかしながら、既存の組換えＤＮＡ戦略は、２つの共刺激シグナル伝達ドメインを組み合わせたキメラタンパク質の細胞表面発現の低下に悩まされることが多く、キメラタンパク質の機能的潜在能力の実現を妨げる。本出願は、そのような必要性に対処する。
本出願は、ＣＤ２８及びＴＮＦＲファミリー由来の２つのシグナル伝達ドメインを組み込み、増強されたＴ細胞機能について従来報告されているものよりも有意に改善されたレベルで発現する第３世代キメラＴ細胞共刺激分子、並びに共刺激分子を作製する方法を開示する。
本明細書では、新規のキメラ共刺激細胞内ドメインが提供される。本明細書で提供されるキメラ共刺激細胞内ドメインは、（ａ）ＣＤ２８ファミリータンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインに基づく第１のシグナル伝達ドメインと、（ｂ）腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む少なくとも第２のシグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ファミリータンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインに基づく第１のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８タンパク質、ＩＣＯＳタンパク質又はそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）及びＣＤ１３４（ＯＸ－４０）から選択されるＴＮＦＲファミリータンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの変異体に基づく。
本明細書で提供されるキメラ共刺激細胞内ドメインは、（ａ）ＣＤ２８タンパク質、ＩＣＯＳタンパク質又はそれらの組み合わせの細胞内シグナル伝達ドメインに基づく第１のシグナル伝達ドメインと、（ｂ）変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインを含む少なくとも第２のシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインは、ＣＤ１３７又はＣＤ１３４細胞内ドメインの膜近位部分における１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入又は置換を含む。理論に束縛されるものではないが、いくつかの実施形態では、膜近位部分中の１つ以上のアミノ酸は、ＣＤ１３７又はＣＤ１３４タンパク質のユビキチン化及び分解に関与するユビキチン化部位であり得る。
また本明細書に開示されるのは、血液学的腫瘍及び固形腫瘍を含むヒト疾患及び障害を治療するために開発された、任意選択で細胞内因性免疫チェックポイント阻害受容体又は免疫刺激受容体又はその一部分と組み合わせた、新規養子細胞療法における使用のための機能的に最適化された細胞内共刺激ドメインである。また本明細書に開示されるのは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、内因性ＴＣＲ又は腫瘍関連抗原を標的化する高親和性ＴＣＲと組み合わせて使用するための機能的に最適化された細胞内共刺激ドメインである。任意選択で、細胞内共刺激ドメインは、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２発現腫瘍などの腫瘍におけるＴ細胞機能性を増加させることができるＰＤ－１スイッチ受容体（ＰＤ－１ベースの共刺激分子）などの、標的組織若しくは細胞に結合するように免疫細胞の遊走を指示するか、又は免疫細胞の活性化及び／若しくは増殖を誘導する第２の成分（例えば、細胞表面受容体又はその一部分）と組み合わせて使用される。また本明細書に開示されるのは、細胞内因性の様式でＰＤ－１チェックポイント遮断を利用する療法であり、これは同時に、自己免疫副作用を最小化し、腫瘍上の機能性の増加を提供する。本出願は、本出願の機能的に最適化された細胞内共刺激ドメインを含むＴ細胞共受容体又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に基づく組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）を開示する。本出願はまた、機能的に最適化された細胞内共刺激ドメイン及びＰＤ－１細胞外ドメイン（すなわち、ＰＤ－１スイッチ受容体又はＰＤ－１ベースの共刺激分子）を含むＴ細胞共受容体を開示する。本出願はまた、ＣＤ１９及びＢ細胞成熟Ａｇ（ＢＣＭＡ）結合媒介Ｔ細胞活性化、増殖、及び腫瘍死滅を促進する機能的に最適化された細胞内共刺激ドメインを含むＣＤ１９及びＢＣＭＡベースのＣＡＲを開示する。本出願に開示されるＲＴＣＲは、チェックポイント標的の評価、安全性スクリーニング、及び前臨床動物モデルの開発のために使用して、本出願の機能的に最適化された細胞内共刺激ドメインと任意のＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせの有効性を評価することができる。有効なＴＣＲを有する追加の細胞内因性免疫チェックポイント阻害剤も開発される。
本開示は、組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）であって、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ細胞内ドメインであって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ細胞内ドメインとを含む、ＲＴＣＲを提供する。
本開示は、組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）であって、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ細胞内ドメインであって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインを含む、キメラ細胞内ドメインとを含む、ＲＴＣＲを提供する。
本開示はまた、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする、核酸を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される核酸を含む、ベクターを提供する。本開示はまた、本明細書に開示される核酸又はベクターを含む、細胞を提供する。
本開示はまた、改変Ｔリンパ球（Ｔ細胞）であって、（ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変であって、ＴＣＲの発現又は活性のレベルを低減又は排除する、改変と、（ｂ）本明細書に開示される組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）とを含む、改変Ｔ細胞を提供する。
本開示はまた、本明細書に開示されるＲＴＣＲを含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される核酸を含むベクターを含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される細胞を含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される改変Ｔ細胞を含む、組成物を提供する。
本開示はまた、細胞集団を含む組成物であって、集団が、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含む複数の細胞、又は本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む、組成物を提供する。本開示はまた、細胞集団を含む組成物であって、集団が、複数の本明細書に開示される改変Ｔ細胞を含む、組成物を提供する。
本開示は、複数の改変Ｔ細胞を産生する方法であって、ａ）本明細書に開示される複数の初代Ｔ細胞を提供することと、ｂ）本明細書に開示されるＲＴＣＲ、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸、又は本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む組成物を提供することと、ｃ）（ｂ）の組成物を（ａ）の複数の初代Ｔ細胞に導入して、複数の改変Ｔ細胞内でＲＴＣＲを安定に発現する条件下で複数の改変Ｔ細胞を産生することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される複数の改変Ｔ細胞を産生する方法は、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列を改変する工程を更に含み、改変は、内因性ＴＣＲの発現又は活性のレベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される複数の改変Ｔ細胞を産生する方法は、内因性配列を改変する工程を更に含み、改変は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）の発現又は活性のレベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される複数の改変Ｔ細胞を産生する方法は、ｄ）複数の改変Ｔ細胞を好適な細胞培養培地中で維持することと、ｅ）ｉ）複数の改変Ｔ細胞を好適な細胞凍結培地中で凍結保存すること、又はｉｉ）疾患若しくは障害に罹患している対象に投与するための複数の改変Ｔ細胞を調製することのいずれかと、を更に含む。
本開示はまた、疾患又は障害を治療する方法であって、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸若しくは本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む治療有効数の細胞、治療有効数の本明細書に開示されるいずれか１つの改変Ｔ細胞、治療有効量の本明細書に開示されるいずれか１つの組成物、又は治療有効数の本明細書に開示される方法によって産生される複数の改変Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ共刺激細胞内タンパク質（ＣＩＰ）であって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＩＰを提供する。
本開示はまた、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ共刺激細胞内タンパク質（ＣＩＰ）であって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインを含む、ＣＩＰを提供する。
本明細書全体を通して、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」という用語、又は「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」若しくは「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」などの変形は、記載された要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程のグループの包含を意味するが、任意の他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程のグループの排除を意味するものではないと理解される。
本明細書全体を通して、「シグナルドメイン」、「シグナル伝達（signaling）ドメイン」、及び「シグナル伝達（signal transduction）ドメイン」という用語は、文脈によって別段の指示がない限り、互換的に使用される。
本開示は発明を実施するための形態と併せて記載されているが、前述の記載は例示することを意図しており、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を限定することを意図するものではない。他の態様、利点、及び修正は、以下の特許請求の範囲内である。
本明細書で言及される特許及び科学文献は、当業者に利用可能な知識を確立する。本明細書に引用される全ての米国特許及び公開又は未公開米国特許出願は、参照により組み込まれる。本明細書に引用される全ての公開された外国特許及び特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に引用される受託番号によって示されるＧｅｎｂａｎｋ及びＮＣＢＩ寄託は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に引用される全ての他の公開された参考文献、文書、原稿及び科学文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願のＴ細胞共刺激分子において使用されるＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーの細胞内尾部のアラインメントを示す。膜近位多塩基領域をイタリック体で示す。潜在的なＰＩ３Ｋ結合部位は太字で下線が引かれている。ＴＲＡＦ１／２結合モチーフ：メジャーモチーフＰｘ（Ｑ／Ｅ）Ｅ及びマイナーモチーフＰｘ（Ｑ／Ｅ）ｘに下線が引かれている。潜在的なユビキチン化部位は太字で示されている。
第２世代及び第３世代の共刺激分子のモジュール設計を示す。シグナルペプチド、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを示す共刺激分子のモジュール設計を示す。第１のシグナル伝達ドメイン：ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、及びＣＤ２８ドメインの一部分が挿入されたＩＣＯＳ細胞内ドメインの構造及び配列を示す。特異的結合機能を有するＩＣＯＳ及びＣＤ２８細胞内ドメインの領域及び既知の結合パートナーを示す。共刺激分子及び細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
第２世代及び第３世代の共刺激分子のモジュール設計を示す。シグナルペプチド、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを示す共刺激分子のモジュール設計を示す。第１のシグナル伝達ドメイン：ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、及びＣＤ２８ドメインの一部分が挿入されたＩＣＯＳ細胞内ドメインの構造及び配列を示す。特異的結合機能を有するＩＣＯＳ及びＣＤ２８細胞内ドメインの領域及び既知の結合パートナーを示す。共刺激分子及び細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
本出願の細胞外エフェクタードメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインの組み合わせを示す。
多塩基ドメイン及びリジン残基を含む４－１ＢＢシグナル伝達ドメインのＮ末端部分の欠失が、共刺激分子の発現をレスキューすることを示す。示された構築物によるレンチウイルス形質導入後のＴリンパ球の表面上のヒトＰＤ１及びｈｕＥＧＦＲｔの発現を示す。示されるように、野生型又はトランケート型４－１ＢＢドメイン又はＯＸ－４０ドメインを含むＩＣＯＳ又はＣＤ２８ベースのキメラ細胞内ドメインを有する異なる共刺激分子を発現するｈｕＥＧＦＲｔ発現細胞上の正規化されたＰＤ１表面発現を示す。キメラ細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
多塩基ドメイン及びリジン残基を含む４－１ＢＢシグナル伝達ドメインのＮ末端部分の欠失が、共刺激分子の発現をレスキューすることを示す。示された構築物によるレンチウイルス形質導入後のＴリンパ球の表面上のヒトＰＤ１及びｈｕＥＧＦＲｔの発現を示す。示されるように、野生型又はトランケート型４－１ＢＢドメイン又はＯＸ－４０ドメインを含むＩＣＯＳ又はＣＤ２８ベースのキメラ細胞内ドメインを有する異なる共刺激分子を発現するｈｕＥＧＦＲｔ発現細胞上の正規化されたＰＤ１表面発現を示す。キメラ細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
野生型又はトランケート型４－１ＢＢ又はＯＸ－４０ドメインを含むＩＣＯＳベースのキメラ細胞内ドメインを有する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞のサイトカイン産生及び増殖を示す。共刺激分子の抗体媒介性架橋がインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。ＩＬ－２（図５Ａ）、ＴＮＦ（図５Ｂ）、及びＩＦＮγ（図５Ｃ）は、プレート結合抗ＰＤ１［２μｇ／ｍＬ］及び示された量のプレート結合抗ＣＤ３による示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清中のビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定された。ｘ軸は異なる共刺激分子を示し、ｙ軸は吸光度単位（Ａ．Ｕ．）として表される産生されたサイトカインの量を示す。示されたプレート結合抗体で９６時間刺激されたＴ細胞の増殖を示す。キメラ細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
野生型又はトランケート型４－１ＢＢ又はＯＸ－４０ドメインを含むＩＣＯＳベースのキメラ細胞内ドメインを有する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞のサイトカイン産生及び増殖を示す。共刺激分子の抗体媒介性架橋がインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。ＩＬ－２（図５Ａ）、ＴＮＦ（図５Ｂ）、及びＩＦＮγ（図５Ｃ）は、プレート結合抗ＰＤ１［２μｇ／ｍＬ］及び示された量のプレート結合抗ＣＤ３による示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清中のビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定された。ｘ軸は異なる共刺激分子を示し、ｙ軸は吸光度単位（Ａ．Ｕ．）として表される産生されたサイトカインの量を示す。示されたプレート結合抗体で９６時間刺激されたＴ細胞の増殖を示す。キメラ細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
野生型又はトランケート型４－１ＢＢ又はＯＸ－４０ドメインを含むＩＣＯＳベースのキメラ細胞内ドメインを有する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞のサイトカイン産生及び増殖を示す。共刺激分子の抗体媒介性架橋がインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。ＩＬ－２（図５Ａ）、ＴＮＦ（図５Ｂ）、及びＩＦＮγ（図５Ｃ）は、プレート結合抗ＰＤ１［２μｇ／ｍＬ］及び示された量のプレート結合抗ＣＤ３による示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清中のビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定された。ｘ軸は異なる共刺激分子を示し、ｙ軸は吸光度単位（Ａ．Ｕ．）として表される産生されたサイトカインの量を示す。示されたプレート結合抗体で９６時間刺激されたＴ細胞の増殖を示す。キメラ細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
野生型又はトランケート型４－１ＢＢ又はＯＸ－４０ドメインを含むＩＣＯＳベースのキメラ細胞内ドメインを有する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞のサイトカイン産生及び増殖を示す。共刺激分子の抗体媒介性架橋がインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。ＩＬ－２（図５Ａ）、ＴＮＦ（図５Ｂ）、及びＩＦＮγ（図５Ｃ）は、プレート結合抗ＰＤ１［２μｇ／ｍＬ］及び示された量のプレート結合抗ＣＤ３による示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清中のビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定された。ｘ軸は異なる共刺激分子を示し、ｙ軸は吸光度単位（Ａ．Ｕ．）として表される産生されたサイトカインの量を示す。示されたプレート結合抗体で９６時間刺激されたＴ細胞の増殖を示す。キメラ細胞内ドメインのアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清におけるビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定されたＩＬ－２（上パネル）、ＩＦＮ（中央パネル）、及びＴＮＦγ（下パネル）を示す。ｘ軸は抗ＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は対照に対するパーセンテージとしてのサイトカイン産生を示す。ＣＤ２８細胞内ドメイン（図６Ｂ、上、中央及び下パネル）及びＩＣＯＳ細胞内ドメイン（図６Ｃ、上、中央及び下パネル）をそれぞれ含む示された共刺激分子で形質導入され、ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で刺激されたＴ細胞によるＩＬ－２（上パネル）、ＩＦＮγ（中央パネル）、並びにＴＮＦ（下パネル）産生を示す。ｘ軸は抗ＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は対照に対するパーセンテージとしてのサイトカイン産生を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清におけるビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定されたＩＬ－２（上パネル）、ＩＦＮ（中央パネル）、及びＴＮＦγ（下パネル）を示す。ｘ軸は抗ＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は対照に対するパーセンテージとしてのサイトカイン産生を示す。ＣＤ２８細胞内ドメイン（図６Ｂ、上、中央及び下パネル）及びＩＣＯＳ細胞内ドメイン（図６Ｃ、上、中央及び下パネル）をそれぞれ含む示された共刺激分子で形質導入され、ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で刺激されたＴ細胞によるＩＬ－２（上パネル）、ＩＦＮγ（中央パネル）、並びにＴＮＦ（下パネル）産生を示す。ｘ軸は抗ＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は対照に対するパーセンテージとしてのサイトカイン産生を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞サイトカイン産生を増加させることを示す。示された構築物で形質導入されたＴ細胞の１８時間の刺激後の培養上清におけるビーズベースのマルチプレックスアッセイによって測定されたＩＬ－２（上パネル）、ＩＦＮ（中央パネル）、及びＴＮＦγ（下パネル）を示す。ｘ軸は抗ＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は対照に対するパーセンテージとしてのサイトカイン産生を示す。ＣＤ２８細胞内ドメイン（図６Ｂ、上、中央及び下パネル）及びＩＣＯＳ細胞内ドメイン（図６Ｃ、上、中央及び下パネル）をそれぞれ含む示された共刺激分子で形質導入され、ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で刺激されたＴ細胞によるＩＬ－２（上パネル）、ＩＦＮγ（中央パネル）、並びにＴＮＦ（下パネル）産生を示す。ｘ軸は抗ＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は対照に対するパーセンテージとしてのサイトカイン産生を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞の細胞傷害性及び増殖を増加させることを示す。図６のように、ＰＤ－１構築物を発現するＴ細胞及びＫ５６２細胞を混合し、刺激した。ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で、示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で９６時間刺激した後の、フローサイトメトリーによって評価された残存するＫ５６２細胞の数（上パネル）及びＴ細胞の数（下パネル）を示す。ｘ軸上に示されるＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ希釈におけるシフトによって測定される、ＨＬＡ－Ａ２（「Ｘ」によって示される）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（「＊」によって示される）及び０．３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３を発現するＫ５６２細胞と共培養された様々なＰＤ１構築物を発現するＴ細胞の増殖を示す。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価された残存する標的細胞（Ｋ５６２）数を示すグラフである。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価されたＴ細胞の数を示すグラフである。ｘ軸はＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は細胞の数を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞の細胞傷害性及び増殖を増加させることを示す。図６のように、ＰＤ－１構築物を発現するＴ細胞及びＫ５６２細胞を混合し、刺激した。ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で、示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で９６時間刺激した後の、フローサイトメトリーによって評価された残存するＫ５６２細胞の数（上パネル）及びＴ細胞の数（下パネル）を示す。ｘ軸上に示されるＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ希釈におけるシフトによって測定される、ＨＬＡ－Ａ２（「Ｘ」によって示される）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（「＊」によって示される）及び０．３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３を発現するＫ５６２細胞と共培養された様々なＰＤ１構築物を発現するＴ細胞の増殖を示す。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価された残存する標的細胞（Ｋ５６２）数を示すグラフである。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価されたＴ細胞の数を示すグラフである。ｘ軸はＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は細胞の数を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞の細胞傷害性及び増殖を増加させることを示す。図６のように、ＰＤ－１構築物を発現するＴ細胞及びＫ５６２細胞を混合し、刺激した。ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で、示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で９６時間刺激した後の、フローサイトメトリーによって評価された残存するＫ５６２細胞の数（上パネル）及びＴ細胞の数（下パネル）を示す。ｘ軸上に示されるＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ希釈におけるシフトによって測定される、ＨＬＡ－Ａ２（「Ｘ」によって示される）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（「＊」によって示される）及び０．３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３を発現するＫ５６２細胞と共培養された様々なＰＤ１構築物を発現するＴ細胞の増殖を示す。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価された残存する標的細胞（Ｋ５６２）数を示すグラフである。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価されたＴ細胞の数を示すグラフである。ｘ軸はＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は細胞の数を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞の細胞傷害性及び増殖を増加させることを示す。図６のように、ＰＤ－１構築物を発現するＴ細胞及びＫ５６２細胞を混合し、刺激した。ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で、示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で９６時間刺激した後の、フローサイトメトリーによって評価された残存するＫ５６２細胞の数（上パネル）及びＴ細胞の数（下パネル）を示す。ｘ軸上に示されるＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ希釈におけるシフトによって測定される、ＨＬＡ－Ａ２（「Ｘ」によって示される）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（「＊」によって示される）及び０．３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３を発現するＫ５６２細胞と共培養された様々なＰＤ１構築物を発現するＴ細胞の増殖を示す。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価された残存する標的細胞（Ｋ５６２）数を示すグラフである。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価されたＴ細胞の数を示すグラフである。ｘ軸はＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は細胞の数を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のＰＤ－Ｌ１エンゲージがインビトロでＴ細胞の細胞傷害性及び増殖を増加させることを示す。図６のように、ＰＤ－１構築物を発現するＴ細胞及びＫ５６２細胞を混合し、刺激した。ＨＬＡ－Ａ２（左パネル）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（右パネル）を発現するＫ５６２細胞の存在下で、示された濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体で９６時間刺激した後の、フローサイトメトリーによって評価された残存するＫ５６２細胞の数（上パネル）及びＴ細胞の数（下パネル）を示す。ｘ軸上に示されるＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ希釈におけるシフトによって測定される、ＨＬＡ－Ａ２（「Ｘ」によって示される）又はＨＬＡ－Ａ２及びＰＤ－Ｌ１（「＊」によって示される）及び０．３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３を発現するＫ５６２細胞と共培養された様々なＰＤ１構築物を発現するＴ細胞の増殖を示す。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価された残存する標的細胞（Ｋ５６２）数を示すグラフである。示される通り、漸増量の抗ＣＤ３抗体（μｇ／ｍｌ）の存在下で、共刺激分子を発現するＴ細胞による刺激の９６時間後に、フローサイトメトリーによって評価されたＴ細胞の数を示すグラフである。ｘ軸はＣＤ３抗体の量（μｇ／ｍｌ）を示し、ｙ軸は細胞の数を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のエンゲージがインビトロでＴ細胞増殖を増加させることを示す。Ｔ細胞を、ｙ軸上に示されるように、２μｇ／ｍＬの抗ＰＤ１及び抗ＣＤ３［ｍｇ／ｍＬ］の濃度（「＊」によって示される）又は抗ＣＤ３のみ（「Ｘ」によって示される）を有するプレート結合抗体上で９６時間刺激し、様々なＰＤ１構築物を発現するＴ細胞の増殖を、ｘ軸上に示されるように、クリスタルバイオレットトレーシングにおけるシフトによって測定した。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現又は機能に対する多塩基及びリジン残基の変異の効果を示す。各プロットの上部に標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１ベースの共刺激分子（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照として使用した（表示なしの線）。図９ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性レベルからの増加倍数として表される）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞の増殖を示すグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現又は機能に対する多塩基及びリジン残基の変異の効果を示す。各プロットの上部に標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１ベースの共刺激分子（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照として使用した（表示なしの線）。図９ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性レベルからの増加倍数として表される）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞の増殖を示すグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現又は機能に対する多塩基及びリジン残基の変異の効果を示す。各プロットの上部に標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１ベースの共刺激分子（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照として使用した（表示なしの線）。図９ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性レベルからの増加倍数として表される）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞の増殖を示すグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現又は機能に対する多塩基及びリジン残基の変異の効果を示す。各プロットの上部に標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１ベースの共刺激分子（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照として使用した（表示なしの線）。図９ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性レベルからの増加倍数として表される）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞の増殖を示すグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及びＯＸ－４０シグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現及び機能を示す。各プロットの上部の標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１スイッチ受容体（ＰＤ１ベースの共刺激分子）（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照（表示なし）として使用した。図１０ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性発現の倍数）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞増殖を示すグラフである。標的細胞上のＰＤ－Ｌ１の存在下又は非存在下でのＴ細胞増殖間の差を、右端のグラフに示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及びＯＸ－４０シグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現及び機能を示す。各プロットの上部の標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１スイッチ受容体（ＰＤ１ベースの共刺激分子）（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照（表示なし）として使用した。図１０ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性発現の倍数）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞増殖を示すグラフである。標的細胞上のＰＤ－Ｌ１の存在下又は非存在下でのＴ細胞増殖間の差を、右端のグラフに示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及びＯＸ－４０シグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現及び機能を示す。各プロットの上部の標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１スイッチ受容体（ＰＤ１ベースの共刺激分子）（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照（表示なし）として使用した。図１０ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性発現の倍数）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞増殖を示すグラフである。標的細胞上のＰＤ－Ｌ１の存在下又は非存在下でのＴ細胞増殖間の差を、右端のグラフに示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
