CN109757103A - 针对tim3的抗体及其用途 - Google Patents

针对tim3的抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN109757103A
CN109757103A CN201780056616.2A CN201780056616A CN109757103A CN 109757103 A CN109757103 A CN 109757103A CN 201780056616 A CN201780056616 A CN 201780056616A CN 109757103 A CN109757103 A CN 109757103A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
antibody
heavy chain
amino acid
tim3
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780056616.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109757103B (zh
Inventor
X.M.谢拜
M.J.塞尔比
M.M.韩
C.比
A.X.邓
A.春塔拉派
B.德沃
H.李
P.O.谢泼德
A.J.科曼
D.F.阿杜雷尔
E.德亚诺瓦
R.黄
G.陈
M.库恩
H-A.长
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bristol Myers Squibb Co
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Priority to CN202311725662.0A priority Critical patent/CN117683135A/zh
Publication of CN109757103A publication Critical patent/CN109757103A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109757103B publication Critical patent/CN109757103B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本文提供了结合含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域‑3（TIM3）蛋白的抗体或其抗原结合部分。还提供了这些抗体或其抗原结合部分在治疗应用例如治疗癌症中的用途。进一步提供了产生所述抗体或其抗原结合部分的细胞、编码所述抗体或其抗原结合部分的重链和/或轻链区的多核苷酸以及包含编码所述抗体或其抗原结合部分的重链和/或轻链区的多核苷酸的载体。

Description

针对TIM3的抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年7月14日提交的美国临时申请号62/362,541和于2017年2月15日提交的美国临时申请号62/459,499的优先权权益，所述申请各自以其整体通过引用并入本文。
对经EFS-WEB电子提交的序列表的引用
随同本申请提交的以ASCII文本文件的电子提交的序列表(名称: 3338_052PC02_序列表；大小: 779,837字节；和创建日: 2017年7月10日)的内容以其整体通过引用并入本文。
公开背景
含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3（TIM3），也称为甲型肝炎病毒细胞受体2（HAVCR2），是I型跨膜蛋白，其作为免疫应答的关键调节因子发挥功能。TIM3最初在活化的产生IFN-γ的T细胞（例如，1型辅助CD4+ T细胞和细胞毒性CD8+ T细胞）上被鉴定，并显示出在结合半乳凝集素-9后诱导T细胞死亡或衰竭。最近的研究已表明TIM3表达在调节许多先天免疫细胞（例如，巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、肥大细胞和自然杀伤细胞）的活性中也是重要的。参见Han G等人, Front Immunol.4: 449 (2013)。
与许多抑制性受体（例如，PD-1和CTLA-4）一样，TIM3表达与许多类型的慢性疾病（包括癌症）相关。已在晚期黑素瘤、非小细胞肺癌或滤泡性B细胞非霍奇金淋巴瘤患者中检测到TIM3+ T细胞。并且TIM3+调节性T细胞的存在已被描述为肺癌进展的有效指标。参见Anderson AC. Cancer Immunol Res.2: 393-8 (2014)。
已经鉴定了TIM3的几种潜在配体：半乳凝集素-9、HMGB1、Semaphorin-4A、CEACAM-1、ILT-4和磷脂酰丝氨酸（PtdSer或PS）。 PS是重要的细胞膜成分，且通常定位于细胞膜的内小叶。但是当细胞经历细胞凋亡时，PS被重新分布并暴露于外膜。在许多肿瘤细胞系中也观察到这种重新分布。参见Riedl S等人, Biochim Biophys Acta.1808: 2638-2645(2011)。TIM3与PS的结合可能对吞噬作用和交叉呈递至关重要。参见Nakayama M等人,Blood.113: 3821-30 (2009)。
研究已表明TIM3与抑制性受体PD-1之间的密切关系。例如，许多肿瘤特异性T细胞表达PD-1和TIM3，并且与仅表达PD-1或TIM3的T细胞相比，已显示这些T细胞功能失调更多。参见Fourcade J等人, J Exp Med.207: 2175-2186 (2010)。
因此，对于设计新的癌症免疫疗法和改进传统的癌症免疫疗法而言，靶向TIM3的药剂和使用这些药剂的方法是高度期望的。
公开概述
本文提供了特异性结合TIM3并具有期望的功能特性的分离的抗体，例如单克隆抗体，特别是人（例如，单克隆）抗体。这些特性包括例如与人TIM3结合、与猴TIM3（例如，食蟹猴TIM3）结合的高亲和力，以及诸如在携带肿瘤或携带病毒（病毒感染的）的主体中刺激免疫应答（例如抗原特异性T细胞应答）的能力以及检测样品中的TIM3蛋白的能力。
在一个方面，与TIM3结合的分离的抗体或其抗原结合部分表现出以下特性中的至少一种：
（a）结合可溶性和/或膜结合的人TIM3；
（b）结合可溶性和/或膜结合的食蟹猴TIM3；
（c）诱导或刺激免疫应答；
（d）诱导或刺激T细胞活化，例如Th1细胞活化（如例如通过增强的细胞因子分泌和/或增殖所证明）；
（e）诱导或刺激T细胞增殖（例如， CD4+、CD8+ T细胞、Th1细胞或TIL），例如，在共培养测定中，如实施例中所述；
（f）诱导或刺激通过T细胞（例如Th1细胞或肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），例如来自人肾、肺、胰腺或乳腺癌肿瘤的TIL）的IFN-γ产生，如例如在实施例中所述的测定中所测定的；
（g）阻断或抑制人TIM3与PtdSer的结合，如例如在实施例中所述的测定中所测定的；
（h） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（i）结合人TIM3胞外结构域(a) CPVFECG (SEQ ID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；或(d)WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)；
（j）与本文所述的结合TIM3的抗体（例如，13A3、3G4、17C3、17C8、9F6或TIM3.2至TIM3.18中的任一种）竞争或交叉阻断结合人TIM3，如例如在实施例中所述的测定中所测定的；
（k）结合人TIM3，但不结合具有以下氨基酸残基的一种或多种的氨基酸取代的人TIM3：L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120，如SEQ ID NO: 286 (图20)中编号的；
（l）结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127(SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如通过HDX-MS所测定的；
（m）具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120和任选T70和/或I112，如由X射线晶体学所测定的；和/或
（n）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如，如实施例中所述的。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分刺激抗肿瘤免疫应答，例如抗原特异性T细胞应答。在其他实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分增加表达TIM3的T细胞中的细胞因子产生（例如，IFN-γ）和/或增加T细胞增殖。在一些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分不结合Fc受体。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分以如通过Biacore测量的10 nM或更低的KD结合可溶性人TIM3，以如通过Scatchard测量的1 nM或更低的KD结合膜结合的人TIM3，以如通过Biacore测量的100 nM或更低的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，以如通过流式细胞术测量的1μg/mL或更低的EC50结合膜结合的人TIM3，以如通过流式细胞术测量的0.1μg/mL或更低的EC50结合膜结合的人TIM3，以如通过流式细胞术测量的1μg/mL或更低的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，以如通过Scatchard测量的1nM或更低的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3。
本文提供分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中重链CDR3包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQID NO: 59、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 128和SEQ ID NO: 129。
在某些实施方案中，重链CDR1包含X1、X2、X3、X4、X5和X6，并且其中X1是S或无，X2是R或无，X3是S、R或D，X4是Y或H，X5是W或M，并且X6是G、N、S或H。在其他实施方案中，重链CDR1包含X1、Y、Y、M和X2，并且其中X1是S或D且X2是H或S。在一些实施方案中，重链CDR1包含R、X1、Y、W和X2，并且其中X1是H或Y且X2是N或S。
在一个实施方案中，重链CDR2包含X1、I、X2、X3、X4、G、X5、X6、X7、X8、Y、X9、X10、X11、X12、X13和X14，并且其中X1是S、Y、I或F，X2是Y、H、N或S，X3是Y、P、G、T或S，X4是S、T、R或G，X5是F、S或D，X6是S、T或I，X7是I或无，X8是Y、N、或I，X9是N、Q、S或A、X10是P、S、Q或D，X11是S或K，X12是L、F或V，X13是K或Q，且X14是S或G。在另一个实施方案中，重链CDR2包含Y、I、H、Y、X1、G、S、T、N、Y、N、X2、S、L、K和S，且其中X1是S或T，且X2是S或P。在一些实施方案中，重链CDR2包含F、I、S、X1、X2、G、S、X3、I、Y、Y、A、D、S、V、K和G，且其中X1是G、T或S，X2是G或S，且X3是T或I。在其他实施方案中，重链CDR2包含I、I、N、P、R、G、D、S、I、I、Y、A、Q、K、F、Q和G。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO: 64或SEQID NO: 65的轻链CDR1、含有SEQ ID NO: 66或SEQ ID NO: 67的轻链CDR2和/或包含SEQ IDNO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70或SEQ ID NO: 71的轻链CDR3。
本文提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并且包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
（a）重链CDR1选自SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44和SEQ ID NO: 45；
（b）重链CDR2选自SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 123、SEQID NO: 124和SEQ ID NO: 125；
（c）重链CDR3选自SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 127、SEQID NO: 128和SEQ ID NO: 129；
（d）轻链CDR1包含SEQ ID NO: 64或SEQ ID NO: 65；
（e）轻链CDR2包含SEQ ID NO: 66或SEQ ID NO: 67；和
（f）轻链CDR3包含SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70或SEQ ID NO: 71。
本文提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并包含：
（a1）分别包含SEQ ID NO: 41、46、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 41、122、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 41、123、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 41、124、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 41、46、126的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 41、46、127的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 41、46、128的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 41、46、129的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 41、122、128的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQ ID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 41、122、126的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQ ID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 42、47、54的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 42、125、54的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（c）分别包含SEQ ID NO: 43、48和55的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（d）分别包含SEQ ID NO: 44、49和56的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（e）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（f）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和71的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（g）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 65、67和70的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（h）分别包含SEQ ID NO: 45、51和58的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（i）分别包含SEQ ID NO: 45、52和59的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
本文提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并包含重链和轻链可变区，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO: 34、35、36、37、38、39、40、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121和364的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约96%、至少约97%、至少约98%、至少约99%或约100%同一性的氨基酸序列，和/或其中轻链可变区包含与选自SEQ ID NO: 60、61、62和63的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一性的氨基酸序列。
本文提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并与包含VH和VL的参考抗体交叉竞争结合人TIM3，其中VH和VL选自：
（a）包含SEQ ID NO: 34所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（b）包含SEQ ID NO: 35所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（c）包含SEQ ID NO: 36所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（d）包含SEQ ID NO: 37所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（e）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（f）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 62所示的氨基酸序列的VL；
（g）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（h）包含SEQ ID NO: 39所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（i）包含SEQ ID NO: 40所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（j）分别包含SEQ ID NO: 121所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（k）分别包含SEQ ID NO: 120所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（l）分别包含SEQ ID NO: 112所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（m）分别包含SEQ ID NO: 113所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（n）分别包含SEQ ID NO: 114所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（o）分别包含SEQ ID NO: 115所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（p）分别包含SEQ ID NO: 116所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（q）分别包含SEQ ID NO: 117所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（r）分别包含SEQ ID NO: 118所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（s）分别包含SEQ ID NO: 119所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；和
（t）分别包含SEQ ID NO: 364所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL。
在一个实施方案中，分离的抗TIM3抗体或其抗原结合部分在与如参考抗体相同的表位处结合TIM3。
在其他实施方案中，分离的抗TIM3抗体或其抗原结合部分包含选自以下的VH和VL：
（a）包含SEQ ID NO: 34所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（b）包含SEQ ID NO: 35所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（c）包含SEQ ID NO: 36所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（d）包含SEQ ID NO: 37所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（e）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（f）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 62所示的氨基酸序列的VL；
（g）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（h）包含SEQ ID NO: 39所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（i）包含SEQ ID NO: 40所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（j）分别包含SEQ ID NO: 121所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（k）分别包含SEQ ID NO: 120所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（l）分别包含SEQ ID NO: 112所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（m）分别包含SEQ ID NO: 113所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（n）分别包含SEQ ID NO: 114所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（o）分别包含SEQ ID NO: 115所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（p）分别包含SEQ ID NO: 116所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（q）分别包含SEQ ID NO: 117所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（r）分别包含SEQ ID NO: 118所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（s）分别包含SEQ ID NO: 119所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；和
（t）分别包含SEQ ID NO: 364所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。在一些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分包含无效应子(effectorless)IgG1 Fc，其包含以下突变：L234A、L235E、G237A和任选A330S和P331S。在其他实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分包含含有选自SEQ ID NO: 130-133的氨基酸序列的重链恒定区。在某些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分是人或人源化抗体。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分特异性结合人TIM3并包含
（a1）分别包含SEQ ID NO: 301 (或302)和29的重链和轻链序列；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 1 (或8)和29的重链和轻链序列；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 15 (或22)和29的重链和轻链序列；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 303 (或304)和29的重链和轻链序列；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 72 (或82)和29的重链和轻链序列；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 92 (或102)和29的重链和轻链序列；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 305 (或306)和29的重链和轻链序列；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 73 (或83)和29的重链和轻链序列；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 93 (或103)和29的重链和轻链序列；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 307 (或308)和29的重链和轻链序列；
（a11）分别包含SEQ ID NO: 74 (或84)和29的重链和轻链序列；
（a12）分别包含SEQ ID NO: 94 (或104)和29的重链和轻链序列；
（a13）分别包含SEQ ID NO: 309 (或310)和29的重链和轻链序列；
（a14）分别包含SEQ ID NO: 75 (或85)和29的重链和轻链序列；
（a15）分别包含SEQ ID NO: 95 (或105)和29的重链和轻链序列；
（a16）分别包含SEQ ID NO: 311 (或312)和29的重链和轻链序列；
（a17）分别包含SEQ ID NO: 76 (或86)和29的重链和轻链序列；
（a18）分别包含SEQ ID NO: 96 (或106)和29的重链和轻链序列；
（a19）分别包含SEQ ID NO: 313 (或314)和29的重链和轻链序列；
（a20）分别包含SEQ ID NO: 77 (或87)和29的重链和轻链序列；
（a21）分别包含SEQ ID NO: 97 (或107)和29的重链和轻链序列；
（a22）分别包含SEQ ID NO: 315 (或316)和29的重链和轻链序列；
（a23）分别包含SEQ ID NO: 78 (或88)和29的重链和轻链序列；
（a24）分别包含SEQ ID NO: 98 (或108)和29的重链和轻链序列；
（a25）分别包含SEQ ID NO: 317 (或318)和29的重链和轻链序列；
（a26）分别包含SEQ ID NO: 79 (或89)和29的重链和轻链序列；
（a27）分别包含SEQ ID NO: 99 (或109)和29的重链和轻链序列；
（a28）分别包含SEQ ID NO: 319 (或320)和29的重链和轻链序列；
（a29）分别包含SEQ ID NO: 349 (或350)和29的重链和轻链序列；
（a30）分别包含SEQ ID NO: 351 (或352)和29的重链和轻链序列；
（a31）分别包含SEQ ID NO: 353 (或354)和29的重链和轻链序列；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 321 (或322)和30的重链和轻链序列；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 2 (或9)和30的重链和轻链序列；
（b3）分别包含SEQ ID NO: 16 (或23)和30的重链和轻链序列；
（b4）分别包含SEQ ID NO: 323 (或324)和30的重链和轻链序列；
（b5）分别包含SEQ ID NO: 80 (或90)和30的重链和轻链序列；
（b6）分别包含SEQ ID NO: 100 (或110)和30的重链和轻链序列；
（b7）分别包含SEQ ID NO: 325 (或326)和30的重链和轻链序列；
（c1）分别包含SEQ ID NO: 327 (或328)和30的重链和轻链序列；
（c2）分别包含SEQ ID NO: 3 (或10)和30的重链和轻链序列；
（c3）分别包含SEQ ID NO: 17 (或24)和30的重链和轻链序列；
（c4）分别包含SEQ ID NO: 329 (或330)和30的重链和轻链序列；
（d1）分别包含SEQ ID NO: 331 (或332)和29的重链和轻链序列；
（d2）分别包含SEQ ID NO: 4 (或11)和29的重链和轻链序列；
（d3）分别包含SEQ ID NO: 18 (或25)和29的重链和轻链序列；
（d4）分别包含SEQ ID NO: 333 (或334)和29的重链和轻链序列；
（e11）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和32的重链和轻链序列；
（e12）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和33的重链和轻链序列；
（e13）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和33的重链和轻链序列；
（e2）分别包含SEQ ID NO: 5 (或12)和33的重链和轻链序列；
（e3）分别包含SEQ ID NO: 19 (或26)和33的重链和轻链序列；
（e4）分别包含SEQ ID NO: 337 (或338)和33的重链和轻链序列；
（e5）分别包含SEQ ID NO: 81 (或91)和33的重链和轻链序列；
（e6）分别包含SEQ ID NO: 101 (或111)和33的重链和轻链序列；
（e7）分别包含SEQ ID NO: 339 (或340)和33的重链和轻链序列；
（f1）分别包含SEQ ID NO: 341 (或342)和29的重链和轻链序列；
（f2）分别包含SEQ ID NO: 6 (或13)和29的重链和轻链序列；
（f3）分别包含SEQ ID NO: 20 (或27)和29的重链和轻链序列；
（f4）分别包含SEQ ID NO: 343 (或344)和29的重链和轻链序列；
（g1）分别包含SEQ ID NO: 345 (或346)和30的重链和轻链序列；
（g2）分别包含SEQ ID NO: 7 (或14)和30的重链和轻链序列；
（g3）分别包含SEQ ID NO: 21 (或28)和30的重链和轻链序列；或
（g4）分别包含SEQ ID NO: 347 (或348)和30的重链和轻链序列。
在其他实施方案中，抗TIM3抗体或其抗原结合部分具有以下特性中的一种或多种：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120和任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如如实施例中所述的。
本文提供了包含与具有第二结合特异性的分子连接的抗TIM3抗体的双特异性分子。
本文提供了编码抗TIM3抗体或其抗原结合部分的重链和/或轻链可变区的核酸、包含核酸分子的表达载体和用表达载体转化的细胞。
本文提供了包含与药剂连接的本文所述的抗TIM3抗体的免疫缀合物。
本文提供了包含本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物和载体的组合物。本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物以及使用说明书。
本文提供了制备抗TIM3抗体或其抗原结合部分的方法，其包括在细胞中表达抗TIM3抗体或其抗原结合部分和从细胞中分离所述抗体或其抗原结合部分。
本文提供了刺激抗原特异性T细胞应答的方法，其包括使T细胞与本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物接触，从而刺激抗原特异性T细胞应答（例如，通过抑制TIM3对细胞例如T细胞的负作用）。
本文提供了是活化或共刺激T细胞例如效应T细胞（例如Th1细胞）的方法，其包括将细胞例如效应T细胞与本文所述的抗TIM3抗体、或其抗原结合部分、双特异性分子、或免疫缀合物和CD3接触，其中效应T细胞被活化或共刺激（例如，通过抑制TIM3对细胞例如T细胞的负作用）。
本文提供了增加T细胞（例如Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生和/或T细胞（例如Th1细胞或TIL）增殖的方法，其包括使T细胞与有效量的本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物接触。
本文提供了增加主体的T细胞中IFN-γ产生的方法，其包括向主体施用有效量的本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物以增加从T细胞的IFN-γ产生。
本文提供了刺激主体中TIL活性的方法，其包括向主体施用治疗有效量的本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分，使得TIL增殖或分泌细胞因子例如IFN-γ。
本文提供了在主体中刺激NK细胞（例如通过增加NK细胞细胞毒活性）和/或巨噬细胞或其他抗原呈递细胞的方法，其包括向主体施用有效量的本文所述的抗TIM3抗体或抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物。 例如，本文所述的抗TIM3抗体可以通过与TIM3抗体接触的抗原呈递细胞增加IL-12分泌。
本文提供了刺激主体中的免疫应答的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，从而刺激主体中的免疫应答。在某些实施方案中，主体具有肿瘤并且刺激针对肿瘤的免疫应答。
本文提供了用于在主体中抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，使得主体中肿瘤的生长受到抑制。
本文提供了例如通过免疫疗法治疗癌症的方法，其包括向有需要的主体施用治疗有效量的本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物以治疗癌症。在某些实施方案中，癌症选自：膀胱癌、乳腺癌、子宫/子宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃肠癌、胰腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肾癌、头颈癌、肺癌、胃癌、生殖细胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮肤癌、中枢神经系统肿瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤、病毒相关癌症其任何组合。在一些实施方案中，癌症是转移性癌症、难治性癌症或复发性癌症。在一些实施方案中，癌症是冷肿瘤(cold tumor)。
在某些实施方案中，本文所述的方法连同抗TIM3抗体还包括一种或多种另外的治疗剂，例如抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗CTLA-4抗体、抗GITR抗体和/或抗PD-L1抗体。
本文提供了检测样品中TIM3蛋白的存在的方法，其包括在允许抗体或其抗原结合部分与TIM3之间形成复合物的条件下使样品与抗TIM3抗体或其抗原结合部分接触，和检测复合物的形成。
实施方案
实施方案1. 分离的抗体（例如，人抗体）或其抗原结合部分，其结合人含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3（TIM3），其中所述抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2、和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
（a）重链CDR1选自SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44和SEQ ID NO: 45；
（b）重链CDR2选自SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 123、SEQID NO: 124和SEQ ID NO: 125；
（c）重链CDR3选自SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 127、SEQID NO: 128和SEQ ID NO: 129；
（d）轻链CDR1包含SEQ ID NO: 64或SEQ ID NO: 65；
（e）轻链CDR2包含SEQ ID NO: 66或SEQ ID NO: 67；和
（f）轻链CDR3包含SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70或SEQ ID NO: 71。
实施方案2. 分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3，所述抗体或其抗原结合部分包含：
