TW202000691A - 嵌合跨膜蛋白及其用途 - Google Patents
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Abstract
本文提供一或多種嵌合跨膜蛋白、編碼此等一或多種嵌合跨膜蛋白之核酸及含有此等核酸之哺乳動物細胞，及製備及使用此等哺乳動物細胞的方法。
Description
本發明係關於生物技術領域，且更特定言之係關於嵌合跨膜蛋白及其用途。
介白素-7 (IL-7)受體在各種細胞類型之細胞表面上表現(暫時性或永久性)，包括未經處理及記憶T細胞。在結合至IL-7後，IL-7受體經由傑納斯激酶(Janus kinase) — JAK1及JAK3之活化將訊號轉導至細胞中(Palmer等人，Cell . Mol . Immunol .
5(2):79-89, 2008)。
儘管已作出許多改進以在第二代嵌合抗原受體(CAR) T細胞中產生第二增殖性訊號(經由在嵌合抗原受體中包括協同刺激信號傳導域，諸如CD28及4-1BB)，此訊號仍具有抗原依賴性，通常在具有較低腫瘤相關抗原水平之實體腫瘤中不具有足夠協同刺激活性。
在另一在CAR T細胞中提供足夠協同刺激活性之嘗試中，已使用共同投與屬於共用γ (γc)鏈受體家族之細胞介素。然而，長期使用重組促增殖性細胞介素(諸如IL-2)通常與嚴重副作用相關，而限制持續時間及投與劑量。鑒於以上，需要向CAR T細胞提供協同刺激訊號之替代的改進方法。
本發明至少部分基於包括介白素-7受體之α鏈的跨膜域之蛋白之發現，該介白素-7受體包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，該序列具有一或多個(例如兩個、三個或四個)以下修飾：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換；(ii)半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間，展現與包括介白素-7受體之α鏈的野生型跨膜域之對應蛋白或包括SEQ ID NO: 1之序列的對應蛋白相比提高的下游信號傳導。代表性經修飾跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
本發明亦至少部分基於嵌合跨膜蛋白之發現，該嵌合跨膜蛋白包括細胞外介白素-15域；來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域；及來自介白素-7受體之α鏈的跨膜域，其提供嵌合抗原受體(CAR) T細胞之非抗原依賴性協同刺激。
鑒於此發現，本文提供嵌合跨膜蛋白，其包括細胞外IL-15域、來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域及介白素-7受體之α鏈的跨膜域。亦提供包括介白素-7受體之α鏈的跨膜域之蛋白質，該介白素-7受體包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，該序列具有一或多個(例如兩個、三個或四個)以下修飾：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換；(ii)半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。代表性經修飾跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
亦提供編碼此等嵌合跨膜蛋白或此等蛋白之核酸、包括此等核酸中之任一者的載體及包括此等核酸或載體中之任一者的哺乳動物細胞。本發明亦提供治療癌症之方法；誘導癌細胞的細胞死亡(例如細胞凋亡及/或壞死)之方法；及降低有需要之個體出現轉移或再轉移的風險之方法，該方法包括向個體投與本文所描述之任一哺乳動物細胞。
在一些實施例中，本文提供包括介白素-7受體之α鏈的跨膜域之蛋白質，其中該跨膜域包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，該序列具有以下修飾中之一或多者：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換；(ii)半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。代表性經修飾跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
在一些實施例中，該蛋白質進一步包括介白素-7受體之α鏈 (例如介白素-7受體之野生型α鏈，諸如但不限於介白素-7受體之野生型人類α鏈)的細胞內域。在一些實施例中，該蛋白質進一步包括細胞內域，該細胞內域包括SEQ ID NO: 45之序列或與介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 45)的細胞內域之序列至少80%一致之序列。在一些實施例中，細胞內域與SEQ ID NO: 45至少90%或95%一致。在一些實施例中，該蛋白質進一步包括介白素-7受體之野生型α鏈之細胞內域，其具有以下中之一者或兩者：(i)自介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 45)的細胞內域之序列之N末端刪除一至十個胺基酸及(ii)自介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 45)的細胞內域之序列之C末端刪除一至十個胺基酸。
在一些實施例中，該蛋白質進一步包括介白素-7受體之α鏈 (例如介白素-7受體之野生型α鏈，諸如但不限於介白素-7受體之野生型人類α鏈)的細胞外域。在一些實施例中，該蛋白質進一步包括細胞外域，該細胞外域包括SEQ ID NO: 11之序列或與介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 11)的細胞外域之序列至少80%一致之序列。在一些實施例中，細胞外域與SEQ ID NO: 11至少90%或95%一致。在一些實施例中，該蛋白質進一步包括介白素-7受體之野生型α鏈之細胞外域，其具有以下中之一者或兩者：(i)自介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 11)的細胞外域之序列之N末端刪除一至十個胺基酸及(ii)自介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 11)的細胞外域之序列之C末端刪除一至十個胺基酸。
本發明亦提供編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的核酸。本發明亦提供載體，該等載體包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸。在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸之載體包括可操作地連接至核酸之啟動子及視情況選用之可操作地連接至核酸的強化子序列。在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸之載體包括可操作地連接至核酸的poly(A)序列。在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸之載體為慢病毒或腺病毒載體。
在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸之載體包括編碼嵌合抗原受體之序列。在一些實施例中，嵌合抗原受體特異性結合至腫瘤抗原(例如選自由以下組成之群的腫瘤抗原：磷脂肌醇蛋白聚醣-3(glypican-3)、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125、CD200、CD221、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纖維結合蛋白外域-B、葉酸受體1、GD2、GD3神經節苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、類胰島素生長因子I受體、整合素α5β1、整合素ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺癌細胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C(tenascin C)、TGF β 2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2及波形蛋白(vimentin))。在一些實施例中，嵌合抗原受體包含一或多個選自由以下組成之群之協同刺激信號傳導域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10及DAP-12。
本發明亦提供哺乳動物細胞，其包括有編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的多種核酸中之任一者或包括本文所描述之此等核酸的載體。在一些實施例中，哺乳動物細胞為免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、單核球、自然殺傷細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、調節T細胞及輔助T細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之哺乳動物細胞之子細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。
本發明亦提供包括多種載體中之任一者及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物，該等載體包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸。本發明亦提供包括多種哺乳動物細胞中之任一者的醫藥組合物，該等哺乳動物細胞包括載體，該等載體包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸。
本發明亦提供包括第一載體及第二載體之載體組，第一載體包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸，第二載體包括編碼嵌合抗原受體之序列。在此等載體組之一些實施例中，嵌合抗原受體特異性結合至腫瘤抗原(例如選自由以下組成之群的腫瘤抗原：磷脂肌醇蛋白聚醣-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125、CD200、CD221、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纖維結合蛋白外域-B、葉酸受體1、GD2、GD3神經節苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、類胰島素生長因子I受體、整合素α5β1、整合素ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺癌細胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGF β 2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2及波形蛋白)。在此等載體組之一些實施例中，嵌合抗原受體包含一或多個選自由以下組成之群之協同刺激信號傳導域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10及DAP-12。在此等載體組之一些實施例中，第一載體及第二載體均為慢病毒或腺病毒載體。在本文提供之載體組之一些實施例中，第二載體進一步包括可操作地連接至編碼嵌合抗原受體的序列之啟動子及視情況選用之可操作地連接至編碼嵌合抗原受體的序列之強化子。在此等載體組之一些實施例中，第二載體進一步包含可操作地連接至編碼嵌合抗原受體的序列之poly(A)序列。
本發明亦提供包括本文提供之多種載體組中之任一者的哺乳動物細胞，該等載體組包括第一載體及第二載體，第一載體包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸，第二載體包括編碼嵌合抗原受體之序列。在一些實施例中，哺乳動物細胞為免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、單核球、自然殺傷細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、調節T細胞及輔助T細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之哺乳動物細胞之子細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。
本發明亦提供包括本文提供之多種載體組中之任一者(例如包括第一載體及第二載體之載體組，第一載體包括編碼本文所描述之多種蛋白中之任一者的任一核酸，第二載體包括編碼嵌合抗原受體之序列)及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。本發明亦提供包括多種哺乳動物細胞中之任一者的醫藥組合物，該等哺乳動物細胞包括此等載體組。
本發明亦提供嵌合跨膜蛋白，其包括：細胞外介白素-15域；來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域；及來自介白素-7受體之α鏈的跨膜域。在一些實施例中，細胞外介白素-15域包括野生型介白素-15蛋白之序列。在一些實施例中，野生型介白素-15蛋白為野生型人類介白素-15蛋白(例如具有SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 24之序列的野生型人類介白素-15蛋白)。在一些實施例中，細胞外介白素-15域包含與野生型介白素-15蛋白(例如野生型人類介白素-15蛋白，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 24之序列的野生型人類介白素-15蛋白)之序列至少80%一致之序列。在一些實施例中，細胞外介白素-15域包含與野生型介白素-15蛋白(例如野生型人類介白素-15蛋白，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 24之序列的野生型人類介白素-15蛋白)之序列至少95%一致之序列。在一些實施例中，細胞外介白素-15域為野生型介白素-15蛋白之序列，其具有以下中之一者或兩者(i)自野生型介白素-15蛋白(例如野生型人類介白素-15蛋白，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 24之序列的野生型人類介白素-15蛋白)之序列的N末端移除一至十個胺基酸，及(ii)自野生型介白素-15蛋白(例如野生型人類介白素-15蛋白，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 24之序列的野生型人類介白素-15蛋白)之序列之C末端移除一至十個胺基酸。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白進一步包括位於細胞外介白素-15域與細胞外sushi域之間的連接子序列。在一些實施例中，連接子序列為約2個胺基酸至約50個胺基酸。在一些實施例中，連接子序列為約4個胺基酸至約40個胺基酸。在一些實施例中，連接子為天然存在之胺基酸序列。在一些實施例中，連接子序列非天然存在之胺基酸序列。在一些實施例中，連接子序列包括SEQ ID NO: 92之序列。在一些實施例中，連接子序列由SEQ ID NO: 92之序列組成。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白進一步包括在細胞外sushi域與跨膜域之間的其他連接子序列。在一些實施例中，其他連接子序列為約2個胺基酸至約50個胺基酸。在一些實施例中，其他連接子序列為約4個胺基酸至約40個胺基酸。在一些實施例中，其他連接子為天然存在之胺基酸序列。在一些實施例中，其他連接子序列非天然存在之胺基酸序列。
在具有細胞外sushi域之嵌合跨膜蛋白之一些實施例中，該細胞外sushi域包括來自介白素-15受體之野生型α鏈的sushi域。在一些實施例中，介白素-15受體之野生型α鏈為介白素-15受體之野生型人類α鏈。在一些實施例中，介白素-15受體之野生型人類α鏈之細胞外sushi域包括SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 37。在一些實施例中，細胞外sushi域與介白素-15受體之野生型α鏈(例如介白素-15受體之野生型人類α鏈，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 37之序列的介白素-15受體之野生型人類α鏈)之細胞外sushi域的序列至少80%一致。在一些實施例中，細胞外sushi域與介白素-15受體之野生型α鏈(例如介白素-15受體之野生型人類α鏈，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 37之序列的介白素-15受體之野生型人類α鏈)之細胞外sushi域之序列至少95%一致。在一些實施例中，細胞外sushi域為介白素-15受體之野生型α鏈的細胞外sushi域之序列，其具有以下中之一者或兩者(i)自介白素-15受體之野生型α鏈(例如介白素-15受體之野生型人類α鏈，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 37之序列的介白素-15受體之野生型人類α鏈)之細胞外sushi域的序列之N末端移除一至五個胺基酸，及(ii)自介白素-15受體之野生型α鏈(例如介白素-15受體之野生型人類α鏈，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 37之序列的介白素-15受體之野生型人類α鏈)之細胞外sushi域的序列之C末端移除一至五個胺基酸。
在具有來自介白素-7受體之α鏈的跨膜域之嵌合跨膜蛋白之一些實施例中，該跨膜域包括來自介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域。在一些實施例中，介白素-7受體之野生型α鏈為人類介白素-7受體之野生型α鏈。在一些實施例中，人類介白素-7受體之野生型α鏈之跨膜域包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列。在一些實施例中，人類介白素-7受體之野生型α鏈之跨膜域包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，該序列具有以下修飾中之一或多者：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換；(ii)半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。代表性經修飾跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。在一些實施例中，跨膜域與介白素-7受體之野生型α鏈之跨膜域(例如介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 1之序列之人類介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域)之序列至少80%一致。在一些實施例中，跨膜域與介白素-7受體之野生型α鏈之跨膜域(例如介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 1之序列之人類介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域)之序列至少95%一致。在一些實施例中，跨膜域為介白素-7受體之野生型α鏈之跨膜域的序列，其具有以下中之一者或兩者(i)自介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域(例如介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 1之序列之人類介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域)序列之N末端移除一至三個胺基酸，及(ii)自介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域(例如介白素-7受體之野生型α鏈之跨膜域，諸如但不限於具有SEQ ID NO: 1之序列的人類介白素-7受體之野生型α鏈的跨膜域)之序列之C末端移除一至三個胺基酸。
在本文提供之嵌合跨膜蛋白之一些實施例中，嵌合跨膜蛋白進一步包括介白素-7受體的α鏈之細胞內域。在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈為介白素-7受體之野生型α鏈。在一些實施例中，介白素-7受體之野生型α鏈為介白素-7受體之野生型人類α鏈。在一些實施例中，細胞內域包括SEQ ID NO: 45之序列。在一些實施例中，細胞內域包括與介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 45)的細胞內域之序列至少80%一致之序列。在一些實施例中，細胞內域與SEQ ID NO: 45至少90%或95%一致。在一些實施例中，細胞內域為介白素-7受體之野生型α鏈的細胞內域之序列，其具有以下中之一者或兩者：(i)自介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 45)的細胞內域之序列之N末端刪除一至十個胺基酸及(ii)自介白素-7受體之野生型α鏈(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 45)的細胞內域之序列之C末端刪除一至十個胺基酸。
本發明亦提供編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的核酸。本發明亦提供包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸之載體。在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸之載體包括可操作地連接至核酸的啟動子及視情況選用之可操作地連接至核酸的強化子序列。在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸之載體包括可操作地連接至核酸的poly(A)序列。在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸之載體為慢病毒或腺病毒載體。
在一些實施例中，包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸之載體包括編碼嵌合抗原受體之序列。在一些實施例中，嵌合抗原受體特異性結合至腫瘤抗原(例如選自由以下組成之群的腫瘤抗原：磷脂肌醇蛋白聚醣-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125、CD200、CD221、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纖維結合蛋白外域-B、葉酸受體1、GD2、GD3神經節苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、類胰島素生長因子I受體、整合素α5β1、整合素ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺癌細胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGF β 2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2及波形蛋白)。在一些實施例中，嵌合抗原受體包含一或多個選自由以下組成之群之協同刺激信號傳導域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10及DAP-12。
本發明亦提供哺乳動物細胞，其包括有編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的多種核酸中之任一者或包括本文所描述之此等核酸之載體。在一些實施例中，哺乳動物細胞為免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、單核球、自然殺傷細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、調節T細胞及輔助T細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之哺乳動物細胞之子細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。
本發明亦提供包括多種載體中之任一者及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物，該等載體包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸。本發明亦提供包括多種哺乳動物細胞中之任一者的醫藥組合物，該等哺乳動物細胞包括載體，該等載體包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸。
本發明亦提供包括第一載體及第二載體之載體組，第一載體為包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸之任何載體，第二載體包括編碼嵌合抗原受體之序列。在此等載體組之一些實施例中，嵌合抗原受體特異性結合至腫瘤抗原(例如選自由以下組成之群的腫瘤抗原：磷脂肌醇蛋白聚醣-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125、CD200、CD221、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纖維結合蛋白外域-B、葉酸受體1、GD2、GD3神經節苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、類胰島素生長因子I受體、整合素α5β1、整合素ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺癌細胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGF β 2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2及波形蛋白)。在此等載體組之一些實施例中，嵌合抗原受體包含一或多個選自由以下組成之群之協同刺激信號傳導域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10及DAP-12。在此等載體組之一些實施例中，第一載體及第二載體均為慢病毒或腺病毒載體。在此等載體組之一些實施例中，第二載體進一步包括可操作地連接至編碼嵌合抗原受體之序列的啟動子及視情況選用之可操作地連接至編碼嵌合抗原受體之序列的強化子。在此等載體組之一些實施例中，第二載體進一步包含可操作地連接至編碼嵌合抗原受體的序列之poly(A)序列。
本發明亦提供包括本文所描述之多種載體組中之任一者的哺乳動物細胞，該等載體組包括第一載體及第二載體，第一載體包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸，第二載體包括編碼嵌合抗原受體之序列。在一些實施例中，哺乳動物細胞為免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、單核球、自然殺傷細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、調節T細胞及輔助T細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之哺乳動物細胞之子細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。
本發明亦提供包括本文所描述之多種載體組中之任一者(例如包括第一載體及第二載體之載體組，第一載體包括編碼本文所描述之多種嵌合跨膜蛋白中之任一者的任一核酸，第二載體包括編碼嵌合抗原受體之序列)及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。本發明亦提供包括多種哺乳動物細胞中之任一者的醫藥組合物，該等哺乳動物細胞包括此等載體組。
本發明亦提供包括本文所描述之多種醫藥組合物中之任一者(例如包括本文所描述之多種載體或載體組中之任一者的醫藥組合物)的套組。
本發明亦提供治療有需要之個體的癌症之方法，該等方法包括：投與治療有效量之本文所描述之多種哺乳動物細胞中之任一者(例如包括本文所描述之多種核酸、載體或載體組中之任一者的哺乳動物細胞)。在一些實施例中，個體為人類及哺乳動物細胞為人類。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之細胞之子細胞。
本發明亦提供減小有需要之個體之實體腫瘤的體積之方法，該等方法包括：投與治療有效量之本文所描述之多種哺乳動物細胞中之任一者(例如包括本文所描述之多種核酸、載體或載體組中之任一者的哺乳動物細胞)。在一些實施例中，個體為人類及哺乳動物細胞為人類。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之細胞之子細胞。
本發明亦提供誘導有需要之個體之癌細胞的細胞死亡之方法，該等方法包括：投與治療有效量之本文所描述的多種哺乳動物細胞中之任一者(例如包括本文所描述之多種核酸、載體或載體組中之任一者的哺乳動物細胞)。在一些實施例中，個體為人類及哺乳動物細胞為人類。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之細胞之子細胞。
本發明亦提供降低患有癌症之個體出現轉移或再轉移之風險的方法，該等方法包括：投與治療有效量之本文所描述之多種哺乳動物細胞中之任一者(例如包括本文所描述之多種核酸、載體或載體組中之任一者的哺乳動物細胞)。在一些實施例中，個體為人類及哺乳動物細胞為人類。在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體獲得或為預先自個體獲得之細胞之子細胞。
本發明亦提供活化免疫細胞中STAT5信號傳導之方法，該等方法包括將本文所描述之多種核酸中之任一者(例如編碼本文所描述之多種蛋白或嵌合跨膜蛋白中之任一者的核酸)引入免疫細胞中。在一些實施例中，免疫細胞自個體獲得。在一些實施例中，個體已鑑別為患有癌症。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、單核球、自然殺傷細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、調節T細胞及輔助T細胞。
在名詞之前使用術語「一」意謂「一或多個」特定名詞。舉例而言，片語「哺乳動物細胞」意謂「一或多個哺乳動物細胞」。在一些實例中，術語「一」可意謂單一單位之特定名詞。
術語「嵌合抗原受體」及「CAR」在本文中可互換使用且係指能夠觸發或抑制免疫細胞之活化的人工多模塊分子，免疫細胞一般但非排他地包含細胞外域(例如配位子/抗原結合域)、跨膜域及一或多個細胞內信號傳導域。CAR分子及其衍生物(例如CAR變異體)描述於例如PCT申請案第US2014/016527號；Fedorov等人，Sci Transl Med
(2013) 5(215):215ra172；Glienke等人，Front Pharmacol
(2015) 6:21；Kakarla及Gottschalk,Cancer J
(2014) 20(2):151-5；Riddell等人，Cancer J
(2014) 20(2):141-4；Pegram等人，Cancer J
(2014) 20(2):127-33；Cheadle等人，Immunol Rev
(2014) 257(1):91-106；Barrett 等人，Annu Rev Med
(2014) 65:333-47；Sadelain等人，Cancer Discov
(2013) 3(4):388-98；Cartellieri等人，J Biomed Biotechnol
(2010) 956304中；其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。CAR可為單鏈嵌合抗原受體或多鏈嵌合抗原受體。
術語「跨膜域」意謂多肽之域，當存在於在哺乳動物細胞表現的對應內源性多肽中時其包括至少一個穿過脂質雙層之連續胺基酸序列。舉例而言，當存在於在哺乳動物細胞中表現之對應內源性多肽中時跨膜域可包括一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個各自穿越脂質雙層之連續胺基酸序列。如此項技術中已知，跨膜域可例如包括至少一個(例如兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)在脂質雙層中具有α螺旋狀二級結構的連續胺基酸序列(當存在於在哺乳動物細胞中表現之對應內源性多肽中時其穿過脂質雙層)。在一些實施例中，跨膜域可包括兩個或更多個在脂質雙層中形成β-筒狀二級結構之連續胺基酸序列(當存在於在哺乳動物細胞中表現之對應內源性多肽中時其各自穿過脂質雙層)。本文描述跨膜域之非限制性實例。跨膜域之其他實例為此項技術中已知的。
術語「抗原結合域」意謂特異性結合至目標抗原之域。在一些實例中，抗原結合域可由存在於單鏈多肽內之胺基酸形成。在其他實例中，抗原結合域可由存在於第一單鏈多肽內之胺基酸及存在於一或多個其他單鏈多肽(例如第二單鏈多肽)中之胺基酸形成。本文描述抗原結合域之非限制性實例，包括但不限於scFv或生長因子之配體結合域(LBD)。抗原結合域之其他實例為此項技術中已知的。
如本文所用，術語「抗原」一般係指藉由本文所描述之抗原結合域特異性識別之結合搭配物。例示性抗原包括不同類別之分子，諸如但不限於多肽及其肽片段、小分子、脂質、碳水化合物及核酸。本文描述可特異性結合任一抗原結合域之抗原之非限制性實例。可特異性結合任一抗原結合域之抗原之其他實例為此項技術中已知的。
術語「細胞內信號傳導域」意謂來自在免疫細胞(例如T淋巴球)中表現之內源性信號傳導跨膜多肽之細胞內信號傳導域，其促進下游免疫細胞信號傳導(例如T細胞受體信號傳導)及/或免疫細胞活化(例如T細胞活化)。本文描述細胞內信號傳導域之非限制性實例。細胞內信號傳導域之其他實例為此項技術中已知的。參見例如Chen等人，Nature Reviews Immunol .
