JPWO2018092907A1 - エピトープ均質化抗体パネル、ならびにその作製方法および利用 - Google Patents
エピトープ均質化抗体パネル、ならびにその作製方法および利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2018092907A1 JPWO2018092907A1 JP2018551721A JP2018551721A JPWO2018092907A1 JP WO2018092907 A1 JPWO2018092907 A1 JP WO2018092907A1 JP 2018551721 A JP2018551721 A JP 2018551721A JP 2018551721 A JP2018551721 A JP 2018551721A JP WO2018092907 A1 JPWO2018092907 A1 JP WO2018092907A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- antibodies
- panel
- epitope
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 434
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 434
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 426
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 320
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 320
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 293
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims abstract description 227
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 44
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 28
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 claims description 225
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 claims description 220
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 164
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 129
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 105
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 claims description 94
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 84
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 claims description 76
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 73
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 55
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 49
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 43
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 43
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 36
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 30
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 29
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 26
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 24
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 claims description 23
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 20
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 15
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims description 11
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 9
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 8
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 8
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 87
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 78
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 72
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 58
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 58
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 52
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 52
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 51
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 49
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 45
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 43
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 41
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 41
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 38
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 38
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 33
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 32
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 30
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 29
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 29
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 description 28
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 27
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 27
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 26
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 26
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 25
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 25
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 23
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 23
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 20
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 20
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 19
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 19
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 19
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 19
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 18
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 18
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 18
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 18
- 101710120217 Fc receptor-like protein 5 Proteins 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 17
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 16
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 238000011161 development Methods 0.000 description 15
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 15
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 12
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 12
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 11
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 11
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 11
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 10
- 101150032879 Fcrl5 gene Proteins 0.000 description 10
- 101100425757 Homo sapiens TNFRSF1B gene Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 10
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 10
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 10
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 10
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 9
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 9
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 9
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 9
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 9
- 102100021253 Antileukoproteinase Human genes 0.000 description 8
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 8
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 8
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 7
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 7
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 6
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 6
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 6
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 201000000464 cone-rod dystrophy 2 Diseases 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 5
- 101000801232 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 5
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 5
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical group NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 4
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 238000007417 hierarchical cluster analysis Methods 0.000 description 4
- 210000005008 immunosuppressive cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 3
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 3
- 102100031381 Fc receptor-like A Human genes 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 101000846860 Homo sapiens Fc receptor-like A Proteins 0.000 description 3
- 101100425758 Mus musculus Tnfrsf1b gene Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 3
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 101100180402 Caenorhabditis elegans jun-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Chemical group 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101000846908 Homo sapiens Fc receptor-like protein 5 Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- -1 TNFR1B Proteins 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 description 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000006754 cone-rod dystrophy Diseases 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 2
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 2
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003498 protein array Methods 0.000 description 2