（a1）分别包含SEQ ID NO: 41、46、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 41、122、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 41、123、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 41、124、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 41、46、126的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 41、46、127的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 41、46、128的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 41、46、129的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 41、122、128的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQ ID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 41、122、126的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQ ID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 42、47、54的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 42、125、54的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（c）分别包含SEQ ID NO: 43、48和55的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（d）分别包含SEQ ID NO: 44、49和56的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（e）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（f）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和71的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（g1）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO: 65、67和70的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（g2）分别包含SEQ ID NO: 45、50、57的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、71的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（g3）分别包含SEQ ID NO: 45、50、57的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（h）分别包含SEQ ID NO: 45、51和58的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（i）分别包含SEQ ID NO: 45、52和59的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
实施方案3. 实施方案1或2的抗体或其抗原结合部分，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO: 34、35、36、37、38、39、40、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121和364的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约96%、至少约97%、至少约98%、至少约99%或约100%同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包含与选自SEQ ID NO: 60、61、62和63的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一性的氨基酸序列。
实施方案4. 实施方案1至3中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含含有以下突变的无效应子IgG1 Fc：L234A、L235E、G237A和任选A330S和P331S。
实施方案5. 任何前述实施方案的抗体或其抗原结合部分，其包含含有选自SEQID NO: 263-266的氨基酸序列的重链恒定区。
实施方案6. 任何前述实施方案的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分是人或人源化抗体。
实施方案7. 实施方案1-6中任一项的抗体，其中所述抗体包含:
（a1）分别包含SEQ ID NO: 301 (或302)和29的重链和轻链序列；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 1 (或8)和29的重链和轻链序列；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 15 (或22)和29的重链和轻链序列；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 303 (或304)和29的重链和轻链序列；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 72 (或82)和29的重链和轻链序列；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 92 (或102)和29的重链和轻链序列；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 305 (或306)和29的重链和轻链序列；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 73 (或83)和29的重链和轻链序列；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 93 (或103)和29的重链和轻链序列；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 307 (或308)和29的重链和轻链序列；
（a11）分别包含SEQ ID NO: 74 (或84)和29的重链和轻链序列；
（a12）分别包含SEQ ID NO: 94 (或104)和29的重链和轻链序列；
（a13）分别包含SEQ ID NO: 309 (或310)和29的重链和轻链序列；
（a14）分别包含SEQ ID NO: 75 (或85)和29的重链和轻链序列；
（a15）分别包含SEQ ID NO: 95 (或105)和29的重链和轻链序列；
（a16）分别包含SEQ ID NO: 311 (或312)和29的重链和轻链序列；
（a17）分别包含SEQ ID NO: 76 (或86)和29的重链和轻链序列；
（a18）分别包含SEQ ID NO: 96 (或106)和29的重链和轻链序列；
（a19）分别包含SEQ ID NO: 313 (或314)和29的重链和轻链序列；
（a20）分别包含SEQ ID NO: 77 (或87)和29的重链和轻链序列；
（a21）分别包含SEQ ID NO: 97 (或107)和29的重链和轻链序列；
（a22）分别包含SEQ ID NO: 315 (或316)和29的重链和轻链序列；
（a23）分别包含SEQ ID NO: 78 (或88)和29的重链和轻链序列；
（a24）分别包含SEQ ID NO: 98 (或108)和29的重链和轻链序列；
（a25）分别包含SEQ ID NO: 317 (或318)和29的重链和轻链序列；
（a26）分别包含SEQ ID NO: 79 (或89)和29的重链和轻链序列；
（a27）分别包含SEQ ID NO: 99 (或109)和29的重链和轻链序列；
（a28）分别包含SEQ ID NO: 319 (或320)和29的重链和轻链序列；
（a29）分别包含SEQ ID NO: 349 (或350)和29的重链和轻链序列；
（a30）分别包含SEQ ID NO: 351 (或352)和29的重链和轻链序列；
（a31）分别包含SEQ ID NO: 353 (或354)和29的重链和轻链序列；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 321 (或322)和30的重链和轻链序列；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 2 (或9)和30的重链和轻链序列；
（b3）分别包含SEQ ID NO: 16 (或23)和30的重链和轻链序列；
（b4）分别包含SEQ ID NO: 323 (或324)和30的重链和轻链序列；
（b5）分别包含SEQ ID NO: 80 (或90)和30的重链和轻链序列；
（b6）分别包含SEQ ID NO: 100 (或110)和30的重链和轻链序列；
（b7）分别包含SEQ ID NO: 325 (或326)和30的重链和轻链序列；
（c1）分别包含SEQ ID NO: 327 (或328)和30的重链和轻链序列；
（c2）分别包含SEQ ID NO: 3 (或10)和30的重链和轻链序列；
（c3）分别包含SEQ ID NO: 17 (或24)和30的重链和轻链序列；
（c4）分别包含SEQ ID NO: 329 (或330)和30的重链和轻链序列；
（d1）分别包含SEQ ID NO: 331 (或332)和29的重链和轻链序列；
（d2）分别包含SEQ ID NO: 4 (或11)和29的重链和轻链序列；
（d3）分别包含SEQ ID NO: 18 (或25)和29的重链和轻链序列；
（d4）分别包含SEQ ID NO: 333 (或334)和29的重链和轻链序列；
（e1.1）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和32的重链和轻链序列；
（e1.2）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和33的重链和轻链序列；
（e1.3）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和31的重链和轻链序列；
（e2）分别包含SEQ ID NO: 5 (或12)和33的重链和轻链序列；
（e3）分别包含SEQ ID NO: 19 (或26)和33的重链和轻链序列；
（e4）分别包含SEQ ID NO: 337 (或338)和33的重链和轻链序列；
（e5）分别包含SEQ ID NO: 81 (或91)和33的重链和轻链序列；
（e6）分别包含SEQ ID NO: 101 (或111)和33的重链和轻链序列；
（e7）分别包含SEQ ID NO: 339 (或340)和33的重链和轻链序列；
（f1）分别包含SEQ ID NO: 341 (或342)和29的重链和轻链序列；
（f2）分别包含SEQ ID NO: 6 (或13)和29的重链和轻链序列；
（f3）分别包含SEQ ID NO: 20 (或27)和29的重链和轻链序列；
（f4）分别包含SEQ ID NO: 343 (或344)和29的重链和轻链序列；
（g1）分别包含SEQ ID NO: 345 (或346)和29的重链和轻链序列；
（g2）分别包含SEQ ID NO: 7 (或43)和30的重链和轻链序列；
（g3）分别包含SEQ ID NO: 21 (或28)和30的重链和轻链序列；或
（g4）分别包含SEQ ID NO: 347 (或348)和30的重链和轻链序列；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
实施方案8. 实施方案1-7中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分具有以下特性中的一种或多种：
（1）例如以10nM或更低（例如，0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的；
（2）例如以100nM或更低（例如，0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的；
（4）例如以1nM或更低（例如，0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的；
（6）例如以1nM或更低（例如，0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联”阻断测定所测量的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120中的一个或多个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18；
（14）如通过HDX-MS所测定的结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120和任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3。
实施方案9. 双特异性分子，其包含与具有第二结合特异性的分子连接的前述实施方案中任一项的抗体。
实施方案10. 核酸，其编码实施方案1至8中任一项的抗体或其抗原结合部分的重链和/或轻链可变区。
实施方案11. 用实施方案10的核酸转化的细胞。
实施方案12. 免疫缀合物，其包含与药剂连接的实施方案1至8中任一项的抗体。
实施方案13. 组合物，其包含实施方案1-9和12中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物和载体。
实施方案14. 试剂盒，其包含实施方案1-9和12中任一项的抗体或其抗原结合部分、或双特异性分子或免疫缀合物和使用说明书。
实施方案15. 在有需要的主体中刺激、增加或调节免疫应答或用于在有需要的主体中治疗癌症的方法，其包括施用实施方案1-9和12中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，在施用后，其中刺激抗原特异性T细胞应答，其中活化或共刺激效应T细胞，其中T细胞中IFN-γ的产生增加，其中T细胞的数量增加，其中刺激TIL活性，其中主体中肿瘤的大小减小，其中抑制主体中的肿瘤生长，或其任何组合。
本公开的其他特征和优点从以下详述和实施例中将变得显而易见，所述详述和实施例不应解释为限制性的。
附图简述
图1A显示抗TIM3单克隆抗体13A3的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ ID NO:167）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 34）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 41）、CDR2（SEQ ID NO: 46）和CDR3（SEQ ID NO: 53），并显示了V、D和J种系来源。
图1B显示抗TIM3单克隆抗体13A3的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 193）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 60）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ ID NO:66）和CDR3（SEQ ID NO: 68），并显示了V和J种系来源。
图1C显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 274和269）的抗TIM3单克隆抗体13A3的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 167)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 34)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 273和268）的抗TIM3单克隆抗体13A3的轻链VL区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 193)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 60)。
图2A显示抗TIM3单克隆抗体8B9的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 168）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 35）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 42）、CDR2（SEQ ID NO:47）和CDR3（SEQ ID NO: 54），并显示了V、D和J种系来源。
图2B显示抗TIM3单克隆抗体8B9的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 194）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 61）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ ID NO:66）和CDR3（SEQ ID NO: 69），并显示了V和J种系来源。
图2C显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 274和269）的抗TIM3单克隆抗体8B9的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 168)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 35)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 273和268）的抗TIM3单克隆抗体8B9的轻链VL区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 194)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 61)。
图3A显示抗TIM3单克隆抗体8C4的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 169）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 36）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 43）、CDR2（SEQ ID NO:48）和CDR3（SEQ ID NO: 55），并显示了V、D和J种系来源。
图3B显示抗TIM3单克隆抗体8C4的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 194）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 61）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ ID NO:66）和CDR3（SEQ ID NO: 69），并显示了V和J种系来源。
图3C显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 274和269）的抗TIM3单克隆抗体8C4的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 169)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 36)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 273和268）的抗TIM3单克隆抗体8C4的轻链VL区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 194)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 61)。
图4A显示抗TIM3单克隆抗体17C3的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 170）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 37）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 44）、CDR2（SEQ ID NO:49）和CDR3（SEQ ID NO: 56），并显示了V、D和J种系来源。
图4B显示抗TIM3单克隆抗体17C3的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 193）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 60）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ ID NO:66）和CDR3（SEQ ID NO: 68），并显示了V和J种系来源。
图4C显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 272和267）的抗TIM3单克隆抗体17C3的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 170)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 37)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 273和268）的抗TIM3单克隆抗体17C3的轻链VL区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 193)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 60)。
图5A显示抗TIM3单克隆抗体9F6的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 171）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 38）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 45）、CDR2（SEQ ID NO:50）和CDR3（SEQ ID NO: 57），并显示了V、D和J种系来源。
图5B显示抗TIM3单克隆抗体9F6的VK1的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQID NO: 195）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 62）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 65）、CDR2（SEQ IDNO: 67）和CDR3（SEQ ID NO: 70），并显示了V和J种系来源。
图5C显示抗TIM3单克隆抗体9F6的VK2的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQID NO: 196）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 63）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ IDNO: 66）和CDR3（SEQ ID NO: 71），并显示了V和J种系来源。
图5D显示抗TIM3单克隆抗体9F6的VK3的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQID NO: 194）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 61）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ IDNO: 66）和CDR3（SEQ ID NO: 69），并显示了V和J种系来源。
图5E显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 275和270）的抗TIM3单克隆抗体9F6的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 171)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 38)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 276和271）的抗TIM3单克隆抗体9F6的VK1、VK2和VK3的轻链VL区的核苷酸序列(分别为SEQ ID NO: 195、196和194)和氨基酸序列(分别为SEQ ID NO: 62、63和61)。
图6A显示抗TIM3单克隆抗体3G4的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 172）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 39）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 45）、CDR2（SEQ ID NO:51）和CDR3（SEQ ID NO: 58），并显示了V、D和J种系来源。
图6B显示抗TIM3单克隆抗体3G4的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 193）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 60）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ ID NO:66）和CDR3（SEQ ID NO: 68），并显示了V和J种系来源。
图6C显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 275和270）的抗TIM3单克隆抗体3G4的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 172)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 39)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 273和268）的抗TIM3单克隆抗体3G4的轻链VL区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 193)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 60)。
图7A显示抗TIM3单克隆抗体17C8的成熟重链可变（VH）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 173）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 40）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 45）、CDR2（SEQ ID NO:52）和CDR3（SEQ ID NO: 59），并显示了V、D和J种系来源。
图7B显示抗TIM3单克隆抗体17C8的成熟轻链可变（VL）区的核苷酸序列（SEQ IDNO: 194）和氨基酸序列（SEQ ID NO: 61）。描绘了CDR1（SEQ ID NO: 64）、CDR2（SEQ ID NO:66）和CDR3（SEQ ID NO: 69），并显示了V和J种系来源。
图7C显示具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 275和270）的抗TIM3单克隆抗体17C8的重链VH区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 173)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 40)，和具有信号序列（分别为SEQ ID NO: 273和268）的抗TIM3单克隆抗体17C8的轻链VL区的核苷酸序列(SEQ ID NO: 194)和氨基酸序列(SEQ ID NO: 61)。
图8A显示单克隆抗体13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的重链可变（VH）区的序列比对。将互补决定区（CDR）加框显示。
图8B列出了抗体的VH区、各个CDR及其突变体的SEQ ID NO。
图9A显示单克隆抗体13A3、8B9、8C4、17C3、9F6_VK1、9F6_VK2、9F6_VK3、3G4和17C8的轻链可变（VL）区的序列比对。将互补决定区（CDR）加框显示。
图9B列出了抗体的VL区和各个CDR的SEQ ID NO。
图10显示单克隆抗体TIM3.5 (13A3)及其示例性变体：TIM3.13 (D101E)、TIM3.14(P102V)、TIM3.15 (P102Y)、TIM3.16 (P102L)、TIM3.17 (N60Q/P102Y)、TIM3.18 (N60Q/D101E)、TIM3.10 (N60Q)、TIM3.11 (N60S)和TIM3.12 (N60A)的成熟全长重链（HC）的序列比对。将各重链的VH区加下划线显示。
图11显示单克隆抗体9F6及其示例性变体TIM3.7 (A108T)的成熟全长HC的序列比对。将各重链的VH区加下划线显示。
图12显示单克隆8B9及其示例性变体TIM3.8 (S61P)的成熟全长HC的序列比对。将各重链的VH区加下划线显示。
图13列出了杂交瘤衍生抗体（13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8）和重组(TIM3.2-TIM3.18)抗人TIM3抗体的全长重链和轻链、可变区和CDR的SEQ ID NO。还显示重链和轻链的同种型。“H.n.”指杂交瘤名称。图13中提及的重链和轻链可以衍生自其元件，例如本文公开的可变区和恒定区。当SEQ ID NO没有出现在表的第二页或第三页上的给定列中时，则它在其前面的页面或在该页面之前的页面中的那一列中提供。
图14A-14B显示抗TIM3抗体与人TIM3转染的CHO细胞（图14A）和活化的人T细胞（图14B）的结合曲线和EC50。
图15A-15B显示抗TIM3抗体与食蟹猴TIM3转染的CHO细胞（图15A）和活化的食蟹猴T细胞（图15B）的结合曲线和EC50。
图16显示促进从肾细胞癌（RCC）中的肿瘤浸润性白细胞（TIL）的IFN-γ产生的抗TIM3活性（在各种抗体浓度下）。如所示，每种抗体的8个柱代表不同浓度的抗体。
图17A-17B显示促进从肺癌TIL的IFN-γ产生的抗TIM3活性（在各种抗体浓度下）（图17A，IFN-γ ELISA；图17B，细胞内IFN-γ染色）。在图17A中，如所示，每种抗体的个别柱形代表不同浓度的抗体。在图17B中，上图显示CD4+细胞且下图显示CD8+细胞。用8B9（x轴）测量TIM3的水平。
图18显示了抗TIM-3抗体（即抗体13A3和3G4）在CHO-OKT3细胞存在的情况下促进从各种组织分离的TIL的IFN-γ分泌。
图19显示TIM-3抗体在活化的人T细胞上的抗TIM-3交叉阻断。
图20显示了抗TIM3单克隆抗体13A3、3G4、17C3和8B9与人TIM3结合所必需的氨基酸残基。信号序列和跨膜结构域标加下划线显示。
图21A-21B显示某些抗TIM3抗体阻断人TIM3和PS-脂质体之间的相互作用。图21A显示磷脂酰丝氨酸(PS)-hTIM3“串联”阻断测定的示意图。图21B显示如通过图21A中所示的PS-hTIM3“串联”阻断测定所测量的，通过某些抗TIM3抗体阻断hTIM3-Fc与PS-脂质体的结合。
图22显示各种抗TIM3抗体（例如TIM3.5、TIM3.4、TIM3.2、TIM3.9、9F6、TIM3.8和TIM3.6）的功能活性的概述。提供了结合测定、T细胞测定、TIL测定和PS-TIM3阻断测定的数据。
图23提供所有SEQ ID编号连同由SEQ ID编号表示的序列的描述的列表。
图24A-24B显示在CT26结肠直肠肿瘤小鼠模型中组合施用抗PD1和抗TIM3抗体的抗肿瘤活性。图24A显示在用（i）对照IgG（左上图）、（ii）单独RMT3-23抗TIM3抗体（右上图）、（iii）单独RMP1-14抗PD1抗体（左下图）和（iv）RMT3-23抗TIM3和RMP1-14抗PD1抗体的组合（右下图）处理的小鼠（n = 10/组）中肿瘤植入后不同时间点的肿瘤体积。图24B显示用（i）单独RMT3-23抗TIM3抗体、（ii）单独的AbM抗TIM3抗体、（iii）单独RMP1-14抗PD1抗体、（iv）RMT3-23抗TIM3和RMP1-14抗PD1抗体的组合、（v）Ab M抗TIM3和RMP1-14抗PD1抗体的组合和（vi）同种型对照抗体处理的小鼠中随时间（肿瘤植入后天数）的平均肿瘤体积。
图25显示了使用氢/氘交换质谱（HDX-MS）用于作图抗TIM3抗体（13A3和3G4）的表位的hTIM-3的常见肽列表。每个柱表示消化的肽。带圆圈的残基（即N99、T145和N172）表示糖基化位点。
图26显示使用HDX-MX鉴定的抗TIM3抗体（13A3和3G4）的人TIM-3结合区。上图显示13A3抗TIM3抗体的结合区。下图显示3G4抗TIM3抗体的结合区。
图27A-27B显示TIM3.18.IgG1.3对异位表达人或食蟹猴TIM3的CHO细胞的Scatchard分析结果。图27A显示125I-TIM3 Ab标准曲线。图27B显示与表达人（左图）和食蟹猴（右图）TIM3的CHO细胞结合的TIM3.18.IgG1.3抗体的量。
图28显示TIM3.18.IgG1.3对来自两个供体（左图和右图）的活化的Th1细胞的Scatchard分析的结果。
图29A和29B显示在极化的Th1/经照射的CHO-OKT3共培养测定中TIM3.18.IgG1.3和TIM3.18.IgG1.3 Fab增强Th1 T细胞的增殖。 图29A显示用各种浓度的TIM3.18.IgG1.3、13A3（“13A3-g4”）或没有抗体或用同种型对照抗体（hIgG1.1和hIgG4）观察到的Th1细胞增殖。 图29B显示用各种浓度的TIM3.18.IgG1.3 Fab或没有抗体或用同种型对照抗体IgG1.3观察到的Th1细胞增殖。
图30显示在极化的Th1/经照射的CHO-OKT3-PD-L1共培养测定中抗-TIM3抗体TIM3.18.IgG1.3与纳武单抗的组合增强Th1 T细胞的增殖。
图31显示抗TIM3抗体TIM3.18.IgG1.3增强用经照射的CHO-OKT3细胞刺激的肾细胞癌肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的干扰素-γ分泌。
图32显示抗TIM3抗体TIM3.18.IgG1.3增强用经照射的CHO-OKT3细胞刺激的乳腺癌TIL的干扰素-γ分泌。
图33显示用于AlloMLR（混合淋巴细胞反应）测定的M0巨噬细胞上的CD163、CD206和TIM3表达，其结果显示于图34中。
图34显示在存在抗TIM3抗体TIM3.18.IgG1.3、同种型对照或不存在抗体的情况下进行的AlloMLR测定中细胞的增殖。
图35是如通过结晶学测定的TIM3:TIM3.18 Fab复合物的结构的带状图。Fab片段以浅灰色显示，且TIM3以深灰色显示。
图36显示如通过结晶学测定的TIM3:TIM3.18 Fab复合物的结构。Fab片段显示为带状图。 TIM3显示为白色表面表示，其中Fab接触残基以深灰色描绘。
图37是用于测量通过抗TIM3抗体的潜在内化的测定的图。
图38显示抗TIM3抗体13A3（左下图）及其某些变体（D101E-左上图；N60Q-右上图）不触发受体（即TIM3）介导的内化。
图39A和39B显示描绘抗TIM3抗体13A3 (图39A)和3G4 (图39B)的表位的带状图。在带状图下方提供每种抗体的表位的氨基酸序列。不同的模式鉴定对应于特定表位的抗TIM3抗体的特定区域。
公开详述
为了本说明书可以更容易理解，首先定义某些术语。另外的定义在整个详述中阐述。
应注意，术语“一个/种(a或an)”实体是指该实体的一个/种或多个/种；例如，“核苷酸序列”应理解为代表一个或多个核苷酸序列。因此，术语“一个/种”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”在本文中可以互换使用。
此外，本文使用的“和/或”被视为具有或不具有另一者的两个指定特征或组件中的每一者的具体公开。因此，本文中短语诸如“A和/或B”中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”（单独）和“B”（单独）。同样地，短语诸如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面的每一者：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A（单独）；B（单独）；和C（单独）。
应当理解，无论何处在本文中用语言“包含/包括”描述方面，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似方面。
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所涉及领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology, Juo, Pei-Show, 第2版, 2002, CRC Press；The Dictionary ofCell and Molecular Biology, 第3版, 1999, Academic Press；和Oxford DictionaryOf Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press为本领域技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用字典。
单位、前缀和符号以其Système International de Unites (SI)接受的形式表示。数值范围包括定义范围的数字。除非另有说明，核苷酸序列以5'至3'取向从左到右书写。氨基酸序列以从氨基到羧基取向从左到右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个方面案的限制，其可作为整体参考说明书而具有。因此，紧靠在下面定义的术语通过参考整个说明书更完整地定义。
术语“约”在本文中用于表示大约、大致、左右或在其区域中。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过扩大在所列数值之上和之下的边界来修饰该范围。一般而言，术语“约”可以以向上或向下(高出或低于)例如10％的差异在所述值之上和之下修饰数值。
本文所用的术语“含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3”或“TIM3”是指作为蛋白的T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域（TIM）家族的成员的受体。TIM3的主要配体包括磷脂酰丝氨酸（TIM3-L）。TIM3也称为甲型肝炎病毒细胞受体2（HAVCR2）、T细胞免疫球蛋白黏蛋白受体3、TIM-3、TIMD3、TIMD-3、肾损伤分子-3、KIM-3和CD366。术语“TIM3”包括由细胞天然表达的TIM3的任何变体或同工型。因此，本文所述的抗体可以与来自除人以外的物种的TIM3（例如，食蟹猴TIM3）交叉反应。可选地，抗体可以是人TIM3特异性的，并且不表现出与其他物种的任何交叉反应性。TIM3或其任何变体和同工型可以从天然表达它们的细胞或组织中分离，或者使用本领域熟知的技术和/或本文所述的那些技术重组产生。
已经鉴定出人TIM3的两种同工型。同工型1（登录号NP_116171；SEQ ID NO: 286）由301个氨基酸组成并代表规范序列。同工型2（登录号AAH20843；SEQ ID NO: 287）由142个氨基酸组成，并且是可溶的。它缺少氨基酸残基143-301，其编码TIM3的跨膜结构域、细胞质结构域和胞外结构域的一部分。氨基酸残基132-142也不同于上述的规范序列。
以下是两种已知的人TIM3同工型的氨基酸序列。
（A）人TIM3同工型1（登录号NP_116171；SEQ ID NO: 286；由具有登录号NM_032782.4的核苷酸序列编码；SEQ ID NO: 288；图20）：