ＩＣＯＳ及びＯＸ－４０シグナル伝達ドメインを組み込む共刺激分子の発現及び機能を示す。各プロットの上部の標識によって示されるように、野生型ＰＤ１受容体（「＊」によって示される）又は異なるＰＤ１スイッチ受容体（ＰＤ１ベースの共刺激分子）（「Ｘ」によって示される）のいずれかを発現するＴ細胞の増殖を示す一連のフローサイトメトリープロットである。内因性ＰＤ－１を発現するＴ細胞を対照（表示なし）として使用した。図１０ＡのＦＡＣＳプロットからのＰＤ－１発現（内因性発現の倍数）を示すグラフである。示されるように、示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（上段）及びＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞（中段）に反応する異なる共刺激分子を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル；ＩＦＮｙ、中央パネル；及びＴＮＦ、右パネル）（ｙ軸）を示すグラフである。Ｋ５６２細胞に反応するＴ細胞とＫ５６２－ＰＤＬ１発現細胞との間のサイトカイン産生のレベルの差を、下の列のグラフに示す。示される濃度の抗ＣＤ３（ｘ軸）で刺激された場合の、Ｋ５６２細胞（左のグラフ）又はＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞（中央のグラフ）との培養９６時間後のＴ細胞増殖を示すグラフである。標的細胞上のＰＤ－Ｌ１の存在下又は非存在下でのＴ細胞増殖間の差を、右端のグラフに示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のエンゲージが、ＰＤ－Ｌ１発現細胞とのＴ細胞コンジュゲーションを増加させることを示す。ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞とＣＴＶ標識Ｋ５６２標的との３０分間のコンジュゲーションのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示す。図１１Ａに示される２つの実験からの結果の定量化を示し、対照コンジュゲーションに対して正規化している。シグナル伝達ペプチドを含む及び含まない共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子のエンゲージが、ＰＤ－Ｌ１発現細胞とのＴ細胞コンジュゲーションを増加させることを示す。ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞とＣＴＶ標識Ｋ５６２標的との３０分間のコンジュゲーションのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示す。図１１Ａに示される２つの実験からの結果の定量化を示し、対照コンジュゲーションに対して正規化している。シグナル伝達ペプチドを含む及び含まない共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子とＰＤ－Ｌ１発現細胞とのエンゲージ時のＴ細胞増殖及び機能の増加を示す。野生型ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲ又は変異体ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲのいずれかを発現するＴ細胞において、レンチウイルストランスフェクションの７２時間後の、Ｋ５６２細胞と共培養した場合の示されるようなＩＣＯＳ＿４－１ＢＢ（トランケート型）シグナル伝達ドメイン（ＰＤ－１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）を含む共刺激分子構築物を含む（下段中央及び右プロット）及び含まない（上段中央及び右プロット）、ＰＤ－１及びＴＣＲβ鎖の表面発現を示すフローサイトメトリープロットである。ｘ軸に示されるＴ細胞：Ａ３７５細胞比で、ＨＬＡ－Ａ２及び抗原を発現するＡ３７５腫瘍細胞と共培養した場合の示されるようなＮＹ－ＥＳＯ－１／ＰＤ１ベースの共刺激分子の組み合わせを発現するＩＬ－２（上のグラフ）及びＩＦＮγ（下のグラフ）産生Ｔ細胞を示すグラフである。示されるようなＩＣＯＳ＿４－１ＢＢ（トランケート型）シグナル伝達ドメイン（ＰＤ－１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）を含む共刺激分子構築物を含む／含まないで示される、示される野生型ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲ又は変異体高親和性（ＨＡ）ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲを発現するＴ細胞によるＡ３７５細胞の用量依存的死滅を示すグラフである。ｘ軸は、用量（Ｔ細胞：Ａ３７５細胞比）及び生存している総投入Ａ３７５細胞のパーセンテージを示す。シグナル伝達ペプチドを含む及び含まない共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子とＰＤ－Ｌ１発現細胞とのエンゲージ時のＴ細胞増殖及び機能の増加を示す。野生型ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲ又は変異体ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲのいずれかを発現するＴ細胞において、レンチウイルストランスフェクションの７２時間後の、Ｋ５６２細胞と共培養した場合の示されるようなＩＣＯＳ＿４－１ＢＢ（トランケート型）シグナル伝達ドメイン（ＰＤ－１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）を含む共刺激分子構築物を含む（下段中央及び右プロット）及び含まない（上段中央及び右プロット）、ＰＤ－１及びＴＣＲβ鎖の表面発現を示すフローサイトメトリープロットである。ｘ軸に示されるＴ細胞：Ａ３７５細胞比で、ＨＬＡ－Ａ２及び抗原を発現するＡ３７５腫瘍細胞と共培養した場合の示されるようなＮＹ－ＥＳＯ－１／ＰＤ１ベースの共刺激分子の組み合わせを発現するＩＬ－２（上のグラフ）及びＩＦＮγ（下のグラフ）産生Ｔ細胞を示すグラフである。示されるようなＩＣＯＳ＿４－１ＢＢ（トランケート型）シグナル伝達ドメイン（ＰＤ－１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）を含む共刺激分子構築物を含む／含まないで示される、示される野生型ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲ又は変異体高親和性（ＨＡ）ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲを発現するＴ細胞によるＡ３７５細胞の用量依存的死滅を示すグラフである。ｘ軸は、用量（Ｔ細胞：Ａ３７５細胞比）及び生存している総投入Ａ３７５細胞のパーセンテージを示す。シグナル伝達ペプチドを含む及び含まない共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
共刺激分子とＰＤ－Ｌ１発現細胞とのエンゲージ時のＴ細胞増殖及び機能の増加を示す。野生型ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲ又は変異体ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲのいずれかを発現するＴ細胞において、レンチウイルストランスフェクションの７２時間後の、Ｋ５６２細胞と共培養した場合の示されるようなＩＣＯＳ＿４－１ＢＢ（トランケート型）シグナル伝達ドメイン（ＰＤ－１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）を含む共刺激分子構築物を含む（下段中央及び右プロット）及び含まない（上段中央及び右プロット）、ＰＤ－１及びＴＣＲβ鎖の表面発現を示すフローサイトメトリープロットである。ｘ軸に示されるＴ細胞：Ａ３７５細胞比で、ＨＬＡ－Ａ２及び抗原を発現するＡ３７５腫瘍細胞と共培養した場合の示されるようなＮＹ－ＥＳＯ－１／ＰＤ１ベースの共刺激分子の組み合わせを発現するＩＬ－２（上のグラフ）及びＩＦＮγ（下のグラフ）産生Ｔ細胞を示すグラフである。示されるようなＩＣＯＳ＿４－１ＢＢ（トランケート型）シグナル伝達ドメイン（ＰＤ－１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）を含む共刺激分子構築物を含む／含まないで示される、示される野生型ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲ又は変異体高親和性（ＨＡ）ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲを発現するＴ細胞によるＡ３７５細胞の用量依存的死滅を示すグラフである。ｘ軸は、用量（Ｔ細胞：Ａ３７５細胞比）及び生存している総投入Ａ３７５細胞のパーセンテージを示す。シグナル伝達ペプチドを含む及び含まない共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
第３世代尾部の変異が、形質導入された初代Ｔ細胞上のＣＤ－１９ ＣＡＲ受容体の表面発現を増加させることを示す。形質導入されていないＴ細胞（ｘによってマークされる）又は示された構築物で形質導入されたＴ細胞（＊によってマークされる）へのＣＤ－１９Ｆｃ結合のヒストグラムを示す。ＦＭＣ６３ｓｃＦＶ＿ＢＢ＿Ｚに対して正規化された、図１３Ａに示されるヒストグラムのＭＦＩ測定値を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
第３世代尾部の変異が、形質導入された初代Ｔ細胞上のＣＤ－１９ ＣＡＲ受容体の表面発現を増加させることを示す。形質導入されていないＴ細胞（ｘによってマークされる）又は示された構築物で形質導入されたＴ細胞（＊によってマークされる）へのＣＤ－１９Ｆｃ結合のヒストグラムを示す。ＦＭＣ６３ｓｃＦＶ＿ＢＢ＿Ｚに対して正規化された、図１３Ａに示されるヒストグラムのＭＦＩ測定値を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代尾部が、サイトカイン産生及び腫瘍死滅を増加させることを示す。ＣＡ Ｒ形質導入初代Ｔ細胞によるＣＤ１９陽性細胞のインビトロ死滅を示す。ＣＤ２８ベース（左パネル）及びＩＣＯＳベース（右パネル）の第２世代及び第３世代受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞との９６時間の共培養後のＢ細胞株（Ｎａｌｍ６細胞）の残存細胞数を示す。ＣＤ２８ベース（左パネル）及びＩＣＯＳベース（右パネル）の第２世代及び第３世代受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞との９６時間の共培養後のＢ細胞株（Ｒａｊｉ細胞）の残存細胞数を示す。ｙ軸は、ｘ軸に示されるＴ細胞のＣＤ１９陽性細胞に対する比に対応する、残存するＣＤ１９陽性細胞の数を示す。ＣＤ１９陽性Ｂ細胞との１８時間のインキュベーションに応答して、ｘ軸に示されるＴ細胞：標的細胞比で、第２世代及び第３世代、ＣＤ２８ベースの受容体（左パネル）及びＩＣＯＳベースの受容体（右パネル）を発現するＴ細胞による、ｙ軸に示される１８時間－ＩＦＮγ産生を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代尾部が、サイトカイン産生及び腫瘍死滅を増加させることを示す。ＣＡ Ｒ形質導入初代Ｔ細胞によるＣＤ１９陽性細胞のインビトロ死滅を示す。ＣＤ２８ベース（左パネル）及びＩＣＯＳベース（右パネル）の第２世代及び第３世代受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞との９６時間の共培養後のＢ細胞株（Ｎａｌｍ６細胞）の残存細胞数を示す。ＣＤ２８ベース（左パネル）及びＩＣＯＳベース（右パネル）の第２世代及び第３世代受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞との９６時間の共培養後のＢ細胞株（Ｒａｊｉ細胞）の残存細胞数を示す。ｙ軸は、ｘ軸に示されるＴ細胞のＣＤ１９陽性細胞に対する比に対応する、残存するＣＤ１９陽性細胞の数を示す。ＣＤ１９陽性Ｂ細胞との１８時間のインキュベーションに応答して、ｘ軸に示されるＴ細胞：標的細胞比で、第２世代及び第３世代、ＣＤ２８ベースの受容体（左パネル）及びＩＣＯＳベースの受容体（右パネル）を発現するＴ細胞による、ｙ軸に示される１８時間－ＩＦＮγ産生を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代尾部が、サイトカイン産生及び腫瘍死滅を増加させることを示す。ＣＡ Ｒ形質導入初代Ｔ細胞によるＣＤ１９陽性細胞のインビトロ死滅を示す。ＣＤ２８ベース（左パネル）及びＩＣＯＳベース（右パネル）の第２世代及び第３世代受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞との９６時間の共培養後のＢ細胞株（Ｎａｌｍ６細胞）の残存細胞数を示す。ＣＤ２８ベース（左パネル）及びＩＣＯＳベース（右パネル）の第２世代及び第３世代受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞との９６時間の共培養後のＢ細胞株（Ｒａｊｉ細胞）の残存細胞数を示す。ｙ軸は、ｘ軸に示されるＴ細胞のＣＤ１９陽性細胞に対する比に対応する、残存するＣＤ１９陽性細胞の数を示す。ＣＤ１９陽性Ｂ細胞との１８時間のインキュベーションに応答して、ｘ軸に示されるＴ細胞：標的細胞比で、第２世代及び第３世代、ＣＤ２８ベースの受容体（左パネル）及びＩＣＯＳベースの受容体（右パネル）を発現するＴ細胞による、ｙ軸に示される１８時間－ＩＦＮγ産生を示す。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代シグナル伝達ドメインと比較して、インビトロでＣＤ１９－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＡＪＩ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｎａｌｍ６）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｒａｊｉ）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｒａｊｉ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代シグナル伝達ドメインと比較して、インビトロでＣＤ１９－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＡＪＩ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｎａｌｍ６）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｒａｊｉ）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｒａｊｉ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代シグナル伝達ドメインと比較して、インビトロでＣＤ１９－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＡＪＩ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｎａｌｍ６）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｒａｊｉ）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｒａｊｉ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代シグナル伝達ドメインと比較して、インビトロでＣＤ１９－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＡＪＩ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｎａｌｍ６）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｒａｊｉ）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｒａｊｉ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代シグナル伝達ドメインと比較して、インビトロでＣＤ１９－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＡＪＩ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｎａｌｍ６）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｎａｌｍ６ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞（Ｒａｊｉ）数（標的細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、Ｒａｊｉ Ｂ細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。ＲＡＪＩ Ｂ細胞標的を用いた、時間０又は５回連続刺激後の、示されるようなＣＡＲ－Ｔ細胞上のＴｉｍ３及びＰＤ－１発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代配列と比較して、インビトロでＢＣＭＡ－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。示されるように、形質導入されていないＴ細胞（「Ｘ」によって示される）又はＣＤ２８ベース及びＩＣＯＳベースの第２世代及び第３世代共刺激分子（「＊」によって示される）を含む示されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ受容体で形質導入されたＴ細胞へのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合のフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１６ＡのＦＡＣＳプロットの形質導入Ｔ細胞からのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合（ＭＦＩ）（ｘ軸）を示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示す一連のグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞数（Ｔ細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ｘ軸に示されるエフェクター対標的比で１８時間インキュベートした、示されるように、ＣＤ２８ベース又はＩＣＯＳベースの共刺激分子を含む示されるＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた、サイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル、ＴＮＦ、中央パネル及びＩＦＮγ、右パネル）（ｙ軸）を示す一連のグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代配列と比較して、インビトロでＢＣＭＡ－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。示されるように、形質導入されていないＴ細胞（「Ｘ」によって示される）又はＣＤ２８ベース及びＩＣＯＳベースの第２世代及び第３世代共刺激分子（「＊」によって示される）を含む示されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ受容体で形質導入されたＴ細胞へのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合のフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１６ＡのＦＡＣＳプロットの形質導入Ｔ細胞からのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合（ＭＦＩ）（ｘ軸）を示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示す一連のグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞数（Ｔ細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ｘ軸に示されるエフェクター対標的比で１８時間インキュベートした、示されるように、ＣＤ２８ベース又はＩＣＯＳベースの共刺激分子を含む示されるＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた、サイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル、ＴＮＦ、中央パネル及びＩＦＮγ、右パネル）（ｙ軸）を示す一連のグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代配列と比較して、インビトロでＢＣＭＡ－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。示されるように、形質導入されていないＴ細胞（「Ｘ」によって示される）又はＣＤ２８ベース及びＩＣＯＳベースの第２世代及び第３世代共刺激分子（「＊」によって示される）を含む示されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ受容体で形質導入されたＴ細胞へのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合のフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１６ＡのＦＡＣＳプロットの形質導入Ｔ細胞からのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合（ＭＦＩ）（ｘ軸）を示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示す一連のグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞数（Ｔ細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ｘ軸に示されるエフェクター対標的比で１８時間インキュベートした、示されるように、ＣＤ２８ベース又はＩＣＯＳベースの共刺激分子を含む示されるＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた、サイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル、ＴＮＦ、中央パネル及びＩＦＮγ、右パネル）（ｙ軸）を示す一連のグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代配列と比較して、インビトロでＢＣＭＡ－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。示されるように、形質導入されていないＴ細胞（「Ｘ」によって示される）又はＣＤ２８ベース及びＩＣＯＳベースの第２世代及び第３世代共刺激分子（「＊」によって示される）を含む示されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ受容体で形質導入されたＴ細胞へのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合のフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１６ＡのＦＡＣＳプロットの形質導入Ｔ細胞からのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合（ＭＦＩ）（ｘ軸）を示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示す一連のグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞数（Ｔ細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ｘ軸に示されるエフェクター対標的比で１８時間インキュベートした、示されるように、ＣＤ２８ベース又はＩＣＯＳベースの共刺激分子を含む示されるＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた、サイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル、ＴＮＦ、中央パネル及びＩＦＮγ、右パネル）（ｙ軸）を示す一連のグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
改変された第３世代シグナル伝達ドメインが、元の第３世代配列と比較して、インビトロでＢＣＭＡ－ＣＡＲ機能を増加させることを示す。示されるように、形質導入されていないＴ細胞（「Ｘ」によって示される）又はＣＤ２８ベース及びＩＣＯＳベースの第２世代及び第３世代共刺激分子（「＊」によって示される）を含む示されたＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ受容体で形質導入されたＴ細胞へのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合のフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１６ＡのＦＡＣＳプロットの形質導入Ｔ細胞からのＢＣＭＡ－Ｆｃ結合（ＭＦＩ）（ｘ軸）を示すグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積Ｔ細胞数（Ｔ細胞増殖を示す）（ｙ軸）を、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示す一連のグラフである。ａ）ＣＤ２８ベース２世代及び３世代受容体（左パネル）、並びにｂ）ＩＣＯＳベース２世代及び３世代受容体（右パネル）を発現するＴ細胞の累積標的細胞数（Ｔ細胞死滅を示す）（ｙ軸）を、ｘ軸上に示されるように、ＲＰＭＩ－８２２６多発性骨髄腫標的細胞による反復刺激にわたって示すグラフである。ｘ軸に示されるエフェクター対標的比で１８時間インキュベートした、示されるように、ＣＤ２８ベース又はＩＣＯＳベースの共刺激分子を含む示されるＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた、サイトカイン産生（ＩＬ－２、左パネル、ＴＮＦ、中央パネル及びＩＦＮγ、右パネル）（ｙ軸）を示す一連のグラフである。共刺激分子のアミノ酸／核酸配列は、示される通りである。
本明細書では、新規のキメラ共刺激細胞内ドメインが提供される。本明細書で提供されるキメラ共刺激細胞内ドメインは、（ａ）ＣＤ２８ファミリータンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインに基づく第１のシグナル伝達ドメインと、（ｂ）ＴＮＦＲファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む少なくとも第２のシグナル伝達ドメインとを含む。
ＣＤ２８ファミリータンパク質は、単一の細胞外免疫グロブリン可変様（ＩｇＶ）ドメインと、それに続く短い細胞質尾部とを有する。ＣＤ２８ファミリータンパク質のメンバーとしては、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、誘導性共刺激因子（ＩＣＯＳ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２）、プログラム死－１（ＰＤ－１）、並びにＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）が挙げられる。ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ及びＩＣＯＳは、活性化、高レベルのサイトカイン／ケモカイン発現、アポトーシスに対する耐性、及びＴ細胞の増殖を促進する、Ｔ細胞上に発現される共刺激タンパク質である。
腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質としては、ＴＮＦＲ１（腫瘍壊死因子受容体１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＴＮＦＲ２（腫瘍壊死因子受容体２／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンホトキシンβ受容体／ＴＮＦＲＳＦ３、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、デコイ受容体３／ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＤＲ４（細胞死受容体４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＤＲ５（細胞死受容体５／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、デコイ受容体１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、デコイ受容体２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＲＡＮＫ（ＮＦ－κＢの受容体活性化因子／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、ＯＰＧ（オステオプロテゲリン／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＤＲ３（細胞死受容体３／ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＴＷＥＡＫ受容体／ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ－Ｒ（ＢＡＦＦ受容体／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＨＶＥＭ（ヘルペスウイルス侵入メディエーター／ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体／ＴＮＦＲＳＦ１６、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原／ＴＮＦＲＳＦ１７、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体／ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＡＪ（毒性及びＪＮＫ誘導物質／ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＤＲ６（細胞死受容体６／ＴＮＦＲＳＦ２１）、ＴＮＦＲＳＦ２２、ＴＮＦＲＳＦ２３、エクトジスプラシンＡ２アイソフォーム受容体／ＴＮＦＲＳ２７及びエクトジスプラシン１－無汗性受容体が挙げられる。腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）リガンドとＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）受容体との間の相互作用は、免疫細胞の生存、増殖、分化、及びエフェクター機能を制御する共刺激シグナルを提供する。ＴＮＦＲＳＦメンバーによって誘導される特異的な細胞内シグナルに応じて、それらは、３つの群－デスドメイン（ＤＤ）含有受容体、デコイ受容体、及びＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）結合受容体に分類することができる。ＴＮＦＲ－１、Ｆａｓ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、及びＤＲ６などのいくつかのＴＮＦＲＳＦは、それら自体のＤＤを含有し、かつ／又は他の細胞質ＤＤ含有アダプター分子と相互作用する。ＴＮＦＲ－２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、Ｆｎ１、リンホトキシンβ受容体（ＬＴβＲ）、ＯＸ４０、ＮＦ－κＢの受容体活性化因子（ＲＡＮＫ）、及びＸＥＤＡＲなどのいくつかの他のＴＮＦＲＳＦは、ＤＤを欠き、ＴＲＡＦタンパク質を動員するＴＲＡＦ相互作用モチーフ（ＴＩＭ）と呼ばれる４～６個のアミノ酸を有するモチーフを含有する。ＴＲＡＦタンパク質は、細胞の生存、増殖、及びサイトカイン産生を助けるＮＦ－κＢ、ヤヌスキナーゼ（ＪＮＫ）、ＥＲＫ、ｐ３８ＭＡＰＫ、及びＰＩ３Ｋなどの複数の下流シグナル伝達経路を活性化するアダプター分子である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ファミリータンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインに基づく第１のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８タンパク質、ＩＣＯＳタンパク質又はそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）及びＣＤ１３４（ＯＸ－４０）から選択されるＴＮＦＲファミリータンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの変異体に基づく。
本明細書では、本出願の第３世代共刺激ドメインに基づく新規のキメラ共刺激細胞内ドメインが提供される。表面発現の低下は、治療目的のためのキメラ共刺激タンパク質の開発における主要な障害である。本開示は、共刺激を誘導するのに有効な現在の第２世代及び第３世代キメラ受容体と比較して高度に発現され、かつ高度に機能的である、本出願の第３世代共刺激ドメインにおける変異を介して生成された新規のキメラ共刺激細胞内ドメインを提供する。本明細書で提供されるキメラ共刺激細胞内ドメインは、（ａ）ＣＤ２８タンパク質、ＩＣＯＳタンパク質又はそれらの組み合わせの細胞内シグナル伝達ドメインに基づく第１のシグナル伝達ドメインと、（ｂ）変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインである少なくとも第２のシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインは、ＣＤ１３７又はＣＤ１３４細胞内ドメインの膜近位部分における１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入又は置換を含む。いくつかの実施形態では、膜近位部分中の１つ以上のアミノ酸は、ＣＤ１３７又はＣＤ１３４タンパク質のユビキチン化及び分解に関与するユビキチン化部位である。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインは、ＣＤ１３７又はＣＤ１３４細胞内ドメインの膜近位部分における１つ以上のリジン残基の欠失、挿入又は置換を含む。いくつかの実施形態では、リジン残基は、ＣＤ１３７又はＣＤ１３４タンパク質のユビキチン化及び分解に関与するユビキチン化部位である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるキメラ共刺激細胞内ドメインは、第３のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第３のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインに基づき得る。
いくつかの実施形態では、本出願の新規の共刺激細胞内ドメインは、機能的組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）を形成するために、任意の既知の共刺激タンパク質の細胞外ドメイン、細胞内因性免疫チェックポイント阻害剤、キメラ抗原受容体、抗体若しくはその一部分、リガンド若しくはその受容体、サイトカイン若しくはその受容体、ケモカイン若しくはその受容体、又は補体受容体とインフレームで組み合わせるか又は融合させることができる。いくつかの実施形態では、ＲＴＣＲは、別のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体又は共刺激タンパク質と組み合わせて細胞において発現され得る。本明細書に開示される新規の共刺激細胞内ドメインを含むＲＴＣＲは、Ｔ細胞においてＴＣＲと共発現される場合、第二世代共刺激受容体と比較して、ＲＴＣＲの細胞表面発現、並びに／又はＴ細胞の細胞増殖、活性化、持続性、サイトカイン産生及び／若しくはエフェクター機能を有意に増加させる。
共有される安全な腫瘍関連抗原を標的とし、抑制性腫瘍微小環境に耐えることができるＴ細胞枯渇の細胞内因性阻害剤を含む、非常に有効な養子細胞治療薬が、本出願に記載される。ＰＤ－１の細胞外ドメイン及び機能的に最適化されたキメラ細胞内共刺激ドメインを発現する例示的なキメラ分子が本明細書に開示される。本開示のキメラ分子を発現する改変Ｔ細胞を生成して、Ｔ細胞刺激、活性化及び増殖の増強におけるキメラ分子の有効性を示す。両方の分子が同じＴ細胞上で発現され、同族ＭＨＣ／ペプチド複合体及び高レベルのＰＤ－Ｌ１／／ＰＤ－Ｌ２の両方を発現する腫瘍細胞に強く反応するＴＣＲ－Ｔ産物を作製する。
例示のために、腫瘍細胞のＴ細胞媒介性死滅の有効性を増強するために、腫瘍関連抗原又は特異的抗原を標的化するＴ細胞受容体と組み合わせた第３世代キメラＰＤ－１受容体の共発現によってＴ細胞枯渇の細胞内因性阻害剤が開発される。本明細書に開示される第３世代キメラ受容体は、任意の内因性又は改変Ｔ細胞受容体並びにキメラ人工受容体（ＣＡＲ）と組み合わせて使用することができる。本明細書の結果は、本明細書に開示される第３世代共刺激分子が、高い生理学的アビディティ及び持続的な増殖能を有するＴ細胞を産生する一方で、ＰＤ－１による負のシグナル伝達を無効にし、代わりに、ＰＤ－Ｌ１の豊富な環境において共刺激シグナルを送達することを示す。新規の共刺激分子は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）特異的ＴＣＲと共発現され得、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２及びＴＡＡ発現腫瘍を標的化するために使用され得る。このことが示すように、ＴＣＲ活性化と共刺激分子との間の相乗効果が、治療域を有意に増加させ、臨床研究のための潜在的により有効な候補を生成する。以下に記載する開示では、第３世代キメラタンパク質の設計を系統的に最適化して、インビトロでの抗癌有効性の改善を更に検証し、インビボでの抗腫瘍有効性を調査する。
ＰＤ－１の細胞外ドメインを、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３４、及びＣＤ１３７の細胞内ドメインと、単独で及び様々な組み合わせで組み込む共刺激分子を生成する。これらの配列は、ＣＤ２８とＴＮＦ受容体ファミリーシグナル伝達ドメインとの間の接合部に焦点を当てて、キメラ受容体のシグナル伝達ドメイン内に重要な変異／欠失を組み込むことによって、表面発現及び機能性について最適化される。これらの受容体の機能性は、可溶性及びプレート結合抗体刺激と、ＰＤ－Ｌ１又はＡ３７５腫瘍細胞を発現するＫ５６２標的細胞との組み合わせを使用して、表面発現、インビトロシグナル伝達、インビトロＴ細胞コンジュゲーション、サイトカイン産生、増殖、及び細胞傷害性に基づいて試験される。
本明細書の開示は、ＴＣＲ－Ｔ産物が、組換えＴＡＡ特異的ＴＣＲ又は内因性ＴＣＲと共にキメラ共刺激分子を共発現するアプローチを提供する。このアプローチは、チェックポイント阻害の同時拮抗及び輸液されたＴ細胞産物への共刺激シグナルの送達を伴いながら腫瘍関連抗原を標的とすることができる。このアプローチは、はるかに改善された産物をもたらすだけでなく、更なるＴＣＲ－Ｔ産物のための普遍的な機能増強プラットフォームを開発するのにも役立つ。
２つのドメインを組み合わせた第３世代ＣＡＲの臨床的採用を妨げる重要な技術的困難は、細胞表面でのキメラタンパク質の異常に低い発現及び関連する機能性の低下であった（Ｚｈａｏ，２０１５，Ｇｕｅｄａｎ，２０１８）。これは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインとＣＤ１３７シグナル伝達ドメインとの組み合わせが、低発現された非機能的な受容体をもたらした共刺激分子においても当てはまった（Ａｎｋｒｉ，２０１３）。本明細書に開示されるのは、ＩＣＯＳ／ＣＤ１３７シグナル伝達ドメインに基づき、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン単独を使用した過去の試験に対して有意な改善である表面発現に最適化されたスイッチ受容体／共刺激分子であり、養子移入された細胞のエフェクター機能及び持続性の両方の増加を媒介する。本明細書に記載される結果は、本明細書に開示される第３世代共刺激分子が、高い生理学的アビディティ及び持続的な増殖能を有するＴ細胞を産生する一方で、ＰＤ－１による負のシグナル伝達を無効にし、代わりに、ＰＤ－Ｌ１の豊富な環境において共刺激シグナルを送達することを示す。本明細書に開示される新規のスイッチ受容体／共刺激分子は、内因性ＴＣＲ又はＴＡＡ特異的ＴＣＲと共発現され得、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２発現腫瘍を標的化するために使用され得る。このことが示すように、ＴＣＲ活性化と共刺激分子との間の相乗効果が、臨床研究のための潜在的により有効な候補についての治療域を有意に増加させる。
腫瘍関連抗原及び腫瘍特異的抗原は、腫瘍外の、オンターゲット副作用のリスクを比較的最小限にして、腫瘍の免疫学的標的化を可能にする。腫瘍細胞は、これらの抗原を上方制御することができ、次いで、ヒト免疫反応又はＡＣＴによって標的化することができる。本明細書の開示は、ＣＤ２８ベースの受容体よりも優れた機能性を示す第３世代ＣＡＲに基づく共刺激分子を、ＴＡＡを標的化する新たな高親和性ＴＣＲと組み合わせて、ＴＭＥの抑制機能に抵抗するＴＣＲ－Ｔ産物を生成する。
本開示は、組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）であって、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ細胞内ドメインであって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ細胞内ドメインとを含む、ＲＴＣＲを提供する。
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインは、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインのいずれか１つである。
本開示は、組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）であって、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ細胞内ドメインであって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインを含む、キメラ細胞内ドメインとを含む、ＲＴＣＲを提供する。
別段の指示がない限り、「共刺激（co-stimulatory）分子」、「共刺激（costimulatory）分子」、「共刺激（co stimulatory）分子」、「共刺激（co-stimulatory）タンパク質」、「共刺激（costimulatory）タンパク質」、「共刺激（co stimulatory）タンパク質」、「共刺激（co-stimulatory）受容体」、「共刺激（costimulatory）受容体」、「共刺激（co stimulatory）受容体」及び「スイッチ受容体」という用語は互換的に使用され、本出願の新規のキメラ共刺激細胞内ドメインを含む組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）を指す。これらの用語は、「組換えＴ細胞」、「組換え」、「キメラＴ細胞」、及び「キメラ」などの用語と組み合わせて、本出願のＲＴＣＲを指すために使用され得る。
本明細書に記載されるように、本開示の「組換えＴ細胞共刺激受容体」又は「スイッチ受容体」は、細胞外ドメインを本開示の細胞内キメラ細胞内タンパク質に作動可能に連結することによって生成される「共刺激分子」、「共刺激受容体」又は「共刺激タンパク質」である。
本明細書に記載される「ＣＤ１３７」は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーであり、４－１ＢＢ、ＣＤ１３７、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）とも称され、リンパ球活性化（ＩＬＡ）によって誘導される。本明細書に記載されるように、「ＣＤ１３７」、「４－１ＢＢ」、「４－１ＢＢ ｗｔ」、「４－１ＢＢ野生型」、「ＢＢ」、「ＢＢ ｗｔ」及び「ＢＢ野生型」という用語は、例えば、本出願の構築物又は共刺激分子を記載する場合、別段の指示がない限り、全体を通して互換的に使用される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、哺乳動物ＣＤ１３７由来であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ１３７は、ヒトＣＤ１３７、マウスＣＤ１３７、ラットＣＤ１３７、又はサルＣＤ１３７であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｕ０３３９７、ＡＡＡ６２４７８、ＮＰ＿００１５５２、Ｑ０７０１１、ＡＡＨ０６１９６及びＸＰ＿００６７１０６８１によるヒトＣＤ１３７アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ヒトＣＤ１３７、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１０７０９７７．１、ＮＰ＿００１０７０９７６．１、ＮＰ＿０３５７４２．１、ＮＰ＿０３３４３０．１、Ｐ２０３３４．１、ＸＰ＿０１１２４８５３０．１、ＸＰ＿０１１２４８５３０．１、ＡＢＩ３０２１３．１、ＢＡＥ３２７２４．１及びＡＡＨ２８５０７．１によるマウスＣＤ１３７アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、マウスＣＤ１３７、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿８５２０４９．１、ＮＰ＿００１０２０９４４．１、ＢＡＤ９９４０４．１、ＸＰ＿００８７６２５０４．１、ＸＰ＿００６２３９５３４．１、ＥＤＬ８１１９６．１、ＡＡＨ９７４８３．１、ＥＨＢ１６６６３．１、ＥＨＢ１６６６３．１、ＫＦＯ３８２８２．１、ＸＰ＿０１０６１８１７７．１、ＸＰ＿０２９４１４１５５．１、ＸＰ＿０２９４１４１５４．１、ＸＰ＿０２１０９９２１９．１及びＸＰ＿０１２８８８５８４．１によるラットＣＤ１３７アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ラットＣＤ１３７又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＢＹ４７５７５．１、ＡＢＩ３０２１２．１、ＡＢＹ４７５７７．１、ＡＢＹ４７５７６．１及びＡＢＹ４７５７８．１によるサルＣＤ１３７アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、サルＣＤ１３７、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ１３７タンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置２１４から始まりＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメインは、本明細書に記載のマウスＣＤ１３７タンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置２１５から始まりＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、１つ以上の変異を含む本明細書に記載のＣＤ１３７タンパク質のいずれか１つに由来し、変異は、ＣＤ１３７タンパク質のアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸の付加／挿入、欠失／トランケーション又は置換／置き換えであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、１つ以上の変異を含む本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメイン配列のいずれか１つであり、変異は、ＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸の付加／挿入、欠失／トランケーション又は置換／置き換えであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ユビキチン化の標的となり得るＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸の欠失又は置換を含む、本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ユビキチン化の標的となり得るＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のリジン残基の欠失又は置換を含む、本明細書に記載のＣＤ１３７タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、ユビキチン化の標的となり得るＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１、２、３又は４つのリジン残基の欠失又は置換を含む、本明細書に記載のＣＤ１３７タンパク質である。いくつかの実施形態では、欠失又は置換され得る、本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸配列内のリジン残基は、ＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸位置２１４、２１８、２１９及び／又は２２５にある。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインであり得る。本明細書に記載のトランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、５０、１００、２００又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチが、本明細書に記載のＣＤ１３７タンパク質のＮ末端から欠失している、本明細書に記載のＣＤ１３７タンパク質のいずれか１つであり得る。本明細書に記載のトランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチが本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端から欠失している、本明細書に記載のＣＤ１３７細胞内ドメイン配列のいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端から欠失したアミノ酸は、ＣＤ１３７細胞内ドメインの１つ以上の近位多塩基アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸位置１３からアミノ酸位置４２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号１によるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載されるトランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、別段の指示がない限り、例えば、本出願の構築物又は共刺激分子を記載する場合、全体を通して互換的に「トランケート型ＣＤ１３７」、「ＣＤ１３７ｔ」、「トランケート型４－１ＢＢ」、「４－１ＢＢｔ」、「トランケート型ＢＢ」又は「ＢＢｔ」と称される。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３又は４個のリジン残基の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上のリジン変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、５、６及び１２から選択されるアミノ酸位置の１つ以上のリジン変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のリジン変異は、リジンからアラニンへの変異である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号１によるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、３、４、５及び６から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む。いくつかの実施形態では、リジン変異は、リジンからアラニンへの変異である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号１によるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載される「ＣＤ１３４」は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーであり、ＯＸ－４０、ＡＣＴ３５、ＩＭＤ１６、ＴＸＧＰ１Ｌ及び腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）とも称される。本明細書に記載される場合、「ＣＤ１３４」、「ＯＸ－４０」、「ＯＸ４０」、「ＯＸ－４０野生型」、「ＯＸ－４０ ｗｔ」、「ＯＸ４０野生型」、「ＯＸ４０ ｗｔ」、「４０」、「４０野生型」及び「４０ｗｔ」という用語は、別段の指示がない限り、例えば、本出願の構築物又は共刺激分子を記載する場合、全体を通して互換的に使用される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、哺乳動物ＣＤ１３４由来であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ１３４は、ヒトＣＤ１３４、マウスＣＤ１３４、ラットＣＤ１３４、又はサルＣＤ１３４であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００３３１８、ＡＡＩ０５０７１、ＡＡＩ０５０７３、ＸＰ＿０１６８５７７２１．１、ＸＰ＿０１６８５７７２０．１、ＸＰ＿０１１５４０３７７．１、ＸＰ＿０１１５４０３７９．１、ＸＰ＿０１１５４０３７８．１、ＸＰ＿０１１５４０３７６．１、Ｐ４３４８９．１、ＮＰ＿００１２８４４９１．１、ＮＰ＿００３３１７．１、ＥＡＷ５６２７８．１及びＣＡＢ９６５４３．１によるヒトＣＤ１３４アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ヒトＣＤ１３４、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０３５７８９．１、ＡＡＩ３９２６７．１、ＡＡＩ３９２４０．１、ＮＰ＿０３３４７８．１、ＸＰ＿００６５３８７８７．３、Ｐ４７７４１．１、ＥＤＬ１５０６７．１、ＣＡＡ７９７７２．１、ＣＡＡ５９４７６．１、ＸＰ＿０２１０１７１０２．２、及びＸＰ＿０２１０５６７１４．１によるマウスＣＤ１３４アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、マウスＣＤ１３４、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０３５７８９．１、ＮＰ＿０３７１８１．１、Ｐ１５７２５．１、ＥＤＬ８１３５３．１、ＣＡＢ９６５４３．１、及びＣＡＡ３４８９７．１によるラットＣＤ１３４アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ラットＣＤ１３４、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＰ＿０１０３７５４８３．１、ＸＰ＿００１０９０８７０．１、ＸＰ＿０２１５２３１４４．１、ＸＰ＿０１７７５０７４４．１、ＸＰ＿００３９３９７１４．１、ＸＰ＿０２６３１３２２９．１、ＸＰ＿０２６３１３２２８．１、ＸＰ＿００３８９０９９８．２、ＸＰ＿０２５２４２４７３．１、ＸＰ＿０１１７６８６２７．１、ＸＰ＿００５５４５１７９．１、ＸＰ＿０１１８８６５１３．１、ＸＰ＿０１１８８６５１２．１、ＸＰ＿０１１８５７３８７．１及びＸＰ＿０１１８１１７６９．１によるサルＣＤ１３４アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、サルＣＤ１３４、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ１３４タンパク質のいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸位置２４１から始まりＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメインは、本明細書に記載のマウスＣＤ１３４タンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置２３６から始まりＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、１つ以上の変異を含む本明細書に記載のＣＤ１３４タンパク質のいずれか１つに由来し、変異は、ＣＤ１３４タンパク質のアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸の付加／挿入、欠失／トランケーション又は置換／置き換えであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、１つ以上の変異を含む本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメイン配列のいずれか１つであり、変異は、ＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸の付加／挿入、欠失／トランケーション又は置換／置き換えであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ユビキチン化の標的となり得るＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸の欠失又は置換を含む、本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ユビキチン化の標的となり得るＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のリジン残基の欠失又は置換を含む、本明細書に記載のＣＤ１３４タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ユビキチン化の標的となり得るＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸配列内の１つ又は２つのリジン残基の欠失又は置換を含む、本明細書に記載のＣＤ１３４タンパク質である。いくつかの実施形態では、欠失又は置換され得る、本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸配列内のリジン残基は、ＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸位置２５２及び／又は２７６にある。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインであり得る。本明細書に記載のトランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、５０、１００、２００又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチが、本明細書に記載のＣＤ１３７タンパク質のＮ末端から欠失している、本明細書に記載のＣＤ１３４タンパク質のいずれか１つであり得る。本明細書に記載のトランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３以上のアミノ酸の連続ストレッチが本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端から欠失している、本明細書に記載のＣＤ１３４細胞内ドメイン配列のいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端から欠失したアミノ酸は、ＣＤ１３４細胞内ドメインの１つ以上の近位多塩基アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸位置１５からアミノ酸位置３７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、配列番号６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、配列番号６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載されるトランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、「トランケート型ＣＤ１３４」、「ＣＤ１３４ｔ」、「トランケート型ＯＸ－４０」、「トランケート型ＯＸ４０」、「ＯＸ－４０ｔ」、「ＯＸ４０ｔ」及び「４０ｔ」と称され、例えば、本出願の構築物又は共刺激分子を記載する場合、別段の指示がない限り、全体を通して互換的に使用される。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までのリジン残基の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を含む。いくつかの実施形態では、リジン変異は、リジンからアラニンへの変異である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、及び５から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３４細胞内ドメインは、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。
膜近位多塩基領域をイタリック体で示す。潜在的なＰＩ３Ｋ結合部位は太字で下線が引かれている。ＴＲＡＦ１／２結合モチーフ、メジャーモチーフＰｘ（Ｑ／Ｅ）Ｅ及びマイナーモチーフＰｘ（Ｑ／Ｅ）ｘを下線で強調する。潜在的なユビキチン化部位は太字で示されている。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、ＣＤ２８ファミリーのタンパク質に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＩＣＯＳ、又はそれらの組み合わせのいずれか１つに由来する。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、ＩＣＯＳタンパク質に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。