13:227-242, 2013。
術語「基於免疫受體酪胺酸之活化基序」或「ITAM」意謂包括酪胺酸之四胺基酸共同序列的胺基酸基序，該酪胺酸藉由兩個其他胺基酸與白胺酸或異白胺酸分隔(YxxL/I)。四胺基酸共同序列中之酪胺酸殘基在信號傳導路徑激酶(例如淋巴細胞信號傳導路徑激酶)之相互作用後變成磷酸化。本文描述ITAM之非限制性實例。ITAM之其他實例為此項技術中已知的。
片語「治療癌症」意謂降低患有癌症之個體的癌症症狀之數量、頻率或一或多個(例如兩個、三個、四個或五個)癌症症狀之嚴重度；降低存在於個體中之癌細胞及/或腫瘤的數量；及/或減小存在於個體中之一或多個實體腫瘤之尺寸。
如本文所用，「細胞外域」描述當多肽在哺乳動物細胞(例如人類細胞)中表現時存在於細胞外空間中之多肽(例如域)的一部分。
除非另外定義，否則本文中所用的所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域的技術人員通常所理解相同的含義。本文描述用於本發明之方法及材料；亦可使用此項技術中已知之其他適合方法及材料。材料、方法及實例僅為說明性的且並不意欲為限制性的。本文所提及之所有公開案、專利申請案、專利、序列、資料庫項目及其他參考文獻均以全文引用的方式併入。在有衝突之情況下，將以本說明書(包括定義)為準。
本發明之其他特徵及優勢將根據以下實施方式及圖式及根據申請專利範圍而顯而易見。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2018年6月22日申請之美國臨時專利申請案第62/688,810號之優先權；其全部內容以引用之方式併入本文中。
本文提供包括介白素-7受體之α鏈之跨膜域的蛋白質，其中跨膜域包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，該序列具有一或多個(例如兩個、三個或四個)以下修飾：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換；(ii)半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。代表性經修飾跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
本發明亦提供嵌合跨膜蛋白，其包括細胞外IL-15域、來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域及介白素-7受體之α鏈的跨膜域。
亦提供編碼此等一或多種嵌合跨膜蛋白中之任一者之核酸、包括此等核酸中之任一者的載體及包括此等核酸或載體中之任一者的哺乳動物細胞。本發明亦提供治療癌症之方法；誘導癌細胞的細胞死亡(例如細胞凋亡及/或壞死)之方法；及降低有需要之個體出現轉移或再轉移的風險之方法，該方法包括向個體投與本文所描述之任一哺乳動物細胞。
本文所提供之一或多種嵌合跨膜蛋白可用於在不存在外源性細胞介素支持或抗原刺激之情況下維持CAR T細胞，因此在無與長期投與細胞介素(例如可溶性重組IL-2)相關的劑量限制性毒性之情況下提供T細胞刺激作用。
下文描述本文所提供之嵌合跨膜蛋白、核酸、載體、哺乳動物細胞及方法之非限制性態樣，且其可非限制性地以任何組合形式使用。此等嵌合跨膜蛋白、核酸、載體、哺乳動物細胞及方法之其他態樣為此項技術中已知的。包括介白素 - 7 受體之 α 鏈之跨膜域的蛋白
本文提供包括介白素-7受體之α鏈之跨膜域的蛋白質，其中跨膜域包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，該序列具有一或多個(例如一個、二個、三個或四個)以下修飾：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經不同的三胺基酸序列置換(例如已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換)；(ii)一至三個(例如一個、兩個或三個)胺基酸(例如半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸)已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)一至四個(例如一個、二個、三個或四個)胺基酸(例如脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸)已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。代表性經修飾跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
在一些實施例中，跨膜域包括SEQ ID NO: 1之序列，其中SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換。在一些實施例中，跨膜域包括SEQ ID NO: 1之序列，其中半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間。在一些實施例中，跨膜域包括SEQ ID NO: 1之序列，其中脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白(例如成熟或前驅蛋白)可為例如約40個胺基酸至約800個胺基酸、約40個胺基酸至約750個胺基酸、約40個胺基酸至約700個胺基酸、約40個胺基酸至約650個胺基酸、約40個胺基酸至約600個胺基酸、約40個胺基酸至約550個胺基酸、約40個胺基酸至約500個胺基酸、約40個胺基酸至約450個胺基酸、約40個胺基酸至約400個胺基酸、約40個胺基酸至約350個胺基酸、約40個胺基酸至約300個胺基酸、約40個胺基酸至約250個胺基酸、約40個胺基酸至約200個胺基酸、約40個胺基酸至約180個胺基酸、約40個胺基酸至約160個胺基酸、約40個胺基酸至約140個胺基酸、約40個胺基酸至約120個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約800個胺基酸、約60個胺基酸至約750個胺基酸、約60個胺基酸至約700個胺基酸、約60個胺基酸至約650個胺基酸、約60個胺基酸至約600個胺基酸、約60個胺基酸至約550個胺基酸、約60個胺基酸至約500個胺基酸、約60個胺基酸至約450個胺基酸、約60個胺基酸至約400個胺基酸、約60個胺基酸至約350個胺基酸、約60個胺基酸至約300個胺基酸、約60個胺基酸至約250個胺基酸、約60個胺基酸至約200個胺基酸、約60個胺基酸至約180個胺基酸、約60個胺基酸至約160個胺基酸、約60個胺基酸至約140個胺基酸、約60個胺基酸至約120個胺基酸、約60個胺基酸至約100個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約800個胺基酸、約80個胺基酸至約750個胺基酸、約80個胺基酸至約700個胺基酸、約80個胺基酸至約650個胺基酸、約80個胺基酸至約600個胺基酸、約80個胺基酸至約550個胺基酸、約80個胺基酸至約500個胺基酸、約80個胺基酸至約450個胺基酸、約80個胺基酸至約400個胺基酸、約80個胺基酸至約350個胺基酸、約80個胺基酸至約300個胺基酸、約80個胺基酸至約250個胺基酸、約80個胺基酸至約200個胺基酸、約80個胺基酸至約180個胺基酸、約80個胺基酸至約160個胺基酸、約80個胺基酸至約140個胺基酸、約80個胺基酸至約120個胺基酸、約80個胺基酸至約100個胺基酸、約100個胺基酸至約800個胺基酸、約100個胺基酸至約750個胺基酸、約100個胺基酸至約700個胺基酸、約100個胺基酸至約650個胺基酸、約100個胺基酸至約600個胺基酸、約100個胺基酸至約550個胺基酸、約100個胺基酸至約500個胺基酸、約100個胺基酸至約450個胺基酸、約100個胺基酸至約400個胺基酸、約100個胺基酸至約350個胺基酸、約100個胺基酸至約300個胺基酸、約100個胺基酸至約250個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約180個胺基酸、約100個胺基酸至約160個胺基酸、約100個胺基酸至約140個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約120個胺基酸至約800個胺基酸、約120個胺基酸至約750個胺基酸、約120個胺基酸至約700個胺基酸、約120個胺基酸至約650個胺基酸、約120個胺基酸至約600個胺基酸、約120個胺基酸至約550個胺基酸、約120個胺基酸至約500個胺基酸、約120個胺基酸至約450個胺基酸、約120個胺基酸至約400個胺基酸、約120個胺基酸至約350個胺基酸、約120個胺基酸至約300個胺基酸、約120個胺基酸至約250個胺基酸、約120個胺基酸至約200個胺基酸、約120個胺基酸至約180個胺基酸、約120個胺基酸至約160個胺基酸、約120個胺基酸至約140個胺基酸、約140個胺基酸至約800個胺基酸、約140個胺基酸至約750個胺基酸、約140個胺基酸至約700個胺基酸、約140個胺基酸至約650個胺基酸、約140個胺基酸至約600個胺基酸、約140個胺基酸至約550個胺基酸、約140個胺基酸至約500個胺基酸、約140個胺基酸至約450個胺基酸、約140個胺基酸至約400個胺基酸、約140個胺基酸至約350個胺基酸、約140個胺基酸至約300個胺基酸、約140個胺基酸至約250個胺基酸、約140個胺基酸至約200個胺基酸、約140個胺基酸至約180個胺基酸、約140個胺基酸至約160個胺基酸、約160個胺基酸至約800個胺基酸、約160個胺基酸至約750個胺基酸、約160個胺基酸至約700個胺基酸、約160個胺基酸至約650個胺基酸、約160個胺基酸至約600個胺基酸、約160個胺基酸至約550個胺基酸、約160個胺基酸至約500個胺基酸、約160個胺基酸至約450個胺基酸、約160個胺基酸至約400個胺基酸、約160個胺基酸至約350個胺基酸、約160個胺基酸至約300個胺基酸、約160個胺基酸至約250個胺基酸、約160個胺基酸至約200個胺基酸、約160個胺基酸至約180個胺基酸、約180個胺基酸至約800個胺基酸、約180個胺基酸至約750個胺基酸、約180個胺基酸至約700個胺基酸、約180個胺基酸至約650個胺基酸、約180個胺基酸至約600個胺基酸、約180個胺基酸至約550個胺基酸、約180個胺基酸至約500個胺基酸、約180個胺基酸至約450個胺基酸、約180個胺基酸至約400個胺基酸、約180個胺基酸至約350個胺基酸、約180個胺基酸至約300個胺基酸、約180個胺基酸至約250個胺基酸、約180個胺基酸至約200個胺基酸、約200個胺基酸至約800個胺基酸、約200個胺基酸至約750個胺基酸、約200個胺基酸至約700個胺基酸、約200個胺基酸至約650個胺基酸、約200個胺基酸至約600個胺基酸、約200個胺基酸至約550個胺基酸、約200個胺基酸至約500個胺基酸、約200個胺基酸至約450個胺基酸、約200個胺基酸至約400個胺基酸、約200個胺基酸至約350個胺基酸、約200個胺基酸至約300個胺基酸、約200個胺基酸至約250個胺基酸、約250個胺基酸至約800個胺基酸、約250個胺基酸至約750個胺基酸、約250個胺基酸至約700個胺基酸、約250個胺基酸至約650個胺基酸、約250個胺基酸至約600個胺基酸、約250個胺基酸至約550個胺基酸、約250個胺基酸至約500個胺基酸、約250個胺基酸至約450個胺基酸、約250個胺基酸至約400個胺基酸、約250個胺基酸至約350個胺基酸、約250個胺基酸至約300個胺基酸、約300個胺基酸至約800個胺基酸、約300個胺基酸至約750個胺基酸、約300個胺基酸至約700個胺基酸、約300個胺基酸至約650個胺基酸、約300個胺基酸至約600個胺基酸、約300個胺基酸至約550個胺基酸、約300個胺基酸至約500個胺基酸、約300個胺基酸至約450個胺基酸、約300個胺基酸至約400個胺基酸、約300個胺基酸至約350個胺基酸、約350個胺基酸至約800個胺基酸、約350個胺基酸至約750個胺基酸、約350個胺基酸至約700個胺基酸、約350個胺基酸至約650個胺基酸、約350個胺基酸至約600個胺基酸、約350個胺基酸至約550個胺基酸、約350個胺基酸至約500個胺基酸、約350個胺基酸至約450個胺基酸、約350個胺基酸至約400個胺基酸、約400個胺基酸至約800個胺基酸、約400個胺基酸至約750個胺基酸、約400個胺基酸至約700個胺基酸、約400個胺基酸至約650個胺基酸、約400個胺基酸至約600個胺基酸、約400個胺基酸至約550個胺基酸、約400個胺基酸至約500個胺基酸、約400個胺基酸至約450個胺基酸、約450個胺基酸至約800個胺基酸、約450個胺基酸至約750個胺基酸、約450個胺基酸至約700個胺基酸、約450個胺基酸至約650個胺基酸、約450個胺基酸至約600個胺基酸、約450個胺基酸至約550個胺基酸、約450個胺基酸至約500個胺基酸、約500個胺基酸至約800個胺基酸、約500個胺基酸至約750個胺基酸、約500個胺基酸至約700個胺基酸、約500個胺基酸至約650個胺基酸、約500個胺基酸至約600個胺基酸、約500個胺基酸至約550個胺基酸、約550個胺基酸至約800個胺基酸、約550個胺基酸至約750個胺基酸、約550個胺基酸至約700個胺基酸、約550個胺基酸至約650個胺基酸、約550個胺基酸至約600個胺基酸、約600個胺基酸至約800個胺基酸、約600個胺基酸至約750個胺基酸、約600個胺基酸至約700個胺基酸、約600個胺基酸至約650個胺基酸、約650個胺基酸至約800個胺基酸、約650個胺基酸至約750個胺基酸、約650個胺基酸至約700個胺基酸、約700個胺基酸至約800個胺基酸、約700個胺基酸至約750個胺基酸或約750個胺基酸至約800個胺基酸。
在一些實施例中，蛋白包含或為SEQ ID NO: 2 (下文所展示的)。例示性蛋白 ( SEQ ID NO : 2 ) ( IL7RA EKA 蛋白 ， EKA 序列加下劃線 ) 
編碼 IL7RA EKA 之核酸 ( SEQ ID NO : 3 ， 編碼 EKA 序列之核酸序列加下劃線 ) 
在一些實施例中，蛋白包含或為與SEQ ID NO: 2至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，蛋白包括與SEQ ID NO: 2不同之處在於一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 2以外本文所提供之任一蛋白可進一步包括一或多個其他胺基酸(例如1個胺基酸至300個胺基酸、1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約300個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約300個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸或約10個胺基酸至約50個胺基酸)。另外地或可替代地，蛋白可自SEQ ID NO: 2之N末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)及/或自SEQ ID NO: 2之C末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)。
在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 3至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 3不同之處在於一至六十個核苷酸(例如1至60個核苷酸、1至55個核苷酸、1至50個核苷酸、1至45個核苷酸、1至40個核苷酸、1至35個核苷酸、1至30個核苷酸、1至25個核苷酸、1至20個核苷酸、1至15個核苷酸、1至10個核苷酸或1至5個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 3以外編碼蛋白之核酸可進一步包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 3之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 3之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
在一些實施例中，蛋白包含或為SEQ ID NO: 4 (下文所展示的)。例示性蛋白 ( SEQ ID NO : 4 ) ( IL7RA EKV 蛋白 ， EKV 序列加下劃線 ) 
編碼 IL7RA EKV 之核酸 ( SEQ ID NO : 5 ， 編碼 EKV 序列之核酸序列加下劃線 ) 
在一些實施例中，蛋白包含或為與SEQ ID NO: 4至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，蛋白包括與SEQ ID NO: 4不同之處在於一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 4以外本文所提供之任一蛋白可進一步包括一或多個其他胺基酸(例如1個胺基酸至300個胺基酸、1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約300個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約300個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸或約10個胺基酸至約50個胺基酸)。另外地或可替代地，蛋白可自SEQ ID NO: 4之N末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)及/或自SEQ ID NO: 4之C末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)。
在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 5至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 5不同之處在於一至六十個核苷酸(例如1至60個核苷酸、1至55個核苷酸、1至50個核苷酸、1至45個核苷酸、1至40個核苷酸、1至35個核苷酸、1至30個核苷酸、1至25個核苷酸、1至20個核苷酸、1至15個核苷酸、1至10個核苷酸或1至5個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 5以外編碼蛋白之核酸可進一步包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 5之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 5之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
在一些實施例中，蛋白包含或為SEQ ID NO: 6 (下文所展示的)。例示性蛋白 ( SEQ ID NO : 6 ) ( IL7RA CPT 插入片段蛋白 ， CPT 序列加下劃線 ) 
編碼 IL7RA CPT 插入片段之核酸 ( SEQ ID NO : 7 ， 編碼 CPT 序列之核酸序列加下劃線 ) 
在一些實施例中，蛋白包含或為與SEQ ID NO: 6至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，蛋白包括與SEQ ID NO: 6不同之處在於一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 6以外本文所提供之任一蛋白可進一步包括一或多個其他胺基酸(例如1個胺基酸至300個胺基酸、1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約300個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約300個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸或約10個胺基酸至約50個胺基酸)。另外地或可替代地，蛋白可自SEQ ID NO: 6之N末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)及/或自SEQ ID NO: 6之C末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)。
在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 7至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 7不同之處在於一至六十個核苷酸(例如1至60個核苷酸、1至55個核苷酸、1至50個核苷酸、1至45個核苷酸、1至40個核苷酸、1至35個核苷酸、1至30個核苷酸、1至25個核苷酸、1至20個核苷酸、1至15個核苷酸、1至10個核苷酸或1至5個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 7以外編碼蛋白之核酸可進一步包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 7之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 7之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
在一些實施例中，蛋白包含或為SEQ ID NO: 8 (下文所展示的)。例示性蛋白 ( SEQ ID NO : 8 ) ( IL7RA PPCL 插入片段蛋白 ， PPCL 序列加下劃線 ) 
編碼 IL7RA PPCL 插入片段之核酸 ( SEQ ID NO : 9 ， 編碼 PPCL 序列之核酸序列加下劃線 ) 
在一些實施例中，蛋白包含或為與SEQ ID NO: 8至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，蛋白包括與SEQ ID NO: 8不同之處在於一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 8以外本文所提供之任一蛋白可進一步包括一或多個其他胺基酸(例如1個胺基酸至300個胺基酸、1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約300個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約300個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸或約10個胺基酸至約50個胺基酸)。另外地或可替代地，蛋白可自SEQ ID NO: 8之N末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)及/或自SEQ ID NO: 8之C末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)。
在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 9至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 9不同之處在於一至六十個核苷酸(例如1至60個核苷酸、1至55個核苷酸、1至50個核苷酸、1至45個核苷酸、1至40個核苷酸、1至35個核苷酸、1至30個核苷酸、1至25個核苷酸、1至20個核苷酸、1至15個核苷酸、1至10個核苷酸或1至5個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 9以外編碼蛋白之核酸可進一步包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 9之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 9之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
在一些實施例中，蛋白包含或為SEQ ID NO: 79 (下文所展示的)。例示性蛋白 ( SEQ ID NO : 79 ) ( IL7RA MCP 插入片段蛋白 ， MCP 序列加下劃線 ) 
編碼 IL7RA MCP 插入片段之核酸 ( SEQ ID NO : 80 ， 編碼 MCP 序列之核酸序列加下劃線 ) 
在一些實施例中，蛋白包含或為與SEQ ID NO: 79至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，蛋白包括與SEQ ID NO: 79不同之處在於一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 79以外本文所提供之任一蛋白可進一步包括一或多個其他胺基酸(例如1個胺基酸至300個胺基酸、1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約300個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約300個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸或約10個胺基酸至約50個胺基酸)。另外地或可替代地，蛋白可自SEQ ID NO: 79之N末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)及/或自SEQ ID NO: 79之C末端缺少一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)。
在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 80至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 80不同之處在於一至六十個核苷酸(例如1至60個核苷酸、1至55個核苷酸、1至50個核苷酸、1至45個核苷酸、1至40個核苷酸、1至35個核苷酸、1至30個核苷酸、1至25個核苷酸、1至20個核苷酸、1至15個核苷酸、1至10個核苷酸或1至5個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 80以外編碼蛋白之核酸可進一步包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 80之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 80之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
本文所描述之任一蛋白之一些實施例可進一步包括介白素-7受體之α鏈之細胞內域(例如本文所描述或此項技術中已知的介白素-7受體之α鏈的例示性細胞內域中之任一者)。
本文所描述之任一蛋白之一些實施例可進一步包括介白素-7受體之α鏈之細胞外域(例如本文所描述或此項技術中已知的介白素-7受體之α鏈的例示性細胞外域中之任一者)。
本文所描述之任一蛋白之一些實施例可進一步包括位於介白素-7受體之α鏈的跨膜域與介白素-7受體之α鏈之細胞外域(例如本文所描述或此項技術中已知之介白素-7受體之α鏈的例示性細胞外域中之任一者)之間的連接子序列(例如本文所描述或此項技術中已知之任一例示性連接子序列)。
本文所描述之任一蛋白之一些實施例可進一步包括位於介白素-7受體之α鏈的跨膜域與介白素-7受體之α鏈的細胞內域(例如本文所描述或此項技術中已知之介白素-7受體之α鏈的例示性細胞內域中之任一者)之間的其他連接子序列(例如本文所描述或此項技術中已知之任一例示性其他連接子序列)。
在一些實施例中，該蛋白質進一步包含在其N末端處之訊號序列。在一些實施例中，訊號序列包含或為序列MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (SEQ ID NO: 10)。在一些實施例中，編碼訊號序列之核酸包含或為序列atgctcctgctcgtgacttcacttcttctctgtgaactcccacaccccgcgtttttgcttatccct (SEQ ID NO: 81)。訊號序列之其他實例為此項技術中已知的。舉例而言，訊號序列長度可為約5個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約28個胺基酸、約5個胺基酸至約26個胺基酸、約5個胺基酸至約24個胺基酸、約5個胺基酸至約22個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約18個胺基酸、約5個胺基酸至約16個胺基酸、約5個胺基酸至約14個胺基酸、約5個胺基酸至約12個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約5個胺基酸至約8個胺基酸、約6個胺基酸至約30個胺基酸、約6個胺基酸至約28個胺基酸、約6個胺基酸至約26個胺基酸、約6個胺基酸至約24個胺基酸、約6個胺基酸至約22個胺基酸、約6個胺基酸至約20個胺基酸、約6個胺基酸至約18個胺基酸、約6個胺基酸至約16個胺基酸、約6個胺基酸至約14個胺基酸、約6個胺基酸至約12個胺基酸、約6個胺基酸至約10個胺基酸、約6個胺基酸至約8個胺基酸、約8個胺基酸至約30個胺基酸、約8個胺基酸至約28個胺基酸、約8個胺基酸至約26個胺基酸、約8個胺基酸至約24個胺基酸、約8個胺基酸至約22個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約18個胺基酸、約8個胺基酸至約16個胺基酸、約8個胺基酸至約14個胺基酸、約8個胺基酸至約12個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約28個胺基酸、約10個胺基酸至約26個胺基酸、約10個胺基酸至約24個胺基酸、約10個胺基酸至約22個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約18個胺基酸、約10個胺基酸至約16個胺基酸、約10個胺基酸至約14個胺基酸、約10個胺基酸至約12個胺基酸、約12個胺基酸至約30個胺基酸、約12個胺基酸至約28個胺基酸、約12個胺基酸至約26個胺基酸、約12個胺基酸至約24個胺基酸、約12個胺基酸至約22個胺基酸、約12個胺基酸至約20個胺基酸、約12個胺基酸至約18個胺基酸、約12個胺基酸至約16個胺基酸、約12個胺基酸至約14個胺基酸、約14個胺基酸至約30個胺基酸、約14個胺基酸至約28個胺基酸、約14個胺基酸至約26個胺基酸、約14個胺基酸至約24個胺基酸、約14個胺基酸至約22個胺基酸、約14個胺基酸至約20個胺基酸、約14個胺基酸至約18個胺基酸、約14個胺基酸至約16個胺基酸、約16個胺基酸至約30個胺基酸、約16個胺基酸至約28個胺基酸、約16個胺基酸至約26個胺基酸、約16個胺基酸至約24個胺基酸、約16個胺基酸至約22個胺基酸、約16個胺基酸至約20個胺基酸、約16個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約30個胺基酸、約18個胺基酸至約28個胺基酸、約18個胺基酸至約26個胺基酸、約18個胺基酸至約24個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約28個胺基酸、約20個胺基酸至約26個胺基酸、約20個胺基酸至約24個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約30個胺基酸、約22個胺基酸至約28個胺基酸、約22個胺基酸至約26個胺基酸、約22個胺基酸至約24個胺基酸、約24個胺基酸至約30個胺基酸、約24個胺基酸至約28個胺基酸、約24個胺基酸至約26個胺基酸、約26個胺基酸至約30個胺基酸、約26個胺基酸至約28個胺基酸或約28個胺基酸至約30個胺基酸。
在一些實施例中，蛋白可進一步包括肽標籤。舉例而言，標籤可用於幫助促進嵌合跨膜蛋白之純化、生產及/或鑑別。在一些實施例中，標籤為包含至少六個組胺酸殘基之組胺酸標籤。標記之其他實例為此項技術中已知的。
下文描述本文所提供之任一蛋白之非限制性態樣。介白素 - 7 受體之 α 鏈的細胞外域
本文所描述之蛋白之一些實施例可進一步包括介白素-7受體之α鏈的細胞外域(例如本文所描述之介白素-7受體之α鏈的例示性域中之任一者)。舉例而言，本文所描述之蛋白可包括來自人類、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、豬、狗、貓或任何其他適當物種之介白素-7受體之野生型α鏈的細胞外域。下文描述介白素-7受體之野生型α鏈的細胞外域之非限制性實例。介白素-7受體之野生型α鏈的細胞外域之其他實例為此項技術中已知的。
在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈之細胞外域為或包含介白素-7受體之野生型α鏈的細胞外域。舉例而言，介白素-7受體之α鏈的細胞外域包含或為介白素-7受體之野生型人類α鏈之細胞外域(例如SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 15)。介白素 - 7 受體之野生型人類 α 鏈之例示性細胞外域 ( SEQ ID NO : 11 ) 
編碼介白素 - 7 受體之 α 鏈的野生型人類細胞外域之核酸 ( SEQ ID NO : 12 ) 
在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈之細胞外域包含或為與介白素-7受體之野生型α鏈的細胞外域之序列(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈的細胞外域之序列，例如SEQ ID NO: 11)至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈的細胞外域包括與SEQ ID NO: 11不同之處在於一至四十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 11以外介白素-7受體之α鏈的細胞外域可進一步包括一至約250個其他胺基酸(例如1至約200個胺基酸、1至約150個胺基酸、1至約100個胺基酸、1至約50個胺基酸、約5至約250個胺基酸、約5至約200個胺基酸、約5至約150個胺基酸、約5至約100個胺基酸、約5至約50個胺基酸、約10至約250個胺基酸、約10至約200個胺基酸、約10至約150個胺基酸、約10至約100個胺基酸或約10至約50個胺基酸)。另外地或可替代地，介白素-7受體之α鏈的細胞外域為介白素-7受體之野生型α鏈之細胞外域的序列(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈之細胞外域的序列，例如SEQ ID NO: 11)，其具有以下中之一者或兩者：自介白素-7受體之野生型α鏈之細胞外域的序列之N末端刪除一至十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)及(ii)自介白素-7受體之野生型α鏈之細胞外域的序列之C末端刪除一至十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)。
在一些實施例中，編碼介白素-7受體之α鏈的細胞外域之核酸包含或為與SEQ ID NO: 12至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼介白素-7受體之α鏈的細胞外域之核酸包括與SEQ ID NO: 12不同之處在於一至六十個核苷酸(例如1至55個核苷酸、1至50個核苷酸、1至45個核苷酸、1至40個核苷酸、1至35個核苷酸、1至30個核苷酸、1至25個核苷酸、1至20個核苷酸、1至15個核苷酸、1至10個核苷酸或1至5個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 12以外編碼介白素-7受體之α鏈的細胞外域之核酸可進一步包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼介白素-7受體之α鏈的細胞外域之核酸可自SEQ ID NO: 12之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 12之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
介白素-7受體之野生型α鏈之其他例示性細胞外域提供於下文中。介白素 - 7 受體同功異型物 1 之 α 鏈的例示性野生型小鼠細胞外域 ( SEQ ID NO : 13 ) 
編碼介白素 - 7 受體同功異型物 1 之 α 鏈的野生型小鼠細胞外域之核酸 ( SEQ ID NO : 14 ) 
介白素 - 7 受體同功異型物 2 之 α 鏈的例示性野生型小鼠細胞外域 ( SEQ ID NO : 15 ) 
編碼介白素 - 7 受體變異體 2 之 α 鏈的野生型小鼠細胞外域之核酸 ( SEQ ID NO : 16 ) 
在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈的細胞外域為介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列(例如介白素-7受體之α鏈的成熟野生型細胞外域，例如本文所描述之介白素-7受體之α鏈的成熟野生型細胞外域中之任一者，例如SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 15)，其自介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列之N末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈的細胞外域為介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列(例如介白素-7受體之α鏈的成熟野生型細胞外域，例如本文所描述之介白素-7受體之α鏈的成熟野生型細胞外域中之任一者，例如SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 15)，其自介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列之C末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈的細胞外域為介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列(例如介白素-7受體之α鏈的成熟野生型細胞外域，例如本文所描述之介白素-7受體之α鏈的成熟野生型細胞外域中之任一者，例如SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 15)，其自介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列之N末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸且自介白素-7受體之α鏈的野生型細胞外域之序列之C末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。
如由一般熟習此項技術者瞭解，當編碼介白素-7受體之α鏈的細胞外域之核酸與SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 16相比，包括或缺乏一或多個其他核苷酸時，應仍然維持轉譯讀碼框，因此不會引入無義密碼子，且可轉譯所有蛋白質(例如編碼介白素-7受體之α鏈的細胞外域之核酸可包括或缺少三個核苷酸，或其倍數)。
如熟習此項技術者咸理解，當來自不同物種之介白素-7受體之α鏈的細胞外域之間之非保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其不太可能引起介白素-7受體之α鏈的細胞外域之一或多種活性程度降低。反之，當來自不同物種之介白素-7受體之α鏈的細胞外域之間之保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其更可能引起介白素-7受體之α鏈的細胞外域之一或多種活性程度降低。鑒於此知識，熟習此項技術者可在介白素-7受體之α鏈的細胞外域中選擇可經取代但不會降低介白素-7受體之α鏈的細胞外域之活性之胺基酸位置(例如非保守胺基酸)。嵌合跨膜蛋白
本文提供嵌合跨膜蛋白，其包括細胞外IL-15域(例如本文所描述或此項技術中已知之任一例示性細胞外IL-15域)、來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域(例如本文所描述或此項技術中已知之來自介白素-15受體之α鏈的例示性細胞外sushi域中任一者之一或多者)及介白素-7受體之α鏈的跨膜域(例如本文所描述或此項技術中已知之介白素-7受體之α鏈的例示性跨膜域中之任一者)。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含位於細胞外IL-15域與來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域之間之連接子序列(例如本文所描述或此項技術中已知的任一例示性連接子序列)。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白進一步包含位於來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域與介白素-7受體之α鏈的跨膜域之間之其他連接子(例如本文所描述或此項技術中已知的任一例示性連接子序列)。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白可進一步包括介白素-7受體之α鏈的細胞內域(例如本文所描述或此項技術中已知之介白素-7受體之α鏈的例示性細胞內域中之任一者)。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含或為SEQ ID NO: 17 (下文所展示的)。例示性嵌合跨膜蛋白 ( SEQ ID NO : 17 ) 