（B）人TIM3同工型2（登录号AAH20843；SEQ ID NO: 287；由具有登录号BC020843.1的核苷酸序列编码；SEQ ID NO: 289）:
。
同工型1和2的信号序列对应于氨基酸1-21（下划线）。因此，成熟同工型1和2分别由氨基酸22-301或22-142组成。成熟人TIM3的胞外结构域由SEQ ID NO: 286的氨基酸22-202组成，并具有以下氨基酸序列：
。
食蟹猴TIM3蛋白由以下氨基酸序列（包括信号序列）组成：
。
在一个实施方案中，术语“抗体”是指包含通过二硫键相互连接的至少两条重（H）链和两条轻（L）链的蛋白。每条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)构成。在某些抗体中，例如天然存在的IgG抗体，重链恒定区由铰链和三个结构域CH1、CH2和CH3构成。在某些抗体中，例如天然存在的IgG抗体，每条轻链由轻链可变区（本文中缩写为VL）和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域（本文中缩写为CL）构成。VH和VL区可进一步细分成超变区(称为互补决定区(CDR))，其散布有更保守的区(称为框架区(FR))。每一VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基端向羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。所述抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q))的结合。重链可以具有C-末端赖氨酸或不具有C-末端赖氨酸。除非本文另有说明，否则可变区中的氨基酸使用Kabat编号系统编号，而恒定区中的氨基酸使用EU系统编号。
在某些实施方案中，如本文所用的“IgG抗体”例如人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4抗体，具有天然存在的IgG抗体的结构，即其具有与相同亚类的天然存在的IgG抗体相同数量的重链和轻链和二硫键。例如，抗TIM3 IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体由两条重链（HC）和两条轻链（LC）组成，其中两条重链和轻链通过相同数量和位置的二硫键连接，所述二硫键分别存在于在天然存在的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4抗体中（除非已经突变抗体以修饰二硫键）。
抗体通常以高亲和力（通过10-5-10-11 M或更低的解离常数(KD)来反映）特异性结合其同源抗原。任何大于约10-4 M的KD 通常被认为表明非特异性结合。如本文所用，“特异性结合”抗原的抗体是指以高亲和力（其意味着具有10-7 M或更低、10-8 M或更低、5×10-9 M或更低、或10-8M-10-10 M或更低的KD）结合抗原和实质上相同的抗原，但不以高度亲和力结合不相关的抗原的抗体。如果抗原展示出与给定抗原高度的序列同一性，例如，如果其展示出与给定抗原序列至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、或至少99的序列同一性，则所述抗原与给定抗原是"实质上相同的"。举例来说，在某些实施方案中，特异性结合人TIM3的抗体还可以具有与来自某些灵长类物种（例如食蟹猴TIM3）的TIM3抗原的交叉反应性，但不能与来自其他物种的TIM3抗原或与TIM3以外的抗原交叉反应。
免疫球蛋白可以来自通常已知的同种型中的任一种，包括、但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG同种型在某些物种中分为亚类：人中的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及小鼠中的IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3。在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体是IgG1亚型。免疫球蛋白例如IgG1存在于几种同种异型中，它们在至多几个氨基酸中彼此不同。举例来说，“抗体”包括天然存在的抗体和非天然存在的抗体；单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人和非人抗体和完全合成的抗体。
如本文使用的，术语抗体的“抗原结合部分”指保留与抗原（例如人TIM3）特异性结合的能力的抗体的一个或多个片段。已显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。包含在术语抗体（例如本文所述的抗TIM3抗体）的“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括（i）Fab片段（来自木瓜蛋白酶切割的片段）或由VL、VH、LC和CH1结构域组成的类似的单价片段；（ii）F(ab')2片段（来自胃蛋白酶切割的片段）或包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的类似的二价片段；（iii）由VH 和CH1结构域组成的Fd片段；（iv）由抗体单臂的VL 和VH 结构域组成的Fv片段，（v）dAb片段(Ward等人, (1989) Nature 341:544-546)，其由VH 结构域组成；（vi）分离的互补决定区（CDR）和（vii）可任选地由合成接头连接的两个或多个分离的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL 和VH由不同的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头连接，所述合成接头使它们能够作为其中VL 和VH 区配对以形成单价分子的单个蛋白链形成（称为单链Fv（scFv）；参见例如Bird等人(1988) Science 242:423-426；和Huston等人(1988) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。此种单链抗体也意欲包含在术语抗体的"抗原结合部分"内。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合部分可通过重组DNA技术、或通过完整的免疫球蛋白的酶或化学切割得到。
“双特异性抗体”或“双功能抗体”是具有两个不同重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂合抗体。双特异性抗体可以通过多种方法产生，所述方法包括杂交瘤的融合或Fab'片段的连接。参见例如Songsivilai & Lachmann, Clin.Exp.Immunol.79:315-321(1990)；Kostelny等人, J. Immunol.148, 1547-1553 (1992)。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指来自实质上同质的抗体群体的抗体，即除了在单克隆抗体的产生过程中可能出现的可能变体（这种变体通常以少量存在）之外，群体中包含的各个抗体实质上相似并且结合相同的表位（例如，抗体展示单一结合特异性和亲和力）。修饰词“单克隆”指示抗体的特征为从实质上均质抗体群体获得的，而不应被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。术语“人单克隆抗体”是指来自实质上同质的抗体群体的抗体，所述实质上同质的抗体展示单一结合特异性并且具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变和任选恒定区。在一个实施方案中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括融合到永生化细胞的获自转基因非人动物例如转基因小鼠（其具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组）的B细胞。
如本文所用的术语“重组人抗体”包括通过重组方式制备、表达、制造或分离的所有人抗体，如(a) 从对人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物（例如小鼠）或由其产生的杂交瘤中分离的抗体，(b) 从转化以表达抗体的宿主细胞中，例如从转染瘤中分离的抗体，(c) 从重组的组合人抗体库中分离的抗体，和(d) 通过涉及人免疫球蛋白基因序列拼接至其它DNA序列的任何其它手段制备、表达、制造或分离的抗体。此类重组人抗体包含可变区和恒定区，其利用由种系基因编码的特定人种系免疫球蛋白序列，但包括例如在抗体成熟过程中发生的随后的重排和突变。如本领域所知（参见，例如Lonberg (2005) Nature Biotech.23(9): 1117- 1125)，可变区含有抗原结合结构域，其由重排以形成对外源抗原特异性的抗体的多种基因编码。除了重排之外，可以通过多个单个氨基酸改变（称为体细胞突变或超突变）进一步修饰可变区，以增加抗体对外源抗原的亲和力。恒定区将在对抗原的进一步应答中变化（即同种型转换）。因此，编码对抗原应答的轻链和重链免疫球蛋白多肽的重排的和体细胞突变的核酸分子不能与原始核酸分子具有序列同一性，而是基本上相同或相似（即，至少具有80％同一性）。
"人"抗体（HuMAb）指具有其中框架区和CDR区域均来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区的抗体。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也来源于人种系免疫球蛋白序列。本文所述的抗TIM3抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基（例如，通过体外随机或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变）。然而，如本文所用，术语"人抗体"并不旨在包括这样的抗体，其中来源于另一哺乳动物物种诸如小鼠的种系的CDR序列已经连接至人框架序列上。术语“人”抗体和“完全人”抗体同义使用。
"人源化"抗体指这样的抗体，所述抗体中一些、大部分或所有非人抗体的CDR结构域外面的氨基酸被来源于人免疫球蛋白的相应氨基酸所替代。在抗体的人源化形式的一个实施方案中，CDR结构域外部的一些、大部分或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸所替代，而一个或多个CDR区内的一些、大部分或所有氨基酸没有改变。氨基酸的小的添加、缺失、插入、取代或修改是容许的，只要它们没有消除抗体结合特定抗原的能力。"人源化"抗体保留与原始抗体类似的抗原特异性。
"嵌合抗体"指这样的抗体，其中可变区来源于一个物种且恒定区来源于另一物种，诸如其中可变区来源于小鼠抗体且恒定区来源于人抗体的抗体。
如本文所用，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别（例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgD和IgE抗体）。
“同种异型”是指特定同种型组内的天然存在的变体，所述变体在少数氨基酸中不同（参见， 例如，Jefferis等人(2009) mAbs 1:1)。本文所述的抗TIM3抗体可以是任何同种异型。如本文所用，称为“IgG1f”、“IgG1.1f”或“IgG1.3f”同种型的抗体分别是同种异型“f”的IgG1、无效应子IgG1.1和无效应子IgG1.3抗体，即，具有根据如在Kabat中的EU索引的214R、356E和358M，如例如SEQ ID NO: 3所示。
短语"识别抗原的抗体"和"对抗原特异性的抗体"在本文中与术语"特异性结合抗原的抗体"可互换使用。
如本文所用，“分离的抗体”意指基本上不含其他蛋白和细胞材料的抗体。
如本文所用，“抑制TIM3-L与TIM3结合”的抗体意指例如在本领域公认的方法（例如本文所述的基于FACS的结合测定）中在使用用人TIM3转染的CHO细胞或表达TIM3的活化T细胞的结合测定中抑制TIM3与其配体（例如磷脂酰丝氨酸）结合的抗体，其中EC50为约1 μg/mL或更低，诸如约0.9 μg/mL或更低、约0.85 μg/mL或更低、约0.8 μg/mL或更低、约0.75 μg/mL或更低、约0.7 μg/mL或更低、约0.65 μg/mL或更低、约0.6 μg/mL或更低、约0.55 μg/mL或更低、约0.5 μg/mL或更低、约0.45 μg/mL或更低、约0.4 μg/mL或更低、约0.35 μg/mL或更低、约0.3 μg/mL或更低、约0.25 μg/mL或更低、约0.2 μg/mL或更低、约0.15 μg/mL或更低、约0.1 μg/mL或更低或约0.05 µg/mL或更低。
“效应子功能”是指抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用，或由此产生的生物化学事件。示例性的“效应子功能”包括C1q结合、补体依赖性细胞毒性（CDC）、Fc受体结合、FcγR介导的效应子功能例如ADCC和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用（ADCP）、以及细胞表面受体（例如B细胞受体；BCR）的下调。此类效应子功能通常需要Fc区与结合结构域（例如，抗体可变结构域）组合。
“Fc受体”或“FcR”是结合免疫球蛋白的Fc区的受体。结合IgG抗体的FcR包含FcγR家族的受体，包括这些受体的等位基因变体和可变剪切形式。FcγR家族由三个活化性(小鼠中的FcγRI、FcγRIII和FcγRIV；人中的FcγRIA、FcγRIIA和FcγRIIIA)和一个抑制性(FcγRIIB)受体组成。人FcγR的各种性质是本领域已知的。大部分先天效应子细胞类型共表达一种或多种活化性FcγR和抑制性FcγRIIB，而天然杀伤（NK）细胞选择性表达一种活化性Fc受体（小鼠中的FcγRIII和人中的FcγRIIIA）但不表达小鼠和人中的抑制性FcγRIIB。人IgG1结合大部分人Fc受体并且认为在活化其结合的Fc受体的类型方面等同于鼠IgG2a。
“Fc区”（片段可结晶区域）或“Fc结构域”或“Fc”指抗体的重链的C末端区域，其介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括结合位于免疫系统的各种细胞（例如效应细胞）上的Fc受体或结合经典补体系统的第一组分（Clq）。因此，Fc区包含排除第一恒定区免疫球蛋白结构域（例如CH1或CL）的抗体的恒定区。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区包含来源于抗体的两条重链的第二（CH2）和第三（CH3）恒定结构域的两个相同的蛋白片段；IgM和IgE Fc区包含各多肽链中的三个重链恒定结构域(CH结构域2-4)。对于IgG，Fc区包含免疫球蛋白结构域CH2和CH3以及CH1和CH2结构域之间的铰链。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界的限定可以改变，如本文所限定，但人IgG重链Fc区定义为从氨基酸残基D221（对于IgG1）、V222（对于IgG2）、L221（对于IgG3）和P224（对于IgG4）至重链的羧基末端的片段(strech)，其中编号根据Kabat中的EU索引。人IgG2 Fc区的CH2 结构域从氨基酸237延伸至氨基酸340，且CH3 结构域位于Fc区的CH2结构域的C末端侧，即，其从IgG的氨基酸341延伸至氨基酸447或446（如果不存在C末端赖氨酸残基）或445（如果不存在C末端甘氨酸和赖氨酸残基）。如本文所用，Fc区可以为天然序列Fc，包括任何同种异型变体，或变体Fc（例如非天然存在的Fc）。Fc也可以孤立地或在含Fc蛋白多肽诸如“包含Fc区的结合蛋白”也称为“Fc融合蛋白”（例如抗体或免疫黏附素）的背景下指这一区域。
“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列一致的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区，以及其天然存在的变体。天然序列Fc包括Fc的各种同种异型（参见例如Jefferis等人 (2009) mAbs 1: 1）。
术语“表位”或“抗原决定簇”指免疫球蛋白或抗体特异性与之结合的抗原（例如TIM3）上的位点，例如，如通过用于鉴定其的具体方法所限定的。表位可以从连续的氨基酸（通常为线性表位）或通过蛋白的三级折叠而并列的不连续氨基酸（通常为构象表位）形成。由连续的氨基酸形成的表位通常（但并非总是如此）在暴露于变性溶剂得以保留，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丧失。表位通常包括独特空间构象中的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。用于确定给定抗体所结合的何种表位的方法（即表位作图）是本领域众所周知的，并且包括例如免疫印迹和免疫沉淀测定，其中测试来自（例如来自TIM3）的重叠或连续肽与给定抗体（例如抗TIM3抗体）的反应性。确定表位的空间构象的方法包括本领域的技术和本文所述的那些技术，例如，X射线晶体学、抗原突变分析、二维核磁共振和HDX-MS (参见例如Epitope Mapping Protocols in Methods inMolecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, 编辑(1996))。
术语“表位作图”指鉴定抗体-抗原识别的分子决定簇的方法。
关于两种或多种抗体的术语“结合相同表位”意指抗体结合氨基酸残基的相同区段，如通过给定方法所测定的。用于确定抗体是否与本文所述抗体结合“TIM3上相同的表位”的技术包括例如表位作图方法，诸如，抗原：抗体复合物的晶体的x射线分析，其提供表位的原子分辨率，和氢/氘交换质谱法（HDX-MS）。其他方法监测抗体与抗原片段或抗原的突变变化形式的结合，其中由于抗原序列内氨基酸残基改变导致的结合丧失通常被认为是表示表位组分。此外，还可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于目标抗体亲和力分离来自组合噬菌体展示肽文库的特异性短肽的能力。预期具有相同的VH和VL或相同的CDR1、2和3序列的抗体结合相同的表位。
“与另一抗体竞争结合靶标”的抗体指（部分或完全）抑制其他抗体与靶标结合的抗体。两种抗体是否彼此竞争结合靶标，即一种抗体是否抑制另一抗体结合靶标且至何种程度，可以使用已知的竞争实验（例如BIACORE®表面等离子共振(SPR)分析）来测定。在某些实施方案中，抗体与另一抗体竞争结合靶标并和抑制另一抗体结合靶标至少50%、60%、70%、80%、90%或100%。抑制或竞争的水平可以取决于何种抗体是“阻断抗体”（即，首先与靶标孵育的冷抗体(cold antibody)）而不同。竞争测定可以如例如以下中所述进行：Ed Harlow和David Lane, Cold Spring Harb Protoc ；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277或由EdHarlow和David Lane的"Using Antibodies" Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, NY, USA 1999的第11章。如果两种抗体以两种方式彼此阻断至少50%（即，无论是否一种或另一种抗体在竞争实验中首先与抗原接触），则两种抗体“交叉竞争”。
用于测定两种抗体是否竞争或交叉竞争结合的竞争结合测定包括：竞争结合表达TIM3的T细胞，例如通过流式细胞术，诸如实施例中所述的。其他方法包括：SPR (例如BIACORE®)、固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人, Methods in Enzymology 9:242 (1983))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA (参见Kirkland等人, J. Immunol.137:3614 (1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定 (参见Harlow和Lane, Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press (1988))；使用1-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel等人, Mol.Immunol.25(1):7 (1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA (Cheung等人,Virology 176:546 (1990))；和直接标记RIA(Moldenhauer等人, Scand.J. Immunol.32:77 (1990))。
如本文所用，术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”指抗体结合预定抗原上的表位。通常，抗体（i）以约小于10-7 M、诸如约小于10 -8 M、10-9M或10-10 M或甚至更低的平衡解离常数(KD)结合，当通过例如表面等离子共振（SPR）技术在BIACORE® 2000仪器中使用预定抗原（例如重组人TIM3）作为分析物和抗体作为配体、或抗体结合抗原阳性细胞的Scatchard分析所测定时，和（ii）以是其对预定抗原或密切相关抗原之外的非特异性抗原（例如BSA、酪蛋白）结合的亲和力的至少两倍的亲和力结合预定抗原。因此，“特异性结合人TIM3”的抗体指以10-7 M或更低，诸如约小于10-8 M、10-9 M或10-10M或甚至更低的KD结合可溶性或细胞结合的人TIM3的抗体。“与食蟹猴TIM3交叉反应”的抗体指以10-7 M或更低，诸如约小于10--8 M、10-9 M或10-10 M或甚至更低的KD结合食蟹猴TIM3的抗体。在某些实施方案中，不与来自非人物种的TIM3交叉反应的此类抗体在标准结合测定中展示出针对这些蛋白基本上无法检测的结合。
如本文所用，术语“kassoc”或“ka”意指特定抗体-抗原相互作用的结合速率，而如本文所用的术语“kdis”或“kd,”意指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所用，术语“KD”意指解离常数，其获自kd比ka (即，kd/ka)的比率并且表示为摩尔浓度(M)。抗体的KD值可以使用本领域充分建立的方法来确定。测定抗体的KD 的可用方法包括表面等离子共振、生物传感器系统诸如BIACORE®系统或流式细胞术和Scatchard分析。
如本文所用，术语IgG抗体的“高亲和力”指抗体对于靶抗原的KD 为10-8 M或更低、10-9 M或更低、或10-10 M或更低。然而，对于其他抗体同种型而言，“高亲和力”结合可以改变。例如，IgM同种型的“高亲和力”结合指抗体具有的KD 为10-10 M或更低或10-8 M或更低。
在使用抗体或其抗原结合片段的体外或体内测定的上下文中的术语“EC50”指诱导为50%最大应答的应答（即，最大应答和基线之间的一半）的抗体或其抗原结合部分的浓度。
术语“天然存在的”如本文所用应用于主体来指主体在自然界中可发现的事实。例如，存在于可以从自然界的来源中分离的生物（包括病毒）中且尚未在实验室中由人有目的地改变的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
“多肽”指包含至少两个连续连接的氨基酸残基的链，其对于链长度没有上限。蛋白中的一个或多个氨基酸残基可以含有修饰诸如但不限于糖基化、磷酸化或二硫键形成。“蛋白”可以包含一种或多种多肽。
如本文所用的术语“核酸分子”旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链的或双链的，并且可以是cDNA。
“保守氨基酸取代”指氨基酸被具有相似侧链的氨基酸残基所取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域定义。这些家族包括具有碱性侧链（例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸）、酸性侧链（例如，天冬氨酸、谷氨酸）、不带电荷的极性侧链（例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸）、非极性侧链（例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸）、β分支侧链（例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸）和芳香族侧链（例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸）的氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体中预测的非必需氨基酸残基被来自相同侧链家族的另一种氨基酸残基替代。鉴定不会消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域众所周知的(参见例如，Brummell等人, Biochem.32:1180-1187 (1993)；Kobayashi等人Protein Eng. 12(10):879-884 (1999)；和Burks等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417 (1997))。
对于核苷酸，术语“实质上同源性”表示当最优比对和比较时，两个核酸或其指定序列在至少约80%的核苷酸，至少约90%至95%、或至少约98%至99.5%的核苷酸上是相同的，且具有合适的核苷酸插入或缺失。可选地，当区段在选择性杂交条件下将与链的互补体杂交时，存在实质上同源性。
对于多肽，术语“实质上同源性”表示当最优比对和比较时，两个多肽或其指定序列在至少约80%的氨基酸，至少约90%至95%、或至少约98%至99.5%的氨基酸上是相同的，且具有合适的氨基酸插入或缺失。
两条序列之间的百分比同一性是序列共有的相同位置的数目的函数（即，% 同一性 = 相同位置的#/位置的总# x 100），并考虑缺口的数目和每一缺口的长度，其需要被引入到两条序列的最优比对中。序列比较和两条序列之间的百分比同一性的确定可以使用数学算法完成，如在下文的非限制性实例中所述。
两条核苷酸序列之间的百分比同一性可以使用GCG软件包（可获自worldwideweb.gcg.com）中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的缺口权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定。两条核苷酸或氨基酸序列之间的百分比同一性还可以使用E. Meyers和W. Miller (CABIOS, 4: 11-17 (1989))的算法来确定，所述算法已并入ALIGN程序（2.0版）中，其使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分为12且缺口罚分为4。此外，两条氨基酸序列之间的百分比同一性可以使用Needleman和Wunsch (J. Mol.Biol.(48):444-453 (1970))算法测定，所述算法已并入GCG软件包(可获自http://www.gcg.com)中的GAP程序，其使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，和16、14、12、10、8、6或4的缺口权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。
本文所述的核酸和蛋白序列可以进一步用作“询问序列”以进行针对公共数据库的检索以例如鉴定相关序列。此类序列可以使用以下的NBLAST和XBLAST程序（2.0版）来进行：Altschul等人(1990) J. Mol.Biol.215:403-10。BLAST核苷酸检索可以用NBLAST程序、评分=100、字长=12来进行以获得与本文所述的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白检索可以用XBLAST程序、评分=50、字长=3来进行以获得与本文所述的蛋白分子同源的氨基酸序列。为了获得比较目的的有缺口的比对，可以利用Gapped BLAST，如Altschul等人,(1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402所述。当利用BLAST和Gapped BLAST程序时，各程序(例如XBLAST和NBLAST)的缺省参数可以使用。参见worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov。
核酸可以存在于完整细胞中、细胞裂解物中、或部分纯化或实质上纯化形式中。当通过标准技术包括碱性/SDS处理、CsCl条带、柱层析、琼脂糖凝胶电泳和本领域中公知的其他技术将核酸从其他细胞组分或其他污染物例如其他细胞核酸（例如，染色体的其他部分）或蛋白中纯化时，所述核酸“被分离”或使所述核酸“实质上纯的”。参见F. Ausubel等人,编辑 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and WileyInterscience, New York (1987)。
核酸例如cDNA可以根据标准技术进行突变以提供基因序列。对于编码序列，这些突变可能如期望的影响氨基酸序列。具体而言，考虑与本文所述的天然V、D、J、恒定、转换和其他此类序列实质上同源或衍生于其的DNA序列（其中“衍生”表示序列与另一序列相同或从其改变）。
如本文所用，术语“载体”旨在指能够转运与其连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其指另外的核酸区段可以连入其中的环状双链的DNA环。另一类型的载体是病毒载体，其中额外的DNA区段可以连接入病毒基因组中。某些载体可以在它们导入其中的宿主细胞中自主复制（例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体）。其他载体（例如，非附加型哺乳动物载体）在引入宿主细胞中时可以整合入宿主细胞的基因组中，并由此随宿主基因组进行复制。此外，某些载体能够指导与其可操作连接的基因的表达。此类载体在本文称为“重组表达载体”（或简单地，“表达载体”）。通常，重组DNA技术中采用的表达载体通常呈质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，还包括其他形式的表达载体，诸如病毒载体（例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒），其起同样的功能。
如本文所用，术语“重组宿主细胞”（或简单地“宿主细胞”）旨在指包含天然不存在于细胞中的核酸的细胞，并且可以是重组表达载体已引入其中的细胞。应理解此类术语旨在不仅指具体的主体细胞还指此类细胞的后代。因为由于突变或环境影响，某些修饰可以在后代中发生，此类后代实际上可能与母细胞不相同，但仍包括在如本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。
“免疫应答”如本领域所理解的，且通常指脊椎动物中针对外源物(foreignagent)或异常细胞例如癌细胞的生物应答，所述应答保护生物体免于这些物质和由其引起的疾病。免疫应答由免疫系统的一种或多种细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、天然杀伤（NK）细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞或嗜中性粒细胞)和由任何这些细胞或肝脏产生的可溶性大分子（包括抗体、细胞因子和补体）的作用介导，其导致从脊椎动物机体选择性靶向、结合、损伤、破坏和/或消除入侵病原体、细胞或感染有病原体的组织、癌性或其他异常细胞、或者（在自身免疫或病理性炎症的情况下）正常人细胞或组织。免疫反应包括例如活化或抑制T细胞，例如效应T细胞、Th细胞、CD4+细胞、CD8+细胞或Treg细胞，或活化或抑制免疫系统的任何其他细胞例如NK细胞。
“免疫调节剂(immunomodulator)”或“免疫调节剂(immunoregulator)”指这样的药剂，例如靶向可以参与调节、调控或修饰免疫应答的信号传导途径的组分的药剂。“调节”、“调控”或“修饰”免疫应答指免疫系统的细胞中的任何改变或此类细胞（例如效应T细胞，诸如Th1细胞）的活性中的任何改变。此类调节包括刺激或抑制免疫系统，其可以显示为各种细胞类型的数目中的增加或降低、这些细胞活性中的增加或降低、或可以在免疫系统内发生的任何其他改变。抑制性和刺激性免疫调节剂两者均已被鉴定，其中的一些可以在肿瘤微环境中具有增强的功能。在一些实施方案中，免疫调节剂靶向T细胞的表面上的分子。“免疫调节靶标(immunomodulatory target)”或“免疫调节靶标(immunoregulatorytarget)”是这样的分子，例如细胞表面分子，其靶向被物质、试剂、部分、化合物或分子所结合并且其活性受所述物质、试剂、部分、化合物或分子的结合而改变。免疫调节靶标包括例如细胞表面上的受体（“免疫调节受体”）和受体配体（“免疫调节配体”）。
“免疫疗法”指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式改变免疫系统或免疫应答的方法治疗患有疾病或者处于感染疾病或经受疾病复发的风险中的主体。
“免疫刺激疗法(Immuno stimulating therapy)”或“免疫刺激疗法(immunostimulatory therapy)”指导致主体中免疫应答增加（诱导或增强）用于例如治疗癌症的疗法。
“加强内源性免疫应答”意指增加主体中现有免疫应答的效力或效能。效力或效能中的这种增加可以例如通过克服抑制内源性宿主免疫应答的机制或通过刺激增强内源性宿主免疫应答的机制来实现。
“T效应”(“Teff”)细胞指具有细胞溶解活性的T细胞(例如CD4+和CD8+ T细胞)以及T辅助（Th）细胞，例如Th1细胞（所述细胞分泌细胞因子并活化和引导其他免疫细胞），但不包括调节性T细胞(Treg细胞)。本文所述的某些抗TIM3抗体活化Teff细胞，例如CD4+和CD8+Teff细胞和Th1细胞。
刺激免疫应答或免疫系统的增加的能力可以产生自T细胞共刺激受体的增强的激动剂活性和/或抑制受体的增强的拮抗剂活性。刺激免疫应答或免疫系统的增加的能力可以通过测量免疫应答的测定中EC50 的倍数增加或活性的最大水平来反映，所述测定例如测量细胞因子或趋化因子释放、细胞毒性活性（对靶细胞直接测定或经检测CD107a或颗粒酶间接测定）和增殖中的改变的测定。刺激免疫应答或免疫系统活性的能力可以增强至少10%、30%、50%、75%、2倍、3倍、5倍或更多。
如本文所用，术语“连接的”指两个或多个分子的缔合。连接可以是共价的或非共价的。连接也可以是基因的（即重组融合的）。此类连接可以使用各种各样的本领域公认技术诸如化学缀合和重组蛋白产生来实现。
如本文所用，“施用”指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统的任何向主体身体引入包含治疗剂的组合物。用于本文所述的抗TIM3抗体的不同施用途径包括静脉内、腹膜内、肌内、皮下、脊椎或其他肠胃外施用途径，例如，通过注射或输注。如本文所用的短语“肠胃外施用”意指除肠内和局部施用外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。可选地，本文所述的抗体可以经非肠胃外途径施用，诸如施用的局部、表皮或粘膜途径，例如，鼻内、经口、阴道、直肠、舌下或局部地。施用还可以例如一次、多次、和/或经一个或多个延长的周期来进行。
如本文所用，术语“T细胞介导的应答”指由T细胞介导的应答，包括效应T细胞(例如，CD8+ 细胞)和辅助T细胞(例如，CD4+细胞)。T细胞介导的应答包括例如T细胞细胞毒性和增殖。
如本文所用，术语“细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答”指由细胞毒性T细胞诱导的免疫应答。CTL应答主要由CD8+ T细胞介导。
如本文所用，术语“抑制”或“阻断”（例如，指抑制/阻断TIM3-L与细胞上的TIM3的结合）可互换使用，并且涵盖部分和完全抑制/阻断。在一些实施方案中，抗TIM3抗体抑制TIM3-L与TIM3的结合至少约50%，例如约60%、70%、80%、90%、95%、99%或100%，例如如本文进一步所述测定的。在一些实施方案中，抗TIM3抗体抑制TIM3-L与TIM3的结合不大于50%，例如约40%、30%、20%、10%、5%或1%，例如如本文进一步所述测定的。
如本文所用，短语“抑制肿瘤生长”包括肿瘤生长任何可测量的降低，例如，抑制肿瘤生长至少约10%，例如，至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约99%或100%。
如本文所用，“癌症”指特征在于体内异常细胞不受控的生长的疾病的宽范围的组。不受调节的细胞分裂导致形成恶性肿瘤或细胞，其侵入邻近组织并可以经淋巴系统或血流转移至身体的远端部分。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”指向主体进行的任何类型的干预或处理，或对主体施用活性药剂，目标在于逆转、减轻、改善、抑制、或减缓或防止与疾病相关的症状、并发症、病况或生物化学指标的进展、发生、加重或复发或增强总体存活率。治疗可以针对患有疾病的主体或不患有疾病的主体（例如用于预防）。
“血液恶性肿瘤”包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤以及脾脏和淋巴结的癌症。示例性淋巴瘤包括B细胞淋巴瘤（B细胞血液癌）和T细胞淋巴瘤。B细胞淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和大部分非霍奇金淋巴瘤。B细胞淋巴瘤的非限制性实例包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、小细胞淋巴细胞淋巴瘤（与慢性淋巴细胞白血病重叠）、套细胞淋巴瘤（MCL）、伯基特淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性积液淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿。T细胞淋巴瘤的非限制性实例包括淋巴结外T细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤和血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤。血液恶性肿瘤还包括白血病，例如但不限于继发性白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病和急性淋巴细胞白血病。血液恶性肿瘤还包括骨髓瘤，例如但不限于多发性骨髓瘤和冒烟型多发性骨髓瘤(smoldering multiple myeloma)。其他血液和/或B细胞或T细胞相关的癌症涵盖在术语血液恶性肿瘤中。
术语“有效剂量(dose)”或“有效剂量(dosage)”定义为足以实现或至少部分实现期望效果的量。药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是这样的药物的任何量，当单独或与另一治疗剂组合使用时，所述量促进由疾病症状严重度降低、无疾病症状的时期的频率和持续时间的增加、或防止由于疾病折磨的损伤或失能所证明的疾病消退。药物的治疗有效量或剂量包括“预防有效量”或“预防有效剂量”，其是药物的任何量，当单独或与另一治疗剂组合施用于处于发生疾病或患有疾病复发的主体时，所述量抑制疾病的发生或复发。治疗剂促进疾病消退或抑制疾病发生或复发的能力可以使用从业医师已知的多种方法来评价，诸如在临床试验过程中在人主体中，在预测在人中的效力的动物模型系统中，或通过测定体外测定中药剂的活性。
例如，抗癌剂是促进主体中癌症消退的药物。在一些实施方案中，治疗有效量的药物促进癌症消退至消除癌症的点。“促进癌症消退”意指单独或与抗肿瘤剂组合施用有效量的药物导致在患者中肿瘤生长或尺寸减少、肿瘤坏死、至少一种疾病症状严重性降低、无疾病症状时期的频率和持续时间增加、防止由于疾病折磨所致的伤残或残疾、或以其他方式改善疾病症状。此外，关于治疗的术语“有效的”和“有效性”包括药理有效性和生理安全性。药理有效性指药物促进患者中癌症消退的能力。生理安全性指由于施用药物导致的毒性水平、或其他细胞、器官和/或生物体水平的不利生理效应（不良作用）。
