CN109988200A

CN109988200A - 用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中使用的治疗剂

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Publication number: CN109988200A
Application number: CN201910375663.4A
Authority: CN
Inventors: 张建革; 林国强; 田平; 冯陈国; 詹常森; 周俊杰
Original assignee: HEHUANG PHARMACEUTICAL CO Ltd SHANGHAI
Current assignee: HEHUANG PHARMACEUTICAL CO Ltd SHANGHAI
Priority date: 2018-06-27
Filing date: 2019-05-07
Publication date: 2019-07-09
Anticipated expiration: 2039-05-07
Also published as: JP7248707B2; US11325937B2; CN111658659B; JP2023085345A; US20210115082A1; CN109988201B; JP7442712B2; EP3819303A1; CN109988200B; JP2021519341A; WO2020001166A1; CN111004297B; CN109988202B; CN109988202A; CN111004297A; EP3819303A4; CN109988201A; CN111658659A

Abstract

本发明涉及一种如式III所示的糖苷类化合物及其盐用于配制药物组合物的用途，其可用于预防和/或治疗缺血性脑血管疾病，尤其是脑卒中。

Description

用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中使用的治疗剂

技术领域

本发明涉及含有糖苷类化合物的治疗剂，其用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中的使用。

背景技术

脑血管病是指脑部动脉或支配脑的颈部动脉发生病变，从而引起颅内血液循环障碍，脑组织受损的一组疾病。临床上常以猝然昏倒、不省人事、或伴有口眼歪斜、言语不利和偏瘫为主要表现。缺血性脑血管病主要是指脑血栓形成、脑栓塞、多发性脑梗死等；其疾病特点为发病突然，进展迅速，病情危重，又因多发于老年人，易合并多发脏器功能损伤，预后不佳，死亡率较高。缺血性脑血管病由于脑动脉的血流急性中断致相应区域的脑组织缺血坏死，故称脑梗死。

脑卒中(cerebral stroke)又称“中风”、脑血管意外(cerebralvascularaccident, CVA)，是世界上最重要的致死性疾病之一，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性和出血性卒中。缺血性卒中的发病率高于出血性卒中，缺血性脑卒中系由各种原因所致的局部脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性病变坏死，进而产生临床上对应的神经功能缺失表现，严重影响着患者的生存质量。

对于缺血损伤病理干预的研究热点主要是改善脑血循环和神经保护。其中，改善脑血循环的措施目前主要是抗血栓治疗。抗血栓药分为溶栓药、抗血小板聚集药和抗凝血药。神经保护药物目前主要有钙离子拮抗剂、谷氨酸拮抗剂、谷氨酸释放抑制剂、GABA受体激动剂、自由基清除剂、细胞膜稳定剂等。

近年促血管新生的发现为有效治疗缺血性血管疾病提供了新的方向，目前也已成为医学领域的研究热点。血管新生能促进脑卒中后神经元存活，改善患者神经功能缺损及卒中后生存质量，但脑卒中后血管新生的影响因素及调控机制复杂。近年研究发现，PAR1参与卒中后微血管新生、神经修复等过程。血管新生是指在原有血管的基础上，通过芽生和(或)非芽生方式形成新的毛细血管。血管新生的主要过程包括:血管通透性增加；产生蛋白水解酶，降解细胞外基质，促进内皮细胞增殖；内皮细胞从基底膜上分离，迁移到血管周围间隙，通过黏附—增殖—重构，组成三维管腔；分化为新的毛细血管；间质细胞在中介分子诱导下进入血管壁，使血管稳定成熟。在正常生理状态下，机体内的血管一旦生成就保持高度的稳定性，并且受许多具有正向或负向调节作用的关键分子 (即促血管生长因子和抑血管生长因子)调控。血管新生的启动仅随刺激信号的出现而短暂开启，随即关闭，维持血管新生与减退的动态平衡。脑卒中后影响微血管新生的因素包括:局部供血供氧情况；凝血酶及其浓度变化；促血管生成因子水平，如缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMPs)、促血管生成素1(Ang-1)、促血管生成素2(Ang-2)等。PAR1通常与促血管生成因子相互作用，发挥促进血管新生的作用。VEGF是目前公认的对血管新生起关键作用的因子，正常情况下VEGF仅少量表达，以维持生理状态下的血管密度和通透性。而一些病理过程如炎症、肿瘤、创伤愈合、缺血、缺氧等可促进VEGF表达。脑卒中患者卒中病灶周围神经元、胶质细胞中VEGF表达增加，通过与内皮细胞表面受体特异性结合，促进血管内皮细胞增殖和迁徙、增加血管通透性、增强降解细胞外基质的因子表达，从而促进微血管新生。

本发明的糖苷类物质能够促进VEGF-A mRNA的表达，从而促进血管新生。

发明内容

发明人意外地发现，特定结构的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物可以预防和/或治疗缺血性脑血管疾病。

本发明的实施方案可以应用于涉及血管壁病变、血液成分改变和/或血流动力学变化导致的血管病变引发的脑部组织缺血的初期至晚期所有症状和/或病理变化。

因此，本发明提供了一种如下式III所示的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物：

其用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中使用；R¹、R²、R³、R⁴和R⁵各自独立地选自氢、羟基、巯基、取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基、硝基或卤素；

或者R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中任意相邻两个与其苯环上相连的碳原子形成5-7元杂环，所述杂环的杂原子为O或S；所述杂原子的数目为1个或多个；当杂原子数目多个时，所述杂原子相同或不同；

所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基中的取代基选自C₃-C₂₀环烷基、C₁-C₂₀烯烃基、取代或未取代的C₆-C₂₀芳基、卤素、取代或未取代的C₂-C₂₀杂芳基、C₃-C₆的环烷氧基、 C₁～C₂₀的烷氧基或C₁～C₂₀烷基；

所述取代或未取代的C₆-C₂₀的芳基和取代或未取代的C₂-C₂₀杂芳基中的取代基各自独立地为卤素或卤素取代的C₁～C₂₀烷基；

X为CH₂、NR⁷、O或S；

Y为CH₂、NR⁸、O或S；

Z为O或S；

R⁷和R⁸各自独立地为氢、芳基取代的C₁-C₆烷氧羰基，或C₁-C₆烷氧羰基；

每个R⁶各自独立地为氢或糖基；

n为2，3或4；

优选地：

当X为CH₂，Y为CH₂，n＝2，3或4时，R¹-R⁵不同时是H；

当n＝2，R¹、R⁴和R⁵是H时，R²和R³不同时是OCH₃和OH；

当n＝2，R¹、R²和R⁵是H时，R³和R⁴不同时是OH和OCH₃；

当n＝2，R²、R⁴和R⁵是H时，R¹和R³不同时是OH；

当n＝2，R¹、R²和R⁴是H时，R³和R⁵不同时是OH。

本发明提供了一种如下式I所示的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物：

其用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中使用，R1、R2、R3、R4和R5各自独立地选自氢、羟基、巯基、取代或未取代的C1～C20烷氧基(例如取代或未取代的C1～C10 烷氧基，例如取代或未取代的C1～C6烷氧基，)、硝基或卤素；

或者R1、R2、R3、R4和R5中任意相邻两个相与其苯环上相连的碳原子形成5-7 元杂环(例如所述R2和R3形成5-7元杂环)，所述杂环的杂原子为O或S(例如O)；所述杂原子的数目为1个或多个(例如两个)；当杂原子数目多个时，所述杂原子相同或不同；

所述取代或未取代的C1～C20烷氧基中的取代基选自C3-C20环烷基(例如C3-C10环烷基，再例如为C3-C6环烷基)、C2-C20烯烃基(例如C2-C6烯烃基，例如C2-C4烯烃基，再例如)、取代或未取代的C6-C20芳基(例如取代或未取代的C6-C10 芳基，再例如取代或未取代的芳基或萘基)、卤素(例如氟、氯、溴或碘)、取代或未取代的C2-C20杂芳基所述取代或未取代的C2-C20杂芳基中的杂原子可选自N、S和O中的一个或多个，(例如杂原子数目为1个；再例如所述杂原子为N；例如，所述取代或未取代的C2-C20杂芳基中可为仅有一个环的芳杂基)。

例如取代或未取代的C₂-C₁₀杂芳基，再例如取代或未取代的C₂-C₆杂芳基)、C₃-C₆的环烷氧基(例如))、C₁～C₂₀的烷氧基(例如C₁～C₁₀烷氧基，例如C₁～C₆烷氧基，再例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)或C₁～C₂₀烷基(例如C₁～C₁₀烷基；例如C₁～C₆烷基；再例如C₁～C₃烷基)；

所述取代或未取代的C₁-C₂₀的芳基和取代或未取代的C₂-C₂₀杂芳基中的取代基各自独立地选自卤素(例如氟、氯、溴或碘)或卤素(例如氟、氯、溴或碘)取代的C₁～C₂₀烷基(所述卤素取代的C₁～C₂₀烷基中的取代基的个数可为1个或多个，当为多个取代基时，各取代基可相同或不同；例如为卤素取代的C₁～C₁₀烷基；例如卤素取代的C₁～C₆烷基；例如卤素取代的C₁～C₃烷基；再例如-CF₃、-CHF₂或-CH₂F)；

X为CH₂、NR⁷、O或S；

Y为CH₂、NR⁸、O或S；

Z为O或S；

R⁷和R⁸各自独立地为氢、芳基取代的C₁-C₆烷氧羰基(例如苄氧羰基)或C₁-C₆烷氧羰基(例如叔丁氧羰基)；

R⁶为氢或

n为2，3或4。

优选地：

当X为CH₂，Y为CH₂，n＝2，3或4时，R¹-R⁵不同时是H；

当n＝2，R¹、R⁴和R⁵是H时，R²和R³不同时是OCH₃和OH；

当n＝2，R¹、R²和R⁵是H时，R³和R⁴不同时是OH和OCH₃。

本发明中，所述取代或未取代的C₂-C₂₀杂芳基可为取代或未取代的吡咯，取代或未取代的呋喃，取代或未取代的噻吩，取代或未取代的吡唑，取代或未取代的咪唑，取代或未取代的噁唑，取代或未取代的噻唑，取代或未取代的异噁唑，取代或未取代的吡啶，取代或未取代的哒嗪，取代或未取代的嘧啶，或取代或未取代的吡嗪，例如取代或取代的吡啶基。

本发明中，所述未取代的C₁～C₂₀烷氧基可为

本发明中，所述C₃-C₂₀环烷基可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

本发明中，所述取代的C₆-C₂₀的芳基可为

本发明中，所述的取代的C₁～C₂₀烷氧基可为

本发明中，所述未取代的C₂-C₂₀杂芳基可为

本发明中，所述5-7元杂环可为

本发明中，所述R¹可为氢。

本发明中，所述R²可为氢，取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基，或所述R²和R³形成所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基及其取代基的定义如前所述。

本发明中，所述R³可为氢、羟基、巯基、取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基、羟基、硝基或卤素；所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基及其取代基、和所述卤素的定义如前所述。

本发明中，所述R⁴可为氢，或取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基；所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基及其取代基的定义如前所述。

本发明中，所述R⁵可为氢。

本发明一实施例方式中，各基团定义如下所述(未提及的基团定义如前所述)：所述 X为CH₂，所述Y为CH₂、NR⁸、S或O；所述R⁸为氢、芳基取代的烷氧羰基或烷氧羰基。

本发明一实施例方式中，各基团定义如下所述(未提及的基团定义如前所述)：所述 X为NR⁷，所述Y为CH₂；所述R⁷为氢、芳基取代的烷氧羰基或烷氧羰基。

本发明一实施例方式中，各基团定义如下所述(未提及的基团定义如前所述)：所述 X为O或S，所述Y为CH₂。

本发明中，当所述R¹、R²、R³、R⁴和R⁵各自独立地选自氢、羟基、巯基、取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基、硝基或卤素时，所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基的个数可为一个或多个(例如1个，2个，或3个；再例如1个)。

本发明中，所述可为以下任一结构：

本发明中，较佳地，所述n＝2。

本发明中，较佳地，所述R¹、R²、R³、R⁴和R⁵各自独立地选自氢、取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基、硝基或卤素。

本发明中，较佳地，所述R⁶为氢。

本发明中，较佳地，所述式I所示的化合物中的的光学异构体可为：

更佳地为

在本发明某一实施方式中，所述式I所述的化合物的取代基可为以下情况(未提及的取代基的定义如前所述)：

所述n为2，3或4；

所述X为CH₂、NR⁷、O或S。

所述n为2，3或4；

Y为CH₂、NR⁸、O或S。

所述R¹为氢；

所述R²为氢，取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基，或所述R²和R³形成所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基及其取代基的定义如前所述；

所述R³为氢、羟基、巯基、取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基、羟基、硝基或卤素；所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基及其取代基、和所述卤素的定义如前所述；

所述R⁴为氢，或取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基；所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基及其取代基的定义如前所述；

所述R⁵为氢。

所述n为2；

所述X为CH₂时，所述Y为CH₂、NR⁸、S或O；

所述所述X为NR⁷时，所述Y为CH₂；

所述X为O或S时，所述Y为CH₂。

本发明还提供了以下任一结构的化合物：

优选地，这些化合物是：

本发明还进一步提供了用于预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中使用的提供了糖苷类化合物的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：溶剂中，将式V所示化合物进行还原反应，得到式VI所示化合物；

R^9’，R^10’和R^11’各自独立地为氢或Ac，且其中至少一个为Ac；R^6’为氢、Ac或者R^12’,R^13’,R^14’,和R^15’各自独立地为氢、Bz或Ac；n,X，Y，Z， R¹，R²，R³，R⁴，R⁵和R⁶的定义如上任一项中所述；当R^6’为氢或Ac时，R⁶为氢；当 R^6’为时，R⁶为