本明細書に記載される「ＩＣＯＳタンパク質」は、誘導性Ｔ細胞共刺激タンパク質であり、ＡＩＬＩＭ、ＣＤ２７８、ＣＣＬＰ、ＣＲＰ－１、Ｈ４、Ｌｙ１１５及びＣＶＩＤ１とも称される。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ細胞内ドメインは、哺乳動物ＩＣＯＳ由来であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＩＣＯＳは、ヒトＩＣＯＳ、マウスＩＣＯＳ、ラットＩＣＯＳ又はサルＩＣＯＳであり得る。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＨ２８００６．１、ＮＰ＿０３６２２４．１、ＡＩＣ５１２８７．１、ＡＩＣ６００３６．１、ＮＰ＿０３６２２４．１、Ｑ９Ｙ６Ｗ８．１、ＥＡＷ７０３５７．１、ＥＡＷ７０３５６．１、ＥＡＷ７０３５５．１、ＡＡＬ４０９３４．１、ＡＡＬ４０９３３．１、ＣＡＣ０６６１２．１、ＡＡＸ９３０７３．１、ＡＡＭ００９０９．１、ＡＡＨ２８２１０．１及びＣＡＤ５９７４２．１によるヒトＩＣＯＳアミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ヒトＩＣＯＳ、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０５９５０８．２、Ｑ９ＷＶＳ０．２、ＥＤＬ００１６１．１、ＣＡＭ１３２４２．１、ＣＡＭ１３２４１．１、ＣＡＢ７１１５３．１、ＡＡＧ４８７３２．１、ＡＡＨ３４８５２．１、ＸＰ＿００６４９６２０３．１、ＸＰ＿００６４９６２０２．１、ＸＰ＿００６４９６２０１．１、ＡＣＸ５０４６４．１、ＡＣＸ５０４６３．１、ＡＡＨ２８００６．１、ＸＰ＿０２１０５２８８０．１、ＸＰ＿０２９３３４９６８．１及びＸＰ＿０２１０３０２８２．１によるマウスＩＣＯＳアミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、マウスＩＣＯＳ、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０７２１３２．１、Ｑ９Ｒ１Ｔ７．１、ＸＰ＿００８７６５３５８．１、ＸＰ＿００６２４５１００．１、ＸＰ＿００６２４５０９９．１、ＥＤＬ９８９２２．１、ＥＤＬ９８９２１．１、ＸＰ＿０３８９４００９９．１、ＸＰ＿０３２７５５４４９．１ＸＰ＿０１７４５７３６４．１、ＸＰ＿００６２５６３２４．１、ＸＰ＿００６２５６３２３．１、ＸＰ＿００６２５６３２２．１ＸＰ＿０２９４２５７５７．１、ＸＰ＿０２９４２５７５７．１、ＸＰ＿０２１１１９２３６．１、ＸＰ＿０１２９２９９３４．１、ＸＰ＿０１２８６７３７０．１及びＸＰ＿０１２８６７３６３．１によるラットＩＣＯＳアミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ラットＩＣＯＳ、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＰ＿００７９６４１３７．１、ＮＰ＿００１２５３９１８．１、ＸＰ＿０１０３５０９３９．１、ＸＰ＿０１２３０１７８５．１、ＸＰ＿０１２３０１７８４．１、ＸＰ＿０１７７３９８６１．１、ＸＰ＿０１０３３４７１４．１、ＸＰ＿００３９２５６７７．１、ＡＦＨ２９３２８．１、ＸＰ＿００８９９７５２０．１、ＸＰ＿０２３０７５１０７．１、ＸＰ＿０２３０７５０９９．１、ＸＰ＿０２１７７９５９３．１、ＸＰ＿００３９０７８８７．１、ＸＰ＿０２５２６０９８８．１、ＸＰ＿０２５２６０９８７．１、ＸＰ＿０２５２６０９８６．１、ＸＰ＿０１１７１６２８７．１、ＸＰ＿０１１７１６２８５．１、ＸＰ＿００５５７４０７５．１、ＸＰ＿０１１９０３００９．１、ＸＰ＿０１１８０５２８８．１、ＸＰ＿０１１８０５２８７．１、ＸＰ＿０１１８４７８６７．１、ＸＰ＿０１１８４７８６６．１、ＸＰ＿０１７３９２３６２．１、ＸＰ＿０３３０８６４８９．１、ＸＰ＿０３２１３４４１４．１、ＸＰ＿０３２１３４４１３．１及びＸＰ＿０１７８０２３３１．１によるサルＩＣＯＳアミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、サルＩＣＯＳ、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置１３３からＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｎ末端からアミノ酸位置１３３のアミノ酸位置から、Ｃ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置１３３から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｎ末端からＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｎ末端のアミノ酸位置からアミノ酸位置１３３から、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｎ末端のアミノ酸位置からＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ（２８）細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置１３３からアミノ酸位置１８３までのＩＣＯＳドメインアミノ酸配列の一部分、及びアミノ酸位置１８４からＣ末端の最後のアミノ酸までのＩＣＯＳドメインアミノ酸配列の一部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ（２８）細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｎ末端からアミノ酸位置１３３から、アミノ酸位置１８３までのＩＣＯＳドメインアミノ酸配列の一部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ（２８）細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置１３３から、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｃ末端のアミノ酸位置からアミノ酸位置１８３までのＩＣＯＳドメインアミノ酸配列の一部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳ（２８）細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＩＣＯＳタンパク質の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｎ末端からアミノ酸位置１３３のアミノ酸位置から、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸Ｃ末端からアミノ酸位置１８３のアミノ酸位置までのＩＣＯＳドメインアミノ酸配列の一部分を含む。
Ｔｐ４４とも称される「ＣＤ２８タンパク質」は、ナイーブＴ細胞上のＣＤ８０（Ｂ７．１）及びＣＤ８６（Ｂ７．２）タンパク質の構成的に発現される受容体であり、Ｔ細胞活性化に重要である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、哺乳動物ＣＤ２８由来であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ２８は、ヒトＣＤ２８、マウスＣＤ２８、ラットＣＤ２８、又はサルＣＤ２８であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｐ１０７４７．１、ＮＰ＿００１２３０００７．１、ＮＰ＿００１２３０００６．１、ＮＰ＿００６１３０．１、ＥＡＷ７０３５０．１、ＥＡＷ７０３４９．１、ＥＡＷ７０３４８．１、ＥＡＷ７０３４７．１、ＡＩＣ４８４５１．１、ＣＡＣ２９２３７．１、ＡＡＡ５１９４５．１、ＡＡＡ５１９４４．１、ＡＡＬ４０９３１．１、ＡＡＦ３３７９４．１、ＡＡＦ３３７９３．１、ＡＡＦ３３７９２．１、ＸＰ＿０１１５１０４９９．１、ＸＰ＿０１１５１０４９７．１、ＸＰ＿０１１５１０４９６．１、ＡＡＩ１２０８６．１、ＡＡＨ９３６９８．１、ＡＢＫ４１９３８．１、ＡＡＹ２４１２３．１、ＣＡＤ５７００３．１及びＡＡＡ６０５８１によるヒトＣＤ２８アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ヒトＣＤ２８、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＡ３７３９６．１、ＮＰ＿０３１６６８．３、Ｐ３１０４１．２、ＡＡＨ６４０５８．１、ＥＤＬ００１５６．１、ＣＡＭ１３２４９．１、ＸＰ＿０３６０１２２８１．１、ＸＰ＿０２１０５４８０６．１、ＸＰ＿０２１０２７４８１．１、ＸＰ＿０３６０１５６５１．１、及びＸＰ＿０３０１０４８０５によるマウスＣＤ２８アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、マウスＣＤ２８、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＡＡ３９００３．１、ＮＰ＿０３７２５３．２、Ｐ３１０４２．１、ＸＰ＿００８７６５３００．１、ＥＤＬ９８９２６．１、ＸＰ＿０３２７５５４４５．１、ＸＰ＿０３４３５４９１０．１、ＸＰ＿０１９０６１８５９．２、ＸＰ＿００８８４４４７４．１、ＸＰ＿００４８５１４０３．１及びＸＰ＿０１２８６５５０４．１によるラットＣＤ２８アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ラットＣＤ２８、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＢＨ０６８９１．１、ＡＢＨ０８５０８．１、ＡＢＨ０６８９２．１ＡＢＨ０８５０９．１、ＡＢＱ０９４９３．１、ＮＰ＿００１２７４２６２．１ＮＰ＿００１０３６１０６．２、ＡＢＧ７７９９８．１、ＡＢＧ７７９９７．１及びＸＰ＿０１４９６６２０７．１によるサルＣＤ２８アミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、サルＣＤ２８、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。
ＣＤ２８ホモログとも称される「ＣＤ２８Ｈタンパク質」、及び膜貫通及び免疫グロブリンドメイン含有タンパク質２は、Ｂ７Ｈ７に結合することによってＴ細胞において共刺激活性を有する。ＣＤ２８Ｈは、細胞－細胞相互作用、細胞遊走、並びに上皮細胞及び内皮細胞の血管新生に関与する分子として最初に記載された（７、８）。ＣＤ２８Ｈは、単一の細胞外免疫グロブリンドメイン、それに続く膜貫通ドメイン及び１１０アミノ酸長の細胞質領域を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、哺乳動物ＣＤ２８Ｈ由来であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ２８は、ヒトＣＤ２８Ｈ、マウスＣＤ２８Ｈ、ラットＣＤ２８Ｈ、又はサルＣＤ２８Ｈであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８Ｈ細胞内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１２９５１６１．１、ＮＰ＿００１１６２５９７．１、Ｑ９６ＢＦ３．２、ＸＰ＿０２４３０７１２７．１及びＸＰ＿０１６８８１７７３．１によるヒトＣＤ２８Ｈアミノ酸配列のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む、ヒトＣＤ２８Ｈ、又はそのアイソフォーム若しくはバリアントに由来し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＣＤ２８細胞内ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ２８タンパク質のアミノ酸配列のアミノ酸位置１４５からＣ末端の最後のアミノ酸までのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＣＤ２８細胞内ドメインの一部分は、本明細書に記載のヒトＣＤ２８タンパク質のアミノ酸配列の約アミノ酸位置１９５から約アミノ酸位置２１２までのアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＣＤ２８細胞内ドメインの一部分は、本明細書に記載のヒトＣＤ２８タンパク質のアミノ酸配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０以上のアミノ酸位置Ｎ末端からアミノ酸位置１９５から、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０以上のアミノ酸位置Ｃ末端アミノ酸位置２２０までのアミノ酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳに由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳに由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号９によるＩＣＯＳタンパク質（ＩＣＯＳ（２８）ドメイン）と組み合わされたＣＤ２８細胞内ドメインの一部分を含む第１のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメインは、配列番号９によるＩＣＯＳタンパク質のＰＩ－３Ｋ結合部位のＮ末端に挿入されたＣＤ２８細胞内ドメインの部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメインは、配列番号９によるＩＣＯＳタンパク質のＰＩ－３Ｋ結合部位に対して１、２、３、４又は５アミノ酸位置Ｎ末端で挿入されたＣＤ２８の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメインは、配列番号９によるＩＣＯＳタンパク質のＰＩ－３Ｋ結合部位に対してＣ末端に挿入されたＣＤ２８の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメインは、配列番号９によるＩＣＯＳタンパク質のＰＩ－３Ｋ結合部位に対して１、２、３、４又は５アミノ酸位置Ｃ末端で挿入されたＣＤ２８の部分を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列のＩＣＯＳタンパク質内のアミノ酸位置４８の前の任意のアミノ酸位置に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列のＩＣＯＳタンパク質内のアミノ酸位置１からアミノ酸位置４８の任意のアミノ酸位置に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置４７からアミノ酸位置４８に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置４６からアミノ酸位置４７に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置４５からアミノ酸位置４６に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置４４からアミノ酸位置４５に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置４３からアミノ酸位置４４に挿入される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列のＩＣＯＳタンパク質内のアミノ酸位置５１の後の任意の位置に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列のＩＣＯＳタンパク質内のアミノ酸位置５１からアミノ酸位置６７の任意のアミノ酸位置に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置５１からアミノ酸位置５２に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置５３からアミノ酸位置５４に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置５４からアミノ酸位置５５に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置５６からアミノ酸位置５７に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の部分は、配列番号９によるアミノ酸配列を有するＩＣＯＳタンパク質のアミノ酸位置５７からアミノ酸位置５８に挿入される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＩＣＯＳ（２８）ドメインのＣＤ２８の部分は、配列番号１０によるＣＤ２８シグナル伝達ドメインのアミノ酸位置５１からアミノ酸位置６８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＩＣＯＳ（２８）ドメインのＣＤ２８の部分は、配列番号１０による完全長ＣＤ２８シグナル伝達ドメインのアミノ酸位置５１からアミノ酸位置７６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＩＣＯＳ（２８）ドメインのＣＤ２８の部分は、配列番号１０によるＣＤ２８シグナル伝達ドメインのアミノ酸位置４５からアミノ酸位置６８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメイン内に挿入されたＣＤ２８の部分は、ＰＲＲＰモチーフを含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメイン内に挿入されたＣＤ２８の部分は、配列番号１１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメイン内に挿入されたＣＤ２８の部分は、配列番号１１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）ドメインは、配列番号１２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳ（２８）は、配列番号１２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載のＣＤ２８に由来するシグナル伝達ドメインは、全体を通して互換的に「ＣＤ２８」又は「２８」と称される。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１４～１７のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１４～１７のいずれか１つと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２０～１２９のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２０～１２９のいずれか１つと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、配列番号１２９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、第３のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第３のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、又はインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメインのいずれか１つに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はそれらの組み合わせに由来する。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、ＣＤ３ζタンパク質に由来する第３のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８によるアミノ酸配列のＣＤ３ζタンパク質である。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８による少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζである。
ヒトＣＤ３ζ完全長（ＣＤ３Ｚ完全長）（配列番号１８）
ＭＫＷＫＡＬＦＴＡＡＩＬＱＡＱＬＰＩＴＥＡＱＳＦＧＬＬＤＰＫＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５、４６、４７、及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むＣＤ３シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε及びトランケート型ＣＤ３ζドメイン（ＣＤ３ζεドメイン）の組み合わせである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεである。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０によるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインは、第４のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第４のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン若しくはインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせのいずれか１つに由来し、第３及び第４のシグナル伝達ドメインは、同一ではない。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５、４６、４７、及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むＣＤ３シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε及びトランケート型ＣＤ３ζドメイン（ＣＤ３ζεドメイン）の組み合わせである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεである。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０によるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラ細胞内ドメインの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。
Ｔ細胞（T cell）、Ｔ細胞（T-cell）、ｔ細胞（t cell）、ｔ細胞（t-cell）及びＴリンパ球という用語は、本開示において互換的に使用することができる。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、標的に結合して免疫細胞の活性化及び／又は増殖を誘導するタンパク質又はその一部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の成分、ｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の成分、ｃ）Ｔ細胞共受容体の成分であって、Ｔ細胞共刺激タンパク質又はＴ細胞阻害タンパク質である、Ｔ細胞共受容体の成分、ｄ）細胞表面受容体又はその成分に結合するリガンド、ｅ）サイトカイン受容体の成分、ｅ）ケモカイン受容体の成分、ｇ）インテグリン受容体の成分、ｈ）内皮細胞表面タンパク質受容体の成分又はその断片、ｉ）神経ガイダンスタンパク質受容体の成分、及びｆ）補体受容体の成分のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共受容体又はＣＡＲの成分は、ＰＤ１、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４０Ｌ、Ｌａｇ－３、Ｔｉｍ－３、若しくはＴＩＧＩＴの成分、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共受容体又はＣＡＲのリガンド又は成分は、ＣＤ１９、Ｂ細胞成熟Ａｇ（ＢＣＭＡ）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＩＬ－１０、増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、ＢＡＦＦ、ＯＸ－４０Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ４０、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ネクチン、ＣＤ１５５、若しくはＣＤ１１２、又はそれらの組み合わせに結合する。いくつかの実施形態では、サイトカイン受容体は、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＴＧＦ－β、ＩＬ－１２、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＦＮ－γ、若しくはＩＦＮ－α／β、又はそれらの組み合わせに結合する。いくつかの実施形態では、補体受容体の成分は、単一のＣ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、ＣＤ４６／ＭＣＰ、ＣＤ５５、ＣＤ９７、若しくはＤＡＦ、又はそれらの組み合わせの成分である。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ａ）ケモカイン受容体、ｂ）サイトカイン受容体、ｃ）細胞表面受容体に対するリガンド、ｄ）インテグリン受容体、ｅ）細胞接着分子又はその受容体、ｆ）内皮細胞表面タンパク質受容体又はその断片、ｇ）補体受容体、及びｈ）神経ガイダンスタンパク質受容体のいずれか１つの成分のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、ケモカイン受容体（ＣＣＲ）４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＣＲ１０、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、白血球特異的β２インテグリン（αＬβ２、αＭβ２、αＸβ２、αＤβ２）、β７インテグリン（α４β７及びαＥβ７）、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）結合β１インテグリン（α１－α６β１）、Ｌ－セレクチン、又はシアリルルイスｘのいずれか１つの成分のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、抗体又はその断片である。いくつかの実施形態では、抗体又はその断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ダイアボディ、ナノボディ、ｓｄＡｂ、Ｆｖ、ＶＨＨ断片、又は単鎖Ｆｖ断片である。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、２つ以上の同一でない標的抗原を標的化するための２つ以上の結合部位を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、標的抗原上の２つ以上の同一でない部位を標的化するための２つ以上の結合部位を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、二重特異性抗体の２つの抗原結合ドメイン又は断片を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、二重特異性抗体のＦ（ａｂ）２断片を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、多重特異性抗体の２つ以上の抗原結合ドメイン又は断片を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍抗原、病原体関連タンパク質、又は癌、自己免疫疾患若しくは障害、感染症、炎症性疾患、腎疾患若しくは障害、肺疾患若しくは障害、肝疾患若しくは障害、心血管疾患若しくは障害、神経変性障害若しくは障害、又は代謝障害若しくは障害である疾患若しくは障害に関連する抗原である標的に結合する。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍分泌抗原（ＴＳＡ）、又は非従来型抗原（ＵＣＡ）のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、癌生殖系列抗原（ＣＧＡ）、ヒト内在性レトロウイルス（ＨＥＲＶ）、組織分化抗原（ＴＤＡ）及び過剰発現腫瘍抗原のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡは、モザイク単一ヌクレオチド変異（ｍＳＮＶ）、挿入－欠失変異（ＩＮＤＥＬ）、遺伝子融合及びウイルス腫瘍性タンパク質のいずれか１つに由来する。いくつかの実施形態では、ＵＣＡは、ゲノムの非コード領域又はゲノムのコード領域に由来する。いくつかの実施形態では、ＵＣＡは、異常な転写、翻訳、又は翻訳後修飾に由来する。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、固形腫瘍若しくは癌又は血液癌に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、固形腫瘍に関連するか、又は癌は、固形腫瘍として現れるか、固形腫瘍をもたらすか、若しくは固形腫瘍に関連する肉腫、癌腫又はリンパ腫から選択される。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、軟部組織肉腫又は骨の肉腫（骨肉腫）である肉腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、小胞横紋筋肉腫、小胞軟組織肉腫、エナメル上皮腫、血管肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、明組織肉腫、脱分化脂肪肉腫、結合組織の過形成小円形細胞腫瘍、胚横紋筋肉腫、類上皮線維肉腫、類上皮血管内皮腫、類上皮肉腫、炎症性神経芽細胞種（感覚神経芽腫）、ユーイング肉腫、骨外性横紋筋肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨外性骨肉種、線維肉腫、巨細胞腫、血管周皮腫、小児線維肉腫、炎症性筋線維芽細胞腫、カポジ肉腫、骨平滑筋肉腫、脂肪肉腫、骨肉種、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、悪性間葉系腫瘍、悪性末梢神経鞘腫瘍、間葉性軟骨肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液性炎症性線維芽細胞肉腫、血管周囲上皮細胞分化を伴う多発性腫瘍、骨肉種、骨膜外骨肉種、血管周囲上皮細胞分化を伴う腫瘍、骨膜骨肉種、多形脂肪肉腫、多形横紋筋肉腫、ＰＮＥＴ／骨外性ユーイング腫瘍、横紋筋肉腫、小細胞骨肉種、単類線維腫、滑膜肉腫又は毛細管拡張骨肉腫から選択される肉腫に関連する。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、基底細胞癌、扁平上皮癌、腎細胞癌、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、浸潤性乳管癌又は腺癌から選択される癌腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、腺扁平上皮癌、未分化癌、大細胞癌、結腸直腸癌、膵臓癌、上咽頭癌又は小細胞癌から選択される癌腫に関連する。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、肛門癌、虫垂癌、胆管細胞癌（すなわち、胆道癌）、乳癌、膀胱癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、結腸ポリープ、原因不明の原発性癌（ｃｕｐ）、食道癌、眼癌、卵管癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、髄芽細胞腫、メラノーマ、口腔癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、精巣癌、喉頭癌、甲状腺癌、子宮癌、腟癌、又は外陰癌から選択される固形腫瘍又は癌に関連する。
いくつかの実施形態では、乳癌は、浸潤性乳管癌、乳管の上皮内癌、浸潤性小葉癌又は上皮内小葉癌である。いくつかの実施形態では、膵臓癌は、腺癌又は島細胞癌である。いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は、腺癌である。いくつかの実施形態では、結腸ポリープは、家族性大腸腺腫症に関連する。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、移行細胞膀胱癌、扁平上皮膀胱癌、又は腺癌である。いくつかの実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌は、腺癌、扁平上皮肺癌、又は肺大細胞癌である。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌は、肺大細胞癌である。いくつかの実施形態では、肺癌は、小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、前立腺癌は、腺癌又は小細胞癌である。いくつかの実施形態では、卵巣癌は、卵巣上皮癌である。いくつかの実施形態では、胆管細胞癌は、近位胆管細胞癌又は遠位胆管細胞癌である。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、白血病、骨髄腫又はリンパ腫から選択される血液癌のいずれか１つに関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞、Ｔ細胞若しくはＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、混合系統白血病（ＭＬＬ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）から選択される白血病に関連する。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、多発性骨髄腫である骨髄腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、多発性骨髄腫の高二倍体（ＨＭＭ）又は非高二倍体若しくは低二倍体サブタイプから選択される多発性骨髄腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫、意義不明単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ）骨髄腫、又は免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）骨髄腫から選択される多発性骨髄腫に関連する。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫であるリンパ腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、非ホジキンリンパ腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞中心細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、又は辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫から選択される非ホジキンリンパ腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、ホジキンリンパ腫であるリンパ腫に関連する。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、結節硬化型古典的ホジキンリンパ腫、リンパ球が豊富な古典的ホジキンリンパ腫又はリンパ球が枯渇した古典的ホジキンリンパ腫から選択されるホジキンリンパ腫に関連する。
いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ホジキンリンパ腫、ホジキン疾患、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、結腸直腸癌、膵臓癌、上咽頭癌、悪性組織球症、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍に伴う高カルシウム血症、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭部癌、頚部癌、遺伝性非ポリポーシス癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、精巣癌、腺癌、肉腫、悪性メラノーマ、及び血管腫のいずれか１つである癌に関連する。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、カリクレイン４、パピローマウイルス結合因子（ＰＢＦ）、優先的に発現されるメラノーマ抗原（ＰＲＡＭＥ）、ウィルムス腫瘍－Ｉ（ＷＴＩ）、ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ様Ｉ（ＨＳＤＬＩ）、メソテリン、癌精巣抗原（ＮＹ－ＥＳ０－１）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ｐ５３、ヒト上皮増殖因子受容体２／神経受容体チロシンキナーゼ（Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ）、癌関連上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、卵巣癌及び子宮癌抗原（ＣＡＩ２５）、葉酸受容体ａ、精子プロテイン１７、腫瘍関連差次的発現遺伝子－１２（ＴＡＤＧ－１２）、ムチン－１６（ＭＵＣ－１６）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩＣＡＭ）、マンナン－ＭＵＣ－１、ヒト内在性レトロウイルスＫ（ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ）、北九州肺癌抗原－Ｉ（ＫＫ－ＬＣ－１）、ヒト癌／精巣抗原（ＫＭ－ＨＮ－１）、癌精巣抗原（ＬＡＧＥ－Ｉ）、メラノーマ抗原－Ａｌ（ＭＡＧＥ－Ａｌ）、精子表面透明帯結合タンパク質（Ｓｐｌ ７）、滑膜肉腫、Ｘ切断点４（ＳＳＸ－４）、一過性軸索糖タンパク質－１（ＴＡＧ－Ｉ）、一過性軸索糖タンパク質－２（ＴＡＧ－２）、アネイブルドホモログ（ＥＮＡＨ）、マンモグロビンＡ、ＮＹ－ＢＲ－Ｉ、乳癌抗原、（ＢＡＧＥ－１）、Ｂメラノーマ抗原、メラノーマ抗原－Ａｌ（ＭＡＧＥ－Ａｌ）、メラノーマ抗原－Ａ２（ＭＡＧＥ－Ａ２）、ムチンｋ、滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ－２）、タキソール耐性関連遺伝子－３（ＴＲＡＧ－３）、トリ骨髄細胞腫症ウイルス癌遺伝子（ｃ－ｍｙｃ）、サイクリンＢ１、ムチンＩ（ＭＵＣ Ｉ）、ｐ６２、サバイビン、リンパ球共通抗原（ＣＤ４５）、ＤｉｃｋｋｏｐｆＷＮＴシグナル伝達経路インヒビターＩ（ＤＫＫＩ）、テロメラーゼ、カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（Ｋ－ｒａｓ）、Ｇ２５０、腸カルボキシルエステラーゼ、α－フェトプロテイン、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、カスパーゼ５（ＣＡＳＰ－５）、シトクロムＣオキシダーゼアセンブリ因子Ｉホモログ（ＣＯＡ－１）、０結合β－Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ（ＯＧＴ）、増幅された骨肉腫９、小胞体レクチン（ＯＳ－９）、形質転換増殖因子β受容体２（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、マウス白血病グリコプロテイン７０（ｇｐ７０）、カルシトニン関連ポリペプチドα（ＣＡＬＣＡ）、プログラム細胞死１リガンド１（ＣＤ２７４）、マウス二重微小２ホモログ（ｍｄｍ－２）、α－アクチニン－４、伸長因子２、リンゴ酸酵素１（ＭＥＩ）、核転写因子ＹサブユニットＣ（ＮＦＹＣ）、Ｇ抗原１，３（ＧＡＧＥ－１，３）、メラノーマ抗原－Ａ６（ＭＡＧＥ－Ａ６）、癌精巣抗原ＸＡＧＥ－１ｂ、６回膜貫通型前立腺上皮抗原１（ＳＴＥＡＰ１）、ＰＡＰ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）、熱ショックタンパク質ｈｓｐ７０－２、メラノーマ抗原－Ａ９（ＭＡＧＥ－Ａ９）、Ａｒｇ特異的ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼファミリーＣ（ＡＲＴＣ １）、Ｂ－Ｒａｆ癌原遺伝子（Ｂ－ＲＡＦ）、セリン／スレオニンキナーゼ、βカテニン、細胞分裂サイクル２７ホモログ（Ｃｄｃ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、サイクリン依存性キナーゼ１２（ＣＤＫ１２）、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子２Ａ（ＣＤＫＮ２Ａ）、カゼインキナーゼ１α１（ＣＳＮＫｌＡｌ）、フィブロネクチン１（ＦＮｌ）、ＧｒｕｗｉｈＡｎｅｓｔ特異的７（ＧＡＳ７）、糖タンパク質非転移性黒色腫タンパク質Ｂ（ＧＰＮＭＢ）、ＨＡＵＳオーグミン様複合体サブユニット３（ＨＡＵＳ３）、ＬＤＬＲ－フコシルトランスフェラーゼ、Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原２（ＭＡＲＴ２）、ミオスタチン（ＭＳＴＮ）、メラノーマ関連抗原（変異）１（ＭＵＭ－１－２－３）、ポリ（Ａ）ポリメラーゼγ（ｎｅｏ－ＰＡＰ）、ミオシンＩ型、プロテインホスファターゼ１調節サブユニット３Ｂ（ＰＰＰ１Ｒ３Ｂ）、ペルオキシレドキシン－５（ＰＲＤＸ５）、受容体型チロシンタンパク質ホスファターゼκ（ＰＴＰＲＫ）、トランスフォーミングタンパク質Ｎ－Ｒａｓ（Ｎ－ｒａｓ）、網膜芽細胞腫関連因子６００（ＲＢＡＦ６００）、サーチュイン－２（ＳＩＲＴ２）、ＳＮＲＰＤｌ、トリオースリン酸イソメラーゼ、眼白子症１型タンパク質（ＯＡｌ）、メンバーＲＡＳ癌遺伝子ファミリー（ＲＡＢ３８）、チロシナーゼ関連タンパク質１－２（ＴＲＰ－１－２）、メラノーマ抗原Ｇｐ７５（ｇｐ７５）、チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ－Ａ（ＭＡＲＴ－１）、糖タンパク質１００メラノーマ抗原（ｇｐｌＯＯ）、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ遺伝子（ＧｎＴＶｆ）、リンパ球抗原６複合体ローカスＫ（ＬＹ６Ｋ）、メラノーマ抗原－ＡｌＯ（ＭＡＧＥ－ＡｌＯ）、メラノーマ抗原－Ａｌ２（ＭＡＧＥ－Ａｌ２）、メラノーマ抗原－Ｃ２（ＭＡＧＥ－Ｃ２）、メラノーマ抗原ＮＡ８８－Ａ、タキソール耐性関連タンパク質３（ＴＲＡＧ－３）、ＢＤＺ結合キナーゼ（ｐｂｋ）、カスパーゼ８（ＣＡＳＰ－８）、肉腫抗原１（ＳＡＧＥ）、切断点クラスタ領域アベルソン癌遺伝子（ＢＣＲ－ＡＢＬ）、白血病における融合タンパク質、ｄｅｋ－ｃａｎ、伸長因子ＴｕＧＴＰ結合ドメイン含有２（ＥＦＴＵＤ２）、ＥＴＳバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病融合タンパク質（ＥＴＶ６－ＡＭＬ１）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３内部タンデム重複（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）、Ｃｙｃｌｉｎ Ａ１、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有３Ｂ（ＦＤＮＣ３Ｂ）、前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体α融合タンパク質（ｐｍｌ－ＲＡＲα）、メラノーマ抗原－Ｃｌ（ＭＡＧＥ－Ｃｌ）、膜タンパク質選択的スプライシングアイソフォーム（Ｄ３９３－ＣＤ２０）、メラノーマ抗原－Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）、又はメラノーマ抗原－Ａ３（ＭＡＧＥ－Ａ３）から選択されるＴＡＡに結合する。
いくつかの実施形態では、自己免疫状態又は障害は、１型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化（ＭＳ）、セリアック病、シェーグレン症候群、リウマチ性多発筋痛症、強直性脊椎炎、円形脱毛症、血管炎及び側頭動脈炎のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、自己免疫状態又は障害に関連する腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、カルボキシペプチダーゼＨ、クロモグラニンＡ、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、Ｉｍｏｇｅｎ－３８、インスリン、インスリノーマ抗原－２及び２β、膵島特異的グルコース－６－ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質（ＩＧＲＰ）、プロインスリン、α－エノラーゼ、アクアポリン－４、β－アレスチン、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、プロテオリピドタンパク質、Ｓ１００－β、シトルリン化タンパク質、コラーゲンＩＩ、熱ショックタンパク質、ヒト軟骨糖タンパク質、二本鎖ＤＮＡ、Ｌａ抗原、ヌクレオソームヒストン及びリボ核タンパク質（ｓｎＲＮＰ）、リン脂質－β－２糖タンパク質Ｉ複合体、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ、及びＵ－１小リボ核タンパク質複合体のＳｍ抗原のいずれか１つに由来する。
いくつかの実施形態では、病原体関連抗原は、細菌、真菌若しくは寄生生物タンパク質又はその断片由来の抗原である。いくつかの実施形態では、病原体関連抗原は、ＨＩＶ感染、ヒトサイトメガロウイルス感染、Ｂ型肝炎感染、Ｃ型肝炎感染、エボラウイルス感染、デング熱、黄熱病、リステリア症、結核、コレラ、マラリア、リーシュマニア症、若しくはトリパノソーマ感染、又はそれらの組み合わせに関連する。
いくつかの実施形態では、神経変性障害又は状態は、アルツハイマー疾患（ＡＤ）及び他の認知症、パーキンソン疾患（ＰＤ）及びＰＤに関連する障害、プリオン疾患、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＡ）又は脊髄性筋萎縮（ＳＭＡ）のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、神経変性障害又は状態に関連する抗原は、アミロイドβ（Ａｂ）、タウ、アルファ－シヌクレイン（α－ｓｙｎ）、ｍＨＴＴ若しくはプリオンＰｒＰｓｃ又はそれらの組み合わせのいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１ｆＭ～１００μＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１ｐＭ～１００μＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１ｐＭ～１０ｐＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１０ｐＭ～５０ｐＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１０ｐＭ～１００ｐＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１００ｐＭ～５００ｐＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、５００ｐＭ～１ｎＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１ｎＭ～１０ｎＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１０ｎＭ～１００ｎＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１００ｎＭ～５００ｎＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、５００ｎＭ～１μＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１μＭ～１０μＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、１μＭ～５μＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、５μＭ～７．５μＭの結合親和性で標的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、７．５μＭ～１０μＭの結合親和性で標的に結合する。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、Ｎ末端にシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、表面発現タンパク質又は分泌タンパク質に由来し得る。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、プレプロラクチン、ＨＩＶプレ－Ｅｎｖ、ＨＣＶポリタンパク質、ＣＢウイルスポリタンパク質、ペスチウイルスポリタンパク質、プレカルレティキュリン、プレ－ＶＳＶ－Ｇ、ＨＬＡ Ｉ型組織適合抗原、又はＰＤ－１シグナルペプチド（ＰＤ－１ ＳＰ）、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、ＧＭ－ＣＳＦ、又はＣＤ８α鎖（ＣＤ８ａ）に由来し得る。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＰＤ－１シグナルペプチド（ＰＤ－１ ＳＰ）である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＨＬＡ Ｉ型組織適合抗原又はその一部分である。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ＰＤ１に由来する。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号１９～２１のいずれか１つによるアミノ酸配列の位置１～１６３からのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号１９によるアミノ酸配列の位置１～１６３からのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２０によるアミノ酸配列の位置１～１６３からのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２１によるアミノ酸配列の位置１～１６３からのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２２～２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号２３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２４～４４及び１３０～１３２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号２９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲの細胞外ドメインは、配列番号３１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲの細胞外ドメインは、配列番号３１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号３９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号４４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号１３０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号１３０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号１３１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号１３１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号１３２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、配列番号１３２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１９結合タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合タンパク質は、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号５１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号５１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５２～６９のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号５９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合キメラ抗原受容体は、配列番号６９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、又はＩｇＧに由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＰＤ１、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、又はＩｇＧに由来する。
本開示はまた、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする、核酸を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸は、配列番号７５～８６及び９２～１１０によるものである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される核酸は、キメラ細胞内ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＴＣＲは、Ｔ細胞における発現のためのものであり、Ｔ細胞は、内因性共刺激分子ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ４０Ｌのうちの少なくとも１つ又はそれらの組み合わせを共発現する。
本開示はまた、本明細書に開示される核酸を含む、ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるベクターは、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、酵母人工染色体、細菌人工染色体又はトランスポゾン／トランスポザーゼ系のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター又はレンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レンチウイルスベクターである。
本開示はまた、本明細書に開示される核酸又はベクターを含む、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、改変Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変Ｔ細胞は、同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、初期メモリーＴ細胞、ステムセル様Ｔ細胞、ステムメモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）及び制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、Ｂ細胞成熟Ａｇ（ＢＣＭＡ）結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＢＣＭＡ特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＢＣＭＡ特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３７～１４６のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３７によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３８によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３９によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１３９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４０によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４１によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４２によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４３によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４４と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４５によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４６によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４６と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、Ｂ細胞成熟Ａｇ（ＢＣＭＡ）結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＢＣＭＡ特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＢＣＭＡ特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合キメラ抗原受容体は、配列番号１４１、１４２、１４５及び１４６のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、人工抗原受容体をコードする配列、治療用ポリペプチド、免疫細胞調節タンパク質、又はそれらの組み合わせを更に含む。いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、組換えＴ細胞受容体（ｒＴＣＲ）を含む。いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、増強された親和性ＴＣＲを含む。いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、病原体関連タンパク質、又は癌、自己免疫疾患若しくは障害、感染症、炎症性腎疾患、腎疾患若しくは障害、肺疾患若しくは障害、肝疾患若しくは障害、神経変性障害若しくは障害、又は代謝障害若しくは障害である疾患若しくは障害に関連する抗原である標的に結合する。
いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、固形腫瘍又は血液癌に関連するＴＡＡに結合する。いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン疾患、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポシ肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、上咽頭癌、悪性組織球症、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍に伴う高カルシウム血症、固形腫瘍、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭部癌、頚部癌、遺伝性非ポリポーシス癌、ホジキンリンパ腫、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、精巣癌、腺癌、肉腫、悪性メラノーマ、及び血管腫のいずれか１つから選択される癌に関連するＴＡＡに結合する。
いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、カリクレイン４、パピローマウイルス結合因子（ＰＢＦ）、優先的に発現されるメラノーマ抗原（ＰＲＡＭＥ）、ウィルムス腫瘍－Ｉ（ＷＴＩ）、ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ様Ｉ（ＨＳＤＬＩ）、メソテリン、癌精巣抗原（ＮＹ－ＥＳ０－１）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ｐ５３、ヒト上皮増殖因子受容体２／神経受容体チロシンキナーゼ（Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ）、癌関連上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、卵巣癌及び子宮癌抗原（ＣＡＩ２５）、葉酸受容体ａ、精子プロテイン１７、腫瘍関連差次的発現遺伝子－１２（ＴＡＤＧ－１２）、ムチン－１６（ＭＵＣ－１６）、Ｌ１細胞接着分子（ＬＩＣＡＭ）、マンナン－ＭＵＣ－１、ヒト内在性レトロウイルスＫ（ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ）、北九州肺癌抗原－Ｉ（ＫＫ－ＬＣ－１）、ヒト癌／精巣抗原（ＫＭ－ＨＮ－１）、癌精巣抗原（ＬＡＧＥ－Ｉ）、メラノーマ抗原－Ａｌ（ＭＡＧＥ－Ａｌ）、精子表面透明帯結合タンパク質（Ｓｐｌ ７）、滑膜肉腫、Ｘ切断点４（ＳＳＸ－４）、一過性軸索糖タンパク質－１（ＴＡＧ－Ｉ）、一過性軸索糖タンパク質－２（ＴＡＧ－２）、アネイブルドホモログ（ＥＮＡＨ）、マンモグロビンＡ、ＮＹ－ＢＲ－Ｉ、乳癌抗原、（ＢＡＧＥ－１）、Ｂメラノーマ抗原、メラノーマ抗原－Ａｌ（ＭＡＧＥ－Ａｌ）、メラノーマ抗原－Ａ２（ＭＡＧＥ－Ａ２）、ムチンｋ、滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ－２）、タキソール耐性関連遺伝子－３（ＴＲＡＧ－３）、トリ骨髄細胞腫症ウイルス癌遺伝子（ｃ－ｍｙｃ）、サイクリンＢ１、ムチンＩ（ＭＵＣ Ｉ）、ｐ６２、サバイビン、リンパ球共通抗原（ＣＤ４５）、ＤｉｃｋｋｏｐｆＷＮＴシグナル伝達経路インヒビターＩ（ＤＫＫＩ）、テロメラーゼ、カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（Ｋ－ｒａｓ）、Ｇ２５０、腸カルボキシルエステラーゼ、α－フェトプロテイン、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、カスパーゼ５（ＣＡＳＰ－５）、シトクロムＣオキシダーゼアセンブリ因子Ｉホモログ（ＣＯＡ－１）、０結合β－Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ（ＯＧＴ）、増幅された骨肉腫９、小胞体レクチン（ＯＳ－９）、形質転換増殖因子β受容体２（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、マウス白血病グリコプロテイン７０（ｇｐ７０）、カルシトニン関連ポリペプチドα（ＣＡＬＣＡ）、プログラム細胞死１リガンド１（ＣＤ２７４）、マウス二重微小２ホモログ（ｍｄｍ－２）、α－アクチニン－４、伸長因子２、リンゴ酸酵素１（ＭＥＩ）、核転写因子ＹサブユニットＣ（ＮＦＹＣ）、Ｇ抗原１，３（ＧＡＧＥ－１，３）、メラノーマ抗原－Ａ６（ＭＡＧＥ－Ａ６）、癌精巣抗原ＸＡＧＥ－１ｂ、６回膜貫通型前立腺上皮抗原１（ＳＴＥＡＰ１）、ＰＡＰ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）、熱ショックタンパク質ｈｓｐ７０－２、メラノーマ抗原－Ａ９（ＭＡＧＥ－Ａ９）、Ａｒｇ特異的ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼファミリーＣ（ＡＲＴＣ １）、Ｂ－Ｒａｆ癌原遺伝子（Ｂ－ＲＡＦ）、セリン／スレオニンキナーゼ、βカテニン、細胞分裂サイクル２７ホモログ（Ｃｄｃ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、サイクリン依存性キナーゼ１２（ＣＤＫ１２）、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子２Ａ（ＣＤＫＮ２Ａ）、カゼインキナーゼ１α１（ＣＳＮＫｌＡｌ）、フィブロネクチン１（ＦＮｌ）、ＧｒｕｗｉｈＡｎｅｓｔ特異的７（ＧＡＳ７）、糖タンパク質非転移性黒色腫タンパク質Ｂ（ＧＰＮＭＢ）、ＨＡＵＳオーグミン様複合体サブユニット３（ＨＡＵＳ３）、ＬＤＬＲ－フコシルトランスフェラーゼ、Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原２（ＭＡＲＴ２）、ミオスタチン（ＭＳＴＮ）、メラノーマ関連抗原（変異）１（ＭＵＭ－１－２－３）、ポリ（Ａ）ポリメラーゼγ（ｎｅｏ－ＰＡＰ）、ミオシンＩ型、プロテインホスファターゼ１調節サブユニット３Ｂ（ＰＰＰ１Ｒ３Ｂ）、ペルオキシレドキシン－５（ＰＲＤＸ５）、受容体型チロシンタンパク質ホスファターゼκ（ＰＴＰＲＫ）、トランスフォーミングタンパク質Ｎ－Ｒａｓ（Ｎ－ｒａｓ）、網膜芽細胞腫関連因子６００（ＲＢＡＦ６００）、サーチュイン－２（ＳＩＲＴ２）、ＳＮＲＰＤｌ、トリオースリン酸イソメラーゼ、眼白子症１型タンパク質（ＯＡｌ）、メンバーＲＡＳ癌遺伝子ファミリー（ＲＡＢ３８）、チロシナーゼ関連タンパク質１－２（ＴＲＰ－１－２）、メラノーマ抗原Ｇｐ７５（ｇｐ７５）、チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ－Ａ（ＭＡＲＴ－１）、糖タンパク質１００メラノーマ抗原（ｇｐｌＯＯ）、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ遺伝子（ＧｎＴＶｆ）、リンパ球抗原６複合体ローカスＫ（ＬＹ６Ｋ）、メラノーマ抗原－ＡｌＯ（ＭＡＧＥ－ＡｌＯ）、メラノーマ抗原－Ａｌ２（ＭＡＧＥ－Ａｌ２）、メラノーマ抗原－Ｃ２（ＭＡＧＥ－Ｃ２）、メラノーマ抗原ＮＡ８８－Ａ、タキソール耐性関連タンパク質３（ＴＲＡＧ－３）、ＢＤＺ結合キナーゼ（ｐｂｋ）、カスパーゼ８（ＣＡＳＰ－８）、肉腫抗原１（ＳＡＧＥ）、切断点クラスタ領域アベルソン癌遺伝子（ＢＣＲ－ＡＢＬ）、白血病における融合タンパク質、ｄｅｋ－ｃａｎ、伸長因子ＴｕＧＴＰ結合ドメイン含有２（ＥＦＴＵＤ２）、ＥＴＳバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病融合タンパク質（ＥＴＶ６－ＡＭＬ１）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３内部タンデム重複（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）、Ｃｙｃｌｉｎ Ａ１、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有３Ｂ（ＦＤＮＣ３Ｂ）、前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体α融合タンパク質（ｐｍｌ－ＲＡＲα）、メラノーマ抗原－Ｃｌ（ＭＡＧＥ－Ｃｌ）、膜タンパク質選択的スプライシングアイソフォーム（Ｄ３９３－ＣＤ２０）、メラノーマ抗原－Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）、及びメラノーマ抗原－Ａ３（ＭＡＧＥ－Ａ３）から選択されるＴＡＡに結合する。
いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、１型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、又は多発性硬化症（ＭＳ）のいずれか１つから選択される自己免疫状態又は障害に関連する抗原に結合する。いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、カルボキシペプチダーゼＨ、クロモグラニンＡ、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、Ｉｍｏｇｅｎ－３８、インスリン、インスリノーマ抗原－２及び２β、膵島特異的グルコース－６－ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質（ＩＧＲＰ）、プロインスリン、α－エノラーゼ、アクアポリン－４、β－アレスチン、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、プロテオリピドタンパク質、Ｓ１００－β、シトルリン化タンパク質、コラーゲンＩＩ、熱ショックタンパク質、ヒト軟骨糖タンパク質、二本鎖ＤＮＡ、Ｌａ抗原、ヌクレオソームヒストン及びリボ核タンパク質（ｓｎＲＮＰ）、リン脂質－β－２糖タンパク質Ｉ複合体、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ、Ｕ－１小リボ核タンパク質複合体のＳｍ抗原のいずれか１つから選択される自己免疫状態又は障害に関連する抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、細菌、真菌若しくは寄生生物タンパク質又はその断片に由来する病原体関連抗原に結合する。いくつかの実施形態では、人工抗体受容体は、ＨＩＶ感染、ヒトサイトメガロウイルス感染、Ｂ型肝炎感染、Ｃ型肝炎感染、エボラウイルス感染、デング熱、黄熱病、リステリア症、結核、コレラ、マラリア、リーシュマニア症、若しくはトリパノソーマ感染、又はそれらの組み合わせに関連する抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、人工抗原受容体は、アルツハイマー疾患（ＡＤ）及び他の認知症、パーキンソン疾患（ＰＤ）及びＰＤに関連する障害、プリオン疾患、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＡ）又は脊髄性筋萎縮（ＳＭＡ）から選択される神経変性障害又は状態に関連する抗原に結合する。いくつかの実施形態では、神経変性障害又は状態に関連する抗原は、アミロイドβ（Ａβ）、タウ、アルファ－シヌクレイン（α－ｓｙｎ）、ｍＨＴＴ、若しくはプリオンＰｒＰＳｃ、又はそれらの組み合わせのいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、治療用ポリペプチドは、サイトカイン、サイトカイン受容体、ケモカイン、ケモカイン受容体、免疫原性ポリペプチド、又は別の細胞の表面上の標的に結合する細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫細胞調節タンパク質は、サイトカイン、ケモカイン、転写因子、プロテインキナーゼ、プロテアーゼ、細胞シグナル伝達経路の成分又はアダプタータンパク質である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、本明細書に開示されるＲＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、本明細書に開示されるＲＴＣＲを安定に又は一過性に発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、本明細書に開示されるＲＴＣＲを安定に発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、本明細書に開示されるＲＴＣＲを一過性に発現する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞は、内因性共刺激分子ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ４０Ｌのうちの少なくとも１つ又はそれらの組み合わせを共発現する。