对于治疗肿瘤，例如，药物的治疗有效量或剂量相对于未治疗的主体抑制细胞生长或肿瘤生长至少约20%、至少约40%、至少约60%、或至少约80%。在一些实施方案中，药物的治疗有效量或剂量完全抑制细胞生长或肿瘤生长，即，抑制细胞生长或肿瘤生长100%。化合物抑制肿瘤生长的能力可以使用下文所述的测定来评估。可选地，组合物的这一特性可以通过检查化合物抑制细胞生长的能力来评估，此类抑制可以通过技术人员所知的测定体外测量。在本文所述的其他实施方案中，肿瘤消退可以被观察到并且可以持续至少约20天、至少约40天、或至少约60天的时期。
术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人和其他哺乳动物主体。
如本文所用，术语“主体”包括任何人或非人动物。例如，本文所述的方法和组合物可以用于治疗具有癌症的主体。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
如本文所提及的术语“基于重量的”剂量或给药意指施用于患者的剂量是基于患者的体重来计算的。例如，当具有60 kg体重的患者需要3 mg/kg的抗TIM3抗体时，可以计算并使用合适量的抗TIM3抗体（即180 mg）用于施用。
关于本公开的方法的术语“固定剂量”的使用意指单一组合物中的两种或多种抗体（例如，抗TIM3抗体和第二抗体，例如PD-1或PD-L1抗体）以相对彼此特定（固定）的比例存在于组合物中。在一些实施方案中，固定剂量基于抗体的重量（例如mg）。在某些实施方案中，固定剂量基于抗体的浓度（例如mg/ml）。在一些实施方案中，两种抗体（例如抗TIM3和抗PD-1或抗PD-L1）的比例为至少约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:15、约1:20、约1:30、约1:40、约1:50、约1:60、约1:70、约1:80、约1:90、约1:100、约1:120、约1:140、约1:160、约1:180、约1:200、约200:1、约180:1、约160:1、约140:1、约120:1、约100:1、约90:1、约80:1、约70:1、约60:1、约50:1、约40:1、约30:1、约20:1、约15:1、约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1或约2:1 mg第一抗体（例如抗TIM3抗体）比mg第二抗体。例如，抗TIM3抗体与PD-1抗体（例如纳武单抗）的2:1比例可以意指小瓶或注射液可以包含约480 mg的抗TIM3抗体和240 mg的抗PD-1抗体，或者约2 mg/ml的抗TIM3抗体和1 mg/ml的抗PD-1抗体。
关于本文所述的方法和剂量的术语“统一剂量(flat dose)”意指向患者施用的而与患者的体重或体表面积（BSA）无关的剂量。因此，统一剂量不作为mg/kg剂量提供，而是作为药剂（例如抗TIM3抗体）的绝对量提供。例如，60 kg的人和100 kg的人将接受相同剂量的抗体（例如480 mg的抗TIM3抗体）。
如本文所用，术语“ug”和“uM”分别与“μg”和“μM”可互换使用。
本文所述的各个方面在以下子部分中进一步详述。
I.抗人TIM3抗体
本文描述了抗体例如完全人抗体，其特征在于特定的功能特征或特性。例如，抗体特异性结合人TIM3，且更特异地结合人TIM3的胞外结构域内的特定结构域（例如，功能结构域）。在一个具体实施方案中，抗体特异性结合TIM3上TIM3-L结合的位点。在某些实施方案中，抗体是拮抗剂抗体，即它们抑制(inhibit或suppress)TIM3对细胞（例如T细胞）的T细胞抑制活性。在某些实施方案中，抗TIM3抗体与来自一种或多种非人灵长类动物的TIM3（例如食蟹猴TIM3）交叉反应。在某些实施方案中，抗体特异性结合人TIM3的胞外区和食蟹猴TIM3的胞外区。在一个实施方案中，抗体以高亲和力结合人TIM3。
本文所述的抗TIM3抗体表现出以下功能特性的一种或多种：
（a）结合可溶性和/或膜结合的人TIM3；
（b）结合可溶性和/或膜结合的食蟹猴TIM3；
（c）诱导或刺激免疫应答；
（d）诱导或刺激T细胞活化，例如Th1细胞活化（如例如通过增强的细胞因子分泌和/或增殖所证明）；
（e）诱导或刺激T细胞增殖（例如， CD4+、CD8+ T细胞、Th1细胞或TIL），例如，在共培养测定中，如实施例中所述；
（f）诱导或刺激通过T细胞（例如Th1细胞或肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），例如来自人肾、肺、胰腺或乳腺癌肿瘤的TIL）的IFN-γ产生，如例如在实施例中所述的测定中所测定的；
（g）阻断或抑制人TIM3与PtdSer的结合，如例如在实施例中所述的测定中所测定的；
（h） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（i）结合人TIM3胞外结构域(i) CPVFECG (SEQ ID NO: 296)；(ii) RIQIPGIMND (SEQID NO: 298)；(iii) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；或(iv)WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)；
（j）与本文所述的结合TIM3的抗体（例如，13A3、3G4、17C3、17C8、9F6或TIM3.2至TIM3.18中的任一种）竞争或交叉阻断结合人TIM3，如例如在实施例中所述的测定中所测定的；
（k）结合人TIM3，但不结合具有以下氨基酸残基中的一个或多个的氨基酸取代的人TIM3：L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120，如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号；和
（l）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)；
（m）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112；和/或
（n）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如，如实施例中所述的。
在一些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体以高亲和力结合人TIM3，例如，KD 为10-7 M或更低、10-8 M或更低、10-9 M或更低、10-10 M或更低、10-11 M或更低、10-12 M或更低、10-12 M至10- 7 M、10-11 M至10-7 M、10-10 M至10-7 M、或10-9 M至10-7 M。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合可溶性人TIM3，如通过Biacore™所测定的(例如，如实施例中所述)，且KD为10-7 M或更低、10-8 M或更低、10-9 M (1 nM)或更低、10-10 M或更低、10-12 M至10-7 M、10-11 M至10-7 M、10-10 M至10-7 M、10-9 M至10-7 M或10-8 M至10-7 M。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合例如活化的人T细胞上结合的（例如，细胞膜结合的）人TIM3，例如如通过流式细胞术和Scatchard图所测定的，且KD 为10-7 M或更低、10-8 M或更低、10-9 M (1 nM)或更低、5x10-10 M或更低、10-10 M或更低、10-12 M至10-7 M、10-11 M至10-8 M、10-10 M至10-8 M、10-9 M至10-8 M、10-11 M至10-9 M或10-10 M至10-9 M。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合例如活化的人T细胞上结合的（例如，细胞膜结合的）人TIM3，例如如通过流式细胞术所测定的，且EC50为10 ug/mL或更低、5 ug/mL或更低、1 ug/mL或更低、0.9 ug/mL或更低、0.8 ug/mL或更低、0.7 ug/mL或更低、0.6 ug/mL或更低、0.5 ug/mL或更低、0.4 ug/mL或更低、0.3 ug/mL或更低、0.2ug/mL或更低、0.1 ug/mL或更低、0.05 ug/mL或更低或0.01 ug/mL或更低。在一些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合食蟹猴TIM3，且例如KD 为10-7 M或更低、10-8 M或更低、10-9M或更低、10-10 M或更低、10-11 M或更低、10-12 M或更低、10-12 M至10- 7 M、10-11 M至10-7 M、10-10 M至10-7 M、或10-9 M至10-7 M。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合可溶性食蟹猴TIM3，如通过Biacore™所测定的(例如，如实施例中所述)，且KD 为10-7 M或更低、10-8 M或更低、10-9 M (1 nM)或更低、10-10 M或更低、10-12 M至10-7 M、10-11 M至10-7 M、10-10 M至10-7 M、10-9 M至10-7 M或10-8 M至10-7 M。抗TIM3抗体可以结合膜结合的食蟹猴TIM3，且例如EC50为100nM或更低、10nM或更低、100nM至0.01nM、100nM至0.1nM、100nM至1nM、或10nM至1nM，例如通过流式细胞术所测量（例如，如实施例中所述的）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合例如活化的人T细胞上结合的（例如，细胞膜结合的）食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术和Scatchard图所测定的，且KD 为10-7 M或更低、10-8 M或更低、10-9 M (1 nM)或更低、5x10-10 M或更低、10-10 M或更低、10-12 M至10-7 M、10-11 M至10-8 M、10-10 M至10-8 M、10-9 M至10-8 M、10-11 M至10-9 M或10-10 M至10-9 M。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体例如通过活化例如肿瘤中的T细胞来刺激或增强免疫应答。例如，抗TIM3抗体可以活化或共刺激细胞，如例如通过增强的细胞因子（例如， IFN-γ）分泌和/或增强的增殖来证明，这可能是由TIM3介导的T细胞抑制活性的抑制引起的。在某些实施方案中，通过TIM3抗体的T细胞活化或共刺激在CD3刺激的存在下发生。在某些实施方案中，抗TIM3抗体增加IFN-γ分泌50％、100％（即2倍）、3倍、4倍、5倍或更多，任选最大直至10倍、30倍、100倍，如在原代人T细胞和/或表达人TIM3的T细胞（例如肿瘤浸润淋巴细胞（TIL））上所测量的。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体抑制磷脂酰丝氨酸与细胞例如CHO细胞或表达人TIM3的活化的T细胞上的人TIM3的结合，且例如EC50 为10μg/ml或更低、1μg/ml或更低、0.01μg/ml至10μg/ml、0.1μg/ml至10μg/ml、或0.1μg/ml至1μg/ml。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合人TIM3的细胞外部分（例如胞外区的Ig样结构域中）中的表位例如构象表位，即SEQ ID NO: 286的氨基酸22-202（图20）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合位于人TIM3胞外结构域（SEQ ID NO: 286）的氨基酸22-120或成熟人TIM3（SEQ ID NO: 290）的氨基酸1-99内的表位（参见实施例）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸58-64组成的区域或结合所述区域内的表位，所述区域对应于成熟人TIM3的氨基酸残基37-43(CPVFECG, SEQ IDNO: 296；参见图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸111-120组成的区域或结合所述区域内的表位，所述区域对应于成熟人TIM3的氨基酸残基90-99 (RIQIPGIMND, SEQ ID NO: 298；参见图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸58-64(CPVFECG, SEQ ID NO: 296)组成的区域或结合所述区域内的表位，并且结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸111-120(RIQIPGIMND, SEQ ID NO: 298；参见图20)组成的区域或结合所述区域内的表位。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸78-89组成的区域或结合所述区域内的表位，所述区域对应于成熟人TIM3的氨基酸残基57-83(WTSRYWLNGDFR, SEQ ID NO: 297；参见图20)。
在一个实施方案中，抗TIM3抗体结合与13A3的表位实质上相同的表位，即包含SEQID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、R111和D120中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20）。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、D104、R111、Q113和D120中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、R111和D120的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、D104、R111、Q113和D120的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与3G4的表位实质上相同的表位，即包含SEQID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G116和M118中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20）。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、D104、G116和M118中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G116和M118的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、D104、G116和M118的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与17C3的表位实质上相同的表位，即包含SEQID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64和G116中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20）。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、D104和G116中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64和G116的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、D104和G116的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与8B9的表位实质上相同的表位，即包含SEQID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87和R89中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20）。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87和R89中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与8B9的表位实质上相同的表位，即包含SEQID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87、R89和D104中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87和R89（图20）的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87和R89（图20）的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在一些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87、R89和D104（图20）的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体与包含本文所述的CDR或可变区（例如抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4和TIM3.2至TIM3.18的任一者的那些）的抗TIM3抗体竞争结合人TIM3（或抑制其结合人TIM3）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体抑制抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。在某些实施方案中，13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者抑制抗TIM3抗体与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。在某些实施方案中，抗TIM3抗体抑制13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％，并且13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者抑制抗TIM3抗体与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％（例如，在两个方向上竞争）。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体具有以下特征中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15种或全部：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如， Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120且任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如如实施例中所述的。
因此，展示出如根据本领域已知的和本文所述的方法所测定这些功能特性（例如，生物化学、免疫化学、细胞、生理学或其他生物学活性等）的一种或多种的抗体将被理解为在特定活性上相对于不存在抗体时观察到的（例如，或当存在无关特异性的对照抗体时）展示出统计学上显著的差异。在一些实施方案中，在给定测定中测量的参数（例如T细胞增殖、细胞因子产生）中抗TIM3抗体诱导的增加使得所测量的参数统计学上显著增加至少10％，例如至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%（即 2倍）、3倍、5倍或10倍，并且在某些实施方案中，相对于在不存在本文所述的抗体的情况下进行的相同测定，所述抗体可以增加测量的参数，例如大于92%、94%、95%、97%、98%、99%、100%（即2倍）、3倍、5倍或10倍。相反，在给定测定中测量的参数（例如肿瘤体积、与人TIM3的TIM3-L结合）中抗TIM3抗体诱导的降低使得所测量的参数统计学上显著降低至少10％，例如至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，并且在某些实施方案中，相对于在不存在本文所述的抗体的情况下进行的相同测定，所述抗体可以降低测量的参数，例如大于92%、94%、95%、97%、98%或99%。
评估抗体对各种物种的TIM3的结合能力的标准测定是本领域已知的，包括例如ELISA、蛋白质印迹和RIA。在实施例中详细描述了合适的测定。抗体的结合动力学（例如，结合亲和力）也可以通过本领域已知的标准测定来评估，例如通过Biacore分析。在下文和实施例中进一步详细描述了评估抗体对TIM3的功能特性（例如，配体结合、T细胞增殖、细胞因子产生）的影响的测定。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体不是天然抗体或不是天然存在的抗体。例如，抗TIM3抗体具有与天然存在的抗体的那些不同的翻译后修饰，例如具有更多、更少或不同类型的翻译后修饰。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体不具有激动剂活性，如例如在CHO-OKT3-CD32:T细胞共培养实验中抗TIM3抗体的交联中所测定的，其中此类抗体不增强活性超出单独的抗TIM3。 在某些实施方案中，抗TIM3抗体阻断TIM3与其配体的相互作用而不促进激动剂活性。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体增强用LPS处理的单核细胞或树突细胞的IL-12产生。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体通过组合治疗复活共表达PD-1和TIM3的肿瘤浸润性CD8 + T细胞，因此避免CD8+ T细胞的耗尽。
II. 示例性抗TIM3抗体
本文所述的具体抗TIM3抗体是如本文所述分离和结构表征的抗体，例如单克隆抗体、重组抗体和/或人抗体，所述抗体具有抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一种的CDR和/或可变区序列，以及与其可变区或CDR序列具有至少80％同一性（例如，至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性）的抗体。13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的VH氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO：34-40。13A3、8B9和9F6的突变形式的VH氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 112-121和364。13A3、17C3和3G4的VL氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 60。8B9、8C4和17C8的VL氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 61。9F6的VL氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 61、62和63。13A3、8B9和9F6的突变形式的VL氨基酸序列是相应的未突变抗体的VL氨基酸序列。图13中提供了SEQ ID NO的身份概述。
因此，本文提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链可变区，其中重链可变区包含选自SEQ ID NO: 34-40、112-121和364的氨基酸序列。
还提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链可变区，其中轻链可变区包含选自SEQ ID NO: 60-63的氨基酸序列。
本文提供分离的抗人TIM3抗体或其抗原结合部分，其包含：
（a）分别包含SEQ ID NO: 34和60的重链和轻链可变区序列；
（b）分别包含SEQ ID NO: 35和61的重链和轻链可变区序列；
（c）分别包含SEQ ID NO: 36和61的重链和轻链可变区序列；
（d）分别包含SEQ ID NO: 37和60的重链和轻链可变区序列；
（e）分别包含SEQ ID NO: 38和61的重链和轻链可变区序列；
（f）分别包含SEQ ID NO: 38和62的重链和轻链可变区序列；
（g）分别包含SEQ ID NO: 38和63的重链和轻链可变区序列；
（h）分别包含SEQ ID NO: 39和60的重链和轻链可变区序列；
（i）分别包含SEQ ID NO: 40和61的重链和轻链可变区序列；
（j）分别包含SEQ ID NO: 121和63的重链和轻链可变区序列；
（k）分别包含SEQ ID NO: 120和61的重链和轻链可变区序列；
（l）分别包含SEQ ID NO: 112和60的重链和轻链可变区序列；
（m）分别包含SEQ ID NO: 113和60的重链和轻链可变区序列；
（n）分别包含SEQ ID NO: 114和60的重链和轻链可变区序列；
（o）分别包含SEQ ID NO: 115和60的重链和轻链可变区序列；
（p）分别包含SEQ ID NO: 116和60的重链和轻链可变区序列；
（q）分别包含SEQ ID NO: 117和60的重链和轻链可变区序列；
（r）分别包含SEQ ID NO: 118和60的重链和轻链可变区序列；
（s）分别包含SEQ ID NO: 119和60的重链和轻链可变区序列；或
（t）分别包含SEQ ID NO: 364和60的重链和轻链可变区序列。
抗TIM3抗体可包含13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8或TIM3.2至TIM3.18中任一者的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3或其组合。13A3、8B9、8C4和17C3的VH CDR1的氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO.41-44。9F6、3G4和17C8的VH CDR1的氨基酸序列显示于SEQ ID NO45。突变的13A3抗体（即TIM3.10-TIM3.18）的VH CDR1的氨基酸序列与未突变的13A3抗体的VH CDR1的氨基酸序列相同，即SEQ ID NO: 41。突变的8B9抗体（即TIM3.8）的VH CDR1的氨基酸序列与未突变的8B9抗体的VH CDR1的氨基酸序列相同，即SEQ ID NO: 42。突变的9F6抗体（即TIM3.7）的VH CDR1的氨基酸序列与未突变的9F6抗体的VH CDR1的氨基酸序列相同，即SEQ ID NO: 45。13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的VH CDR2的氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO.46-52。突变的13A3抗体TIM3.10、TIM3.17和TIM3.18的VH CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 122。突变的13A3抗体TIM3.11和TIM3.12的VH CDR2的氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO: 123和124。突变的13A3抗体TIM3.13和TIM3.16的VH CDR2的氨基酸序列是未突变的13A3抗体的VH CDR2的氨基酸序列，即SEQ ID NO: 46。突变的8B9抗体（即TIM3.8）的VH CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 125。突变的9F6抗体（即TIM3.7）的VHCDR2的氨基酸序列与未突变的9F6抗体的VH CDR2的氨基酸序列相同，即SEQ ID NO: 45。13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的VH CDR3的氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO.53-59。
突变的13A3抗体（即TIM3.10至TIM3.12）的VH CDR3的氨基酸序列是未突变的13A3抗体的VH CDR3的氨基酸序列，即SEQ ID NO: 53。突变的13A3抗体TIM3.13和TIM3.18的VHCDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 126。突变的13A3抗体TIM3.15和TIM3.17的VH CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 128。突变的13A3抗体TIM3.14和TIM3.16的VH CDR3的氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO: 127和129。突变的8B9抗体（即TIM3.8）的VH CDR3的氨基酸序列是未突变的8B9抗体的VH CDR3的氨基酸序列，即SEQ ID NO: 54。突变的9F6抗体（即TIM3.7）的VH CDR3的氨基酸序列与未突变的9F6抗体的VH CDR3的氨基酸序列相同，即SEQID NO: 57。13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的VH CDR2的氨基酸序列分别显示于SEQID NO.53-59。13A3、8B9、8C4、17C3、3G4和17C8的VL CDR1的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:64。9F6的VL CDR1的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 64和65。13A3、8B9、8C4、17C3、3G4和17C8的VL CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 66。9F6的VL CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 66和67。13A3、17C3和3G4的VL CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO 68。8B9、8C4和17C8的VL CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO 69。9F6的VL CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 69、70和71。突变的抗体13A3、8B9和9F6的VL CDR的氨基酸序列是相应的未突变抗体的VL CDR的氨基酸序列。图13提供了本文所述的抗TIM3抗体的CDR的SEQ ID NO列表。
CDR区使用Kabat系统描绘(Kabat, E. A., 等人(1991) Sequences of Proteinsof Immunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and HumanServices, NIH公开号91-3242)。Kabat系统是称为EU索引或EU编号系统的方案的最常用编号系统，其基于测序的第一个人IgG1序列编号（EU抗体；Edelman等人1969)。基于本文公开的Kabat编号方案，抗体编号可以转换成本领域已知的其他系统，例如Chotia、IMGT、Martin（增强的Chothia）或AHo编号方案。
鉴于这些抗体中的每一种都与人TIM3结合，并且抗原结合特异性主要由CDR1、2和3区提供，VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列（例如图13中的那些）可以“混合并匹配”（即，来自不同抗体的CDR可以混合并匹配，尽管每种抗体必须含有VH CDR1、2和3以及VLCDR1、2和3）以产生本文所述的其他抗TIM3结合分子。可以使用上文和实施例中描述的结合测定（例如， ELISA）测试这种“混合并匹配的”抗体的TIM3结合。在一些实施方案中，当VHCDR序列混合并匹配时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列被结构上相似的CDR序列替换。同样地，当VL CDR序列混合并匹配时，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列被结构上相似的CDR序列替换。对于普通技术人员来说显而易见的是，可以通过用来自本文公开的单克隆抗体13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4、17C8和TIM3.2至TIM3.18中任一者的CDR序列的结构相似的序列取代一个或多个VH和/或VL CDR区序列来产生新的VH和VL序列。
本文提供分离的抗人TIM3抗体或其抗原结合部分，其包含：
（a）包含选自SEQ ID NO: 41-45的氨基酸序列的重链可变区CDR1；
（b）包含选自SEQ ID NO: 46-52和122-125的氨基酸序列的重链可变区CDR2；
（c）包含选自SEQ ID NO: 53-59和126-129的氨基酸序列的重链可变区CDR3；
（d）包含选自SEQ ID NO: 64-65的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；
（e）包含选自SEQ ID NO: 66-67的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和
（f）包含选自SEQ ID NO: 68-71的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
在一个实施方案中，抗人TIM3抗体包含重链和轻链可变区，其中重链可变区CDR1、CDR2和CDR3区包含：
(a) SEQ ID NO: 41, 46, 53；
(b) SEQ ID NO: 42, 47, 54；
(c) SEQ ID NO: 43, 48, 55；
(d) SEQ ID NO: 44, 49, 56；
(e) SEQ ID NO: 45, 50, 57；
(f) SEQ ID NO: 45, 51, 58；
(g) SEQ ID NO: 45, 52, 59；
(h) SEQ ID NO: 41, 122, 53；
(i) SEQ ID NO: 41, 123, 53；
(j) SEQ ID NO: 41, 124, 53；
(k) SEQ ID NO: 41, 46, 126；
(l) SEQ ID NO: 41, 46, 127；
(m) SEQ ID NO: 41, 46, 128；
(n) SEQ ID NO: 41, 46, 129；
(o) SEQ ID NO: 41, 122, 128；或
(p) SEQ ID NO: 41, 122, 126；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
在一些实施方案中，抗人TIM3抗体包含重链和轻链可变区，其中轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区包含：
(a) SEQ ID NO: 64, 66, 68；
(b) SEQ ID NO: 64, 66, 69；
(c) SEQ ID NO: 65, 67, 70；或
(d) SEQ ID NO: 64, 66, 71；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
在一个具体实施方案中，抗TIM3抗体包含重链和轻链可变区，其中：
（a1）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、46、53，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a2）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、122、53，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a3）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、123、53，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a4）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、124、53，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a5）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、46、126，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a6）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、46、127，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a7）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、46、128，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a8）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、46、129，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a9）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、122、128，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（a10）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 41、122、126，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（b1）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 42、47、54，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、69；
（b2）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 42、125、54，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、69；
（c）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 43、48、55，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、69；
（d）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 44、49、56，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；
（e）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、50、57，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、69；
（f）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、50、57，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、71；