本发明还提供了式I所示化合物的制备方法，其包含以下步骤：溶剂中，将式II所示化合物进行还原反应，得到式I所示化合物，即可；

R^9’，R^10’和R^11’各自独立地为氢或Ac，且其中至少一个为Ac；R^6’为氢、Ac或者R^12’,R^13’,R^14’,和R^15’各自独立地为氢、Bz或Ac；n,X，Y，Z，R¹， R²，R³，R⁴，R⁵和R⁶的定义如前所述；当R^6’为氢或Ac时,R⁶为氢；当R^6’为时，R⁶为

本发明还提供了上述所示的糖苷类化合物，或如下所示化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物，在制备预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中应用；

本发明还提供了式I所示的糖苷类化合物，化合物TG-052、化合物TG-053、化合物TG-054或TG-057，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物在制备预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中应用；

本发明还提供了上述所示的糖苷类化合物，下式所示化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物，在制备治疗缺血性脑血管疾病尤其是脑梗死(脑卒中)的药物中的应用；

本发明还提供了式I所示的糖苷类化合物，化合物TG-052、化合物TG-053或化合物TG-054，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物在制备治疗缺血性脑血管疾病尤其是脑梗死(脑卒中)、的药物中的应用；

所述缺血性脑血管疾病涉及血管壁病变、血液成分改变和/或血流动力学变化导致的血管病变引发的脑部组织缺血的初期至晚期所有症状和/或病理变化，例如脑梗死(脑卒中)或心梗。

本发明还提供了上述所示糖苷类化合物的中间体化合物：

本发明还提供了式I所示糖苷类化合物的中间体化合物：

本发明进一步提供上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物，其用于在预防和/ 或治疗促血管生成的药物中的应用，优选在缺血性血管病中使用，进一步优选在缺血性脑血管疾病尤其是脑梗死(脑卒中)中使用。这一方面可以表达为上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物用于制备药物的用途，所述药物通过促血管生成用于预防和/或治疗哺乳动物(包括人)的缺血性血管疾病。进一步优选在缺血性脑血管疾病尤其是脑梗死(脑卒中)、中使用。另一方面还可以表达为促进有需要的患者血管生成的方法，优选为治疗和/或预防包括患有或易于患有缺血性血管疾病的哺乳动物(包括人)的方法，进一步是指患有缺血性脑血管病尤其是脑梗死(脑卒中)的哺乳动物(包括人)的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物，连同药用赋形剂或载体。

进一步本发明的上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物用于预防和/或治疗缺血性脑血管疾病的用途。缺血性脑血管疾病的实例包括：脑卒中、动脉粥样硬化性脑血栓形成、心源性脑血栓、急性缺血性脑血管综合征、小血管病变(也称为腔隙性脑卒中)、多发性脑梗死、大面积脑梗死、分水岭脑梗死、出血性脑梗死、无症状的脑梗死、脑静脉及静脉窦血栓形成、颅底异常血管网病、其他原因所致的缺血性脑卒中。

在一个优选的实施方案中，缺血性脑血管疾病是由动脉粥样硬化性血栓形成，动脉粥样硬化性血栓形成即在动脉粥样硬化及各类动脉炎等血管病变的基础上形成血栓导致管腔闭塞，引起脑组织缺血缺氧、坏死、软化等临床综合征。

在另一个优选的实施方案中，缺血性脑血管疾病是由心源性脑栓塞形成，心源性脑栓塞是指心源性栓子循血流径路向远端迁移进入脑动脉系统后导致血管闭塞引起的脑梗死。

在另一个优选的实施方案中，缺血性脑血管疾病是由急性缺血性脑血管综合征形成，急性缺血性脑血管综合征包括3种疾病：短暂性脑缺血发作、可逆性缺血性神经功能缺失和完全恢复性脑卒中。

在另一个优选的实施方案中，脑血管疾病是指脑卒中，脑卒中是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性和出血性卒中。

优选地将治疗有效量的本发明上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物根据通常给药途径并且根据本领域已知方法以常规药物组合物(该药物组合物包含有效量的活性成分和合适的药用载体)和剂型配制而施用至需要这样治疗的患者。

治疗有效量”是指这样的活性成分的量，当施用时，其足以防止所针对的疾病的一种或多种症状的发展，或在某种程度上缓解所述一种或多种症状。根据本发明施用的化合物的具体剂量将由围绕该病例的具体情况确定，所述情况包括所施用的化合物、给药途径、治疗的具体病况以及类似的考虑因素。特别地，“治疗有效量的化合物”是指足以防止或在某种程度上缓解一种或多种缺血性血管疾病的化合物的量，所述缺血性血管疾病包括缺血性脑血管病尤其是脑梗死(脑卒中)，进一步，缺血性脑血管疾病包括脑卒中、动脉粥样硬化性血栓形成、心源性脑血栓、急性缺血性脑血管综合征、小血管病变 (也称为腔隙性脑卒中)、多发性脑梗死、大面积脑梗死、分水岭脑梗死、出血性脑梗死、无症状的脑梗死、脑静脉及静脉窦血栓形成、颅底异常血管网病、其他原因所致的缺血性脑卒中。

进一步根据待治疗的缺血性血管疾病的类型和严重性以及具体患者对药物治疗的反应，单个剂量以及日剂量不同。因此，将根据在医生的指导下的标准医学原理来确定准确的单个剂量。

用于在治疗缺血性血管疾病中使用本发明糖苷类化合物的有效日剂量为0.01mg至约1000mg、约1mg至约500mg、或约10mg至约200mg以及可选的约0.01mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg、或约200mg至约600mg的其他活性剂的口服剂型。

本发明的上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物可以单独使用或组合使用或与其他治疗剂的联合疗法使用。

在本发明的一个实施方案中，上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物用于在预防和/或治疗缺血性血管疾病中使用，其中所述预防或治疗包括施用作为唯一活性成分使用。

在本发明的另一个实施方案中，上述糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物用于在预防和/或治疗缺血性血管疾病中使用，其中所述预防或治疗包括以与选自由以下各项组成的组中的治疗剂的联合疗法施用：另一种本发明糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物、降血压药、降低血脂的药物、溶解血栓的药物、抗血小板聚集的药物、抗凝药物、神经保护药物、钙离子拮抗剂、谷氨酸拮抗剂、谷氨酸释放抑制剂、GABA受体激动剂、自由基清除剂、细胞膜稳定剂。在一个优选的实施方案中，另外的治疗剂选自由以下各项组成的组：另一种本发明糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物、瑞替普酶、兰替普酶、孟替普酶、豆豉纤溶酶、新型蚯蚓纤溶酶、纳豆激酶、蛇毒纤溶酶原激活剂、阿司匹林、噻氯匹定、氯吡格雷、普拉格雷、替卡格雷、坎格雷洛、盐酸沙格雷酯、vorapaxar、 atopaxar、肝素、低分子肝素、华法林、利伐沙班、比法卢定、达比加群酯、依达拉奉、他汀类药物。

如对于本领域技术人员将明显的是，包含本发明糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物与另外的治疗剂的本发明的组合不仅在这些活性成分以单一组合物使用时是有效的，而且在以两个不同组合物(同时、依次或在一段时间之后分开地施用)使用时也是有效的。此外，本领域技术人员将理解，本发明糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物、可以开处方为与联合疗法中的其他活性成分一起使用，以预防和/或治疗缺血性血管疾病。

在一个特别的实施方案中，联合疗法包括向受试者同时、依次或分开地施用本发明的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物和另外的治疗剂。备选地，联合疗法包括向受试者施用在单一组合物中的本发明糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物和另外的治疗剂。

在本发明的一个实施方案中，本发明的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物可以方便地施用至患者。因此，用于本发明的用途的化合物可以为包含与药用赋形剂或载体组合的有效量的本发明的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物的药物组合物的形式。这一方面也可以表达为，包含与药用赋形剂或载体组合的有效量的本发明的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物的组合物用于在预防和/或治疗：脑梗死、脑卒中、动脉粥样硬化性血栓形成、心源性脑血栓、急性缺血性脑血管综合征、小血管病变(也称为腔隙性脑卒中)、多发性脑梗死、大面积脑梗死、分水岭脑梗死、出血性脑梗死、无症状的脑梗死、脑静脉及静脉窦血栓形成、颅底异常血管网病、其他原因所致的缺血性脑卒中。

在本发明的一个实施方案中，使用的化合物可以以包含常规药用载体的剂量单位制剂通过口腔、注射、皮下、呼吸道、透皮、非肠道、直肠、局部外用、静脉、肌肉或通过其它方式来给予。可以将药物组合物配制成任何药用形式，如：片剂、颗粒剂、注射剂、凝胶剂、丸剂、胶囊剂、栓剂、植入剂、纳米制剂、粉针剂。诸如片剂和胶囊剂的一些剂型可以再分成包含诸如达到期望目的的有效量的适当量活性组分的适当剂量单位剂型。

在另一个实施方案中，用于本发明的用途的本发明的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物为待施用至要治疗的患者的注射制剂，适用于本发明的注射剂是指药物与适宜的溶剂或分散介质制成供注入人体内的灭菌或无菌溶液、乳状液或悬浮液，以及供使用前配制成溶液或悬浮液的粉末无菌制剂。所述注射剂包括注射液(其中供静脉滴注用的大体积注射液也称静脉输液)、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。

载体包括赋形剂和稀释剂，并且必须具有足够高的纯度和十分低的毒性以使它们适于被给予待治疗的患者。载体可以是惰性的或其可以本身具有药用益处。

载体的种类包括但不限于：稀释剂如填料和疏松剂、粘合剂、润滑剂、抗结块剂、崩解剂、增甜剂、缓冲剂、防腐剂、增溶剂、等张剂、悬浮剂和分散剂、润湿剂或乳化剂、调味剂和芳香剂、增稠剂和媒介物。一些载体可以列在多于一种的类别中，如：植物油可以在一些制剂中用作滑润剂并在其他制剂中用作稀释剂。示例性药用载体包括糖、淀粉、纤维素、麦芽、明胶、滑石和植物油。可选的活性剂可以包括在药物组合物中，其基本上不影响本发明的化合物的活性。

本发明的积极进步效果在于：本发明所提供的糖苷类化合物制备方法简单，能显著提高VEGF-A mRNA的表达，可用于制备促血管生成，为寻求具有促血管生成活性治疗的脑梗死、心梗、下肢缺血性等微循环障碍疾病的药物的研究提供了可靠的保障。

本申请的化合物或盐可以是被给予的唯一活性剂或可以连同其他活性剂被给予。

术语约定：

“立体异构体”、“光学异构体”或“旋光异构体”是具有相同化学组成但原子或基团在空间中的排布不同的化合物。其包括“非对映异构体”和“对映异构体”

“非对映异构体”是具有两个或更多手性中心并且其分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同物理性能，例如：熔点、沸点、谱特性和反应活性。在拆分剂或色谱存在的情况下，使用诸如手性HPLC柱，可以在诸如电泳、结晶的高分辨分析步骤下分离非对映异构体的混合物。

“对映异构体”指代彼此无重叠镜像的一种化合物的两个立体异构体。对映异构体的 50:50的混合称为外消旋混合物或外消旋体，其在化学反应或处理过程中可以出现在已经没有立体选择性或立体定向性的情况下。

“烷基”包括支链和直链饱和脂肪族烃基两者，并具有指定数量的碳原子数量，一般1 至约12个碳原子。如在本文中使用的术语C₁-C₆烷基表示具有1至约6个碳原子的烷基。当本文中结合另一基团使用C₀-C_n烷基时，以(苯基)C₀-C₄烷基为例，指定的基团，在这种情况下，苯基是通过单个共价键(C₀)直接键合或通过具有指定的碳原子数(在这种情况下，1至约4个碳原子)的烷基链连接。烷基的实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、3-甲基丁基、叔丁基、正戊基、和仲戊基。

“烯基”或“烯烃基”指包括一个或多个不饱和的碳-碳键的直链和支链烃链，碳-碳键可以出现在沿着链的任一稳定点。本文中所述的烯基通常具有2至约12个碳原子。优选烯基是低级烯基，那些烯基具有2至约8个碳原子，如：C₂-C₈、C₂-C₆、和C₂-C₄烯基。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、和丁烯基。

“烷氧基”是指具有通过氧桥连接的指定数量的碳原子的如上所定义的烷基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、3-己氧基、和3-甲基戊氧基。

术语“杂环”表示5-至8-元饱和环、部分不饱和环、或包含选自N、O和S的1至约4个杂原子且剩余的环原子是碳的芳族环，或是7至11元饱和环、部分不饱和环、或芳族杂环系统和10至15-元三环系统，该系统包含选自N、O和S的多环系统中的至少1 个杂原子并且在多环系统中的各环中包含独立地选自N、O和S的至多约4个杂原子。除非另外指明，否则杂环可以连接至它在任何杂原子和碳原子处取代并且产生稳定结构的基团。当指明时，本文中所述的杂环可以在碳或氮原子上被取代，只要得到的化合物是稳定的。可以可选地季铵化杂环中的氮原子。优选杂环基中杂原子的总数不大于4而且优选杂环基中S和O原子的总数不大于2，更优选不大于1。杂环基的实例包括：吡啶基、吲哚基、嘧啶基、哒嗪基(pyridizinyl)、吡嗪基、咪唑基、噁唑基、呋喃基、苯硫基、噻唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、喹啉基、吡咯基、吡唑基、苯并[b]苯硫基 (benz[b]thiophenyl)、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噻吩基、异吲哚基、二氢异吲哚基、5,6,7,8-四氢异喹啉、吡啶基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、和吡咯烷基。

“芳基”或“杂芳基”表示包含选自N、O和S的1至4个、或优选1至3个杂原子并且剩余环原子为碳的稳定的5-或6-元单环或多环。当杂芳基中S和O原子的总数超过 1时，这些杂原子不彼此邻近。优选杂芳基中S和O原子的总数不大于2。尤其优选杂芳基中S和O原子的总数不大于1。可以可选地季铵化杂环中的氮原子。当指明时，这些杂芳基还可以用碳或非碳原子或基团取代。这种取代可以包括与可选地包含独立地选自N、O和S的1或2个杂原子的5至7-元饱和的环基的稠合，从而形成例如[1,3]二噁唑并[4,5-c]吡啶基。杂芳基的实例包括但不限于：吡啶基、吲哚基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、咪唑基、噁唑基、呋喃基、苯硫基、噻唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、喹啉基、吡咯基、吡唑基、苯并[b]苯硫基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噻吩基、异吲哚基、和5,6,7,8-四氢异喹啉。