編碼嵌合跨膜蛋白之核酸 ( SEQ ID NO : 18 ) 
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含或為與SEQ ID NO: 17至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包括與SEQ ID NO: 17不同之處在於一至約100個胺基酸(例如1至約95個胺基酸、1至約90個胺基酸、1至約80個胺基酸、1至約75個胺基酸、1至約70個胺基酸、1至約65個胺基酸、1至約60個胺基酸、1至約55個胺基酸、1至約50個胺基酸、1至約45個胺基酸、1至約40個胺基酸、1至約35個胺基酸、1至約30個胺基酸、1至約25個胺基酸、1至約20個胺基酸、1至約15個胺基酸、1至約10個胺基酸、1至約5個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約95個胺基酸、約5個胺基酸至約90個胺基酸、約5個胺基酸至約85個胺基酸、約5個胺基酸至約80個胺基酸、約5個胺基酸至約75個胺基酸、約5個胺基酸至約70個胺基酸、約5個胺基酸至約65個胺基酸、約5個胺基酸至約60個胺基酸、約5個胺基酸至約55個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約45個胺基酸、約5個胺基酸至約40個胺基酸、約5個胺基酸至約35個胺基酸、約5個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸或約5個胺基酸至約10個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 17之序列以外嵌合跨膜蛋白包括1至約300個其他胺基酸(例如1至約250個胺基酸、1至約200個胺基酸、1至約150個胺基酸、1至約100個胺基酸、1至約50個胺基酸、1至約25個胺基酸、約5至約300個胺基酸、約5至約250個胺基酸、約5至約200個胺基酸、約5至約150個胺基酸、約5至約100個胺基酸、約5至約50個胺基酸、約10至約300個胺基酸、約10至約250個胺基酸、約10至約200個胺基酸、約10至約150個胺基酸、約10至約100個胺基酸或約10至約50個胺基酸)。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含SEQ ID NO: 17之序列，其自SEQ ID NO: 17之N末端移除一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)及/或自SEQ ID NO: 17之C末端移除一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)。
在一些實施例中，編碼嵌合跨膜蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 18至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼嵌合跨膜蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 18不同之處在於1至約300個核苷酸(例如1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸、1至約50個核苷酸、約5個核苷酸至約300個核苷酸、約5個核苷酸至約250個核苷酸、約5個核苷酸至約200個核苷酸、約5個核苷酸至約150個核苷酸、約5個核苷酸至約100個核苷酸、約5個核苷酸至約50個核苷酸、約10個核苷酸至約300個核苷酸、約10個核苷酸至約250個核苷酸、約10個核苷酸至約200個核苷酸、約10個核苷酸至約150個核苷酸、約10個核苷酸至約100個核苷酸或約10個核苷酸至約50個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 18以外編碼嵌合跨膜蛋白之核酸包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼嵌合跨膜蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 18之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 18之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含或為SEQ ID NO: 19、83、85、87或89中之一者(下文所展示的)。例示性嵌合跨膜蛋白 ( SEQ ID NO : 19 ) 
編碼例示性嵌合跨膜蛋白之核酸 ( SEQ ID NO : 20 ) 
例示性嵌合跨膜蛋白 ( SEQ ID NO : 83 ) 
編碼例示性嵌合跨膜蛋白之核酸 ( SEQ ID NO : 84 ) 
例示性嵌合跨膜蛋白 ( SEQ ID NO : 85 ) 
編碼例示性嵌合跨膜蛋白之核酸 ( SEQ ID NO : 86 ) 
例示性嵌合跨膜蛋白 ( SEQ ID NO : 87 ) 
編碼例示性嵌合跨膜蛋白之核酸 ( SEQ ID NO : 88 ) 
例示性嵌合跨膜蛋白 ( SEQ ID NO : 89 ) 
編碼例示性嵌合跨膜蛋白之核酸 ( SEQ ID NO : 90 ) 
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含或為與SEQ ID NO: 19、83、85、87或89至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包括與SEQ ID NO: 19、83、85、87或89不同之處在於一至約100個胺基酸(例如1至約95個胺基酸、1至約90個胺基酸、1至約80個胺基酸、1至約75個胺基酸、1至約70個胺基酸、1至約65個胺基酸、1至約60個胺基酸、1至約55個胺基酸、1至約50個胺基酸、1至約45個胺基酸、1至約40個胺基酸、1至約35個胺基酸、1至約30個胺基酸、1至約25個胺基酸、1至約20個胺基酸、1至約15個胺基酸、1至約10個胺基酸、1至約5個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約95個胺基酸、約5個胺基酸至約90個胺基酸、約5個胺基酸至約85個胺基酸、約5個胺基酸至約80個胺基酸、約5個胺基酸至約75個胺基酸、約5個胺基酸至約70個胺基酸、約5個胺基酸至約65個胺基酸、約5個胺基酸至約60個胺基酸、約5個胺基酸至約55個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約45個胺基酸、約5個胺基酸至約40個胺基酸、約5個胺基酸至約35個胺基酸、約5個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸或約5個胺基酸至約10個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 19、83、85、87或89之序列以外嵌合跨膜蛋白包括1至約300個其他胺基酸(例如1至約250個胺基酸、1至約200個胺基酸、1至約150個胺基酸、1至約100個胺基酸、1至約50個胺基酸、1至約25個胺基酸、約5至約300個胺基酸、約5至約250個胺基酸、約5至約200個胺基酸、約5至約150個胺基酸、約5至約100個胺基酸、約5至約50個胺基酸、約10至約300個胺基酸、約10至約250個胺基酸、約10至約200個胺基酸、約10至約150個胺基酸、約10至約100個胺基酸或約10至約50個胺基酸)。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含SEQ ID NO: 19、83、85、87或89之序列，其自SEQ ID NO: 19、83、85、87或89之N末端移除一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)及/或自SEQ ID NO: 19、83、85、87或89之C末端移除一至二十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)。
在一些實施例中，編碼嵌合跨膜蛋白之核酸包含或為與SEQ ID NO: 20、84、86、88或90至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼嵌合跨膜蛋白之核酸包括與SEQ ID NO: 20、84、86、88或90不同之處在於1至約300個核苷酸(例如1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸、1至約50個核苷酸、約5個核苷酸至約300個核苷酸、約5個核苷酸至約250個核苷酸、約5個核苷酸至約200個核苷酸、約5個核苷酸至約150個核苷酸、約5個核苷酸至約100個核苷酸、約5個核苷酸至約50個核苷酸、約10個核苷酸至約300個核苷酸、約10個核苷酸至約250個核苷酸、約10個核苷酸至約200個核苷酸、約10個核苷酸至約150個核苷酸、約10個核苷酸至約100個核苷酸或約10個核苷酸至約50個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 20、84、86、88或90以外編碼嵌合跨膜蛋白之核酸包括一或多個其他核苷酸(例如1至約900個核苷酸、1至約850個核苷酸、1至約800個核苷酸、1至約750個核苷酸、1至約700個核苷酸、1至約650個核苷酸、1至約600個核苷酸、1至約550個核苷酸、1至約500個核苷酸、1至約450個核苷酸、1至約400個核苷酸、1至約350個核苷酸、1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸或1至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼嵌合跨膜蛋白之核酸可自SEQ ID NO: 20、84、86、88或90之5'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 20、84、86、88或90之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白(例如成熟或前驅蛋白)長度可為約210個胺基酸至約650個胺基酸、約210個胺基酸至約640個胺基酸、約210個胺基酸至約620個胺基酸、約210個胺基酸至約600個胺基酸、約210個胺基酸至約580個胺基酸、約210個胺基酸至約560個胺基酸、約210個胺基酸至約540個胺基酸、約210個胺基酸至約520個胺基酸、約210個胺基酸至約500個胺基酸、約210個胺基酸至約480個胺基酸、約210個胺基酸至約460個胺基酸、約210個胺基酸至約440個胺基酸、約210個胺基酸至約420個胺基酸、約210個胺基酸至約400個胺基酸、約210個胺基酸至約380個胺基酸、約210個胺基酸至約360個胺基酸、約210個胺基酸至約340個胺基酸、約210個胺基酸至約320個胺基酸、約210個胺基酸至約300個胺基酸、約210個胺基酸至約280個胺基酸、約210個胺基酸至約260個胺基酸、約210個胺基酸至約240個胺基酸、約220個胺基酸至約650個胺基酸、約220個胺基酸至約640個胺基酸、約220個胺基酸至約620個胺基酸、約220個胺基酸至約600個胺基酸、約220個胺基酸至約580個胺基酸、約220個胺基酸至約560個胺基酸、約220個胺基酸至約540個胺基酸、約220個胺基酸至約520個胺基酸、約220個胺基酸至約500個胺基酸、約220個胺基酸至約480個胺基酸、約220個胺基酸至約460個胺基酸、約220個胺基酸至約440個胺基酸、約220個胺基酸至約420個胺基酸、約220個胺基酸至約400個胺基酸、約220個胺基酸至約380個胺基酸、約220個胺基酸至約360個胺基酸、約220個胺基酸至約340個胺基酸、約220個胺基酸至約320個胺基酸、約220個胺基酸至約300個胺基酸、約220個胺基酸至約280個胺基酸、約220個胺基酸至約260個胺基酸、約220個胺基酸至約240個胺基酸、約240個胺基酸至約650個胺基酸、約240個胺基酸至約640個胺基酸、約240個胺基酸至約620個胺基酸、約240個胺基酸至約600個胺基酸、約240個胺基酸至約580個胺基酸、約240個胺基酸至約560個胺基酸、約240個胺基酸至約540個胺基酸、約240個胺基酸至約520個胺基酸、約240個胺基酸至約500個胺基酸、約240個胺基酸至約480個胺基酸、約240個胺基酸至約460個胺基酸、約240個胺基酸至約440個胺基酸、約240個胺基酸至約420個胺基酸、約240個胺基酸至約400個胺基酸、約240個胺基酸至約380個胺基酸、約240個胺基酸至約360個胺基酸、約240個胺基酸至約340個胺基酸、約240個胺基酸至約320個胺基酸、約240個胺基酸至約300個胺基酸、約240個胺基酸至約280個胺基酸、約240個胺基酸至約260個胺基酸、約260個胺基酸至約650個胺基酸、約260個胺基酸至約640個胺基酸、約260個胺基酸至約620個胺基酸、約260個胺基酸至約600個胺基酸、約260個胺基酸至約580個胺基酸、約260個胺基酸至約560個胺基酸、約260個胺基酸至約540個胺基酸、約260個胺基酸至約520個胺基酸、約260個胺基酸至約500個胺基酸、約260個胺基酸至約480個胺基酸、約260個胺基酸至約460個胺基酸、約260個胺基酸至約440個胺基酸、約260個胺基酸至約420個胺基酸、約260個胺基酸至約400個胺基酸、約260個胺基酸至約380個胺基酸、約260個胺基酸至約360個胺基酸、約260個胺基酸至約340個胺基酸、約260個胺基酸至約320個胺基酸、約260個胺基酸至約300個胺基酸、約260個胺基酸至約280個胺基酸、約280個胺基酸至約650個胺基酸、約280個胺基酸至約640個胺基酸、約280個胺基酸至約620個胺基酸、約280個胺基酸至約600個胺基酸、約280個胺基酸至約580個胺基酸、約280個胺基酸至約560個胺基酸、約280個胺基酸至約540個胺基酸、約280個胺基酸至約520個胺基酸、約280個胺基酸至約500個胺基酸、約280個胺基酸至約480個胺基酸、約280個胺基酸至約460個胺基酸、約280個胺基酸至約440個胺基酸、約280個胺基酸至約420個胺基酸、約280個胺基酸至約400個胺基酸、約280個胺基酸至約380個胺基酸、約280個胺基酸至約360個胺基酸、約280個胺基酸至約340個胺基酸、約280個胺基酸至約320個胺基酸、約280個胺基酸至約300個胺基酸、約300個胺基酸至約650個胺基酸、約300個胺基酸至約640個胺基酸、約300個胺基酸至約620個胺基酸、約300個胺基酸至約600個胺基酸、約300個胺基酸至約580個胺基酸、約300個胺基酸至約560個胺基酸、約300個胺基酸至約540個胺基酸、約300個胺基酸至約520個胺基酸、約300個胺基酸至約500個胺基酸、約300個胺基酸至約480個胺基酸、約300個胺基酸至約460個胺基酸、約300個胺基酸至約440個胺基酸、約300個胺基酸至約420個胺基酸、約300個胺基酸至約400個胺基酸、約300個胺基酸至約380個胺基酸、約300個胺基酸至約360個胺基酸、約300個胺基酸至約340個胺基酸、約300個胺基酸至約320個胺基酸、約320個胺基酸至約650個胺基酸、約320個胺基酸至約640個胺基酸、約320個胺基酸至約620個胺基酸、約320個胺基酸至約600個胺基酸、約320個胺基酸至約580個胺基酸、約320個胺基酸至約560個胺基酸、約320個胺基酸至約540個胺基酸、約320個胺基酸至約520個胺基酸、約320個胺基酸至約500個胺基酸、約320個胺基酸至約480個胺基酸、約320個胺基酸至約460個胺基酸、約320個胺基酸至約440個胺基酸、約320個胺基酸至約420個胺基酸、約320個胺基酸至約400個胺基酸、約320個胺基酸至約380個胺基酸、約320個胺基酸至約360個胺基酸、約320個胺基酸至約340個胺基酸、約340個胺基酸至約650個胺基酸、約340個胺基酸至約640個胺基酸、約340個胺基酸至約620個胺基酸、約340個胺基酸至約600個胺基酸、約340個胺基酸至約580個胺基酸、約340個胺基酸至約560個胺基酸、約340個胺基酸至約540個胺基酸、約340個胺基酸至約520個胺基酸、約340個胺基酸至約500個胺基酸、約340個胺基酸至約480個胺基酸、約340個胺基酸至約460個胺基酸、約340個胺基酸至約440個胺基酸、約340個胺基酸至約420個胺基酸、約340個胺基酸至約400個胺基酸、約340個胺基酸至約380個胺基酸、約340個胺基酸至約360個胺基酸、約360個胺基酸至約650個胺基酸、約360個胺基酸至約640個胺基酸、約360個胺基酸至約620個胺基酸、約360個胺基酸至約600個胺基酸、約360個胺基酸至約580個胺基酸、約360個胺基酸至約560個胺基酸、約360個胺基酸至約540個胺基酸、約360個胺基酸至約520個胺基酸、約360個胺基酸至約500個胺基酸、約360個胺基酸至約480個胺基酸、約360個胺基酸至約460個胺基酸、約360個胺基酸至約440個胺基酸、約360個胺基酸至約420個胺基酸、約360個胺基酸至約400個胺基酸、約360個胺基酸至約380個胺基酸、約380個胺基酸至約650個胺基酸、約380個胺基酸至約640個胺基酸、約380個胺基酸至約620個胺基酸、約380個胺基酸至約600個胺基酸、約380個胺基酸至約580個胺基酸、約380個胺基酸至約560個胺基酸、約380個胺基酸至約540個胺基酸、約380個胺基酸至約520個胺基酸、約380個胺基酸至約500個胺基酸、約380個胺基酸至約480個胺基酸、約380個胺基酸至約460個胺基酸、約380個胺基酸至約440個胺基酸、約380個胺基酸至約420個胺基酸、約380個胺基酸至約400個胺基酸、約400個胺基酸至約650個胺基酸、約400個胺基酸至約640個胺基酸、約400個胺基酸至約620個胺基酸、約400個胺基酸至約600個胺基酸、約400個胺基酸至約580個胺基酸、約400個胺基酸至約560個胺基酸、約400個胺基酸至約540個胺基酸、約400個胺基酸至約520個胺基酸、約400個胺基酸至約500個胺基酸、約400個胺基酸至約480個胺基酸、約400個胺基酸至約460個胺基酸、約400個胺基酸至約440個胺基酸、約400個胺基酸至約420個胺基酸、約420個胺基酸至約650個胺基酸、約420個胺基酸至約640個胺基酸、約420個胺基酸至約620個胺基酸、約420個胺基酸至約600個胺基酸、約420個胺基酸至約580個胺基酸、約420個胺基酸至約560個胺基酸、約420個胺基酸至約540個胺基酸、約420個胺基酸至約520個胺基酸、約420個胺基酸至約500個胺基酸、約420個胺基酸至約480個胺基酸、約420個胺基酸至約460個胺基酸、約420個胺基酸至約440個胺基酸、約440個胺基酸至約650個胺基酸、約440個胺基酸至約640個胺基酸、約440個胺基酸至約620個胺基酸、約440個胺基酸至約600個胺基酸、約440個胺基酸至約580個胺基酸、約440個胺基酸至約560個胺基酸、約440個胺基酸至約540個胺基酸、約440個胺基酸至約520個胺基酸、約440個胺基酸至約500個胺基酸、約440個胺基酸至約480個胺基酸、約440個胺基酸至約460個胺基酸、約460個胺基酸至約650個胺基酸、約460個胺基酸至約640個胺基酸、約460個胺基酸至約620個胺基酸、約460個胺基酸至約600個胺基酸、約460個胺基酸至約580個胺基酸、約460個胺基酸至約560個胺基酸、約460個胺基酸至約540個胺基酸、約460個胺基酸至約520個胺基酸、約460個胺基酸至約500個胺基酸、約460個胺基酸至約480個胺基酸、約480個胺基酸至約650個胺基酸、約480個胺基酸至約640個胺基酸、約480個胺基酸至約620個胺基酸、約480個胺基酸至約600個胺基酸、約480個胺基酸至約580個胺基酸、約480個胺基酸至約560個胺基酸、約480個胺基酸至約540個胺基酸、約480個胺基酸至約520個胺基酸、約480個胺基酸至約500個胺基酸、約500個胺基酸至約650個胺基酸、約500個胺基酸至約640個胺基酸、約500個胺基酸至約620個胺基酸、約500個胺基酸至約600個胺基酸、約500個胺基酸至約580個胺基酸、約500個胺基酸至約560個胺基酸、約500個胺基酸至約540個胺基酸、約500個胺基酸至約520個胺基酸、約520個胺基酸至約650個胺基酸、約520個胺基酸至約640個胺基酸、約520個胺基酸至約620個胺基酸、約520個胺基酸至約600個胺基酸、約520個胺基酸至約580個胺基酸、約520個胺基酸至約560個胺基酸、約520個胺基酸至約540個胺基酸、約540個胺基酸至約650個胺基酸、約540個胺基酸至約640個胺基酸、約540個胺基酸至約620個胺基酸、約540個胺基酸至約600個胺基酸、約540個胺基酸至約580個胺基酸、約540個胺基酸至約560個胺基酸、約560個胺基酸至約650個胺基酸、約560個胺基酸至約640個胺基酸、約560個胺基酸至約620個胺基酸、約560個胺基酸至約600個胺基酸、約560個胺基酸至約580個胺基酸、約580個胺基酸至約650個胺基酸、約580個胺基酸至約640個胺基酸、約580個胺基酸至約620個胺基酸、約580個胺基酸至約600個胺基酸、約600個胺基酸至約650個胺基酸、約600個胺基酸至約640個胺基酸、約600個胺基酸至約620個胺基酸、約620個胺基酸至約650個胺基酸、約620個胺基酸至約640個胺基酸或約630個胺基酸至約650個胺基酸。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白在其N末端進一步包含訊號序列。在一些實施例中，訊號序列包含或為MDWTWILFLVAAATRVHS (SEQ ID NO: 21)之序列。在一些實施例中，編碼訊號序列之核酸包含或為序列atggattggacctggattctgtttctggtggccgctgccacaagagtgcacagc (SEQ ID NO: 91)。訊號序列之其他實例為此項技術中已知的。舉例而言，訊號序列長度可為約5個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約28個胺基酸、約5個胺基酸至約26個胺基酸、約5個胺基酸至約24個胺基酸、約5個胺基酸至約22個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約18個胺基酸、約5個胺基酸至約16個胺基酸、約5個胺基酸至約14個胺基酸、約5個胺基酸至約12個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約5個胺基酸至約8個胺基酸、約6個胺基酸至約30個胺基酸、約6個胺基酸至約28個胺基酸、約6個胺基酸至約26個胺基酸、約6個胺基酸至約24個胺基酸、約6個胺基酸至約22個胺基酸、約6個胺基酸至約20個胺基酸、約6個胺基酸至約18個胺基酸、約6個胺基酸至約16個胺基酸、約6個胺基酸至約14個胺基酸、約6個胺基酸至約12個胺基酸、約6個胺基酸至約10個胺基酸、約6個胺基酸至約8個胺基酸、約8個胺基酸至約30個胺基酸、約8個胺基酸至約28個胺基酸、約8個胺基酸至約26個胺基酸、約8個胺基酸至約24個胺基酸、約8個胺基酸至約22個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約18個胺基酸、約8個胺基酸至約16個胺基酸、約8個胺基酸至約14個胺基酸、約8個胺基酸至約12個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約28個胺基酸、約10個胺基酸至約26個胺基酸、約10個胺基酸至約24個胺基酸、約10個胺基酸至約22個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約18個胺基酸、約10個胺基酸至約16個胺基酸、約10個胺基酸至約14個胺基酸、約10個胺基酸至約12個胺基酸、約12個胺基酸至約30個胺基酸、約12個胺基酸至約28個胺基酸、約12個胺基酸至約26個胺基酸、約12個胺基酸至約24個胺基酸、約12個胺基酸至約22個胺基酸、約12個胺基酸至約20個胺基酸、約12個胺基酸至約18個胺基酸、約12個胺基酸至約16個胺基酸、約12個胺基酸至約14個胺基酸、約14個胺基酸至約30個胺基酸、約14個胺基酸至約28個胺基酸、約14個胺基酸至約26個胺基酸、約14個胺基酸至約24個胺基酸、約14個胺基酸至約22個胺基酸、約14個胺基酸至約20個胺基酸、約14個胺基酸至約18個胺基酸、約14個胺基酸至約16個胺基酸、約16個胺基酸至約30個胺基酸、約16個胺基酸至約28個胺基酸、約16個胺基酸至約26個胺基酸、約16個胺基酸至約24個胺基酸、約16個胺基酸至約22個胺基酸、約16個胺基酸至約20個胺基酸、約16個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約30個胺基酸、約18個胺基酸至約28個胺基酸、約18個胺基酸至約26個胺基酸、約18個胺基酸至約24個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約28個胺基酸、約20個胺基酸至約26個胺基酸、約20個胺基酸至約24個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約30個胺基酸、約22個胺基酸至約28個胺基酸、約22個胺基酸至約26個胺基酸、約22個胺基酸至約24個胺基酸、約24個胺基酸至約30個胺基酸、約24個胺基酸至約28個胺基酸、約24個胺基酸至約26個胺基酸、約26個胺基酸至約30個胺基酸、約26個胺基酸至約28個胺基酸或約28個胺基酸至約30個胺基酸。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白可進一步包括肽標籤。舉例而言，標籤可用於幫助促進嵌合跨膜蛋白之純化、生產及/或鑑別。在一些實施例中，標籤為包含至少六個組胺酸殘基之組胺酸標籤。標記之其他實例為此項技術中已知的。
下文描述本文所提供之任一嵌合跨膜蛋白之非限制性態樣。細胞外 IL - 15 域
在本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例中，細胞外IL-15域包含或為野生型IL-15蛋白之序列(例如成熟野生型IL-15蛋白)。舉例而言，野生型IL-15蛋白可為野生型人類IL-15蛋白(例如成熟野生型人類IL-2蛋白)、野生型小鼠IL-15蛋白(例如成熟野生型小鼠IL-15蛋白)、野生型黑猩猩IL-15蛋白(例如成熟野生型黑猩猩IL-15蛋白)或野生型猴子IL-15蛋白(例如成熟野生型猴子IL-15蛋白)。下文提供野生型IL-15蛋白序列及編碼此等例示性IL-15蛋白序列之非限制性實例。例示性人類 IL - 15 同功異型物 1 ( SEQ ID NO : 22 ) 
編碼人類 IL - 15 同功異型物 1 ( SEQ ID NO : 23 ) 之核酸 
例示性人類 IL - 15 同功異型物 2 ( SEQ ID NO : 24 ) 
編碼人類 IL - 15 同功異型物 2 ( SEQ ID NO : 25 ) 之核酸 
例示性小鼠 IL - 15 變體 A ( SEQ ID NO : 26 ) 
編碼小鼠 IL - 15 變體 A ( SEQ ID NO : 27 ) 之核酸 
例示性小鼠 IL - 15 變體 B ( SEQ ID NO : 28 ) 
編碼小鼠 IL - 15 變體 B ( SEQ ID NO : 29 ) 之核酸 
在一些實施例中，細胞外IL-15域包含或為與野生型IL-15蛋白(例如野生型成熟IL-15蛋白，例如SEQ ID NO: 22、24、26或28)至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，細胞外IL-15域包括與SEQ ID NO: 22、24、26或28不同之處在於一至25個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 22、24、26或28之序列以外細胞外IL-15域包括一或多個其他個胺基酸(例如1至約100個胺基酸、1至約80個胺基酸、1至約60個胺基酸、1至約40個胺基酸、1至約20個胺基酸、1至約10個胺基酸、約5至約100個胺基酸、約5至約80個胺基酸、約5至約60個胺基酸、約5至約40個胺基酸、約5至約20個胺基酸、約10至約100個胺基酸、約10至約80個胺基酸、約10至約60個胺基酸、約10至約40個胺基酸、約10至約20個胺基酸)。另外地或可替代地，與SEQ ID NO: 22、24、26或28之序列相比細胞外IL-15域可缺少一至約25個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸)。
在一些實施例中，編碼細胞外IL-15域之核酸包含或為與SEQ ID NO: 23、25、27或29至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼細胞外IL-15域之核酸包括與SEQ ID NO: 23、25、27或29不同之處在於一至約75個核苷酸(例如1至約70個核苷酸、1至約60個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約個30核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約10個核苷酸、約5個核苷酸至約75個核苷酸、約5個核苷酸至約70個核苷酸、約5個核苷酸至約60個核苷酸、約5個核苷酸至約50個核苷酸、約5個核苷酸至約40個核苷酸、約5個核苷酸至約30個核苷酸、約5個核苷酸至約20個核苷酸、約5個核苷酸至約10個核苷酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 23、25、27或29之序列以外編碼細胞外IL-15域之核酸包括一或多個其他核苷酸(例如1至約300個核苷酸、1至約250個核苷酸、1至約200個核苷酸、1至約150個核苷酸、1至約100個核苷酸、1至約50個核苷酸、約5個核苷酸至約300個核苷酸、約5個核苷酸至約250個核苷酸、約5個核苷酸至約200個核苷酸、約5個核苷酸至約150個核苷酸、約5個核苷酸至約100個核苷酸或約5個核苷酸至約50個核苷酸)。另外地或可替代地，編碼細胞外IL-15域之核酸可自SEQ ID NO: 23、25、27或29之5'末端缺少一至75個核苷酸(例如1至約70個核苷酸、1至約65個核苷酸、1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)及/或自SEQ ID NO: 23、25、27或29之3'末端缺少一至六十個核苷酸(例如1至約60個核苷酸、1至約55個核苷酸、1至約50個核苷酸、1至約45個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約35個核苷酸、1至約30個核苷酸、1至約25個核苷酸、1至約20個核苷酸、1至約15個核苷酸、1至約10個核苷酸或1至約5個核苷酸)。
如熟習此項技術者可理解，當來自不同物種之野生型IL-15蛋白之間的非保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時其不大可能引起IL-15蛋白之一或多種活性程度的降低。相比而言，當來自不同物種之野生型IL-15蛋白之間的保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時其更可能引起IL-15蛋白之一或多種活性程度的降低。鑒於此知識，熟習此項技術者可選擇野生型IL-15蛋白中哪些胺基酸位置(例如非保守胺基酸)可經取代而不降低IL-15蛋白之活性。
在一些實施例中，細胞外IL-15域為野生型IL-15蛋白之序列(例如成熟野生型IL-15蛋白，例如本文所描述之任一成熟野生型IL-15蛋白，例如SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28)，其自野生型IL-15蛋白的序列之N末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。在一些實施例中，細胞外IL-15域為野生型IL-15蛋白之序列(例如成熟野生型IL-15蛋白，例如本文所描述之任一成熟野生型IL-15蛋白，例如成熟野生型人類IL-15蛋白SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28)，其自野生型IL-15蛋白的序列之C末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。在一些實施例中，細胞外IL-15域為野生型IL-15蛋白之序列(例如成熟野生型IL-15蛋白，例如本文所描述之任一成熟野生型IL-15蛋白，例如成熟野生型人類IL-15蛋白，例如SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28)，其自野生型IL-15蛋白的序列之N末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸且自野生型IL-15蛋白之序列之C末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。
如一般熟習此項技術者所瞭解，當編碼具有細胞外IL-15域之嵌合跨膜蛋白之核酸與SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 29相比包括或缺乏一或多個其他核苷酸時，應仍然維持轉譯讀碼框因此不引入無義密碼子且全部蛋白可經轉譯(例如編碼具有細胞外IL-15域的嵌合跨膜蛋白之核酸可在嵌合跨膜蛋白之細胞外IL-15部分內包括或缺少三個核苷酸或其倍數)。IL - 7 受體之 α 鏈
本文所描述之嵌合跨膜蛋白之一些實施例可進一步包括IL-7受體蛋白之α鏈的序列或其部分。舉例而言，本文所描述之嵌合跨膜蛋白可包括來自人類、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、豬、狗、貓或任何其他適當物種之IL-7受體蛋白的野生型α鏈之序列或其部分。下文描述IL-7受體之野生型α鏈之非限制性實例。IL-7受體之α鏈之其他實例為此項技術中已知的。在一些實施例中，包括IL-7受體之α鏈之序列或其部分的嵌合跨膜蛋白包括IL-7受體之α鏈的跨膜域(例如本文所描述之IL-7受體之α鏈的跨膜域中之任一者)。例示性野生型人類 IL - 7 受體 α 鏈 ( SEQ ID NO : 30 ) 
編碼野生型人類 IL - 7 受體 α 鏈之核酸 ( SEQ ID NO : 31 ) 
例示性野生型小鼠 IL - 7 受體 α 鏈變異體 1 ( SEQ ID NO : 32 ) 
編碼野生型小鼠 IL - 7 受體 α 鏈變異體 1 之核酸 ( SEQ ID NO : 33 ) 
例示性野生型小鼠 IL - 7 受體 α 鏈變異體 2 ( SEQ ID NO : 34 ) 
編碼小鼠 IL - 7 受體 α 鏈變異體 2 之核酸 ( SEQ ID NO : 35 ) 
本文所提供之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例可包括例如與SEQ ID NO: 30、32或34或其部分至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。本文所提供之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例可包括例如與SEQ ID NO: 30、32或34不同之處在於一至60個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60個胺基酸)之序列。本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例可進一步包括例如與SEQ ID NO: 30、32或34不同之處在於缺乏一至60個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60個胺基酸)之序列。
在一些實施例中，編碼IL-7受體之α鏈的核酸包含或為與SEQ ID NO: 31、33或35至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼IL-7受體之α鏈之核酸包括與SEQ ID NO: 31、33或35不同之處在於一或多個核苷酸(例如1至約180個核苷酸、1至約160個核苷酸、1至約140個核苷酸、1至約個120核苷酸、1至約100個核苷酸、1至約80個核苷酸、1至約60個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約20個核苷酸、約5至約180個核苷酸、約5至約160個核苷酸、約5至約140個核苷酸、約5至約120個核苷酸、約5至約100個核苷酸、約5至約80個核苷酸、約5至約60個核苷酸、約5至約40個核苷酸或約5至約20個核苷酸)的序列。另外地或可替代地，編碼IL-7受體之α鏈的核酸與SEQ ID NO: 31、33或35相比可缺少一或多個核苷酸(例如1至約180個核苷酸、1至約160個核苷酸、1至約140個核苷酸、1至約120個核苷酸、1至約100個核苷酸、1至約80個核苷酸、1至約60個核苷酸、1至約40個核苷酸、1至約20個核苷酸、約5至約180個核苷酸、約5至約160個核苷酸、約5至約140個核苷酸、約5至約120個核苷酸、約5至約100個核苷酸、約5至約80個核苷酸、約5至約60個核苷酸、約5至約40個核苷酸或約5至約20個核苷酸)。
如熟習此項技術者可理解，當來自不同物種之IL-7受體蛋白之野生型α鏈之間的非保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其不大可能引起IL-7受體蛋白之α鏈的一或多種活性程度之降低。相比而言，當來自不同物種之IL-7受體蛋白之野生型α鏈之間的保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其更可能引起IL-7受體蛋白之α鏈的一或多種活性程度之降低。鑒於此知識，熟習此項技術者可選擇IL-7受體蛋白之野生型α鏈中的哪些胺基酸位置(例如非保守胺基酸)可經取代而不降低IL-7受體蛋白之α鏈的活性。
本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例可包括IL-7受體蛋白之野生型α鏈之序列(例如IL-7受體蛋白之成熟野生型α鏈，例如本文所描述的IL-7受體之成熟野生型α鏈中之任一者，例如IL-7受體蛋白之成熟野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 30)，其自IL-7受體蛋白之野生型α鏈的序列之N末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例可包括IL-7受體蛋白之野生型α鏈之序列(例如IL-7受體蛋白之成熟野生型α鏈，例如本文所描述的IL-7受體之成熟野生型α鏈中之任一者，例如IL-7受體蛋白之成熟野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 30)，其自IL-7受體蛋白之野生型α鏈的序列之C末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例可包括IL-7受體蛋白之野生型α鏈之序列(例如IL-7受體蛋白之成熟野生型α鏈，例如本文所描述的IL-7受體之成熟野生型α鏈中之任一者，例如IL-7受體蛋白之成熟野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 30)，其自IL-7受體蛋白之野生型α鏈的序列之N末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸且自IL-7受體蛋白之野生型α鏈的序列之C末端移除一至十個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)胺基酸。
如一般熟習此項技術者所瞭解，當編碼具有IL-7受體蛋白域之α鏈的嵌合跨膜蛋白之核酸與SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33或SEQ ID NO: 35相比包括或缺乏一或多個其他核苷酸時，應仍然維持轉譯讀碼框因此不引入無義密碼子且全部蛋白可經轉譯(例如編碼具有編碼IL-7受體蛋白之α鏈的域之嵌合跨膜蛋白之核酸可在編碼IL-7受體之α鏈的域內包括或缺少三個核苷酸或其倍數)。IL - 15 受體之 α 鏈之細胞外 Sushi 域
在一些實施例中，本文所描述之嵌合跨膜受體可包括一或多個(例如一個、二個、三個或四個)來自IL-15受體之α鏈的sushi域。舉例而言，本文所描述之嵌合跨膜蛋白可包括來自IL-15受體之野生型α鏈(例如IL-15受體之野生型人類α鏈、IL-15受體之野生型小鼠α鏈、IL-15受體之野生型大鼠α鏈、IL-15受體之野生型猴子α鏈、IL-15受體之野生型黑猩猩α鏈、IL-15受體之野生型豬α鏈、IL-15受體之野生型狗α鏈或IL-15受體之野生型貓α鏈)的sushi域。下文描述來自IL-15受體之sushi域之非限制性實例。來自IL-15受體之sushi域之其他實例為此項技術中已知的。
sushi域(亦稱為短共同重複或1型醣蛋白基序)為蛋白-蛋白相互作用中之共用基序。Sushi域已在多種蛋白結合分子上鑑別，包括補體組分C1r、C1s、因子H及C2m以及非免疫分子因子XIII及β2醣蛋白。典型Sushi域具有大致60個胺基酸殘基且含有四個半胱胺酸(Ranganathan,Pac . Symp Biocomput .