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FVPXJPVSJNSJBL-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrimidine-2,4-dione;1,3-thiazole Chemical compound C1=CSC=N1.O=C1C=CNC(=O)N1 FVPXJPVSJNSJBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-L 4-nitrophenyl phosphate(2-) Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical class CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010073478 Anaplastic large-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010017987 CD30 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 229940124293 CD30 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010170 Death domains Human genes 0.000 description 1
- 108050001718 Death domains Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101100119860 Homo sapiens FCRL5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 101000611185 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Proteins 0.000 description 1
- 101500028163 Homo sapiens Tumor necrosis factor-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 1
- 108010044023 Ki-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 208000032004 Large-Cell Anaplastic Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003657 Likelihood-ratio test Methods 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108700033844 Pseudomonas aeruginosa toxA Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000091 Tumor necrosis factor-binding protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100082060 Xenopus laevis pou5f1.1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 229940125752 antibody drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 229940124691 antibody therapeutics Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000009172 cell transfer therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940073621 enbrel Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 238000007840 fluorescent microbead array Methods 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 108010023260 immunoglobulin Fv Proteins 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000023578 negative regulation of cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 1
- 238000000455 protein structure prediction Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 229940051173 recombinant immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000000547 structure data Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- BPJYAXCTOHRFDQ-UHFFFAOYSA-L tetracopper;2,4,6-trioxido-1,3,5,2,4,6-trioxatriarsinane;diacetate Chemical compound [Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.[O-][As]1O[As]([O-])O[As]([O-])O1.[O-][As]1O[As]([O-])O[As]([O-])O1 BPJYAXCTOHRFDQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A30/00—Adapting or protecting infrastructure or their operation
- Y02A30/27—Relating to heating, ventilation or air conditioning [HVAC] technologies
Abstract
Description
(項目1)
ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製する方法であって、
(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に対する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体を加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
を含む方法。
(項目2)
前記Eが、前記抗原に存在し得るエピトープ領域の数である、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記Nが、前記E個のクラスターをクラスタリングによって生成するのに十分な抗体数である、項目1または2に記載の方法。
(項目4)
前記Nが、E×2〜6の範囲である、項目1〜3のいずれか1項に記載の方法。
(項目5)
e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルおよび/または部分パネルから、さらに抗体数が至適抗体数の上限Nx以下のものを選択する、項目1〜4のいずれか1項に記載の方法。
(項目6)
前記Nxが、E×2〜6の範囲で設定される、項目5に記載の方法。
(項目7)
e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルおよび/または部分パネルから、さらに抗体数が最小のものを選択する、項目1〜6のいずれか1項に記載の方法。
(項目8)
前記結合データが、前記オリジナル抗体パネルまたは部分パネルに含まれる第1の抗体の、該オリジナル抗体パネルまたは部分パネルに含まれる第2の抗体の存在下での抗原への結合の変化を結合アッセイによって検出した結合変化データに基づく、項目1〜7のいずれか1項に記載の方法。
(項目9)
前記結合アッセイが、ペア逐次結合アッセイであって、該ペア逐次結合アッセイにおいて、前記第2の抗体は前記第1の抗体が前記抗原に接触された後に、該抗原に接触される、項目8に記載の方法。
(項目10)
前記結合アッセイにおいて、前記第2の抗体が前記第1の抗体よりも大過剰量で存在する、項目8または9に記載の方法。
(項目11)
前記クラスタリングが階層的クラスタリングである、項目1〜10のいずれか1項に記載の方法。
(項目12)
前記結合データは各アッセイについて単独で取得されたデータと2つ以上の抗体を用いて取得されたデータを含み、前記クラスタリングが、各抗体の結合について、別の抗体の不存在下で得られたデータと該別の抗体の存在下で得られたデータとの間の変化データに基づいて行われる、項目1〜11のいずれか1項に記載の方法。
(項目13)
前記エピトープグループ数が、前記クラスタリングによってクラスタリングした場合に、クラスタリングの安定性を示す安定度指数に基づいて決定されるクラスター数として算出される、項目1〜12のいずれか1項に記載の方法。
(項目14)
前記安定度指数が、前記クラスタリングによって生成されるブートストラップ値を使用して算出される、項目13に記載の方法。
(項目15)
(d)における前記1または複数の抗体の前記オリジナル抗体パネルからの除外が、以下の基準:最も近接している抗体を選択して除外する;最も密度の高いクラスターを選択してそこから除去する;最も密度の高いクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;平均より高い密度のクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;バックグラウンドが高い抗体を除外する;シグナルが低い抗体を除外する;抗体数が3個以上のクラスターから抗体を除外する;最も近接している抗体の対であっても、他の抗体との距離が大きければ除外しない;機能が公知である抗体を除外しない;抗体の親和性を考慮して選択する;抗体のサブクラスを考慮して選択する;ハイブリドーマの抗体産生能を考慮して選択する;ハイブリドーマの血清の要求性を考慮して選択する;抗体の回収量を考慮して選択する;抗体タンパク質の酸変性の容易さ(精製の困難さ)を考慮して選択する;抗体のFvの配列を考慮して選択する;熱安定性が悪い抗体を除外する;pH安定性が悪い抗体を除外する;機械的刺激に対して安定性が悪い抗体を除外する;安定性が悪い抗体を除外する;高濃度で沈殿する抗体を除外する;溶液の粘度が高い抗体を除外する;溶解度が低い抗体を除外する;非特異的結合性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的外のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外する;目的抗原のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外しない;および高濃度でシグナルが低い抗体を除外する、のうちの1または複数の基準に基づいて行われる、項目1〜14のいずれか1項に記載の方法。
(項目16)
前記抗体の集合を提供する工程が、前記抗原に対する既知の抗体を提供することを含む、項目1〜15のいずれか1項に記載の方法。
(項目17)
ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルの作製方法をコンピュータに実行させるためのプログラムであって、該方法は、
(a)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして前記コンピュータに提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数(N)以上である、工程と、
(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
を含む、プログラム。
(項目17A)
項目1〜16のいずれか1項または複数に記載の特徴をさらに含む、項目17に記載のプログラム。
(項目18)
ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルの作製方法をコンピュータに実行させるためのプログラムを格納する記録媒体であって、該方法は、
(a)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして前記コンピュータに提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数(N)以上である、工程と、
(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数(E)を充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足する抗体パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
を含む、記録媒体。
(項目18A)
項目1〜16のいずれか1項または複数に記載の特徴をさらに含む、項目18に記載の記録媒体。
(項目19)
ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製するシステムであって、該システムは、
(A)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして、および該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを提供する抗体パネルデータ提供部であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数N以上である、抗体パネルデータ提供部と、
(B)抗体データ計算部であって、該計算部において:
該結合データに基づいて、該抗体パネルをクラスタリングし、
必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、結合データに基づいてクラスタリングし、
該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数(E)を充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足する抗体パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し、再度オリジナル抗体パネル生成、結合データ提供、クラスタリング、必要に応じて部分パネル生成およびクラスタリングを繰り返すように指令を出し、
得られた該エピトープ均質化抗体パネルを出力する
抗体データ計算部、
を備える、システム。
(項目19A)
項目1〜16のいずれか1項または複数に記載の特徴をさらに含む、項目19に記載のシステム。
(項目20)
ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルであって、エピトープグループ数eが、該抗原に関する目標エピトープグループ数Eと比較してe≧Eであり、該Eが、該抗原に存在し得るエピトープ領域の数である、エピトープ均質化抗体パネル。
(項目21)
ある抗原の表面に存在する全てのエピトープ領域に対して、各エピトープ領域に結合する抗体を少なくとも2つ以上含む、エピトープ均質化抗体パネル。
(項目22)
エピトープグループあたり2〜6個の抗体を含む、項目20または21に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
(項目23)
各エピトープグループに属する抗体の数が、平均値から1標準偏差の範囲内である、項目20〜22のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
(項目24)
前記抗原との親和性がKd=1×10−8Mより低い親和性である抗体を含む、項目20〜23のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
(項目25)
抗体のスクリーニングのための、項目20〜24のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
(項目26)
抗原の低免疫原性化のための、項目20〜24のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
(項目27)
ある抗原に対する抗体をスクリーニングする方法であって、該方法は:
(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に対する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)該オリジナル抗体パネルから、エピトープグループ数が減少しないように、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)(d)のクラスタリングで得られた部分パネルのエピトープ数が該オリジナル抗体パネルのエピトープグループ数以上であるものを選択し、該選択された部分パネルを用いて該スクリーニングを行う工程と
を包含する、方法。
(項目27A)
項目1〜16のいずれか1項または複数に記載の特徴をさらに含む、項目27に記載の方法。
(項目28)
前記における前記1または複数の抗体の前記オリジナル抗体パネルからの除外が、以下の基準:最も近接している抗体を選択して除外する;最も密度の高いクラスターを選択してそこから除去する;最も密度の高いクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;平均より高い密度のクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;バックグラウンドが高い抗体を除外する;シグナルが低い抗体を除外する;抗体数が3個以上のクラスターから抗体を除外する;最も近接している抗体の対であっても、他の抗体との距離が大きければ除外しない;機能が公知である抗体を除外しない;抗体の親和性を考慮して選択する;抗体のサブクラスを考慮して選択する;ハイブリドーマの抗体産生能を考慮して選択する;ハイブリドーマの血清の要求性を考慮して選択する;抗体の回収量を考慮して選択する;抗体タンパク質の酸変性の容易さ(精製の困難さ)を考慮して選択する;抗体のFvの配列を考慮して選択する;熱安定性が悪い抗体を除外する;pH安定性が悪い抗体を除外する;機械的刺激に対して安定性が悪い抗体を除外する;安定性が悪い抗体を除外する;高濃度で沈殿する抗体を除外する;溶液の粘度が高い抗体を除外する;溶解度が低い抗体を除外する;非特異的結合性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的外のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外する;目的抗原のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外しない;および高濃度でシグナルが低い抗体を除外する、のうちの1または複数の基準に基づいて行われる、項目27に記載の方法。
(項目29)
ある抗原に対する抗体をスクリーニングする方法であって、該方法は:
(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に対する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体を加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
(f)該エピトープ均質化抗体パネルを用いて該スクリーニングを行う工程と
を含む、方法。
(項目29A)
項目1〜16のいずれか1項または複数に記載の特徴をさらに含む、項目27に記載の方法。
(項目30)
配列番号32の119〜201位にエピトープを有する、抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目31)
抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物であって、該TNFR2抗体は、
(A)配列番号3(TR92重鎖)、配列番号13(TR94重鎖)、配列番号23(TR109重鎖)、配列番号37(TR92ヒト化重鎖1)、配列番号38(TR92ヒト化重鎖2)、配列番号41(TR109ヒト化重鎖1)、および配列番号42(TR109ヒト化重鎖2)からなる群より選択される重鎖可変領域のアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、
(B)配列番号8(TR92軽鎖)、配列番号18(TR94軽鎖)、配列番号28(TR109軽鎖)、配列番号39(TR92ヒト化軽鎖1)、配列番号40(TR92ヒト化軽鎖2)、配列番号43(TR109ヒト化軽鎖1)、および配列番号44(TR109ヒト化軽鎖2)からなる群より選択される軽鎖可変領域のアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖と
を含む、
抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目32)
前記TNFR2抗体は、
(i)配列番号3(TR92重鎖)、配列番号37(TR92ヒト化重鎖1)、もしくは配列番号38(TR92ヒト化重鎖2)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、配列番号8(TR92軽鎖)、配列番号39(TR92ヒト化軽鎖1)、もしくは配列番号40(TR92ヒト化軽鎖2)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖とを含む抗体であるか、
(ii)配列番号13(TR94重鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、配列番号18(TR94軽鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖とを含む抗体であるか、あるいは
(iii)配列番号23(TR109重鎖)、配列番号41(TR109ヒト化重鎖1)、もしくは配列番号42(TR109ヒト化重鎖2)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、配列番号28(TR109軽鎖)、配列番号43(TR109ヒト化軽鎖1)、もしくは配列番号44(TR109ヒト化軽鎖2)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖とを含む抗体である、
項目31に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目33)
前記TNFR2抗体は、
(i)配列番号4,5および6に示すアミノ酸配列を含む重鎖CDRと、配列番号9、10および11に示すアミノ酸配列を含む軽鎖CDRとを含む抗体、
(ii)配列番号14、15および16に示すアミノ酸配列を含む重鎖CDRと、配列番号19、20および21に示すアミノ酸配列を含む軽鎖CDRとを含む抗体、あるいは
(ii)配列番号24、25および26に示すアミノ酸配列を含む重鎖CDRと、配列番号29、30および31に示すアミノ酸配列を含む軽鎖CDRとを含む抗体
である、項目31または32に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目34)
前記TNFR2抗体は、
(i)配列番号3に示すアミノ酸配列と、配列番号8に示すアミノ酸配列とを含む抗体、(ii)配列番号13に示すアミノ酸配列と、配列番号18に示すアミノ酸配列とを含む抗体、あるいは
(ii)配列番号23に示すアミノ酸配列と、配列番号28に示すアミノ酸配列とを含む抗体
である、項目31〜33のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目35)
前記抗TNFR2抗体は、ヒト化抗体である、項目31〜34のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目35A)
前記抗TNFR2抗体は、配列番号37または38に示すアミノ酸配列と、配列番号39または40に示すアミノ酸配列とを含む、項目35に記載の抗体。
(項目35B)
前記抗TNFR2抗体は、配列番号41または42に示すアミノ酸配列と、配列番号43または44に示すアミノ酸配列とを含む、項目35に記載の抗体。
(項目36)
TNFR2とTNFとの結合を阻害する、項目31〜35のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目37)
TNFR2とTNFとの結合を活性化する、項目31〜35のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
(項目38)
項目31〜項目37のいずれか1項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントも
しくは機能的等価物、あるいはその重鎖および/または軽鎖をコードする核酸配列を含む1または複数の核酸分子。
(項目39)
前記核酸分子は、前記重鎖をコードする核酸配列を含む核酸分子と、前記軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸分子とを含む、項目38に記載の核酸分子。
(項目40)
項目31〜項目37のいずれか1項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物における重鎖をコードする核酸配列を含む核酸分子。
(項目41)
項目31〜項目37のいずれか1項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物における軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸分子。
(項目42)
項目38〜41のいずれか1項に記載の核酸分子を含むベクター。
(項目43)
項目38〜41のいずれか1項に記載の核酸分子、または項目42に記載のベクターを含む細胞。
(項目44)
項目38〜41のいずれか1項に記載の核酸分子、または項目42に記載のベクターを含むハイブリドーマ細胞。
(項目45)
項目38〜41のいずれか1項に記載の核酸分子、または項目42に記載のベクター、項目43に記載の細胞を含む動物。
以下に本明細書において特に使用される用語の定義および/または基本的技術内容を適宜説明する。
的クラスタリングの安定性の解析と可視化、情報処理学会論文誌:数理モデル化と応用、Voo. 48、No. SIG15(TOM18)、2007、176-188などを参照することができ、これらは参考として本明細書に援用する。安定度指数は、例えば、クラスタリングによって生成されるブートストラップ値を使用して算出してもよいがこれに限定されない。安定度指数は、SI、EGSIなどを挙げることができる。
る)は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質(例えば、抗体または抗体を改変した分子も含む)、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、核酸、糖、脂質、有機低分子、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本発明の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
以下に、本発明のエピトープ均質化抗体パネルの作製方法について説明する。1つの局面において、本発明はある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製する方法であって、該方法は、(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧E(該抗原に関する目標エピトープグループ数)を充足する集合または部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体を加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す工程とを含む方法を提供する。本発明のエピトープ均質化抗体パネルの製造方法は、図1A〜1Bに例示されている。その各ステップについては、図2A〜2Dに代表的な例を用いて詳述されているので、以下これらの図も適宜参酌しながら、各工程、特徴等を説明する。
本発明の該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程は、当該分野で公知の任意の抗体を生成する方法を用いて実施することができる。
本発明のエピトープ均質化抗体パネルの作製において、抗体の集合を得、オリジナル抗体パネルが得られたら、そのオリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る。
(1)ELISAのフォーマットですべての選択抗体の組み合わせについてペア逐次結合アッセイをする。
(2)阻害無しの場合(阻害抗体なし)の結合を、100%として、結合阻害の程度を結合%で表す。
本発明では、結合データが得られると、この結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングし、抗体を各クラスターにグループ化する。ここでは通常は、階層的クラスタリングにより、エピトープグループごとにクラスター化される。クラスタリングのおおまかなスキームは、図2Aに例示されている。クラスタリングのためには、X線結晶構造データ、タンパク質構造予測、エピトープ間距離、分子表面積などを用いてクラスタリングの1つの指標である目標エピトープグループ数Eを特定することができる。Eの特定については別の節に置いて詳述されている。
Treeの結合位置の高さ(arbitrary unit)
Treeのトポロジー
Treeの各ノード間の距離(arbitrary unit)
各結合のブートストラップの値(例えば、1000回試行)
を得ることができる。それ以外にも、任意選択での出力を得ることもできる。
本発明の一態様では、階層的クラスタリングによるクラスター数を決定するために、安定度指数を用いる。安定度指数は、階層的クラスタリングのクラスター数により変化する値であり、そのクラスター数でクラスタリングした場合のクラスタリングの安定性を示す数値である。
である。
本発明において、オリジナル抗体パネルのクラスタリングの後、必要に応じて、オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成することができる。このような部分パネルの生成を、本明細書において、「ダウンサンプリング」または「ダウンサイジング」と称する。なお、オリジナル抗体パネルのクラスタリングの後、そのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数E(好ましくは、抗原に存在し得るエピトープ領域の数)を充足する場合、そのオリジナル抗体パネルを、エピトープ均質化抗体パネルとして出力することもできる。あるいは、オリジナル抗体パネルについて、e≧Eであっても、上記ダウンサンプリングを行って部分パネルを生成し、さらに解析を続けることもできる。複数部分パネルが生成されることにより、より最適な抗体パネルが生成され、より改善されたエピトープ均質化抗体パネルが提供される可能性が高まるからである。
(1)ペア逐次アッセイデータから算出されるユークリッド距離を抗体間の距離として採用する(クラスタリングと同様)。
(2)各抗体の最近接抗体への距離の分布から(いいかえれば、最も近いペア結合アッセイのデータを示す抗体)、近傍領域を定めるが、抗体の総数に依存して、この時の近傍領域内に存在する他抗体の%をパラメーター入力し、その値に応じて対応する近傍領域を定義する。
(3)近傍領域内の抗体の密度計算をして(いいかえれば、領域内の抗体数を数えて)、それを抗体のエピトープ空間における局所濃度の推定値とし、その局所濃度の推定値の分布によりダウンサンプリングのための濃度閾値を定める(抗体の総数により任意のパラメーター指定)。その入力値より局所濃度が高い抗体について密度に反比例してサンプリングを行う。
入する可能性を低減させることができるからである。
本発明の、ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルの作製方法において、必要に応じて、抗体パネルのエピトープグループ数および抗体数について目標値(Eおよび/またはN)を設定する。Eは対象となる抗原に関する目標エピトープグループ数であり、Nは抗原に関する目標抗体数である。
(1)仮想エピトープの構築の例
(i)抗原の構造を用いて、抗原の各原子の抗原表面の露出面積を計算する。
(2)仮想競合試験に用いる仮想エピトープパネルの選択
(iv)複数の仮想エピトープパネルを作製した場合、各仮想エピトープパネル中の、すべての仮想エピトープに含まれる原子の露出面積の和を計算し、その値の抗原の表面面積に対する比から、各仮想エピトープパネルの抗原表面カバー率を求める。
(3)仮想競合試験
(vi)(v)で選択した各仮想エピトープパネル、あるいは(iii)で作製した全ての仮想エピトープを含む仮想エピトープパネルに含まれる、各々の仮想エピトープ内に含まれる原子が、同時に他の仮想エピトープに含まれる場合、その割合を指標に、各エピトープを認識する抗体間の仮想競合試験を行う。
(4)仮想クラスタリングと各仮想エピトープパネルに固有のエピトープグループ数の導出
(vii)上記仮想競合試験の結果から、各仮想エピトープパネルに含まれる仮想エピトープについてクラスタリングを行う。クラスタリングの結果と、各クラスター数(2からその仮想エピトープパネルに含まれるエピトープの総数までの各々の値)で分類した場合の安定度指数(Stability Index)から、各仮想エピトープパネルのエピトープグループ数を決定する。
(5)抗原に固有の推定エピトープグループ数(TE)の算出
(viii)各仮想エピトープパネルについて計算したエピトープグループ数の分布から、最大値を求め、その最大値の一定の割合の数値をTEとする。仮想エピトープパネルとして全ての仮想エピトープを含む仮想エピトープパネルを用いている場合には、当該エピトープパネルについて計算したエピトープグループ数をTEとする。
(6)目標抗体数TNの算出
(ix)(vii)でクラスタリングに用いた仮想エピトープパネルのうち、算出されたエピトープグループ数がTE以上のものを数え、同一数の仮想エピトープ数からなる選択仮想抗体パネルが一定数(一定割合)以上存在する場合、その仮想エピトープ数(仮想抗体数)を取得する。取得した仮想エピトープ数のうち、最小の数をTNとする。
ンプリングして仮想エピトープを作れば、どの方法でも仮想エピトープの分布は近似的には同一で、均質性は保たれる。なぜならば、露出領域の周りのサンプリングしていない空白のスペースは実質的に存在せず、仮に存在しても抗体の結合部位の大きさよりかなり小さいためである。つまりどんなやり方で仮想エピトープをサンプリングしても、選ばれる可能性のある隣の仮想エピトープとは十分近く、それにより網羅性は保証される。
別の実施形態では、仮想エピトープの構築は以下のようにしても実施することができる。
(#1)対象抗原(例えば、抗原A)の構造を用い、各原子のExposed Area (accessible
surface area (ASA)) をMSMSで計算する。http://mgltools.scripps.edu/packages/MSMS、Michel Sanner, Arthur J. Olson, Jean Claude Spehner (1996). Reduced Surface: an Efficient Way to Compute Molecular Surfaces. Biopolymers, Vol 38, (3), 305-320.Sanner M.F.
次に、TNはTEの例えば、5倍であるTN=55に設定することができる(この場合、各エピトープグループに平均5つの抗体であるが、これは適宜変更することができる。)。
(#2)各アミノ酸残基ごとのASAの和をランキングし、例えば、80A2以上の面積を有するアミノ酸残基のα-carbonの位置の座標を取得する(上記例の場合、合計84残基。ここでの面積値も適宜変更することができる。)。
(#3)各α-carbonを中心とし、例えば、半径14Åの球として仮想エピトープを作製する
(つまり上記例でいうと、84個の仮想エピトープができる。ここでの球半径は適宜変更することができる)。
(#4)いずれかの仮想エピトープに含まれる原子のASAの和と抗原AのTotal ASAに対する比を確認する。この例では1であったので、例である84個の仮想エピトープ群の抗原Aの表面カバー率は100%であると算出することができる。各仮想エピトープの平均分子表面カバー率は、この例の場合は8.4%で、表面のどの場所も、この例の場合は平均7回、いずれかの仮想エピトープに含まれている。したがって、この場合、抗原Aの表面を均質に網羅的にカバーする84個の仮想エピトープを作製できたことになる。これらの性状の値は、各例においてASAの和、Total ASAに対する比、表面カバー率などを計算して各値を算出することができる。
(#5)ある仮想エピトープ(仮想エピトープ1)に含まれるすべての原子の数を数え、Xとする。仮想エピトープ1に含まれる原子のうち、別のある仮想エピトープ(仮想エピトープ2)に含まれる原子の数を数え、その数Yとする。
(#6)あらかじめ仮想エピトープ2を認識する仮想抗体2を抗原に結合させた場合、仮想エピトープ1を認識する仮想抗体1の抗原への結合が、(仮想抗体2がない場合に比べ)(X−Y)/X%に減弱すると仮定し、すべての仮想エピトープ(上記例の場合、計84)を認識する仮想抗体の仮想競合試験(仮想ペア逐次結合試験)を行う。