（g1）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、50、57，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 65、67、70；
（g2）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、50、57，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、71；
（g3）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、50、57，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、69；
（h）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、51、58，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、68；或
（i）重链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 45、52、59，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 64、66、69；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
本文所述的VH结构域或其一个或多个CDR可连接至恒定结构域以形成重链，例如全长重链。类似地，本文所述的VL结构域或其一个或多个CDR可连接至恒定结构域以形成轻链，例如全长轻链。全长重链（C末端赖氨酸（K）除外或C末端甘氨酸和赖氨酸（GK）除外，其可以不存在）和全长轻链组合形成全长抗体。
本文所述的VH结构域可以与人IgG例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定结构域（其是天然存在的或修饰的）融合，例如如本文进一步描述的。例如，VH结构域可包含与人IgG（例如IgG1）恒定区诸如以下野生型人IgG1恒定结构域氨基酸序列：
融合的本文所述的任何VH结构域的氨基酸序列，或者包含SEQ ID NO: 291的同种异型变体的氨基酸序列并具有以下氨基酸序列：
；同种异型具体氨基酸残基以粗体和下划线显示)。
抗TIM3抗体的VH结构域可包含与无效应子恒定区融合的本文所述的任何VH结构域的氨基酸序列，例如以下无效应子人IgG1恒定结构域氨基酸序列：
；“IgG1.1f,”其包含取代L234A、L235E、G237A、A330S和P331S，所述取代加下划线显示)
或
；“IgG1.3f”，其包含取代L234A、L235E和G237A，所述取代加下划线显示)。
例如，IgG1的同种异型变体包含K97R、D239E和/或L241M（上文加下划线和粗体显示），并根据SEQ ID NO: 277、294和295中的编号进行编号。在全长重区域内，例如8C4（SEQID NO: 3），并且根据EU编号，这些氨基酸取代编号为K214R、D356E和L358M。在一些实施方案中，抗TIM3抗体的恒定区可以进一步包含如SEQ ID NO: 277、294和295中编号的氨基酸L117、A118、G120、A213和P214（上文加下划线显示）或根据EU编号的L234、A235、G237、A330和P331处的一个或多个突变或取代。在进一步的实施方案中，抗TIM3抗体的恒定区包含SEQID NO: 291的氨基酸L117A、A118E、G120A、A213S和P214S或根据EU编号的L234A、L235E、G237A、A330S和P331S处的一个或多个突变或取代。抗TIM3抗体的恒定区还可以包含SEQ IDNO: 291的L117A、A118E和G120A或根据EU编号的L234A、L235E和G237A的一个或多个突变或取代。
可选地，抗TIM3抗体的VH结构域可包含与人IgG4恒定区融合的本文所述的任何VH结构域的氨基酸序列，所述人IgG4恒定区例如以下人IgG4氨基酸序列或其变体：
(SEQ ID NO: 292，其包含S228P)。
本文所述的VL结构域可以与人κ或λ轻链的恒定结构域融合。例如，抗TIM3抗体的VL结构域可包含与以下人IgG1κ轻链氨基酸序列融合的本文所述的任何VL结构域的氨基酸序列：
。
在某些实施方案中，重链恒定区包含在C-末端的赖氨酸或另一种氨基酸，例如其包含以下最后的氨基酸：重链中的LSPGK（SEQ ID NO: 279）。在某些实施方案中，重链恒定区在C-末端缺少一个或多个氨基酸，并且具有例如C-末端序列LSPG（SEQ ID NO: 280）或LSP（SEQ ID NO: 281）。
示例性重链和轻链的氨基酸序列对应于SEQ ID NO: 1-28、72-111、301-354（对于重链）和SEQ ID NO: 29-30和32-33（对于轻链）。
本文提供分离的抗人TIM3抗体或其抗原结合部分，其包含：
（a1）分别包含SEQ ID NO: 301 (或302)和29的重链和轻链序列；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 1 (或8)和29的重链和轻链序列；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 15 (或22)和29的重链和轻链序列；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 303 (或304)和29的重链和轻链序列；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 72 (或82)和29的重链和轻链序列；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 92 (或102)和29的重链和轻链序列；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 305 (或306)和29的重链和轻链序列；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 73 (或83)和29的重链和轻链序列；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 93 (或103)和29的重链和轻链序列；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 307 (或308)和29的重链和轻链序列；
（a11）分别包含SEQ ID NO: 74 (或84)和29的重链和轻链序列；
（a12）分别包含SEQ ID NO: 94 (或104)和29的重链和轻链序列；
（a13）分别包含SEQ ID NO: 309 (或310)和29的重链和轻链序列；
（a14）分别包含SEQ ID NO: 75 (或85)和29的重链和轻链序列；
（a15）分别包含SEQ ID NO: 95 (或105)和29的重链和轻链序列；
（a16）分别包含SEQ ID NO: 311 (或312)和29的重链和轻链序列；
（a17）分别包含SEQ ID NO: 76 (或86)和29的重链和轻链序列；
（a18）分别包含SEQ ID NO: 96 (或106)和29的重链和轻链序列；
（a19）分别包含SEQ ID NO: 313 (或314)和29的重链和轻链序列；
（a20）分别包含SEQ ID NO: 77 (或87)和29的重链和轻链序列；
（a21）分别包含SEQ ID NO: 97 (或107)和29的重链和轻链序列；
（a22）分别包含SEQ ID NO: 315 (或316)和29的重链和轻链序列；
（a23）分别包含SEQ ID NO: 78 (或88)和29的重链和轻链序列；
（a24）分别包含SEQ ID NO: 98 (或108)和29的重链和轻链序列；
（a25）分别包含SEQ ID NO: 317 (或318)和29的重链和轻链序列；
（a26）分别包含SEQ ID NO: 79 (或89)和29的重链和轻链序列；
（a27）分别包含SEQ ID NO: 99 (或109)和29的重链和轻链序列；
（a28）分别包含SEQ ID NO: 319 (或320)和29的重链和轻链序列；
（a29）分别包含SEQ ID NO: 349 (或350)和29的重链和轻链序列；
（a30）分别包含SEQ ID NO: 351 (或352)和29的重链和轻链序列；
（a31）分别包含SEQ ID NO: 353 (或354)和29的重链和轻链序列；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 321 (或322)和30的重链和轻链序列；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 2 (或9)和30的重链和轻链序列；
（b3）分别包含SEQ ID NO: 16 (或23)和30的重链和轻链序列；
（b4）分别包含SEQ ID NO: 323 (或324)和30的重链和轻链序列；
（b5）分别包含SEQ ID NO: 80 (或90)和30的重链和轻链序列；
（b6）分别包含SEQ ID NO: 100 (或110)和30的重链和轻链序列；
（b7）分别包含SEQ ID NO: 325 (或326)和30的重链和轻链序列；
（c1）分别包含SEQ ID NO: 327 (或328)和30的重链和轻链序列；
（c2）分别包含SEQ ID NO: 3 (或10)和30的重链和轻链序列；
（c3）分别包含SEQ ID NO: 17 (或24)和30的重链和轻链序列；
（c4）分别包含SEQ ID NO: 329 (或330)和30的重链和轻链序列；
（d1）分别包含SEQ ID NO: 331 (或332)和29的重链和轻链序列；
（d2）分别包含SEQ ID NO: 4 (或11)和29的重链和轻链序列；
（d3）分别包含SEQ ID NO: 18 (或25)和29的重链和轻链序列；
（d4）分别包含SEQ ID NO: 333 (或334)和29的重链和轻链序列；
（e1.1）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和32的重链和轻链序列；
（e1.2）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和33的重链和轻链序列；
（e1.3）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和31的重链和轻链序列；
（e2）分别包含SEQ ID NO: 5 (或12)和33的重链和轻链序列；
（e3）分别包含SEQ ID NO: 19 (或26)和33的重链和轻链序列；
（e4）分别包含SEQ ID NO: 337 (或338)和33的重链和轻链序列；
（e5）分别包含SEQ ID NO: 81 (或91)和33的重链和轻链序列；
（e6）分别包含SEQ ID NO: 101 (或111)和33的重链和轻链序列；
（e7）分别包含SEQ ID NO: 339 (或340)和33的重链和轻链序列；
（f1）分别包含SEQ ID NO: 341 (或342)和29的重链和轻链序列；
（f2）分别包含SEQ ID NO: 6 (或13)和29的重链和轻链序列；
（f3）分别包含SEQ ID NO: 20 (或27)和29的重链和轻链序列；
（f4）分别包含SEQ ID NO: 343 (或344)和29的重链和轻链序列；
（g1）分别包含SEQ ID NO: 345 (或346)和30的重链和轻链序列；
（g2）分别包含SEQ ID NO: 7 (或14)和30的重链和轻链序列；
（g3）分别包含SEQ ID NO: 21 (或28)和30的重链和轻链序列；或
（g4）分别包含SEQ ID NO: 347 (或348)和30的重链和轻链序列；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含本文所示（例如，在前一段中）的重链和轻链序列的组合，其中所述抗体包含两条重链和两条轻链，并且还可包含将两条重链连接在一起的至少一个二硫键。 抗体还可以包含将每条轻链与每条重链连接的二硫键。
包含与本文所示的任何重链或轻链（或其可变区）例如SEQ ID NO: 1-33、72-111和301-354具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％、80％、75％或70％同一性的氨基酸序列的重链和轻链可用于形成具有期望的特征（例如本文进一步所述的那些）的抗人TIM3抗体。示例性变体是包含例如在恒定结构域中的同种异体变异和/或在可变区或恒定区中的突变（诸如本文公开的突变）的变体。包含与本文所示的任何重链或轻链（或其可变区）至多1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-5、1-4、1-3、1-2或1个氨基酸（通过取代、添加或缺失）不同的氨基酸序列的重链和轻链可用于形成具有期望的特征（例如本文进一步所述的那些）的抗人TIM3抗体。
在各种实施方案中，上述抗体展示出以下功能特性的一种或多种、两种或多种、三种或多种、四种或多种、五种或多种、六种或多种、七种或多种、八种或多种、九种或多种、十种或多种、十一种或多种、十二种或多种、十三种或多种、十四种或多种、十五种或多种、或全部：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如， Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120且任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如如实施例中所述的。
此类抗体包括例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合构象表位。
在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合成熟人TIM3胞外结构域（SEQ IDNO: 290）的以下区域内的氨基酸残基：
SEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNVVLRTDERDVNYWTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMND (SEQ ID NO: 299)，其对应于成熟人TIM3胞外结构域（SEQID NO: 290）的氨基酸残基1-99或具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸22-120。
在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合成熟人TIM3胞外结构域（SEQ IDNO: 290）的以下区域内的氨基酸残基：CPVFECG (SEQ ID NO: 296)，其对应于成熟的人TIM3胞外结构域（SEQ ID NO: 290）的氨基酸残基37-43。
在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合成熟人TIM3胞外结构域（SEQ IDNO: 290）的以下区域内的氨基酸残基：WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，其对应于成熟的人TIM3胞外结构域（SEQ ID NO: 290）的氨基酸残基57-83。
在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合成熟人TIM3胞外结构域（SEQ IDNO: 290）的以下区域内的氨基酸残基：RIQIPGIMND (SEQ ID NO:298)，其对应于成熟的人TIM3胞外结构域（SEQ ID NO: 290）的氨基酸残基90-99。
在一个实施方案中，抗TIM3抗体具有如同抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4和TIM3.2至TIM3.18中的一种或多种的与野生型和突变的人TIM3结合的相同模式。在一个实施方案中，抗TIM3抗体结合成熟人TIM3胞外结构域（SEQ ID NO: 290）的以下区域内的氨基酸残基：CPVFECG (SEQ ID NO: 296)、WTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLAD (SEQ ID NO:297)和/或RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)。
在某些实施方案中，如通过HDX-MS所测定的，抗TIM3抗体结合(1)49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)或(2) 40YTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 369)、66VVLRTDERDVNY77 (SEQ ID NO:370)、78WTSRYWLNGDFRKGDVSL95 (SEQ ID NO: 371)、110CRIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO:372)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如例如在实施例中所述的。在某些实施方案中，如通过HDX-MS所测定的，抗TIM3抗体与hTIM3的氨基酸残基40-62和111-127的区域相互作用，但不与其他区域显著相互作用，例如N-末端至氨基酸残基Y40的区域、位于氨基酸残基E62和R111之间的区域和C-末端至氨基酸残基L127的区域，如例如在实施例中所述的。
在某些实施方案中，相对于结合野生型人TIM3，抗TIM3抗体具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，并且如通过HDX-MS所测定的，所述抗体结合(1)49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)或(2) 40YTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 369)、66VVLRTDERDVNY77 (SEQ ID NO:370)、78WTSRYWLNGDFRKGDVSL95 (SEQ ID NO: 371)、110CRIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO:372)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如例如在实施例中所述的。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体具有如TIM3.18.IgG1.3或13A3的与野生型和突变的人TIM3结合的相似模式，即所述抗体：
（i）结合(1) 49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，并且，例如，但不显著结合（a）具有位于氨基酸残基49的N末端的序列的肽；（b）具有位于氨基酸残基62和111之间的序列的肽（例如，78WTSRYWLNGDFRKGDVSL95 (SEQ ID NO: 371)）；和（c）具有位于氨基酸残基127的C末端的序列的肽，如通过HDX-MS所测定的（例如，如在实施例中所述的）；
（ii）无法结合人TIM3，或者具有显著降低的与人TIM3的结合，如例如使用酵母表面展示方法测定的（例如，如在实施例中所述的），所述人TIM3具有一个或多个下列氨基酸突变：C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120和任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（iii）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含重链和轻链，其中重链选自SEQ ID NO: 72-111、305-354、325-326和339-340，和/或轻链选自SEQ ID NO: 29-33。
如本文进一步讨论的，本文所述的抗TIM3抗体的重链恒定区可以是任何同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4、或其组合和/或其修饰。抗TIM3抗体可具有效应子功能或可具有降低的效应子功能或不具有效应子功能。在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含修饰的重链恒定区，所述修饰的重链恒定区为抗体提供增强的特性。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含重链和轻链，其中重链选自SEQ ID NO: 72-111和349-352，和/或轻链选自SEQ ID NO: 29-33。
III. 具有特定种系序列的抗体
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含来自特定种系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或来自特定种系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。
如本文所证明的，已经制备了对TIM3特异性的包含重链可变区的人抗体，所述重链可变区是人种系VH 4-39基因、VH 4-59基因、VH 1-46基因、VH 3-11、VH 4-17基因、VH 3-10基因、VH 6-19基因、VH 6-13基因、VH JH5b基因和/或VH JH6b基因的产物或者衍生自所述基因。因此，本文提供了包含重链可变区的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述重链可变区是选自以下的人VH种系基因的产物或衍生自所述基因：VH 4-39、VH 4-59、VH 1-46、VH 3-11、VH 4-17、VH 3-10、VH6-19、VH 6-13、VH JH5b、VH JH6b及其任何组合。
已经制备了包含轻链可变区的对TIM3特异性的人抗体，所述轻链可变区是人种系VK A27基因、VK JK5基因、VK JK4基因、VK L18基因和/或VK JK1基因的产物或衍生自所述基因。因此，本文提供了包含轻链可变区的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述轻链可变区是选自以下的人VK种系基因的产物或衍生自所述基因：VK A27、VK JK5、VK JK4、VKL18、VK JK1及其任何组合。
本文所述的抗TIM3抗体包括包含重链可变区且还包含轻链可变区的那些，所述重链可变区是上文列出的人种系VH基因之一的产物或衍生自所述基因之一，所述轻链可变区是上文列出的人种系VK基因之一的产物或衍生自所述基因之一，如附图所示。
如本文所用，如果抗体的可变区获自使用人种系免疫球蛋白基因的系统，则人抗体包含是特定种系序列的“产物”或“衍生自”所述特定种系序列的重链和轻链可变区。此类系统包括用目的抗原免疫携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠或用目的抗原筛选噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库。通过将人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较并选择序列上与人抗体的序列最接近（即最大%同一性）的人种系免疫球蛋白序列，可以如此鉴定出作为人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“衍生自”所述人种系免疫球蛋白序列的人抗体。作为特定人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“衍生自”所述特定人种系免疫球蛋白序列的人抗体当相比于种系序列时可以包含氨基酸差异，其由于例如天然存在的体细胞突变或定点突变的有意引入。然而，选择的人抗体通常在氨基酸序列上与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少90％的同一性，并且包含当与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列（例如，鼠种系序列）相比时将人抗体鉴定为人的氨基酸残基。在某些情况下，人抗体可以在氨基酸序列上与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%或99%的同一性。通常，衍生自特定人种系序列的人抗体将显示与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10个氨基酸差异。在某些情况下，人抗体可以展示与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列的不超过5个、或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸差异。
IV. 同源抗体
本文包括具有重链和轻链可变区的抗体，所述重链和轻链可变区包含与本文所述的抗TIM3抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列，并且其中所述抗体保留了本文所述的抗TIM3抗体的期望的功能特性。
例如，分离的抗TIM3抗体或其抗原结合部分可包含重链可变区和轻链可变区，其中：
（a）重链可变区包含与选自SEQ ID NO: 34-40、112-121和364的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99％同一性的氨基酸序列，或包含相对于选自SEQ IDNO: 34-40、112-121和364的氨基酸序列的1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-50个氨基酸改变（即氨基酸取代、添加或缺失），其中任选地，重链可变区包含本文所述的抗TIM3抗体之一的CDR序列；
（b）轻链可变区包含与选自SEQ ID NO: 60-63的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99％同一性的氨基酸序列，或包含相对于选自SEQ ID NO: 60-63的氨基酸序列的1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-50个氨基酸改变（即氨基酸取代、添加或缺失），其中任选地，轻链可变区包含本文所述的抗TIM3抗体之一的CDR序列；
（c）所述抗体特异性结合人TIM3，和
（d）抗体展示出以下功能特性中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15种或全部：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如， Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120且任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如如实施例中所述的。
在各种实施方案中，抗体可以表现出如上文(1)至(16)列出的功能特性的一种或多种，两种或多种、三种或多种、四种或多种、五种或多种、六种或多种、七种或多种、八种或多种、九种或多种或全部。抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
分离的抗TIM3抗体或其抗原结合部分可包含重链和轻链，其中：
（a）重链包含与选自SEQ ID NO: 1-28、72-111和349-352的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99％同一性的氨基酸序列，或包含相对于选自SEQ ID NO: 1-28、72-111和349-352的氨基酸序列的1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-50个氨基酸改变（即氨基酸取代、添加或缺失），条件是，在某些实施方案中，如果序列是无效应子重链的序列，则不会对IgG1.1恒定区修饰使重链无效应子的突变（例如，不对R214、A234、E235、A237、S330和S331进行修饰）且不对IgG1.3恒定区的R214、A234和E235进行修饰，其中任选地，重链可变区包含本文所述的抗TIM3抗体之一的CDR序列；
（b）轻链包含与选自SEQ ID NO: 29-31的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99％同一性的氨基酸序列，或包含相对于选自SEQ ID NO: 29-31的氨基酸序列的1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-50个氨基酸改变（即氨基酸取代、添加或缺失），其中任选地，轻链可变区包含本文所述的抗TIM3抗体之一的CDR序列；
（c）所述抗体特异性结合人TIM3，和
（d）抗体展示出以下功能特性中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15种或全部：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如， Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120且任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如如实施例中所述的。
还提供了包含VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的抗TIM3抗体，所述CDR与13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一者的相应CDR的不同在于1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个氨基酸改变（即氨基酸取代、添加或缺失）。在某些实施方案中，相对于13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一者的相应序列，抗TIM3抗体包含CDR的1、2、3、4、5或6个的每一个中的1-5个氨基酸改变。在某些实施方案中，相对于13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一者中的CDR，抗TIM3抗体在所有CDR中包含总共1-5个氨基酸改变。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含由13A3的那些组成的VH和VL CDR，其中一个或多个CDR中的一个或多个氨基酸是本文公开的其他抗TIM3抗体之一的那些。
例如，在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含相对于SRSYYWG（SEQ ID NO: 41）含有一个或多个氨基酸修饰的VH CDR1，并且可包含例如以下简并序列：X1X2X3X4YX5X6 (SEQ IDNO: 282)，其中X1为任何氨基酸，例如S或无；X2为任何氨基酸，例如R或无；X3为任何氨基酸，例如S、R或D；X4为任何氨基酸，例如Y或H；X5为任何氨基酸，例如W或M；且X6为任何氨基酸，例如G、N、S或H。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含相对于SIYYSGFTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 46)含有一个或多个氨基酸修饰的VH CDR2，并且可包含例如以下简并序列：X1IX2X3X4GX5X6X7X8YX9X10X11X12X13X14 (SEQ ID NO: 283)，其中X1为任何氨基酸，例如S、Y、I或F；X2为任何氨基酸，例如Y、H、N或S；X3为任何氨基酸，例如Y、P、G、T或S；X4为任何氨基酸，例如S、T、R或G；X5为任何氨基酸，例如F、S或D；X6为任何氨基酸，例如S、T或I；X7为任何氨基酸，例如I或无；X8为任何氨基酸，例如Y、N或I；X9为任何氨基酸，例如N、Q、S或A；X10为任何氨基酸，例如P、S、Q或D；X11为任何氨基酸，例如S或K；X12为任何氨基酸，例如L、F或V；X13为任何氨基酸，例如K或Q；且X14为任何氨基酸，例如S或G。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含相对于GGPYGDYAHWFDP (SEQ ID NO: 53)含有一个或多个氨基酸修饰的VH CDR3，并且可包含例如以下简并序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10YGX11X12X13X14X15X16X17X18 (SEQ ID NO: 284)，其中X1为任何氨基酸，例如D、E或无；X2为任何氨基酸，例如F、G或无；X3为任何氨基酸，例如Y或无；X4为任何氨基酸，例如G、S或无；X5为任何氨基酸，例如G、T或S；X6为任何氨基酸，例如G或S；X7为任何氨基酸，例如N、W或无；X8为任何氨基酸，例如Y、S、E或无；X9为任何氨基酸，例如Y或无；X10为任何氨基酸，例如P或Y；X11为任何氨基酸，例如D或无；X12为任何氨基酸，例如Y或无；X13为任何氨基酸，例如A或无；X14为任何氨基酸，例如H或无；X15为任何氨基酸，例如W或无；X16为任何氨基酸，例如F或M；X17为任何氨基酸，例如D或E；且X18为任何氨基酸，例如P、I、V、Y或L。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含VH CDR3，其包含选自SEQ ID NO: 53-59和126-129的氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含VL CDR1，其包含如SEQ ID NO: 64或SEQ IDNO: 65所示的氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含VL CDR2，其包含如SEQ ID NO: 66或SEQ IDNO: 67所示的氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含相对于QQYGSSPIT (SEQ ID NO: 68)含有一个或多个氨基酸修饰的VL CDR3，并且可包含例如以下简并序列：QQX1X2SX3X4X5T (SEQ IDNO: 285)，其中X1为任何氨基酸，例如F或Y；X2为任何氨基酸，例如N或G；X3为任何氨基酸，例如Y或S；X4为任何氨基酸，例如P或无；X5为任何氨基酸，例如I、R或L。
具有与13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一者的那些（例如分别SEQ ID NO: 34-40、112-121或364和SEQ ID NO: 60-63的VH 和VL区、或分别SEQ IDNO: 1-28、72-111或349-352和SEQ ID NO: 29-33的重链和轻链、或CDR）具有同源性的序列的抗体可以如下获得：通过诱变（例如，定点或PCR介导的诱变）编码SEQ ID NO: 167-173和/或SEQ ID NO: 193-196或SEQ ID NO: 134-161和/或SEQ ID NO: 162-166的核酸分子，然后通过使用本文所述的功能测定测试编码的改变的抗体的保留功能（即上文（1）至（16）中所述的功能）。
V. 具有保守修饰的抗体
抗TIM3抗体可包含含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个包含基于本文所述的抗TIM3抗体（例如，13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一者）的指定的氨基酸序列或其保守修饰，并且其中所述抗体保留本文所述的TIM3抗体的期望的功能特性。因此，分离的抗TIM3抗体或其抗原结合部分可包含含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中：
（a）重链可变区CDR3序列包含选自SEQ ID NO：53-59和126-129的氨基酸序列的氨基酸序列及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代，其中任选地，重链可变区包含本文所述的抗TIM3抗体之一的CDR序列；
（b）轻链可变区CDR3序列包含选自SEQ ID NO：68-71的氨基酸序列的氨基酸序列及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代，其中任选地，轻链可变区包含本文所述的抗TIM3抗体之一的CDR序列；
（c）所述抗体特异性结合人TIM3，和
（d）抗体展示出以下特征中的1、2、3、4、5、6、7、8、9种或全部：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如， Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112，（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120和任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3，例如如实施例中所述的。
在一个实施方案中，重链可变区CDR2序列包含选自SEQ ID NO: 46-52和122-125的氨基酸序列的氨基酸序列及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代；并且轻链可变区CDR2序列包含选自SEQ ID NO: 66-67的氨基酸序列的氨基酸序列及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，重链可变区CDR1序列包含选自SEQ ID NO: 41-45的氨基酸序列的氨基酸序列及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代；并且轻链可变区CDR1序列包含选自SEQ ID NO: 64-65的氨基酸序列的氨基酸序列及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代。
在各种实施方案中，抗体可以表现出如上文(1)至(16)列出的功能特性的一种或多种，两种或多种、三种或多种、四种或多种、五种或多种、六种或多种、七种或多种、八种或多种、九种或多种或全部。此类抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
保守氨基酸取代还可以在抗体的CDR之外的部分中进行或者除了CDR外还在抗体的其他部分中进行。例如，可以在框架区或Fc区中进行保守氨基酸修饰。可变区或重链或轻链相对于本文提供的抗TIM3抗体序列可包含1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-50个保守氨基酸取代。在某些实施方案中，抗TIM3抗体包含保守和非保守氨基酸修饰的组合。
VI. 抗体结合相同的表位或竞争结合
还提供了与一种或多种本文所述的具体抗TIM3抗体（例如，抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4和/或TIM3.2-TIM3.18）竞争结合人TIM3的抗体。可以基于它们在标准TIM3结合测定中与一种或多种单克隆抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4和/或TIM3.2-TIM3.18竞争性抑制结合人TIM3的能力来鉴定这种竞争抗体。例如，可以使用标准ELISA测定或竞争性ELISA测定，其中将重组人TIM3蛋白固定在板上，添加各种浓度的未标记的第一抗体，洗涤板，添加标记的第二抗体，并且测量标记的量。如果未标记的（第一）抗体（也称为“阻断抗体”）的渐增浓度抑制标记的（第二）抗体的结合，则认为第一抗体抑制第二抗体在板上与靶标的结合，或认为与第二抗体的结合竞争。另外或可选地，Biacore分析可以用于评价抗体竞争的能力。测试抗体抑制本文所述的抗TIM3抗体与TIM3结合的能力表明测试抗体可与所述抗体竞争结合人TIM3。