2000:155-67)。第一半胱胺酸可與第三半胱胺酸形成二硫鍵，且第二半胱胺酸可與第四半胱胺酸形成二硫橋鍵。
在一些實施例中，sushi域長度可為約25個胺基酸至約90個胺基酸、約25個胺基酸至約85個胺基酸、約25個胺基酸至約80個胺基酸、約25個胺基酸至約75個胺基酸、約25個胺基酸至約70個胺基酸、約25個胺基酸至約65個胺基酸、約25個胺基酸至約60個胺基酸、約25個胺基酸至約55個胺基酸、約25個胺基酸至約50個胺基酸、約25個胺基酸至約45個胺基酸、約25個胺基酸至約40個胺基酸、約25個胺基酸至約35個胺基酸、約25個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約90個胺基酸、約30個胺基酸至約85個胺基酸、約30個胺基酸至約80個胺基酸、約30個胺基酸至約75個胺基酸、約30個胺基酸至約70個胺基酸、約30個胺基酸至約65個胺基酸、約30個胺基酸至約60個胺基酸、約30個胺基酸至約55個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約45個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約35個胺基酸、約35個胺基酸至約90個胺基酸、約35個胺基酸至約85個胺基酸、約35個胺基酸至約80個胺基酸、約35個胺基酸至約75個胺基酸、約35個胺基酸至約70個胺基酸、約35個胺基酸至約65個胺基酸、約35個胺基酸至約60個胺基酸、約35個胺基酸至約55個胺基酸、約35個胺基酸至約50個胺基酸、約35個胺基酸至約45個胺基酸、約35個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約90個胺基酸、約40個胺基酸至約85個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約75個胺基酸、約40個胺基酸至約70個胺基酸、約40個胺基酸至約65個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約40個胺基酸至約55個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約45個胺基酸、約45個胺基酸至約90個胺基酸、約45個胺基酸至約85個胺基酸、約45個胺基酸至約80個胺基酸、約45個胺基酸至約75個胺基酸、約45個胺基酸至約70個胺基酸、約45個胺基酸至約65個胺基酸、約45個胺基酸至約60個胺基酸、約45個胺基酸至約55個胺基酸、約45個胺基酸至約50個胺基酸、約50個胺基酸至約90個胺基酸、約50個胺基酸至約85個胺基酸、約50個胺基酸至約80個胺基酸、約50個胺基酸至約75個胺基酸、約50個胺基酸至約70個胺基酸、約50個胺基酸至約65個胺基酸、約50個胺基酸至約60個胺基酸、約50個胺基酸至約55個胺基酸、約55個胺基酸至約90個胺基酸、約55個胺基酸至約85個胺基酸、約55個胺基酸至約80個胺基酸、約55個胺基酸至約75個胺基酸、約55個胺基酸至約70個胺基酸、約55個胺基酸至約65個胺基酸、約55個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約90個胺基酸、約60個胺基酸至約85個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約60個胺基酸至約75個胺基酸、約60個胺基酸至約70個胺基酸、約60個胺基酸至約65個胺基酸、約65個胺基酸至約90個胺基酸、約65個胺基酸至約85個胺基酸、約65個胺基酸至約80個胺基酸、約65個胺基酸至約75個胺基酸、約65個胺基酸至約70個胺基酸、約70個胺基酸至約90個胺基酸、約70個胺基酸至約85個胺基酸、約70個胺基酸至約80個胺基酸、約70個胺基酸至約75個胺基酸、約75個胺基酸至約90個胺基酸、約75個胺基酸至約85個胺基酸、約75個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約90個胺基酸、約80個胺基酸至約85個胺基酸或約85個胺基酸至約90個胺基酸。
在一些實施例中，細胞外sushi域包含或為與IL-2受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分(例如IL-2受體的成熟野生型人類α鏈，例如SEQ ID NO: 36或37)至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。來自 IL - 15 同功異型物 1 之野生型人類 α 鏈之 Sushi 域 ( SEQ ID NO : 36 ) 
來自 IL - 15 同功異型物 2 之野生型人類 α 鏈之 Sushi 域 ( SEQ ID NO : 37 ) 
來自 IL - 15 同功異型物 1 之野生型小鼠 α 鏈之 Sushi 域 ( SEQ ID NO : 38 ) 
來自 IL - 15 同功異型物 4 之野生型小鼠 α 鏈之 Sushi 域 ( SEQ ID NO : 39 ) 
來自 IL - 15 蛋白之野生型雞 α 鏈之 Sushi 域 ( SEQ ID NO : 40 ) 
來自 IL - 15 同功異型物 1 之野生型人類 α 鏈之細胞外部分 ( SEQ ID NO : 41 ) 
在一些實施例中，細胞外sushi域為IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分(例如IL-15受體的成熟野生型人類α鏈之細胞外部分，例如SEQ ID NO: 41)。在一些實施例中，細胞外sushi域為與IL-15受體之成熟野生型α鏈的細胞外部分(例如SEQ ID NO: 41)至少80%、至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%、至少99%或100%一致之序列。在一些實施例中，細胞外sushi域為IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分的序列(例如SEQ ID NO: 41)，其自IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分的序列之N末端移除一至二十個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)胺基酸。在一些實施例中，細胞外sushi域為IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分的序列(例如SEQ ID NO: 41)，其自IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分的序列之C末端移除一至二十個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)胺基酸。在一些實施例中，細胞外sushi域為IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分的序列(例如SEQ ID NO: 41)，其自IL-15受體之成熟野生型α鏈之細胞外部分的序列之N末端移除一至二十個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)胺基酸且自IL-15受體之成熟野生型α鏈的細胞外部分之序列之C末端移除一至二十個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)胺基酸。
在一些實施例中，細胞外sushi域包含或為來自IL-15受體之野生型α鏈之sushi域的序列(例如本文所描述之來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域中之任一者，例如來自IL-15受體之野生型人類α鏈的sushi域，例如包含SEQ ID NO: 36或37中之一者或兩者的序列)。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白之細胞外sushi域包含與IL-15受體之野生型α鏈的sushi域(例如SEQ ID NO: 36、37、38、39或40)至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。
如熟習此項技術者可理解，當來自不同物種之IL-15受體蛋白之野生型α鏈的sushi域之間的非保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其不大可能引起來自IL-15受體蛋白之α鏈的sushi域之IL-15結合活性程度降低。相比而言，當來自不同物種之IL-15受體蛋白之野生型α鏈之sushi域之間的保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其更可能引起來自IL-15受體蛋白之α鏈的sushi域之IL-15結合活性程度之降低。鑒於此知識，熟習此項技術者可選擇IL-15受體蛋白之α鏈之sushi域中的哪些胺基酸位置(例如非保守胺基酸)可經取代而不降低IL-15受體蛋白之α鏈的sushi域之活性。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白之細胞外sushi域為來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之序列(例如SEQ ID NO: 36、37、38、39或40中之任一者)，其自來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之N末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白之細胞外sushi域為來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之序列(例如SEQ ID NO: 36、37、38、39或40中之任一者)，其自來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之C末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白之細胞外sushi域為來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之序列(例如SEQ ID NO: 36、37、38、39或40中之任一者)，其自來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之N末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸，且自來自IL-15受體之野生型α鏈的sushi域之C末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸。
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含兩個sushi域。在一些實施例中，各sushi域可獨立地為本文所描述之任一sushi域。IL - 7 受體之 α 鏈之跨膜域
本文所描述之嵌合跨膜蛋白可包括來自人類、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、豬、狗、貓或任何其他適當物種之IL-7受體的野生型α鏈之跨膜域。下文描述IL-7受體的α鏈之跨膜域之非限制性實例。IL-7受體之α鏈的跨膜域之其他實例為此項技術中已知的。IL - 7 受體之野生型人類 α 鏈的跨膜域 ( SEQ ID NO : 1 ) 
IL - 7 受體同功異型物 1 之野生型小鼠 α 鏈的跨膜域 ( SEQ ID NO : 42 ) 
IL - 7 受體同功異型物 2 之野生型小鼠 α 鏈之跨膜域 ( SEQ ID NO : 42 ) 
IL - 7 受體之野生型長尾獼猴 α 鏈之跨膜域 ( SEQ ID NO : 44 )
PILLTISLLSFFSVALLVILACVLW
在一些實施例中，來自IL-2受體蛋白之α鏈之跨膜域長度可為約10個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約45個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約35個胺基酸、10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約10個胺基酸至約22個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約18個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約15個胺基酸至約50個胺基酸、約15個胺基酸至約45個胺基酸、約15個胺基酸至約40個胺基酸、約15個胺基酸至約35個胺基酸、約15個胺基酸至約30個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約22個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、約15個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約50個胺基酸、約18個胺基酸至約45個胺基酸、約18個胺基酸至約40個胺基酸、約18個胺基酸至約35個胺基酸、約18個胺基酸至約30個胺基酸、約18個胺基酸至約25個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約45個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約35個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約25個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約50個胺基酸、約22個胺基酸至約45個胺基酸、約22個胺基酸至約40個胺基酸、約22個胺基酸至約35個胺基酸、約22個胺基酸至約30個胺基酸、約22個胺基酸至約25個胺基酸、約25個胺基酸至約50個胺基酸、約25個胺基酸至約45個胺基酸、約25個胺基酸至約40個胺基酸、約25個胺基酸至約35個胺基酸、約25個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約45個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約35個胺基酸、約35個胺基酸至約50個胺基酸、約35個胺基酸至約45個胺基酸、約35個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約45個胺基酸或約45個胺基酸至約50個胺基酸。
在本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例中，IL-7受體之α鏈之跨膜域可為來自IL-7受體之野生型α鏈的跨膜域(例如IL-7受體之野生型人類α鏈之跨膜域，例如SEQ ID NO: 1)(例如列於以下或此項技術中已知的IL-7受體之野生型α鏈之例示性跨膜域中之任一者，例如SEQ ID NO: 1、42或44)。
在一些實施例中，IL-7受體之α鏈之跨膜域包含或為與來自IL-7受體之野生型α鏈的跨膜域(例如SEQ ID NO: 1、42或44)至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，IL-7受體之α鏈的跨膜域包括與IL-7受體之野生型α鏈之跨膜域(例如SEQ ID NO: 1、42或44中之任一者)不同之處在於一至五個胺基酸(例如1、2、3、4或5個胺基酸)的序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 1、42或44之序列以外IL-7受體之α鏈的跨膜域包括一或二十個其他胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)。在一些實施例中，IL-7受體之α鏈之跨膜域可具有SEQ ID NO: 1、42或44中之任一者的序列但缺少一至五個胺基酸(例如1、2、3、4或5個胺基酸)。
如熟習此項技術者可理解，當來自不同物種之IL-7受體蛋白之野生型α鏈的跨膜域之間的非保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其不大可能引起來自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之活性降低。相比而言，當來自不同物種之IL-7受體蛋白之野生型α鏈的跨膜域之間的保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其更可能引起來自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之活性降低。鑒於此知識，熟習此項技術者可選擇IL-7受體蛋白之α鏈之跨膜域中的哪些胺基酸位置(例如非保守胺基酸)可經取代而不降低來自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之活性。
在一些實施例中，IL-7受體蛋白之α鏈之跨膜域為IL-7受體蛋白之野生型α鏈的跨膜域之序列(例如SEQ ID NO: 1、42或44)，其自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之N末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸。在一些實施例中，IL-7受體蛋白之α鏈之跨膜域為IL-7受體蛋白之野生型α鏈的跨膜域之序列(例如SEQ ID NO: 1、42或44)，其自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之C末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸。在一些實施例中，IL-7受體蛋白之α鏈之跨膜域為IL-7受體蛋白之野生型α鏈的跨膜域之序列(例如IL-7受體蛋白之野生型人類α鏈之跨膜域，例如SEQ ID NO: 1、42或44)，其自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之N末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸，且自IL-7受體蛋白之α鏈的跨膜域之C末端移除一至五個(例如一個、兩個、三個、四個或五個)胺基酸。
在本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白之一些實施例中，介白素-7受體之α鏈之跨膜域包括PILLTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 1)之序列，其具有一或多個(例如一個、二個、三個或四個)以下修飾：(i) SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸已經不同的三胺基酸序列置換(例如已經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換)；(ii)一至三個(例如一個、兩個或三個)胺基酸(例如半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸)已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間；及(iii)一至四個(例如一個、二個、三個或四個)胺基酸(例如脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸)已插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。在一些實施例中，跨膜域經修飾以具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
在一些實施例中，跨膜域包括SEQ ID NO: 1之序列，其中SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置15至17處的丙胺酸-白胺酸-白胺酸經麩胺酸-離胺酸-纈胺酸或麩胺酸-離胺酸-丙胺酸置換。在一些實施例中，跨膜域包括SEQ ID NO: 1之序列，其中半胱胺酸-脯胺酸-蘇氨酸插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置5與6之間。在一些實施例中，跨膜域包括SEQ ID NO: 1之序列，其中脯胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-白胺酸插入SEQ ID NO: 1中之胺基酸位置4與5之間。在一些實施例中，跨膜域經修飾以具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。IL - 7 受體之 α 鏈之細胞內域
本文所描述之嵌合跨膜蛋白之一些實施例可進一步包括IL-7受體之α鏈的細胞內域或其部分。舉例而言，本文所描述之嵌合跨膜蛋白可包括來自人類、小鼠、大鼠、猴子、黑猩猩、豬、狗、貓或任何其他適當物種之IL-7受體的野生型α鏈之細胞內域。下文描述IL-7受體之α鏈的細胞內域之非限制性實例。IL-7受體之α鏈的細胞內域之其他實例為此項技術中已知的。
本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白可包括介白素-7受體的α鏈(例如本文所描述之介白素-7受體之α鏈中之任一者)之細胞內域。在一些實施例中，介白素-7受體之α鏈之細胞內域的長度可為約100個胺基酸至約225個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約180個胺基酸、約100個胺基酸至約160個胺基酸、約100個胺基酸至約140個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約120個胺基酸至約225個胺基酸、約120個胺基酸至約200個胺基酸、約120個胺基酸至約180個胺基酸、約120個胺基酸至約160個胺基酸、約120個胺基酸至約140個胺基酸、約140個胺基酸至約225個胺基酸、約140個胺基酸至約200個胺基酸、約140個胺基酸至約180個胺基酸、約140個胺基酸至約160個胺基酸、約160個胺基酸至約225個胺基酸、約160個胺基酸至約200個胺基酸、約160個胺基酸至約180個胺基酸、約180個胺基酸至約225個胺基酸、約180個胺基酸至約200個胺基酸或約200個胺基酸至約225個胺基酸。
本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白可包括介白素-7受體之α鏈的細胞內域(例如介白素-7受體之野生型α鏈之細胞內域(例如介白素-7受體之野生型人類α鏈的細胞內域，例如SEQ ID NO: 45)，例如SEQ ID NO: 46之介白素-7之野生型人類α鏈的細胞內域)。IL - 7 受體之野生型人類 α 鏈之細胞內域 ( SEQ ID NO : 45 ， BOX1 基序加下劃線 ， 磷酸化之酪胺酸為較大加粗字體 ) 
編碼 IL - 7 受體之野生型人類 α 鏈的細胞內域之核酸 ( SEQ ID NO : 82 ， 編碼 BOX1 基序之核酸序列加下劃線 ) 
IL - 7 受體同功異型物 1 之野生型小鼠 α 鏈之細胞內域 ( SEQ ID NO : 46 ) 
在一些實施例中，IL-7受體之α鏈之細胞內域包含或為與IL-7受體之野生型α鏈的細胞內域(例如SEQ ID NO: 45或46)至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，IL-7受體之α鏈之包括與IL-7受體之野生型α鏈的細胞內域之序列(例如SEQ ID NO: 45或46)不同之處在於一至40個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)之序列。在一些實施例中，例如除SEQ ID NO: 45或46之序列以外IL-7受體之α鏈之細胞內域包括一或多個其他胺基酸(例如1至約100個胺基酸、1至約95個胺基酸、1至約90個胺基酸、1至約85個胺基酸、1至約80個胺基酸、1至約75個胺基酸、1至約70個胺基酸、1至約65個胺基酸、1至約60個胺基酸、1至約55個胺基酸、1至約50個胺基酸、1至約45個胺基酸、1至約40個胺基酸、1至約35個胺基酸、1至約30個胺基酸、1至約25個胺基酸、1至約20個胺基酸、1至約15個胺基酸、1至約10個胺基酸或1至約5個胺基酸)。在一些實施例中，IL-7受體之α鏈的細胞內域可具有SEQ ID NO: 45或46中之任一者之序列，但缺少一至四十個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)。
如熟習此項技術者可理解，當來自不同物種之IL-7受體蛋白之野生型α鏈的細胞內域之間的非保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其不大可能引起來自IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之活性降低。相比而言，當來自不同物種之IL-7受體蛋白之野生型α鏈的細胞內域之間的保守胺基酸突變(例如經不同胺基酸取代)時，其更可能引起來自IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之活性降低。鑒於此知識，熟習此項技術者可選擇IL-7受體蛋白之α鏈之細胞內域中的哪些胺基酸位置(例如非保守胺基酸)可經取代而不降低IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之活性。
在一些實施例中，IL-7受體蛋白之α鏈之細胞內域為IL-7受體蛋白之野生型α鏈的細胞內域之序列(例如SEQ ID NO: 45或46)，其自IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之N末端移除一至三個(例如一個、兩個或三個)胺基酸。在一些實施例中，IL-7受體蛋白之α鏈之細胞內域為IL-7受體蛋白之野生型α鏈的細胞內域之序列(例如SEQ ID NO: 45或46)，其自IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之C末端移除一至三個(例如一個、兩個或三個)胺基酸。在一些實施例中，IL-7受體蛋白之α鏈之細胞內域為IL-7受體蛋白之野生型α鏈的細胞內域之序列(例如SEQ ID NO: 45或46)，其自IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之N末端移除一至三個(例如一個、兩個或三個)胺基酸且自IL-7受體蛋白之α鏈的細胞內域之C末端移除一至三個(例如一個、兩個或三個)胺基酸。連接子序列
在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含位於細胞外IL-15域與細胞外sushi域之間的連接子序列。在一些實施例中，嵌合跨膜蛋白包含位於細胞外sushi域與IL-15受體之α鏈之跨膜域之間的其他連接子序列。當嵌合跨膜蛋白包含連接子序列及其他連接子序列時，各連接子序列可為相同的或彼此不同。
在一些實施例中，連接子序列或其他連接子序列為1個胺基酸至約50個胺基酸、1個胺基酸至約48個胺基酸、1個胺基酸至約46個胺基酸、1個胺基酸至約44個胺基酸、1個胺基酸至約42個胺基酸、1個胺基酸至約40個胺基酸、1個胺基酸至約38個胺基酸、1個胺基酸至約36個胺基酸、1個胺基酸至約34個胺基酸、1個胺基酸至約32個胺基酸、1個胺基酸至約30個胺基酸、1個胺基酸至約28個胺基酸、1個胺基酸至約26個胺基酸、1個胺基酸至約24個胺基酸、1個胺基酸至約22個胺基酸、1個胺基酸至約20個胺基酸、1個胺基酸至約18個胺基酸、1個胺基酸至約16個胺基酸、1個胺基酸至約14個胺基酸、1個胺基酸至約12個胺基酸、1個胺基酸至約10個胺基酸、1個胺基酸至約8個胺基酸、1個胺基酸至約6個胺基酸、1個胺基酸至約4個胺基酸、1個胺基酸至約3個胺基酸、約2個胺基酸至約50個胺基酸、約2個胺基酸至約48個胺基酸、約2個胺基酸至約46個胺基酸、約2個胺基酸至約44個胺基酸、約2個胺基酸至約42個胺基酸、約2個胺基酸至約40個胺基酸、約2個胺基酸至約38個胺基酸、約2個胺基酸至約36個胺基酸、約2個胺基酸至約34個胺基酸、約2個胺基酸至約32個胺基酸、約2個胺基酸至約30個胺基酸、約2個胺基酸至約28個胺基酸、約2個胺基酸至約26個胺基酸、約2個胺基酸至約24個胺基酸、約2個胺基酸至約22個胺基酸、約2個胺基酸至約20個胺基酸、約2個胺基酸至約18個胺基酸、約2個胺基酸至約16個胺基酸、約2個胺基酸至約14個胺基酸、約2個胺基酸至約12個胺基酸、約2個胺基酸至約10個胺基酸、約2個胺基酸至約8個胺基酸、約2個胺基酸至約6個胺基酸、約2個胺基酸至約4個胺基酸、約4個胺基酸至約50個胺基酸、約4個胺基酸至約48個胺基酸、約4個胺基酸至約46個胺基酸、約4個胺基酸至約44個胺基酸、約4個胺基酸至約42個胺基酸、約4個胺基酸至約40個胺基酸、約4個胺基酸至約38個胺基酸、約4個胺基酸至約36個胺基酸、約4個胺基酸至約34個胺基酸、約4個胺基酸至約32個胺基酸、約4個胺基酸至約30個胺基酸、約4個胺基酸至約28個胺基酸、約4個胺基酸至約26個胺基酸、約4個胺基酸至約24個胺基酸、約4個胺基酸至約22個胺基酸、約4個胺基酸至約20個胺基酸、約4個胺基酸至約18個胺基酸、約4個胺基酸至約16個胺基酸、約4個胺基酸至約14個胺基酸、約4個胺基酸至約12個胺基酸、約4個胺基酸至約10個胺基酸、約4個胺基酸至約8個胺基酸、約4個胺基酸至約6個胺基酸、約6個胺基酸至約50個胺基酸、約6個胺基酸至約48個胺基酸、約6個胺基酸至約46個胺基酸、約6個胺基酸至約44個胺基酸、約6個胺基酸至約42個胺基酸、約6個胺基酸至約40個胺基酸、約6個胺基酸至約38個胺基酸、約6個胺基酸至約36個胺基酸、約6個胺基酸至約34個胺基酸、約6個胺基酸至約32個胺基酸、約6個胺基酸至約30個胺基酸、約6個胺基酸至約28個胺基酸、約6個胺基酸至約26個胺基酸、約6個胺基酸至約24個胺基酸、約6個胺基酸至約22個胺基酸、約6個胺基酸至約20個胺基酸、約6個胺基酸至約18個胺基酸、約6個胺基酸至約16個胺基酸、約6個胺基酸至約14個胺基酸、約6個胺基酸至約12個胺基酸、約6個胺基酸至約10個胺基酸、約6個胺基酸至約8個胺基酸、約8個胺基酸至約50個胺基酸、約8個胺基酸至約48個胺基酸、約8個胺基酸至約46個胺基酸、約8個胺基酸至約44個胺基酸、約8個胺基酸至約42個胺基酸、約8個胺基酸至約40個胺基酸、約8個胺基酸至約38個胺基酸、約8個胺基酸至約36個胺基酸、約8個胺基酸至約34個胺基酸、約8個胺基酸至約32個胺基酸、約8個胺基酸至約30個胺基酸、約8個胺基酸至約28個胺基酸、約8個胺基酸至約26個胺基酸、約8個胺基酸至約24個胺基酸、約8個胺基酸至約22個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約18個胺基酸、約8個胺基酸至約16個胺基酸、約8個胺基酸至約14個胺基酸、約8個胺基酸至約12個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約48個胺基酸、約10個胺基酸至約46個胺基酸、約10個胺基酸至約44個胺基酸、約10個胺基酸至約42個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約38個胺基酸、約10個胺基酸至約36個胺基酸、約10個胺基酸至約34個胺基酸、約10個胺基酸至約32個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約28個胺基酸、約10個胺基酸至約26個胺基酸、約10個胺基酸至約24個胺基酸、約10個胺基酸至約22個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約18個胺基酸、約10個胺基酸至約16個胺基酸、約10個胺基酸至約14個胺基酸、約10個胺基酸至約12個胺基酸、約12個胺基酸至約50個胺基酸、約12個胺基酸至約48個胺基酸、約12個胺基酸至約46個胺基酸、約12個胺基酸至約44個胺基酸、約12個胺基酸至約42個胺基酸、約12個胺基酸至約40個胺基酸、約12個胺基酸至約38個胺基酸、約12個胺基酸至約36個胺基酸、約12個胺基酸至約34個胺基酸、約12個胺基酸至約32個胺基酸、約12個胺基酸至約30個胺基酸、約12個胺基酸至約28個胺基酸、約12個胺基酸至約26個胺基酸、約12個胺基酸至約24個胺基酸、約12個胺基酸至約22個胺基酸、約12個胺基酸至約20個胺基酸、約12個胺基酸至約18個胺基酸、約12個胺基酸至約16個胺基酸、約12個胺基酸至約14個胺基酸、約14個胺基酸至約50個胺基酸、約14個胺基酸至約48個胺基酸、約14個胺基酸至約46個胺基酸、約14個胺基酸至約44個胺基酸、約14個胺基酸至約42個胺基酸、約14個胺基酸至約40個胺基酸、約14個胺基酸至約38個胺基酸、約14個胺基酸至約36個胺基酸、約14個胺基酸至約34個胺基酸、約14個胺基酸至約32個胺基酸、約14個胺基酸至約30個胺基酸、約14個胺基酸至約28個胺基酸、約14個胺基酸至約26個胺基酸、約14個胺基酸至約24個胺基酸、約14個胺基酸至約22個胺基酸、約14個胺基酸至約20個胺基酸、約14個胺基酸至約18個胺基酸、約14個胺基酸至約16個胺基酸、約16個胺基酸至約50個胺基酸、約16個胺基酸至約48個胺基酸、約16個胺基酸至約46個胺基酸、約16個胺基酸至約44個胺基酸、約16個胺基酸至約42個胺基酸、約16個胺基酸至約40個胺基酸、約16個胺基酸至約38個胺基酸、約16個胺基酸至約36個胺基酸、約16個胺基酸至約34個胺基酸、約16個胺基酸至約32個胺基酸、約16個胺基酸至約30個胺基酸、約16個胺基酸至約28個胺基酸、約16個胺基酸至約26個胺基酸、約16個胺基酸至約24個胺基酸、約16個胺基酸至約22個