(#7)仮想競合試験の結果を、ユークリッド距離を用いたウォード法(Ward's Method) により階層的クラスター分析を行う。仮想クラスタリングの結果から、各仮想抗体パネルを各クラスター数(2からその仮想抗体パネルに含まれる抗体の総数までの各々の値)で分類した場合の安定度指数を算出し、その最大値と最大値から2番目に高い数値を取り、それらの数値が得られるときのクラスター数のうち、大きい方のクラスター数をその仮想抗体パネルのエピトープグループ数とする。つまり、上述の例では、安定度指数の最大値はクラスター数10のときであり、安定度指数が最大値から2番目に高い数値を示したときは、クラスター数11だったので、エピトープグループ数は11であることになる。これらの数値は、各々の抗原や各種条件、算出値によって変動するが、いずれも上記手順にしたがって計算することができる。
抗原に関する目標エピトープグループ数Eは、好ましくは、抗原に存在し得るエピトープ領域の数で設定する。一部の実施形態では、Eは、抗原全体を均質に認識する抗体群をペアアッセイによって分類したとき、検出される最小のエピトープグループ数である。
抗原に関する目標抗体数Nは、代表的には、対象となる抗原について所定のE個のクラスターをクラスタリングによって生成するのに十分な抗体数である。
(2)抗原タンパク質のホモロジー解析から得られる予測ドメイン構造
(3)抗原タンパク質のアミノ酸配列から推定される予測2次構造
(4)抗原タンパク質に対して過去に取得されている既存の抗体および結合リガンドの結合位置情報
もちろん、これ以外の情報を考慮してもよい。
本発明において、エピトープ均質化抗体パネルの生成において、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルおよび/または部分パネルから、さらに抗体数nが至適抗体数の上限Nx以下となるようにさらに選抜してもよい。n≦Nxとなればよいことから、Nxは至適抗体数の上限であるが、本明細書においては単に至適抗体数ということもある。
1つの局面において、本発明は、本発明のエピトープ均質化抗体パネルを製造する方法をコンピュータに実施させるための方法を実装するプログラム、該プログラムを記録した記録媒体、およびこれを実現するためのシステムを提供する。
(a)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして前記コンピュータに提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数(N)以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数(E)を充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足する抗体パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程とを含む、記録媒体を提供する。ここで採用され得る任意の特徴は本明細書のエピトープ均質化抗体パネルの作製方法の説明に記載される任意の特徴またはその組み合わせを採用することができる。1つの実施形態では、記
録媒体は、内部に格納され得るROMやHDD、磁気ディスク、USBメモリ等のフラッシュメモリなどの外部記憶装置でありうる。
必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、結合データに基づいてクラスタリングし、該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数(E)を充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足する抗体パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し、再度オリジナル抗体パネル生成、結合データ提供、クラスタリング、必要に応じて部分パネル生成およびクラスタリングを繰り返すように指令を出し、必要に応じて得られた該エピトープ均質化抗体パネルを出力することができる。
別の局面において、本発明は、エピトープ均質化抗体パネルを提供する。本発明のエピトープ均質化抗体パネルは、代表的には、そのエピトープグループ数eが、該抗原に関する目標エピトープグループ数Eと比較してe≧Eであり、該Eが、該抗原に存在し得るエピトープ領域の数である。好ましい実施形態では、ある抗原の表面に存在する全てのエピトープ領域に対して、各エピトープ領域に結合する抗体を少なくとも2つ以上含み、さらに好ましくはエピトープグループあたり2〜6個の抗体を含む。エピトープ均質化パネルは、抗原のエピトープ領域を網羅しており、抗体のin vivoにおける詳細な機能を推定し、構造活性相関から作用メカニズムを推定するのに用いることができる。エピトープ均質化抗体パネルは、幅広いエピトープの多様性を確保し、低頻度・取得が困難な抗体を含む。エピトープ均質化抗体パネルは「抗体の結合という機能」を、抗体の分類に使うことによって、他の抗体機能の探索をしやすくするパネルである。本発明の方法は、そのような網羅的な抗体パネルを、取り扱う抗体の数(種類)を最小化しながら提供することができる。
なエピトープ空間が圧倒的に大きく広がり、抗体パネルが有用となる。
別の局面において、本発明のエピトープ均質化抗体パネルは、抗体のスクリーニングのために用いることができる。別の局面では、本発明のエピトープ均質化抗体パネルは、抗原の抗原性の解析と改変(例えば低免疫原性化)のために用いることができる。別の局面では、本発明のエピトープ均質化抗体パネルは、抗体エピトープ領域(抗体機能に相関した領域)の定義に利用できる。
1つの局面において、本発明は、抗腫瘍壊死因子レセプター2(TNFR2)抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物を提供する。
(a)配列番号32に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド;
(b)配列番号32に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド;
(c)配列番号32に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド;または
(d)(a)〜(c)のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、または少なくとも99%であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、TNFR2の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること(例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと)をいう。
の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でDNA配列が、代表的には少なくとも50%同一である場合、好ましくは少なくとも70%同一である場合、より好ましくは少なくとも80%、90%、95%、96%、97%、98%または99%同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。従って本明細書において「相同体」または「相同遺伝子産物」は、本明細書にさらに記載する複合体のタンパク質構成要素(例えば、本発明の抗体)と同じ生物学的機能を発揮する、別の種、好ましくは哺乳動物におけるタンパク質を意味する。こうような相同体はまた、「オルソログ遺伝子産物」とも称されることもある。本発明の目的に合致する限り、このような相同体、相同遺伝子産物、オルソログ遺伝子産物等も用いることができることが理解される。
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法、バイオインフォマティクスは、当該分野において公知であり、周知でありまたは慣用される任意のものが使用され得る。
1−1:材料および方法
[抗原A]
本実施例において、可溶性タンパク質A(抗原A)に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製した。抗原Aの配列と構造は、https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/1IKQ_Aからアクセスすることができる、Accession: 1IKQ_A GI: 17943391の一部である。抗原Aは1IKQ_Aからdomain IとIB domainが欠失したイムノトキシンのための変異体である。詳細には、1IKQ_Aの251-364と381-605をつなげたものであり、配列番号1では1〜114、および115〜339にそれぞれ対応する。この実施例中で以下に示される変異部位の表示はもとのアミノ酸番号で表示される。抗原Aの配列は:
である。
抗原Aに対するモノクローナル抗体作製は抗原Aを免疫したマウスの脾臓B細胞とSP2/0-neoミエローマ細胞を、定法のPEG法で細胞融合させ、抗体産生ハイブリドーマを取得することにより行った(Nagata, S., G. Salvatore, and I. Pastan. 2003. DNA immunization followed by a single boost with cells: a protein-free immunization protocol for production of monoclonal antibodies against the native form of membrane proteins. J. Immunol.Methods 280: 59-72.)。マウスへの抗原Aの免疫は、全てのエピトープグループに対するモノクローナル抗体を広範に取得するため、マウスStrain、アジュバント、免疫スケジュールなどが異なる様々な条件下で行った。またドメイン欠失変異体や、アミノ酸変異体の免疫も用い、異なるエピトープに対する免疫応答を惹起した。モノクローナル抗体の選択には、非固相化条件の溶液中で非変性の抗原Aに結合する抗体を得るために、溶液中非変性抗原キャプチャーELISA法(ICC-ELISA)をスクリーニング法として採用した。一部の抗体作製では、ICC−ELISA法と同様の結果を与える非変性抗原間接固相化ELISA法を用いた。Igのアイソタイプは、mouse mAb isotyping reagents (ISO2; Sigma-Aldrich)を用いて決定し、培養上清中のIgG濃度は、isotype-matched IgG controls (no.90-6551, mouse Ig panel; Zymed Laboratories)を既知濃度に希釈して、標準物質として用い、サンドイッチELISA法で定量した。
タンパク質のプラスチック表面への受動的吸着は、しばしば、タンパク質のコンフォメーションを変化させ、コンフォメーショナルエピトープの破壊や、隠れているエピトープを露出させる等の抗原性の変化を引き起こす。したがって、本発明者らは、このような潜在的な問題を回避するため、溶液中非変性抗原キャプチャーELISA法(ICC-ELISA)を考案し抗抗原A抗体を取得するためのスクリーニングアッセイに用いた。ICC−ELISAは、溶液中で起こる抗原−抗体反応を検出する。
特定のエピトープ領域の位置を抗原Aの構造上に特定するため、本発明者らは、抗原Aについて一連の点変異体を作製し、これらの変異体に対する各抗体の反応性の減弱を調べた。まず点変異体で変異させるアミノ酸残基の候補として、大きく抗原表面に露出している残基(>70Å2)を選択した。これらの候補残基は、347の総残基のうち98の残基(28%)であり、113.1±33.3Å2の平均露出面積を有し、総表面積の67%をカバーする。エピトープは通常6〜8AAの領域にわたり、400〜900Å2を占めることから、それが均質に分布している場合には、抗原Aの表面全体を「カバー」するのに、比較的少数の変異で十分である。
抗原Aについて、エピトープ均質化抗体パネルのエピトープグループ数の目標値Eと、抗体数の目標値Nを以下のように決定した。
1.抗原Aの構造を用い、各原子のExposed Area (accessible surface area (ASA))をMSMSで計算した(http://mgltools.scripps.edu/packages/MSMS、Michel Sanner, Arthur J. Olson, Jean Claude Spehner (1996). Reduced Surface: an Efficient Way to Compute Molecular Surfaces. Biopolymers, Vol 38, (3), 305-320.Sanner M.F.)。
2.抗原Aの各アミノ酸残基のASAの和をランキングし、80Åsquare以上の面積を有する
アミノ酸残基のα-carbonの位置の座標を取得した。80Åsquare以上の面積を有するアミ
ノ酸残基は、合計で84残基であった。
3.各α-carbonを中心とした半径14Åの球として仮想エピトープ領域を作成し、これにより84個の仮想エピトープ領域が生成された。選んだ84残基のリストと84残基の抗原A表面の分布は、図5に示される。84の仮想エピトープ領域の中心として選ばれた84残基は、図のように抗原Aの表面を網羅的に均質にカバーしており、抗原Aの表面をCoverする網羅性のある均一な仮想エピトープ群ができた。84の仮想エピトープのいずれにも含まれていないExposed Atomはなく、いずれかの仮想エピトープに含まれる原子のASAの和と抗原A Total ASAに対する比は1であった。つまり84個の仮想エピトープ群の抗原A表面カバー率は100%であった。各仮想エピトープの平均分子表面カバー率は、8.4%で、表面のどの場所も、平均7回、いずれかの仮想エピトープに含まれていた。
4.ある仮想エピトープ(仮想エピトープ1)に含まれるすべての原子の数を数え、Xとした。仮想エピトープ1に含まれる原子のうち、別のある仮想エピトープ(仮想エピトープ2)に含まれる原子の数を数え、その数をYとした。
5.あらかじめ仮想エピトープ2を認識する仮想抗体2を抗原に結合させた場合、仮想エピトープ1を認識する仮想抗体1の抗原への結合が、(仮想抗体2がない場合に比べ)(X−Y)/X%に減弱すると仮定し、すべての仮想エピトープ(計84)を認識する仮想抗体の仮想競合試験(仮想ペア逐次結合試験)を行った。
6.仮想競合試験の結果を、ユークリッド距離を用いたウォード法(Ward's Method)により階層的クラスタリングした。仮想競合試験に基づき1〜84の仮想エピトープ領域をクラスター分析した結果は、樹形図として示される(図6)。
7.さらに、仮想クラスタリングの結果から、各仮想エピトープパネルを各クラスター数(2からその仮想エピトープパネルに含まれる仮想エピトープの総数までの各々の値)で分類した場合の安定度指数を算出した。安定度指数(Epitope Group Stability Index)の分布は、図7に示される。
8.EGSIの、最大値と最大値から2番目に高い数値を取り、それらの数値が得られるときのクラスター数のうち、大きい方のクラスター数をエピトープグループ推定値、TEとした。つまりEGSIの最大値はエピトープグループ数10のときであり、EGSIの最大値から2番目に高い数値を示したときは、エピトープグループ数11だったので、TE=11を採用した。次に、TNはTEの5倍でTN=55とした(各エピトープグループに平均5つの抗体)。
2次構造の予測に用いている方法のリスト
タンパク質2次構造予測アルゴリズム
1.GOR II method (Garnier and Robson)
Garnier, J. and Robson, B., ‘The GOR method for predicting secondary structures in proteins’, ‘Prediction of Protein Structure and the Principles ofProtein Conformation', ed. G.D. Fasman, 11 417, 1989.
Garnier, J., Osguthorpe, D.J. and Robson, B., ‘Analysis of the accuracy and implications of simple methods for predicting the secondary structure of globular proteins', J.Mol. Biol., 120 97, 1978.
タンパク質疎水性アルゴリズム
2.Fauchere Fauchere, J.L. & Pliska, V., Eur. J. Med. Chem. (Chim. Ther.), 18, 369, 1983.
3.Janin Janin, J., Nature (London), 277, 491, 1979.
4.Kyte and Doolittle Kyte, J. & Doolittle, R.F., J. Mol. Biol., 157, 105, 1982.
5.Manavalan Manavalan, P. & Ponnuswamy, P.K., Nature (London), 275, 673, 1978
6.Sweet and Eisenberg Sweet, R.M. & Eisenberg, D., J. Mol. Biol., 171, 479, 1983.
タンパク質親水性アルゴリズム
7.Goldman, Engelman and Steitz (GES) Engelman, D.M., Steitz, T.A. & Goldman, A., Ann. Rev. Biophys. Biophys.Chem., 15, 321, 1986.
8.von Heijne von Heijne, G., Eur. J. Biochem., 116, 419, 1981.
タンパク質可撓性予測アルゴリズム
9.Karplus and Schulz Karplus, P.A. & Schulz, G.E., Naturwissenschaften, 72, 212, 1985.
これらの文献に記載される方法を用いて、抗原Aの2次構造を特定した。その後、以下に示される文献に記載されるようなアルゴリズムにおける2つ以上のプログラムによってコンセンサスが得られた箇所を、エピトープ予測領域(Epitope-Predictive region)とした(判定はSampling Windowのサイズによるが、Defaultを用いた)。
タンパク質抗原性予測アルゴリズム
1.Hopp and Woods Hopp, T.P. & Woods, K.R., Proc. Natl. Acad. Sci., 78, 3824, 1981.
2.Parker Parker, J.M.R., Guo, D. & Hodges, R.S., Biochemistry, 25, 5425, 1986.
3.Protrusion Index (Thornton) Thornton, J.M, Edwards, M.S., Tayler, W.R. & Barlow, D.J., EMBO J., 5, 409, 1986.
4.Welling Welling, G.W, Wiejer, W.J, Van der Zee, R. & Welling-Webster, S., FEBS Letters., 188, 215, 1985.