“药学上可接受的盐”或“化合物的盐”是所公开的化合物的衍生物，其中，母体化合物通过制备无毒的酸或其碱加成盐改性，并且还指这些化合物和这些盐的药用溶剂化物，包括水合物。药用盐的实例包括但不限于：碱性残基如胺类的无机或有机酸加成盐；酸性残基如羧酸的碱或有机加成盐；等等，以及包括一种或多种上述盐的组合。药用盐包括诸如从无毒无机或有机酸形成的母体化合物的无毒盐和季铵盐。例如，无毒酸性盐包括衍生自无机酸的那些，例如：盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；其他可接受的无机盐包括金属盐如：钠盐、钾盐、铯盐等；碱土金属盐如：钙盐、镁盐等，以及包括一种或多种上述盐的组合。

化合物的有机盐包括由诸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、丁二酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对氨基苯磺酸、2-乙酸基苯酸、富马酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸、HOOC-(CH2)n-COOH(其中 n为0至4)等的有机酸制备的盐；有机胺盐，如：三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己基胺盐、N,N'-二苄基乙二胺盐等；和氨基酸盐，如：精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等，以及包括一种或多种上述盐的组合。

“糖基”包括单糖基、双糖基、寡糖基、多糖基等，其中单糖基包括但不限于赤藓糖基、苏力糖基、阿拉伯糖基、核糖基、木糖基、来苏糖基、葡萄糖基、甘露糖基、果糖基、半乳糖基等。双糖基包括但不限于蔗糖基、麦芽糖基、纤维二糖基、异麦芽糖基、龙胆二糖基、海藻糖基和乳糖基等。

“前药”是指在宿主中代谢，如水解或氧化成本发明化合物的化合物，前药典型的例子包括在活性化合物的官能团上具有生物不稳定保护基团的化合物。前药包括可被氧化、还原、胺化、脱胺化、羟基化、脱羟基化、水解、脱水、烷基化、脱烷基化、酰基化、脱酰基、磷酸化、脱磷酸化以产生活性化合物的化合物。

“衍生物”是指化合物的氢原子或原子团被其他原子或原子团取代而衍生的较复杂的产物。

附图说明

图1为海绵植入动物模型上化合物促进VEGF-A mRNA表达作用的示意图。

图2为不同药物在MCAO急性脑梗模型上的梗死率(％)。

图3为不同药物在MCAO急性脑梗模型上的体重变化率(％)。

图4为Longa神经评分标准的示意图。从左向右依次为：1分，表示不能完全伸展对侧前爪；2分，表示向对侧转圈；3分，表示向对侧倾倒；4分，表示不能自发行走，意思丧失。

图5为不同药物在MCAO急性脑梗模型上的Longa神经评分的示意图。

图6为不同药物在MCAO急性脑梗模型上的脑含水量及血脑屏障完整性的测定。

图7为药物在2VO慢性脑缺血大鼠模型上的体重变化率。

图8为药物在2VO慢性脑缺血大鼠模型上的Morris水迷宫定位航行实验结果。

图9为药物在2VO慢性脑缺血大鼠模型上的Morris水迷宫空间探索实验结果。

图10为慢性脑缺血后的脑切片的HE染色及Nissl染色结果。

图11为VEGF蛋白在MCAO急性脑梗模型上作用3天时对于脑梗死的抑制作用的 TTC染色结果。

图12为VEGF蛋白在MCAO急性脑梗模型上的梗死率。

图13为VEGF蛋白在MCAO急性脑梗模型上的梗死抑制率。

图14为效果实施例4中各组样品对HUVEC-12细胞增殖的影响。

图15为效果实施例4中各组样品对HUVEC-12细胞迁移的影响。

图16为效果实施例4中各组样品的划痕实验结果。

图17为效果实施例4中各组样品对HUVEC-12细胞小管生成的影响的倒置显微镜图。

图18为效果实施例4中各组样品对HUVEC-12细胞小管生成的影响。

图19为单独使用不同剂量的红景天苷(TG-056)在海绵植入动物模型上对VEGF-AmRNA表达量的影响。

图20为TG-028和TG-057在MCAO急性脑梗模型上的梗死率和Longa神经评分。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

路线A：化合物TG-001,TG-002,TG-003,TG-004,TG-005,TG-006,TG-007,TG-008，TG-057的合成

路线a实验操作：

将化合物4a(1eq)、Pd(PPh₃)₂Cl₂(2mol％)、CuI(2mol％)加入到反应瓶中，在N₂保护下，向体系中依次加入THF(0.2M)、化合物5(1.2eq)、Et₃N(9.6eq)，然后在室温下反应20h。用硅藻土(上海大合化学品有限公司分析纯AR)过滤后直接旋干过柱 (石油醚/乙酸乙酯＝2：1)，得化合物6a(yield 89％)。将化合物6a(1eq)、Pd/C(10％) 加入MeOH(0.1M)中，在60atm的H₂条件下，室温反应20h。硅藻土过滤后，减压浓缩，硅胶柱层析提纯，得化合物7a(yield 94％)。

向化合物8a(1eq)中滴加33％的HBr/AcOH(4eq)溶液，在室温条件下反应4h。直接旋干，用Et₂O和正己烷重结晶，得化合物9a(76g,yield 98％)。

将化合物7a(1eq)、9a(1.2eq)加入到反应瓶中，在N₂保护下，向体系中加入二氯甲烷(0.3M)，室温条件下反应30min。再向体系中加入Ag₂CO₃(1.2eq)，室温条件下反应20h，过滤后直接旋干过柱(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4：1)，得化合物10a(yield 40％)。将化合物10a(1eq)加入到反应瓶中，分别加入MeOH(4M)、H₂O(4M)、 Et₃N(2eq)，室温条件下反应20h，减压浓缩，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：二氯甲烷: 甲醇＝9:1)，得化合物TG-001(yield70％)。

化合物TG-002,TG-003,TG-004,TG-005,TG-006,TG-007,TG-008,TG-057的合成使用与化合物TG-001类似的合成路线，其结构如下。

化合物TG-001，TG-002,TG-003,TG-004,TG-005,TG-006,TG-007,TG-008，TG-057的结构鉴定数据如下：

TG-001的鉴定数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.17–7.06(m,2H),6.88(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(td,J＝7.4,0.9Hz,1H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.91(m,1H),3.85(dd,J＝11.9,2.0Hz,1H), 3.80(s,3H),3.66(dd,J＝11.9,5.3Hz,1H),3.55(m,1H),3.37–3.21(m,3H),3.19–3.12(m, 1H),2.61(t,J＝7.0Hz,2H),1.64(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺365.1；HRMS(ESI):[M+H]⁺计算值C₁₇H₂₇O₇ ⁺343.1751，实测值为343.1748。

TG-002的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)6.35(d,J＝2.2Hz,2H),6.28(t,J＝2.2Hz,1H),4.24(d,J＝7.8Hz,1H),3.96–3.91(m,1H),3.85(dd,J＝11.8,1.7Hz,1H),3.74(s,6H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.58-3.53(m,1H),3.38–3.21(m,3H),3.19–3.11(m,1H),2.57(t,J＝7.3Hz,2H),1.75–1.58(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺395.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值为C₁₈H₃₂O₈N⁺390.2122，实测值为390.2122。

TG-003的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)6.84(d,J＝8.2Hz,1H),6.79(d,J＝1.9Hz,1H),6.72(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),4.24(d,J＝7.8Hz,1H),3.98-3.88(m,1H),3.86(dd,J＝11.9,1.9Hz,1H),3.81(s,3H),3.79(s,1H),3.66(dd,J＝11.9,5.3Hz,1H),3.61–3.51(m,1H),3.38–3.21(m,3H),3.20–3.12(m,1H),2.58(t,J＝7.2Hz,2H),1.75–1.56(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺395.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值为C₁₈H₃₂O₈N⁺390.2122，实测值为390.2118。

TG-005的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.07(d,J＝8.8Hz,2H),6.80(d,J＝8.8Hz,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.93–3.82(m,2H),3.75(s,3H),3.66(dd,J＝11.9,5.3Hz,1H),3.52(dt,J＝9.5,6.7Hz,1H),3.38–3.22(m,3H),3.20–3.12(m,1H),2.54(t,J＝7.6Hz,2H),1.68-1.61(m,4H),1.47–1.31(m,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺375.1；HRMS(ESI):[M+H]⁺计算值为C₁₈H₂₉O₇ ⁺357.1908，实测值为357.1906。

TG-006的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.06(d,J＝8.6Hz,2H),6.84–6.80(d,J＝8.6 Hz,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.93–3.82(m,2H),3.75(s,3H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.52(dt,J＝9.5,6.7Hz,1H),3.38–3.21(m,3H),3.20–3.11(m,1H),2.53(t,J＝7.6Hz,2H),1.68–1.50(m,4H),1.47–1.25(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺393.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₉H₃₄O₇N⁺388.2330, 实测值为388.2327。

终产物TG-004的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.15(t,J＝7.8Hz,1H),6.79–6.67(m,3H),4.24 (d,J＝7.8Hz,1H),3.92(dt,J＝9.4,6.4Hz,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.8Hz,1H),3.76(s,3H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.60–3.51(m,1H),3.39–3.21(m,3H),3.19–3.12(m,1H),2.60(t,J＝7.3Hz,2H),1.78–1.56(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺365.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₇H₃₀O₇N⁺360.2017,实测值为为360.2016。

TG-007的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)6.49(s,2H),4.24(d,J＝7.8Hz,1H),3.97–3.83 (m,2H),3.81(s,6H),3.72(s,3H),3.69–3.52(m,2H),3.37–3.21(m,3H),3.20–3.13(m, 1H),2.59(t,J＝7.3Hz,2H),1.79–1.55(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺425.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₉H₃₄O₉N⁺420.2228，实测值为为420.2226。

TG-008的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)6.71-6.67(m,2H),6.65-6.61(m,1H),5.87(s,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.95-3.88(m,1H),3.85(m,1H),3.66(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.60–3.48(m,1H),3.38–3.20(m,3H),3.19–3.12(m,1H),2.55(t,J＝7.1Hz,2H),1.73–1.53 (m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺379.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₇H₂₄O₈Na⁺379.1374,实测值为379.1362。

TG-057的数据：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)6.83(d,1H,J＝7.6Hz),6.70–6.64(m,2H),6.26(br,1H),4.83(br,8H),4.00(s,1H),3.88(s,3H),3.74(t,2H,J＝6.4Hz),3.55(s,2H),2.58(t, 2H,J＝7.2Hz),1.69–1.62(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺381.2。

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

上述中间体10a-10h的鉴定数据为：

10a:

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.32(d,J＝2.2Hz,2H),6.29(t,J＝2.2Hz,1H),5.20(t,J＝9.5Hz,1H),5.08(t,J＝9.7Hz,1H),4.98(dd,J＝9.6,8.0Hz,1H),4.48(d,J＝8.0Hz,1H),4.26(dd,J＝12.3,4.7Hz,1H),4.13(dd,J＝12.3,2.3Hz,1H),3.89(d,J＝9.5Hz,1H),3.78(s,6H),3.68(dd,J＝9.9,2.2Hz,1H),3.49(d,J＝9.4Hz,1H),2.55(t,J＝6.6Hz,2H),2.08(s, 3H),2.05–1.97(m,9H),1.63(dd,J＝11.5,4.3Hz,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺533.5。

10b：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.34–6.28(m,3H),5.20(t,J＝9.5Hz,1H),5.08(t,J＝9.7Hz,1H),4.98(dd,J＝9.6,8.0Hz,1H),4.48(d,J＝8.0Hz,1H),4.26(dd,J＝12.3,4.7Hz,1H),4.13(dd,J＝12.3,2.3Hz,1H),3.89(d,J＝9.5Hz,1H),3.78(s,6H),3.68(dd,J＝9.9,2.2Hz,1H),3.49(d,J＝9.4Hz,1H),2.55(t,J＝6.6Hz,2H),2.10–2.07(s,3H),2.03(s,3H),2.00(m,6H),1.63(dd,J＝11.5,4.3Hz,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺563.5。

10c：

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ6.82–6.59(m,3H),5.27–4.83(m,3H),4.46(d,J＝7.9 Hz,1H),4.32–3.99(m,2H),3.83(m,7H),3.74–3.35(m,2H),2.53(m,2H),1.99(m,12H), 1.59(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺563.5。

10d：

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.19(t,J＝8.1Hz,1H),6.81–6.65(m,3H),5.28–4.88 (m,3H),4.48(d,J＝8.0Hz,1H),4.32–4.06(m,2H),3.88(m,1H),3.80(s,3H),3.68(d,J＝8.2Hz,1H),3.51(m,1H),2.59(m,2H),2.03(m,12H),1.64(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺533.5。

10e：

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.08(d,J＝6.9Hz,2H),6.82(d,J＝6.8Hz,2H),5.69(d, J＝4.2Hz,1H),5.19(m,1H),4.91(d,J＝9.3Hz,1H),4.30(m,1H),4.20(m,2H),3.96(m, 1H),3.79(s,3H),3.46(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(t,J＝7.0Hz,2H),2.09(m,9H),1.71(s,3H),1.66–1.48(m,4H),1.36(d,J＝6.7Hz,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺547.5。

10f：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.08(d,J＝8.6Hz,2H),6.83(t,J＝5.7Hz,2H),5.20(t,J＝9.5Hz,1H),5.08(t,J＝9.7Hz,1H),4.98(dd,J＝9.6,8.0Hz,1H),4.48(d,J＝8.0Hz,1H),4.26(dd,J＝12.3,4.7Hz,1H),4.12(m,1H),3.86(dt,J＝9.6,6.3Hz,1H),3.79(s,3H),3.68(ddd,J＝9.9,4.6,2.4Hz,1H),3.46(dt,J＝9.5,6.8Hz,1H),2.58–2.49(m,2H),2.08(s,3H), 2.02(m,9H),1.62–1.49(m,4H),1.36–1.28(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺561.5。