本開示はまた、改変Ｔリンパ球（Ｔ細胞）であって、（ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変であって、ＴＣＲの発現又は活性のレベルを低減又は排除する、改変と、（ｂ）本明細書に開示される組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）とを含む、改変Ｔ細胞を提供する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変は、核酸改変系を使用して行われる。いくつかの実施形態では、核酸改変系は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓタンパク質、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、及びエンドヌクレアーゼのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変は、非相同末端結合修復によって行われる。いくつかの実施形態では、非相同末端結合修復は、ジンクフィンガーヌクレアーゼによって生成され、物理的手段、ウイルスベクター、又は非ウイルスベクターによって細胞に導入される。いくつかの実施形態では、非相同末端結合修復は、ＴＡＬＥヌクレアーゼによって生成され、物理的手段、ウイルスベクター、又は非ウイルスベクターによって細胞に導入される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変は、ＴＣＲのα鎖の発現レベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変は、ＴＣＲのβ鎖の発現レベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変は、α鎖及びβ鎖ＴＣＲα鎖の両方の発現レベルを低減又は排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される改変Ｔ細胞は、内因性共刺激分子ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ４０Ｌのうちの少なくとも１つ又はそれらの組み合わせを共発現する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）の成分をコードする内因性配列の改変を更に含み、改変は、ＭＨＣ－Ｉの発現又は活性のレベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、改変は、β２－マクログロブリンの発現又は活性を低減又は排除する。
本開示はまた、本明細書に開示されるＲＴＣＲを含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される核酸を含むベクターを含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される細胞を含む、組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に開示される改変Ｔ細胞を含む、組成物を提供する。
本開示はまた、細胞集団を含む組成物であって、集団が、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含む複数の細胞又は本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む、組成物を提供する。本開示はまた、細胞集団を含む組成物であって、集団が、複数の本明細書に開示される改変Ｔ細胞を含む、組成物を提供する。
本開示はまた、複数の改変Ｔ細胞を産生する方法であって、ａ）本明細書に開示される複数の初代Ｔ細胞を提供することと、ｂ）本明細書に開示されるＲＴＣＲ、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸、又は本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む組成物を提供することと、ｃ）（ｂ）の組成物を（ａ）の複数の初代Ｔ細胞に導入して、複数の改変Ｔ細胞内でＲＴＣＲを安定に発現する条件下で複数の改変Ｔ細胞を産生することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される複数の改変Ｔ細胞を産生する方法は、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列を改変する工程を更に含み、改変は、内因性ＴＣＲの発現又は活性のレベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される複数の改変Ｔ細胞を産生する方法は、内因性配列を改変する工程を更に含み、改変は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）の発現又は活性のレベルを低減又は排除する。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変は、核酸改変系を使用して行われる。いくつかの実施形態では、発現又は活性のレベルを低減又は排除する内因性配列の改変は、核酸改変系を使用して行われる。いくつかの実施形態では、核酸改変系は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓタンパク質、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、及びエンドヌクレアーゼのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、内因性配列の改変は、非相同末端結合修復によって行われる。いくつかの実施形態では、非相同末端結合修復は、ジンクフィンガーヌクレアーゼによって生成され、物理的手段、ウイルスベクター、又は非ウイルスベクターによって細胞に導入される。いくつかの実施形態では、非相同末端結合修復は、ＴＡＬＥヌクレアーゼによって生成され、物理的手段、ウイルスベクター、又は非ウイルスベクターによって細胞に導入される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列を改変することは、ＴＣＲのα鎖の発現レベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列を改変することは、ＴＣＲのβ鎖の発現レベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列を改変することは、α鎖及びβ鎖ＴＣＲα鎖の両方の発現レベルを低減又は排除する。
いくつかの実施形態では、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）の発現又は活性のレベルを低減又は排除する内因性配列を改変することであって、内因性配列を改変することは、ＭＨＣ－Ｉの発現又は活性のレベルを低減又は排除する。いくつかの実施形態では、内因性配列を改変することは、β２－マクログロブリンの発現又は活性を低減又は排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される複数の改変Ｔ細胞を産生する方法は、ｄ）複数の改変Ｔ細胞を好適な細胞培養培地中で維持又は増殖することと、ｅ）ｉ）複数の改変Ｔ細胞を好適な細胞凍結培地中で凍結保存すること、又はｉｉ）疾患若しくは障害に罹患している対象に投与するための複数の改変Ｔ細胞を調製することのいずれかと、を更に含む。
対象への投与を目的とする、本開示の細胞又は改変Ｔ細胞、及び本開示の方法によって産生される複数の改変Ｔ細胞を含む組成物は、組成物が医薬製品としての製剤及び／又は対象への投与のために安全かつ有効であることを示す１つ以上の「放出基準」を満たす必要があり得る。放出基準は、本開示の組成物（例えば、本開示の細胞又は改変Ｔ細胞）が、その細胞表面に本開示のＲＴＣＲを発現する細胞又は改変Ｔ細胞を特定のパーセンテージで含むという要件を含み得る。増殖プロセスは、特定の基準が満たされる（例えば、本開示の細胞若しくは改変Ｔ細胞のある特定の総数、又は本開示のＲＴＣＲを発現する細胞若しくは改変Ｔ細胞の総数のある特定のパーセンテージを達成する）まで継続されるべきである。
特定の基準は、増殖プロセスが終了すべき点を示す。例えば、細胞は、それらが３００ｆＬの細胞サイズに達すると、製剤化、再活性化、又は凍結保存されるべきである（そうでなければ、この閾値を上回るサイズに達する細胞は死滅し始める可能性がある）。細胞集団が３００ｆＬ未満の平均細胞サイズに達した直後の凍結保存は、凍結保存前に細胞がまだ完全静止状態に達していないため（完全静止サイズはおよそ１８０ｆＬである）、解凍及び培養時により良好な細胞回収率をもたらし得る。増殖の前に、本開示のＴ細胞は、約１８０ｆＬの細胞サイズを有し得るが、増殖の３日後にそれらの細胞サイズの４倍を超えておよそ９００ｆＬになり得る。次の６～１２日間にわたって、Ｔ細胞の集団は、１８０ｆＬで完全に静止するまで細胞サイズをゆっくりと減少させる。
製剤化のために細胞集団を調製するためのプロセスとしては、細胞集団の細胞を濃縮する工程、細胞を洗浄する工程、及び／又は特定の表面発現マーカーに対する薬物耐性若しくは磁気ビーズ選別を介して細胞を更に選択する工程が挙げられ得るが、これらに限定されない。製剤化のために細胞集団を調製するためのプロセスとしては、最終生成物の安全性及び純度を確保するための選別工程が更に挙げられ得る。例えば、患者由来の腫瘍細胞が、本開示の改変Ｔ細胞を刺激するために使用されているか、又は製剤化のために調製されている本開示の改変Ｔ細胞を刺激するために改変されている場合、患者由来の腫瘍細胞が最終生成物に含まれないことが重要である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞又は本明細書に開示される改変Ｔ細胞は、野生型ＣＤ１３７又は野生型ＣＤ１３４細胞内ドメインをそれぞれ含む共刺激分子の発現レベルと比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍又は２０倍高いレベルで、本明細書に開示される変異体ＣＤ１３７又は変異体ＣＤ１３４細胞内シグナル伝達ドメインを含むＲＴＣＲを細胞表面上に発現する。
医薬組成物又は製剤
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、及び本明細書に開示される方法を使用して産生される改変Ｔ細胞の集団は、医薬製剤（又は組成物）の形態である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤は、薬学的に許容される担体を含む。本開示の医薬製剤は、注入、凍結保存、及び／又は貯蔵のためにバッグに分配され得る。
本開示の医薬製剤は、標準的なプロトコル、及び任意選択で、注入可能な凍結保存培地を使用して凍結保存され得る。例えば、ＤＭＳＯ不含凍結保存剤（例えば、ＣｒｙｏＳＯｆｒｅｅ（商標）ＤＭＳＯ不含凍結保存培地）を使用して、凍結に関連する毒性を低減することができる。本開示の凍結保存された医薬製剤は、後日の患者への注入のために保存され得る。有効な治療は、本開示の医薬製剤の複数回投与を必要とする場合があり、したがって、医薬製剤は、凍結保存され得るが、個々の用量の解凍のために分離され得る、予め分割された「用量」で包装され得る。
本開示の医薬製剤は、室温で保存され得る。有効な治療は、本開示の医薬製剤の複数回投与を必要とする場合があり、したがって、医薬製剤は、一緒に保存され得るが、個々の用量の投与のために分離され得る、予め分割された「用量」で包装され得る。
本開示の医薬製剤は、例えば、状態の寛解及び再発後の将来に投与を必要とし得る同種療法の場合、同じ患者への追加の用量の生成のためのその後の再増殖及び／又は選択のために保管され得る。
上記のように、本開示は、好ましくは、生理食塩水又は選択された塩を含むリン酸緩衝液を含む安定な製剤、並びに保存剤を含有する保存溶液及び製剤、並びに薬学的に許容される製剤中に少なくとも１つの改変細胞を含む、薬学的又は獣医学的使用に好適な多用途保存製剤を提供する。保存製剤は、水性希釈液中に、少なくとも１つの既知の防腐剤、又は少なくとも１つのフェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、ポリマー、若しくはそれらの混合物からなる群から任意選択で選択されるものを含有する。当該技術分野で既知のように、任意の好適な濃度又は混合物、例えば、約０．００１５％、又はその中の任意の範囲、値、若しくは分率を使用することができる。非限定的な例としては、防腐剤なし、約０．１～２％ｍ－クレゾール（例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、約０．１～３％ベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、約０．００１～０．５％チメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、約０．００１～２．０％フェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５～１．０％アルキルパラベン（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などが挙げられる。
上記のように、本開示は、包装材料と、少なくとも１つの改変細胞の所定の緩衝剤及び／又は保存剤を含む少なくとも１つの改変細胞の溶液を、任意選択で水性希釈液中に含む少なくとも１つのバイアルと、を含む製品を提供し、当該包装材料は、そのような溶液が１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間又はそれ以上の期間にわたって保持され得ることを示すラベルを含む。
本開示の製品は、即時から２４時間以上の範囲の期間にわたる投与に有用である。したがって、現在特許請求されている製品は、患者に対して著しい有意性を提供する。本開示の製剤は、任意選択で、約２℃～約４０℃の温度で安全に保存することができ、タンパク質の生物学的活性を長期間保持することができ、したがって、溶液を６、１２、１８、２４、３６、４８、７２、又は９６時間以上の期間にわたって保持及び／又は使用することができることを示す包装ラベルを可能にする。
本開示の生成物は、包装材料を含む。包装材料は、規制当局によって必要とされる情報に加えて、生成物が使用され得る条件を提供する。
本開示はまた、疾患又は障害を治療する方法であって、本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸若しくは本明細書に開示されるＲＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む治療有効数の細胞、治療有効数の本明細書に開示されるいずれか１つの改変Ｔ細胞、治療有効量の本明細書に開示されるいずれか１つの組成物、又は治療有効数の本明細書に開示される方法によって産生される複数の改変Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供した。
いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒト、霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、有蹄動物、ウマ及びブタのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、癌、自己免疫障害、感染症、炎症性疾患若しくは状態、腎疾患若しくは障害、肺疾患若しくは障害、肝疾患若しくは障害、心血管系疾患若しくは障害、神経変性障害若しくは状態、又は代謝障害若しくは状態のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、癌は、固形腫瘍又は血液癌である。いくつかの実施形態では、感染症は、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、又は寄生生物によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、神経変性障害又は状態は、アルツハイマー疾患（ＡＤ）及び他の認知症、パーキンソン疾患（ＰＤ）及びＰＤに関連する障害、プリオン疾患、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＡ）又は脊髄性筋萎縮（ＳＭＡ）のいずれか１つである。
本開示は、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ共刺激細胞内タンパク質（ＣＩＰ）であって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＩＰを提供する。
本開示はまた、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ共刺激細胞内タンパク質（ＣＩＰ）であって、第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインを含む、ＣＩＰを提供する。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、ＴＮＦＲファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインは、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＣＩＰは、膜貫通ドメインを更に含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインである。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸位置１３からアミノ酸位置４２によるアミノ酸配列を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号１によるアミノ酸配列を含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインは、配列番号３によるアミノ酸配列を含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３又は４個のリジン残基の欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上のリジン変異を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、５、６及び１２から選択されるアミノ酸位置の１つ以上のリジン変異を含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、３、４、５及び６から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインである。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸位置１５からアミノ酸位置３７によるアミノ酸配列を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインは、配列番号６によるアミノ酸配列を含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までのリジン残基の欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を含む。
本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、本開示のＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、及び５から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインは、ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＣＤ２８ファミリーのタンパク質に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＩＣＯＳ、又はそれらの組み合わせのいずれか１つに由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＩＣＯＳに由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳに由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号９によるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、配列番号９によるＩＣＯＳドメインと組み合わされたＣＤ２８細胞内ドメインの一部分を含む第１のシグナル伝達ドメインを含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号１２又は１０９のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０によるアミノ酸配列を含む。本明細書に開示されるＣＩＰのいくつかの実施形態では、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号１２１～１２２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＩＰは、配列番号１４～１７のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、第３のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン若しくはインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせのいずれか１つに由来する第３のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰのＣＤ３シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はそれらの組み合わせに由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰのＣＤ３シグナル伝達ドメインは、配列番号１８、４５、４６、４７及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むＣＤ３ドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８による少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５による少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメイン、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６による少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７によるアミノ酸配列を含むＣＤ３εドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３εドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε及びトランケート型ＣＤ３ζドメイン（ＣＤ３ζεドメイン）の組み合わせである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインは、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９によるアミノ酸配列を含むＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ２シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０によるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、第４のシグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン若しくはインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせのいずれか１つに由来する第４のシグナル伝達ドメインを更に含み、第３及び第４のシグナル伝達ドメインは、同一ではない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はそれらの組み合わせに由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８、４５、４６、４７及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むＣＤ３ドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号１８による少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６によるアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第３のシグナル伝達ドメイン、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４６による少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むトランケート型ＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７によるアミノ酸配列を含むＣＤ３εドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４７と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３εドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε及びトランケート型ＣＤ３ζドメイン（ＣＤ３ζεドメイン）の組み合わせである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８によるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４８と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ３ζεドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインは、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９によるアミノ酸配列を含むＣＤ２シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号４９と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ２シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０によるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰの第４のシグナル伝達ドメインは、配列番号５０と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、Ｔ細胞における発現のためのものであり、Ｔ細胞は、内因性共刺激分子ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ４０Ｌのうちの少なくとも１つ又はそれらの組み合わせを共発現する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、Ｔ細胞においてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と共発現される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、内因性ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、人工ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、人工ＴＣＲは、高親和性ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ＣＩＰは、Ｔ細胞においてＴＣＲと共発現される場合、Ｔ細胞の活性化及び増殖を誘導するための第２の活性化シグナルを提供し、第１の活性化シグナルは、ＴＣＲによる抗原結合によって提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、標的に対する人工受容体の成分としてＴ細胞において発現される。いくつかの実施形態では、人工受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、リガンド又はその成分に対する受容体、抗体又はその断片である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、ＣＡＲの成分として発現される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＩＰは、抗体又はその断片の成分として発現される。いくつかの実施形態では、抗体又はその断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ダイアボディ、ナノボディ、ｓｄＡｂ、Ｆｖ、ＶＨＨ断片、又は単鎖Ｆｖ断片である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるように、Ｔ細胞において人工受容体の成分として発現されるＣＩＰは、人工受容体による標的結合時にＴ細胞の活性化及び増殖を誘導する。
「約」又は「およそ」という用語は、述べられた値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内として理解することができる。いくつかの実施形態では、「約」又は「およそ」は、述べられた値の５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内として理解することができる。いくつかの実施形態では、「約」又は「およそ」は、述べられた値の２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内として理解することができる。いくつかの実施形態では、「約」又は「およそ」は、記載された値の１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内として理解することができる。
以下の実施例は、本開示をより良く説明するために提供され、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。特定の材料が言及される範囲において、それは単に例示の目的のためであり、本開示を限定することを意図しない。当業者は、発明能力を行使することなく、かつ本開示の範囲から逸脱することなく、等価な手段又は反応物を開発することができる。
材料及び方法
培地及び細胞株
ＤＭＥＭにペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０μｇ／ｍＬゲンタマイシン及び１０％ＦＢＳを補充して、完全ＤＭＥＭを作製した。ＲＰＭＩにペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、１０％ＦＢＳ、及び５０ｕＭ ２－ＭＥを補充して、完全ＲＰＭＩを作製した。Ｔ細胞増殖培地は、完全ＲＰＭＩに５０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ２、１０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ７、及び１０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を補充することによって作製した。Ｘ－Ｖｉｖｏ１５に、１％ヒト血清、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、及び１０μｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充して、サイトカイン培地を作製した。ヒトＰＢＭＣをｉＳｐｅｃｉｍｅｎから購入し、完全ＲＰＭＩ中で培養した。２９３ＦＴは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。Ｋ５６２及びＡ３７５細胞をＡＴＣＣから購入し、完全ＤＭＥＭ中で培養した。
プラスミド及びクローニング
トランケート型ヒトＥＧＦＲ受容体（ｈｕＥＧＦＲｔ）を駆動するＰＧＫプロモーター、続いてＧＦＰを駆動するＭＳＣＶプロモーター、及び後続のＷＰＲＥ配列を含有するレンチウイルスプラスミドを、ベクタービルダーから注文した。共刺激分子、続いてＰ２Ａ配列を単一遺伝子ブロック（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）として注文し、ＮＥＢビルダー相同性ベースの組換えを使用してｈｕＥＧＦＲｔ配列とインフレームで配置した。ＣＡＲ及びＴＣＲ配列を３つの遺伝子ブロック断片（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から構築し、ＧＦＰ切除後にＭＳＣＶプロモーターの下流にＮＥＢビルダーを使用してクローニングした。ＰＤ－Ｌ１＿Ｐ２Ａ及びＨＬＡ－Ａ２を、それぞれｈｕＥＧＦＲｔとインフレームで、ＧＦＰの代わりにクローニングした。
Ｐ２Ａアミノ酸配列（配列番号１１１）
ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ
ヒトＥＧＦＲｔアミノ酸配列（別名：ｈｕＥＧＦＲｔ（ＡＡ１１２））（配列番号１１２）
ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ
ＨＬＡ－Ａ２シグナルペプチド（配列番号１１３）
ＭＡＶＭＡＰＲＴＬＶＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＱＴＷＡ
ｈｕＧＭＣＳＦシグナルペプチド、アミノ酸配列（配列番号１１９）
ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ
Ｐ２Ａ核酸配列（配列番号１１４）
ＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＣＣＡＣＣＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＣＡＧＧＣＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ
ヒトＥＧＦＲｔ核酸配列（配列番号１１５）
ＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＴＡＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＣＣＴＧＣＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＧＧＣＡＴＣＧＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＣＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＡＴＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＧＡＧＧＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＡＣＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＴＧＡＡＡＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＴＴＴＣＴＧＴＴＧＡＴＣＣＡＧＧＣＴＴＧＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＧＧＡＣＡＧＡＴＣＴＧＣＡＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＣＧＧＡＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＧＣＣＡＧＴＴＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＡＡＧＡＡＡＴＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＧＧＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＴＧＣＴＡＣＧＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＡＧＣＴＧＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＡＡＧＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＣＡＡＧＴＧＴＧＣＣＡＣＧＣＴＣＴＧＴＧＴＡＧＣＣＣＴＧＡＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＣＣＧＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＴＴＧＣＧＴＧＴＣＣＴＧＴＣＧＧＡＡＴＧＴＧＴＣＣＣＧＧＧＧＣＡＧＡＧＡＡＴＧＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＴＴＣＧＴＧＧＡＡＡＡＣＡＧＣＧＡＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＣＣＣＣＧＡＧＴＧＴＣＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＡＡＣＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＣＧＡＣＡＡＣＴＧＴＡＴＴＣＡＧＴＧＣＧＣＣＣＡＣＴＡＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＡＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＧＴＧＡＴＧＧＧＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＴＧＧＡＡＧＴＡＴＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＧＡＣＡＴＧＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＧＴＧＴＣＡＣＣＣＴＡＡＴＴＧＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＴＧＴＡＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＴＡＡＧＡＴＣＣＣＣＴＣＴＡＴＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＡＴＧＧＴＴＧＧＡＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＣＣＣＴＴＧＧＡＡＴＣＧＧＣＣＴＧＴＴＣＡＴＧＴＧＡ
ＨＬＡ－Ａ２シグナルペプチド核酸配列（配列番号１１６）
ＡＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＧＧＣＣＣＣＴＡＧＡＡＣＡＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＣＡＧＡＣＡＴＧＧＧＣＣ
ＣＤ８ａシグナルペプチド核酸配列（配列番号１４８）
ＡＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＴＧＣＡＴＧＣＣＧＣＴＡＧＡＣＣＴ
ＣＤ８ａヒンジ（配列番号１４９）
ＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＣＣＣＧＡＧＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＣ
ｈｕＧＭＣＳＦシグナルペプチド、核酸配列（配列番号１５０）
ＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＴＡＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＣＣＴＧＣＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＣＣ
レンチウイルス産生及びレトロネクチンプレートの調製
ＶＳＶシュードタイプ化レンチウイルスを６ウェルプレート中で産生した。簡潔に述べると、２９３ＦＴを、前日又は当日に、それぞれ０．９×１０６又は１．４×１０６細胞／ウェルで播種した。細胞が接着し、少なくとも８０％の集密度に達したら、レンチウイルスプラスミド、パッケージングベクター（ｐｓＰＡＸ２）及びＶＳＶ－Ｇエンベロープ発現プラスミド（ＰＭＤ２．Ｇ）の混合物を、リポフェクタミン３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、製造業者のプロトコルに従ってトランスフェクトした。１８時間後、培地を３ｍＬの新鮮なＤＭＥＭと交換した。培地を交換した４８時間後にウイルス上清を回収し、１５００ＲＰＭでスピンダウンして２９３ＦＴ細胞／デブリを除去した。レトロネクチンを、２４ウェル非組織培養処理プレート上に、ＰＢＳ－／－中２０μｇ／ウェルで、３７℃で２時間又は４℃で一晩コーティングした。レトロネクチンを除去し、ＰＢＳで１回洗浄した後、レンチウイルスＳＮ（２ｍＬ）を添加した。次いで、プレートを１５００Ｇ、３２℃で９０分間回転させて、レトロネクチン上にウイルス粒子を濃縮した。レンチウイルスＳＮを、初代Ｔ細胞又は腫瘍細胞の形質導入の直前に除去した。あるいは、Ｔ細胞を、３２℃で２時間、８００Ｇのスピンフェクションで、８ｕｇ／ｍＬのポリブレンで形質導入した。
Ｔ細胞培養、形質導入、及び単離
ヒトＰＢＭＣを、完全ＲＰＭＩ中のＣＤ３／２８マイクロビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＴ細胞増殖培地中で活性化した（１００ｕｌビーズ／５０ｘ１０６ＰＢＭＣ）。活性化の４８時間後、活性化ＰＢＭＣをレンチウイルスコーティングレトロネクチンプレートに４８時間移した後、新鮮なＴ細胞増殖培地を含有する６ウェルプレートに移した。培養中で更に２４時間後、細胞形質導入をフローサイトメトリーによって決定し、形質導入された細胞をｈｕＥＧＦＲｔ発現に基づいて濃縮した。ＥＧＦＲ発現に基づいて細胞を単離するために、Ｔ細胞培養物を収集し、活性化ビーズを除去した。次いで、細胞を、４℃で３０分間、ＭＡＣＳ緩衝液中の１：１００抗ＥＧＦＲ－ＡＰＣ抗体中で染色した。次いで、細胞を洗浄し、抗ＡＰＣマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）と４℃で１５～３０分間インキュベートした。次いで、未結合マイクロビーズを遠心分離によって除去し、ｈｕＥＧＦＲｔ細胞をｍｉｎｉ－ｍａｃｓカラム上でのポジティブ選択によって単離した。細胞をｍｉｎｉ－ＭＡＣＳカラムから溶出させ、Ｔ細胞増殖培地中の培養に戻し、２週間以内に実験に使用した。安定な細胞株を作製するために、細胞を収集し、初代Ｔ細胞と同様に形質導入した。ＥＧＦＲ選択は、２週間間隔で２回実施した。
Ｔ細胞刺激
Ｔ細胞をプレート結合抗体で刺激した場合、ｍａｘｉｓｏｒｐ平底プレート（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、３７℃で２時間、ＰＢＳ－／－中の示された量の抗ヒトＣＤ３抗体（ＨＩＴ３ａ－Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でコーティングした。プレートを使用前に基礎ＲＰＭＩで２回洗浄した。Ｋ５６２刺激のために、Ｋ５６２細胞を収集し、サイトカイン培地に再懸濁し、Ｕ底プレートに等分した。同様に、Ａ３７５細胞を９６ウェル平底プレート中のＤＭＥＭ中にＴ細胞を添加する１日前にプレーティングした。同族Ｔ細胞の添加前に培地を交換した。ＥＧＦＲ＋選択後、Ｔ細胞を収集し、計数し、サイトカイン培地中に適切な濃度で再懸濁し、抗体又はＡＰＣを有するウェルに分配した。Ｋ５６２実験のために、抗ＣＤ３（ＨＩＴ３ａ／Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、３７℃でのＫ５６２／Ｔ細胞相互作用の１～２時間後に示された用量で添加した。Ｔ細胞増殖を追跡する場合、刺激プレートに添加する前に、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄのプロトコルに従って、Ｔ細胞をバイオレットトラッキング色素（Ｖｉｏｌｅｔ Ｔｒａｃｋｉｎｇ Ｄｙｅ）（ＣＴＶ）で標識した。刺激の１８～３６時間後に上清を収集してサイトカイン分泌を評価し、９６時間の刺激後に増殖／Ｔ細胞死滅を評価した。
サイトカイン多重アッセイ
Ｔ細胞上清の収集後、ヒトＴｈ又はＴｈ１サイトカイン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）のＬｅｇｅｎｄｐｌｅｘ Ｍｕｌｔｉ－Ａｎａｌｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔを用いてサイトカインを測定した。以下の点を除外して、製造業者のプロトコルに従った：７５μＬのＴ細胞ＳＮを使用してサイトカインを測定し、２μＬの各試薬／ウェルを使用した。分泌されたサイトカインをフローサイトメトリーによって測定し、複数の実験を組み合わせて分析し、実験とドナーとの間の変動性について正規化するために、値を対照群の最大応答に対して正規化した。
コンジュゲーションアッセイ
Ｔ細胞の標的細胞へのコンジュゲーションを評価するために、製造業者のプロトコルに従って、Ｔ細胞をＣＦＳＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で標識し、Ｋ５６２＿ＨＬＡ－Ａ２又はＫ５６２＿ＨＬＡ－Ａ２＿ＰＤ－Ｌ１細胞をＣＴＶで標識した。Ｔ細胞及びＡＰＣを１：２の比で混合し、コンジュゲーションを促進するために１．５ｍＬエッペンドルフチューブ中で短時間遠心分離した。細胞ペレットを３７℃で３０分間インキュベートし、次いで細胞ペレットを、ｐ２００及びカットオフピペットチップを用いた反復ピペッティング（２０×）によって穏やかに再懸濁し、フローサイトメトリーによって直ちに評価した。
フローサイトメトリー
細胞を収集し、ＭＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ－／－、１％ＦＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ）中で洗浄した後、関連抗体を含有するＭＡＣＳ緩衝液中で染色した。抗ＥＧＦＲ－ＡＰＣ、抗マウスＴＣＲβ－ＦＩＴＣ、抗ヒトＰＤ１－ＰＥ、抗ＣＤ３ ＡＰＣ－Ｃｙ７、抗ＣＤ８ ＰＥ－Ｃｙ７は全て、ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した。抗体の添加後、細胞を４℃で３０～６０分間染色した。ＣＤ－１９ ＣＡＲ発現の検出のために、細胞を、１μｇ／ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液中のＣＤ－１９Ｆｃ組換えタンパク質と室温で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、１：１００希釈の抗ヒトＦＣ抗体とインキュベートした。次いで、細胞をＭＡＣＳ緩衝液中で３回洗浄し、Ａｃｅａ ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーターで分析した。細胞を一定体積で収集し、正確な細胞数を得ることを可能にした。
実施例１：キメラ細胞内シグナル伝達ドメインを含む共刺激分子の設計
本明細書の開示は、図１に示されるようなＣＤ１３７／４－１ＢＢ又はＣＤ１３４／ＯＸ－４０受容体を含むか又はそれらに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む共刺激分子の設計を提供する。細胞質尾部のＣＤ１３７ファミリーの配列の試験（図１）は、共通の膜近位多塩基ドメイン、並びにユビキチン化部位として機能し得るいくつかのリジン残基、並びにレセプター連結後にＮＦ－κＢシグナル伝達経路を活性化するように働くＴＲＡＦ結合ドメインを示した。理論に束縛されるものではないが、保存されたリジン残基は、ＣＤ１３４／ＣＤ１３７のユビキチン化及び分解を制御することができるユビキチン化部位として機能する可能性があり、潜在的なＣＤ２８／ＩＣＯＳ－ＣＤ１３４ ＣＡＲ又はＣＤ２８／ＩＣＯＳ－ＣＤ１３７ ＣＡＲ受容体それぞれにおけるＣＤ１３７又はＣＤ１３４細胞質尾部の破壊された位置は、多塩基ドメイン又は保存されたリジン残基のいずれかを介して、得られた分子の局在化又は半減期に影響を及ぼす可能性がある。ＩＣＯＳ／ＣＤ２８細胞内ドメインと、多塩基配列及び保存されたリジン残基を欠くＣＤ１３７又はＯＸ－４０の細胞質ドメインとの新しい融合ドメイン、並びにそれらの野生型（ＷＴ）対応物を生成した（図２Ａ及び２Ｂ）。刺激を増強する可能性のあるＬｃｋ及びＶａｖ３の結合に関与するＣＤ２８の細胞質ドメインの一部分も含めた。ＰＤ－１の細胞外ドメインを使用して、細胞内尾部を省略することによるドミナントネガティブ（ＤＮ）バージョン、又は負の調節シグナルを正の調節シグナルに変化させる阻害性スイッチ受容体のいずれかを作製し、したがって細胞内因性ＰＤ－１遮断を提供した。本明細書に記載される細胞質尾部、すなわち、細胞内共刺激ドメインは、図３に詳述されるように、新しいＣＡＲ受容体若しくは異なる阻害性スイッチ受容体を作製するために、又は他の免疫調節性細胞外ドメインを発現させるために、目的の他のシグナル伝達タンパク質の細胞質尾部の使用を介して増殖され得る。
実施例２：チェックポイント共刺激分子のインビトロ機能性の生成及び試験
本明細書の開示は、共刺激分子の設計及び高親和性ＴＣＲの機能に対するそれらの効果の検証を提供する。本明細書に記載される共刺激分子を、図２Ａ及び２Ｂに示されるように設計した。全ての組換え受容体において、ＰＤ１シグナルペプチド（ＳＰ）を、受容体の表面発現を増加させるＨＬＡ－Ａ２由来のシグナルペプチドと交換した。対照として、ＰＤ１－ＷＴ及びＩＴＩＭ含有細胞内尾部（ＴＬｓ）を欠くトランケート型ＰＤ－１を含めた。ＣＤ２８又はＩＣＯＳの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含有する２つの第２世代受容体を、第２世代対照受容体として含めた。更に、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーの細胞内シグナル伝達ドメインに連結されたＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８に由来する膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含有する１５個の第３世代受容体を生成した。第１世代は、野生型ＣＤ１３７／４－１ＢＢの細胞内ドメイン（ＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢ：配列番号２６）を含有したが、第２世代及び第３世代は、表面発現を増加させるために組み込まれた重要な変異を有するＣＤ１３７／４－１ＢＢドメイン又はＣＤ１３４／ＯＸ－４０細胞内ドメインのいずれか（それぞれ、ＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ：配列番号２７及びＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｔ：配列番号２８）を含有した。更に、本明細書に記載される第３世代受容体は、変異ＣＤ１３７ドメイン（ＩＣＯＳ４ＢＢｔ）又は変異ＣＤ１３４／ＯＸ４０ドメイン（ＩＣＯＳ－ＯＸ４０ｔ）（ＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ１＿ＩＣＯＳ（２８）＿ＢＢｔ：配列番号２９及びＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ１＿ＩＣＯＳ（２８）＿ＯＸ４０ｔ：配列番号３０）のいずれかに更に連結されたＩＣＯＳ細胞内ドメイン内に挿入されたＣＤ２８細胞内ドメインの一部分を含むキメラ細胞内ドメインを含有する。変異ＣＤ１３７（２８＿ＢＢｔ）又は変異ＣＤ１３４／ＯＸ４０（２８＿ＯＸ４０ｔ）ドメイン（ＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ１＿２８＿ＢＢｔ：配列番号１３１及びＨＬＡ Ａ２－ＳＰ＿ＰＤ＿２８＿ＯＸ４０ｔ：配列番号１３２）のいずれかに連結されたＣＤ２８細胞内ドメインを含有する、更に２つの第３世代の受容体を、本明細書に記載のように作製した（図２Ａ）。これらのベクターをレンチウイルスベクターにクローニングし、自己トランケートペプチドによってトランケート型ｈｕＥＧＦＲ受容体（ｈｕＥＧＦＲｔ）に融合させて、形質導入細胞を追跡し、磁気選択した。これらの受容体が初代Ｔ細胞へのレンチウイルス形質導入によって発現された場合、各受容体は、内因性ＰＤ－１レベルを有意に超えて発現する（図４Ａ）。第２世代の共刺激分子は十分に発現されたが、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメインの包含により、組換え受容体の表面発現がかなり減少した。本明細書の開示は、ＴＲＡＦ結合ドメインを維持する変異細胞内ドメインの包含が、これらの最適化された第３世代受容体の表面発現をレスキューすることを示す。ｈｕＥＧＦＲｔ及び共刺激分子の表面発現は、非トランケート型（ＩＣＯＳ＿ＢＢｗｔ）と比較して、トランケート型ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）設計（ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ）の発現の増加を実証する。ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）の細胞質ドメインにおける同様の変異も、共刺激分子の高い表面発現をもたらした（図４Ｂ）。
形質導入後、Ｔ細胞をｈｕＥＧＦＲｔの発現に基づいて＞９０％純度まで単離し、再刺激実験に使用した。本明細書に開示される結果は、インビトロでの共刺激分子のエンゲージが、特に低用量の抗ＣＤ３抗体で、Ｔ細胞サイトカイン産生及び増殖を増強したことを実証する（図５Ａ～５Ｄ）。より生理学的な系を作製するために、ＨＬＡ－Ａ２単独又はＨＬＡ－Ａ２とＰＤ－Ｌ１のいずれかをＫ５６２細胞上で過剰発現させ、共刺激受容体形質導入Ｔ細胞及び示された用量の抗ＣＤ３とインキュベートした。Ｋ５６２：ＰＤ－Ｌ１細胞とのインキュベーションは、特にＰＤ１＿ＷＴを過剰発現するＴ細胞で、分泌されたサイトカインの量を低減させた（図６Ａ）。ＰＤ１＿ＴＬ又はＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｗｔのいずれかの発現は、ＩＬ－２、ＴＮＦ、又はＩＦＮγの分泌にほとんど影響を及ぼさないが、ＰＤ１＿２８又はＰＤ１＿ＩＣＯＳの発現は、ＰＤ－Ｌ１発現Ｋ５６２細胞の存在下で、エフェクターサイトカイン分泌をＧＦＰ対照よりも３～４倍増加させた。注目すべきことに、ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ及びＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｔ共刺激分子の両方は、この効果を更に改善し、エフェクターサイトカイン分泌を、ＰＤ－Ｌ１の存在下でＰＤ１＿ＩＣＯＳ発現細胞よりも２～３倍増加させた（図６Ｃ）。ＰＤ１＿２８、ＰＤ１＿２８＿ＢＢｔ及びＰＤ１＿２８＿ＯＸ４０ｔの発現は、同等のエフェクターサイトカイン分泌をもたらした（図６Ｂ）。構築物のいずれも構成的に活性ではなく、ＰＤ－Ｌ１又は抗ＣＤ３の非存在下でサイトカイン分泌に対して最小限の効果を有し、Ｔ細胞応答を開始するためにＰＤ－１及び抗原の両方が必要であることを示した。サイトカインデータに当てはめると、ａ）ＰＤ１＿２８、ＰＤ１＿２８＿ＢＢｔ及びＰＤ１＿２８＿ＯＸ４０ｔ（図７Ａ、下パネル、及び図７Ｃ）、並びにｂ）ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ及びＰＤ１：ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｔ（図７Ｂ、下パネル、及び図７Ｃ）を発現するＴ細胞は、ＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞に応答して最もよく増殖し、ＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞を最もよく死滅させることができた（図７Ａ～７Ｂ、上パネル）。サイトカインデータに当てはめると、ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ及びＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｔを発現するＴ細胞は、ＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞に応答して最もよく増殖し、ＰＤ－Ｌ１を発現するＫ５６２細胞を最もよく死滅させることができた（図７Ｃ～７Ｅ）。再び、この応答は、抗ＣＤ３及びＰＤ－Ｌ１発現の両方を必要とした。共刺激分子は、細胞が抗ＣＤ３及び抗ＰＤ１でコーティングされた９６ウェルプレート上で刺激された場合、それらの発現がＴ細胞増殖を増加させたため共刺激能力を実証した（図８）。
共刺激分子の表面発現（図９Ａ～９Ｂ）、抗ＣＤ３抗体による刺激に応答したエフェクターサイトカイン産生（図９Ｃ）、及びＰＤ－Ｌ１を発現する標的細胞による刺激に応答したＴ細胞増殖（図９Ｄ）の両方に関して、多塩基及びリジン残基の変異を有する受容体の効果は、ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＢＢｔ共刺激分子よりも小さい。ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｔ受容体（トランケート型ＯＸ４０細胞内ドメインを有する）は、共刺激分子の表面発現（図１０Ａ～１０Ｂ）、抗ＣＤ３抗体による刺激に応答したエフェクターサイトカイン産生（図１０Ｃ）、及びＰＤ－Ｌ１を発現する標的細胞による刺激に応答したＴ細胞増殖（図１０Ｄ）の両方に関して、野生型ＰＤ１＿ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｗｔ受容体（野生型ＯＸ４０細胞内ドメインを含む）の効果に匹敵する効果を有した。
更に、ＩＣＯＳベースの共刺激分子は、フローベースのコンジュゲーションアッセイにおいてＴ細胞：ＰＤ－Ｌ１発現（ＰＤ－Ｌ１＋）標的細胞相互作用を促進し、これらの受容体が、同族抗原をスキャンしながら長期のＴ細胞－ＡＰＣ相互作用を促進することが示唆され、これは、ＴＭＥ中の低存在量抗原をスキャンする場合に有用な特性である（図１１Ａ～１１Ｂ）。
本明細書の開示は、本明細書に開示される改変された第３世代細胞内シグナル伝達ドメインに基づく共刺激分子が、ＰＤ－Ｌ１＋標的細胞に反応した場合のＴ細胞エフェクター機能の増強において、既存のＰＤ１＿２８共刺激分子よりも優れていることを示す。これには、Ｔ細胞増殖、サイトカイン分泌、及び標的細胞死滅の増加が含まれる。本明細書に開示される第３世代細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＡＡを標的化するＴＣＲ－Ｔ療法と首尾よく組み合わせることができる。
実施例３：インビトロ前臨床研究
特異的ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ特異的ＴＣＲ単独を発現するＴ細胞と比較して、Ｔ細胞表面上の共刺激分子の発現（図１２Ａ）、エフェクターサイトカイン産生（図１２Ｂ）、及びＮＹ－ＥＳＯを発現する標的細胞の死滅（図１２Ｃ）を増加させる、特異的ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ特異的ＴＣＲ並びにＩＣＯＳ及び変異ＣＤ１３７シグナル伝達ドメインを含む共刺激分子を発現するＴ細胞が本明細書に記載される。
本明細書に開示される改変された第３世代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＤ－１９ ＣＡＲ構築物が本明細書に記載される。本明細書に記載される第３世代細胞内シグナル伝達構築物を有するＣＤ－１９（ＦＭＣ６３ｓｃＦＶ）ＣＡＲは、細胞内キメラドメイン：ＣＤ２８－ＣＤ１３７－ＣＤ３ζ（２８＿ΒΒｗｔ＿ｚ）、ＣＤ２８－ＣＤ１３７変異体－ＣＤ３ζ（２８＿ΒΒｔ＿ｚ）、ＣＤ２８－ＣＤ１３４変異体－ＣＤ３ζ（２８＿ＯＸ４０ｔ＿Ｚ）、ＩＣＯＳ－ＣＤ１３７－ＣＤ３ζ（ＩＣＯＳ＿ΒΒ＿ｚ）、ＩＣＯＳ－ＣＤ１３７変異体－ＣＤ３ζ（ＩＣＯＳ＿ΒΒｔ＿ｚ）、及びＩＣＯＳ－ＣＤ１３４変異体－ＣＤ３ζ（ＩＣＯＳ＿ＯＸ４０ｔ－ｚ）を含む構築物を含む。また、ＩＣＯＳドメイン内に挿入されたＣＤ２８の一部分を有する第３世代細胞内シグナル伝達構築物：ＩＣＯＳ（２８）－ＣＤ１３７－ＣＤ３ζ（ＩＣＯＳ（２８）＿ΒΒｗｔ＿ｚ）、ＩＣＯＳ（２８）－ＣＤ１３７変異体－ＣＤ３ζ（ＩＣＯＳ（２８）＿ΒΒｔ＿ｚ）、及びＩＣＯＳ（２８）－ＣＤ１３４変異体－ＣＤ３ζ（ＩＣＯＳ（２８）＿ＯＸ４０ｔ－ｚ）を有するＣＤ－１９ＣＡＲが提供される。ＣＤ１３７－ＣＤ３ζ（ΒΒｗｔ＿ｚ）、ＣＤ２８－ＣＤ３ζ（２８＿ｚ）及びＩＣＯＳ－ＣＤ３ζ（ΙＣＯＳ＿ｚ）を含む第２世代構築物を対照として使用する。ＰＤ－１ ３世代細胞内シグナル伝達構築物を使用した本明細書に記載される研究と同様に、ＣＤ１３７及びＣＤ１３４変異体ドメインを有するＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、野生型ＣＤ１３７及びＣＤ１３４ドメインを有する対応する構築物（それぞれ２８＿ＢＢｗｔ＿ｚ及びＩＣＯＳ＿ＢＢｗｔ＿ｚ）と比較して、より高い発現を示した（図１３Ａ～１３Ｂ）。本明細書に記載されるインビトロ研究は、第３世代ＣＤ２８ベース及びＩＣＯＳベースのＣＤ１９ ＣＡＲで形質導入された初代Ｔ細胞による、ＣＤ１９発現細胞（ＣＤ１９＋）の死滅の増加（図１４Ａ～１４Ｂ及び図１５Ｃ～１５Ｄ）、エフェクターサイトカイン産生の増加（図１４Ｃ、右パネル）並びにＴ細胞増殖及び持続性の増加（図１５Ａ～１５Ｂ及び１５Ｅ）を示す。
本開示はまた、変異ＣＤ１３４／ＣＤ１３７シグナル伝達ドメインを含むＣＤ２８ベースの受容体及び変異ＣＤ１３４／ＣＤ１３７シグナル伝達ドメインを含むＩＣＯＳベースの受容体の発現が、標的抗原（ＢＣＭＡ－Ｆｃ）へのＢＣＭＡ特異的Ｔ細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）の結合を増加させたことを示す（図１６Ａ～１６Ｂ）。また、本開示は、変異ＣＤ１３４／ＣＤ１３７シグナル伝達ドメインを含むＣＤ２８ベースの受容体及び変異ＣＤ１３４／ＣＤ１３７シグナル伝達ドメインを含むＩＣＯＳベースの受容体の発現が、ＢＣＭＡを発現する骨髄腫細胞株に応答したＢＣＭＡ特異的Ｔ細胞による増殖及びエフェクターサイトカイン産生（図１６Ｃ及び１６Ｅ）並びに標的細胞死滅（図１６Ｄ）を増加させたことを示す。

Claims (159)

  1. 組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）であって、
    （ａ）細胞外ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ細胞内ドメインであって、前記第１及び前記少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、前記少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）細胞内ドメインを含む、キメラ細胞内ドメインとを含む、ＲＴＣＲ。
  2. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインである、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  3. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸位置１３からアミノ酸位置４２によるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のＲＴＣＲ。
  4. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む、請求項２に記載のＲＴＣＲ。
  5. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む、請求項２に記載のＲＴＣＲ。
  6. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、配列番号３によるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のＲＴＣＲ。
  7. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３又は４個のリジン残基の欠失を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  8. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上のリジン変異を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  9. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、５、６及び１２から選択されるアミノ酸位置の１つ以上のリジン変異を含む、請求項８に記載のＲＴＣＲ。
  10. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  11. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  12. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、３、４、５及び６から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１１に記載のＲＴＣＲ。
  13. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む、請求項１２に記載のＲＴＣＲ。
  14. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインである、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  15. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸位置１５からアミノ酸位置３７によるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のＲＴＣＲ。
  16. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む、請求項１４に記載のＲＴＣＲ。
  17. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む、請求項１４に記載のＲＴＣＲ。
  18. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、配列番号６によるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のＲＴＣＲ。
  19. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までのリジン残基の欠失を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  20. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  21. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  22. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１に記載のＲＴＣＲ。
  23. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、及び５から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項２２に記載のＲＴＣＲ。