胺基酸、約16個胺基酸至約20個胺基酸、約16個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約50個胺基酸、約18個胺基酸至約48個胺基酸、約18個胺基酸至約46個胺基酸、約18個胺基酸至約44個胺基酸、約18個胺基酸至約42個胺基酸、約18個胺基酸至約40個胺基酸、約18個胺基酸至約38個胺基酸、約18個胺基酸至約36個胺基酸、約18個胺基酸至約34個胺基酸、約18個胺基酸至約32個胺基酸、約18個胺基酸至約30個胺基酸、約18個胺基酸至約28個胺基酸、約18個胺基酸至約26個胺基酸、約18個胺基酸至約24個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約48個胺基酸、約20個胺基酸至約46個胺基酸、約20個胺基酸至約44個胺基酸、約20個胺基酸至約42個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約38個胺基酸、約20個胺基酸至約36個胺基酸、約20個胺基酸至約34個胺基酸、約20個胺基酸至約32個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約28個胺基酸、約20個胺基酸至約26個胺基酸、約20個胺基酸至約24個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約50個胺基酸、約22個胺基酸至約48個胺基酸、約22個胺基酸至約46個胺基酸、約22個胺基酸至約44個胺基酸、約22個胺基酸至約42個胺基酸、約22個胺基酸至約40個胺基酸、約22個胺基酸至約38個胺基酸、約22個胺基酸至約36個胺基酸、約22個胺基酸至約34個胺基酸、約22個胺基酸至約32個胺基酸、約22個胺基酸至約30個胺基酸、約22個胺基酸至約28個胺基酸、約22個胺基酸至約26個胺基酸、約22個胺基酸至約24個胺基酸、約24個胺基酸至約50個胺基酸、約24個胺基酸至約48個胺基酸、約24個胺基酸至約46個胺基酸、約24個胺基酸至約44個胺基酸、約24個胺基酸至約42個胺基酸、約24個胺基酸至約40個胺基酸、約24個胺基酸至約38個胺基酸、約24個胺基酸至約36個胺基酸、約24個胺基酸至約34個胺基酸、約24個胺基酸至約32個胺基酸、約24個胺基酸至約30個胺基酸、約24個胺基酸至約28個胺基酸、約24個胺基酸至約26個胺基酸、約26個胺基酸至約50個胺基酸、約26個胺基酸至約48個胺基酸、約26個胺基酸至約46個胺基酸、約26個胺基酸至約44個胺基酸、約26個胺基酸至約42個胺基酸、約26個胺基酸至約40個胺基酸、約26個胺基酸至約38個胺基酸、約26個胺基酸至約36個胺基酸、約26個胺基酸至約34個胺基酸、約26個胺基酸至約32個胺基酸、約26個胺基酸至約30個胺基酸、約26個胺基酸至約28個胺基酸、約28個胺基酸至約50個胺基酸、約28個胺基酸至約48個胺基酸、約28個胺基酸至約46個胺基酸、約28個胺基酸至約44個胺基酸、約28個胺基酸至約42個胺基酸、約28個胺基酸至約40個胺基酸、約28個胺基酸至約38個胺基酸、約28個胺基酸至約36個胺基酸、約28個胺基酸至約34個胺基酸、約28個胺基酸至約32個胺基酸、約28個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約48個胺基酸、約30個胺基酸至約46個胺基酸、約30個胺基酸至約44個胺基酸、約30個胺基酸至約42個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約38個胺基酸、約30個胺基酸至約36個胺基酸、約30個胺基酸至約34個胺基酸、約30個胺基酸至約32個胺基酸、約32個胺基酸至約50個胺基酸、約32個胺基酸至約48個胺基酸、約32個胺基酸至約46個胺基酸、約32個胺基酸至約44個胺基酸、約32個胺基酸至約42個胺基酸、約32個胺基酸至約40個胺基酸、約32個胺基酸至約38個胺基酸、約32個胺基酸至約36個胺基酸、約32個胺基酸至約34個胺基酸、約34個胺基酸至約50個胺基酸、約34個胺基酸至約48個胺基酸、約34個胺基酸至約46個胺基酸、約34個胺基酸至約44個胺基酸、約34個胺基酸至約42個胺基酸、約34個胺基酸至約40個胺基酸、約34個胺基酸至約38個胺基酸、約34個胺基酸至約36個胺基酸、約36個胺基酸至約50個胺基酸、約36個胺基酸至約48個胺基酸、約36個胺基酸至約46個胺基酸、約36個胺基酸至約44個胺基酸、約36個胺基酸至約42個胺基酸、約36個胺基酸至約40個胺基酸、約36個胺基酸至約38個胺基酸、約38個胺基酸至約50個胺基酸、約38個胺基酸至約48個胺基酸、約38個胺基酸至約46個胺基酸、約38個胺基酸至約44個胺基酸、約38個胺基酸至約42個胺基酸、約38個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約48個胺基酸、約40個胺基酸至約46個胺基酸、約40個胺基酸至約44個胺基酸、約40個胺基酸至約42個胺基酸、約42個胺基酸至約50個胺基酸、約42個胺基酸至約48個胺基酸、約42個胺基酸至約46個胺基酸、約42個胺基酸至約44個胺基酸、約44個胺基酸至約50個胺基酸、約44個胺基酸至約48個胺基酸、約44個胺基酸至約46個胺基酸、約46個胺基酸至約50個胺基酸、約46個胺基酸至約48個胺基酸或約48個胺基酸至約50個胺基酸。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列包含(SG)n
之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列包含(GS)n
之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列包含(SGGS)n
[SGGS = SEQ ID NO: 47]之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列包含(SGGGS)n
[SGGGS = SEQ ID NO: 48]之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列包含(SGGGGS)n
[SGGGGS = SEQ ID NO: 49]之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8或9。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括SGGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 50)之序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括ASTKGPSVFPLAPSSSGSG (SEQ ID NO: 51)之序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52)之序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括GGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 53)之序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ (SEQ ID NO: 92)之序列。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為瘭疽連接子。在一些實施例中，瘭疽連接子具有GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 54)之胺基酸序列或編碼瘭疽連接子序列之核苷酸序列為ggcagcaccagcggcagcggcaaaccgggcagcggcgaaggcagcaccaaaggc (SEQ ID NO: 55)。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為(G4
S)5
連接子。在一些實施例中，(G4
S)5
連接子具有GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 56)之胺基酸序列或編碼(G4
S)5
連接子序列之核苷酸序列為ggcggtggtggttctggaggcggtggcagcggtggaggtggctcaggaggaggaggtagcggcggcggagggagt (SEQ ID NO: 57)。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或可包括一或多個IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 CH1、CH2及CH3域。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或可包括CH2-CH3 人類IgG1域。在一些實施例中，CH2-CH3人類IgG1域具有序列：AEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD (SEQ ID NO: 58)。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括靠近人類CD8跨膜域之人類CD8細胞外序列之部分。舉例而言，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括人類CD8序列：TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (SEQ ID NO: 59)。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列可為或包括人類IgG1鉸鏈序列。在一些實施例中，人類IgG1鉸鏈序列為AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (SEQ ID NO: 60)。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列具有α螺旋結構。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列為捲曲螺旋域。
在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列為天然存在之胺基酸序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列非天然存在之胺基酸序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列包含SEQ ID NO: 92之序列。在一些實施例中，連接子序列及/或其他連接子序列由SEQ ID NO: 92之序列組成。連接子之其他態樣及實例為此項技術中已知的。嵌合抗原受體
嵌合抗原受體(CAR)為一種蛋白質，其包括細胞外抗原結合域(例如本文所描述或此項技術中已知之任一抗原結合域)、跨膜域(例如本文所描述或此項技術中已知之任一跨膜域)、協同刺激域(例如本文所描述或此項技術中已知之任一協同刺激域)及基於免疫受體酪胺酸的活化基序(ITAM)。在一些實施例中，CAR包含其他序列，諸如但不限於細胞外柄序列(例如CD28柄序列)。在CAR包含細胞外柄序列(例如CD28柄序列)之一些實施例中，柄序列與跨膜域同界。在CAR包含細胞外柄序列(例如CD28柄序列)之一些實施例中，細胞外柄序列來自與跨膜域相同之蛋白質。在CAR包含細胞外柄序列(例如CD28柄序列)之一些實施例中，細胞外柄序列來自與跨膜域不同之蛋白質。嵌合抗原受體之非限制性態樣描述於例如Kershaw等人，Nature Reviews Immunol .
5(12):928-940, 2005；Eshhar等人，Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A .
90(2):720-724, 1993；Sadelain等人，Curr . Opin . Immunol .
21(2): 215-223, 2009；WO 2015/142675；WO 2015/150526；及WO 2014/134165中，其中各揭示內容以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，嵌合抗原受體可包括一或多個(例如兩個、三個、四個或五個)協同刺激域(例如本文所描述或此項技術中已知之任一例示性協同刺激域的任何組合)。此等嵌合抗原受體之一些實施例包括4-1BB協同刺激域及CD28協同刺激域中之一者或兩者。
在一些實施例中，嵌合抗原受體可包括一或多個(例如兩個、三個、四個或五個)ITAM(例如本文所描述或此項技術中已知之任一ITAM)。在此等嵌合抗原受體之一些實施例中，ITAM包括來自CD3ζ (例如人類CD3ζ)之細胞質信號傳導序列。
在一些實施例中，細胞外抗原結合域與跨膜域之間的一或多個胺基酸為來自衍生出跨膜域之同一內源性單鏈多肽之序列。在一些實施例中，細胞外抗原結合域與跨膜域之間的一或多個胺基酸為或包括抗體(諸如但不限於人類抗體(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4))之鉸鏈區序列。在一些實施例中，細胞外抗原結合域與跨膜域之間的一或多個胺基酸為或包含連接子序列(例如非天然存在之連接子序列，例如GS或本文所描述之任一其他連接子序列)。
在本文所描述之任一CAR之一些實例中，在N-末端至C-末端方向，CAR之細胞內部分包括協同刺激域及細胞內信號傳導域。在本文所描述之任一CAR之一些實例中，在N-末端至C-末端方向，CAR之細胞內部分包括細胞內信號傳導域及協同刺激域。
在本文所描述之任一CAR之一些實例中，在C-末端至N-末端方向，CAR之細胞內部分包括協同刺激域及細胞內信號傳導域。在本文所描述之任一CAR之一些實例中，在N-末端至C-末端方向，CAR之細胞內部分包括細胞內信號傳導域及協同刺激域。
在本文所描述之任一CAR之一些實施例中，跨膜域為或包括CD28、CD3ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154之跨膜域。本文描述跨膜域之其他實例及態樣。
在本文所描述之任一CAR之一些實施例中，協同刺激域為或包括4-1BB、CD28、CD2、CD4或CD8之協同刺激域。本文描述協同刺激域之其他實例及態樣。
在本文所描述之任一CAR之一些實施例中，CAR自CAR前體產生，CAR前體包括使CAR靶向細胞膜之訊號肽序列。在一些實施例中，CAR訊號肽包含或為SEQ ID NO: 93之序列：例示性 CAR 訊號序列肽 ( SEQ ID NO : 93 ) 
編碼例示性 CAR 訊號序列肽之例示性核酸序列 ( SEQ ID NO : 94 ) 
在一些實施例中，CAR訊號肽包含與SEQ ID NO: 93之多肽序列至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼CAR訊號肽之核酸序列包含與SEQ ID NO: 94之核酸序列至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。
本文所描述之可用於測定任一CAR之KD
值之多種方法為此項技術中已知的(例如電泳遷移偏移分析、過濾結合分析、表面電漿子共振及生物分子結合動力學分析等)。
本文所描述之任一嵌合抗原受體之一些實施例可進一步包括二聚域及/或肽標籤。抗原結合域
在嵌合抗原受體之一些實施例中，抗原結合域可選自scFv、scFv-Fc、VHH域、VNAR域、(scFv)2
及BiTE。可與本文所描述之嵌合抗原受體一起使用的抗原結合域之其他實例為此項技術中已知的。
單鏈Fv或scFv片段在單一多肽鏈中包括VH
域及VL
域。VH
及VL
一般藉由肽連接子連接。在其他實例中，連接子可為單一胺基酸。在一些實例中，連接子可為化學鍵。參見例如Pluckthun, Antibodies fromE . coli .
In Rosenberg M. & Moore G.P. (編), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, 第269-315頁, Spinger-Verlag, New York, 1994。
scFv-Fc片段包括附接至Fc域之scFv。舉例而言，Fc域可附接至例如scFv之C末端。Fc域可跟隨VL
或VH
，視scFv中可變域之方向而定。Fc域可為此項技術中已知的任何Fc域。在一些實例中，Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域)。
BiTE為在單一多肽中包括兩個VL
及兩個VH
一起形成scFv之抗原結合域，其可各自結合相同抗原上之不同抗原決定基或各自結合不同抗原。參見例如Baeuerle等人，Curr . Opin . Mol . Ther .
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VH
H域為存在於駱駝中之單一單體可變抗體域，且VNAR
域為存在於軟骨魚中之單一單體可變抗體域。VH
H域及VNAR
域描述於例如Van Audenhove等人，EBioMedicine
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在一些實施例中，CAR之抗原結合域為包含或為SEQ ID NO: 95之序列：例示性抗 CD19 抗原結合域 ( SEQ ID NO : 95 ) 
編碼例示性抗 CD19 抗原結合域之核酸 ( SEQ ID NO : 96 ) 
在一些實施例中，抗原結合域包含與SEQ ID NO: 95之多肽序列至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。在一些實施例中，編碼抗原結合域之核酸序列包含與SEQ ID NO: 96之核酸序列至少60%一致、至少65%一致、至少70%一致、至少75%一致、至少80%一致、至少82%一致、至少84%一致、至少85%、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少91%一致、至少92%一致、至少93%一致、至少94%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致之序列。
本文所描述之任一抗原結合域可結合至抗原，其中解離平衡常數(KD
)為小於1×10- 7
M、小於1×10- 8
M、小於1×10- 9
M、小於1×10- 10
M、小於1×10- 11
M、小於1×10- 12
M或小於1×10- 13
M。在一些實施例中，本文所提供之抗原結合蛋白複合物可結合至第一及/或第二抗原，其中KD
為約1×10- 4
M至約1×10- 6
M、約1×10- 5
M至約1×10- 7
M、約1×10- 6
M至約1×10- 8
M、約1×10- 7
M至約1×10- 9
M、約1×10- 8
M至約1×10- 10
M、或約1×10- 9
M至約1×10- 11
M (包括端點)。此項技術中已知的多種不同方法可用於測定抗原結合域之KD
值(例如電泳遷移偏移分析、過濾結合分析、表面電漿子共振及生物分子結合動力學分析等)。抗原
在一些實施例中，本文所描述之嵌合抗原受體可結合至單一抗原(例如本文所描述或此項技術中已知之任一例示性抗原)。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合域可結合至兩個或更多個不同抗原(例如本文所描述或此項技術中已知之任何例示性抗原中之兩種或更多種)。抗原之非限制性實例包括：磷脂肌醇蛋白聚醣-3、HER2、A33抗原、9-O-乙醯基-GD3、CA19-9標記物、BhCG、CA-125標記物、碳酸酐酶IX (MN/CA IX)、鈣網蛋白、CCR5、CCR8、CD2、CD3、CD5、CD16、CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD27、CD28、CD30、CD33、CD38、CD40L、CD44、CD44V6、CD63、CD70、CD84、CD96、CD100、CC123、CD133、CD137、CD138、CD150、CD152 (CTLA-4)、CD160、CRTAM、CS1 (CD319)、DNAM-1 (CD226)、CD229、CD244、CD272 (BTLA)、CD274 (PDL-1、B7H1)、CD279 (PD-1)、CD319、CD352、CRTAM (CD355)、CD358、DR3、GITR (TNFRSF 18)、HVEM、ICOS、LIGHT、LTBR、OX40、KIR之活化形式、NKG2C、NKG2D、NKG2E、一或多種天然細胞毒性受體、NTB-A、PEN-5、癌胚抗原(CEA；CD66e)、橋粒黏蛋白4、E-鈣黏素新抗原決定基、內皮唾酸蛋白、艾普瑞林A2 (ephrin A2) (EphA2)、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、墨角藻糖基GM1、GD2、GD3、GM2、神經節苷脂GM3、Globo H、醣蛋白100、HER2/neu、HER3、HER4、似胰島素生長因子受體1、路易斯-Y (Lewis-Y)、LG、Ly-6、黑素瘤特異性硫酸軟骨素蛋白聚糖(MCSCP)、間皮素、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5b
、MUC7、MUC16、第II型苗勒氏管(Mullerian)抑制性物質(MIS)受體、漿細胞抗原、聚SA、PSCA、PSMA、音蝟因子(SHH)、SAS、STEAP、sTn抗原、TNF-α前體、2B4 (CD244)、β2-整合素、KIR、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR3DL2、KIR-L、KLRGI、LAIR-1、NKG2A、NKR-P IA、Siglec-3、Siglec-7、Siglec-9、TCRa、TCRB、TCR5K、TIM1、LAG3、LAIR1、PD-1H、TIGIT、TIM2及TIM3。抗原之其他實例為此項技術中已知的。CAR 跨膜域
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自內源性多肽之跨膜域或其部分，其中內源性多肽係選自以下之群：T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD28 (亦稱為Tp44)、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37 (亦稱為GP52-40或TSPAN26)、CD64 (亦稱為FCGR1A)、CD80 (亦稱為B7、B7-1、B7.1、BB1、CD28LG、CD28LG1及LAB7)、CD45 (亦稱為PTPRC、B220、CD45R、GP180、L-CA、LCA、LY5、T200及蛋白酪胺酸磷酸酶、C型受體)、CD4、CD5 (亦稱為LEU1及T1)、CD8α (亦稱為Leu2、MAL及p32)、CD9 (亦稱為BTCC-1、DRAP-27、MIC3、MRP-1、TSPAN-29及TSPAN29)、CD16 (亦稱為FCGR3及FCG3)、CD22 (亦稱為SIGLEC-2及SIGLEC2)、CD86 (亦稱為B7-2、B7.2、B70、CD28LG2及LAB72)、CD134 (亦稱為TNFRSF4、ACT35、RP5-902P8.3、IMD16、OX40、TXGP1L及腫瘤壞死因子受體超家族成員4)、CD137 (亦稱為TNFRSF9、4-1BB、CDw137、ILA及腫瘤壞死因子受體超家族成員9)、CD27 (亦稱為S152、S152.LPFS2、T14、TNFRSF7及Tp55)、CD152 (亦稱為CTLA4、ALPS5、CELIAC3、CTLA-4、GRD4、GSE、IDDM12及細胞毒性T淋巴球相關蛋白4)、PD1 (亦稱為PDCD1、CD279、PD-1、SLEB2、hPD-1、hPD-l、hSLE1及計劃性細胞死亡1)、ICOS (亦稱為AILIM、CD278及CVID1)、CD272 (亦稱為BTLA及BTLA1)、CD30 (亦稱為TNFRSF8、D1S166E及Ki-1)、GITR (亦稱為TNFRSF18、RP5-902P8.2、AITR、CD357及GITR-D)、HVEM (亦稱為TNFRSF14、RP3-395M20.6、ATAR、CD270、HVEA、HVEM、LIGHTR及TR2)、DAP10及CD154 (亦稱為CD40LG、CD40L、HIGM1、IGM、IMD3、T-BAM、TNFSF5、TRAP、gp39、hCD40L及CD40配位子)。字母「CD」為前述代表「分化叢集」之句子，例如CD3代表「分化叢集3」。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自內源性哺乳動物(例如人類)多肽(例如上文所列之任一多肽之哺乳動物或人類同源物)之跨膜域或其部分。
用以錨定哺乳動物細胞之脂質雙層(例如質膜)中之內源性多肽的任何跨膜域或其部分適合於如本文所揭示之組合物及方法使用。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自人類CD28之跨膜域或其部分，例如GenBank寄存編號P01747，例如SEQ ID NO: 61之胺基酸153至179。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括跨膜域，其與SEQ ID NO: 61或其部分之胺基酸153至179至少80% (例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%)一致。SEQ ID NO: 61 
在一些實施例中，CAR包含跨膜域及細胞外柄域，其具有序列SEQ ID NO: 97。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括跨膜域及細胞外柄域，其為或包括與SEQ ID NO: 97至少80% (例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%)一致之序列。CD28 柄及 TMD 之例示性多肽序列 ( SEQ ID NO : 97 ) 
在一些實施例中，編碼CAR之核酸包含編碼具有SEQ ID NO: 98之序列的跨膜域及細胞外柄域之核酸序列。在一些實施例中，編碼嵌合抗原受體之核酸包括編碼跨膜域及細胞外柄域之核酸，該跨膜域及細胞外柄域為或包括與SEQ ID NO: 98至少80% (例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%)一致之序列。編碼 CD28 柄及 TMD 之多肽序列之例示性核酸序列 ( SEQ ID NO : 98 ) 
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自人類CD3之跨膜域或其部分，例如GenBank寄存編號P20963，例如SEQ ID NO: 62之胺基酸31至51。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括跨膜域，該跨膜域為或包括與SEQ ID NO: 62之胺基酸31至51至少80% (例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%)一致之序列。SEQ ID NO: 62 
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括SEQ ID NO. 63至69中之任一者之跨膜域或其部分。
LGLLVAGVLVLLVSLGVAIHLCC (SEQ ID NO: 63)；
VAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLL (SEQ ID NO: 64)；
ALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFCVRC (SEQ ID NO: 65)；
LCYLLDGILFIYGVILTALFLRV (SEQ ID NO: 66)；
WVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQ ID NO: 67)；
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ ID NO: 68)；及
ALPAALAVISFLLGLGLGVACVLA (SEQ ID NO: 69)。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括跨膜域，該跨膜域為或包括與SEQ ID NO. 63至69中之任一者至少80% (例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%)一致的序列。
如一般熟習此項技術者所瞭解，某些內源性多肽具有兩個或更多個同功異構物，該等同功異構物至少在其初級多肽序列方面不同。本文所揭示之嵌合抗原受體可包括跨膜域，該跨膜域包括來自內源性跨膜蛋白(例如內源性哺乳動物，例如人類跨膜蛋白)之任何同功異型物的胺基酸序列，該同功異型物包括例如以下之同功異型物(例如人類同功異型物)：T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1或CD154。
在一些實施例中，嵌合抗原受體之跨膜域或其部分包括展現與來自以下內源性哺乳動物(例如人類)跨膜蛋白：T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1或CD154中之一或多者的跨膜域至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，嵌合抗原受體之跨膜域或其部分包括與內源性哺乳動物(例如人類)跨膜蛋白之跨膜域：T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1或CD154相比具有一或多個胺基酸取代、缺失或添加的胺基酸序列。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括合成跨膜域。在一些情況下，合成跨膜域可包括主要疏水性殘基，諸如但不限於白胺酸及纈胺酸。在一些實施例中，合成跨膜域包括在域之各端處的苯丙胺酸、色胺酸及纈胺酸之三重態。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括為嵌合跨膜域之跨膜域，該嵌合跨膜域具有來自兩個或更多個內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽之跨膜域之部分，該等跨膜多肽諸如但不限於T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD33、CD37、CD64、CD80、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD86、CD134、CD137、CD27、CD152、PD1及CD154，使得跨膜域之兩個或更多個部分一起構成功能性跨膜域。在一些實施例中，嵌合跨膜域之此類部分與野生型跨膜域之對應部分相比可包括一或多個胺基酸取代、缺失或添加。
當存在於在哺乳動物細胞中表現之對應內源性多肽中時跨膜域可包括一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個各自穿越脂質雙層之連續胺基酸序列。如此項技術中已知，跨膜域可例如包括至少一個(例如兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)在脂質雙層中具有α螺旋狀二級結構的連續胺基酸序列(當存在於在哺乳動物細胞中表現之對應內源性多肽中時其穿過脂質雙層)。在一些實施例中，跨膜域可包括兩個或更多個在脂質雙層中形成β-筒狀二級結構之連續胺基酸序列(當存在於在哺乳動物細胞中表現之對應內源性多肽中時其各自穿過脂質雙層)。跨膜域之其他實例及特徵為此項技術中已知的。協同刺激域
在正常淋巴細胞中，T細胞活化由兩個類別之細胞內信號傳導域介導。初級信號傳導經由MHC介導之經由T細胞受體(例如TCR/CD3複合物)的抗原依賴性活化來引發。第二或協同刺激訊號係由包括協同刺激信號傳導域之不同受體提供，該協同刺激信號傳導域以抗原非依賴性方式起作用。單獨經由TCR之信號傳導域產生之訊號對於完全T細胞活化而言不夠充分；亦需要協同刺激訊號。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽之協同刺激域或其部分，該跨膜多肽選自以下群組：CD27 (亦稱為S152、S152.LPFS2、T14、TNFRSF7及Tp55)、CD28 (亦稱為Tp44)、4-1BB (亦稱為TNFRSF9、CD137、CDw137、ILA及腫瘤壞死因子受體超家族成員9)、OX40 (亦稱為TNFRSF4、ACT35、RP5-902P8.3、IMD16、CD134、TXGP1L及腫瘤壞死因子受體超家族成員4)、CD30 (亦稱為TNFRSF8、D1S166E及Ki-1)、CD40L (亦稱為CD40LG、CD154、HIGM1、IgM、IMD3、T-BAM、TNFSF5、TRAP、gp39、hCD40L及CD40配位子)、CD40 (亦稱為Bp50、CDW40、TNFRSF5、p50、CD40 (蛋白)及CD40分子)、PD-1 (亦稱為PDCD1、CD279、PD-1、SLEB2、hPD-1、hPD-l、hSLE1及計劃性細胞死亡1)、PD-L1 (亦稱為CD274、B7-H、B7H1、PD-L1、PDCD1L1、PDCD1LG1、PDL1、CD274分子及計劃性細胞死亡1配位子1)、ICOS (亦稱為AILIM、CD278及CVID1)、LFA-1 (亦稱為淋巴細胞功能相關抗原1)、CD2 (亦稱為LFA-2、SRBC、T11及CD2分子)、CD7 (亦稱為GP40、LEU-9、TP41、Tp40及CD7分子)、CD160 (亦稱為BY55、NK1、NK28及CD160分子)、LIGHT (亦稱為TNFSF14、CD258、HVEML、LIGHT、LTg、TR2、TNLG1D及腫瘤壞死因子超家族成員14)、BTLA (亦稱為CD272及BTLA1)、TIM3 (亦稱為HAVCR2、HAVcr-2、KIM-3、TIM3、TIMD-3、TIMD3、TIM-3、CD366及A型肝炎病毒細胞受體2)、CD244 (亦稱為2B4、NAIL、NKR2B4、Nmrk、SLAMF4及CD244分子)、CD80 (亦稱為B7、B7-1、B7.1、BB1、CD28LG、CD28LG1、LAB7及CD80分子、LAG3 (亦稱為CD223及淋巴細胞活化3)、NKG2C (亦稱為CD314、D12S2489E、KLR、NKG2-D、NKG2D及殺傷細胞凝集素類受體K1)、GITR (亦稱為TNFRSF18、RP5-902P8.2、AITR、CD357及GITR-D)、HVEM (亦稱為TNFRSF14、RP3-395M20.6、ATAR、CD270、HVEA、HVEM、LIGHTR及TR2)、TLRl、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLRIO、CARDl l、CD54 (ICAM)、CD83、DAP10、LAT、SLP76、TRIM、ZAP70及B7-H3 (亦稱為CD276、4Ig-B7-H3、B7H3、B7RP-2及CD276分子)。在一些實施例中，單鏈嵌合多肽、單鏈嵌合抗原受體或多鏈嵌合抗原受體包括來自內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽(例如上文所列之任一多肽之哺乳動物或人類同源物)之協同刺激域或其部分