10g:

LRMS(ESI):[M+Na]⁺593.5。

10h：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺547.5。

路线B：化合物TG-009,TG-010,TG-011,TG-012的合成

路线B实验操作：

将化合物12i(1eq)溶于THF(0.2M)中，0℃下向体系中缓慢加入LiAlH₄(2eq)，室温条件下反应2～20h。0℃下依次向体系中缓慢加入H₂O(1倍THF溶剂体积)、15％ NaOH溶液(1倍THF溶剂体积)、H₂O(3倍THF溶剂体积)。以乙酸乙酯萃取，萃取液合并后，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂后，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得化合物7i(yield 98％)。

将化合物7i(1eq)、9a(1.2eq)加入到反应瓶中，在N₂保护下，向体系中加入二氯甲烷(0.3M)，室温条件下反应30min。再向体系中加入Ag₂CO₃(1.2eq)，室温条件下反应20h。硅藻土过滤后，减压浓缩，硅胶柱层析提纯，得化合物10i(yield 26％)。将化合物10i(1eq)加入到反应瓶中，分别加入MeOH(4M)、H₂O(4M)、Et₃N(2eq)，室温条件下反应20h，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：二氯甲烷:甲醇＝9:1)，得化合物TG-009 (yield 75％)。

化合物TG-010,TG-011,TG-012的合成使用与化合物TG-009类似的合成路线。化合物TG-009、TG-010,TG-011和TG-012的结构及鉴定数据如下所示：

TG-009的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)4.24(d,J＝7.8Hz,1H),3.95–3.81(m,2H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.53(dt,J＝9.5,6.7Hz,1H),3.38–3.21(m,3H),3.20–3.11(m,1H),1.81–1.51(m,7H),1.46–1.08(m,8H),0.95–0.80(m,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺341.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₆H₃₀O₆Na⁺341.1946,实测值为341.1934。

TG-012的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.38(d,J＝8.3Hz,2H),7.12(d,J＝8.3Hz,2H),4.24(d,J＝7.8Hz,1H),3.92(dt,J＝9.5,6.4Hz,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.6Hz,1H),3.66(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.56(dt,J＝9.6,6.3Hz,1H),3.31(m,3H),3.19–3.11(m,1H),2.61(t,J＝7.4Hz,2H),1.77–1.55(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺414.9；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₆H₂₃O₆BrNa⁺413.0570, 实测值为413.0568。

TG-011的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)8.14(d,J＝8.7Hz,2H),7.45(d,J＝8.7Hz,2H),4.25(d,J＝7.8Hz,1H),4.00–3.82(m,2H),3.70–3.50(m,2H),3.37–3.22(m,3H),3.21–3.12(m,1H),2.78(t,J＝7.6Hz,2H),1.85–1.57(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺380.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₆H₂₃O₈NNa⁺380.1327, 实测值为380.1314。

TG-010的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.18(dd,J＝8.5,5.6Hz,2H),7.00–6.91(m,2H),4.24(d,J＝7.8Hz,1H),3.92(dt,J＝9.6,6.3Hz,1H),3.87-3.82(m,1H),3.66(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.56(dt,J＝9.5,6.3Hz,1H),3.37–3.22(m,3H),3.20–3.11(m,1H),2.62(t,J＝7.3Hz,2H),1.78–1.54(m,4H).

LRMS(ESI):[M+COOH]^-375.0；HRMS(ESI):[M+Cl]^-计算值C₁₆H₂₃O₆FCl^-365.1173, 实测值为365.1173。

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

上述中间体10i-10l的鉴定数据为：

10i：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺509.5。

10j：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺521.5。

10k：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺548.5。

10l：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺582.4。

路线C:化合物TG-013,TG-014，TG-015,TG-016,TG-017,TG-018,TG-019,TG-020,TG-021,TG-022,TG-024,TG-025,TG-026，TG-027，TG-049、TG-050、TG-051和 TG-023的合成

路线C实验操作：

将化合物13(1eq)、Et₃N(1.5eq)加入二氯甲烷(0.5M)中，在0℃的条件下滴加Ac₂O(1.2eq)，0℃至室温条件下反应20h后，分别用饱和NH₄Cl、NaCl溶液洗涤，无水Na₂SO4干燥后减压浓缩，得化合物14(16g,yield 92％)。

将化合物14(1eq)加入二氯甲烷(0.5M)中，在-78℃的条件下缓慢滴加1M的BBr₃/二氯甲烷(2.5eq)，0℃下反应5h，用饱和NaHCO₃溶液淬灭，再用二氯甲烷萃取，无水Na₂SO4干燥后减压浓缩，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得化合物15(8.7g,yield 78％)。

将化合物15(1eq)加入MeOH(0.5M)中，向体系中加入1M的NaOH溶液(3eq)，室温条件下反应2h，2N HCl溶液调节PH至3，再用乙酸乙酯萃取，无水Na₂SO4干燥后减压浓缩，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得化合物16(6g,yield 85％)。

将化合物16(1eq)、9a(1.2eq)加入到反应瓶中，在N₂保护下，向体系中加入二氯甲烷(0.3M)，室温条件下反应30min。再向体系中加入Ag₂CO₃(2.2eq)，室温条件下反应20h。硅藻土过滤后，减压浓缩，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得化合物17(7.6g,yield 32％)。

将化合物17(1eq)、PPh₃(1.5eq)加入到反应瓶中，室温下向体系中缓慢滴加DIAD(1.5eq)，继续反应30min后向体系中滴加R^3’OH(1.2eq)，65℃条件下反应2～10h。减压浓缩，硅胶柱过柱提纯，得化合物18a～j(yield 55～90％)。

将化合物18a或17(1eq)加入到反应瓶中，分别加入MeOH(4M)、H₂O(4M)、 Et₃N(2eq)，室温条件下反应20h。减压浓缩，硅胶柱过柱提纯(洗脱剂：二氯甲烷: 甲醇＝9:1)，分别得化合物TG-013(yield 59％)和TG-023(yield 13％)。

化合物TG-014,TG-015,TG-016,TG-017,TG-018,TG-019,TG-020,TG-021, TG-022,TG-024,TG-025,TG-026,TG-027、TG-049、TG-050、TG-051和TG-023的合成使用与化合物TG-013类似的合成路线。

化合物TG-013，TG-014,TG-015,TG-016,TG-017,TG-018,TG-019,TG-020, TG-021,TG-022,TG-024,TG-025,TG-026,TG-027、TG-049、TG-050、TG-051和TG-023 结构及鉴定数据如下所示：

TG-013的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.34(m,5H),7.09(d,J＝8.3Hz,2H),6.88(d,J ＝8.4Hz,2H),5.03(s,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),4.01–3.82(m,2H),3.66(dd,J＝11.8,5.0Hz,1H),3.59–3.47(m,1H),3.39–3.22(m,3H),3.16(t,J＝8.3Hz,1H),2.56(t,J＝6.9Hz,2H),1.65(d,J＝4.1Hz,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺441.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₃H₃₀O₇Na⁺441.1884,实测值为441.1880。

TG-015的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.08(d,J＝8.6Hz,2H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),6.12–5.96(m,1H),5.37(dd,J＝17.3,1.6Hz,1H),5.22(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),4.55–4.44(m,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.97–3.80(m,2H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H), 3.60–3.50(m,1H),3.38–3.21(m,3H),3.20–3.12(m,1H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),1.73– 1.55(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺391.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₉H₂₈O₇Na⁺391.1727,实测值为391.1726。

TG-016的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.06(d,J＝8.5Hz,2H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.95–3.82(m,2H),3.72(d,J＝6.4Hz,2H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.59–3.50(m,1H),3.37–3.20(m,3H),3.19–3.12(m,1H),2.56(t,J＝7.1Hz, 2H),1.86(d,J＝13.1Hz,2H),1.81–1.57(m,8H),1.38–1.16(m,3H),1.09(m,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺447.2；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₃H₃₆O₇Na⁺447.2353,实测值为447.2352。

TG-017的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)8.65(d,J＝1.2Hz,1H),8.52(dd,J＝4.9,1.2Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.48(dd,J＝7.8,5.0Hz,1H),7.14(d,J＝8.5Hz,2H),6.94(d,J＝8.6Hz,2H),5.14(s,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.99–3.85(m,2H),3.69(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.58(dt,J＝9.4,6.2Hz,1H),3.43–3.24(m,3H),3.23–3.16(m,1H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),1.76–1.60(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺442.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₂H₂₉O₇NNa⁺442.1836, 实测值为442.1834。

TG-018的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.99–3.86(m,2H),3.83(d,J＝6.9Hz,2H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),3.41–3.24(m,3H),3.21-3.17(m,1H),2.59(t,J＝7.0Hz,2H),2.40-2.30(m,1H),1.93-1.78(m,2H),1.76–1.57(m,8H),1.47–1.35(m,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺433.2；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₂H₃₄O₇Na⁺433.2197，实测值为433.2192。

TG-019的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)8.66–8.44(m,2H),7.54(d,J＝5.9Hz,2H),7.15 (d,J＝8.6Hz,2H),6.93(d,J＝8.6Hz,2H),5.18(s,2H),4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.95(dt,J ＝9.5,6.3Hz,1H),3.89(dd,J＝11.9,1.9Hz,1H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),3.41–3.24(m,3H),3.23–3.16(m,1H),2.61(t,J＝7.1Hz,2H),1.77–1.58(m, 4H).

LRMS(ESI):[M+H]⁺420.2；HRMS(ESI):[M+H]⁺计算值C₂₂H₃₀O₇N⁺420.2017，实测值为420.2014。

TG-020的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.11(d,J＝8.5Hz,2H),6.83(d,J＝8.5Hz,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),4.05–3.86(m,4H),3.82(d,J＝6.3Hz,2H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.58(dt,J＝9.5,6.2Hz,1H),3.49(td,J＝12.0,1.7Hz,2H),3.40–3.24(m,3H),3.19(t,J＝8.4Hz,1H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),2.14–1.98(m,1H),1.85–1.60(m,6H),1.47(qd,J＝12.3,4.5Hz,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺449.2；HRMS(ESI):[M+H]⁺计算值C₂₂H₃₅O₈ ⁺427.2326,实测值为427.2323。

TG-021的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.83(d,J＝8.5Hz,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.99–3.85(m,4H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.58(dt,J＝9.4,6.2Hz,1H),3.41–3.24(m,3H),3.19(t,J＝8.4Hz,1H),2.85–2.71(m,1H),2.59(t,J＝7.1Hz,2H),2.24–2.08(m,2H),2.08–1.85(m,4H),1.70(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺419.2。

TG-014的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.07(d,J＝8.5Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.96–3.80(m,4H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.59–3.49(m,1H),3.38–3.21(m,3H),3.20–3.11(m,1H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),1.75(m,2H),1.70– 1.57(m,4H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺393.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₉H₃₀O₇Na⁺393.1884,实测值为393.1880。

TG-022的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.86(td,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.59(d,J＝7.9Hz,1H),7.36(dd,J＝7.0,5.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,2H),6.90(d,J＝8.6Hz,2H),5.13(s,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.95–3.88(m,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.7Hz,1H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.59–3.51(m,1H),3.35-3.12(m,4H),2.57(t,J＝7.1Hz,2H),1.81–1.52(m,4H)。

LRMS(ESI):[M+Na]⁺442.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₂H₂₉O₇NNa⁺442.1836, 实测值为442.1834。

TG-024的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),4.27(d, J＝7.8Hz,1H),4.02(q,J＝7.0Hz,2H),3.98–3.92(m,1H),3.89(dd,J＝11.8,1.6Hz,1H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.58(dt,J＝9.5,6.2Hz,1H),3.41–3.29(m,3H),3.23–3.13(m,1H),2.59(t,J＝7.1Hz,2H),1.78–1.56(m,4H),1.39(t,J＝7.0Hz,3H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺379.1。

TG-025的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.13(d,J＝8.5Hz,2H),6.88(d,J＝8.6Hz,2H),4.97–4.83(m,2H),4.62(t,J＝6.0Hz,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),4.19(d,J＝6.4Hz,2H),3.95(dt,J＝6.3,3.3Hz,1H),3.89(dd,J＝11.8,1.7Hz,1H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.63– 3.54(m,1H),3.52–3.41(m,1H),3.41–3.24(m,3H),3.23–3.15(m,1H),2.61(t,J＝7.1Hz, 2H),1.81–1.57(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺421.1。

TG-026的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.68(dd,J＝18.9,8.3Hz,4H),7.14(d,J＝8.6Hz,2H),6.93(d,J＝8.6Hz,2H),5.17(s,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.95(dt,J＝6.3,3.3Hz,1H),3.89(dd,J＝11.8,1.7Hz,1H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),3.42–3.24(m,3H),3.23–3.15(m,1H),2.61(t,J＝7.1Hz,2H),1.83–1.52(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺509.2。

TG-027的数据：

H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.40(dt,J＝7.9,5.9Hz,1H),7.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.20(d,J＝9.9Hz,1H),7.13(d,J＝8.6Hz,2H),7.05(td,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.09(s,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.95(dt,J＝9.4,6.3Hz,1H),3.89(dd,J＝11.9,1.8Hz,1H),3.69(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),3.41–3.24(m,3H),3.23–3.15(m,1H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),1.90–1.55(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺459.2。

TG-049的鉴定数据

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.74(s,1H),7.69(d,J＝7.4Hz,1H),7.62-7.53(m,2H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.13(s,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.92(dt,J＝9.4,6.3Hz,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.7Hz,1H),3.66(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.55(dt,J＝9.6,6.2Hz,1H),3.37-3.32(m,1H),3.26(t,J＝5.9Hz,2H),3.20–3.11(m,1H),2.57(t,J＝7.1Hz,2H),1.80-1.49(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺509.20