  24. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む、請求項２３に記載のＲＴＣＲ。
  25. 前記キメラ細胞内ドメインが、ＣＤ２８ファミリーのタンパク質に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  26. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＩＣＯＳ又はそれらの組み合わせに由来する、請求項２５に記載のＲＴＣＲ。
  27. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、ＩＣＯＳに由来する、請求項２６に記載のＲＴＣＲ。
  28. ＩＣＯＳ由来の前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号９によるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のＲＴＣＲ。
  29. 前記キメラ細胞内ドメインが、配列番号９によるＩＣＯＳドメインと組み合わされたＣＤ２８細胞内ドメインの一部分を含む第１のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  30. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号１２及び１０９のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載のＲＴＣＲ。
  31. 前記キメラ細胞内ドメインが、ＣＤ２８に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  32. ＣＤ２８に由来する前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号１０によるアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載のＲＴＣＲ。
  33. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号１２１～１２２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項３１又は３２に記載のＲＴＣＲ。
  34. 前記キメラ細胞内ドメインが、配列番号１４～１７のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  35. 前記キメラ細胞内ドメインが、第３のシグナル伝達ドメインを更に含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  36. 前記第３のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン又はインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせに由来する、請求項３５に記載のＲＴＣＲ。
  37. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はその組み合わせに由来する、請求項３６に記載のＲＴＣＲ。
  38. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、配列番号１８、４５、４６、４７及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載のＲＴＣＲ。
  39. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項３６に記載のＲＴＣＲ。
  40. 前記変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項３９に記載のＲＴＣＲ。
  41. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、配列番号４９によるアミノ酸配列を含む、請求項３９又は４０に記載のＲＴＣＲ。
  42. 前記ＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインが、配列番号５０によるアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載のＲＴＣＲ。
  43. 前記キメラ細胞内ドメインが、第４のシグナル伝達ドメインを更に含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  44. 前記第４のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン若しくはインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせに由来し、前記第３及び前記第４のシグナル伝達ドメインが同一ではない、請求項４３に記載のＲＴＣＲ。
  45. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はその組み合わせに由来する、請求項４４に記載のＲＴＣＲ。
  46. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、配列番号１８、４５、４６、４７及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項４５に記載のＲＴＣＲ。
  47. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項４４に記載のＲＴＣＲ。
  48. 前記変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項４７に記載のＲＴＣＲ。
  49. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、配列番号４９によるアミノ酸配列を含む、請求項４７又は４８に記載のＲＴＣＲ。
  50. 前記ＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインが、配列番号５０によるアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載のＲＴＣＲ。
  51. 前記細胞外ドメインが、免疫細胞の活性化及び／又は増殖を誘導するタンパク質又はその一部分を含む、請求項１～５０のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  52. 前記細胞外ドメインが、
    ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の成分、
    ｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の成分、
    ｃ）Ｔ細胞共受容体の成分であって、Ｔ細胞共刺激タンパク質又はＴ細胞阻害タンパク質である、Ｔ細胞共受容体の成分、
    ｄ）細胞表面受容体又はその成分に結合するリガンド、
    ｅ）サイトカイン受容体の成分、
    ｆ）ケモカイン受容体の成分、
    ｇ）インテグリン受容体の成分、
    ｈ）内皮細胞表面タンパク質受容体の成分又はその断片、
    ｉ）神経ガイダンスタンパク質受容体の成分、及び
    ｊ）補体受容体の成分のいずれか１つを含む、請求項５１に記載のＲＴＣＲ。
  53. 前記Ｔ細胞共受容体又は前記ＣＡＲの前記成分が、ＰＤ１、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４０Ｌ、Ｌａｇ－３、Ｔｉｍ－３、若しくはＴＩＧＩＴの成分、又はそれらの組み合わせである、請求項５２に記載のＲＴＣＲ。
  54. 前記Ｔ細胞共受容体又は前記ＣＡＲの前記成分が、ＣＤ１９、Ｂ細胞成熟Ａｇ（ＢＣＭＡ）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＩＬ－１０、増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、ＢＡＦＦ、ＯＸ－４０Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ４０、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ネクチン、ＣＤ１５５、若しくはＣＤ１１２、又はそれらの組み合わせに結合する、請求項５２に記載のＲＴＣＲ。
  55. 前記サイトカイン受容体が、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＴＧＦ－β,ＩＬ－１２、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＦＮ－γ,若しくはＩＦＮ－α／β,又はそれらの組み合わせに結合する、請求項５２に記載のＲＴＣＲ。
  56. 前記補体受容体の成分が、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、ＣＤ４６／ＭＣＰ、ＣＤ５５、ＣＤ９７、若しくはＤＡＦの成分、又はそれらの組み合わせである、請求項５２に記載のＲＴＣＲ。
  57. 前記細胞外ドメインが、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、ケモカイン受容体（ＣＣＲ）４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＣＲ１０、ネトリン－１受容体、セマフォリン受容体、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、白血球特異的β２インテグリン（αＬβ２、αＭβ２、αＸβ２、又はαＤβ２β）、β７インテグリン（α４β７又はαＥβ７）、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）結合β１インテグリン（α１－α６β１）、Ｌ－セレクチン、又はシアリルルイスｘの成分のアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載のＲＴＣＲ。
  58. 前記細胞外ドメインが、ポリペプチド、糖タンパク質、又は抗体若しくはその断片である、請求項５１～５４のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  59. 前記抗体又はその断片が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ダイアボディ、ナノボディ、ｓｄＡｂ、Ｆｖ、ＶＨＨ断片、又は単鎖Ｆｖ断片である、請求項５８に記載のＲＴＣＲ。
  60. 前記細胞外ドメインが、腫瘍抗原、病原体関連タンパク質、及び自己免疫、炎症性、代謝性、又は神経変性状態若しくは障害に関連する抗原から選択される標的に結合する、請求項５１～５４及び５８～５９のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  61. 前記腫瘍抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍分泌抗原（ＴＳＡ）又は非従来型抗原（ＵＣＡ）である、請求項６０に記載のＲＴＣＲ。
  62. 前記細胞外ドメインが、１ｆＭ～１００μＭの結合親和性で標的に結合する、請求項５１～６１のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  63. 前記細胞外ドメインが、１μＭ～１０μＭの結合親和性で標的に結合する、請求項６２に記載のＲＴＣＲ。
  64. 前記細胞外ドメインが、Ｎ末端にシグナルペプチドを含み、前記シグナルペプチドが、表面タンパク質又は分泌タンパク質に由来する、請求項１～６３のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  65. 前記シグナルペプチドが、ＰＤ－１シグナルペプチド（ＰＤ－１ ＳＰ）である、請求項６４に記載のＲＴＣＲ。
  66. 前記シグナルペプチドが、ＨＬＡ Ｉ型組織適合抗原又はその一部分である、請求項６４に記載のＲＴＣＲ。
  67. 前記細胞外ドメインが、ヒンジ領域を含む、請求項１～６６のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  68. 前記ヒンジ領域が、ＣＤ８、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、又はＩｇＧに由来する、請求項６８に記載のＲＴＣＲ。
  69. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８、ＰＤ１、ＣＤ２８、ＣＯＳ、又はＩｇＧに由来する、請求項１～６８のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  70. 前記ＲＴＣＲが、Ｔ細胞における発現のためのものであり、前記Ｔ細胞が、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ４０Ｌから選択される前記内因性共刺激分子の少なくとも１つ、並びにそれらの組み合わせを共発現する、請求項１～６９のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ。
  71. 請求項１～７０のいずれか一項に記載のＲＴＣＲをコードする、核酸。
  72. 請求項７１に記載の核酸を含む、ベクター。
  73. 請求項７１に記載の核酸又は請求項７２に記載のベクターを含む、細胞。
  74. 前記細胞が、改変Ｔ細胞である、請求項７３に記載の細胞。
  75. 前記細胞が、改変ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）である、請求項７３に記載の細胞。
  76. 前記改変Ｔ細胞が、同種異系Ｔ細胞である、請求項７４に記載の細胞。
  77. 前記改変Ｔ細胞が、自己Ｔ細胞である、請求項７４に記載の細胞。
  78. 前記改変Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、初期メモリーＴ細胞、ステムセル様Ｔ細胞、ステムメモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、又は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項７４に記載の細胞。
  79. 前記細胞が、人工抗原受容体をコードする配列、治療用ポリペプチド、若しくは免疫細胞調節タンパク質、又はそれらの組み合わせを更に含む、請求項７３～７８のいずれか一項に記載の細胞。
  80. 前記人工抗原受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項７９に記載の細胞。
  81. 前記細胞が、請求項１～７０のいずれか一項に記載のＲＴＣＲを一過的又は安定的に発現する、請求項７３～８０のいずれか一項に記載の細胞。
  82. 前記細胞が、前記ＲＴＣＲと、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ４０Ｌから選択される前記内因性共刺激分子の少なくとも１つ以上、並びにそれらの組み合わせを共発現する、請求項７３～８１のいずれか一項に記載の細胞。
  83. 改変Ｔリンパ球（Ｔ細胞）であって、
    （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列の改変であって、前記改変が、前記ＴＣＲの発現又は活性のレベルを低減又は排除する、改変、及び
    （ｂ）請求項１～７０のいずれか一項に記載の組換えＴ細胞共刺激受容体（ＲＴＣＲ）を含む、改変Ｔ細胞。
  84. 主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）の成分をコードする内因性配列の改変を更に含み、前記改変が、前記ＭＨＣ－Ｉの発現又は活性のレベルを低減又は排除する、請求項８３に記載の改変Ｔ細胞。
  85. 前記改変Ｔ細胞が、前記ＲＴＣＲと、前記内因性共刺激分子ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ４０Ｌのうちの少なくとも１つ又はそれらの組み合わせを共発現する、請求項８３又は８４に記載の改変Ｔ細胞。
  86. 請求項１～７０のいずれか一項に記載のＲＴＣＲを含む、組成物。
  87. 請求項７１に記載の核酸を含む、組成物。
  88. 請求項７２に記載のベクターを含む、組成物。
  89. 請求項７３～８２のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。
  90. 請求項８３～８５のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞を含む、組成物。
  91. 細胞集団を含む組成物であって、前記集団が、請求項７３～８２のいずれか一項に記載の複数の細胞を含むか、又は前記集団が、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の複数の改変Ｔ細胞を含む、組成物。
  92. 複数の改変Ｔ細胞を産生する方法であって、前記方法が、
    ａ）複数の初代Ｔ細胞を提供することと、
    ｂ）請求項１～７０のいずれか一項に記載のＲＴＣＲ、請求項７１に記載の核酸、又は請求項７２に記載のベクターを含む組成物を提供することと、
    ｃ）（ａ）の前記複数の初代Ｔ細胞に（ｂ）の前記組成物を導入して、複数の改変Ｔ細胞を、前記複数の改変Ｔ細胞内で前記ＲＴＣＲを安定に発現する条件下で産生することと、を含む、方法。
  93. 前記方法が、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする内因性配列を改変する工程を更に含み、前記改変が、前記内因性ＴＣＲの発現又は活性のレベルを低減又は排除する、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記方法が、前記複数の初代Ｔ細胞の内因性配列を改変する工程を更に含み、前記改変が、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）の発現又は活性のレベルを低減又は排除する、請求項９２又は９３に記載の方法。
  95. 前記方法が、
    ｄ）好適な細胞培養培地中で前記複数の改変Ｔ細胞を維持又は増殖させることと、
    ｅ）
    ｉ）好適な細胞凍結培地中で前記複数の改変Ｔ細胞を凍結保存すること、又は
    ｉｉ）前記複数の改変Ｔ細胞を、それを必要とする対象への投与のために調製すること
    のいずれかとを更に含む、請求項９２～９４のいずれか一項に記載の方法。
  96. 疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効数の請求項７３～８２のいずれか一項に記載の細胞、治療有効数の請求項８３～８５のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞、治療有効量の請求項８６～９１のいずれか一項に記載の組成物、又は治療有効数の請求項９２～９５のいずれか一項に記載の方法によって産生された複数の改変Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
  97. 前記対象が、哺乳動物である、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記疾患又は障害が、癌、自己免疫疾患若しくは障害、感染症、炎症性疾患、腎疾患若しくは障害、肺疾患若しくは障害、肝疾患若しくは障害、心血管系疾患若しくは障害、神経変性疾患若しくは障害、又は代謝性疾患若しくは障害である、請求項９６～９８のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記癌が、固形腫瘍又は血液癌である、請求項９９に記載の方法。
  101. 前記固形腫瘍が、肉腫、癌腫又はメラノーマである、請求項１００に記載の方法。
  102. 前記血液癌が、白血病、リンパ腫又は骨髄腫である、請求項１００に記載の方法。
  103. 前記癌が、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ホジキンリンパ腫、ホジキン疾患、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、結腸直腸癌、膵臓癌、上咽頭癌、悪性組織球症、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍に伴う高カルシウム血症、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭部癌、頚部癌、遺伝性非ポリポーシス癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、精巣癌、腺癌、肉腫、悪性メラノーマ、及び血管腫から選択される、請求項９９に記載の方法。
  104. 前記感染症が、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、又は寄生生物によって引き起こされる、請求項９９に記載の方法。
  105. 前記神経変性障害が、アルツハイマー疾患（ＡＤ）及び他の認知症、パーキンソン疾患（ＰＤ）及びＰＤに関連する障害、プリオン疾患、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＡ）、又は脊髄性筋萎縮（ＳＭＡ）である、請求項９９に記載の方法。
  106. 前記炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は多発性硬化症である、請求項９９に記載の方法。
  107. 第１及び少なくとも第２のシグナル伝達ドメインを含むキメラ共刺激細胞内タンパク質（ＣＩＰ）であって、
    前記第１及び前記少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、同一ではなく、
    前記少なくとも第２のシグナル伝達ドメインが、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリータンパク質の変異体細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＩＰ。
  108. ＴＮＦＲファミリータンパク質の前記変異体細胞内シグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ１３４（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン又は変異体ＣＤ１３７（ＯＸ－４０）細胞内ドメインである、請求項１０７に記載のＣＩＰ。
  109. 前記ＣＩＰが、膜貫通ドメインを更に含む、請求項１０７又は１０８に記載のＣＩＰ。
  110. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインである、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  111. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのアミノ酸位置１３からアミノ酸位置４２によるアミノ酸配列を含む、請求項１１０に記載のＣＩＰ。
  112. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む、請求項１１０に記載のＣＩＰ。
  113. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む、請求項１１０に記載のＣＩＰ。
  114. 前記トランケート型ＣＤ１３７細胞内ドメインが、配列番号３によるアミノ酸配列を含む、請求項１１０に記載のＣＩＰ。
  115. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１、２、３又は４個のリジン残基の欠失を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  116. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上のリジン変異を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  117. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、５、６及び１２から選択されるアミノ酸位置の１つ以上のリジン変異を含む、請求項１１６に記載のＣＩＰ。
  118. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  119. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１２までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  120. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、３、４、５及び６から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１１９に記載のＣＩＰ。
  121. 前記変異体ＣＤ１３７細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３７細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む、請求項１２０に記載のＣＩＰ。
  122. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインである、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  123. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのアミノ酸位置１５からアミノ酸位置３７によるアミノ酸配列を含む、請求項１２２に記載のＣＩＰ。
  124. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチの欠失を含む、請求項１２２に記載のＣＩＰ。
  125. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又はそれ以上のアミノ酸の欠失を含む、請求項１２２に記載のＣＩＰ。
  126. 前記トランケート型ＣＤ１３４細胞内ドメインが、配列番号６によるアミノ酸配列を含む、請求項１２２に記載のＣＩＰ。
  127. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までのリジン残基の欠失を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  128. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を含む、請求項１２７に記載のＣＩＰ。
  129. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸の欠失を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  130. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４までの１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１０８に記載のＣＩＰ。
  131. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１、２、及び５から選択されるアミノ酸位置の１つ以上の近位塩基性アミノ酸変異を含む、請求項１３０に記載のＣＩＰ。
  132. 前記変異体ＣＤ１３４細胞内ドメインが、前記ＣＤ１３４細胞内ドメインのＮ末端のアミノ酸位置１２のリジン変異を更に含む、請求項１３１に記載のＣＩＰ。
  133. 前記キメラ細胞内ドメインが、ＣＤ２８ファミリーのタンパク質に由来する第１のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１０７～１３２のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
  134. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＩＣＯＳ又はそれらの組み合わせに由来する、請求項１３３に記載のＣＩＰ。
  135. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、ＩＣＯＳに由来する、請求項１３４に記載のＣＩＰ。
  136. ＩＣＯＳ由来の前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号９によるアミノ酸配列を含む、請求項１３５に記載のＣＩＰ。
  137. 前記キメラ細胞内ドメインが、配列番号９によるＩＣＯＳドメインと組み合わされたＣＤ２８細胞内ドメインの一部分を含む第１のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１０７～１３４のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
  138. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号１２又は１０９のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項１３７に記載のＣＩＰ。
  139. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８に由来する、請求項１０７～１３４のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
  140. ＣＤ２８由来の前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号１０によるアミノ酸配列を含む、請求項１３９に記載のＣＩＰ。
  141. 前記第１のシグナル伝達ドメインが、配列番号１２１～１２２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項１３９又は１４０に記載のＣＩＰ。
  142. 前記ＣＩＰが、配列番号１４～１７のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項１０７～１３８のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
  143. 前記ＣＩＰが、第３のシグナル伝達ドメインを更に含む、請求項１０７～１４２のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
  144. 前記第３のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン若しくはインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせに由来する、請求項１４３に記載のＣＩＰ。
  145. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はその組み合わせに由来する、請求項１４４に記載のＣＩＰ。
  146. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、配列番号１８、４５、４６、４７及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項１４５に記載のＣＩＰ。
  147. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項１４４に記載のＣＩＰ。
  148. 前記変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項１４７に記載のＣＩＰ。
  149. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、配列番号４９によるアミノ酸配列を含む、請求項１４７又は１４８に記載のＣＩＰ。
  150. 前記ＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインが、配列番号５０によるアミノ酸配列を含む、請求項１４４に記載のＣＩＰ。
  151. 前記キメラ細胞内ドメインが、第４のシグナル伝達ドメインを更に含む、請求項１０７～１５０のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
  152. 前記第４のシグナル伝達ドメインが、ＣＤ３シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン若しくはインターロイキン２受容体結合（ＩＬ－２ＲＢ）タンパク質シグナル伝達ドメイン又はそれらの組み合わせに由来し、前記第３及び前記第４のシグナル伝達ドメインが同一ではない、請求項１３５に記載のＣＩＰ。
  153. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３εドメイン又はその組み合わせに由来する、請求項１５２に記載のＣＩＰ。
  154. 前記ＣＤ３シグナル伝達ドメインが、配列番号１８、４５、４６、４７及び４８のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、請求項１５３に記載のＣＩＰ。
  155. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項１５２に記載のＣＩＰ。
  156. 前記変異体ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、トランケート型ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項１５５に記載のＣＩＰ。
  157. 前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、配列番号４９によるアミノ酸配列を含む、請求項１５５又は１５６に記載のＣＩＰ。
  158. 前記ＩＬ－２ＲＢタンパク質シグナル伝達ドメインが、配列番号５０によるアミノ酸配列を含む、請求項１５２に記載のＣＩＰ。
  159. 前記ＣＩＰが、Ｔ細胞における発現のためのものであり、前記Ｔ細胞が、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＯＸ－４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ４０Ｌから選択される前記内因性共刺激分子の少なくとも１つ、並びにそれらの組み合わせを共発現する、請求項１０７～１５８のいずれか一項に記載のＣＩＰ。
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