抗原Aの予測される2次構造の一例は、図8および図9に示される。2次構造からの予測を考慮したうえで、E=11、N=55と決定した。
抗原Aに対する抗体の取得
免疫動物個体より、ハイブリドーマを作製し、標的結合スクリーニングにより高親和性特異抗体を選択した。本実施例では、ある程度の個数の抗体が得られた段階(動物個体数1−6由来の抗体群)でペアアッセイを行い、ダウンサンプリングを行った。その中から適宜抗体を選択し、最終的なオリジナル抗体パネルに含めた。抗原Aに対する抗体の取得では18個体を用い、300以上の抗体から選択した221以上の抗体についていずれかの段階でペアアッセイを行った。
完成したエピトープ均質化抗体パネルが、抗原のエピトープ領域を正確に網羅していることを確認するため、変異体との結合アッセイを行った。
本実施例では、CD30抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルの作製を行った。
[CD30]
CD30は、分子量65kDaの、TNF受容体スーパーファミリーの一種の細胞表面タンパク質である。ホジキンリンパ腫や未分化大細胞リンパ腫等の細胞に発現し、アドセトリス(Brentuximab vedotin)(商標)のターゲット分子とされている等、抗体医薬の標的として注目されている。
本実施例においては、CD30に対するモノクローナル抗体を上記実施例と同様に、細胞融合によって産生し、抗体の集合として用いた。モノクローナル抗体の産生の手順の模式図が図20に示される。また、いくつかの機能既知の抗体を含めて抗体パネルの作製を行った。例えば、HeFi−I(Frederick Cancer Research and Development Center,National Cancer Institute)(Hecht et al., 1985)、Ber−H2(DAKO, Glostrup, Denmark) (Schwarting et al., 1989)、HRS4 (Biodesign Int., Kennbunk, ME)、Ki4 (supplied by Dr. Hilmer Lemke, Christian-Albrechts University, Kiel, Germany) (Horn-Lohrenset al., 1995)およびM67(supplied by Dr. Colin S. Duckett, Department of Pathology, University of Michigan) (Gruss et al., 1994)である。
抗CD30モノクローナル抗体のすべてのペア(実施例1の第1の抗体と第2の抗体に相当する)について相互競合を調査した。マイクロタイタープレート(MaxiSorp, Nalge Nunc, Rochester, NY)を、リン酸緩衝食塩水(PBS)中200ng/50μl/ウェルのヤギ抗マウスIgG(Fcg fragment specific, 115-005-071, Jackson ImmunoResearch, Grove, PA)を用いて、室温で2時間にわたってコーティングした。
CD30は二つのTNFRドメインを持つが(広義に定義されるTNFRドメイン)、各TNFRドメインはそれぞれ3つずつの、システインリッチドメイン(CRD)と呼ばれる単位から構成される。さらに各CRDには、ジスルフィド結合ペアを持つモジュール構造が2つある場合が、典型的である。エピトープ領域の広さから考えると、エピトープグループが形成されている高次構造はこの各モジュールに相当するが、通常のドメイン検索法では、このモジュール構造が高次構造上に保存されているか、不明である。そこでシークエンスのホモロジー解析によって、システインペアの保存を解析し、モジュール構造の推定を行った(図21A)。なお、図の左にはCD30の19−170と、226−337の配列をクエリとして用いて生成した3次元ホモロジーモデルを示す((TNFR2結晶構造を、両方のクエリ配列についてテンプレートとして用いた(それぞれ配列同一性31%および28%)(SWISS MODEL))。3次元モデリングはCRDドメインの構造については良好な結果を与え、モジュール構造の推定によりエピトープ領域を推定するストラテジーは妥当であると考えられた。その結果CD30の6つあるCRDのうち、N末から4番目のCRDと6番目のCRDは不完全であり、高い可能性で、構造モジュールが形成されていないことがわかった(保存されているシステイン残基を含まない)。解析の結果、最終的にCD30に予測されるモジュール構造は9つであった。またCD30の他の領域は、他の報告されているタンパク分子の構造とホモロジーはなく、はっきりとしたエピトープと推定される領域がなかった。構造が予測されない領域は大きく2つに分かれ、各々92アミノ酸残基と、77アミノ酸残基のスパンで構成されている。
実施例1と同様に、CD30に対するモノクローナル抗体の集合を提供し、ペア逐次結合アッセイを行った(図22)。
作製したエピトープ均質化抗体パネルが、抗原上のエピトープを実際に網羅しているかを確認するため、Deletion mutantによるエピトープマッピングを行い、各エピトープグループが認識するドメインを見出した。本発明の方法に従って作製した均質化抗体パネルのエピトープグループはDeletion mutantによるエピトープマッピングの結果とよく整合した(図27)。従って作製したエピトープ均質化抗体パネルは、予想通りCD30を網羅するエピトープ領域群を認識した。
本実施例では、FCRL5に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製した。
[FCRL5]
FcRL5(Fcレセプター様タンパク質5)は、CD307e、FCRH5、IRTA2(免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連タンパク質2)とも称されるタンパク質である。FcRL5の模式的な構造は、図36に示される。FcRL5遺伝子は、Fcレセプターのファミリーと相同な細胞表面レセプターをコードする。B細胞系列の細胞において、その発現が限られていることから、このタンパク質は、B細胞悪性腫瘍の免疫療法の新たな標的として研究されている。本実施例では、その遺伝子産物の発現についての研究に使用することができる、FCRL5遺伝子産物に特異的な抗体を含むエピトープ均質化抗体パネルを作製した。
図36に示されるように、FCRL5はイムノグロビンドメインを9つ有するため、目標値のエピトープグループ数は9と定められた。4-9番目のドメインがファミリーメンバーに似ていることから、FCRL5に厳密に特異的な抗体を選択できるように、これらのドメインに対応するエピトープグループには、各々4つの少し多めの抗体とし、他は各々2抗体を目標値とし、N=4x6+2x3=30とした。
上記実施例と同様に抗体の取得を行い、最初の免疫動物からNの値を充足するだけの抗体を取得することができた。得られた抗体の集合を、オリジナル抗体パネルとして、ペア逐次結合アッセイを行った。ペア逐次アッセイの結果に基づき、クラスタリングを行った。
FcRL5に対するエピトープ均質化抗体パネルに含まれる抗体群の各ドメインの欠失変異体に対する反応性と、FCRLファミリーメンバーに対する交差反応性とを図40Aおよび図40Bに示す。
4−1:材料および方法
[TNFR2]
TNFR2は、TNFRSFの一種であり、TNFαをリガンドとする受容体である(Croft M1, Benedict CA, Ware CF. Clinical targeting of the TNF and TNFR superfamilies. Nat Rev Drug Discov. 12(2), 147−68. (2013).;Grell M, Douni E, Wajant H, Lohden M, Clauss M, Maxeiner B, et al. The transmembrane form of tumor necrosis factor is the prime activating ligand of the 80 kDa tumor necrosis factor receptor. Cell. 83(5), 793-802. (1995).)。TNFαは、二つの受容体であるTNFR1とTNFR2に結合し、生体における様々な生理機能に重要な役割を示す事が知られている。そのうち、デスドメインを細胞内領域に持つTNFR1は、古くからその生理機能が調べられており、炎症の惹起に重要な役割を持つことが知られている(Pimentel−Muinos, F. X. & Seed, B. Regulated commitment of TNF receptor signaling: a molecular switch for death or activation. Immunity 11, 783-793. (1999).)。一方で、TNFR2の機能については、その詳細な機能が明らかにされておらず、どのような機能を持つのか、その役割の解明に関する研究が精力的に行われている。TNFR2の発現は、血管内皮細胞やリンパ球を含むT細胞集団などに限定されており(Ware, C. F. et al. Tumor necrosis factor (TNF) receptor expression in T lymphocytes. Differential regulation of the type I TNF receptor during activation of resting and effector T cells. J. Immunol. 147, 4229-4238 (1991).)、TNFR2の活性化に依存したT細胞の増殖
や細胞生存の亢進が報告されている(Kim EY, Priatel JJ, Teh SJ, Teh HS. TNF receptor type 2 (p75) functions as a costimulator for antigendriven T cell responses in vivo. Journal of immunology. 176(2), 1026-35. (2006).)。これらのことからTNFR2は、炎症の制御や生体防御機構に大きな役割を持つことが予測されているものの、その詳細な機能の解明が、病態の発症や悪化、さらにはTNFR2を治療薬の標的としての利用することに繋がると期待されている。
各抗TNFR2抗体産生ハイブリドーマは、5%ウシ胎児血清(gibco)(以下FBS)および1%ペニシリンーストレプトマイシン混合溶液(ナカライテスク)(以下PS)および1%L-グルタミン(ナカライテスク)(以下L−gln)およびインターロイキン6(以下IL6)含有イスコブ変法ダルベッコ培地(ナカライテスク)(以下IMDM)で37℃,5%CO2条件下で継代培養した。培養上清を5,500rpmで10分間遠心し、上清を回収し、終濃度0.1%アジ化ナトリウムを加えた。50,000MWCO PESメンブレン(Sartorius)を取り付けたVivacell250(Sartorius)を用いて、150rpm、4℃、0.32MPaで培養上清の限外濾過を行った。限外濾過を行った溶液にprotein G Sepharose(GE Healthcare)(以下Protein G ビーズ)を4ml加え、ローテーターを用いて、4℃で一晩攪拌した。500Gで1分間遠心し、沈殿したProtein Gビーズを回収した。Protein G ビーズをPBSで洗浄する作業を3回繰り返した。glysine−HCl(pH2.7)をProtein G ビーズに1.5ml加え、攪拌し、スピンカラムに移した。1M Tris−HCl(pH8.0)(ニッポンジーン)を375μl加えたチュープにスピンカラムをセットし、500Gで1分間遠心した。回収した溶液は、MWCO12−14,000の透析膜(Spectrum Labs)およびPBSを用いて4℃で一晩透析を行った。
goat anti−mouse IgG(Jackson)をPBSで2μg/mlに希釈し、96穴イムノプレートに50μl/well添加し、5時間室温で静置して固相化した。PBSTで1回洗浄後、BBBで2μg/mlに希釈した各抗TNFR2抗体または抗CD20抗体の1F5を50 μl/well添加し、一晩4℃で静置してindirectで固相化した。PBSTで2回洗浄後、終濃度10ng/mlとなるようにBBBで希釈したhTNFR2−rFcと、終濃度5μg/mlになるようにBBBで希釈した各抗TNFR2抗体を混和した溶液を50μl/well添加し、1時間室温で反応させた。PBSTで2回洗浄後、BBBTで4000倍に希釈したALP−conjugated goat anti−rabbit IgG(Jackson)を50μl/well添加して、室温で1時間反応させた。PBSTで4回洗浄後、ALP bufferで希釈した1mg/mlのPNPPを100μl/well加えて発色を行い、測定波長405nmで吸光度を測定した。
使用したプラスミドは、pcDNA6/myc−His AにCD30のドメイン1をTNFR2のドメイン1に置換したタンパク質のDNAを組み込んだTNFR2 DS1, pcDNA6/myc−His AのCD30のドメイン2をTNFR2のドメイン2に置換したタンパク質のDNAを組み込んだTNFR2 DS2, pcDNA6/myc−His AのCD30のドメイン3をTNFR2のドメイン3に置換したタンパク質のDNAを組み込んだTNFR2 DS3である。10%FBSおよび1%PSを含むダルベッコ改変イーグル培地(以下DMEM)を用いて、37℃,5%CO2条件下で293T細胞を継代培養した。293T細胞を5×105cells/mlに調整し、6穴平底プレート(Costar)に2ml/well添加し、37℃,5%CO2条件下で一晩培養した。LipofectamineTM(R)3000Reagent(Thermo Fisher)の手法に従って、TNFR2 DS1, TNFR2 DS2, TNFR2 DS3を293Tへトランスフェクションし、一晩37℃,5%CO2条件下で培養した。0.05% EDTAを含む0.53mMトリプシンで処理した293TをFACS buffer(0.1% アジ化ナトリウム、2.5% FBS、25% DMEMを含むPBS溶液)を用いて8×106cells/mlに調整し、96穴V底プレート(Violamo)に25μl/well添加した。さらに、2μg/mlに調整した各TNFR2抗体または抗CD30抗体を25μl/well添加し、氷上で30分静置した。1200rpmで5分間遠心した後、上清を除去した。FACS bufferで1回洗浄後、200倍希釈したGoat anti−mouse−PE(Jackson)25μl/well添加し、氷上、暗所で30分静置した。1200rpmで5分間遠心した後、上清を除去した。FACS bufferで1回洗浄後、200μl/wellで懸濁を行い、FCMによって解析を行った。
使用したプラスミドは、human TNFR2のドメイン1とドメイン2にrabbit Fcが結合したタンパク質のDNAを組み込んだpcDNA3.1 hygro(以下TNFR2 ED 1−2−rFc)、または、human TNFR2のドメイン2とドメイン3にrFcが結合したタンパク質のDNAを組み込んだpcDNA3.1 hygro(以下TNFR2 ED 2−3−rFc)または、human TNFR2のドメイン3とドメイン4にrFcが結合したタンパク質のDNAを組み込んだpcDNA3.1 hygro(以下TNFR2 ED 3−4−rFc)である。10% FBSおよび1%PSを含むDMEMを用いて、37℃,5%CO2条件下で293T細胞を継代培養した。293T細胞を5×105cells/mlに調整し、6穴平底プレートに2ml/well添加し、37℃,5%CO2条件下で一晩培養した。LipofectamineTM(R)3000 Reagentの手法に従って、TNFR2ED 1−2−rFc, TNFR2ED 2−3−rFc, TNFR2ED 3−4−rFcを293Tへトランスフェクションし、一晩37℃,5%CO2条件下で培養した。goat anti−rabbit IgGをPBSで希釈し、96穴イムノプレートに50μl/well添加し、4℃で一晩静置して固相化した。PBSTで1回洗浄後、TNFR2 ED 1−2−rFc, TNFR2 ED 2−3−rFc, TNFR2 ED 3−4−rFcをトランスフェクションした細胞それぞれの培養上清を50μl/well添加し、一晩4℃で静置してindirectで固相化した。PBSTで1回洗浄後、BBBで希釈した1μg/mlの各TNFR2抗体または1F5、TNFR2を免疫した際の血清を50μl/well添加し、室温で1時間反応させた。PBSTで2回洗浄後、BBBTで4000倍に希釈したALP−conjugated goat anti−rabbit IgGを50μl/well添加して、室温で1時間反応させた。PBSTで4回洗浄後、ALP bufferで希釈した1mg/mlのPNPPを100μl/well加えて発色を行い、測定波長405nmで吸光度を測定した。