TG-050的鉴定数据

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.53(td,J＝7.5,1.3Hz,1H),7.42-7.34(m,1H),7.21(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.18-7.10(m,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,2H),6.92(d,J＝8.6Hz,2H),5.12(s,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.95(dt,J＝9.4,6.3Hz,1H),3.89(dd,J＝11.9,1.8Hz,1H), 3.69(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.58(dt,J＝9.5,6.3Hz,1H),3.39-3.25(m,3H),3.24-3.16(m, 1H),2.61(t,J＝7.1Hz,2H),1.78-1.59(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺459.20

TG-051的数据

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.47(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.13(d,J＝8.6Hz,4H),7.14-7.09(m,1H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.04(s,2H),4.27(d,J＝7.8Hz,1H),3.95(dt,J＝9.3,6.2Hz,1H),3.89(dd,J＝11.8,1.7Hz,1H),3.69(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.58(dt,J＝ 9.4,6.2Hz,1H),3.-3.24(m,3H),3.23-3.14(m,1H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),1.91-1.56(m, 4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺459.2

TG-023的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ6.99(d,J＝8.5Hz,2H),6.70–6.63(m,2H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.96–3.82(m,2H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.54(dt,J＝9.5,6.1Hz,1H),3.38–3.21(m,3H),3.16(dd,1H),2.53(t,J＝7.0Hz,2H),1.70–1.56(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺351.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₆H₂₈O₇N⁺346.1860, 实测值为346.1857。

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

上述中间体18a-18q的鉴定数据为：

18a：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺609.6。

18b：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺561.5。

18c：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺559.5。

18d：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺615.6。

18e：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺610.6。

18f：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺601.6。

18g：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺610.6。

18h：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺617.6。

18i：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺587.6。

18j：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺610.2。

18k：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺547.2。

18l：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺589.2。

18m：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺677.2。

18n：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺627.2。

18o：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺677.23。

18p：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺654.23。

18q：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺654.23。

路线D：终产物TG-028,TG-029,TG-030的合成

路线D实验操作：

将20a(3g，16.7mmol)加入40ml吡啶中，滴加Ac₂O，反应3天。减压浓缩，硅胶柱层析提纯(洗脱剂：酸乙酯：石油醚＝1：4)得产品8a，产率95％。向化合物8a中滴加33％的HBr/AcOH(4eq)溶液，在室温条件下反应4h。减压浓缩，粗产物以Et₂O 和正己烷重结晶，得化合物9a。将9a(1eq)加入三颈瓶，加入4A分子筛和无水二氯甲烷/Et₂O混合溶液。混合液搅拌均匀后，加入原料13(0.95eq)。继续搅拌30min后加入 Ag₂CO₃(1.2eq)，反应过夜。硅藻土过滤，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得产品22a(19％ yield)。

将化合物22a(1eq)加入到反应瓶中，分别加入MeOH(4M)、H₂O(4M)、Et₃N (2eq)，室温条件下反应20h。硅藻土过滤后，减压浓缩，硅胶柱层析提纯，得化合物 TG-028(64％yield)。

化合物TG-029和TG-030的合成使用与化合物TG-028类似的合成路线。

化合物TG-028、TG-029和TG-030的结构及鉴定数据如下所示：

TG-028的数据：

H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.83(d,J＝8.5Hz,2H),5.10– 4.78(m,3H),4.45(t,J＝5.9Hz,1H),4.09(d,J＝7.8Hz,1H),3.77(m,J＝12.5,6.4Hz,1H), 3.71(s,3H),3.65(dd,J＝10.8,6.0Hz,1H),3.49–3.37(m,2H),3.17–2.98(m,3H),2.92(td, J＝8.3,5.1Hz,1H),2.55-2.5(m,2H)1.69–1.41(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺365.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₇H₂₆O₇Na⁺365.1571, 实测值为365.1569。

TG-029的数据

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.08(d,J＝8.5Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d, J＝7.8Hz,1H),3.91(m,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.66(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),3.55(dt,J＝9.5,6.1Hz,1H),3.37–3.1(m,4H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),1.78–1.53(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺365.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₇H₂₆O₇Na⁺365.1571,实测值为365.1570。

TG-030的数据

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.12(d,J＝8.3Hz,2H),6.83(d,J＝8.4Hz,2H),4.22(d, J＝7.3Hz,1H),3.95(dd,J＝10.9,4.9Hz,1H),3.85(d,J＝2.4Hz,1H),3.83–3.71(m,5H),3.64–3.44(m,4H),2.59(t,J＝6.9Hz,2H),1.68(d,J＝3.7Hz,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺365.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₇H₃₀O₇N⁺360.2017,实测值为360.2015。

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

上述中间体22a-22c的鉴定数据为：

22a：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.07(d,J＝8.6Hz,2H),6.82(t,J＝5.7Hz,2H),5.20(t,J＝9.5Hz,1H),5.08(t,J＝9.7Hz,1H),4.98(t,J＝9.6,8.0Hz,1H),4.48(d,J＝8.0Hz,1H),4.26(dd,J＝12.3,4.7Hz,1H),4.16–4.07(m,1H),3.89(dd,J＝5.8,3.7Hz,1H),3.78(s,3H),3.68(m,J＝9.9,4.6,2.4Hz,1H),3.49(dt,J＝9.4,6.1Hz,1H),2.55(t,J＝6.6Hz,2H),2.08(s,3H),2.05–1.96(m,9H),1.68–1.52(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺533.2。

22b：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺533.2。

22c：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺533.2。

路线E：化合物TG-031TG-032TG-033TG-034TG-035TG-036TG-037 的合成

其中片段24a～e的合成如下所示：

路线E实验操作：

片段24a：将化合物28(2.48g,0.02mol)和29(3.336g，0.024mol)分别加入DMF(30mL) 中，室温加K₂CO₃(13.8g,0.1mol)，室温搅拌48小时。加水用乙酸乙酯萃取，萃取液合并水洗，以无水硫酸钠干燥。砂芯漏斗过滤，减压浓缩。以乙酸乙酯和石油醚混合液重结晶得24a：3.1g 85％yield。

片段24b：将31(3.72g，60mmol)加入THF中，分批加入NaH(0.624g，26mmol) 依次加入30(3.132g，20mmol)Bu₄NI(738mg，2mmol)加热到70℃，搅拌5h。反应液降低到室温，用饱和氯化铵洗涤一次，减压浓缩。硅胶柱层析提纯，得到24b：2.9g， 80％yield。

片段24c：将33(6.1g，0.1mol)加入MeOH中，室温下32(13.6g，0.1mol)加热到70℃，搅拌过夜。冷却到室温，分批加入NaBH₄(3.8g,0.1mol)，然后加热到70℃，搅拌2h。冷却到室温，采用乙酸乙酯萃取。萃取液合并后用水洗，无水硫酸钠干燥。砂芯漏斗过滤，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得34(13.4g，88％yield)。

将34(3.6g，23.8mmol)加入二氯甲烷中，冰浴滴加Boc₂O(6.23g，28.6mmol)。滴加完毕后，室温搅拌反应过夜，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得24c(4.9g，73％yield)。

片段24d：将34(3.6g，23.8mmol)加入二氯甲烷中，冰浴依次滴加CbzCl(6.63g，0.39mmol)和Et₃N(4.5g，0.45mmol)搅拌5h。反应液依次以水、NaHCO₃饱和液、饱和食盐水洗涤一次。无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得24d(6g，63.5％yield)。

片段24e：将35(6.15g，50mmol)，29(13.9g,100mol),和K₂CO₃(13.8g，100mmol) 依次加入正丁醇(40mL)中，加碘(50mg),回流反应30h。减压浓缩，硅胶柱层析提纯得产品368.5g，93％yield。将36(3.3g，18.2mmol)加入二氯甲烷,加K₂CO₃(4.9g，36mmol)，冰浴滴加Cbz-Cl(4g，23.7mmol)室温搅拌过夜。依次以水、饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得24e(3g，72％yield)。

将9a(1eq)和24a～e(0.95mmol)，4A分子筛依次加入反应瓶。加干燥的二氯甲烷(0.25mol/L),搅拌30min。氩气氛保护下加Ag₂CO₃(1.2eq)，室温搅拌过夜，硅藻土过滤。滤液减压浓缩，以硅胶柱层析提纯得产品25a～e。将25a～e(1eq)各自加入单颈瓶，向各单颈瓶中均加入MeOH(6eq)，H₂O(6eq)，Et₃N(3eq)，搅拌过夜，减压浓缩，硅胶柱层析提纯(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝1:15)得产品TG-031(产率24％),TG-032(产率26％),TG-033(产率24％),TG-034(产率20％),TG-035(产率12％)。

将TG-033(1g，2.25mmol)和2,6-Lutidine(481mg，4.5mmol)加入二氯甲烷,冰浴下滴加TBDMSOTf(893mg，3,38mmol)，0℃搅拌2小时，TLC显示反应完全。用0.5M 的HCl将PH调到5，旋干，过柱(甲醇/二氯甲烷＝1:20)，得TG-036 400mg，产率：46.8％。

将TG-035(700mg，1.46mmol)，加入MeOH(30ml)加Pd/C，用氢气抽气换气，40 个大气压常温搅拌过夜。硅藻土过滤，减压浓缩，硅胶柱层析提纯(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝1:12)得产品TG-037(320mg，63％yield)。

化合物TG-031，TG-032，TG-033，TG-034，TG-035，TG-036和TG-037的结构及鉴定数据如下所示：

TG-031的数据：

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ6.89–6.81(m,1H),4.90(s,1H),4.46(s,1H),4.46(s,1H),4.13(d,J＝7.8Hz,1H),3.99(t,J＝6.4Hz,1H),3.90(dt,J＝9.9,6.3Hz,1H),3.66–3.55(m,1H),3.43(dd,J＝11.8,5.5Hz,1H),3.08(dq,J＝23.5,8.9Hz,1H),2.94(t,J＝8.3Hz,1H),1.94(q,J＝6.6Hz,1H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺367.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₆H₂₈O₈N⁺362.1809,实测值为362.1807。

TG-032的数据：

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.46(s,2H),4.25(d,J＝7.7Hz,1H),4.06–3.91(m,1H),3.87–3.54(m,7H),3.36–3.10(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺367.1；HRMS(ESI):[M+NH₄]⁺计算值C₁₆H₂₈O₈N⁺362.1809,实测值为362.1806。

TG-033的数据：

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.18(d,J＝8.4Hz,2H),6.90(d,J＝8.1Hz,2H),5.02(bs,2H),4.59–4.28(m,3H),4.11(t,1H),3.73(s,4H),3.66(d,J＝11.6Hz,1H),3.61–3.50(m,1H),3.44(dd,J＝11.6,4.7Hz,1H),3.39–3.00(m,6H),2.94(t,J＝8.3Hz,1H),1.41(d,J＝14.2Hz,9H)。

TG-034的数据：

¹H NMR(300MHz,DMSO)δ7.35(d,J＝13.0Hz,5H),7.17(d,J＝15.0Hz,2H),6.88(t,2H),5.09(dd,J＝14.9Hz,3H),4.95(dd,J＝14.2Hz,2H),4.54–4.41(m,3H),4.17–4.04(m,1H),3.87–3.51(m,5H),3.50–3.20(m,4H),3.18–2.87(m,5H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺500.2；HRMS(ESI):[M+H]⁺计算值C₂₄H₃₂O₉N⁺478.2072,实测值为478.2065。

TG-035的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.55–7.02(m,7H),6.92(d,J＝8.9Hz,2H),5.08(s,2H),4.17(d,J＝7.7Hz,1H),3.98–3.87(m,1H),3.86–3.70(m,6H),3.64(dd,J＝11.9,5.3Hz,1H),3.60–3.50(m,1H),3.36–3.19(m,3H),3.14(t,J＝8.4Hz,1H),1.93–1.74(m,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺500.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₄H₃₁O₉NNa⁺500.1891，实测值为500.1889。

TG-036的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.43(d,J＝8.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.35(d, J＝7.8Hz,1H),4.20(s,2H),4.09(s,1H),3.90(m,J＝14.0,4.4Hz,2H),3.82(s,3H),3.65(dd,J＝11.7,6.1Hz,1H),3.40–3.32(m,2H),3.24(dt,J＝11.5,9.1Hz,4H).