用以提供協同刺激訊號之任何協同刺激域或其部分適合於如本文揭示之組合物及方法使用。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自人類CD28 (例如GenBank寄存編號P01747，例如SEQ ID NO: 70之胺基酸180至220)之協同刺激域或其部分。在一些實施例中，協同刺激域為或包括與SEQ ID NO: 70之胺基酸180至220或其片段至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致(或一致)的序列。SEQ ID NO : 70 ( 胺基酸 180 至 220 加下劃線 ) 
編碼胺基酸人類 CD28 協同刺激域之例示性核酸 ( SEQ ID NO : 99 ) 
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自人類4-1BB (例如GenBank寄存編號Q07011，例如SEQ ID NO: 71之胺基酸214至255)之協同刺激域或其部分。在一些實施例中，協同刺激域為或包括與SEQ ID NO: 75或其部分之胺基酸214至255至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列。SEQ ID NO: 71 
本文所揭示之嵌合抗原受體可包括協同刺激域，該協同刺激域包括來自具有協同刺激域之內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽之任何同功異型物的胺基酸序列，該協同刺激域包括例如以下同功異型物：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3 (包括但不限於此等多肽中之任一者的哺乳動物或人類同源物)。
在一些實施例中，嵌合抗原受體之協同刺激域或其部分包括展現與來自一或多種哺乳動物(例如人類)CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3之協同刺激域至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，嵌合抗原受體之協同刺激域或其部分包括與一或多種內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽之協同刺激域相比具有一或多個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列，該跨膜多肽為：T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3 (包括但不限於此等多肽中之任一者的哺乳動物或人類同源物)。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括協同刺激域，該協同刺激域為具有來自兩個或更多個內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽之協同刺激域部分之嵌合協同刺激域，該等跨膜多肽包括但不限於CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3 (包括但不限於此等多肽中之任一者的哺乳動物或人類同源物)，使得跨膜域之兩個或更多個部分一起構成功能性協同刺激域。在一些實施例中，嵌合協同刺激域之此類部分與野生型協同刺激域之對應部分相比可包括一或多個胺基酸取代、缺失或添加。
本文所揭示之嵌合抗原受體之協同刺激域可為任何適合之長度。舉例而言，協同刺激域長度可為約20個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸、約55個胺基酸、約50個胺基酸、約45個胺基酸、約40個胺基酸、約35個胺基酸、約30個胺基酸或約25個胺基酸(包括端點)；約25個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸、約55個胺基酸、約50個胺基酸、約45個胺基酸、約40個胺基酸、約35個胺基酸或約30個胺基酸(包括端點)；約30個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸、約55個胺基酸、約50個胺基酸、約45個胺基酸、約40個胺基酸或約35個胺基酸(包括端點)；約35個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸、約55個胺基酸、約50個胺基酸、約45個胺基酸或約40個胺基酸(包括端點)；約40個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸、約55個胺基酸、約50個胺基酸或約45個胺基酸(包括端點)；約45個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸、約55個胺基酸或約50個胺基酸(包括端點)；約50個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸、約60個胺基酸或約55個胺基酸(包括端點)；約55個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸、約65個胺基酸或約60個胺基酸(包括端點)；約60個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸、約70個胺基酸或約65個胺基酸(包括端點)；約65個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸、約80個胺基酸、約75個胺基酸或約70個胺基酸(包括端點)；約70個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸、約90個胺基酸、約85個胺基酸或約80個胺基酸(包括端點)；約80個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸、約100個胺基酸、約95個胺基酸或約90個胺基酸(包括端點)；約90個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸、約110個胺基酸或約100個胺基酸(包括端點)；約100個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸、約120個胺基酸或約110個胺基酸(包括端點)；約110個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸、約130個胺基酸或約120個胺基酸(包括端點)；約120個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸、約140個胺基酸或約130個胺基酸(包括端點)；約130個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸、約150個胺基酸或約140個胺基酸(包括端點)；約140個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸、約160個胺基酸或約150個胺基酸(包括端點)；約150個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸、約170個胺基酸或約160個胺基酸(包括端點)；約160個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸、約180個胺基酸或約170個胺基酸(包括端點)；約170個胺基酸至約200個胺基酸、約190個胺基酸或約180個胺基酸(包括端點)；約180個胺基酸至約200個胺基酸或約190個胺基酸(包括端點)；或約190個胺基酸至約200個胺基酸(包括端點)。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括兩個或更多個協同刺激域，例如兩個、三個、四個、五個或更多個協同刺激域。在一些實施例中，兩個或更多個協同刺激域為一致(例如其具有相同胺基酸序列)。在一些實施例中，協同刺激域並不一致。舉例而言，協同刺激域可選自不同內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽，包括但不限於CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40L、CD40、PD-1、PD-L1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160、LIGHT、BTLA、TIM3、CD244、CD80、LAG3、NKG2C或B7-H3 (包括但不限於此等多肽中之任一者的哺乳動物或人類同源物)。在一些實施例中，兩個或更多個協同刺激域彼此不同之處可為一或多個(例如兩個、三個、四個或五個)胺基酸取代、缺失或添加。在一些實施例中，兩個或更多個協同刺激域展現與彼此至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大之序列一致性。基於免疫受體酪胺酸之活化基序 ( ITAM )
ITAM通常在免疫系統之某些細胞表面蛋白之細胞質尾端中重複(例如兩次或多於兩次)，且通常由六個至八個胺基酸分隔開。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自內源性哺乳動物(例如人類)多肽之ITAM或其部分，其中內源性哺乳動物(例如人類)多肽係選自以下群組：CD3ζ (亦稱為CD3 ζ)、CD3δ (CD3 δ)、CD3ε (CD3 ε)、CD3γ (CD3 γ)、DAP12、FCεR1γ (Fc ε受體I γ鏈)、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A (抗原受體複合物相關蛋白α鏈)、CD79B (抗原受體複合物相關蛋白β鏈)及CD66d。
用於介導內源性哺乳動物(例如人類)跨膜蛋白中之信號傳導的任何ITAM或其部分適合根據本文所揭示之組合物及方法使用。在一些實施例中，嵌合抗原受體包括來自人類CD3 ζ之ITAM或其部分(例如GenBank寄存編號P20963，例如存在於SEQ ID NO: 72之胺基酸52至164或其部分；或SEQ ID NO: 73或其部分中之ITAM)。在一些實施例中，ITAM包含與：SEQ ID NO: 72 (或其部分)之胺基酸52至164之序列或SEQ ID NO: 73 (或其部分)的序列至少80% (例如至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、至少99%或100%)一致之序列。SEQ ID NO: 72 
SEQ ID NO : 73 ( 人類 CD3 ζ 信號傳導域 ) 
SEQ ID NO : 74 ( 編碼 SEQ ID NO : 73 之人類 CD3 ζ 信號傳導域之 cDNA ) 
如一般熟習此項技術者所瞭解，某些多肽具有兩個或更多個同功異構物，該等同功異構物至少在其初級多肽序列方面不同。舉例而言，不同同功異構物可由替代性拼接產生。本文所揭示之嵌合抗原受體可包括ITAM，該ITAM包括來自內源性哺乳動物跨膜多肽之任何同功異型物的胺基酸序列，該內源性哺乳動物跨膜多肽具有包括例如：CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B或CD66d之哺乳動物(例如人類)同功異型物之ITAM。
在一些實施例中，嵌合抗原受體之ITAM或其部分包括與內源性哺乳動物(例如人類)跨膜蛋白中之一或多個ITAM的ITAM相比具有一或多個(例如兩個、三個、四個或五個)胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列，該內源性哺乳動物跨膜蛋白為諸如CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B或CD66d。舉例而言，ITAM之酪胺酸及白胺酸或異白胺酸可保留，而分隔其之兩個胺基酸可經不同胺基酸置換。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括為具有來自兩個或更多個內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽之ITAM部分之嵌合ITAM的ITAM，該等內源性哺乳動物跨膜多肽包括但不限於CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B或CD66d (包括但不限於此等多肽中之任一者之哺乳動物或人類同源物)，使得兩個或更多個ITAM部分一起構成功能性ITAM。在一些實施例中，嵌合ITAM之此類部分與野生型ITAM之對應部分相比可包括一或多個胺基酸取代、缺失或添加。
在一些實施例中，嵌合抗原受體包括兩個或更多個ITAM，例如兩個、三個、四個、五個或更多個ITAM。在一些實施例中，兩個或更多個ITAM為一致的(例如其具有相同胺基酸序列)。在一些實施例中，兩個或更多個ITAM並不一致。舉例而言，ITAM可選自不同內源性哺乳動物(例如人類)跨膜多肽，包括但不限於CD3ζ、CD3D、CD3E、CD3G、DAP12、FCER1G、FcRy、FcRft、CD35、CD22、CD79A、CD79B (包括但不限於此等多肽中之任一者之哺乳動物或人類同源物)。在一些實施例中，兩個或更多個ITAM與彼此不同之處可為一或多個胺基酸取代、缺失或添加。CAR 連接子序列
嵌合抗原受體之任何兩個相鄰域可由連接子序列(例如本文所描述或此項技術中已知之任一例示性連接子序列)分隔開。
在一些實施例中，抗原結合域與跨膜域之間的連接子序列可為1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約240個胺基酸、1個胺基酸至約230個胺基酸、1個胺基酸至約220個胺基酸、1個胺基酸至約210個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約190個胺基酸、1個胺基酸至約180個胺基酸、1個胺基酸至約170個胺基酸、1個胺基酸至約160個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約140個胺基酸、1個胺基酸至約130個胺基酸、1個胺基酸至約120個胺基酸、1個胺基酸至約110個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約95個胺基酸、1個胺基酸至約90個胺基酸、1個胺基酸至約85個胺基酸、1個胺基酸至約80個胺基酸、1個胺基酸至約75個胺基酸、1個胺基酸至約70個胺基酸、1個胺基酸至約65個胺基酸、1個胺基酸至約60個胺基酸、1個胺基酸至約55個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、1個胺基酸至約45個胺基酸、1個胺基酸至約40個胺基酸、1個胺基酸至約35個胺基酸、1個胺基酸至約30個胺基酸、1個胺基酸至約25個胺基酸、1個胺基酸至約20個胺基酸、1個胺基酸至約15個胺基酸、1個胺基酸至約10個胺基酸、1個胺基酸至約5個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約240個胺基酸、約5個胺基酸至約230個胺基酸、約5個胺基酸至約220個胺基酸、約5個胺基酸至約210個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約190個胺基酸、約5個胺基酸至約180個胺基酸、約5個胺基酸至約170個胺基酸、約5個胺基酸至約160個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約140個胺基酸、約5個胺基酸至約130個胺基酸、約5個胺基酸至約120個胺基酸、約5個胺基酸至約110個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約95個胺基酸、約5個胺基酸至約90個胺基酸、約5個胺基酸至約85個胺基酸、約5個胺基酸至約80個胺基酸、約5個胺基酸至約75個胺基酸、約5個胺基酸至約70個胺基酸、約5個胺基酸至約65個胺基酸、約5個胺基酸至約60個胺基酸、約5個胺基酸至約55個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約45個胺基酸、約5個胺基酸至約40個胺基酸、約5個胺基酸至約35個胺基酸、約5個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約240個胺基酸、約10個胺基酸至約230個胺基酸、約10個胺基酸至約220個胺基酸、約10個胺基酸至約210個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約190個胺基酸、約10個胺基酸至約180個胺基酸、約10個胺基酸至約170個胺基酸、約10個胺基酸至約160個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約140個胺基酸、約10個胺基酸至約130個胺基酸、約10個胺基酸至約120個胺基酸、約10個胺基酸至約110個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸、約10個胺基酸至約95個胺基酸、約10個胺基酸至約90個胺基酸、約10個胺基酸至約85個胺基酸、約10個胺基酸至約80個胺基酸、約10個胺基酸至約75個胺基酸、約10個胺基酸至約70個胺基酸、約10個胺基酸至約65個胺基酸、約10個胺基酸至約60個胺基酸、約10個胺基酸至約55個胺基酸、約10個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約45個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約35個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約15個胺基酸至約250個胺基酸、約15個胺基酸至約240個胺基酸、約15個胺基酸至約230個胺基酸、約15個胺基酸至約220個胺基酸、約15個胺基酸至約210個胺基酸、約15個胺基酸至約200個胺基酸、約15個胺基酸至約190個胺基酸、約15個胺基酸至約180個胺基酸、約15個胺基酸至約170個胺基酸、約15個胺基酸至約160個胺基酸、約15個胺基酸至約150個胺基酸、約15個胺基酸至約140個胺基酸、約15個胺基酸至約130個胺基酸、約15個胺基酸至約120個胺基酸、約15個胺基酸至約110個胺基酸、約15個胺基酸至約100個胺基酸、約15個胺基酸至約95個胺基酸、約15個胺基酸至約90個胺基酸、約15個胺基酸至約85個胺基酸、約15個胺基酸至約80個胺基酸、約15個胺基酸至約75個胺基酸、約15個胺基酸至約70個胺基酸、約15個胺基酸至約65個胺基酸、約15個胺基酸至約60個胺基酸、約15個胺基酸至約55個胺基酸、約15個胺基酸至約50個胺基酸、約15個胺基酸至約45個胺基酸、約15個胺基酸至約40個胺基酸、約15個胺基酸至約35個胺基酸、約15個胺基酸至約30個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約250個胺基酸、約20個胺基酸至約240個胺基酸、約20個胺基酸至約230個胺基酸、約20個胺基酸至約220個胺基酸、約20個胺基酸至約210個胺基酸、約20個胺基酸至約200個胺基酸、約20個胺基酸至約190個胺基酸、約20個胺基酸至約180個胺基酸、約20個胺基酸至約170個胺基酸、約20個胺基酸至約160個胺基酸、約20個胺基酸至約150個胺基酸、約20個胺基酸至約140個胺基酸、約20個胺基酸至約130個胺基酸、約20個胺基酸至約120個胺基酸、約20個胺基酸至約110個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸、約20個胺基酸至約95個胺基酸、約20個胺基酸至約90個胺基酸、約20個胺基酸至約85個胺基酸、約20個胺基酸至約80個胺基酸、約20個胺基酸至約75個胺基酸、約20個胺基酸至約70個胺基酸、約20個胺基酸至約65個胺基酸、約20個胺基酸至約60個胺基酸、約20個胺基酸至約55個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約45個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約35個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約25個胺基酸、約25個胺基酸至約250個胺基酸、約25個胺基酸至約240個胺基酸、約25個胺基酸至約230個胺基酸、約25個胺基酸至約220個胺基酸、約25個胺基酸至約210個胺基酸、約25個胺基酸至約200個胺基酸、約25個胺基酸至約190個胺基酸、約25個胺基酸至約180個胺基酸、約25個胺基酸至約170個胺基酸、約25個胺基酸至約160個胺基酸、約25個胺基酸至約150個胺基酸、約25個胺基酸至約140個胺基酸、約25個胺基酸至約130個胺基酸、約25個胺基酸至約120個胺基酸、約25個胺基酸至約110個胺基酸、約25個胺基酸至約100個胺基酸、約25個胺基酸至約95個胺基酸、約25個胺基酸至約90個胺基酸、約25個胺基酸至約85個胺基酸、約25個胺基酸至約80個胺基酸、約25個胺基酸至約75個胺基酸、約25個胺基酸至約70個胺基酸、約25個胺基酸至約65個胺基酸、約25個胺基酸至約60個胺基酸、約25個胺基酸至約55個胺基酸、約25個胺基酸至約50個胺基酸、約25個胺基酸至約45個胺基酸、約25個胺基酸至約40個胺基酸、約25個胺基酸至約35個胺基酸、約25個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約250個胺基酸、約30個胺基酸至約240個胺基酸、約30個胺基酸至約230個胺基酸、約30個胺基酸至約220個胺基酸、約30個胺基酸至約210個胺基酸、約30個胺基酸至約200個胺基酸、約30個胺基酸至約190個胺基酸、約30個胺基酸至約180個胺基酸、約30個胺基酸至約170個胺基酸、約30個胺基酸至約160個胺基酸、約30個胺基酸至約150個胺基酸、約30個胺基酸至約140個胺基酸、約30個胺基酸至約130個胺基酸、約30個胺基酸至約120個胺基酸、約30個胺基酸至約110個胺基酸、約30個胺基酸至約100個胺基酸、約30個胺基酸至約95個胺基酸、約30個胺基酸至約90個胺基酸、約30個胺基酸至約85個胺基酸、約30個胺基酸至約80個胺基酸、約30個胺基酸至約75個胺基酸、約30個胺基酸至約70個胺基酸、約30個胺基酸至約65個胺基酸、約30個胺基酸至約60個胺基酸、約30個胺基酸至約55個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約45個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約35個胺基酸、約35個胺基酸至約250個胺基酸、約35個胺基酸至約240個胺基酸、約35個胺基酸至約230個胺基酸、約35個胺基酸至約220個胺基酸、約35個胺基酸至約210個胺基酸、約35個胺基酸至約200個胺基酸、約35個胺基酸至約190個胺基酸、約35個胺基酸至約180個胺基酸、約35個胺基酸至約170個胺基酸、約35個胺基酸至約160個胺基酸、約35個胺基酸至約150個胺基酸、約35個胺基酸至約140個胺基酸、約35個胺基酸至約130個胺基酸、約35個胺基酸至約120個胺基酸、約35個胺基酸至約110個胺基酸、約35個胺基酸至約100個胺基酸、約35個胺基酸至約95個胺基酸、約35個胺基酸至約90個胺基酸、約35個胺基酸至約85個胺基酸、約35個胺基酸至約80個胺基酸、約35個胺基酸至約75個胺基酸、約35個胺基酸至約70個胺基酸、約35個胺基酸至約65個胺基酸、約35個胺基酸至約60個胺基酸、約35個胺基酸至約55個胺基酸、約35個胺基酸至約50個胺基酸、約35個胺基酸至約45個胺基酸、約35個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約250個胺基酸、約40個胺基酸至約240個胺基酸、約40個胺基酸至約230個胺基酸、約40個胺基酸至約220個胺基酸、約40個胺基酸至約210個胺基酸、約40個胺基酸至約200個胺基酸、約40個胺基酸至約190個胺基酸、約40個胺基酸至約180個胺基酸、約40個胺基酸至約170個胺基酸、約40個胺基酸至約160個胺基酸、約40個胺基酸至約150個胺基酸、約40個胺基酸至約140個胺基酸、約40個胺基酸至約130個胺基酸、約40個胺基酸至約120個胺基酸、約40個胺基酸至約110個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約95個胺基酸、約40個胺基酸至約90個胺基酸、約40個胺基酸至約85個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約75個胺基酸、約40個胺基酸至約70個胺基酸、約40個胺基酸至約65個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約40個胺基酸至約55個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約45個胺基酸、約45個胺基酸至約250個胺基酸、約45個胺基酸至約240個胺基酸、約45個胺基酸至約230個胺基酸、約45個胺基酸至約220個胺基酸、約45個胺基酸至約210個胺基酸、約45個胺基酸至約200個胺基酸、約45個胺基酸至約190個胺基酸、約45個胺基酸至約180個胺基酸、約45個胺基酸至約170個胺基酸、約45個胺基酸至約160個胺基酸、約45個胺基酸至約150個胺基酸、約45個胺基酸至約140個胺基酸、約45個胺基酸至約130個胺基酸、約45個胺基酸至約120個胺基酸、約45個胺基酸至約110個胺基酸、約45個胺基酸至約100個胺基酸、約45個胺基酸至約95個胺基酸、約45個胺基酸至約90個胺基酸、約45個胺基酸至約85個胺基酸、約45個胺基酸至約80個胺基酸、約45個胺基酸至約75個胺基酸、約45個胺基酸至約70個胺基酸、約45個胺基酸至約65個胺基酸、約45個胺基酸至約60個胺基酸、約45個胺基酸至約55個胺基酸、約45個胺基酸至約50個胺基酸、約50個胺基酸至約250個胺基酸、約50個胺基酸至約240個胺基酸、約50個胺基酸至約230個胺基酸、約50個胺基酸至約220個胺基酸、約50個胺基酸至約210個胺基酸、約50個胺基酸至約200個胺基酸、約50個胺基酸至約190個胺基酸、約50個胺基酸至約180個胺基酸、約50個胺基酸至約170個胺基酸、約50個胺基酸至約160個胺基酸、約50個胺基酸至約150個胺基酸、約50個胺基酸至約140個胺基酸、約50個胺基酸至約130個胺基酸、約50個胺基酸至約120個胺基酸、約50個胺基酸至約110個胺基酸、約50個胺基酸至約100個胺基酸、約50個胺基酸至約95個胺基酸、約50個胺基酸至約90個胺基酸、約50個胺基酸至約85個胺基酸、約50個胺基酸至約80個胺基酸、約50個胺基酸至約75個胺基酸、約50個胺基酸至約70個胺基酸、約50個胺基酸至約65個胺基酸、約50個胺基酸至約60個胺基酸、約50個胺基酸至約55個胺基酸、約55個胺基酸至約250個胺基酸、約55個胺基酸至約240個胺基酸、約55個胺基酸至約230個胺基酸、約55個胺基酸至約220個胺基酸、約55個胺基酸至約210個胺基酸、約55個胺基酸至約200個胺基酸、約55個胺基酸至約190個胺基酸、約55個胺基酸至約180個胺基酸、約55個胺基酸至約170個胺基酸、約55個胺基酸至約160個胺基酸、約55個胺基酸至約150個胺基酸、約55個胺基酸至約140個胺基酸、約55個胺基酸至約130個胺基酸、約55個胺基酸至約120個胺基酸、約55個胺基酸至約110個胺基酸、約55個胺基酸至約100個胺基酸、約55個胺基酸至約95個胺基酸、約55個胺基酸至約90個胺基酸、約55個胺基酸至約85個胺基酸、約55個胺基酸至約80個胺基酸、約55個胺基酸至約75個胺基酸、約55個胺基酸至約70個胺基酸、約55個胺基酸至約65個胺基酸、約55個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約250個胺基酸、約60個胺基酸至約240個胺基酸、約60個胺基酸至約230個胺基酸、約60個胺基酸至約220個胺基酸、約60個胺基酸至約210個胺基酸、約60個胺基酸至約200個胺基酸、約60個胺基酸至約190個胺基酸、約60個胺基酸至約180個胺基酸、約60個胺基酸至約170個胺基酸、約60個胺基酸至約160個胺基酸、約60個胺基酸至約150個胺基酸、約60個胺基酸至約140個胺基酸、約60個胺基酸至約130個胺基酸、約60個胺基酸至約120個胺基酸、約60個胺基酸至約110個胺基酸、約60個胺基酸至約100個胺基酸、約60個胺基酸至約95個胺基酸、約60個胺基酸至約90個胺基酸、約60個胺基酸至約85個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約60個胺基酸至約75個胺基酸、約60個胺基酸至約70個胺基酸、約60個胺基酸至約65個胺基酸、約65個胺基酸至約250個胺基酸、約65個胺基酸至約240個胺基酸、約65個胺基酸至約230個胺基酸、約65個胺基酸至約220個胺基酸、約65個胺基酸至約210個胺基酸、約65個胺基酸至約200個胺基酸、約65個胺基酸至約190個胺基酸、約65個胺基酸至約180個胺基酸、約65個胺基酸至約170個胺基酸、約65個胺基酸至約160個胺基酸、約65個胺基酸至約150個胺基酸、約65個胺基酸至約140個胺基酸、約65個胺基酸至約130個胺基酸、約65個胺基酸至約120個胺基酸、約65個胺基酸至約110個胺基酸、約65個胺基酸至約100個胺基酸、約65個胺基酸至約95個胺基酸、約65個胺基酸至約90個胺基酸、約65個胺基酸至約85個胺基酸、約65個胺基酸至約80個胺基酸、約65個胺基酸至約75個胺基酸、約65個胺基酸至約70個胺基酸、約70個胺基酸至約250個胺基酸、約70個胺基酸至約240個胺基酸、約70個胺基酸至約230個胺基酸、約70個胺基酸至約220個胺基酸、約70個胺基酸至約210個胺基酸、約70個胺基酸至約200個胺基酸、約70個胺基酸至約190個胺基酸、約70個胺基酸至約180個胺基酸、約70個胺基酸至約170個胺基酸、約70個胺基酸至約160個胺基酸、約70個胺基酸至約150個胺基酸、約70個胺基酸至約140個胺基酸、約70個胺基酸至約130個胺基酸、約70個胺基酸至約120個胺基酸、約70個胺基酸至約110個胺基酸、約70個胺基酸至約100個胺基酸、約70個胺基酸至約95個胺基酸、約70個胺基酸至約90個胺基酸、約70個胺基酸至約85個胺基酸、約70個胺基酸至約80個胺基酸、約70個胺基酸至約75個胺基酸、約75個胺基酸至約250個胺基酸、約75個胺基酸至約240個胺基酸、約75個胺基酸至約230個胺基酸、約75個胺基酸至約220個胺基酸、約75個胺基酸至約210個胺基酸、約75個胺基酸至約200個胺基酸、約75個胺基酸至約190個胺基酸、約75個胺基酸至約180個胺基酸、約75個胺基酸至約170個胺基酸、約75個胺基酸至約160個胺基酸、約75個胺基酸至約150個胺基酸、約75個胺基酸至約140個胺基酸、約75個胺基酸至約130個胺基酸、約75個胺基酸至約120個胺基酸、約75個胺基酸至約110個胺基酸、約75個胺基酸至約100個胺基酸、約75個胺基酸至約95個胺基酸、約75個胺基酸至約90個胺基酸、約75個胺基酸至約85個胺基酸、約75個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約250個胺基酸、約80個胺基酸至約240個胺基酸、約80個胺基酸至約230個胺基酸、約80個胺基酸至約220個胺基酸、約80個胺基酸至約210個胺基酸、約80個胺基酸至約200個胺基酸、約80個胺基酸至約190個胺基酸、約80個胺基酸至約180個胺基酸、約80個胺基酸至約170個胺基酸、約80個胺基酸至約160個胺基酸、約80個胺基酸至約150個胺基酸、約80個胺基酸至約140個胺基酸、約80個胺基酸至約130個胺基酸、約80個胺基酸至約120個胺基酸、約80個胺基酸至約110個胺基酸、約80個胺基酸至約100個胺基酸、約80個胺基酸至約95個胺基酸、約80個胺基酸至約90個胺基酸、約80個胺基酸至約85個胺基酸、約85個胺基酸至約250個胺基酸、約85個胺基酸至約240個胺基酸、約85個胺基酸至約230個胺基酸、約85個胺基酸至約220個胺基酸、約85個胺基酸至約210個胺基酸、約85個胺基酸至約200個胺基酸、約85個胺基酸至約190個胺基酸、約85個胺基酸至約180