10%FBSおよび1%PSを含むIMDMで継代培養したRamos Blue(InvivoGen)またはhuman TNFR2を発現するプラスミドをトランスフェクションし、細胞膜上にTNFR2が発現しているRamos Blue(以下Ramos Blue/TNFR2)をそれぞれ2,67×106cells/mlに調整し、96穴平底プレート(NUNC)に75μl/well添加した。さらに、12μg/mlから10倍段階希釈した各抗TNFR2抗体またはTNFRSF8抗体またはTNFRSF5抗体または400ng/mlから5倍段階希釈したhuman TNFα(peprotech)を25μl/well添加し、37℃、5%CO2条件下で22時間培養を行った。培養上清20μlにALP bufferで希釈した1mg/mlのPNPPを100μl/well加えて発色を行い、測定波長405nmで吸光度を測定した。
Tumor necrosis factor receptor 2(TNFR2)(UniProt: P20333、RefSeq (protein) NP_001057)はアミノ酸461残基からなる、TypeI膜タンパク質であり、エピトープの存在する細胞外ドメインは23-257アミノ酸の領域に相当する。
1.TNFR2の高次構造情報(http://www.rcsb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=3ALQ, R chain)を用い、各原子のExposed Area (accessible surface area (ASA))をMSMSで計算した(http://mgltools.scripps.edu/packages/MSMS、Michel Sanner, Arthur J. Olson, Jean Claude Spehner (1996). Reduced Surface: an Efficient Way to Compute Molecular Surfaces. Biopolymers, Vol 38, (3), 305-320.Sanner M.F.)。
5.ある仮想エピトープ(仮想エピトープ1)に含まれるすべての原子の数を数え、Xとした。仮想エピトープ1に含まれる原子のうち、別のある仮想エピトープ(仮想エピトープ2)に含まれる原子の数を数え、その数をYとした。
7.仮想競合試験の結果を、ユークリッド距離を用いたウォード法(Ward's Method)により階層的クラスタリングした。仮想競合試験に基づき1〜62の仮想エピトープ領域をクラスター分析した結果は、樹形図として示される(図42)。
上記手順にしたがって、TNFR2に対する抗体を取得し、抗体パネルを作製した。26抗体が取得でき、抗体数がN以上であるため、上記の手順に従い逐次結合アッセイを行い、抗体パネルについてクラスタリングを行った。
密度依存的ノーマリゼーション(近傍のエピトープを認識する抗体と、樹形図の高さの1%以下の低い位置でクラスターを形成するものを除く)、同一のクラスターに属する抗体を1つ、ランダムに残す(エピトープを減らさない)
Step2(21→20MAbs)
密度依存的ノーマリゼーション(近傍のエピトープを認識する抗体と、樹形図の高さの2%以下の低い位置でクラスターを形成するものを除く)、同一のクラスターに属する抗体を2つ、ランダムに残す(エピトープを減らさない。かつエピトープに特徴的なアッセイパターンを示す2つ(複数)の抗体を残すことで、クラスタリングの解析で当該エピトープが除外される危険性を減らす)
Step3(20→17MAbs)
Reference抗体を選別するため抗体1つのエピトープを許容する。ELISAアッセイでの非特異的吸着が比較的高い25%のMabを除く。もっとも類似の抗体またはクラスターと結合する樹形図のノードの高さが2%以上になる場合、その抗体は除外しない(その抗体に代表されるユニークなエピトープグループを残す)、同一のクラスターに属する抗体を1つ、ランダムに残す(エピトープを減らさない)
それぞれの部分パネルについてクラスタリングを行い、EGSIに基づいてエピトープグループ数を算出した。
作製途中の不完全パネルに含まれる抗体には、完成された均質化抗体パネルの要素となる有用抗体が含まれる場合もある。この実施例では作製途中の不完全パネルの有用性を調べるために、TNFR2抗体の抗TNFR2 26抗体から構成されるオリジナルパネルに含まれる抗体の性状について解析を行った。
作製した抗TNFR2抗体のうち、TR92、TR94、およびTR109は、抗体のイムノグロブリンFvの重鎖と軽鎖についてRapid amplification of cDNA end(RACE)法でcDNAシークエンスを決定した。得られたcDNAシークエンスと導出されるアミノ酸配列を以下に示す。
>TR92 重鎖可変領域核酸配列(配列番号2)
AAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAAACCCGGGGCATCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTGAGTCTATTATACACTGGGTAAAGCAGAGGTCTGGACAGGGTCTTGAGTGGATTGGGTGGTTTTACCCTGGAAGTGATAATATAAACTACAATGAGAAATTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGCGGACAAATCCTCCAGCACAGTCTATATGGAGCTTACTAGATTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGCCACGAAGGCCCGTATGTGTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
>TR92 重鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号3)
KVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTESIIHWVKQRSGQGLEWIGWFYPGSDNINYNEKFKDKATLTADKSSSTVYMELTRLTSEDSAVYFCASHEGPYVYFDYWGQGTTLTVSS
>TR92 重鎖CDR1アミノ酸配列(配列番号4)
ESIIH
>TR92 重鎖CDR2アミノ酸配列(配列番号5)
WFYPGSDNINYNEKFKD
>TR92 重鎖CDR3アミノ酸配列(配列番号6)
HEGPYVYFDY
>TR92 軽鎖可変領域核酸配列(配列番号7)
GACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGAGTACTGCTGTTGCCTGGTATCAACAAAAACCAGGGCAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGACATCCACCCGGCACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTATACTCTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAGGACCTGGCACTTTATTACTGTCAGCATCATTATAGCACTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATACAACGGGCTGAT
>TR92 軽鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号8)
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWTSTRHTGVPDRFTGSGSGTDYTLTISSVQAEDLALYYCQHHYSTPYTFGGGTKLEIQRAD
>TR92 軽鎖CDR1アミノ酸配列(配列番号9)
KASQDVSTAVA
>TR92 軽鎖CDR2アミノ酸配列(配列番号10)
WTSTRHT
>TR92 軽鎖CDR3アミノ酸配列(配列番号11)
QHHYSTPYT
>TR94 重鎖可変領域核酸配列(配列番号12)
CAGGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGACTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAGCTACTGGATGCAGTGGGTAAAACAGACGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAGATGGTGATAGTAGGTACATTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGATGGTAACTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
>TR94 重鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号13)
QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQTPGQGLEWIGAIYPGDGDSRYIQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCARDGNYYAMDYWGQGTSVTVSS
>TR94 重鎖CDR1アミノ酸配列(配列番号14)
SYWMQ
>TR94 重鎖CDR2アミノ酸配列(配列番号15)
AIYPGDGDSRYIQKFKG
>TR94 重鎖CDR3アミノ酸配列(配列番号16)
DGNYYAMDY
>TR94 軽鎖可変領域核酸配列(配列番号17)
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCTAGGGGAACGGGTCACCATAACCTGCACTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTCCACTTACTTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACTCTGGATTTATAGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCAGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCACCAGTATCATCGTTCCCCACCCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGAT
>TR94 軽鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号18)
QIVLTQSPAIMSASLGERVTITCTASSSVSSTYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPPTFGAGTKLELKRAD
>TR94 軽鎖CDR1アミノ酸配列(配列番号19)
TASSSVSSTYLH
>TR94 軽鎖CDR2アミノ酸配列(配列番号20)
STSNLAS
>TR94 軽鎖CDR3アミノ酸配列(配列番号21)
HQYHRSPPT
>TR109 重鎖可変領域核酸配列(配列番号22)
CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACATGCACCGTCTCAGGGTTCTCATTAACCGTCTATGGTGTAAATTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAATGATATGGGGTGATGGAAGCACAGCCTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCACCAAGGACAACTCCAAGACCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCAGGTACTACTGTGCCAGAGATGGGCGACGGTATGCTCTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
>TR109 重鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号23)
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTVYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTAYNSALKSRLTITKDNSKTQVFLKMNSLQTDDTARYYCARDGRRYALDYWGQGTSVTVSS
>TR109 重鎖CDR1アミノ酸配列(配列番号24)
VYGVN
>TR109 重鎖CDR2アミノ酸配列(配列番号25)
MIWGDGSTAYNSALKS
>TR109 重鎖CDR3アミノ酸配列(配列番号26)
DGRRYALDY
>TR109 軽鎖可変領域核酸配列(配列番号27)
GACATTGTGCTGACCCAATCTCCAACTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGGGCCACCATATCCTGCAGAGCCAGTGAAAGTGTTGATAGTTATGGCGATAGTTTTTTGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCATACTCCTCATCTATCGTGCATCCAACCTAGATTCTGGGATCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTAGGACAGACTTCACCCTCACCATTAATCCTGTGGAGGCTGATGATGTTGCAACCTATTACTGTCAGCAAAGCAATGAGGATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTAGAAATAAACCGGGCTGAT
>TR109 軽鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号28)
DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISCRASESVDSYGDSFLHWYQQKPGQPPILLIYRASNLDSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEINRAD
>TR109 軽鎖CDR1アミノ酸配列(配列番号29)
RASESVDSYGDSFLH
>TR109 軽鎖CDR2アミノ酸配列(配列番号30)
RASNLDS
>TR109 軽鎖CDR3アミノ酸配列(配列番号31)
QQSNEDPYT
抗体の配列の番号付けには、種々のツールを用いることができ、例えば、様々なNumberingを自動で行うツールとして、Abnum: Antibody numbering http://www.bioinf.org.uk/abs/abnum/がある(Abhinandan, K.R. and Martin, A.C.R. (2008) Analysis and improvements to Kabat and structurally correct numbering of antibody variable domains Molecular Immunology, 45, 3832−3839.)。