LRMS(ESI):[M+H]⁺344.1；HRMS(ESI):[M+H]⁺计算值C₁₆H₂₆O₇N⁺344.1704,实测值为344.1701。

TG-037的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ6.78–6.72(m,2H),6.72–6.65(m,2H),4.28(d,J＝7.8 Hz,1H),4.07–3.96(m,1H),3.87(dd,J＝11.8,1.4Hz,1H),3.70(s,3H),3.69–3.63(m,2H),3.34(t,J＝4.5Hz,1H),3.29–3.25(m,2H),3.23–3.14(m,3H),1.89(t,J＝6.4Hz,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺366.1

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

上述中间体25a-25e的鉴定数据为:

25a：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺535.1。

25b：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺535.1。

25c：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺634.2。

25d：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺668.2。

25e：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺668.2。

路线F：化合物TG-038，TG-039，TG-040，TG-041，TG-042，TG-043和TG-044 的合成

路线F的实验操作：

将15(1eq)和PPh₃(1.3eq)加入反应瓶，加干燥的THF(0.5mol/L)，加37a～f(1eq)，0℃下滴加DIAD(1.1eq)。升至60℃搅拌，TLC监测反应结束。减压浓缩，硅胶柱层析提纯39a～f。

将37g(1eq)加入THF(0.2mol/L)，冰浴下滴加PPh₃(2eq)，咪唑(2eq)，I₂(2.5eq)，升至室温搅拌过夜。硅藻土过滤，减压浓缩，硅胶柱层析提纯(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚＝1：9)，得产品38g(5.7g，93％yield)。将38g(1.2eq)，15(1eq)和K₂CO₃(2eq) 加入DMF,加热到110℃，搅拌10h。硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯萃取。萃取液合并后水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品39g 3.8g。

将39a～g(1eq)加入MeOH(0.5mol/L),室温滴加1M的NaOH水溶液(2.5eq)，搅拌 4小时。以2M的HCl中和反应体系，然后乙酸乙酯萃取，萃取液以无水硫酸钠干燥。减压浓缩，硅胶柱层析提纯(洗脱液：乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得产品40a～g。

将8a(120g，0.3mol)500ml的DMF中，室温中加(NH₄)₂CO₃(60g，0.6mol)，将反应液加热到45℃，搅拌5h。硅藻土过滤，滤液加水，以乙酸乙酯萃取。萃取液合并后以依次以水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗产品41(95g)，直接用于下一步反应。将41(95g，0.273mol)和K₂CO₃(49g,0.355mol)加入二氯甲烷(400mL)，冰浴下滴加CCl₃CN(157g，1.1mol)升至室温搅拌过夜。硅藻土过滤，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得42(95g，71％yield)。

将40a～g(1.1eq)和42(1eq)，4A分子筛加入反应瓶，加干燥的二氯甲烷(0.2mol/L)，将反应冷却至-20℃滴加TMSOTf(0.5eq)。TLC检测反应结束，加Et₃N(1.5eq)淬灭反应。减压浓缩，硅胶柱层析提纯得(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得产品43a～g。

将43a/43b/43e(1eq)分别加入单颈瓶，加入MeOH(6eq)，H₂O(6eq)，Et₃N(3eq)，搅拌过夜。减压浓缩，硅胶柱层析提纯得(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝1:15)得产品TG-038 (产率63％)/TG-039(产率60％)/TG-042(产率36％)。

将43c/43d/43f/43g(1eq)分别加入MeOH(0.5mol/L)，冰浴滴加0.2M的MeONa(2.5eq) 升至室温搅拌1h。TLC检测反应结束，减压浓缩，硅胶柱层析提纯得TG-040(产率15％) /TG-041(产率64％)/TG-043(产率55％)/TG-044(产率16％)。

化合物TG-038，TG-039，TG-040，TG-041，TG-042，TG-043和TG-044的结构及鉴定数据如下所示：

TG-038的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.07(d,J＝8.6Hz,2H),6.89–6.70(m,2H),4.52(dt,J ＝12.1,6.1Hz,1H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.95–3.88(m,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.9Hz,1H),3.66(dd,J＝11.8,5.3Hz,1H),3.62–3.51(m,1H),3.36–3.33(m,1H),3.28–3.20(m,2H),3.17(dd,J＝15.1,7.2Hz,1H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),1.75–1.54(m,4H),1.27(d,J＝6.0Hz,6H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺393.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₁₉H₃₀O₇Na⁺393.1884,实测值为393.1880。

TG-039的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.07(d,J＝8.6Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d, J＝7.8Hz,1H),3.91(m,1H),3.88–3.82(m,1H),3.77(d,J＝6.8Hz,2H),3.67(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.55(m,1H),3.33-3.17(m,4H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),1.76–1.54(m,4H),1.27–1.16(m,1H),0.59(dd,J＝8.1,1.4Hz,2H),0.38–0.24(m,2H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺405.0；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₀H₃₀O₇Na⁺405.1884，实测值为405.1883。

TG-040的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.07(d,J＝8.5Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d, J＝7.8Hz,1H),3.99(t,J＝7.1Hz,2H),3.91(dt,J＝9.3,6.3Hz,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.9Hz,1H),3.67(dd,J＝11.9,5.3Hz,1H),3.57-3.52(m,1H),3.26-3.11(m,4H),2.56(t,J＝7.1 Hz,2H),1.75–1.53(m,6H),0.99(s,9H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺435.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₂H₃₆O₇Na⁺435.2353，实测值为435.2352。

TG-041的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.82(d,J＝8.5Hz,2H),4.27(d, J＝7.8Hz,1H),4.01–3.82(m,2H),3.71(d,J＝5.2Hz,1H),3.60(m,3H),3.42–3.24(m, 4H),3.20(t,J＝8.4Hz,1H),2.59(t,J＝7.0Hz,2H),1.78–1.53(m,4H),1.06(s,9H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺421.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₁H₃₄O₇Na⁺421.2197，实测值为421.2194。

TG-042的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ6.85(m,2H),6.58(d,J＝8.9Hz,1H),4.23(d,J＝7.8Hz,1H),3.95–3.88(m,1H),3.85(dd,J＝11.9,1.8Hz,1H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.58–3.51(m,1H),3.36-3.26(m,2H),3.25-3.13(m,2H),2.74(t,J＝6.8Hz,2H),2.51(t,J＝6.9Hz,2H),1.77(t,J＝6.8Hz,2H),1.71–1.56(m,4H),1.28(s,6H)。

LRMS(ESI):[M+Na]⁺419.1；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₁H₃₂O₇Na⁺419.2040，实测值为419.2041。

TG-043的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.07(d,J＝8.6Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d, J＝7.8Hz,1H),3.92(dd,J＝7.9,5.1Hz,2H),3.85(dd,J＝11.9,1.9Hz,1H),3.66(dd,J＝11.9,5.2Hz,1H),3.55(m,1H),3.34–3.21(m,4H),2.56(t,J＝7.1Hz,2H),1.70(m,6H),1.45(m,2H),1.41–1.20(m,24H),0.99(s,1H),0.89(t,J＝6.8Hz,3H).

LRMS(ESI):[M+Na]575.3；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₃₂H₅₆O₇Na⁺,575.3918，实测值为575.3917。

TG-044的数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.08(d,J＝8.5Hz,2H),6.83(d,J＝8.6Hz,2H),4.23(d, J＝7.8Hz,1H),4.15–4.02(m,2H),3.91(m,1H),3.85(dd,J＝11.8,1.7Hz,1H),3.83–3.78(m,2H),3.71–3.47(m,14H),3.36-3.17(m,7H),2.56(t,J＝7.0Hz,2H),1.66(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺541.2；HRMS(ESI):[M+Na]⁺计算值C₂₅H₄₂O₁₁Na 541.2619,found 541.2618。

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

上述中间体39a-39f的鉴定数据为:

39a：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺273.1。

39b：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺285.1。

39c：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺315.2。

39d：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺301.1。

39e：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺299.1。

39f：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺455.6。

39g：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺421.2。

40b：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺243.1。

40c：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺273.1。

40d：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺259.1。

40e：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺257.1。

40f：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺413.3。

40g：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺329.2。

43a：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺561.2。

43b：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺573.2。

43c：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺603.2。

43d：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺589.2。

43e：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺587.2。

43f：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺743.4。

43g：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺709.3。

TG-045的合成

实验操作：

将原料45和Py加入体系中，搅拌溶解，体系降至0℃滴加BzCl，滴加完毕自然升至室温搅拌12h，减压蒸出溶剂。加大量H₂O,二氯甲烷萃取3次，合并有机相。有机相依次用NaHCO₃x2、饱和NaCl x 1洗，Na₂SO₄干燥。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯 (洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2：1)得无色液体化合物46，产率100％。

将46和NH₂NH₂.AcOH加入体系中，DMF搅拌溶解，60℃搅拌7h。加大量H₂O, 二氯甲烷萃取3次，合并有机相。有机相依次用NaHCO₃x2、饱和NaCl x 1洗，Na₂SO₄干燥。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1：1)得无色液体化合物47，产率78％。

将47和二氯甲烷加入体系中，0℃搅拌依次滴加DBU、CCl₃CN，滴加完毕自然升至室温搅拌3h。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2：1) 得白色固体化合物48，产率72％。

将化合物48、醇13、二氯甲烷和4A分子筛加入体系中，搅拌溶解，0℃滴加TMSOTf，滴加完毕自然升至室温搅拌12h。抽滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5：1)得无色液体化合物49,产率85％。

将49、MeOH加入体系中，搅拌溶解，0℃加入NaOMe，加完毕自然升至室温搅拌12h。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/MeOH＝5：1)得白色固体终产物TG-045，产率75％。

TG-045的鉴定数据：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.25-7.01(m,2H),6.95-6.75(m,2H),4.41-4.26(m,2H),3.90-3.38(m,16H),3.31-3.22(m,1H),2.60-2.36(m,2H),1.65-1.42(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺527.2。

该实验过程中的各反应中间体的结构如下：

46的鉴定数据：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺1197.3。

47的鉴定数据：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺1093.3。

48的鉴定数据：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺1236.2。

49的鉴定数据：

LRMS(ESI):[M+Na]⁺1255.4。

TG-046的合成

将化合物50(9g,50mmol)和13(27g，150mmol)，TsOH.H₂O(1g,5.26mmol)加入反应瓶，加热到80℃，搅拌18小时。冷却至室温，加H₂O(50mL)，搅拌1小时，加乙酸乙酯(100mL)萃取三次。萃取液合并，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯得到粗产品3.1g，结晶得纯品TG-046(500mg)。

TG-046鉴定数据如下所示：

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.12(d,J＝8.3Hz,2H),6.84(d,J＝8.3Hz,2H),4.79(d,J＝3.5Hz,1H),3.88-3.73(m,2H),3.78(s,3H),3.73-3.64(m,2H),3.62-3.54(m,1H), 3.53-3.45(m,1H),3.41(dd,J＝9.7,3.7Hz,1H),3.29(m,1H),2.63-2.59(m,2H),1.75-1.63 (m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺365.1

TG-047和TG-048的合成

将化合物9a(16.4g，40mmol)，KSAc(13.28g，80mmol)，依次加入丙酮(150mL) 中，室温搅拌4小时，TLC监测基本反应完全。将反应液倒入150mL水中，乙酸乙酯萃取，萃取液合并，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯(洗脱剂：乙酸乙酯:石油醚＝1:6)得化合物51 12.7g。

将化合物51(12.7g，31.2mmol)、52(6.26g，40.7mmol)和NaHCO₃(0.262g，3.12mmol)加入DMF(100mL)中室温搅拌1小时。加水150mL，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:4)得化合物53 10g。

将化合物13(10mmol)、PPh₃(4.3g，13mmol)加入加入25mL二氯甲烷中。室温下分批加入CBr₄(4.3g，13mmol)，室温搅拌1小时。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯得化合物54(2g)

将化合物53(1.2g，3.34mmol)54(3.674mmol)和Et₃N(334mg，3.34mmol) 依次加入乙腈(20mL)中，室温搅拌1小时，加水20mL，用乙酸乙酯萃取，饱和NaCl 水溶液洗，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯得化合物55(1.1g)

LRMS(ESI):[M+Na]⁺549.2

将化合物55(1.1g)加入MeOH(5mL)中，加H₂O(5mL)，Et₃N(2.5mL)，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。减压蒸除溶剂，硅胶柱柱层析提纯得TG-048(500mg)。

TG-048鉴定数据

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.12(d,J＝8.6Hz,2H),6.85(d,J＝5.7Hz,2H),4.35(d, J＝9.7Hz,1H),3.86(dd,J＝12.0,2.0Hz,1H),3.78(s,3H),3.67(dd,J＝11.8,5.7Hz,1H),3.43-3.16(m,4H),2.76(m,2H),2.60(t,J＝7.2Hz,2H),1.88-1.54(m,4H).

LRMS(ESI):[M+Na]⁺381.1

TG-047的制备方法参考TG-048的制备方法，其结构如下所示：

TG-047鉴定数据

1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.18(d,J＝8.6Hz,2H),6.85(d,J＝8.6Hz,2H),4.38(d,J＝9.5Hz,1H),3.90(dd,J＝12.0,1.8Hz,1H),3.78(s,3H),3.69(dd,J＝12.0,5.4Hz,1H),3.36-3.26(m,3H),3.22(t,J＝8.7Hz,1H),3.07-2.86(m,4H).

LRMS(ESI):[M+COOH]-375.0。

效果实施例

效果实施例1、体外巨噬细胞实验测试化合物的促VEGF-A mRNA表达活性

1.1、活性筛选的具体步骤为：分别将1～10×10⁶对数生长期的巨噬细胞(RAW264.7) 置于细胞培养皿中，将待测化合物(上述化合物TG-001,TG-002,TG-003,TG-004,TG-005, TG-006,TG-007,TG-008，TG-009,TG-010,TG-011,TG-012，TG-013,TG-014,TG-015, TG-016,TG-017,TG-018,TG-019,TG-020,TG-021,TG-022,TG-023，TG-024，TG-025， TG-026，TG-027，TG-028,TG-029,TG-030，TG-031，TG-032，TG-033，TG-034，TG-035，TG-036，TG-037，TG-045，TG-039，TG-040TG-041，TG-042，TG-043，TG-044， TG-045、TG-052、TG-053、TG-054、TG-047、TG-048、TG-046、TG-049、TG-050、TG-051、 TG-055和TG-056)分别稀释成不同的浓度，分别加入到上述的含有巨噬细胞的培养皿中，在37℃、5％CO₂细胞培养箱中于完全培养液(RPMI 1640培养基：胎牛血清：三抗(即青霉素-链霉素-庆大霉素，北京雷根生物技术有限公司)体积比＝89:10:1)中培养 3h，Trizol(康为世纪生物科技有限公司)裂解细胞提取RNA，使用超微量核酸蛋白测定仪(Nanodrop2000c)测定RNA浓度。根据RNA浓度计算所需RNA体积V，根据表 1进行RNA逆转录反应体系配制，然后根据表2所述条件进行RNA逆转录(cDNA合成)(RT EasyTM I(For first-strand cDNA synthesis)反转录试剂盒，成都福际生物技术有限公司)反应。所得cDNA按照表3配制荧光定量PCR反应溶液。按照表4设置荧光定量PCR反应条件，以逆转录反应的cDNA为模板进行荧光定量PCR反应(Realtime PCR EasyTM-SYBR Green荧光定量试剂盒，成都福际生物技术有限公司)。每个样品的Ct值以空白对照组为对照，以β-Actin为内参，计算目标基因的相对表达量2^－ΔΔCt。

化合物TG-052、TG-053和TG-054可参考Chemical&Pharmaceutical Bulletin,2010， 58,1627-1629记载的方法进行合成得到。