個胺基酸、約85個胺基酸至約170個胺基酸、約85個胺基酸至約160個胺基酸、約85個胺基酸至約150個胺基酸、約85個胺基酸至約140個胺基酸、約85個胺基酸至約130個胺基酸、約85個胺基酸至約120個胺基酸、約85個胺基酸至約110個胺基酸、約85個胺基酸至約100個胺基酸、約85個胺基酸至約95個胺基酸、約85個胺基酸至約90個胺基酸、約90個胺基酸至約250個胺基酸、約90個胺基酸至約240個胺基酸、約90個胺基酸至約230個胺基酸、約90個胺基酸至約220個胺基酸、約90個胺基酸至約210個胺基酸、約90個胺基酸至約200個胺基酸、約90個胺基酸至約190個胺基酸、約90個胺基酸至約180個胺基酸、約90個胺基酸至約170個胺基酸、約90個胺基酸至約160個胺基酸、約90個胺基酸至約150個胺基酸、約90個胺基酸至約140個胺基酸、約90個胺基酸至約130個胺基酸、約90個胺基酸至約120個胺基酸、約90個胺基酸至約110個胺基酸、約90個胺基酸至約100個胺基酸、約90個胺基酸至約95個胺基酸、約95個胺基酸至約250個胺基酸、約95個胺基酸至約240個胺基酸、約95個胺基酸至約230個胺基酸、約95個胺基酸至約220個胺基酸、約95個胺基酸至約210個胺基酸、約95個胺基酸至約200個胺基酸、約95個胺基酸至約190個胺基酸、約95個胺基酸至約180個胺基酸、約95個胺基酸至約170個胺基酸、約95個胺基酸至約160個胺基酸、約95個胺基酸至約150個胺基酸、約95個胺基酸至約140個胺基酸、約95個胺基酸至約130個胺基酸、約95個胺基酸至約120個胺基酸、約95個胺基酸至約110個胺基酸、約95個胺基酸至約100個胺基酸、約100個胺基酸至約250個胺基酸、約100個胺基酸至約240個胺基酸、約100個胺基酸至約230個胺基酸、約100個胺基酸至約220個胺基酸、約100個胺基酸至約210個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約190個胺基酸、約100個胺基酸至約180個胺基酸、約100個胺基酸至約170個胺基酸、約100個胺基酸至約160個胺基酸、約100個胺基酸至約150個胺基酸、約100個胺基酸至約140個胺基酸、約100個胺基酸至約130個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約100個胺基酸至約110個胺基酸、約120個胺基酸至約250個胺基酸、約120個胺基酸至約240個胺基酸、約120個胺基酸至約230個胺基酸、約120個胺基酸至約220個胺基酸、約120個胺基酸至約210個胺基酸、約120個胺基酸至約200個胺基酸、約120個胺基酸至約190個胺基酸、約120個胺基酸至約180個胺基酸、約120個胺基酸至約170個胺基酸、約120個胺基酸至約160個胺基酸、約120個胺基酸至約150個胺基酸、約120個胺基酸至約140個胺基酸、約120個胺基酸至約130個胺基酸、約130個胺基酸至約250個胺基酸、約130個胺基酸至約240個胺基酸、約130個胺基酸至約230個胺基酸、約130個胺基酸至約220個胺基酸、約130個胺基酸至約210個胺基酸、約130個胺基酸至約200個胺基酸、約130個胺基酸至約190個胺基酸、約130個胺基酸至約180個胺基酸、約130個胺基酸至約170個胺基酸、約130個胺基酸至約160個胺基酸、約130個胺基酸至約150個胺基酸、約130個胺基酸至約140個胺基酸、約140個胺基酸至約250個胺基酸、約140個胺基酸至約240個胺基酸、約140個胺基酸至約230個胺基酸、約140個胺基酸至約220個胺基酸、約140個胺基酸至約210個胺基酸、約140個胺基酸至約200個胺基酸、約140個胺基酸至約190個胺基酸、約140個胺基酸至約180個胺基酸、約140個胺基酸至約170個胺基酸、約140個胺基酸至約160個胺基酸、約140個胺基酸至約150個胺基酸、約150個胺基酸至約250個胺基酸、約150個胺基酸至約240個胺基酸、約150個胺基酸至約230個胺基酸、約150個胺基酸至約220個胺基酸、約150個胺基酸至約210個胺基酸、約150個胺基酸至約200個胺基酸、約150個胺基酸至約190個胺基酸、約150個胺基酸至約180個胺基酸、約150個胺基酸至約170個胺基酸、約150個胺基酸至約160個胺基酸、約160個胺基酸至約250個胺基酸、約160個胺基酸至約240個胺基酸、約160個胺基酸至約230個胺基酸、約160個胺基酸至約220個胺基酸、約160個胺基酸至約210個胺基酸、約160個胺基酸至約200個胺基酸、約160個胺基酸至約190個胺基酸、約160個胺基酸至約180個胺基酸、約160個胺基酸至約170個胺基酸、約170個胺基酸至約250個胺基酸、約170個胺基酸至約240個胺基酸、約170個胺基酸至約230個胺基酸、約170個胺基酸至約220個胺基酸、約170個胺基酸至約210個胺基酸、約170個胺基酸至約200個胺基酸、約170個胺基酸至約190個胺基酸、約170個胺基酸至約180個胺基酸、約180個胺基酸至約250個胺基酸、約180個胺基酸至約240個胺基酸、約180個胺基酸至約230個胺基酸、約180個胺基酸至約220個胺基酸、約180個胺基酸至約210個胺基酸、約180個胺基酸至約200個胺基酸、約180個胺基酸至約190個胺基酸、約190個胺基酸至約250個胺基酸、約190個胺基酸至約240個胺基酸、約190個胺基酸至約230個胺基酸、約190個胺基酸至約220個胺基酸、約190個胺基酸至約210個胺基酸、約190個胺基酸至約200個胺基酸、約200個胺基酸至約250個胺基酸、約200個胺基酸至約240個胺基酸、約200個胺基酸至約230個胺基酸、約200個胺基酸至約220個胺基酸、約200個胺基酸至約210個胺基酸、約210個胺基酸至約250個胺基酸、約210個胺基酸至約240個胺基酸、約210個胺基酸至約230個胺基酸、約210個胺基酸至約220個胺基酸、約220個胺基酸至約250個胺基酸、約220個胺基酸至約240個胺基酸、約220個胺基酸至約230個胺基酸、約230個胺基酸至約250個胺基酸、約230個胺基酸至約240個胺基酸或約240個胺基酸至約250個胺基酸。
在一些實施例中，抗原結合域與跨膜域之間的連接子序列可為或可包括IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 CH1、CH2及CH3域中之一或多者。在一些實施例中，抗原結合域與跨膜域之間的連接子可為或可包括CH2-CH3人類IgG1域。在一些實施例中，CH2-CH3人類IgG1域具有序列：
在一些實施例中，抗原結合域與跨膜域之間的連接子序列可為或包括靠近人類CD8跨膜域之人類CD8細胞外序列之部分。舉例而言，抗原結合域與跨膜域之間的連接子序列可為或包括TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (SEQ ID NO: 76)之人類CD8序列。
在一些實施例中，抗原結合域與跨膜域之間的連接子序列可為或包括人類IgG1鉸鏈序列。在一些實施例中，人類IgG1鉸鏈序列為AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (SEQ ID NO: 77)。
在一些實施例中，連接子序列(例如本文所描述或此項技術中已知之任一連接子序列)可存在於跨膜域與協同刺激域之間。在一些實施例中，連接子序列(例如本文所描述或此項技術中已知之任一連接子序列)可存在於協同刺激域與ITAM之間。核酸
本發明亦提供編碼具有介白素-7受體之α鏈之跨膜域的多種多肽中之任一者之核酸，該介白素-7受體具有一或多個胺基酸修飾、嵌合跨膜蛋白或本文所描述之其他蛋白質。載體
本文提供包括編碼具有介白素-7受體之α鏈之跨膜域的多種多肽中之任一者之任一核酸的載體，該介白素-7受體具有一或多個胺基酸修飾、嵌合跨膜蛋白或本文所提供之其他蛋白質。本發明之「載體」為能夠誘導哺乳動物細胞中重組蛋白(例如嵌合跨膜蛋白、蛋白及/或嵌合抗原受體)之表現的多核苷酸。本文所提供之載體可呈例如圓形或線性化形式。載體之非限制性實例包括質體、SV40載體、腺病毒病毒載體及腺相關病毒(AAV)載體。載體之非限制性實例包括慢病毒載體或反轉錄病毒載體，例如γ反轉錄病毒載體。參見例如Carlens等人，Exp . Hematol .
28(10:1137-1146, 2000；Park等人，Trends Biotechnol .
29(11):550-557, 2011；及Alonso-Camino等人，Mol . Ther . Nucleic Acids
2:e93, 2013。反轉錄病毒載體之非限制性實例包括來源於莫洛尼(Moloney)鼠類白血病病毒、骨髓增生肉瘤病毒、鼠類胚胎幹細胞病毒、鼠類幹細胞病毒、脾臟病灶形成病毒或腺相關病毒之彼等反轉錄病毒載體。反轉錄病毒載體之非限制性實例描述於例如美國專利第5,219,740及6,207,453號；Miller等人，BioTechniques
7:980-990, 1989；Miller,Human Gene Therapy
1:5-14, 1990；Scarpa等人，Virology
180:849-852, 1991；Burns等人，Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A .
90:8033-8037, 1993；及Boris-Lawrie等人，Cur . Opin . Genet . Develop .
3:102-109, 1993中。例示性慢病毒載體描述於例如Wang等人，J . Immunother .
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101:1637-1644, 2003；Verhoeyen等人，Methods Mol . Biol .
506:97-114, 2009；及Cavalieri等人，Blood
102(2):497-505, 2003中。
可插入本文所提供之任一核酸的例示性載體描述於例如Ausubel等人編「Current Protocols in Molecular Biology」 Current Protocols, 1993；及Sambrook等人編「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」，第2版，Cold Spring Harbor Press, 1989中。
在一些實施例中，載體進一步包括可操作地連接至本文所描述之任一核酸的啟動子序列及/或強化子序列。啟動子之非限制性實例包括來自人類細胞巨大病毒(CMV)、小鼠磷酸甘油酯激酶1、多瘤病毒腺病毒、促甲狀腺激素α、波形蛋白、猿猴病毒40 (SV40)、腫瘤壞死因子、β-血球蛋白、α-胎蛋白、γ-血球蛋白、β-干擾素、γ-麩胺醯基轉移酶、人類泛蛋白C (UBC)、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)、甘油醛-3-磷酸酯去氫酶、β-肌動蛋白、金屬硫蛋白II (MT II)、澱粉酶、人類EF1α、組織蛋白酶、MI蕈毒鹼受體、反轉錄病毒LTR (例如人類T細胞白血病病毒HTLV)、AAV ITR、介白素-2、膠原蛋白酶、血小板衍生生長因子、腺病毒E2、基質溶素、鼠類MX、大鼠胰島素、葡萄糖調節蛋白78、人類免疫不全病毒、葡萄糖調節蛋白94、α-2-巨球蛋白、I類MHC、HSP70、增殖蛋白、免疫球蛋白輕鏈、T細胞受體、HLA DQα、HLA DQβ、介白素-2受體、II類MHC、前白蛋白(甲狀腺素運載蛋白)、彈性蛋白酶I、白蛋白、c-fos、類神經細胞黏附分子(NCAM)、H2B組蛋白、大鼠生長激素、人類血清澱粉狀蛋白(SAA)、肌肉肌酐激酶、肌鈣蛋白I (TN I)及長臂猿白血病病毒(GALV)之啟動子。在一些實施例中，啟動子可為誘導型啟動子或組成型啟動子。啟動子之其他實例為此項技術中已知的。
在一些實例中，本文所提供之載體進一步包括poly(A)序列，其可操作地連接至編碼嵌合跨膜蛋白、蛋白或嵌合抗原受體之序列且定位於3'。poly(A)序列之非限制性實例包括來源於牛類生長激素(Woychik等人，Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A .
81(13): 3944-3948, 1984及美國專利第5,122, 458號)；小鼠β-血球蛋白、小鼠α-血球蛋白(Orkin等人，EMBO J .
4(2): 453-456, 1985)；人類膠原蛋白、多瘤病毒(Batt等人，Mol . Cell Biol .
15(9):4783-4790, 1995)；單純疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)；IgG重鏈多腺苷酸化訊號(美國專利申請公開案第2006/0040354號)；人類生長激素(hGH) (Szymanski等人，Mol . Therapy
15(7):1340-1347, 2007)；SV40 poly(A)位點，例如SV40晚期及早期poly(A)位點(Schek等人，Mol . Cell Biol .
12(12):5386-5393, 1992)之彼等poly(A)序列。在一些實施例中，poly(A)序列包括高度保守上游要素(AATAAA)。此AATAAA序列可例如經其他具有與AATAAA之同源性的能夠信號傳導多腺苷酸化之六核苷酸序列取代，該等六核苷酸序列包括例如ATTAAA、AGTAAA、CATAAA、TATAAA、GATAAA、ACTAAA、AATATA、AAGAAA、AATAAT、AAAAAA、AATGAA、AATCAA、AACAAA、AATCAA、AATAAC、AATAGA、AATTAA及AATAAG。參見例如WO 06012414 A2。
poly(A)序列可例如為合成多腺苷酸化位點。參見例如Levitt等人，Genes Dev .
3(7): 1019-1025, 1989。在一些實例中，poly(A)序列可為可溶性神經菌毛素-1之多腺苷酸化訊號：AAATAAAATACGAAATG (SEQ ID NO: 78)。poly ( A )序列之其他實例為此項技術中已知的。載體之其他實例及態樣亦為此項技術中已知的。
在本文所描述之任一載體之一些實施例中，載體可進一步包括編碼嵌合抗原受體之序列。在一些實施例中，嵌合抗原受體可特異性結合至腫瘤抗原(例如選自由以下組成之群的腫瘤抗原：磷脂肌醇蛋白聚醣-3、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125、CD200、CD221、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纖維結合蛋白外域-B、葉酸受體1、GD2、GD3神經節苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、類胰島素生長因子I受體、整合素α5β1、整合素ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺癌細胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGF β 2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2及波形蛋白)。在一些實施例中，嵌合抗原受體包含一或多個共刺激信號傳導域，該等共刺激信號傳導域選自以下群組：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10及DAP-12。在本文所描述之任一載體的一些實例中，載體為慢病毒或腺病毒載體。
本發明亦提供包括第一載體及第二載體之載體組，第一載體包括編碼本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白的序列(例如包括編碼本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白的序列之任一載體)，第二載體包括編碼嵌合抗原受體(例如本文所描述之任一嵌合抗原受體)的序列。在一些實施例中，第一載體及第二載體中之一者或兩者為慢病毒或腺病毒載體。在一些實施例中，第二載體進一步包括可操作地連接至編碼嵌合抗原受體之序列之啟動子序列及/或強化子序列。在一些實施例中，第二載體進一步包括可操作地連接至編碼嵌合抗原受體之序列之poly(A)序列。引入核酸或載體至哺乳動物細胞中之方法
此項技術中已知之多種不同方法可用於引入本文所揭示之任一核酸及載體至哺乳動物細胞(例如本文所描述之任一哺乳動物細胞，例如本文所描述之任一T細胞(例如人類T細胞))中。可用於引入核酸或載體至哺乳動物細胞中之方法之非限制性實例包括脂質體轉染、轉染、電致孔、顯微注射、磷酸鈣轉染、基於樹狀體之轉染、陽離子聚合物轉染、細胞擠壓、聲致穿孔、光學轉染、嵌入、流體動力遞送、磁轉染、病毒轉導(例如腺病毒及慢病毒轉導)及奈米顆粒轉染。引入核酸或載體至哺乳動物細胞中之其他方法為此項技術中已知的。哺乳動物細胞
本發明亦提供包括本文所描述之任一核酸或載體之哺乳動物細胞。本發明亦提供包括本文所描述之任一載體組之哺乳動物細胞。
在一些實施例中，哺乳動物細胞預先自個體(例如人類個體，例如經鑑別或診斷為患有癌症之人類個體)獲得或為預先自個體(例如人類個體，例如經鑑別或診斷為患有癌症之人類個體)獲得的哺乳動物細胞之子細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。
免疫細胞之非限制性實例包括T細胞(例如人類T細胞)。T細胞(例如人類T細胞)之非限制性實例包括例如不成熟胸腺細胞、外周血液淋巴細胞、輔助T細胞、未經處理T細胞、多能TH
細胞前體、淋巴母細胞、Treg
細胞、記憶T細胞、TH
17細胞、TH
22細胞、TH
9細胞、TH
2細胞、TH
1細胞、TH
3細胞、γδ T細胞、αβ T細胞、調節T細胞(Treg細胞)及腫瘤浸潤T細胞。T細胞(例如人類T細胞)之其他實例包括CD8+
T細胞、CD4+
T細胞、記憶T細胞、Treg細胞、自然殺手細胞、B細胞及單核球。哺乳動物細胞之其他實例包括肥大細胞、巨噬細胞、嗜中性白血球、樹突狀細胞、嗜鹼性球、嗜酸性球及自然殺手細胞。組合物及套組
本發明亦提供包括本文所描述之任一核酸、載體、核酸組、載體組或哺乳動物細胞之組合物(例如醫藥組合物)。舉例而言，本文提供包括本文所描述之任一核酸或核酸組或本文所提供之任一載體或載體組及醫藥學上可接受的溶劑或載劑之組合物。
在一些實施例中，組合物可為本文所描述之包含編碼本文所描述之任一嵌合跨膜蛋白及/或任一嵌合抗原受體之核酸的任一哺乳動物細胞(例如本文所描述之預先自個體(例如經鑑別或診斷為患有癌症之個體)獲得的任一哺乳動物細胞)。在包括本文所描述之任一哺乳動物細胞之組合物中，組合物可進一步包括細胞培養基或醫藥學上可接受之緩衝液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)。包括本文所描述之任一哺乳動物細胞之組合物可經調配用於靜脈內或動脈內投與。
亦提供包括本文所描述之組合物(例如醫藥組合物)中任一者之一或多者的套組。在一些實施例中，套組可進一步包括用於進行本文所描述之任一方法之說明。治療個體之癌症的方法
本發明亦提供治療個體(例如人類、小鼠、兔、大鼠、馬、狗、猴子或猿)之癌症之方法，該等方法包括投與治療有效量之任一哺乳動物細胞，該等哺乳動物細胞包括編碼具有介白素-7受體之α鏈的跨膜域(其具有一或多個如本文所描述胺基酸修飾)之多肽之核酸、如本文所描述嵌合跨膜蛋白或兩者(及視情況選用之包括本文所描述的任一嵌合抗原受體之核酸)。在此等方法之一些實例中，哺乳動物細胞為T細胞(例如CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、記憶T細胞、Treg細胞及天然殺手T細胞)。在一些實例中，哺乳動物細胞(例如本文所描述之任一哺乳動物細胞)為預先自個體(例如已經鑑別或診斷為患有癌症(例如本文所描述之任一癌症)的個體)獲得之哺乳動物細胞。此等方法之一些實施例進一步包括自個體獲得哺乳動物細胞。
此等方法之一些實施例進一步包括引入編碼本文所描述之單鏈嵌合抗原受體或本文所描述之多鏈嵌合抗原受體的核酸至哺乳動物細胞(例如本文所描述或此項技術中已知之任一哺乳動物細胞)中以產生向個體投與之哺乳動物細胞。
可使用本文所提供之任一方法治療之癌症之非限制性實例包括：肝細胞癌、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓白血病、腎上腺皮質癌、卡堡氏肉瘤(Kaposi sarcoma)、淋巴瘤、肛門癌、闌尾癌、畸胎樣/橫紋腫瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、支氣管腫瘤、類癌、心臟腫瘤、宮頸癌、脊索瘤、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓增生性腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽管瘤、膽管癌、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、敏感性神經胚細胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、眼癌、輸卵管癌、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌、胃腸基質瘤、生殖細胞腫瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、心臟癌、肝癌、下咽癌、胰臟癌、腎臟癌、喉癌、慢性骨髓性白血病、唇部及口腔癌、肺癌、黑素瘤、梅克爾細胞癌(Merkel cell carcinoma)、間皮瘤、口腔癌、口部癌、骨肉瘤、卵巢癌、陰莖癌、咽部癌、前列腺癌、直腸癌、唾液腺癌、皮膚癌、小腸癌、軟組織肉瘤、胃癌、睪丸癌、咽喉癌、甲狀腺癌、尿道癌、子宮癌、陰道癌及外陰癌。
在此等方法中之任一者之一些實施例中，該等方法引起個體的腫瘤負荷減小(例如腫瘤塊及/或實體腫瘤體積減小)。舉例而言，本文所描述之任一方法可引起個體之腫瘤負荷減小至少約1%至約99% (例如約1%至約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約2%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約3%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約5%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%或約10% (包括端點)；約10%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%或約15% (包括端點)；約15%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%或約20% (包括端點)；約20%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%或約25% (包括端點)；約25%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%或約30% (包括端點)；約30%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%或約35% (包括端點)；約35%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%或約40% (包括端點)；約40%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%或約45% (包括端點)；約45%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%或約50% (包括端點)；約50%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%或約55% (包括端點)；約55%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%或約60% (包括端點)；約60%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%或約65% (包括端點)；約65%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%或約70% (包括端點)；約70%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%或約72% (包括端點)；約72%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%或約74% (包括端點)；約74%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%或約76% (包括端點)；約76%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%或約78% (包括端點)；約78%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%或約80% (包括端點)；約80%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%或約82% (包括端點)；約82%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%或約84% (包括端點)；約84%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%或約86% (包括端點)；約86%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%或約88% (包括端點)；約88%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%或約90% (包括端點)；約90%至約99%、約98%、約96%、約94%或約92% (包括端點)；約92%至約99%、約98%、約96%或約94% (包括端點)；約94%至約99%、約98%或約96% (包括端點)；或約96%至約99%或約98% (包括端點)) (例如與治療之前個體之腫瘤負荷相比)。
在一些實施例中，該等方法引起個體之癌症發展速率降低。舉例而言，本文所描述之任一方法可引起個體之癌症發展速率降低至少約1%至約99% (例如約1%至約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約2%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約3%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約5%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%或約10% (包括端點)；約10%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%或約15% (包括端點)；約15%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%或約20% (包括端點)；約20%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%或約25% (包括端點)；約25%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%或約30% (包括端點)；約30%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%或約35% (包括端點)；約35%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%或約40% (包括端點)；約40%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%或約45% (包括端點)；約45%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%或約50% (包括端點)；約50%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%或約55% (包括端點)；約55%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%或約60% (包括端點)；約60%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%或約65% (包括端點)；約65%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%或約70% (包括端點)；約70%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%或約72% (包括端點)；約72%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%或約74% (包括端點)；約74%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%或約76% (包括端點)；約76%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%或約78% (包括端點)；約78%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%或約80% (包括端點)；約80%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%或約82% (包括端點)；約82%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%或約84% (包括端點)；約84%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%或約86% (包括端點)；約86%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%或約88% (包括端點)；約88%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%或約90% (包括端點)；約90%至約99%、約98%、約96%、約94%或約92% (包括端點)；約92%至約99%、約98%、約96%或約94% (包括端點)；約94%至約99%、約98%或約96% (包括端點)；或約96%至約99%或約98% (包括端點)) (例如與治療之前的個體或患有相同癌症且不施用治療或施用不同治療之對照個體或對照個體群體之癌症發展速率相比)。
在此等方法中之任一者之一些實施例中，該等方法引起個體之癌症之存活時間增加。舉例而言，本文所描述之任一方法可引起個體之癌症之存活時間增加約1%至約800% (例如約1%至約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%、約100%、約80%、約60%、約40%、約20%、約10%或約5% (包括端點)；約5%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%、約100%、約80%、約60%、約40%、約20%或約10% (包括端點)；約10%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%、約100%、約80%、約60%、約40%或約20% (包括端點)；約20%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%、約100%、約80%、約60%或約40% (包括端點)；約40%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%、約100%、約80%或約60% (包括端點)；約60%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%、約100%、約80% (包括端點)；約80%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%、約150%或約100% (包括端點)；約100%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%、約200%或約150% (包括端點)；約150%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%、約250%或約200% (包括端點)；約200%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%、約300%或約250% (包括端點)；約250%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%、約350%或約300% (包括端點)；約300%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%、約400%或約350% (包括端點)；約350%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%、約450%或約400% (包括端點)；約400%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%、約500%或約450% (包括端點)；約450%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%、約550%或約500% (包括端點)；約500%至約800%、約750%、約700%、約650%、約600%或約550% (包括端點)；約550%至約800%、約750%、約700%、約650%或約600% (包括端點)；約600%至約800%、約750%、約700%或約650% (包括端點)；約650%至約800%、約750%或約700% (包括端點)；約700%至約800%或約750% (包括端點)；或約750%至約800% (包括端點)) (例如與患有相同癌症且不接受治療或接受不同治療之對照個體或對照個體群體之存活時間相比)。