方法:ヒトTNFR2−rabbit Fc融合たんぱく質(a)、またはヒトTNFR2全長を一過性発現させた293細胞のライセート(b)をSDS−PAGE(4〜20%のグラジエントゲル)で分離し、常法によりPVDFメンブランに転写した。膜上の抗原分子と各抗TNFR2 抗体とインキュベートしたのち、結合した抗体をALP−標識抗マウスIgGとBCIP/NBT基質を用いて検出した。
上記の実験により活性が確認されたマウス抗体である抗TNFR2アゴニスト抗体(Ep5: TR92)およびアンタゴニスト抗体(Ep9: TR109) のヒト化を行った。ホモロジーモデリングにより構築したTR92とTR109の高次構造モデルを図73に示す。モデルの構築(Nat Protoc 2017, 12:401)によりTR109のCDR−L1が大きく突き出た構造をしていることが示唆され、特徴的エピトープ認識により、リガンド結合を阻害するアンタゴニストとしての抗体機能を有する可能性が考えられた。
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本願は、日本国特許庁に出願された特願2016-225858(2016年11月21日出願)および特願2017-21553(2017年2月8日出願)に対して優先権主張をするものであり、その内容は本願においてその全体が参考として援用される。
配列番号2:TR92 重鎖可変領域核酸配列
配列番号3:TR92 重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号4:TR92 重鎖CDR1アミノ酸配列
配列番号5:TR92 重鎖CDR2アミノ酸配列
配列番号6:TR92 重鎖CDR3アミノ酸配列
配列番号7:TR92 軽鎖可変領域核酸配列
配列番号8:TR92 軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号9:TR92 軽鎖CDR1アミノ酸配列
配列番号10:TR92 軽鎖CDR2アミノ酸配列
配列番号11:TR92 軽鎖CDR3アミノ酸配列
配列番号12:TR94 重鎖可変領域核酸配列
配列番号13:TR94 重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号14:TR94 重鎖CDR1アミノ酸配列
配列番号15:TR94 重鎖CDR2アミノ酸配列
配列番号16:TR94 重鎖CDR3アミノ酸配列
配列番号17:TR94 軽鎖可変領域核酸配列
配列番号18:TR94 軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号19:TR94 軽鎖CDR1アミノ酸配列
配列番号20:TR94 軽鎖CDR2アミノ酸配列
配列番号21:TR94 軽鎖CDR3アミノ酸配列
配列番号22:TR109 重鎖可変領域核酸配列
配列番号23:TR109 重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号24:TR109 重鎖CDR1アミノ酸配列
配列番号25:TR109 重鎖CDR2アミノ酸配列
配列番号26:TR109 重鎖CDR3アミノ酸配列
配列番号27:TR109 軽鎖可変領域核酸配列
配列番号28:TR109 軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号29:TR109 軽鎖CDR1アミノ酸配列
配列番号30:TR109 軽鎖CDR2アミノ酸配列
配列番号31:TR109 軽鎖CDR3アミノ酸配列
配列番号32:膜型TNFR2のアミノ酸配列
配列番号33:TNFR2システインリッチドメインモジュール交換変異体MC1
配列番号34:TNFR2システインリッチドメインモジュール交換変異体MC2
配列番号35:TNFR2システインリッチドメインモジュール交換変異体MC3
配列番号36:TNFR2システインリッチドメインモジュール交換変異体MC4
配列番号37:TR92HUVH1
配列番号38:TR92HUVH2
配列番号39:TR92HUVL1
配列番号40:TR92HUVL2
配列番号41:TR109HUVH1
配列番号42:TR109HUVH2
配列番号43:TR109HUVL1
配列番号44:TR109HUVL2
Claims (38)
- ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製する方法であって、
(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に対する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体を加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
を含む方法。 - 前記Eが、前記抗原に存在し得るエピトープ領域の数である、請求項1に記載の方法。
- 前記Nが、前記E個のクラスターをクラスタリングによって生成するのに十分な抗体数である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記Nが、E×2〜6の範囲である、請求項3に記載の方法。
- e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルおよび/または部分パネルから、さらに抗体数が至適抗体数の上限Nx以下のものを選択する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記Nxが、E×2〜6の範囲で設定される、請求項5に記載の方法。
- e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルおよび/または部分パネルから、さらに抗体数が最小のものを選択する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記結合データが、前記オリジナル抗体パネルまたは部分パネルに含まれる第1の抗体の、該オリジナル抗体パネルまたは部分パネルに含まれる第2の抗体の存在下での抗原への結合の変化を結合アッセイによって検出した結合変化データに基づく、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記結合アッセイが、ペア逐次結合アッセイであって、該ペア逐次結合アッセイにおいて、前記第2の抗体は前記第1の抗体が前記抗原に接触された後に、該抗原に接触される、請求項8に記載の方法。
- 前記結合アッセイにおいて、前記第2の抗体が前記第1の抗体よりも大過剰量で存在する、請求項8または9に記載の方法。
- 前記クラスタリングが階層的クラスタリングである、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記結合データは各アッセイについて単独で取得されたデータと2つ以上の抗体を用いて取得されたデータを含み、前記クラスタリングが、各抗体の結合について、別の抗体の不存在下で得られたデータと該別の抗体の存在下で得られたデータとの間の変化データに基づいて行われる、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記エピトープグループ数が、前記クラスタリングによってクラスタリングした場合に、クラスタリングの安定性を示す安定度指数に基づいて決定されるクラスター数として算出される、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記安定度指数が、前記クラスタリングによって生成されるブートストラップ値を使用して算出される、請求項13に記載の方法。
- (d)における前記1または複数の抗体の前記オリジナル抗体パネルからの除外が、以下の基準:最も近接している抗体を選択して除外する;最も密度の高いクラスターを選択してそこから除去する;最も密度の高いクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;平均より高い密度のクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;バックグラウンドが高い抗体を除外する;シグナルが低い抗体を除外する;抗体数が3個以上のクラスターから抗体を除外する;最も近接している抗体の対であっても、他の抗体との距離が大きければ除外しない;機能が公知である抗体を除外しない;抗体の親和性を考慮して選択する;抗体のサブクラスを考慮して選択する;ハイブリドーマの抗体産生能を考慮して選択する;ハイブリドーマの血清の要求性を考慮して選択する;抗体の回収量を考慮して選択する;抗体タンパク質の酸変性の容易さ(精製の困難さ)を考慮して選択する;抗体のFvの配列を考慮して選択する;熱安定性が悪い抗体を除外する;pH安定性が悪い抗体を除外する;機械的刺激に対して安定性が悪い抗体を除外する;安定性が悪い抗体を除外する;高濃度で沈殿する抗体を除外する;溶液の粘度が高い抗体を除外する;溶解度が低い抗体を除外する;非特異的結合性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的外のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外する;目的外のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外する;目的抗原のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外しない;および高濃度でシグナルが低い抗体を除外する、のうちの1または複数の基準に基づいて行われる、請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体の集合を提供する工程が、前記抗原に対する既知の抗体を提供することを含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
- ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルの作製方法をコンピュータに実行させるためのプログラムであって、該方法は、
(a)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして前記コンピュータに提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数(N)以上である、工程と、
(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
を含む、プログラム。 - ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルの作製方法をコンピュータに実行させるためのプログラムを格納する記録媒体であって、該方法は、
(a)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして前記コンピュータに提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数(N)以上である、工程と、
(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数(E)を充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足する抗体パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
を含む、記録媒体。 - ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルを作製するシステムであって、該システムは、
(A)該抗原に対する抗体の集合のデータをオリジナル抗体パネルのデータとして、および該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを提供する抗体パネルデータ提供部であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に関する目標抗体数N以上である、抗体パネルデータ提供部と、
(B)抗体データ計算部であって、該計算部において:
該結合データに基づいて、該抗体パネルをクラスタリングし、
必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、結合データに基づいてクラスタリングし、
該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数(E)を充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足する抗体パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体のデータを加えて新たな抗体の集合を作成し、再度オリジナル抗体パネル生成、結合データ提供、クラスタリング、必要に応じて部分パネル生成およびクラスタリングを繰り返すように指令を出し、
得られた該エピトープ均質化抗体パネルを出力する
抗体データ計算部、
を備える、システム。 - ある抗原に対するエピトープ均質化抗体パネルであって、エピトープグループ数eが、該抗原に関する目標エピトープグループ数Eと比較してe≧Eであり、該Eが、該抗原に存在し得るエピトープ領域の数である、エピトープ均質化抗体パネル
- ある抗原の表面に存在する全てのエピトープ領域に対して、各エピトープ領域に結合する抗体を少なくとも2つ以上含む、エピトープ均質化抗体パネル。
- エピトープグループあたり2〜6個の抗体を含む、請求項20または21に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
- 各エピトープグループに属する抗体の数が、平均値から1標準偏差の範囲内である、請求項20〜22のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
- 前記抗原との親和性がKd=1×10−8Mより低い親和性である抗体を含む、請求項20〜23のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
- 抗体のスクリーニングのための、請求項20〜24のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
- 抗原の低免疫原性化のための、請求項20〜24のいずれか1項に記載のエピトープ均質化抗体パネル。
- ある抗原に対する抗体をスクリーニングする方法であって、該方法は:
(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に対する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)該オリジナル抗体パネルから、エピトープグループ数が減少しないように、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)(d)のクラスタリングで得られた部分パネルのエピトープ数が該オリジナル抗体パネルのエピトープグループ数以上であるものを選択し、該選択された部分パネルを用いて該スクリーニングを行う工程と