化合物TG-056购于(上海源叶生物科技有限公司)，其结构为：

表1 RT反应体系配制

表2 cDNA合成反应条件

表3 QPCR反应溶液

表4 QPCR反应条件

根据药物在一定浓度下能够促进VEGF-A mRNA表达的最大量来判断其活性，规定未加药物时巨噬细胞VEGF-A mRNA表达量为1，以临床上用于心脑血管疾病领域的一款中药注射液丹参多酚酸盐促进巨噬细胞VEGF-A mRNA最大表达量6(结果见表5)为判断标准，最大表达量大于4的化合物为目标化合物。即，当所述待测物质促进巨噬细胞中 VEGF-A mRNA的最大表达量比未加所述待测物质时巨噬细胞中VEGF-A mRNA的表达量提高4倍以上时，所述待测物质即为初步的目标促血管生成活性物质。结果如表6所示，结果显示本发明提供的待测物大部分在一定剂量下具有良好的促VEGF-A mRNA表达的作用。

表5不同浓度的丹参多酚酸盐作用于巨噬细胞时VEGF-A mRNA的表达量

表6不同浓度的化合物作用于巨噬细胞时VEGF-A mRNA的表达量

“-”代表未检测。

效果实施例2利用“海绵(sponge)植入动物模型”筛选促进VEGF-A mRNA表达的活性分子

选用效果实施例1中所获得的在细胞水平表现良好的目标促血管生成化合物TG-052、 TG-053、TG-054、TG-028、TG-055，在炎症性血管生成的“海绵(sponge)植入动物模型”上进一步筛选促进VEGF-A mRNA表达的活性分子。相关研究表明，在“海绵植入动物模型”中，炎症初期能募集到海绵中的细胞约有75％以上为巨噬细胞，该模型可以很好地反映募集到炎症周围的巨噬细胞中VEGF-A mRNA的表达量。

通过Zhang J,Modi Y,Yarovinsky T,et al.Macrophageβ2integrin-mediated,HuR-dependent stabilization of angiogenic factor-encoding mRNAs ininflammatory angiogenesis.[J].American Journal of Pathology,2012.180(4):1751-1760中所述方法建立小鼠海绵植入动物模型，本发明所用小鼠为C57/BL6小鼠，雄性，周龄为6-8周，体重为20-25克，购自上海斯莱克实验动物有限公司，生产许可证号SCXK(沪)2013-0016。将效果实施例1中筛选得到的上述化合物按两周用量进行称量，然后与凝胶基质剂及溶剂混合制得化合物缓释凝胶剂(所述缓释凝胶的制备方法及模型建立和检测方法详见专利申请CN201610168493.9)，具体步骤为：称取一定量的效果实施例1所得化合物置于1.5 mL EP管中，再称取一定量的重均分子量小于1万的左旋聚乳酸(PLLA)与之混合(所得化合物与PLLA的质量比值在0.5:1到2:1之间)，最后加入一定量的DMSO(小于100 微升)，涡旋混匀后用封口膜封口，在200W功率，25℃条件下连续超声5h后得到该化合物的缓释凝胶剂，4℃保存备用。

所制得的缓释凝胶剂可以在2周内将药物释放完全。将该缓释凝胶剂与海绵同时植入到小鼠的背部皮下，2周后将海绵取出，除去多余组织和皮毛后，转移到10mL含胶原酶的DMEM培养液的细胞培养皿中(胶原酶：DMEM＝10mg/10mL)，将海绵切碎，并置于细胞培养箱中孵育1h。然后将上述含海绵碎屑的培养液过滤，得到的滤液离心，弃去上清液，往沉淀中加入500μL Trizol试剂，吹散混合均匀后将液体转移到1.5mL EP 管中，-80℃保存。按照常规的方法提取RNA，使用超微量核酸蛋白测定仪(Nanodrop 2000c)测定RNA浓度。根据RNA浓度计算所需RNA体积V，根据表1进行RNA逆转录反应体系配制，然后根据表2所述条件进行RNA逆转录(cDNA合成)反应。所得 cDNA按照表3配制荧光定量qPCR反应溶液。按照表4设置荧光定量qPCR反应条件，以逆转录反应的cDNA为模板进行荧光定量PCR反应。每个样品的Ct值以空白对照组为对照，以β-Actin为内参，计算目标基因的相对表达量2^－ΔΔCt。观察在2周作用时间下，由海绵所提取的细胞中的VEGF-A mRNA的表达水平。

在“海绵植入动物模型”上化合物分别选择了高、中、低三个不同的给药剂量，60mg/kg/d组的丹参多芬酸盐(购于河南省人民医院)为阳性对照(实验表明该剂量为丹参多芬酸盐在此模型上能够促进VEGF-A mRNA表达的最佳剂量，如图1A所示)，未加药的空白对照缓释凝胶为空白对照，图1为通过RT-qPCR实验所得的结果。

与未加药的空白对照相比，结果发现TG-052(41.37mg/kg/d)、TG-055(19.48mg/kg/d) VEGF-A mRNA表达量增加了约3倍，与丹参多芬酸盐(60mg/kg/d)的活性相当，TG-055(19.48mg/kg/d)的剂量要小于TG-052(41.37mg/kg/d)，其活性要优于TG-052；TG-053 与TG-054VEGF-A mRNA表达量与丹参多芬酸盐(60mg/kg/d)相比，活性稍微降低； TG-028在11.74mg/kg/d及23.48mg/kg/d剂量下，促进VEGF-A mRNA表达量为未加药的空白对照的6倍以上，活性明显高于丹参多芬酸盐(60mg/kg/d)的活性。因此，活性结果可以表述为：TG-028＞TG-055＞TG-052＞丹参多芬酸盐＞TG-053＞TG-054。结果表明，效果实施例1中利用体外细胞实验筛选出的化合物在体内动物筛选模型上大部分活性优于商购的药物丹参多酚酸盐或与其相当。

如图19所示，单独使用不同剂量的红景天苷(TG-056)在海绵植入动物模型上对VEGF-A mRNA表达量非常低。同时，在海绵植入动物模型上我们考察红景天苷和酪醇 LC(红景天苷注射液里面的主要成分)一起作用对VEGF-A mRNA表达的影响，发现在红景天苷20.62mg/(kg.d)+酪醇3.08mg/(kg.d)可以促进VEGF-A mRNA的表达，作用不如丹参多酚酸盐，因此，在后续实验中我们就不再考察红景天苷的作用。

效果实施例3筛选出的活性分子的抑制脑梗作用和对脑损伤神经保护功能的验证

在炎症性血管生成动物模型上获得能够促进VEGF-A mRNA表达的活性分子后，运用大鼠脑梗模型进行进一步验证。根据Longa,E.Z.,Longa,E.Z.,Weinstein,P.R.,Carlson,S. &Commin,R.Reversible middle cerebral artery occlusion withoutcraniectomy in rats.[J]. Stroke,1989.1:84–91所述方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)急性脑梗模型，和根据C.dela Torre,T.Fortin,G.A.S.Park,K.S.Butler,P.Kozlowski,B.A.Pappas,H.de Socarraz, J.K.Saunders and M.T.Richard.[J].BrainResearch,1992.582:186-195所述方法建立大鼠双侧颈总动脉永久结扎(2VO)慢性脑缺血大鼠模型，对效果实施例2中筛选出的活性分子进行抑制脑梗作用和对脑损伤神经保护功能的验证。

在大鼠MCAO急性脑梗模型上，选择效果实施例2中显示活性较高的TG-028及 TG-055进行活性验证，所用对照药为：依达拉奉(购于浙江盛通生物科技有限公司)、硫酸氢氯吡格雷(购于武汉远成共创科技有限公司)及丹参多酚酸盐(购于河南省人民医院)，其中硫酸氢氯吡格雷是一种血小板聚集抑制剂，依达拉奉是一种脑保护剂(自由基清除剂)。运用线栓法制作大鼠MCAO模型，本效果实施例所用大鼠为SD大鼠，雄性，280-320克，购自于上海斯莱克实验动物有限公司。每组5只SD(Sprague Dawley) 大鼠，腹腔注射给药，术前2h给药，造模后每隔24h给药，具体给药剂量如表7所示。

表7所用药品的给药剂量

三天后取脑，对大鼠大脑进行TTC染色(2，3，5—氯化三苯基四氮唑染色，用于检测细胞活力)后拍照，计算梗死率(％)＝(右侧脑切片非梗死面积-左侧脑切片非梗死面积)/脑切片总面积*100％，根据t tests检验，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001与模型组 (MCAO)比较，结果如图2所示。计算不同药物剂量的梗死抑制率(％)＝(模型组梗死率-给药组梗死率)/模型组梗死率*100％，根据不同药物剂量的梗死抑制率作图，计算获得药物的ED50，结果如表8所示。

表8不同药物在MCAO急性脑梗模型上的梗死抑制率(％)的ED50值

由表8结果可知，化合物TG-028在大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)急性脑梗模型上抑制大鼠大脑梗死的作用最强，要优于目前市场上常用的药物。

同时，记录大鼠的体重，计算体重变化率(％)＝(最后体重-初始体重)/最后体重*100％，得到不同药物不同给药量的体重变化率，如图3所示。由大鼠在大脑损伤三天后的体重变化率可以看到，TG-028在大鼠大脑损伤后对于大鼠体重的保护作用明显，要优于 TG-055、依达拉奉、硫酸氢氯吡格雷、丹参多酚酸盐。

在大鼠MCAO急性脑梗模型三天时，按照Longa神经评分标准对实验大鼠进行神经功能评分，评分标准的示意图如图4所示。其中0分表示正常，无神经损伤；1分表示不能完全伸展对侧前爪；2分表示向对侧转圈；3分表示向对侧倾倒；4分表示不能自发行走，意思丧失。

按照Longa神经评分标准对实验大鼠进行神经功能评分，获得不同药物不同剂量的 Longa神经评分，结果如图5所示。Longa神经评分标准结果显示：TG-028、TG-055在大鼠大脑损伤后对于神经的保护作用与依达拉奉、硫酸氢氯吡格雷、丹参多酚酸盐相当。

从上述大鼠MCAO急性脑梗模型上药物的梗死抑制率(％)，体重的变化率及Longa神经评分的结果发现TG-028要明显优于TG-055，这与前面的在sponge植入动物模型上的实验结果相一致，说明本发明筛选模型的可靠性。

在上述实验的基础上，同时也测试了TG-057的活性，如图20所示，在与TG-028 相同给药剂量(5mg/kg)的情况下，TG-057也具有抑制大鼠大脑梗死的作用，Longa神经评分结果显示TG-057在大鼠大脑损伤后对于神经具有保护作用，但是其作用都不如 TG-028强。

大鼠MCAO急性脑梗造模3天后，取出完整脑组织，去除嗅球及额极前部4mm的脑组织，取之后相邻2mm层厚的脑组织，进行脑含水量测定，结果如图6A所示。脑组织含水量的计算公式为：(WW-DW)/WW×100％，其中WW为湿重(Wet weight)，DW 为干重(Dry weight)。大鼠MCAO急性脑梗造模3天后，脑组织用伊文思蓝(Evans Blue， EB，一种常用的偶氮染料制剂)评价血脑屏障(BBB)通透性，对其进行血脑屏障完整性的评估，结果如图6B所示。这两个实验均用之前测定的每个药物中最佳剂量的老鼠来进行检测：TG-028(5mg/Kg)，丹参多酚酸盐(20mg/Kg)，硫酸氢氯吡格雷(40mg/Kg)，依达拉奉(40mg/Kg)。

图6A显示(Sham为假手术组)，大鼠MCAO急性脑损伤后TG-028对于脑水肿的减轻作用要优于依达拉奉、硫酸氢氯吡格雷、丹参多酚酸盐。图6B显示，大鼠MCAO 急性脑损伤后TG-028对于血脑屏障的保护作用要优于依达拉奉、丹参多酚酸盐。

在本发明后期，建立了双侧颈总动脉永久结扎(2VO)慢性脑缺血大鼠模型，通过腹腔注射，每天给药TG-028(5mg/kg)，共给药3周，每组5只SD大鼠，观察TG-028及对照药依达拉奉(40mg/kg)在慢性脑缺血大鼠模型上的作用。

在3周内大鼠的体重变化如图7(Sham为假手术组)所示，大鼠脑缺血慢性损伤3 天时，给药组TG-028及依达拉奉组与假手术组相比均有体重减轻，但是在1周以后，给药组TG-028与假手术组相比体重变化没有差别，说明TG-028对体重有保护作用，而依达拉奉组与假手术组相比体重增加不明显，对体重的保护作用低。

在2VO慢性脑缺血大鼠模型建立3周后，对实验大鼠进行Morris水迷宫实验来判断药物对于动物学习记忆的影响。首先需要对实验大鼠进行5天周围定位和记忆的训练，训练至第五天后，进行定位航行实验，依次记录各组大鼠从不同入水点面向池壁放入水中的找到平台时间，即逃避潜伏期。第六天撤去平台，进行空间探索实验，从目标象限的对侧象限入水记录120s内，大鼠在目标象限的游泳时间，目标象限的停留时间，目标象限的路程，经过平台的次数等。水迷宫定位航行实验结果如图8(Sham为假手术组) 所示。大鼠在2VO慢性脑缺血给药3周之后进行Morris水迷宫定位航行实验的结果显示，大鼠逃避潜伏期所用时间，与2VO+NaCl组比较，2VO+TG-028组与2VO+依达拉奉组的逃避潜伏期时间与总路程在训练后实验第三天开始出现差异性，到第五天时差异性最大。TG-028组与依达拉奉组相比作用相当，说明大鼠的记忆能力得到了改善，认知能力得到提升。

双侧颈总动脉永久结扎三周后，进行5天定位训练，训练结束后进行 Morris水迷宫空间探索实验，结果如图9(Sham为假手术组)所示。与2VO+NaCl组比较，2VO+TG-028组经过平台次数显著性增加，而2VO+依达拉奉组的并没有显著性差异，说明在给药之后，2VO+TG-028组对空间的探索能力增强，认知能力得到改善。Data were Mean±SEM(n＝7)。**P﹤0.01，*P﹤0.05，ns：No Significant Different。