本發明亦提供誘導有需要之個體之癌細胞的細胞死亡之方法，其包括向個體投與治療有效量之本文所描述之任一哺乳動物細胞。
本發明亦提供降低患有癌症之個體出現轉移或再轉移之風險的方法，其包括向個體投與治療有效量之本文所描述之任一哺乳動物細胞。舉例而言，本文所描述之任一方法可引起個體出現轉移或再轉移之風險降低至少約1%至約99% (例如約1%至約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約2%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約3%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5% (包括端點)；約5%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%或約10% (包括端點)；約10%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%或約15% (包括端點)；約15%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%或約20% (包括端點)；約20%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%或約25% (包括端點)；約25%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%或約30% (包括端點)；約30%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%或約35% (包括端點)；約35%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%或約40% (包括端點)；約40%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%或約45% (包括端點)；約45%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%、約55%或約50% (包括端點)；約50%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%、約60%或約55% (包括端點)；約55%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%、約65%或約60% (包括端點)；約60%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%、約70%或約65% (包括端點)；約65%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%、約72%或約70% (包括端點)；約70%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%、約74%或約72% (包括端點)；約72%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%、約76%或約74% (包括端點)；約74%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%、約78%或約76% (包括端點)；約76%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%、約80%或約78% (包括端點)；約78%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%、約82%或約80% (包括端點)；約80%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%、約84%或約82% (包括端點)；約82%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%、約86%或約84% (包括端點)；約84%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%、約88%或約86% (包括端點)；約86%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%、約90%或約88% (包括端點)；約88%至約99%、約98%、約96%、約94%、約92%或約90% (包括端點)；約90%至約99%、約98%、約96%、約94%或約92% (包括端點)；約92%至約99%、約98%、約96%或約94% (包括端點)；約94%至約99%、約98%或約96% (包括端點)；或約96%至約99%或約98% (包括端點)) (例如與患有相同癌症且不施用治療或施用不同治療之對照個體或對照個體群體出現轉移或再轉移之風險相比)。實例
本發明進一步描述於以下實例中，該等實例不限制申請專利範圍中所描述之本發明之範疇。實例 1 . 經修飾 IL7R α 蛋白在初級 T 細胞之表面上表現
將初級T細胞用抗N-末端His標籤之抗螢光染料結合抗體染色以偵測經突變IL7Rα蛋白之表面表現。簡言之，在經慢病毒載體轉導後72小時採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗His (APC；1:100)/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。使用BD LSRII Fortessa儀器進行流式細胞量測術且使用FlowJo V10軟體分析(圖3，所展示之資料來自活化後第6天)。藉由流式細胞量測術偵測GFP (FITC)用作表現之代替，此係因為GFP基因在與IL7Ra突變體蛋白相同之轉基因內編碼且藉由T2A自分裂肽序列分隔。GFP之偵測及His標籤之表面偵測為線性的。實例 2 . 嵌合跨膜蛋白在初級 T 細胞之表面上表現
mbIL15-IL17Rα-WT為嵌合跨膜蛋白，其具有野生型IL7Rα跨膜及細胞內域、IL15Rα細胞外域(包括sushi域)、連接子及IL15多肽域(參見圖4中所展示之構築體之示意圖)。mbIL15-IL17Rα-Ins_PPCL為嵌合跨膜蛋白，其具有野生型IL7Rα細胞內域、IL7Rα跨膜域(其中在成熟野生型IL7Rα之胺基酸位置4與5之間插入PPCL之序列)、IL15Rα細胞外域(包括sushi域)、連接子及IL15多肽域。
初級T細胞用抗IL15Rα之螢光染料結合抗體染色以偵測嵌合mbIL15蛋白之表面表現。簡言之，在經慢病毒載體轉導後72小時採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗IL15Rα (APC；1:100)/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。使用BD LSRII Fortessa儀器進行流式細胞量測術且使用FlowJo V10軟體分析(圖5，所展示之資料來自活化後第6天)。藉由流式細胞量測術偵測GFP (FITC)用作表現之代替，此係因為GFP基因在與IL7Rα突變體及嵌合mbIL15蛋白相同之轉基因內編碼且藉由T2A自分裂肽序列分隔。GFP之偵測及IL15Rα之表面表現為線性的。實例 3 . 表現 IL7 突變體受體之 T 細胞維持 CD62L ( Tscm 及 Tcm 群體 ) 之高度表現及 CD25 之可變表現
初級人類T細胞經慢病毒載體轉導以表現圖6A之x軸上所展示的特異性IL7Rα蛋白中之一者或特異性嵌合膜蛋白中之一者。簡言之，在各時間點採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (PE；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)及抗CD62L (BV605；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。CD45RO及CD62L之相對表現水平用於確定細胞之分化狀態。Teff =效應T細胞。Tem =效應記憶T細胞。Tcm =中樞記憶T細胞。Tscm =幹細胞記憶T細胞。圖6A展示當初級人類T細胞經指示蛋白轉導時不同類型之CD8+ T細胞之百分比。
在活化後15天評估在表現不同IL7Rα突變體蛋白及嵌合跨膜蛋白之初級人類T細胞中PD-1 (圖6B，左邊圖示)或CD25 (圖6B，右邊圖示)之表現。簡言之，在各時間點採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (PE；1:100)、抗CD25 (BV421；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)、抗CD62L (BV605；1:200)及抗PD1 (PE-Cy7；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。未經轉導之(「UT」)對照T細胞提供PD-1及CD25表現之基礎水平。實例 4 . IL7R α 跨膜域突變在初級 T 細胞中誘導 STAT5 之磷酸化
初級人類T細胞中保持未經轉導(「UT」)或經慢病毒轉導之磷酸化STAT5之水平係藉由西方墨點法(頂部西方墨點)評估，該等慢病毒編碼圖7A中所展示的特異性IL7Rα蛋白中之一者或特異性嵌合膜蛋白中之一者。全細胞裂解物係在活化後14天在血清/細胞介素缺乏條件下16至20小時以後由T細胞製備。經100 ng/mL可溶性IL2刺激15 min之UT T細胞充當陽性對照(+刺激)，而未經刺激UT細胞(-刺激)提供基礎磷酸基/蛋白水平。對照蛋白(α微管蛋白)亦藉由西方墨點法(底部西方墨點)評估。
初級人類T細胞中各種IL7Rα突變體蛋白及嵌合跨膜蛋白之表現在活化後第15天評估(圖7B)。GFP資料以%表現(頂部長條圖)及平均螢光強度(底部長條圖)形式展示。藉由流式細胞量測術偵測GFP表現用於追蹤在14天培養週期內(細胞在活化後第1天經轉導)表現各種IL7Rα突變體或嵌合跨膜蛋白之細胞的相對數量。實例 5 . IL7R α 跨膜域突變與 CD19 CAR 一起共感染初級 T 細胞
評估CD19 CAR (1928z嵌合抗原受體)、EKV或Ins_CPT IL7Rα突變體蛋白、mbIL15-17Rα Ins_PPCL嵌合跨膜蛋白及mbIL15蛋白在初級T細胞之表面上的表現。圖8A及圖8B示意性展示構築體及其在初級T細胞上之共表達。
初級T細胞分別經存在於IL7Rα突變體及CAR之N末端處的抗His及Myc標記之螢光染料結合抗體染色或經抗IL15Rα抗體染色以偵測嵌合mbIL15蛋白之表面表現。簡言之，在經慢病毒載體轉導後72小時採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗His (APC；1:100)或抗IL15Rα (APC；1:100)及抗Myc (PE；1:100)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。使用BD LSRII Fortessa儀器進行流式細胞量測術且使用FlowJo V10軟體分析(圖8C，所展示之資料來自活化後第6天)。GFP在與IL7Ra突變體及嵌合mbIL15蛋白相同之轉基因內表現，藉由流式細胞量測術偵測GFP (FITC)可用作表現之代替。雙重陽性(Myc-PE+，FITC)群體展現初級人類T細胞上之兩種蛋白之共表現。
自第6天至第14天培養物中表現mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL及mbIL15之細胞的數量減少(圖8D)。相比而言，表現IL7Rα_EKV、IL7Rα_Ins_CPT及1928z嵌合抗原受體之細胞的數量在相同週期內相對保持恆定。藉由流式細胞量測術偵測GFP表現及N-末端Myc標籤(Myc-PE；於FACS緩衝液中1:100持續30 min)用於在14天培養週期(細胞在活化後第1天經轉導)分別追蹤表現各種IL7Rα突變體或嵌合跨膜蛋白及CD19 CAR之細胞的相對數量。
在活化後第14天表現各種IL7Ra突變體及嵌合跨膜蛋白之CAR T細胞維持較少分化記憶表型(圖9)。簡言之，在活化後14天採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (FITC；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)及抗CD62L (BV605；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。使用BD LSRII Fortessa儀器進行流式細胞量測術且使用FlowJo V10軟體分析。在Myc+、CD8+群體上閘控T細胞記憶子組群體(CD62L與CD45RO)。Teff =效應T細胞。Tem =效應記憶T細胞。Tcm =中樞記憶T細胞。Tscm =幹細胞記憶T細胞。
評估初級人類T細胞中保持未經轉導或經編碼所展示之IL7Rα蛋白中之一者或所展示之嵌合跨膜蛋白中之一者(存在及不存在CAR下)的慢病毒載體轉導之磷酸化STAT5及STAT3之水平以及BCL-XL之總蛋白水平。全細胞裂解物係在活化後14天在血清/細胞介素缺乏條件下16至20小時以後由T細胞製備。經100 ng/mL可溶性IL2刺激15 min之UT T細胞充當陽性對照(+刺激)，而未經刺激UT細胞(-刺激)提供基礎磷酸基/蛋白水平。實例 6 . 在連續曝露於抗原後表現 IL7R α 突變體之 CAR - T 細胞相對於對照 CAR - T 細胞展現優良擴增
評估在連續曝露於1:1比率效應物:目標(E:T)比率之抗原後表現IL7Rα突變體之CAR T細胞相比於對照CAR之擴增。在活化後第14天，在第0天在GRex 24孔盤之各孔中針對5×105
個Nalm6 B細胞接種5×105
個CAR+ T細胞。重複三次接種細胞。在第4、7、11、14及17天以1:1比率基於如藉由流式細胞量測術所計算之各孔中CAR+細胞之數量將Nalm6 B細胞及新鮮細胞培養基添加回培養盤。在整個21天分析中相對於未經轉導及單獨腫瘤對照所有表現IL7Rα突變體之細胞均維持腫瘤細胞之100%裂解。在第4、7、11、17及21天藉由流動式細胞量測分析測定CAR+ T細胞之倍數擴增。簡言之，在各時間點採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (PE；1:100)、抗CD3 (BV421；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)、抗CD62L (BV605；1:200)及抗PD1 (PE-Cy7；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。考慮到在各條件下定量細胞數量在流動式細胞量測分析之前將計數珠粒(50 μL，123count™ eBeads，Thermo Fisher Scientific)直接添加至各管子。此等數量用於追蹤CAR+擴增速率且用於確定待以1:1 E:T比率添加回各孔之Nalm6目標細胞的數量。此等資料展示在連續曝露於1:1比率效應物:目標(E:T)比率之抗原後與對照CAR相比表現IL7Rα突變體之CAR T細胞展現優良擴增(圖11A及11B)。
評估基於螢光素酶之隔夜殺傷分析中CD19+ Nalm6 B細胞(圖12A)及CD19-K562細胞(圖12B)之裂解百分比。自21天連續殺傷分析(如本文所描述)末期獲得T細胞且Nalm6或CD19-K562細胞系經工程改造以表現螢火蟲螢光素酶(fLuc+)。每孔接種1×104
個Nalm6或K562細胞，且根據% CAR+以各種E:T比率接種T細胞。細胞裂解係基於存活Nalm6 B或K652細胞之相對光單位(RLU)強度量測且將其標準化為單獨Nalm6 K562對照。
在連續遭遇抗原22天後在較低E:T比率下表現IL7Rα突變體之T細胞相對於對照CD19 CAR展現CD19+ Nalm6 B細胞之優良殺傷(圖12A)。如所預期，供體及壽命相當(活化後第35天)UT T細胞在21天連續殺傷分析未存活，因此本文未分析。
在較高E:T比率(20:1及6:1)下表現IL7Rα_EKV之CAR T細胞展現提高的抗CD19-K562之脫靶細胞毒性，而表現其他細胞介素受體變異體之CAR-T細胞展現於對照CAR類似的脫靶細胞毒性(圖12B)。
在連續曝露於抗原之後第14天評估表現IL7Rα突變體之CAR T細胞之記憶型分化(圖13)。在第0、4、7、11、14、17及21天將Nalm6 B細胞添加至細胞培養物。Teff =效應T細胞。Tem =效應記憶T細胞。Tcm =中樞記憶T細胞。Tscm =幹細胞記憶T細胞。簡言之，在各時間點採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (PE；1:100)、抗CD3 (BV421；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)、抗CD62L (BV605；1:200)及抗PD1 (PE-Cy7；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。此等資料展示在連續曝露於抗原之後第14天表現IL7Rα突變體之CAR T細胞維持較少分化記憶表型。實例 7 . 在單次曝露於抗原後表現 IL7R α 突變體之 CAR - T 細胞相對於對照 CAR - T 細胞展現優良擴增
在以1:3 E:T比率單次曝露於目標後評估表現IL7Rα突變體之CAR T細胞相比於對照CAR之擴增(圖14A及14B)。在活化後第14天，在第0天在GRex 24孔盤之各孔中相對於1.5×106
個Nalm6 B細胞接種5×105
個CAR+T細胞。重複三次接種細胞。在整個21天分析中相對於未經轉導及單獨腫瘤對照所有細胞均維持腫瘤細胞之100%裂解。在第4、7、11、17及21天藉由流動式細胞量測分析測定CAR+ T細胞之倍數擴增。簡言之，在各時間點採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (PE；1:100)、抗CD3 (BV421；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)、抗CD62L (BV605；1:200)及抗PD1 (PE-Cy7；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。考慮到在各條件下定量細胞數量在分析之前將計數珠粒(50 μl，123count™ eBeads)直接添加至各管子。此等資料展示在單次曝露於目標後表現IL7Rα突變體之CAR T細胞相對於對照CAR展現優良擴增。
在連續曝露於抗原之後第14天評估表現IL7Rα突變體之CAR-T細胞之記憶型分化(圖15)。在第0天將Nalm6 B細胞添加至細胞培養物。簡言之，在各時間點採集至多1×106
個細胞且在4℃下將該等細胞用抗Myc (PE；1:100)、抗CD3 (BV421；1:100)、抗CD4 (BV785；1:200)、抗CD8 (PE；1:200)、抗CD45RO (APC；1:200)、抗CD62L (BV605；1:200)及抗PD1 (PE-Cy7；1:200)抗體/PBS + 2% FBS (FACS緩衝液)培育30分鐘。此等資料展示在單次曝露於抗原之後第14天表現IL7Rα突變體之CAR T細胞維持較少分化記憶表型。Teff =效應T細胞。Tem =效應記憶T細胞。Tcm =中樞記憶T細胞。Tscm =幹細胞記憶T細胞。實例 8 . 用 Nalm6 腫瘤活體內測試 CD19 CAR + IL7Ra CPT 、 MCP 或 PPCL 。
CD19+急性淋巴母細胞白血病(ALL)細胞系Nalm6購自ATCC且經螢光素酶轉導以允許生物發光成像。在實驗之第一天將0.5×106
個Nalm6_luc細胞植入NOD-SCID IL2Rgammanull
(NSG)小鼠中。在第6天(及其後每三至四天)對動物腹膜內注射D-螢光素(150 mg/kg具有15 mg/mL來自Promega之受質)且在IVIS S5 Lumina (PerkinElmer，MA)成像器上量測生物發光(BLI)。使用Living Image 4.3.1 (PerkinElmer，MA)分析圖像以定量全部主體、固定體積ROI，且計算總流量(光子/秒)並展示於下表1中。在實驗之第6天，亦將動物劃分至六個動物之群組(除僅存在三個動物之媒劑組外)中且對該等動物給藥未經轉導的T細胞或攜帶單獨CD19 CAR、CD19 CAR + IL7RαCPT、CD19 CAR + IL7RαMCP或CD19 CAR + IL7RαPPCL之T細胞。所有接受CAR T細胞之動物均接受0.1×106
個CAR T細胞之應力測試劑量，且所有動物均接受相同總數之T細胞。
此等實驗中所用之各CD19 CAR、CD19 CAR + IL7RαCPT、CD19 CAR + IL7RαMCP或CD19 CAR + IL7RαPPCL之蛋白及DNA序列展示如下。CD19 CAR DNA (SEQ ID NO: 100) 
CD19 CAR 蛋白 ( SEQ ID NO : 101 ) 
CD19 CAR + IL7RA_CPT DNA (SEQ ID NO: 102) 
CD19 CAR + IL7RA_CPT 蛋白 (SEQ ID NO: 103) 
CD19CAR + IL7RaMCP DNA (SEQ ID NO: 104) 
CD19CAR + IL7RaMCP 蛋白 (SEQ ID NO: 105) 
CD19CAR + IL7RaPPCL DNA (SEQ ID NO: 106) 
CD19CAR + IL7RaPPCL 蛋白 (SEQ ID NO: 107) 
如下文所描述計算腫瘤生長延緩及生命期之延長百分比。
腫瘤生長延緩(TGD或T-C) — TGD為群組終點。腫瘤生長延緩以天數單位表示且根據群組中之小鼠達至指定腫瘤負荷所需要之中位時間(達至評估尺寸之時間，TES)計算。其係如下計算：
TGD =中位TES經治療-中位TES對照
其中對照為UT T細胞。
%生命期延長(ILS) - %ILS為群組終點。其係如下計算：
來自此等實驗之資料展示於圖16至18中。未經轉導之T細胞不具有抗癌活性。在0.1×106
個細胞之應力測試劑量下，單獨CD19 CAR延長動物之生命期68.8%，但不延長腫瘤生長延緩。經CD19 CAR + IL7RaCPT治療為最有效的，其中相對於媒劑治療生命期延長175%且腫瘤生長延緩＞ 29.2天。經CD19 CAR + IL7RaMCP及CD19 CAR + IL7RaPPT治療均有效且各延長生命期＞ 175%以及分別延緩腫瘤生長＞ 22.0天及＞ 17.9天。表 1 . 
實例 9 . 使用 GPC3 CAR + IL7RaCPT 之 活體外連續殺傷實驗
將相等數量之GPC3 CAR陽性T細胞及GPC3 CAR + IL7Rα CPT陽性T細胞與來自American Type Culture Company (ATCC，Manassas，VA)之Hep3B目標細胞共培養(0.5×106
個CAR T細胞與0.5×106
個Hep3B目標細胞一起共培養)。IL7Ra CPT蛋白與實例8中所描述之蛋白相同。每週每三至四天添加目標細胞兩次(以1:1 CAR T細胞比目標Hep3B細胞比率)持續35天且CAR T細胞之數量藉由計數珠粒及流式細胞量測術量測。添加目標細胞直至第35天且在第35天之後一週一次量測CAR T細胞之數量。CAR T細胞數量展示於下表2中。
GPC3 CAR及GPC3 CAR + IL7RαCPT之蛋白及DNA序列展示如下。GPC3 CAR DNA (SEQ ID NO: 108) 
GPC3 CAR 蛋白 (SEQ ID NO: 109) 
GPC3CAR + IL7RaCPT (SEQ ID NO: 110) 
GPC3CAR + IL7RaCPT 蛋白 (SEQ ID NO: 111) 
來自此實驗之資料展示於圖19中。GPC3 CAR T細胞之擴增在第10天達至峰值，其中超過起始細胞密度最多2.4倍。亦表現IL7Rα CPT之GPC3 CAR T細胞在第28天擴增超過基線高達40倍且僅在不再添加目標之第31天之後停止擴增。表 2 
其他實施例
應理解，儘管本發明已結合其實施方式加以描述，但前述描述意欲說明且不限制由所附申請專利範圍之範疇限定的本發明之範疇。其他態樣、優勢及修改在以下申請專利範圍之範疇內。
圖1為IL7Rα之示意圖。ECD =細胞外域。TMD =跨膜域。ICD =細胞內域。指示相關區、基序及胺基酸修飾。
圖2為IL7Rα之示意圖，展示相關基序及信號傳導活化機制。
圖3為展示經修飾IL7Rα蛋白在初級T細胞之表面上的表現之流式細胞量測資料之集合。所展示之資料來自活化後第6天。
圖4為例示性嵌合跨膜蛋白之示意圖。指示相關基序連同信號傳導活化機制。藉由箭頭指示IL15Rα sushi域。
圖5為流式細胞量測資料之集合，其展示嵌合跨膜蛋白在初級T細胞之表面上的表現。所展示之資料來自活化後第6天。
圖6A為展示當初級人類T細胞經慢病毒載體轉導以表現特異性IL7Rα蛋白中之一者或所展示之特異性嵌合膜蛋白中之一者時不同類型的CD8+
T細胞之百分比之圖式。
圖6B為兩個流式細胞量測術資料之圖式的集合，其展示在活化後第15天PD-1 (左邊圖示)或CD25 (右邊圖示)在表現不同IL7Rα突變體蛋白及初級人類T細胞中之嵌合跨膜蛋白的初級人類T細胞中之表現。
圖7A為展示在保持未經轉導(「UT」)或經編碼特異性IL7Rα蛋白中之一者或所展示之特異性嵌合膜蛋白中之一者的慢病毒轉導之初級人類T細胞中磷酸化STAT5之水平的免疫墨點。
圖7B為展示在活化後第15天各種IL7Rα突變體蛋白及嵌合跨膜蛋白在初級人類T細胞中之表現的兩個條形圖之集合。
圖8A展示用於共感染初級T細胞之IL7Rα突變體表現構築體及1928z嵌合抗原受體表現構築體之示意圖。
圖8B概略展示1928z嵌合抗原受體在T細胞表面處與EKV或Ins_CPT IL7Rα突變蛋白、mbIL15-17Rα Ins_PPCL嵌合跨膜蛋白或mbIL15嵌合跨膜蛋白共表現。
圖8C為展示在初級T細胞之表面上1928z嵌合抗原受體、EKV或Ins_CPT IL7Rα突變體蛋白、mbIL15-17Rα Ins_PPCL嵌合跨膜蛋白及mbIL15蛋白之表現的流式細胞量測資料之集合。所展示之資料來自活化後第6天。
圖8D為展示培養物中表現mbIL15-IL7Rα_Ins_PPCL及mbIL15之細胞的數量自第6天至第14天減少而表現IL7Rα_EKV、IL7Rα_Ins_CPT及1928z嵌合抗原受體之細胞的數量在相同週期內保持相對恆定之兩個圖式的集合。
圖9為展示在活化後第14天表現各種IL7Ra突變體及嵌合跨膜蛋白之CAR T細胞維持較少分化記憶表型的兩個圖式之集合。
圖10為展示在保持未經轉導或經慢病毒載體轉導之初級人類T細胞中磷酸化STAT5及STAT3之水平以及BCL-XL之總蛋白水平的免疫墨點之集合，該等慢病毒載體在存在及不存在CAR (1928z)下編碼特異性IL7Rα蛋白中之一者或特異性嵌合跨膜蛋白中之一者。
圖11A為展示表現各種IL7Rα突變體之細胞之擴增的曲線圖及圖11B為展示CAR-T細胞在連續遭遇Nalm6目標細胞21天內之倍數擴增之長條圖；圖11A及11B一起展示在1:1比率效應物:目標(E:T)比率下連續曝露於抗原後表現IL7Rα突變體之CAR T細胞相比於對照CAR展現優良擴增。
圖12A為展示在基於螢光素酶之隔夜殺傷分析中CD19+ Nalm6 B細胞之裂解百分比之曲線圖。
圖12B為展示在基於螢光素酶之隔夜殺傷分析中CD19-K562細胞之裂解百分比的曲線圖。
圖13為展示在連續曝露於抗原之後第14天表現IL7Rα突變體之CAR T細胞維持較少分化記憶表型的條形圖之集合。
圖14A為展示表現各種IL7Rα突變體之細胞之擴增的曲線圖及圖14B為展示CAR-T細胞在以1:3 E:T比率單次遭遇抗原之後21天內之倍數擴增的長條圖；圖14A及14B一起展示在單次曝露於目標後表現IL7Rα突變體之CAR T細胞相比於對照CAR展現優良擴增。
圖15為展示在單次曝露於抗原之後第14天表現IL7Rα突變體之CAR T細胞維持較少分化記憶表型的條形圖之集合。
圖16為隨時間推移第1天投與0.5×106
個Nalm6_luc細胞隨後投與0.1×106
個未經轉導之T細胞或攜帶單獨CD19 CAR、CD19 CAR + IL7RaCPT、CD19 CAR + IL7RaMCP或CD19 CAR + IL7RaPPCL之T細胞的NOD-SCID IL2Rgammanull
小鼠之量測流量(光子/秒)。所展示之資料為平均值+/-標準差。
圖17為隨時間推移第1天投與0.5×106
個Nalm6_luc細胞隨後投與0.1×106
個未經轉導之T細胞或攜帶單獨CD19 CAR、CD19 CAR + IL7RaCPT、CD19 CAR + IL7RaMCP或CD19 CAR + IL7RaPPCL之T細胞的NOD-SCID IL2Rgammanull
小鼠之體重變化。所展示之資料為平均值+/-標準差。
圖18為未經轉導之T細胞或攜帶單獨CD19 CAR、CD19 CAR + IL7RaCPT、CD19 CAR + IL7RaMCP或CD19 CAR + IL7RaPPCL之T細胞中pSTAT5a、b及pSTAT3之相對平均螢光強度(MFI)。平均螢光強度資料與未經轉導之T細胞中所量測之平均螢光強度相比。
圖19為展示隨時間推移與來自American Type Culture Company (ATCC，Manassas，VA)之Hep3B目標細胞共培養之GPC3 CAR陽性T細胞及GPC3 CAR + IL7Ra CPT陽性T細胞(0.5×106
個CAR T細胞與0.5×106
個Hep3B目標細胞共培養) (如實例9中所描述)之倍數擴增的圖式。
Claims (20)
- 一種包含具有一或多個修飾之介白素-7受體之α鏈的跨膜域之蛋白質，其中具有一或多個修飾之跨膜域具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。
- 如請求項1之蛋白質，其中該蛋白質進一步包含介白素-7受體之α鏈的細胞內域。
- 如請求項2之蛋白質，其中該細胞內域包含SEQ ID NO: 45之序列。
- 如請求項1之蛋白質，其中該蛋白質進一步包含介白素-7受體之α鏈的細胞外域。
- 如請求項4之蛋白質，其中該細胞外域包含SEQ ID NO: 11之序列。
- 如請求項1之蛋白質，其進一步包含 細胞外介白素-15域；及 來自介白素-15受體之α鏈的細胞外sushi域。
- 如請求項6之蛋白質，其中該細胞外介白素-15域包含SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 24之序列。
- 如請求項6之蛋白質，其中介白素-15受體之該α鏈的細胞外sushi域包含SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 37。
- 一種核酸，其編碼如請求項1之蛋白質。
- 一種載體，其包含如請求項9之核酸。
- 如請求項10之載體，其進一步包含可操作地連接至該核酸之啟動子及視情況選用之可操作地連接至該核酸的強化子序列。
- 如請求項10之載體，其進一步包含編碼特異性結合至腫瘤抗原的嵌合抗原受體之序列。
- 如請求項12之載體，其中該腫瘤抗原選自由以下組成之群：磷脂肌醇蛋白聚醣-3(glypican-3)、BCMA、MAGE、MUC16、CD19、WT-1、CD22、LI-CAM、ROR-1、CEA、4-1BB、ETA、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白(AFP)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD20、CD125、CD200、CD221、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纖維結合蛋白外域-B、葉酸受體1、GD2、GD3神經節苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgGl、IL-13、IL-6、類胰島素生長因子I受體、整合素α5β1、整合素ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、黏蛋白CanAg、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺癌細胞、RANKL、RON、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C(tenascin C)、TGF β 2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2及波形蛋白(vimentin)。
- 如請求項10之載體，其中該嵌合抗原受體包含一或多個選自由以下組成之群之協同刺激信號傳導域：4-1BB、CD27、OX40、CD40、CD28、GITR、CD2、CD5、ICAM-1、CD11a、Lck、TNFR-I、TNFR-II、FasR、CD30、ICOS、LIGHT、NKG2C、B7-H3、DAP-10及DAP-12。
- 如請求項10之載體，其中該載體為慢病毒或腺病毒載體。
- 一種哺乳動物細胞，其包含如請求項10之載體。
- 如請求項16之哺乳動物細胞，其中該哺乳動物細胞為免疫細胞。
- 如請求項17之哺乳動物細胞，其中該免疫細胞選自由以下組成之群：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、單核球、自然殺手細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、調節T細胞及輔助T細胞。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項10之載體及醫藥學上可接受之載劑。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項16之哺乳動物細胞。
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