を包含する、方法。 - 前記における前記1または複数の抗体の前記オリジナル抗体パネルからの除外が、以下の基準:最も近接している抗体を選択して除外する;最も密度の高いクラスターを選択してそこから除去する;最も密度の高いクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;平均より高い密度のクラスターを選択して、その中で最も近接している抗体を選択して除外する;バックグラウンドが高い抗体を除外する;シグナルが低い抗体を除外する;抗体数が3個以上のクラスターから抗体を除外する;最も近接している抗体の対であっても、他の抗体との距離が大きければ除外しない;機能が公知である抗体を除外しない;抗体の親和性を考慮して選択する;抗体のサブクラスを考慮して選択する;ハイブリドーマの抗体産生能を考慮して選択する;ハイブリドーマの血清の要求性を考慮して選択する;抗体の回収量を考慮して選択する;抗体タンパク質の酸変性の容易さ(精製の困難さ)を考慮して選択する;抗体のFvの配列を考慮して選択する;熱安定性が悪い抗体を除外する;pH安定性が悪い抗体を除外する;機械的刺激に対して安定性が悪い抗体を除外する;安定性が悪い抗体を除外する;高濃度で沈殿する抗体を除外する;溶液の粘度が高い抗体を除外する;溶解度が低い抗体を除外する;非特異的結合性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原以外の近縁タンパク質への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外する;目的抗原のオルソログ抗原への交差反応性が高い抗体を除外しない;目的外のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外する;目的抗原のオルタナティブスプライシング産物に反応する抗体を除外しない;および高濃度でシグナルが低い抗体を除外する、のうちの1または複数の基準に基づいて行われる、請求項27に記載の方法。
- ある抗原に対する抗体をスクリーニングする方法であって、該方法は:
(a)該抗原に対する抗体の集合をオリジナル抗体パネルとして提供する工程であって、該抗体の集合に含まれる抗体数nは、該抗原に対する目標抗体数N以上である、工程と、(b)該オリジナル抗体パネルに含まれる抗体の結合データを得る工程と、
(c)該結合データに基づいて、該オリジナル抗体パネルをクラスタリングする工程と、(d)必要に応じて該オリジナル抗体パネルから、1または複数の抗体を除外して、1または複数の部分パネルを生成し、該1または複数の部分パネルの各々について、該結合データに基づいてクラスタリングする工程と、
(e)該オリジナル抗体パネルおよび該1または複数の部分パネルのエピトープグループ数eを算出し、e≧該抗原に関する目標エピトープグループ数Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在する場合には、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルをエピトープ均質化抗体パネルとし、e≧Eを充足するオリジナル抗体パネルまたは部分パネルが存在しない場合、該オリジナル抗体または該部分パネルに新たな抗体を加えて新たな抗体の集合を作成し(a)〜(d)を繰り返す、工程と
(f)該エピトープ均質化抗体パネルを用いて該スクリーニングを行う工程と
を含む、方法。 - 配列番号32の119〜201位にエピトープを有する、抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
- 抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物であって、該TNFR2抗体は、
(A)配列番号3(TR92重鎖)、配列番号13(TR94重鎖)、および配列番号23(TR109重鎖)からなる群より選択される重鎖可変領域のアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、
(B)配列番号8(TR92軽鎖)、配列番号18(TR94軽鎖)、配列番号28(TR109軽鎖)からなる群より選択される軽鎖可変領域のアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖と
を含む、
抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。 - 前記TNFR2抗体は、
(i)配列番号3(TR92重鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、配列番号8(TR92軽鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖とを含む抗体であるか、
(ii)配列番号13(TR94重鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、配列番号18(TR94軽鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖とを含む抗体であるか、あるいは
(iii)配列番号23(TR109重鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む重鎖と、配列番号28(TR109軽鎖)に示すアミノ酸配列のCDR1、CDR2およびCDR3、あるいはそれらの機能的等価配列を含む軽鎖とを含む抗体である、
請求項31に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。 - 前記TNFR2抗体は、
(i)配列番号4,5および6に示すアミノ酸配列を含む重鎖CDRと、配列番号9、10および11に示す核酸配列を含む軽鎖CDRとを含む抗体、
(ii)配列番号14、15および16に示すアミノ酸配列を含む重鎖CDRと、配列番号19、20および21に示す核酸配列を含む軽鎖CDRとを含む抗体、あるいは
(ii)配列番号24、25および26に示すアミノ酸配列を含む重鎖CDRと、配列番号29、30および31に示す核酸配列を含む軽鎖CDRとを含む抗体
である、請求項31または32に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。 - 前記TNFR2抗体は、
(i)配列番号3に示すアミノ酸配列と、配列番号8に示すアミノ酸配列とを含む抗体、
(ii)配列番号13に示すアミノ酸配列と、配列番号18に示すアミノ酸配列とを含む抗体、あるいは
(ii)配列番号23に示すアミノ酸配列と、配列番号28に示すアミノ酸配列とを含む抗体
である、請求項31〜33のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。 - 前記抗TNFR2抗体は、ヒト化抗体である、請求項31〜34のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
- TNFR2とTNFとの結合を阻害する、請求項31〜35のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
- TNFR2とTNFとの結合を活性化する、請求項31〜35のいずれか1項に記載の抗TNFR2抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物。
- 請求項31〜請求項37のいずれか1項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは機能的等価物、あるいはその重鎖および/または軽鎖をコードする核酸配列を含む1または複数の核酸分子。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016225858 | 2016-11-21 | ||
JP2016225858 | 2016-11-21 | ||
JP2017021553 | 2017-02-08 | ||
JP2017021553 | 2017-02-08 | ||
PCT/JP2017/041683 WO2018092907A1 (ja) | 2016-11-21 | 2017-11-20 | エピトープ均質化抗体パネル、ならびにその作製方法および利用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018092907A1 true JPWO2018092907A1 (ja) | 2019-10-17 |
JP7054209B2 JP7054209B2 (ja) | 2022-04-13 |
Family
ID=62145514
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018551721A Active JP7054209B2 (ja) | 2016-11-21 | 2017-11-20 | エピトープ均質化抗体パネル、ならびにその作製方法および利用 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7054209B2 (ja) |
WO (1) | WO2018092907A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK2953634T3 (da) | 2013-02-07 | 2021-08-30 | Massachusetts Gen Hospital | Fremgangsmåder til udvidelse eller udtømning af regulerende t-celler |
KR102410778B1 (ko) | 2016-05-13 | 2022-06-21 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | 길항성 항-종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 항체 |
CN108833156B (zh) * | 2018-06-08 | 2022-08-30 | 中国电力科学研究院有限公司 | 一种针对电力通信网的仿真性能指标的评估方法及系统 |
EP3840782A4 (en) * | 2018-08-20 | 2022-06-08 | The General Hospital Corporation | TUMOR NECROSIS FACTOR RECEPTOR SUPERFAMILY ANTAGONIST POLYPEPTIDES |
US20230192877A1 (en) * | 2020-03-30 | 2023-06-22 | National Institutes Of Biomedical Inovation, Health And Nutriton | Epitope region-bridging biparatopic antibody and method for producing same |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003048729A2 (en) * | 2001-12-03 | 2003-06-12 | Abgenix, Inc. | Discovery of therapeutic products |
DK2953634T3 (da) * | 2013-02-07 | 2021-08-30 | Massachusetts Gen Hospital | Fremgangsmåder til udvidelse eller udtømning af regulerende t-celler |
-
2017
- 2017-11-20 WO PCT/JP2017/041683 patent/WO2018092907A1/ja active Application Filing
- 2017-11-20 JP JP2018551721A patent/JP7054209B2/ja active Active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MABS, vol. 9, no. 1, JPN6018003895, October 2016 (2016-10-01), pages 29 - 42, ISSN: 0004679324 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7054209B2 (ja) | 2022-04-13 |
WO2018092907A1 (ja) | 2018-05-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7054209B2 (ja) | エピトープ均質化抗体パネル、ならびにその作製方法および利用 | |
CN102782148B (zh) | 与多种cc趋化因子结合的抗因子抗体 | |
Townsend et al. | Significant differences in physicochemical properties of human immunoglobulin kappa and lambda CDR3 regions | |
CN110177876A (zh) | 抗gpc3抗体 | |
JP2023538782A (ja) | Ccr8抗体及びその用途 | |
CN108139407B (zh) | 抗体表位 | |
CN112079929A (zh) | 双特异性抗体 | |
CN104017078A (zh) | 人源化的抗-cxcr5抗体、其衍生物及它们的应用 | |
CN111744013B (zh) | 抗tigit抗体联合pd-1抑制剂治疗疾病的方法和药物组合 | |
CN110914304A (zh) | Cd96抗体、其抗原结合片段及医药用途 | |
CN112703013B (zh) | Cd3抗原结合片段及其应用 | |
CN102007147A (zh) | 抗cd27抗体 | |
Fisher et al. | Generation and preclinical characterization of an antibody specific for SEMA4D | |
CN116239698A (zh) | 双功能融合蛋白及其医药用途 | |
US20210122818A1 (en) | Humanized anti-bag3 antibodies | |
KR20220154140A (ko) | Pvrig 결합 단백질 및 이의 의학적 용도 | |
CN114621345A (zh) | 一种抗lag-3的单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用 | |
CN114206929A (zh) | 一种抗tigit免疫抑制剂及应用 | |
CN116848135A (zh) | 新颖的抗gremlin1抗体 | |
WO2022135536A1 (zh) | Cd3人源化抗体及其应用 | |
DK2855527T3 (en) | TLR3 BINDERS | |
CN116801905A (zh) | Cd5抗体及其应用 | |
WO2020244574A1 (en) | Anti-cd137l antibodies and methods of using same | |
JP2010524475A (ja) | オステオポンチンの機能エピトープ、それと特異的に結合するモノクローナル抗体及び用途 | |
CA2875200A1 (en) | Fibrosis suppression by inhibiting integrin alpha8beta1 function |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200904 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210916 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211110 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220111 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220302 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220311 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220325 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7054209 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D04 |