3周慢性脑缺血后的脑切片进行HE染色(苏木精-伊红染色)及Nissl染色(尼氏染色)结果如图10(Sham为假手术组)所示。结果显示与2VO+NaCl组比较，2VO+TG-028 组的大鼠海马CA3区神经元细胞排列整齐密集，颗粒大小均匀且清晰，同时2VO+依达拉奉组细胞形态也得到改善。说明了TG-028和依达拉奉均具有保护与修复损伤的神经元促进神经功能的改善。

除此之外，还进行了TG-028的急性毒性实验，测得其LD50为616.59mg/kg，治疗指数LD50/ED50＝616.59/2.61＝236，该数值说明TG-028的治疗窗口大，安全性好。

最后，我们还直接将Recombinant Human VEGF165蛋白(PEPROTECH，美国)作用于大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型上，并观察3天后其对于脑梗死的抑制作用。大鼠MCAO模型的制备方法和相关的实验所用动物和实验步骤均与前述相同。具体给药剂量和TTC染色结果如图11中所示。相关梗死率和梗死抑制率的结果如图12和13所示。结果显示，VEGF具有抑制大鼠大脑梗死的作用，直接证明了VEGF是脑缺血后促血管生成的重要因子。

效果实施例4 TG-028作用于巨噬细胞后可以促进内皮细胞的增殖、迁移和小管形成，从而影响新生血管的形成

此外，进一步验证了：在体外细胞实验上，发现TG-028通过作用于巨噬细胞，可以促进内皮细胞的增殖、迁移、小管形成，从而影响新生血管的形成。

该实验分为七组，第一组为单纯DMEM培养液(Gibcol，上海)加10％FBS(SERANA，德国)直接作用于HUVEC-12内皮细胞(购于上海荣创生物，control)；第二组巨噬细胞用DMEM培养液加10％FBS培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-control)；第三组为TG-028直接作用于DMEM培养液加10％FBS培养的内皮细胞组(TG-028，10μΜ)；第四组为TG-028作用于巨噬细胞(DMEM培养液加10％FBS)并共培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-TG-028，10μM)；第五组为Cpd-18(丹参多酚酸盐)直接作用于 DMEM培养液加10％FBS培养的内皮细胞(cpd-18，10μM)；第六组为Cpd-18(丹参多酚酸盐，10μM)作用于巨噬细胞(DMEM培养液加10％FBS)培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-cpd18)；第七组为VEGF蛋白直接作用于DMEM培养液加10％FBS 培养的内皮细胞(Recombinant Human VEGF165，10ng/mL)。

(1)TG-028作用巨噬细胞24h后的上清对内皮细胞增殖的影响

取对数生长期的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12细胞进行细胞计数，调整细胞密度为2.5×10⁴个/mL，以每孔100μL接种于96孔培养板。放入培养箱内过夜培养后完全贴壁。根据以上不同分组，处理HUVEC-12内皮细胞，将96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养24小时。取出96孔板加入5mg/mL MTT，20μL/孔，继续培养4h。4h后弃上清加DMSO，150μL/孔，摇床上摇10min，使紫色结晶物充分溶解，DMSO溶后10 min置酶联免疫检测仪上测定波长570nm下的OD值。(酶标仪，Thermo Fisher公司)。根据所测得的吸光度OD值，以单纯DMEM培养液直接作用于HUVEC-12内皮细胞 (control)为空白对照(即第一组)，计算各组细胞增加的百分比，并进行对比研究。结果发现：除了Cpd-18(丹参多酚酸盐，10μM)直接作用于内皮细胞(即第五组)对内皮细胞的增殖没有显著性的差异以外，其他各组均显著性地促进了内皮细胞的增殖，而且TG-028作用于巨噬细胞培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-TG-028，10μM)组 (即第四组)与Cpd-18(丹参多酚酸盐，10μM)作用于巨噬细胞培养24小时后的上清作用于内皮细胞组(即第六组)，这两组均比VEGF直接作用于内皮细胞组(即第七组) 促进内皮细胞的增殖作用强，具有显著性差异(##P<0.01)，而巨噬细胞培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-control)组(即第二组)与VEGF直接作用于内皮细胞组(即第七组)相比对内皮细胞的增殖没有显著性差异(ns)，由此说明，TG-028与Cpd-18(丹参多酚酸盐)可以通过作用于巨噬细胞从而促进内皮细胞的增殖，并且不同于VEGF直接对内皮细胞的增殖作用。如图14所示。

(2)TG-028作用巨噬细胞24h后的上清对内皮细胞迁移的影响

取对数生长期的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12细胞进行细胞计数，调整细胞密度为5×10⁵个/mL，以每孔1mL接种至6孔板。放入培养箱内常规培养形成90％融合的单层细胞，取出铺满六孔板的细胞，用200L枪头垂直于细胞表面由孔一端划向另一端，尽可能垂直于板底的横线划痕，此刻可以清楚地在培养皿表面观察到细胞表面呈井字形划痕。

吸去旧的培养基，用PBS洗掉划下的细胞。同样根据上面的七个分组，处理上述培养好的HUVEC-12细胞，每组两个副孔，放入37℃，5％CO₂饱和温度培养箱培养。按0 h、24h取样，拍照，观察不同处理组的划痕宽度。根据细胞划痕法检测内皮细胞的迁移情况并计算相对迁移率。相对迁移率＝(0h划痕宽度-24h划痕宽度)/0h划痕宽度。划痕实验结果如图15和16所示。

在24小时内与单纯DMEM培养液直接作用于HUVEC-12内皮细胞(control)组(即第一组)相比，TG-028组(即第三组)、VEGF组(即第七组)、s-TG-028(即第四组) 及s-cpd18(即第六组)对于内皮细胞的迁移具有显著性的差异(*P<0.05，***P<0.001)， s-TG-028及s-cpd18对内皮细胞的迁移作用与VEGF相当。与巨噬细胞培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-control)组(即第二组)相比，VEGF组、s-TG-028及s-cpd18 对内皮细胞的迁移作用均优于s-control组，说明化合物TG-028及丹参多酚酸盐可以通过作用于巨噬细胞从而促进内皮细胞的迁移。

(3)TG-028作用巨噬细胞24h后的上清对内皮细胞小管形成的影响

将96孔板和无菌黄枪头放入-20℃冰箱冷藏过夜。将分装好的Matrigel基质胶于实验前放入4℃冰箱融化过夜，第二天待Matrigel基质胶冻融后，离心数分钟。把预冷的Matrigel基质胶在超净台中在冰上加入96孔板，每孔加60μL，然后放到培养箱中放置1 h。待Matrigel基质胶凝固后，取对数生长期的HUVEC-12细胞，调整细胞密度，以5×10⁴个/孔密度与各组培养液混匀接种到96孔板，置于37℃，5％CO₂培养箱中3h之后，取出细胞培养板，开始连续在倒置显微镜下观察并拍照(放大倍数50×，德国Leica DMi1 倒置显微镜)，每孔随机选取5个视野拍照观察细胞间连接形成的管样结构并采用ImageJ 图像分析软件分析管样结构，用number of master junction量化指标评价成管能力。结果如图17和图18所示。

在成管实验中，与单纯DMEM培养液直接作用于HUVEC-12内皮细胞(control)组相比，TG-028组、VEGF组、s-TG-028及s-cpd18对于内皮细胞的成管具有显著性的差异(*P<0.05,***P<0.001)，s-TG-028及s-cpd18对内皮细胞的成管作用与VEGF相当。单独巨噬细胞培养24小时后的上清作用于内皮细胞(s-control)组对于内皮细胞的成管作用没有作用，但是加入药物TG-028及丹参多酚酸盐的s-TG-028及s-cpd18组却大大提高了内皮细胞的成管作用，说明化合物TG-028及丹参多酚酸盐可以通过巨噬细胞活化促进内皮细胞的成管能力。

因此，通过本发明的活性筛选方法筛选出的化合物TG-028，其通过作用于巨噬细胞可以促进内皮细胞的增殖、迁移、小管形成，从而影响新生血管的形成。

以上各效果实施例的结果可以看出，本发明的体外巨噬细胞实验从大批量待测化合物中筛选出了初步的目标促血管生成活性物质，其在后续的半体内动物筛选模型上都表现出很好的促血管生成活性物质，其中化合物TG-028的活性甚至优于丹参多酚酸盐。即，本发明从分子水平就能筛选出目标促血管生成活性物质，并且进一步后续的体内动物模型实验都验证了本发明活性筛选方法的准确性和稳定性。此外，还验证了化合物TG-028 主要是通过作用于巨噬细胞后，可以促进内皮细胞的增殖、迁移、小管形成，从而影响新生血管的形成，从而从机理上又反证了选用体外巨噬细胞、海绵植入动物模型检测 VEGF-A mRNA作为促血管生成活性物质的筛选模型的可靠性。按照本发明的活性筛选方法筛选出来的化合物是预期化合物，并能达到促进血管新生进而抑制脑梗死、对神经保护功能、减轻脑水肿、保护损伤后血脑屏障的完整性、脑损伤后对体重的保护作用以及改善大鼠的记忆功能、保护与修复损伤的神经元促进神经功能的改善的效果。

Claims

1.一种如式III所示的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物：

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵各自独立地选自氢、羟基、巯基、取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基、硝基或卤素；

所述取代或未取代的C₁～C₂₀烷氧基中的取代基选自C₃-C₂₀环烷基、C₁-C₂₀烯烃基、取代或未取代的C₆-C₂₀芳基、卤素、取代或未取代的C₂-C₂₀杂芳基、C₃-C₆的环烷氧基、C₁～C₂₀的烷氧基或C₁～C₂₀烷基；

X为CH₂、NR⁷、O或S；

Y为CH₂、NR⁸、O或S；

Z为O或S；

每个R⁶各自独立地为氢或糖基；

n为2，3或4；

其用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中的使用。

2.根据权利要求1使用的化合物，其用于在预防和/或治疗脑卒中、动脉粥样硬化性血栓形成、心源性脑血栓、急性缺血性脑血管综合征、小血管病变(也称为腔隙性脑卒中)、多发性脑梗死、大面积脑梗死、分水岭脑梗死、出血性脑梗死、无症状的脑梗死、脑静脉及静脉窦血栓形成、颅底异常血管网病、其他原因所致的缺血性脑卒中使用。

3.一种如式I所示的糖苷类化合物，其互变异构体、光学异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐、酯、药学上可接受的前体药物或衍生物：

X为CH₂、NR⁷、O或S；

Y为CH₂、NR⁸、O或S；

Z为O或S；

R⁶为氢或

n为2，3或4；

其用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中的使用。

4.根据权利要求3使用的化合物，其用于在预防和/或治疗脑卒中、动脉粥样硬化性血栓形成、心源性脑血栓、急性缺血性脑血管综合征、小血管病变(也称为腔隙性脑卒中)、多发性脑梗死、大面积脑梗死、分水岭脑梗死、出血性脑梗死、无症状的脑梗死、脑静脉及静脉窦血栓形成、颅底异常血管网病、其他原因所致的缺血性脑卒中使用。

5.根据权利要求1-4中任一项使用的化合物，其中所述预防或治疗包括施用作为唯一活性成分的所述式III或式I的化合物。

6.根据权利要求1-4中任一项使用的化合物，其中所述预防或治疗包括在与选自由以下各项组成的组中的另外的治疗剂的联合疗法中施用式III或式I的化合物：降血压药、降低血脂的药物、溶解血栓的药物、抗血小板聚集的药物、抗凝药物、神经保护药物、钙离子拮抗剂、谷氨酸拮抗剂、谷氨酸释放抑制剂、GABA受体激动剂、自由基清除剂、细胞膜稳定剂。

7.根据权利要求6使用的化合物，其中所述另外的治疗剂选自由以下各项组成的组：瑞替普酶、兰替普酶、孟替普酶、豆豉纤溶酶、新型蚯蚓纤溶酶、纳豆激酶、蛇毒纤溶酶原激活剂、阿司匹林、噻氯匹定、氯吡格雷、普拉格雷、替卡格雷、坎格雷洛、盐酸沙格雷酯、vorapaxar、atopaxar、肝素、低分子肝素、华法林、利伐沙班、比法卢定、达比加群酯、依达拉奉、他汀类药物。

8.根据权利要求6-7中任一项使用的化合物，其中所述联合疗法包括向受试者同时、依次或分开地施用所述式III或式I的化合物和所述另外的治疗剂。

9.一种式III或式I的化合物和如权利要求6-8中任一项所定义的另外的治疗剂的组合，其用于在预防和/或治疗缺血性脑血管疾病中的使用。

10.根据权利要求9所述的组合，其中所述缺血性脑血管疾病选自由以下各项组成的组：脑卒中、动脉粥样硬化性血栓形成、心源性脑血栓、急性缺血性脑血管综合征、小血管病变(也称为腔隙性脑卒中)、多发性脑梗死、大面积脑梗死、分水岭脑梗死、出血性脑梗死、无症状的脑梗死、脑静脉及静脉窦血栓形成、颅底异常血管网病、其他原因所致的缺血性脑卒中使用。

11.根据权利要求1-10中任一项使用的化合物，其中所述缺血性脑血管疾病是脑卒中。

12.根据权利要求1-11中任一项使用的化合物，其作为药物组合物的成分，所述药物组合物包含与药用赋形剂或载体组合的有效量的式III或式I的化合物或其药用盐。

13.根据权利要求12使用的化合物，其中所述药物组合物是通过口服单位剂型、静脉、局部、非肠道、吸入或喷雾、舌下、透皮、直肠、或通过其它方式来给予。

14.根据权利要求13使用的化合物，其中可以将药物组合物配制成气雾剂、乳膏剂、凝胶剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、糖浆剂、透皮贴剂、注射剂、纳米制剂。

15.根据权利要求9-10中任一项的组合，其中所述药物组合物是口服单位剂型、口腔内单位剂型、吸入剂型、局部单位剂型和注射剂型。