因此，本文提供抗TIM3抗体，其抑制本文所述的抗TIM3抗体结合细胞（例如活化的T细胞）上的TIM3至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100％，和/或其结合细胞（例如活化的T细胞）上的人TIM3被抑制至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100％，例如如通过ELISA或FACS所测量的，例如通过使用以下段落中描述的测定法。
用于确定例如第一抗体是否阻断第二抗体的结合（即“与其竞争”）的示例性竞争实验可以如实施例中所述进行，或如下进行：将活化的人T细胞如下制备：使用Ficoll梯度从人全血中分离外周血单核细胞（PBMC），并用10μg/mL植物血凝素(PHA-L) (USBiol#P3370-30)和200IU/mL重组IL-2 (Peprotech#200-02)活化3天。将活化的T细胞重悬浮于FACS缓冲液（含有5％胎牛血清的PBS）中，并以每样品孔105 个细胞接种在96孔板中。将板放置在冰上，随后添加浓度范围为0-50 µg/mL（自50 µg/mL的最高浓度开始的三倍滴定）的未缀合的第一抗体。不相关的IgG可以用作第一抗体的同种型对照并以相同浓度（自50 µg/mL的最高浓度开始的三倍滴定）添加。与50 µg/mL未标记的第二抗体预孵育的样品可以包括作为完全阻断（100%抑制）的阳性对照，并且在一级孵育中无抗体的样品可以用作阴性对照（无竞争；0%抑制）。孵育30分钟后，将标记的（例如生物素化的）第二抗体以每孔2µg/mL的浓度添加，不洗涤。将样品在冰上再孵育30分钟。通过用FACS缓冲液洗涤细胞将未结合的抗体去除。用检测标记的试剂例如用于检测生物素的PE缀合的链霉抗生物素(Invitrogen,目录号S21388)检测细胞结合的标记的第二抗体。在FACS Calibur Flow Cytometer (BD,San Jose)上获得样品并用Flowjo®软件(Tree Star, Inc, Ashland, OR)分析。结果可以表示为％抑制（即，每个浓度下的标记量除以无阻断抗体时获得的标记量，减去100％）。通常，随后颠倒(in the reverse)进行相同实验，即，第一抗体为第二抗体且第二抗体为第一抗体。
在某些实施方案中，抗体至少部分地（例如，至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%）或完全（100%）阻断其他抗体与靶标（例如人TIM3或其部分）的结合，而与当一种或另一种抗体为第一抗体时是否发生抑制无关。当抗体两种方式彼此竞争时（即，在其中首先加入第一抗体的竞争实验中和在其中首先加入第二抗体的竞争实验中），第一抗体和第二抗体“交叉阻断”彼此与靶标的结合。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合与本文所述的抗TIM3抗体（例如，13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4和/或TIM3.2-TIM3.18）的表位相同的表位，例如，如通过给定的表位作图技术所确定的。用于确定与本文所述的抗TIM3抗体结合“TIM3上的相同表位”的抗体的技术包括，例如，表位作图方法，例如提供表位的原子分辨率的抗原：抗体复合物晶体的X射线分析。其他方法监测抗体与抗原片段或抗原的突变变化形式的结合，其中由于抗原序列内氨基酸残基修饰导致的结合丧失通常被认为是表示表位组分（参见图20）。此外，还可以使用用于表位作图的计算组合方法。方法还可以依赖于目标抗体从组合噬菌体展示肽文库中亲和力分离特异性短肽（以天然三维形式或以变性形式）的能力。随后将肽认为是对应于用于筛选肽文库的抗体的表位定义的引导。对于表位作图，还已经开发了计算算法，其已显示对构象不连续表位进行定位。
可以通过使用本领域已知的方法鉴定与本文所述的抗TIM3抗体竞争结合相同表位或结合相同表位的抗体。例如，可以如本文所述用人TIM3免疫小鼠，产生杂交瘤，并筛选所得单克隆抗体与本文所述抗体竞争结合人TIM3的能力。小鼠也可以用含有抗体结合的表位的较小TIM3片段免疫。表位或包含表位的区域也可以通过例如筛选结合跨越TIM3的一系列重叠肽来定位。可选地，Jespers等人, Biotechnology 12:899, 1994的方法可用于指导选择具有与本文所述抗TIM3抗体相同表位且因此具有相似特性的抗体。使用噬菌体展示，将抗TIM3抗体的第一重链与全部的(repertoire)（人）轻链配对以选择TIM3结合抗体，并随后将新的轻链与全部（人）重链配对以选择具有如本文所述的抗TIM3抗体的相同表位或表位区域的（人）TIM3结合抗体。可选地，本文所述的抗体的变体可以通过诱变编码抗体的重链和轻链的cDNA来获得。
如由Cunningham和Wells (1989) Science 244: 1081-1085所述的丙氨酸扫描诱变、或TIM3中氨基酸残基的一些其它形式的点诱变也可用于获得TIM3抗体结合特征。
还可以通过评估抗体与包含TIM3片段（例如非变性或变性片段）的肽的结合来确定特异性抗体的结合特征。含有TIM3（例如人TIM3）序列的一系列重叠肽可以合成并筛选结合，例如在直接ELISA、竞争ELISA（其中评价肽阻止抗体与结合至微量滴定板的孔的TIM3的结合的能力）中或在芯片上。
抗TIM3抗体的结合特征还可以通过基于MS的蛋白足迹法诸如氢/氘交换质谱法（HDX-MS）和蛋白快速光化学氧化法(Fast Photochemical Oxidation of Proteins,FPOP)来获得。HDX-MS可以例如如WO2015/18735中和Wei等人(2014) Drug Discovery Today 19:95中所述的来进行，所述方法具体地通过引用并入本文。FPOP可以如例如描述于Hambley和Gross (2005) J. American Soc.Mass Spectrometry 16:2057中所述进行，所述方法具体地通过引用并入本文。
抗TIM3抗体的结合特征也可以通过结构方法来获得，诸如X射线晶体结构测定（例如WO2005/044853）、分子建模和核磁共振（NMR）光谱学，包括当游离时和当结合在与目标抗体的复合物中时TIM3中不稳定的酰胺氢的H-D交换速率的NMR测定(Zinn- Justin等人(1992) Biochemistry 31, 11335-11347；Zinn-Justin等人(1993) Biochemistry 32,6884-6891)。
关于X射线晶体学，结晶可以使用本领域任何已知方法来完成(例如Giege等人(1994) Acta Crystallogr.D50:339-350；McPherson (1990) Eur.J. Biochem.189: 1-23)，包括微配液结晶法(microbatch)(例如Chayen (1997) Structure 5: 1269-1274)、悬滴蒸汽扩散(例如McPherson (1976) J. Biol.Chem.251:6300-6303)、引晶种(seeding)和透析。期望使用具有至少约1 mg/mL或约10 mg/mL至约20 mg/mL的浓度的蛋白制剂。结晶可以在含有聚乙二醇1000-20,000 (PEG；平均分子量范围为约1000至约20,000 Da)、约5000至约7000 Da、或约6000 Da，且浓度范围为约10%至约30% (w/v)的沉淀剂溶液中最佳实现。还可以期望包含蛋白稳定剂，例如，浓度范围为约0.5%至约20%的甘油。合适的盐诸如氯化钠、氯化锂或柠檬酸钠在沉淀剂溶液中也是期望的，浓度范围为约1 mM至约1000 mM。将沉淀剂缓冲至约3.0至约5.0的pH。可用于沉淀剂溶液的具体缓冲剂可以变化，并且是本领域熟知的(Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 第三版, (1994)Springer- Verlag, New York)。可用的缓冲液的实例包括但不限于HEPES、Tris、MES和乙酸盐。晶体可以在宽范围温度下生长，包括2℃、4℃、8℃和26℃。
抗体：抗原晶体可以使用众所周知的X射线衍射技术研究并可以使用计算机软件诸如X-PLOR细化(Yale University, 1992, 由Molecular Simulations, Inc.发布；参见例如Blundell & Johnson (1985) Meth.Enzymol.114 & 115, H. W. Wyckoff等人, 编辑, Academic Press；美国专利申请公开号2004/0014194)和BUSTER (Bricogne (1993)Acta Cryst.D49:37-60；Bricogne (1997) Meth.Enzymol.276A:361-423, Carter &Sweet, 编辑；Roversi等人(2000) Acta Cryst.D56:1313-1323)，其公开内容以其整体通过引用并入本文。
抗TIM3抗体可以与具有本文所述氨基酸序列的任何抗TIM3抗体结合相同的表位，如通过表位作图技术测定的，例如本文所述的技术。
本文涵盖了与人TIM3和任选食蟹猴TIM3结合的抗体，其具有与本文所述的抗TIM3抗体相似且通过实施例中使用的方法之一确定的结合特征。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体结合人TIM3的胞外部分中，例如胞外区的Ig样结构域或IgV结构域中（即，SEQ ID NO: 286的氨基酸22-130 (图20)）的表位，例如构象表位。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合位于人TIM3胞外结构域（SEQ ID NO:286）的氨基酸22-120或成熟人TIM3（SEQ ID NO: 290）的氨基酸1-99内的表位（参见实施例）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸58-64组成的区域或结合所述区域内的表位，所述区域对应于成熟人TIM3的氨基酸残基37-43(CPVFECG, SEQ ID NO: 296；参见图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQID NO: 286的人TIM3的氨基酸111-120组成的区域或结合所述区域内的表位，所述区域对应于成熟人TIM3的氨基酸残基90-99 (RIQIPGIMND, SEQ ID NO: 298；参见图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸58-64组成的区域和由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸111-120组成的区域或结合所述区域内的表位。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合由具有SEQ ID NO: 286的人TIM3的氨基酸78-89组成的区域或结合所述区域内的表位，所述区域对应于成熟人TIM3的氨基酸残基57-83(WTSRYWLNGDFR, SEQ ID NO: 297；参见图20)。
在一个实施方案中，抗TIM3抗体结合与13A3的表位实质上相同的表位。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、R111和D120中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20）。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、D104、R111、Q113和D120中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO:286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、R111和D120的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、F61、E62、C63、D104、R111、Q113和D120的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与3G4的表位实质上相同的表位。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G116和M118中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、D104、G116和M118中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ IDNO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G116和M118的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、D104、G116和M118的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与17C3的表位实质上相同的表位。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64和G116中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、D104和G116中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO:286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64和G116的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、D104和G116的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与8B9的表位实质上相同的表位。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87和R89中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87和R89中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在一些实施方案中，抗TIM3抗体结合与8B9的表位实质上相同的表位。在某些实施方案中，抗TIM3抗体结合包含SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87、R89和D104中的一个或多个的表位（或人TIM3的区域）（图20)。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87和R89的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87和R89的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。在某些实施方案中，抗TIM3抗体不显著结合或仅以显著降低的结合亲和力结合这样的人TIM3蛋白，在所述人TIM3蛋白中SEQ ID NO: 286的氨基酸残基L48、W78、S80、R81、W83、G86、D87、R89和D104（图20）的一个或多个例如以非保守氨基酸取代改变为另一种氨基酸。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体与包含本文所述的CDR或可变区（例如抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4和TIM3.2至TIM3.18的任一者的那些）的抗TIM3抗体竞争结合人TIM3（或抑制其结合人TIM3）。在某些实施方案中，抗TIM3抗体抑制抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。在某些实施方案中，13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者抑制抗TIM3抗体与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。在某些实施方案中，抗TIM3抗体抑制13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％，并且13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18的任一者抑制抗TIM3抗体与人TIM3的结合至少50％、60％、70％、80％、90％或100％（例如，在两个方向上竞争）。
VII. 工程化且修饰的抗体
还提供工程化且修饰的抗体，其可以使用具有本文公开的VH和/或VL序列中的一种或多种的抗体作为起始材料以工程化修饰的抗体来制备，所述修饰的抗体可以具有自起始抗体的改变的特性。可以通过在一个或两个可变区（即VH和/或VL）内，例如在一个或多个CDR区和/或在一个或多个框架区内修饰一个或多个残基来将抗体工程化。另外地或可选地，可以通过在恒定区内修饰残基例如以改变抗体的效应子功能来将抗体工程化。
可以进行的一种类型的可变区工程化是CDR移植。抗体经位于六个重链和轻链互补决定区（CDR）中的氨基酸残基主要地与靶抗原相互作用。为此原因，CDR内的氨基酸序列在不同抗体之间比CDR之外的序列更加多变。由于CDR序列负责大部分抗体-抗原相互作用，因此可以通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在抗体的特性的重组抗体，所述表达载体包括移植至来自具有不同特性的不同抗体的框架序列的特定天然存在抗体的CDR序列(参见例如，Riechmann, L.等人(1998) Nature 332:323-327；Jones, P.等人(1986)Nature 321 :522-525；Queen, C.等人(1989) Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10029-10033；Winter的美国专利号5,225,539和Queen等人的美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
因此，本文所述的另一个实施方案涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别含有选自SEQ ID NO: 41-45、SEQID NO: 46-52、122-125和SEQ ID NO: 53-59、126-129的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含分别含有选自SEQ ID NO: 64-65、SEQ ID NO: 66-67和SEQ IDNO: 68-71的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3序列。因此，此类抗体含有单克隆抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中任一者的VH 和VL CDR序列，仍可以可以含有来自这些抗体的不同框架序列。
此类框架序列可以获自公共DNA数据库或包括种系抗体基因序列的公开的参考。例如，人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以发现于"VBase"人种系序列数据库（可在互联网上www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase获得）以及Kabat, E. A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, U.S. Department ofHealth and Human Services, NIH公开号91-3242；Tomlinson, I. M.,等人(1992) "TheRepertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VHSegments with Different Hypervariable Loops" /.Mol.Biol.227:776-798；和Cox, J.P. L.等人(1994) "A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a StrongBias in their Usage" Eur.J. Immunol.24:827-836；其各自内容通过引用明确地并入本文。
在一些实施方案中，用于本文所述的抗TIM3抗体的框架序列是结构上类似于由本文所述的抗TIM3抗体所用的框架序列的框架序列。VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列可以移植至具有与发现于框架序列所来源的种系免疫球蛋白基因中的相同序列的框架区上，或者CDR序列可以移植至相比于种系序列含有一个或多个突变的框架区上。例如，已发现在某些情况下，在框架区内突变残基对于维持或增强抗体的抗原结合能力是有利的(参见例如Queen等人的美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
本文所述的工程化抗TIM3抗体包括其中对VH和/或VL内的框架残基进行了修饰（例如以改善抗体的性质，例如9F6中氨基酸107处的突变）的那些抗体。通常，做出这样的框架修饰，以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个框架残基"回复突变"成对应的种系序列。更具体地，已经经历体细胞突变的抗体可以含有不同于所述抗体所来源的种系序列的框架残基。此类残基可以通过将抗体框架序列与抗体所来源的种系序列进行比较来鉴定。为了使框架区序列返回至其种系构象，可以将体细胞突变“回复突变”至种系序列，例如通过定点诱变或PCR介导的诱变。此类“回复突变的”抗体也旨在被涵盖。另一类型的框架修饰涉及在框架区内或甚至在一个或多个CDR区内突变一个或多个残基，以去除T细胞表位，由此降低抗体的潜在免疫原性。这种方法也称为“去免疫化(deimmunization)”，且进一步详细描述于Carr等人的美国专利公开号20030153043中。
另一种类型的可变区修饰是突变VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基，从而改进目标抗体的一种或多种结合特性（例如，亲和力）。可以进行定点诱变或PCR介导的诱变以引入突变，并且可以在如本文所述并在实施例中提供的体外或体内测定中评估对抗体结合或其他目标功能性质的影响。在一些实施方案中，引入了保守修饰（如上所讨论）。突变可以是氨基酸取代、添加或缺失。此外，通常改变CDR区内不超过一个、两个、三个、四个或五个残基。
因此，还提供分离的抗TIM3单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含：
（a）VH CDR1区，其包含选自SEQ ID NO: 41-45的氨基酸序列或相比于SEQ ID NO: 41-45具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；
（b）VH CDR2区，其包含选自SEQ ID NO: 46-52和122-125的氨基酸序列或相比于SEQID NO: 46-52和122-125具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；
（c）VH CDR3区，其包含选自SEQ ID NO: 53-59和126-129的氨基酸序列或相比于SEQID NO: 53-59和126-129具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；
（d）VL CDR1区，其包含选自SEQ ID NO: 64-65的氨基酸序列或相比于SEQ ID NO: 64-65具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；
（e）VL CDR2区，其包含选自SEQ ID NO: 66-67的氨基酸序列或相比于SEQ ID NO: 66-67具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；和
（f）VL CDR3区，其包含选自SEQ ID NO: 68-71的氨基酸序列或相比于SEQ ID NO: 68-71具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列。
抗体的CDR中的甲硫氨酸残基可以被氧化，导致潜在的化学降解和随之抗体效能的降低。因此，还提供抗TIM3抗体，其在重链和/或轻链CDR中用不经受氧化降解的氨基酸残基替换一个或多个甲硫氨酸残基。在一个实施方案中，抗体13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4或TIM3.2至TIM3.18中的任一者的CDR中的甲硫氨酸残基被不经受氧化降解的氨基酸残基替换。
类似地，脱酰胺位点可以从抗TIM3抗体尤其是CDR中去除。
本文所述的抗TIM3可变区可以连接（例如共价连接或融合）至Fc，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc，其可以是任何同种异型或异同种异型(isoallotype)，例如对于IgG1:Glm, Glml(a), Glm2(x), Glm3(f), Glml7(z)；对于IgG2: G2m, G2m23(n)；对于IgG3:G3m, G3m21(gl), G3m28(g5), G3ml l(b0), G3m5(bl), G3ml3(b3), G3ml4(b4), G3ml0(b5), G3ml5(s), G3ml6(t), G3m6(c3), G3m24(c5), G3m26(u), G3m27(v)和对于K: Km,Km1, Km2, Km3 (参见例如Jefferies等人(2009) mAbs 1:1)。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3可变区连接至无效应子或大部分无效应子Fc，例如IgG1。
通常，本文所述的可变区可以连接至包含一个或多个修饰的Fc，通常以改变抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，可以将本文所述的抗体化学修饰（例如，可以将一个或多个化学部分连接至抗体上）或修饰以改变它的糖基化，从而改变所述抗体的一种或多种功能特性。下文更详细地描述这些实施方案中的每个。Fc区中的残基编号是Kabat的EU索引的那种。
Fc区包括衍生自免疫球蛋白恒定区的结构域，包括恒定区的片段、类似物、变体、突变体或衍生物。合适的免疫球蛋白包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和其他类别例如IgA、IgD、IgE和IgM。免疫球蛋白的恒定区定义为与免疫球蛋白C-末端区域同源的天然存在的或合成产生的多肽，并且可以分别或组合地包括CH1结构域、铰链、CH2结构域、CH3结构域或CH4结构域。
Ig分子与多类细胞受体相互作用。例如，IgG分子与对IgG类抗体特异性的三类Fcγ受体(FcγR)即FcγRI、FcγRII和FcγRIII相互作用。已报道，IgG与FcγR受体结合的重要序列位于CH2和CH3结构域。抗体的血清半衰期受该抗体结合Fc受体（FcR）的能力的影响。
在某些实施方案中，Fc区是变体Fc区，例如相对于亲本Fc序列（例如，未改变的Fc多肽，其随后改变以产生变体）已经改变（例如通过氨基酸取代、缺失和/或插入）的Fc序列，以提供期望的结构特征和/或生物活性。
通常，恒定区或其部分的变体，例如CH1、CL、铰链，CH2或CH3结构域可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个突变，和/或至多10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个突变、或1-10或1-5个突变，或包含与相应的野生型区域或结构域（分别为CH1、CL、铰链、CH2或CH3结构域）的具有至少约75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99％同一性的氨基酸序列，条件是包含特定变体的重链恒定区保留必要的生物活性。
例如，可以在Fc区中进行改变以产生Fc变体，所述变体相对于亲本Fc（a）具有增加或降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC），（b）增加或降低的补体介导的细胞毒性（CDC），（c）具有增加或降低的对C1q的亲和力和/或（d）具有增加或降低的对Fc受体的亲和力。此类Fc区变体将通常包含Fc区中的至少一个氨基酸改变。认为组合氨基酸改变饰是特别期望的。例如，变体Fc区可以在其中（例如本文鉴定的特定Fc区位置）包括两个、三个、四个、五个等取代。
变体Fc区还可以包含序列改变，其中涉及二硫键形成的氨基酸被除去或被其他氨基酸替代。这种去除可以避免与用于产生本文所述的抗TIM3抗体的宿主细胞中存在的其他含半胱氨酸的蛋白反应。即使当去除半胱氨酸残基时，单链Fc结构域仍然可以形成非共价保持在一起的二聚体Fc结构域。在其他实施方案中，可改变Fc区以使其与所选宿主细胞更相容。例如，可以去除典型天然Fc区的N末端附近的PA序列，所述序列可以被大肠杆菌中的消化酶（例如脯氨酸亚氨基肽酶）识别。在其他实施方案中，可以去除Fc结构域内的一个或多个糖基化位点。通常糖基化的残基（例如，天冬酰胺）可以赋予细胞溶解反应。这些残基可以被缺失或被未糖基化的残基（例如丙氨酸）取代。在其他实施方案中，可以从Fc区除去参与与补体（例如C1q结合位点）相互作用的位点。例如，可以缺失或取代人IgG1的EKK序列。在某些实施方案中，可以除去影响与Fc受体结合的位点，优选除挽救受体(salvagereceptor)结合位点之外的位点。在其他实施方案中，可以改变Fc区以去除ADCC位点。ADCC位点是本领域已知的；例如，参见Molec.Immunol.29 (5): 633-9 (1992)，关于IgG1中的ADCC位点。变体Fc结构域的具体实例公开于例如WO 97/34631和WO 96/32478。
在一个实施方案中，改变Fc的铰链区，从而改变（例如，增加或减少）在铰链区中的半胱氨酸残基的数目。该方法进一步描述于由Bodmer等人的美国专利号5,677,425中。改变在Fc的铰链区中的半胱氨酸残基的数目，以例如促进轻链和重链的装配，或增加或降低抗体的稳定性。在一个实施方案中，突变抗体的Fc铰链区，以降低所述抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变导入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面（interface）区中，使得所述抗体具有与天然Fc-铰链结构域SpA结合相比受损的葡萄球菌蛋白A（SpA）结合。该方法进一步详细描述于由Ward等人的美国专利号6,165,745中。
在其它实施方案中，通过用不同的氨基酸残基替代至少一个氨基酸残基来改变Fc区，以改变所述抗体的效应子功能。例如，可以用不同的氨基酸残基替代选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320、322、330和/或331的一个或多个氨基酸，使得所述抗体具有改变的对效应子配体的亲和力，但是保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力对于其改变的效应子配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。在Winter等人美国专利号5,624,821和5,648,260中进一步详细描述了该方法。
在另一个实例中，选自氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基替换，使得抗体具有改变的C1q结合和/或减少或消除的补体依赖性细胞毒性（CDC）。这种方法在Idusogie等人的美国专利6,194,551中进一步详细地描述。
在另一个实例中，改变在氨基酸位置231和239内的一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体的固定补体的能力。该方法在Bodmer等人的PCT公开WO 94/29351中进一步描述。
在又另一个实例中，可以通过改变以下位置处的一个或多个氨基酸来改变Fc区以降低抗体依赖性细胞毒性（ADCC）和/或降低对Fcγ受体的亲和力：234、235、236、238、239、240、241 、243、244、245、247、248、249、252、254、255、256、258、262、263、264、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、299、301、303、305、307、309、312、313、315、320、322、324、325、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、433、434、435、436、437、438或439。示例性取代包括236A、239D、239E、268D、267E、268E、268F、324T、332D和332E。示例性变体包括239D/332E、236A/332E、236A/239D/332E、268F/324T、267E/268F、267E/324T和267E/268F7324T。用于增强FcγR和补体相互作用的其他改变包括但不限于取代298 A、333A、334A、326A、2471、339D、339Q、280H、290S、298D、298V、243L、292P、300L、396L、3051和396L。这些和其他改变在Strohl, 2009, Current Opinion inBiotechnology 20:685-691中进行了综述。
增加与Fcγ受体结合的Fc改变包括在Fc区的以下氨基酸位置的任何一个或多个处的氨基酸改变：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、279、280、283、285、298、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、312、315、324、327、329、330、335、337、338、340、360、373、376、379、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，其中Fc区中残基的编号如在abat中(WO00/42072)的EU索引的编号。
可以对Fc进行的其他Fc改变是用于减少或消除与FcγR和/或补体蛋白的结合从而减少或消除Fc介导的效应子功能（例如ADCC、ADCP和CDC）的那些。示例性改变包括但不限于位置234、235、236、237、267、269、325、328、330和/或331（例如330和331）处的取代、插入和缺失，其中编号是根据EU索引。示例性取代包括但不限于234A、235E、236R、237A、267R、269R、325L、328R、330S和331S（例如330S和331S），其中编号是根据EU索引。Fc变体可包含236R/328R。用于减少FcγR和补体相互作用的其他改变包括取代297A、234A、235A、237A、318A、228P、236E、268Q、309L、330S、331 S、220S、226S、229S、238S、233P和234V，以及通过突变或酶促手段或通过在不将蛋白糖基化的生物诸如细菌中产生来去除297位的糖基化。这些和其他改变在Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691中进行了综述。
任选地，Fc区可以在本领域技术人员已知的另外和/或替代位置处包含非天然存在的氨基酸残基（参见，例如，美国专利号5,624,821；6,277,375；6,737,056；6,194,551；7,317,091；8,101,720；PCX专利公开WO 00/42072；WO 01/58957；WO 02/06919；WO 04/016750；WO 04/029207；WO 04/035752；WO 04/074455；WO 04/099249；WO 04/063351；WO05/070963；WO 05/040217, WO 05/092925和WO 06/0201 14）。
还可以使用增强对抑制性受体FcγRIIb的亲和力的Fc变体。此类变体可以提供具有关于FcγRIIb细胞包括例如B细胞和单核细胞的免疫调节活性的Fc融合蛋白。在一个实施方案中，Fc变体提供相对于一种或多种活化性受体的对于FcγRIIb的选择性增强的亲和力。改变与FcγRIIb结合的改变包括在选自根据EU索引的位置234、235、236、237、239、266、267、268、325、326、327、328、330、331和332处的一个或多个改变。增强FcγRIIb亲和力的示例性取代包括但不限于234A、234D、234E、234F、234W、235D、235E、235F、235R、235Y、236D、236N、237A、237D、237N、239D、239E、266M、267D、267E、268D、268E、327D、327E、328F、328W、328Y、330S、331S和332E。示例性取代包括235Y、236D、239D、266M、267E、268D、268E、328F、328W和328Y。增强结合FcγRIIb的其他Fc变体包括235Y/267E、236D/267E、239D/268D、239D/267E、267E/268D、267E/268E和267E/328F。
Fc区对其配体的亲和力和结合特性可以通过本领域中已知的多种体外测定方法（基于生物化学或免疫学的方法）来测定，包括但不限于：平衡法（例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)或放射性免疫测定(RIA)）、或动力学（例如BIACORE分析），和其他方法诸如间接结合测定、竞争性抑制测定、荧光共振能量转移（FRET）、凝胶电泳和层析（例如凝胶过滤）。这些和其他方法可以利用所检测的组分中的一种或多种上的标记和/或采用多种检测方法，包括但不限于发色、荧光、发光或同位素标记。结合亲和力和动力学的详述可见于Paul, W.E.,编辑, Fundamental immunology, 第4版, Lippincott-Raven, Philadelphia(1999)，其关注于抗体-免疫原相互作用。
在某些实施方案中，修饰抗体以增加其生物半衰期。多种方法是可以的。例如，这可以通过增加Fc区对FcRn的结合亲和力来完成，例如，可以突变以下残基中的一个或多个：252、254、256、433、435、436，如美国专利号6,277,375中所述。具体的示例性取代包括以下一种或多种：T252L、T254S和/或T256F。可选地，为了增加生物半衰期，可以在CH1或CL区内改变抗体以包含获自IgG的Fc区的CH2结构域的两个环的挽救受体(salvage receptor)结合表位，如在Presta等人的美国专利号5,869,046和6,121,022中所述。其他增加对FcRn结合和/或改进药代动力学特性的示例性变体包括在位置259、308、428和434处的取代，包括例如 2591、308F、428L、428M、434S、4341 1. 434F、434Y和434X1。增加Fc与FcRn结合的其他变体包括：250E、250Q、428 L、428F、250Q/428L (Hinton等人 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216, Hinton等人 2006 Journal of Immunology 176:346-356)、256A、272A、286A、305A、307A、307Q、31 1A、312A、376A、378Q、380A、382A、434A (Shields等人, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604)、252F、252T、252Y、252W、254T、256S、256R、256Q、256E、256D、256T、309P、31 1 S、433R、433S、4331、433P、433Q、434H、434F、434Y、252Y/254T/256E、433K/434F/436H、308T/309P/311S (Dall Acqua等人 Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall'Acqua等人, 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524)。用于调节FcRn结合的其他改变描述于Yeung等人, 2010, J Immunol, 182:7663-7671。
在某些实施方案中，可以使用具有特定生物学特征的杂种IgG同种型。例如，可以通过用来自IgG3的其中两种同种型不同的位置处的氨基酸取代IgG1的CH2和/或CH3区域中的位置来构建IgG1/IgG3杂种变体。因此，可以构建包含一个或多个取代例如274Q、276K、300F、339T、356E、358M、384S、392N、397M、4221、435R和436F的杂种变体IgG抗体。在本文所述的其他实施方案中，可以通过用来自IgG1的其中两种同种型不同的位置处的氨基酸取代IgG2的CH2和/或CH3区域中的位置来构建IgG1/IgG2杂种变体。因此，可以构建杂种变体IgG抗体，其包含一个或多个取代，例如一个或多个以下氨基酸取代：233E、234L、235L、-236G（指在236位插入甘氨酸）和327A。
此外，已经对人IgG1上FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点作图，并且已经描述了具有改进的结合的变体(参见Shields, R.L.等人 (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604)。显示位置256、290、298、333、334和339处的特定突变改进了与FcγRIII的结合。此外，以下组合突变体显示出改进FcγRIII结合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A，已显示其表现出增强的FcγRIIIa结合和ADCC活性（Shields等人, 2001）。已经鉴定了与FcγRIIIa具有强烈增强的结合的其他IgG1变体，包括具有S239D/I332E和S239D/I332E/A330L突变的变体，其显示对FcγRIIIa的亲和力的最大增加、FcγRIIb结合的降低和食蟹猴中的强细胞毒性活性(Lazar等人, 2006)。将三突变引入抗体如阿仑单抗（CD52特异性）、曲妥珠单抗（HER2/neu特异性）、利妥昔单抗（CD20特异性）和西妥昔单抗（EGFR特异性）转化为在体外极大增强的ADCC活性，并且S239D/I332E变体显示出猴中增强的耗尽B细胞的能力(Lazar等人, 2006)。此外，已鉴定含有L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L突变的IgG1突变体，其表现出与FcγRIIIa的增强的结合并且伴随在B细胞恶性肿瘤和乳腺癌模型中在表达人FcγRIIIa的转基因小鼠中的ADCC活性增强(Stavenhagen等人, 2007；Nordstrom等人, 2011)。可以使用的其他Fc突变体包括：S298A/E333A/L334A、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L、L235V/F243L/R292P/Y300L/ P396L和M428L/N434S。
在某些实施方案中，选择具有降低的与FcγR结合的Fc。具有降低的FcγR结合的示例性Fc例如IgG1 Fc包含以下三种氨基酸取代：L234A、L235E和G237A。
在某些实施方案中，选择具有降低的补体结合的Fc。具有降低的补体结合的示例性Fc例如IgG1 Fc具有以下两种氨基酸取代：A330S和P331S。
在某些实施方案中，选择基本上不具有效应子功能的Fc，即其具有降低的与FcγR的结合和降低的补体结合。无效应子的示例性Fc例如IgG1 Fc包含以下五种突变：L234A、L235E、G237A、A330S和P331S。
当使用IgG4恒定结构域时，它可以包括取代S228P，其模拟IgG1中的铰链序列，从而稳定IgG4分子。
在仍另一个实施方案中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备无糖基化抗体（即抗体缺乏糖基化）。糖基化可以改变以例如增加抗体对于抗原的亲和力。此类碳水化合物修饰可以通过例如改变在抗体序列内的一个或多个糖基化位点来完成。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致一个或多个可变区框架糖基化位点的消除，从而消除在该位点上的糖基化。这种糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。在Co等人美国专利号5,714,350和6,350,861中进一步详细描述了该方法。
可以通过将N297残基突变为另一个残基（例如N297A）和/或通过突变相邻氨基酸（例如298）从而减少N297上的糖基化来防止恒定区N297上的糖基化。
另外或可选地，可以制备具有改变类型的糖基化的抗体，例如具有减少量的岩藻糖残基的低岩藻糖化抗体或具有增加的二等分GlcNAc结构的抗体。此类改变的糖基化模式已证实增加抗体的ADCC能力。例如，通过在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体，可以实现这样的碳水化合物修饰。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域中描述，并且可用作宿主细胞，在所述宿主细胞中表达本文所述的重组抗TIM3抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。例如，Hanai等人的EP 1,176,195描述了具有功能性破坏的FUT8基因（其编码岩藻糖基转移酶）的细胞系，使得在这种细胞系中表达的抗体表现出低岩藻糖基化。Presta的PCT公开WO 03/035835描述了变体CHO细胞系Led 3细胞，其具有降低的将岩藻糖与Asn(297)连接的碳水化合物的附接的能力，还导致在该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(也参见Shields, R.L.等人 (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740)。Umana等人PCT公开WO 99/54342描述了经工程化以表达修饰糖蛋白的糖基转移酶{例如β(l,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III (GnTIII))的细胞系，使得在工程化的细胞系中表达的抗体表现出增加的二等分GlcNac结构，其导致抗体的ADCC活性增加(也参见Umana等人 (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180)。
本文所述的抗TIM3抗体的另一种修饰是聚乙二醇化。例如，可以将抗体PEG化以增加抗体的生物（例如血清）半衰期。为了将抗体PEG化，通常将抗体或其片段与聚乙二醇（PEG）诸如PEG的反应性酯或醛衍生物反应，其在其中一个或多个PEG基团与抗体或抗体片段进行附接的条件下。在一些实施方案中，聚乙二醇化经由与反应性PEG分子（或类似的反应性水溶性聚合物）的酰化反应或烷基化反应进行。如本文使用的，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白的任何形式的PEG，例如单(CI-CIO)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，待PEG化的抗体是非糖基化(aglycosylated)抗体。用于将蛋白PEG化的方法是本领域已知的且可应用于本文所述的抗TIM3抗体。参见例如Nishimura等人的EP 0 154 316和Ishikawa等人的EP 0 401 384。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，其中重链恒定区选自SEQ ID NO: 263-266。
VIII. 抗体物理性质
抗TIM3抗体（例如本文所述的那些）具有本文所述的特异性抗TIM3抗体的一些或全部物理特征，例如实施例中描述的特征。
本文所述的抗TIM3抗体可以在轻链或重链可变区中包含一个或多个糖基化位点。由于抗原结合的改变，这种糖基化位点可导致抗体的免疫原性增加或抗体pK的改变(Marshall等人, (1972) Annu Rev Biochem 41:673-702；Gala和Morrison (2004) J. Immunol 172:5489-94；Wallick等人, (1988) J Exp Med 168: 1099-109；Spiro (2002)Glycobiology 12:43R-56R；Parekh等人, (1985) Nature 316:452-7；Mimura等人,(2000) Mol Immunol 37:697-706)。已经知晓糖基化在含有N-X-S/T序列的基序处发生。在一些情况下，抗TIM3抗体不含可变区糖基化。这可以通过选择在可变区中不包含糖基化基序的抗体或者通过在糖基化区域内突变残基来实现。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体不包含天冬酰胺异构位点。天冬酰胺的去酰胺可在N-G或D-G序列上发生且引起产生异天冬氨酸残基，该异天冬氨酸残将扭结(kink)引入多肽链中且降低其稳定性(异天冬氨酸作用)。
每一抗体将具有独特的等电点（pi），其一般落入6-9.5的pH范围。IgG1抗体的pi通常落入7-9.5的pH范围并且IgG4抗体的pi通常落入6-8的pH范围。推测具有正常范围之外的pi的抗体可能在体内条件下具有一些解折叠和不稳定性。因此，抗TIM3抗体可含有落在正常范围内的pi值。这可以通过选择pi在正常范围内的抗体或通过突变带电荷的表面残基来实现。
每种抗体具有特征性的熔解温度，较高的熔解温度表明体内总体稳定性较高(Krishnamurthy R和Manning M C (2002) Curr Pharm Biotechnol 3:361-71)。通常，TMi（初始解折叠的温度）可以大于60℃、大于65℃或大于70℃。抗体的熔点可以使用差示扫描量热法(Chen等人, (2003) Pharm Res 20: 1952-60；Ghirlando等人,(1999) Immunol Lett 68:47-52)或圆二色性(Murray等人, (2002) J. Chromatogr Sci 40:343-9)测量。
在一个实施方案中，选择不快速降解的抗体。使用毛细管电泳（CE）和MALDI-MS(Alexander A J和Hughes D E (1995) Anal Chem 67:3626-32)，可以测量抗体的降解。
在另一个实施方案中，选择具有最小聚集作用的抗体，所述聚集作用可以导致引起不想要的免疫应答和/或改变的或不利的药代动力学特性。一般地，抗体具有25%或更少、20%或更少、15%或更少、10%或更少、或者5%或更少的聚集是可接受的。聚集可以通过几种技术进行测量，所述技术包括尺寸排阻柱（SEC）、高效液相层析（HPLC）和光散射。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体具有在上文第(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)部分中描述的结构和性质的组合。在一个实施方案中，抗-TM3抗体与抗体13A3、17C3、8B9、8C4、3G4、17C8和9F6交叉竞争（如第I和/或VI部分中所述），衍生自如第III部分中所示述的种系序列，具有如第V部分所述的保守突变，和/或如第IV部分中所述，与第I和II部分中的抗TIM3抗体具有同源性并组合有本文任何地方描述的一种或多种功能特性。
IX. 工程化抗体的方法
如上所述，具有本文公开的VH和VL序列的抗TIM3抗体可用于通过修饰VH和/或VL序列或与其连接的恒定区来产生新的抗TIM3抗体。因此，在本文所述的另一个方面，本文所述的抗TIM3抗体的结构特征用于产生结构上相关的抗TIM3抗体，所述抗体保留本文所述的抗TIM3抗体的至少一种功能特性，例如与人TIM3和食蟹猴TIM3的结合。例如，如上所讨论的，17C3、8B9、8C4、3G4、17C8、9F6、13A3或TIM3.2至TIM3.18中任一者的一个或多个CDR区可以与已知的框架区和/或其他CDR重组组合以产生额外的、本文所述的重组工程化的抗TIM3抗体。其他类型的修饰包括上一节中描述的那些。用于工程化方法的起始材料是本文提供的一种或多种VH和/或VL序列、或其一个或多个CDR区。为了产生工程化抗体，不必实际制备（即，表达为蛋白）具有本文提供的一种或多种VH和/或VL序列、或其一个或多个CDR区的抗体。相反，将序列中包含的信息用作起始材料以产生从原始序列衍生的“第二代”序列，然后制备“第二代”序列并且表达为蛋白。
因此，本文提供了制备抗TIM3抗体的方法，其包括：
（a）提供：（i）重链可变区抗体序列，其包含选自SEQ ID NO: 41-45的CDR1序列、选自SEQ ID NO: 46-52和122-125的CDR2序列和/或选自SEQ ID NO: 53-59和126-129的CDR3序列；和（ii）轻链可变区抗体序列，其包含选自SEQ ID NO：64-65的CDR1序列、选自SEQ IDNO: 66-67的CDR2序列和/或选自SEQ ID NO: 68-71的CDR3序列；
（b）改变重链可变区抗体序列和/或轻链可变区抗体序列中的至少一个氨基酸残基，以产生至少一种改变的抗体序列；和
（c）将改变的抗体序列表达为蛋白。
标准分子生物学技术可用于制备和表达改变的抗体序列。在一些实施方案中，由改变的抗体序列编码的抗体是保留本文所述的抗TIM3抗体的一种、一些或全部功能性质的抗体，所述性质包括：
（1）例如以10nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（2）例如以100nM或更低（例如0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的，例如如实施例中所述的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（4）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的（例如，如实施例中所述的）；
（6）例如以1nM或更低（例如0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的，例如如实施例中所述的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如， Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实，例如如实施例中所述的；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖，例如如实施例中所述的；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联(in-tandem)”阻断测定所测量的，例如如实施例中所述的；
（10） 当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)，例如如实施例中所述的；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代，例如如实施例中所述的；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18，例如如实施例中所述的；
（14）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)，例如如实施例中所述的；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120，和任选T70和/或I112（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与其中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120且任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代的人TIM3的结合；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合，例如如实施例中所述的。
改变的抗体可以表现出如上文(1)至(16)所述的功能特性的一种或多种，两种或多种、三种或多种、四种或多种、五种或多种、六种或多种、七种或多种、八种或多种、九种或多种或全部。可以使用本领域可获得的和/或本文所述的标准测定来评估改变的抗体的功能特性，所述标准测定例如实施例中所述的那些（例如，ELISA、FACS）。
在工程化本文所述的抗TIM3抗体的方法的某些实施方案中，可以沿着全部或部分抗TIM3抗体编码序列随机或选择性地引入突变，并且可以筛选所得的修饰的抗TIM3抗体的结合活性和/或如本文所述的其他功能特性。本领域已经描述了突变方法。例如，Short的PCT公开WO 02/092780描述了使用饱和诱变、合成连接装配或其组合产生和筛选抗体突变的方法。可选地，Lazar等人的PCT公开WO 03/074679描述了使用计算筛选方法来优化抗体的生理化学特性的方法。
X.核酸分子
本文所述的另一方面涉及编码本文所述的抗TIM3抗体的核酸分子。核酸可以存在于完整细胞中、细胞裂解物中、或部分纯化或实质上纯化形式中。当通过标准技术包括碱性/SDS处理、CsCl条带、柱层析、限制酶、琼脂糖凝胶电泳和本领域中公知的其他技术将核酸从其他细胞组分或其他污染物例如其他细胞核酸（例如，其他染色体DNA，例如天然连接到分离的DNA上的染色体DNA）或蛋白中纯化出时，所述核酸“被分离”或使所述核酸“实质上纯的”。参见F. Ausubel,等人, 编辑(1987) Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley Interscience, New York。本文所述的核酸例如可以是DNA或RNA，且可以包含或可以不包含内含子序列。在某些实施方案中，核酸是cDNA分子。
本文所述的核酸可以使用标准分子生物学技术获得。对于由杂交瘤（例如从携带有如下文进一步所述的人免疫球蛋白基因的转基因小鼠中制备的杂交瘤）表达的抗体，编码由杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得。对于获自免疫球蛋白基因文库（例如使用噬菌体展示技术）的抗体，可以从文库中回收编码抗体的核酸。
本文所述的一些核酸分子是编码13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4、17C8或TIM3.2至TIM3.18抗体中任一者的VH和VL序列的核酸分子。编码13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的VH序列的示例性DNA序列显示于SEQ ID NO: 167-173、245-254和359。编码13A3、17C3和3G4的VL序列的示例性DNA序列显示于SEQ ID NO: 193。编码8B9、8C4和17C8的VL序列的示例性DNA序列显示于SEQ ID NO: 194。编码9F6的VL序列的示例性DNA序列显示于SEQ IDNO: 194-196。编码13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的重链序列的示例性DNA序列显示于SEQ ID NO: 134-161、205-244和355-358。编码13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的轻链序列的示例性DNA序列显示于SEQ ID NO: 162-166。
编码13A3.IgG1.1和13A3.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 167和193所示。编码13A3.IgG1.1和13A3.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 134和148所示，并且编码13A3.IgG1.1和13A3.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 162所示。
编码8B9.IgG1.1和8B9.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 168和194所示。编码8B9.IgG1.1和8B9.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 135和149所示，并且编码8B9.IgG1.1和8B9.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 163所示。
编码8C4.IgG1.1和8C4.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 169和194所示。编码8C4.IgG1.1和8C4.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 136和150所示，并且编码8C4.IgG1.1和8C4.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 163所示。
编码17C3.IgG1.1和17C3.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 170和193所示。编码17C3.IgG1.1和17C3.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 137和151所示，并且编码17C3.IgG1.1和17C3.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 162所示。
编码9F6.IgG1.1和9F6.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 171和197所示。编码9F6.IgG1.1和9F6.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 138和152所示，并且编码9F6.IgG1.1和9F6.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 166所示。
编码3G4.IgG1.1和3G4.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 172和193所示。编码3G4.IgG1.1和3G4.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 139和153所示，并且编码3G4.IgG1.1和3G4.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 162所示。
编码17C8.IgG1.1和17C8.IgG1.3（相同可变区）抗体的成熟VH和VL结构域的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 173和194所示。编码17C8.IgG1.1和17C8.IgG1.3抗体的成熟重链的示例性核酸分别如SEQ ID NO: 140和154所示，并且编码17C8.IgG1.1和17C8.IgG1.3抗体的成熟轻链的示例性核酸如SEQ ID NO: 163所示。
上述示例性核酸可以进一步包括SEQ ID NO: 267-271和361中所示的信号肽。编码这些信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO: 272-276、362和363所示。
可修饰本文所述的核酸分子以删除特定序列例如限制酶识别序列或以优化密码子。
制备13A3 IgG1.1、8B9 IgG1.1、8C4 IgG1.1、17C3 IgG1.1、9F6 IgG1.1、3G4IgG1.1、17C8 IgG1.1和/或TIM3.2至TIM3.18 IgG1.1的方法可以包括在细胞系中表达重链和轻链，所述细胞系包含编码重链和轻链及信号肽的核苷酸序列，例如对于13A3 IgG1.1分别为SEQ ID NO: 269和268。制备13A3 IgG1.3、8B9 IgG1.3、8C4 IgG1.3、17C3 IgG1.3、9F6IgG1.3、3G4 IgG1.3和/或17C8 IgG1.3的方法可以包括在细胞系中表达重链和轻链，所述细胞系包含编码重链和轻链及信号肽的核苷酸序列，例如对于13A3 IgG1.3分别为SEQ IDNO: 274和273。包含这些核苷酸序列的宿主细胞包括在本文中。
一旦获得编码VH和VL区段的DNA片段，可以通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如，以转变可变区基因为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些实施方案中，编码VL或VH的DNA片段可操作地连接至编码另一蛋白的另一DNA片段，诸如抗体恒定区或柔性接头。如本上下文中所用的术语“可操作地连接”旨在意指将两个DNA片段连接，使得由两个DNA片段编码的氨基酸序列保持框内(in-frame)。
编码VH区的分离的DNA可以转变为全长重链基因，其通过将编码VH的DNA可操作地连接至编码重链恒定区（铰链、CH1、CH2和/或CH3）的另一DNA分子。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat, E. A.等人(1991) Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services,NIH Publication No. 91-3242)并且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，例如，IgG1区。对于Fab片段重链基因，编码VH的DNA可以可操作地连接至仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。
编码VL区的分离的DNA可以转变为全长轻链基因（以及Fab轻链基因），其通过将编码VL的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一DNA分子。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat, E. A.等人(1991) Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services,NIH Publication No. 91-3242)并且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
为了产生scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH和VL序列可以表达为连续单链蛋白，且VL和VH区由柔性接头连接(参见例如，Bird等人, (1988) Science 242:423-426；Huston等人, (1988) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；McCafferty等人, (1990) Nature348:552-554)。
本文还提供了编码VH和VL序列的核酸分子，其与17C3、8B9、8C4、3G4、17C8、9F6、13A3和任何TIM3.2至TIM3.18抗体的序列同源。示例性核酸分子编码与编码17C3、8B9、8C4、3G4、17C8、9F6、13A3或任何TIM3.2至TIM3.18抗体的VH和VL序列的核酸分子具有至少70%同一性、例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少99%同一性的VH和VL序列。本文还提供了具有保守取代的核酸分子（即，在核酸分子翻译时不改变所得氨基酸序列的取代）例如用于密码子优化。
还提供了编码抗TIM3抗体（例如本文所述的抗TIM3抗体）的VH和/或VL区的核酸，所述核酸包含与编码本文所述抗TIM3抗体的VH和/或VL区的任何核苷酸序列具有至少约75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的核苷酸序列。
还提供了编码抗TIM3抗体（例如本文所述的抗TIM3抗体）的重链和/或轻链的核酸，所述核酸包含与编码本文所述抗TIM3抗体的重链和/或轻链的任何核苷酸序列具有至少约75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的核苷酸序列。
XI. 抗体产生
本文所述的单克隆抗TIM3抗体可使用多种已知技术产生，例如 Kohler和Milstein,Nature 256: 495 (1975)描述的标准体细胞杂交技术。尽管优选体细胞杂交程序，但原则上，其他用于产生单克隆抗体的技术也可以采用，例如，B淋巴细胞的病毒或致癌性转化、使用人抗体基因文库的噬菌体展示技术。
用于制备杂交瘤的优选动物系统是鼠系统。在小鼠中的杂交瘤产生是非常完善的程序。用于分离用于融合的经免疫的脾细胞的免疫方案和技术是本领域中已知的。融合配偶体(例如，鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。
本文所述的嵌合或人源化抗TIM3抗体可以基于如上所述制备的鼠单克隆抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以使用标准分子生物学技术获自目标鼠杂交瘤并且经工程化以包含非鼠（例如人）免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用本领域中已知的方法将鼠可变区连接至人恒定区（参见例如Cabilly等人的美国专利号4,816,567）。为了产生人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠CDR区插入人框架中(参见例如Winter的美国专利号5,225,539 和Queen等人的美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体是人单克隆抗体。此类针对TIM3的人单克隆抗体可以使用携带部分人免疫系统而非小鼠系统的转基因或转染色体小鼠来产生。这些转基因和转染色体小鼠包括本文分别称为HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠，并且在本文中一并称为“人Ig小鼠”。
HuMAb小鼠® (Medarex, Inc.)含有编码未重排的人重链(µ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微基因座(miniloci)，连同失活内源µ 和κ链基因座的靶向突变(参见例如，Lonberg,等人, (1994) Nature 368(6474): 856-859)。因此，小鼠展示出小鼠IgM或κ的表达降低，并且响应于免疫，引入的人重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力的人IgGK单克隆(Lonberg, N.等人(1994),上文；综述于Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101；Lonberg,N.和Huszar, D. (1995) Intern.Rev. Immunol.13: 65-93,和Harding, F.和Lonberg,N. (1995) Ann.N.Y.Acad.Sci.764:536-546)。制备和使用HuMab小鼠和通过此类小鼠携带的基因组修饰进一步描述于Taylor, L.等人(1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295；Chen, J.等人, (1993) International Immunology 5: 647-656；Tuaillon等人(1993) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:3720-3724；Choi等人(1993) Nature Genetics 4:117-123；Chen, J.等人(1993) EMBO J. 12: 821-830；Tuaillon等人(1994)Immunol.152:2912-2920；Taylor, L.等人(1994) International Immunology 6: 579-591；和Fishwild, D.等人(1996) Nature Biotechnology 14: 845-851。进一步参见美国专利号5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；和5,770,429；均属于Lonberg和Kay；Surani等人的美国专利号5,545,807；PCT 公开号 WO 92/03918、WO 93/12227、WO 94/25585、WO 97/13852、WO 98/24884和WO 99/45962, 均属于Lonberg和Kay；和Korman等人的PCR公开号WO 01/14424。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体使用携带转基因和转染色体上的人免疫球蛋白序列的小鼠诸如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠来产生。此类小鼠在本文称为“KM小鼠”，详细描述于Ishida等人的PCR公开WO 02/43478中。
仍进一步，表达人免疫球蛋白基因的可选转基因动物系统是本领域可获得的并且可用于产生本文所述的抗TIM3抗体。例如，可以使用称为Xenomouse (Abgenix, Inc.)的可选转基因系统；此类小鼠描述于例如Kucherlapati等人的美国专利号5,939,598；6,075,181；6,114,598；6,150,584和6,162,963。
此外，表达人免疫球蛋白基因的可选转染色体动物系统是本领域可获得的并且可用于产生本文所述的抗TIM3抗体。例如，可以使用称为“TC小鼠”的携带人重链转染色体和人轻链转染色体的小鼠；此类小鼠描述于Tomizuka等人(2000) Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:722-727。此外，本领域中已经描述了携带人重链和轻链转染色体的牛(Kuroiwa等人(2002) Nature Biotechnology 20:889-894)并且其可用于产生本文所述的抗TIM3抗体。
本领域中所述的用于产生人抗体（例如人抗TIM3抗体）的另外的小鼠系统包括：(i)VELOCLMMUNE® 小鼠(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)，其中已经经同源重组用可操作地连接至内源小鼠恒定区的人重链和轻链可变区替代内源小鼠重链和轻链可变区，使得在小鼠中产生嵌合抗体（人V/小鼠C），并随后使用标准重组DNA技术转换为完全人抗体；和(ii) MEMO®小鼠(Merus Biopharmaceuticals, Inc.)，其中小鼠包含未重排的人重链可变区但单一重排的人共同轻链可变区。此类小鼠及其产生抗体的用途描述于例如WO2009/15777、US 2010/0069614、WO 2011/072204、WO 2011/097603、WO 2011/163311、WO2011/163314、WO 2012/148873、US 2012/0070861和US 2012/0073004。
本文所述的人单克隆抗TIM3抗体还可以使用用于筛选人免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法来制备。用于分离人抗体的此类噬菌体展示方法在本领域中已建立。参见例如：Ladner等人的美国专利号5,223,409；5,403,484；和5,571,698；Dower等人的美国专利号5,427,908和5,580,717；McCafferty等人的美国专利号5,969,108和6,172,197；和Griffiths等人的美国专利号5,885,793；6,521,404；6,544,731；6,555,313；6,582,915和6,593,081。
本文所述的人单克隆抗TIM3抗体也可以使用SCID小鼠来制备，已经将人免疫细胞重构入所述SCID小鼠，使得免疫后可以产生人抗体应答。此类小鼠描述于例如Wilson等人的美国专利号5,476,996和5,698,767中。
XI.A.免疫
为了产生针对TIM3的完全人抗体，可以用TIM3抗原的纯化或富集制剂和/或表达TIM3或其片段的细胞免疫含有人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体小鼠（例如HCol2、HCo7或KM小鼠），如例如由Lonberg等人, (1994) Nature 368(6474): 856-859；Fishwild等人,(1996) NatureBiotechnology 14: 845-851和WO 98/24884对于其他抗原所述。可选地，可以用编码人TIM3或其片段的DNA免疫小鼠。在一些实施方案中，小鼠在第一次输注时可以为6-16周龄。例如，重组TIM3抗原的纯化的或富集的制备物(5-50 µg)可用于腹膜内免疫HuMAb小鼠。在使用纯化的或富集的TIM3抗原制备物免疫不产生抗体的情况中，还可以用表达TIM3的细胞例如细胞系免疫小鼠以促进免疫应答。示例性细胞系包括过表达TIM3的稳定CHO和Raji细胞系。
用各种抗原的经验累积已显示用在Ribi氏佐剂中的抗原腹膜内（IP）或皮下（SC）初始免疫随后每隔一周用Ribi氏佐剂中的抗原IP/SC免疫（最高至总共10次）时，HuMAb转基因小鼠应答最好。免疫应答可以随免疫方案过程用通过框后出血获得的血浆样品来监测。血浆可以通过ELISA和FACS（如下文所述）来筛选并且具有抗TIM3人免疫球蛋白的足够滴度的小鼠可用于融合。可以在处死并移除脾和淋巴结前3天用抗原静脉内对小鼠加强。预期对于每一免疫可能需要进行2-3次融合。对于每一抗原通常免疫6-24只小鼠。通常，使用HCo7、HCol2和KM品系。此外，HCo7和HCol2转基因可以一同繁殖为具有两种不同人重链转基因(HCo7/HCol2)的单一小鼠。
XI.B.生产针对TIM3的单克隆抗体的杂交瘤的产生
为了产生生产本文所述的人单克隆抗TIM3抗体的杂交瘤，可以从经免疫的小鼠分离脾细胞和/或淋巴结细胞并融合至合适的无限增殖化细胞系，诸如小鼠骨髓瘤细胞系。可以针对抗原-特异性的抗体的生产，筛选得到的杂交瘤。例如，来自经免疫的小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬浮液可以用PEG融合至Sp2/0非分泌小鼠骨髓瘤细胞(ATCC, CRL 1581)。可以将细胞铺板在平底微量滴定板中，然后在选择性培养基中孵育。几周后，细胞可以在培养基中培养。各个孔可以随后通过用于人单克隆IgM和IgG抗体的ELISA来筛选。一旦出现大量杂交瘤生长，通常在10-14天后可以观察培养基。将分泌抗体的杂交瘤再铺板，再次筛选，并且如果仍对于人IgG为阳性，则可以通过有限稀释将单克隆抗体亚克隆至少两次。稳定的亚克隆可以随后体外培养以在组织培养基中产生少量的抗体用于表征。
为了纯化人单克隆抗体，所选的杂交瘤可以在两升旋转瓶(spinner-flask)中生长用于单克隆抗体纯化。可以将上清液过滤并浓缩，随后用蛋白A-琼脂糖(Pharmacia,Piscataway, N.J.)亲和层析。洗脱的IgG可以通过凝胶电泳和高效液相层析检查以确保纯度。可以将缓冲液交换至PBS并可以使用1.43消光系数通过OD280测定浓度。可以将单克隆抗体进行等分并存储。
XI.C.生产针对TIM3的单克隆抗体的转染瘤的产生
可以使用例如如本领域熟知的重组DNA技术和基因转染方法的组合在宿主细胞转染瘤中产生抗体(Morrison, S. (1985) Science 229: 1202)。
例如，为了表达抗体或其抗体片段，可以通过标准分子生物学技术（例如，使用表达目标抗体的杂交瘤的PCR扩增或cDNA克隆）获得编码部分或全长轻链和重链的DNA，并且可以将DNA插入表达载体中，从而将基因可操作地连接至转录和翻译控制序列。在本上下文中，术语“可操作地连接”旨在意指将抗体基因连接入载体内使得载体内的转录和翻译控制序列行使其调节转录和翻译抗体基因的预期功能。选择表达载体和表达控制序列以与所用的表达宿主细胞相容。可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入单独的载体或者将两个基因插入同一表达载体。通过标准方法（例如，抗体基因片段和载体上的互补性限制位点连接或平端连接（如果不存在限制性位点的话））将抗体基因插入表达载体中。本文所述的抗TIM3抗体的轻链和重链可变区可用于产生任何抗体同种型的全长抗体基因，其通过将它们插入已经编码期望的同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体内，使得VH区段可操作地连接至载体内的CH区段并且VL区段可操作地连接至载体内的CL区段。
另外地或可选地，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的单一肽。可以将抗体链基因克隆入载体中，使得单一肽框内连接至抗体链基因的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽（即来自非免疫球蛋白蛋白的信号肽）。
在示例性实施方案中，可以使用来自人抗体重链和轻链的以下信号肽：MDWTWRVFCLLAVAPGAHS (SEQ ID NO: 267)；METPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 268)；MKHLWFFLLLVAAPRWVLS (SEQ ID NO: 269)；MEFGLSWVFLVAIIKGVQC (SEQ ID NO: 270)；MDMRVPAQLLGLLLWLPGARC (SEQ ID NO: 271)或MRAWIFFLLCLAGRALA (SEQ ID NO: 361)。在一个具体实施方案中，用于表达本文所述的任何一种抗TIM3抗体的信号序列是SEQ ID NO:361。抗TIM3抗体的重链和轻链可以和与各个链连接的相应信号序列在它们自其克隆的杂交瘤中表达。以下是它们自其克隆的杂交瘤中存在的各种抗TIM3抗体的信号序列，所述信号序列可用于表达相同抗体或另一种抗体：
(i)13A3 VH信号序列的氨基酸序列:
(ii) 13A3 VH信号序列的核酸序列:
(iii) 13A3 VL信号序列的氨基酸序列:
(iv) 13A3 VL信号序列的核酸序列:
(v) 8B9 VH信号序列的氨基酸序列:
(vi) 8B9 VH信号序列的核酸序列:
(vii) 8B9 VL信号序列的氨基酸序列:
(viii) 8B9 VL信号序列的核酸序列:
(ix) 8C4 VH信号序列的氨基酸序列:
(x) 8C4 VH信号序列的核酸序列:
(xi) 8C4 VL信号序列的氨基酸序列:
(xii) 8C4 VL信号序列的核酸序列:
(xiii) 17C3 VH信号序列的氨基酸序列:
(xiv) 17C3 VH信号序列的核酸序列:
(xv) 17C3 VL信号序列的氨基酸序列:
(xvi) 17C3 VL信号序列的核酸序列:
(xvii) 9F6 VH信号序列的氨基酸序列:
(xviii) 9F6 VH信号序列的核酸序列:
(xix) 9F6 VL1信号序列的氨基酸序列:
(xx) 9F6 VL1信号序列的核酸序列:
(xxi) 9F6 VL2和VL3信号序列的氨基酸序列:
(xxii) 9F6 VL2和VL3信号序列的核酸序列:
(xxiii) 3G4 VH信号序列的氨基酸序列:
(xxiv) 3G4 VH信号序列的核酸序列:
(xxv) 3G4 VL信号序列的氨基酸序列:
(xxvi) 3G4 VL信号序列的核酸序列:
(xxvii) 17C8 VH信号序列的氨基酸序列:
(xxviii) 17C8 VH信号序列的核酸序列:
(xxix) 17C8 VL信号序列的氨基酸序列:
(xxx) 17C8 VL信号序列的核酸序列:
。
在另一个实施方案中，抗TIM3抗体（例如，TIM3.2至TIM3.18）的重链和轻链可以用信号序列工程化，所述信号序列不同于它们自其克隆的杂交瘤中存在的信号序列。此类序列的实例包括但不限于下列：
（i）重链的信号序列的核酸序列：
（ii）轻链的信号序列的核酸序列：
（iii）重链和轻链的信号序列的氨基酸序列：MRAWIFFLLCLAGRALA (SEQ ID NO: 361)。
除了抗体链基因外，重组表达载体可以携带控制抗体链基因在宿主细胞中表达的调节序列。术语“调节序列”意欲包括启动子、增强子及其他表达控制元件（例如多腺苷酸化信号），其控制抗体链基因的转录或翻译。此类调节序列例如描述于Goeddel (GeneExpression Technology.Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego,CA (1990))。本领域技术人员将理解设计表达载体包括选择调节序列可以依赖于作为待转化的宿主细胞的选择的此类因子、期望蛋白的表达水平等。优选的用于哺乳动物宿主细胞表达的调节序列包括指导哺乳动物细胞中高水平蛋白表达的病毒元件，诸如衍生自巨细胞病毒（CMV）、猿猴病毒40（SV40）、腺病毒（例如，腺病毒主要晚期启动子（AdMLP）和多瘤病毒）的启动子和/或增强子。可选地，可以使用非病毒调节序列，诸如泛素启动子或β-珠蛋白启动子。还进一步，调节元件由来自不同来源的序列构成，诸如SRa启动子系统，其包含来自SV40早期启动子的序列和人T细胞白血病病毒1型的长末端重复(Takebe, Y.等人(1988)Mol.Cell.Biol.8:466-472)。
除抗体链基因和调节序列之外，重组表达载体可以携带另外的序列，例如调节宿主细胞中的载体复制的序列（例如复制起点）和可选标记基因。可选标记基因促进选择其中已引入载体的宿主细胞(参见例如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017，均属于Axel等人)。例如，通常可选标记基因赋予其中已引入载体的宿主细胞对药物诸如G418、潮霉素或甲氨蝶呤的抗性。优选的可选标记基因包括二氢叶酸还原酶（DHFR）基因（用于用甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞）和neo基因（用于G418选择）。
为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染入宿主细胞。各种形式的术语"转染"意欲涵盖通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞内的广泛多样的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。
尽管理论上可以在原核或真核宿主细胞中表达本文所述的抗TIM3抗体，但在真核细胞且最优选在哺乳动物宿主细胞中表达抗体是最优选的，因为此类真核细胞特别是哺乳动物细胞比原核细胞更可能装配和分泌正确折叠且免疫学有活性的抗体。已报道抗体基因的原核表达无法有效产生高产量的活性抗体(Boss, M. A.和Wood, C. R. (1985)Immunology Today 6: 12-13)。
用于表达本文所述的重组抗TIM3抗体的某些哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞) (包括dhfr- CHO细胞，其描述于Urlaub 和Chasin (1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220，与DHRF可选标记一同使用，例如如描述于R. J.Kaufman和P. A. Sharp (1982) Mol.Biol.759:601-621)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。具体地，与NSO骨髓瘤细胞使用，另一表达系统是描述于WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841中的GS基因表达系统。当将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞时，通过将宿主细胞培养足以允许抗体在宿主细胞中表达或更优选地分泌抗体至宿主细胞生长的培养基中的时期来产生抗体。抗体可以使用标准蛋白纯化方法从培养基中回收。
XII. 测定
可以通过例如标准ELISA测试本文所述的抗TIM3抗体与人TIM3的结合。简而言之，用纯化的TIM3包被微量滴定板，然后用牛血清白蛋白封闭。将抗体稀释液（例如，来自TIM3免疫小鼠的血浆稀释液）加入每个孔中并孵育。洗涤平板并与缀合至辣根过氧化物酶（HRP）的第二试剂（例如，对于人抗体，山羊抗人IgG Fc特异性多克隆试剂）一起孵育。洗涤后，可以将板显影并用分光光度计分析。来自经免疫小鼠的血清可以随后进一步通过流式细胞术筛选与表达人TIM3的细胞系结合但不与不表达TIM3的对照细胞系结合。简而言之，可以通过将表达TIM3的CHO细胞与抗TIM3抗体孵育来评估抗TIM3抗体的结合。可以洗涤细胞并且可以用抗人IgG Ab检测结合。可以使用FACScan流式细胞术(Becton Dickinson, San Jose,CA)进行流式细胞术分析。产生最高滴度的小鼠可用于融合。
上文所述的ELISA测定可用于筛选抗体并且因此筛选产生显示与TIM3免疫原的阳性反应性的抗体的杂交瘤。产生以高亲和力结合TIM3的抗体的杂交瘤可随后进行亚克隆并进一步表征。来自每一杂交瘤的一个克隆（其保留亲本细胞的反应性（通过ELISA））可以选择用于产生细胞库和抗体纯化。
为了纯化抗TIM3抗体，可以培养选择的杂交瘤用于单克隆抗体纯化。可以在亲和层析之前过滤并浓缩上清液。洗脱的IgG可以通过凝胶电泳和高效液相层析检查以确保纯度。可以交换缓冲溶液，并且可以确定浓度。可以将单克隆抗体进行等分并存储。
为了确定所选的抗TIM3单克隆抗体是否结合独特表位，可以将每一抗体使用可商购试剂(Pierce, Rockford, IL)进行生物素化。生物素化的MAb结合可以用链霉抗生物素标记的探针检测。使用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体的竞争研究可以使用如上所述的TIM3包被的ELISA板进行。
为了确定纯化抗体的同种型，可以使用对于特定同种型的抗体特异性的试剂进行同种型ELISA。例如，为了确定人单克隆抗体的同种型，可以将微量滴定板的孔用1µg/ml的抗人免疫球蛋白在4℃包被过夜。用1% BSA封闭后，将板与1µg/ml或更少的测试单克隆抗体或纯化的同种型对照在室温下反应1至2小时。孔随后可以与人IgG1或人IgM特异性的碱性磷酸酶缀合的探针反应。将板显色并如上所述分析。
为了测试单克隆抗体与表达TIM3的活细胞的结合，可以使用流式细胞术，如实施例中所述。简言之，将表达膜结合的TIM3的细胞系（在标准生长条件下生长）与各种浓度的在含0.1% BSA的PBS中的单克隆抗体在4℃下混合1小时。洗涤后，将细胞与荧光素标记的抗IgG抗体在如一级抗体染色的相同条件下反应。样品可以通过FACScan仪器使用光和侧散射性质分析以门控单细胞，并且测定经标记抗体的结合。（除了流式细胞术测定之外，或代替流式细胞术）使用荧光显微术的可选测定可以使用。细胞可如上所述准确染色并通过荧光显微术来检查。该方法允许个别细胞的显色，但取决于抗原密度，可能具有减少的灵敏度。
抗TIM3抗体可以进一步通过蛋白质印迹测试与TIM3抗原的反应性。简言之，来自表达TIM3的细胞的细胞提取物可以制备并进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后，将分离的抗原转移至硝酸纤维素膜，用20%小鼠血清封闭，并用待测试的单克隆抗体探测。IgG结合可以使用抗IgG碱性磷酸酶检测并且用BCIP/NBT底物片剂(Sigma Chem.Co.,St. Louis, MO)来显色。
用于分析各种抗TIM3抗体的结合亲和力、交叉反应性和结合动力学的方法包括本领域已知的标准测定，例如，Biacore™表面等离子共振(SPR)分析，其使用Biacore™ 2000SPR仪器(Biacore AB, Uppsala, Sweden)。
可以使用多种测定来表征抗TIM3抗体的生物活性（其可以用于例如比较不同的抗TIM3抗体），所述测定例如本文所述的那些：
（1）T细胞活化测定，例如使用从人供体的PBMC获得的纯化T细胞的测定。可以用总T细胞或其亚群例如Th1细胞、T细胞毒性细胞、Treg细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞（条件是它们表达TIM3）进行测定。可以通过测定某些细胞因子（例如干扰素-γ或IL-2）的分泌水平或T细胞的增殖水平来测量活化。不希望受限于特定的作用机制，TIM3抗体与T细胞上TIM3的结合可能阻止TIM3与TIM3配体的结合（TIM3推定的配体包括半乳凝集素-9、HMGB1、Semaphorin-4A、CEACAM-1、ILT-4和磷脂酰丝氨酸），从而阻止T细胞中TIM3介导的信号传导，从而防止TIM3对T细胞的负调节。在实施例中提供了示例性测定，包括Th1测定、TIL测定和混合淋巴细胞反应（MLR）；
（2）测量巨噬细胞例如M1或M2巨噬细胞刺激的测定；和
（3）测量来自TIM3阳性骨髓细胞的髓样相关细胞因子（例如 TNFα、IL-1β、GM-CSF、IL-6、IL-2、IL-10、CCL2、CCL3、CCL4或CCL5）的分泌的测定。在某些实施方案中，抗TIM3抗体刺激TNFα、IL-1β、GM-CSF、IL-6和IL-2的分泌和/或抑制TIM3阳性骨髓细胞中IL-10、CCL2、CCL3、CCL4或CCL5的分泌。
通常，用于测试抑制免疫应答的药剂的生物活性的任何方法可用于表征抗TIM3抗体的生物活性，例如与TIM3有关的文献（包括专利和专利申请）中描述的那些。
XIII.免疫缀合物、抗体衍生物和诊断
本文所述的抗TIM3抗体可用于诊断目的，包括样品测试和体内成像，并且为此目的，可将抗体（或其结合片段）缀合至合适的可检测试剂，以形成免疫缀合物。出于诊断目的，适当的试剂是可检测标记，其包括放射性同位素（用于全身成像）以及放射性同位素、酶、荧光标记和用于样品测试的其他合适的抗体标签。
可与本文所述的任何TIM3抗体连接的可检测标记可以是目前体外诊断领域中使用的各种类型的任一种，包括颗粒标记，包括金属溶胶，例如胶体金、同位素例如用例如N2S2、N3S或N4 类型的肽螯合剂呈现的I125或Tc99、发色团包括荧光标记、发光标记、磷光标记等，以及将给定底物转化为可检测标记的酶标记，以及扩增（例如通过聚合酶链式反应）后显示的多核苷酸标签。合适的酶标记包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。例如，标记可以是酶碱性磷酸酶，其通过测量1,2-二氧杂环丁烷底物例如金刚烷基甲氧基磷酰氧基苯基二氧杂环丁烷(AMPPD)、3-(4-(甲氧基螺{l,2-二氧杂环丁烷-3,2'-(5'-氯)三环{3.3.1.1 3,7}癸烷}-4-基)苯基膦酸二钠(CSPD)以及CDP和CDP-star®或本领域技术人员熟知的其他发光底物，例如合适的镧系元素如铽（III）和铕（III）的螯合物转化后的化学发光的存在或形成来检测。检测装置由所选标记决定。标记或其反应产物的外观可以使用肉眼（在标记是颗粒并且以适当的水平累积的情况下）或者使用仪器诸如分光光度计、发光计、荧光计等实现，均根据标准惯例。
在一些实施方案中，缀合方法产生实质上（或几乎）无免疫原性的键，例如肽键（即酰胺键）、硫化物键、（空间位阻的键）、二硫化物键、腙键和醚键。这些键是几乎无免疫原性的并且在血清内显示出合理的稳定性（参见例如Senter, P. D.,Curr.Opin.Chem.Biol.13 (2009) 235-244；WO 2009/059278；WO 95/17886)。
取决于部分和抗体的生物化学性质，可以采用不同的缀合策略。如果所述部分是天然存在的或重组的50至500个氨基酸，则在教科书中有标准程序描述蛋白缀合物的合成化学，本领域技术人员可以容易地遵循该程序（参见例如Hackenberger, C. P. R.,和Schwarzer, D., Angew.Chem.Int. Ed.Engl. 47 (2008) 10030-10074)。在一个实施方案中，使用马来酰亚胺基团与抗体或部分内的半胱氨酸残基的反应。在例如使用抗体的Fab或Fab'片段的情况下，这是特别适合的偶联化学。可选地，在一个实施方案中，进行与抗体或部分的C末端偶联。蛋白（例如Fab片段）的C末端修饰可以如所述进行(Sunbul, M.和Yin,J., Org.Biomol.Chem.7 (2009) 3361-3371)。
通常，位点特异性反应和共价偶联基于将天然氨基酸转化为具有与存在的其他官能团的反应性正交的反应性的氨基酸。例如，稀有序列环境中的特定半胱氨酸可以在醛中酶促转化（参见Frese, M. A.,和Dierks, T., ChemBioChem.10 (2009) 425-427)。通过在给定的序列环境中利用某些酶与天然氨基酸的特异性酶促反应性，也可以获得所需的氨基酸修饰（参见，例如Taki, M.等人, Prot.Eng. Des.Sel.17 (2004) 119-126；Gautier, A.等人Chem.Biol.15 (2008) 128-136；以及由Bordusa, F., Highlights in BioorganicChemistry (2004) 389-403使用的C— N键的蛋白酶催化的形成)。通过末端氨基酸与适当的修饰试剂的选择性反应也可以实现位点特异性反应和共价偶联。
N-末端半胱氨酸与苯甲腈的反应性（参见Ren, H.等人, Angew. Chem.Int. Ed.Engl. 48 (2009) 9658-9662)可用于实现位点特异性共价偶联。
天然化学连接也可依赖于C-末端半胱氨酸残基(Taylor, E. Vogel；Imperiali,B, Nucleic Acids and Molecular Biology (2009), 22 (Protein Engineering), 65-96)。
US6437095 B1描述了一种缀合方法，其基于一段带负电荷的氨基酸内的半胱氨酸与位于一段带正电荷的氨基酸中的半胱氨酸的更快反应。
该部分也可以是合成肽或肽模拟物。在化学合成多肽的情况下，可以在这种合成过程中掺入具有正交化学反应性的氨基酸（参见例如de Graaf, A. J.等人,Bioconjug.Chem.20 (2009) 1281-1295)。由于多种正交官能团处于关键(at stake)并且可以引入合成肽中，因此这种肽与接头的缀合是标准化学。
为了获得单标记的多肽，可以通过色谱法从其他缀合副产物中分离具有1：1化学计量的缀合物。通过使用染料标记的结合对成员和带电接头可以促进该过程。通过使用这种标记的和高度带负电荷的结合对成员，单缀合多肽易于与未标记的多肽和携带多于一个接头的多肽分离，这是因为电荷和分子量的差异可用于分离。荧光染料可用于从未结合的组分如标记的单价粘合剂中纯化复合物。
在一个实施方案中，与抗TIM3抗体连接的部分选自结合部分、标记部分和生物活性部分。
本文所述的抗TIM3抗体还可以与治疗剂缀合以形成免疫缀合物，例如抗体-药物缀合物（ADC）。合适的治疗剂包括抗代谢物、烷化剂、DNA小沟结合剂、DNA嵌入剂、DNA交联剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、核输出抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶I或II抑制剂、热休克蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素和抗有丝分裂剂。在ADC中，抗体和治疗剂优选通过可切割的接头例如肽基、二硫化物或腙接头缀合。在其他实施方案中，接头是肽基接头，例如Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Pro-Val-Gly-Val-Val (SEQ ID NO:300)、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Ala-Ala-Asn、Cit-Cit、Val-Lys、Lys、Cit、Ser或Glu。可以如美国专利号7,087,600；6,989,452和7,129,261；PCT公开WO 02/096910；WO 07/038658；WO 07/051081；WO 07/059404；WO 08/083312和WO 08/103693；美国专利公开20060024317；20060004081和20060247295中所述制备ADC。
抗TIM3抗体例如本文所述的那些，也可用于检测TIM3，例如人TIM3，例如组织或组织样品中的人TIM3。抗体可用于例如ELISA测定或流式细胞术。在某些实施方案中，使抗TIM3抗体与细胞（例如组织中的细胞）接触适合于发生特异性结合的时间，然后添加试剂，例如检测抗TIM3抗体的抗体。在实施例中提供了示例性测定。抗TIM3抗体可以是完全人抗体，或者它可以是嵌合抗体，例如具有人可变区和鼠恒定区或其部分的抗体。用于检测样品（细胞或组织样品）中的TIM3（例如人TIM3）的示例性方法包括（i）使样品与抗TIM3抗体接触足够的时间以允许抗TIM3抗体与样品中的TIM3特异性结合，和（2）使样品与特异性结合抗TIM3抗体（诸如结合抗TIM3抗体的Fc区）的检测试剂（例如抗体）接触，从而检测由抗TIM3抗体结合的TIM3。在与抗体和/或检测试剂孵育后，可以包括洗涤步骤。用于这些方法的抗TIM3抗体不必与标记或检测剂连接，因为可以使用单独的检测剂。
抗TIM3抗体的其他用途，例如作为单一疗法或组合疗法，在本文其他地方提供，例如在与组合治疗有关的部分中。
XIV. 双特异性分子
本文所述的抗TIM3抗体可用于形成双特异性分子。抗TIM3抗体或其抗原结合部分可以衍生化或连接至另一功能分子，例如另一肽或蛋白（例如另一抗体或受体的配体）以产生结合至少两个不同结合位点或靶分子的双特异性分子。例如，抗TIM3抗体可以与抗体或scFv连接，所述抗体或scFv特异性结合可以用作组合治疗的潜在靶标的任何蛋白，例如本文所述的蛋白（例如针对PD-1、PD-L1、GITR或LAG-3的抗体）。本文所述的抗体可以实际上衍生化或连接至多于一种其他功能分子以产生结合多于两种不同结合位点和/或靶分子的双特异性分子；此类双特异性分子也旨在被如本文所用的术语“双特异性分子”所涵盖。为了产生本文所述的双特异性分子，本文所述的抗体可以功能性连接（例如通过化学偶联、基因融合、非共价连接或其他方式）至一种或多种其他结合分子，诸如另一抗体、抗体片段、肽或结合模拟物，从而产生双特异性分子。
因此，本文提供包含至少对于TIM3的第一结合特异性和对于第二靶表位的第二结合特异性的双特异性分子。在其中双特异性分析是多特异性的本文所述的一个实施方案中，分子可以进一步包含第三结合特异性。
在一个实施方案中，本文所述的双特异性分子包含至少一种抗体或其抗体片段作为结合特异性，包括例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或单链Fv (scFv)。抗体还可以是轻链或重链二聚体或其任何最小片段，诸如Fv或单链构建体，如描述于Ladner等人美国专利号4,946,778。
尽管优选人单克隆抗体，但可用于本文所述的双特异性分子的其他抗体是鼠、嵌合和人源化单克隆抗体。
本文所述的双特异性分子可以通过使用本领域已知的方法缀合成分结合特异性来制备。例如，双特异性分子的每一结合特异性可以单独产生并随后彼此缀合。当结合特异性为蛋白或肽时，多种偶联或交联剂可用于共价缀合。交联剂的实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯 (SATA)、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (DTNB)、邻亚苯基二马来酰亚胺 (oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯 (SPDP)和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸磺基琥珀酰亚胺酯 (磺基-SMCC) (参见例如Karpovsky等人(1984) J. Exp.Med.160: 1686；Liu, MA等人(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。其他方法包括描述于以下中的那些：Paulus (1985)Behring Ins.Mitt.No. 78, 118-132；Brennan等人(1985) Science 229:81-83)和Glennie等人(1987) J. Immunol.139: 2367-2375)。一些缀合剂为SATA和磺基-SMCC，均可得自Pierce Chemical Co. (Rockford, IL)。
当结合特异性为抗体时，它们经两条重链的C末端铰链区的巯基键合进行缀合。在具体的实施方案中，铰链区经修饰以在缀合前包含奇数数目的巯基残基，优选一个。
可选地，两种结合特异性可以在相同的载体中编码并且在相同的宿主细胞中表达并装配。该方法尤其可用于双特异性分子为mAb x mAb、mAb x Fab、mAb x (scFv)2、Fab xF(ab')2或配体x Fab融合蛋白的情况。双特异性抗体可包括在每条重链的C末端包含scFv的抗体。本文所述的双特异性分子可以是包含一个单链抗体和结合决定簇的单链分子或包含两种结合决定簇的单链双特异性分子。双特异性分子可以包含至少两个单链分子。制备双特异性分子的方法描述于例如美国专利号5,260,203；美国专利号5,455,030；美国专利号4,881,175；美国专利号5,132,405；美国专利号5,091,513；美国专利号5,476,786；美国专利号5,013,653；美国专利号5,258,498；和美国专利号5,482,858。
双特异性分子与其特定靶标的结合可以使用本领域公认的方法确认，例如酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、FACS分析、生物测定（例如，生长抑制）或蛋白质印迹测定。这些测定的每一种通常通过采用对于目标复合物特异性的经标记的试剂（例如抗体）来检测特定目标蛋白-抗体复合物的存在。
XV. 组合物
还提供了组合物，例如药物组合物，其含有连同药学上可接受的载体一起配制的抗TIM3抗体中的一种或组合或其与本文所述的针对其他靶标的抗体或其抗原结合部分的组合。此类组合物可以包含（例如两种或多种不同）抗体或免疫缀合物或本文所述的双特异性分子的一种或组合。例如，本文所述的药物组合物可以包含结合靶抗原上的不同表位或者具有互补活性的抗体（或免疫缀合物或双特异性分子）的组合。
在某些实施方案中，组合物包含抗TIM3抗体，浓度为至少1 mg/ml、5 mg/ml、10mg/ml、50 mg/ml、100 mg/ml、150 mg/ml、200 mg/ml，1-300 mg/ml或100-300 mg/ml。
本文所述的药物组合物还可以以组合疗法即与其他药剂组合施用。例如，组合疗法可以包括组合有至少一种其他抗癌剂和/或免疫调节剂例如T细胞刺激（例如活化）剂的本文所述的抗TIM3抗体。可用于组合疗法中的治疗剂的实例更详细地描述于下文关于使用本文所述的抗TIM3抗体的部分中。
在一些实施方案中，本文公开的治疗组合物可以包括用于治疗癌症的其他化合物、药物和/或药剂。此类化合物、药物和/或药剂可以包括例如化疗药物、小分子药物或刺激对给定癌症的免疫应答的抗体。在一些情况下，治疗组合物可包含例如以下的一种或多种：抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗OX40（也称为CD134、TNFRSF4、ACT35和/或TXGP1L）抗体、抗CD137抗体、抗LAG-3抗体、抗GITR抗体或其任何组合。
如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、涂料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等，其是生理学上相容的。在一些实施方案中，载体适合于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊椎或表皮施用（例如通过注射或输注）。取决于施用途径，活性化合物即抗体、免疫缀合物或双特异性分子可以包被在材料中以保护所述化合物免于酸和其他可能失活化合物的天然条件的作用。
本文所述的药物化合物可以包括一种或多种药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”指保留母体化合物的期望的生物活性且不产生任何不想要的毒性作用的盐(参见例如Berge, S.M.,等人(1977) J. Pharm.Sci.66: 1-19)。此类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等的酸加成盐以及衍生自无毒有机酸诸如脂族一元和二元羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳族酸、脂族磺酸和芳族磺酸等的酸加成盐。碱加成盐包括衍生自碱土金属诸如钠、钾、镁、钙等的碱加成盐以及衍生自无毒有机胺诸如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等的碱加成盐。
本文所述的药物组合物还可以包含药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：（1）水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；（2）油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚（BHA）、丁基羟基甲苯（BHT）、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和（3）金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
可用于本文所述的药物组合物的合适的含水和非含水载体的实例包括水、乙醇、多元醇（诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等）及其合适的混合物，植物油诸如橄榄油和可注射有机酯诸如油酸乙酯。可以例如通过使用涂覆材料诸如卵磷脂，通过在分散剂的情况下维持期望的颗粒大小和通过使用表面活性剂，维持适当的流动性。
这些组合物也可含有佐剂，诸如防腐剂、湿润剂、乳化剂及分散剂。可以如下确保防止微生物的存在： 通过如上的消毒程序，和通过包括不同的抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等。也可希望将等渗剂(如糖、氯化钠等)包含入组合物中。另外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达到。
药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。使用此类介质和试剂用于药学上有活性的物质是本领域已知的。除了与活性化合物不相容的任何常规介质或试剂范围之外，其在本文所述的药物组合物中的使用均被考虑。药物组合物可包含防腐剂或可不含防腐剂。还可以将补充性活性化合物掺入组合物中。
治疗组合物通常必须是无菌的且在制造和储存的条件下是稳定的。组合物可以配制为溶液、微乳液、脂质体或其他适合于高药物浓度的有序结构。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇、和液体聚乙二醇等）及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用涂料诸如卵磷脂，通过在分散的情况下维持期望的颗粒大小和通过使用表面活性剂，维持适当的流动性。在许多情况下，组合物可以包含等渗剂，例如组合物中的蔗糖、多元醇诸如甘露醇、山梨醇、或氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸盐和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。
无菌的可注射溶液可以通过将活性化合物以需要的量掺入具有上文列举的成分的一种或其组合的合适的溶剂中（如需要，随后为灭菌微滤）来制备。通常，通过将活性化合物掺入含有基础分散介质和来自本文列举的那些的所需其他成分的无菌媒介物中来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，一些制备方法是真空干燥和冷冻干燥（冻干），其产生来自其先前无菌过滤溶液的活性成分加上任何另外的所需成分的粉末。
可与载体物质组合以产生单一剂型的活性组分的量将取决于所治疗主体和具体施用模式而不同。可以与载体物质组合以产生单一剂型的活性成分的量通常为产生治疗学效果的化合物的量。通常，在百分之百中，该量范围为约0.01％至约99%的活性成分、约0.1％至约70％、或约1％至约30％的活性成分与药学上可接受的载体的组合。
给药方案进行调整以提供最佳的期望应答（例如，治疗性应答）。例如，可以施用单次大剂量，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以如治疗情况的紧急性所示按比例减少或增加剂量。为了容易施用和剂量的一致性，尤其有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物。如本文所用的剂量单位形式指适合作为用于待治疗的主体的单一剂量的物理上分离的单位(physically discrete units)；每一单位含有经计算产生期望的治疗效果的预定量的活性化合物和必需的药物载体。对本文所述的剂量单位形式的规格由（a）活性化合物的独特特征和待实现的具体治疗效果以及（b）在针对个体的治疗敏感性调配此类活性化合物的领域中固有的限制所指明且直接取决于它们。
对于例如本文所述的抗TIM3抗体的施用，剂量范围为约0.0001至100mg/kg、且更通常为0.01至5或10mg/kg的宿主体重。例如，剂量可以为0.3 mg/kg体重、1 mg/kg体重、3mg/kg体重、5 mg/kg体重或10 mg/kg体重或在1-10 mg/kg的范围内。示例性治疗方案包括每周施用一次、每两周施用一次、每三周施用一次、每四周施用一次、每月一次、每3个月一次或每3-6个月一次。本文所述的抗TIM3抗体的示例性剂量方案包括通过静脉内施用的1mg/kg体重或3mg/kg体重，且使用以下给药时间表之一给予抗体：（i）每四周给药六次剂量，然后每三个月；（ii）每三周；（iii）3mg/kg体重一次，然后为每3周1mg/kg体重。
抗TIM3抗体可以以统一剂量（统一剂量方案）施用。在其他实施方案中，抗TIM3抗体可以以固定剂量与另一种抗体一起施用。在某些实施方案中，抗TIM3抗体以基于体重的剂量施用。
在一些方法中，具有不同结合特异性的两种或多种单克隆抗体同时施用，在这种情况下施用的每一抗体的剂量落入所示范围内。抗体通常在多次时机施用。单一剂量之间的间隔例如可以是每周、每月、每三个月或每年。间隔也可以是不规律的，如测量患者中针对靶抗原的抗体的血液水平所示。在一些方法中，调节剂量以实现约1-1000 μg/ml且在一些方法中约25-300 μg/ml的血浆抗体浓度。
可以在另一种抗体的给药方案下将抗TIM3抗体与另一种抗体一起施用。例如，抗TIM3抗体可以与抗PD-1抗体如纳武单抗(OPDIVO®)每两周作为经60分钟的i.v.输注一起施用，直至疾病进展或不可接受的毒性发生。抗TIM3抗体可以与派姆单抗(KEYTRUDA®)每3周经30分钟的i.v.输注一起施用，直至疾病进展或不可接受的毒性发生。抗TIM3抗体可以与阿特朱单抗(TECENTRIQTM)每3周经60或30分钟的i.v.输注一起施用，直至疾病进展或不可接受的毒性发生。
抗体可以作为缓释制剂施用，在这种情况下需要较低频率施用。剂量和频率取决于抗体在患者中的半衰期而不同。通常，人抗体显示最长的半衰期，随后为人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。施用的剂量和频率可以取决于治疗为预防性或治疗性的而不同。在预防性应用中，在长时期以相对稀少的间隔施用相对低剂量。一些患者持续接受治疗，持续其一生。在治疗性应用中，有时需要相对短时间间隔的相对高剂量，直到疾病进程减少或终止，且直到患者显示疾病症状的部分或完全改善。其后，可以向患者施用预防性方案。
本文所述的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变，从而获得这样的活性成分的量，其有效地实现对特定患者、组合物和施用模式而言的期望的治疗应答，而无对患者的毒性。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用的本文所述的具体组合物的活性、其酯、盐或酰胺、施用途径、施用时间、所用的具体化合物的排泄速率、治疗持续时间、其他药物、与所用的具体组合物组合使用的化合物和/或材料，被治疗的患者的年龄、性别、体重、病况和一般健康和早期医疗史，和医疗领域熟知的类似因素。
本文所述的抗TIM3抗体的“治疗有效剂量”可以导致疾病症状严重性的降低、无疾病症状时期的频率和持续时间增加或防止由于疾病折磨所致的伤残或残疾。在癌症的情况下，治疗有效剂量可以导致存活例如总体存活增加和/或预防与癌症相关的身体症状的进一步恶化。癌症症状在本领域中是众所周知的，并且包括例如不正常的痣特征，包括不对称性、边界、颜色和/或直径在内的痣外观的改变，新染色的皮肤区域、异常的痣、指甲下的变黑区域、乳房肿块、乳头变化、乳房囊肿、乳房疼痛、死亡、体重减轻、无力、过度疲劳、进食困难、食欲不振、慢性咳嗽、呼吸困难加重、咳血、尿血、便血、恶心、呕吐、肝转移、肺转移、骨转移、腹部饱胀感、腹胀、腹腔积液、阴道出血、便秘、腹部膨大、结肠穿孔、急性腹膜炎（感染、发热、疼痛）、疼痛、吐血、大量出汗、发热、高血压、贫血、腹泻、黄疸、头晕、寒战、肌肉痉挛、结肠转移、肺转移、膀胱转移、肝转移、骨转移、肾转移和胰腺转移、吞咽困难等。
治疗有效剂量可以防止或延迟癌症发生，诸如可以在出现疾病的早期或初步体征时期望。用于癌症诊断的实验室测试包括化学（包括TIM3水平的测量）、血液学、血清学和放射学。因此，监测前述任一者的任何临床或生物化学测定可以用于确定特定治疗是否是治疗癌症的治疗有效剂量。本领域普通技术人员将能够基于此类因素诸如主体大小、主体症状的严重程度和具体组合物或所选施用途径来确定此类量。
本文所述的组合物可以使用本领域已知的多种方法的一种或多种经一种或多种施用途径来施用。如本领域技术人员将理解的，施用途径和/或模式将根据期望的结果而不同。用于本文所述的抗TIM3抗体的施用途径可以包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、脊椎或其他肠胃外施用途径，例如，通过注射或输注。如本文所用的短语“肠胃外施用”意指除肠内和局部施用外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
可选地，本文所述的抗体可以潜在地经非肠胃外途径使用，诸如施用的局部、表皮或粘膜途径，例如，鼻内、经口、阴道、直肠、舌下或局部地。
活性化合物可以与载体一同制备，所述载体将保护化合物免于快速释放，诸如受控释放制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化的递送系统。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、和聚乳酸。许多用于此类制剂制备的方法是获专利的或本领域技术人员通常已知的。参见例如Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems, J.R.Robinson, 编辑, Marcel Dekker,Inc., New York, 1978。
治疗组合物可以用本领域已知的医疗装置施用。例如，在具体的实施方案中，本文所述的治疗组合物可以用无针皮下注射装置施用，诸如公开于以下中的装置：美国专利号5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556。用于本文所述的抗TIM3抗体的众所周知的植入物和模块的实例包括：美国专利号4,487,603，其公开以控制速率分配药物的可植入微输注泵；美国专利号4,486,194，其公开用于经皮肤施用药物的治疗装置；美国专利号4,447,233，其公开以精确输注速率递送药物的药物输注泵；美国专利号4,447,224，其公开用于持续药物递送的变速流可植入输注设备；美国专利号4,439,196，其公开具有多室隔室的渗透药物递送系统；和美国专利号4,475,196，其公开渗透药物递送系统。这些专利通过引用并入本文。许多其他此类植入物、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体可以配制以确保体内合适分配。例如，血脑屏障（BBB）排除许多高亲水性化合物。为了确保本文所述的治疗化合物穿过BBB（如需要的话，例如对于脑癌），它们可以例如配制在脂质体中。对于制备脂质体的方法，参见例如美国专利号4,522,811；5,374,548；和5,399,331。脂质体可以包含选择性转运入特定细胞或器官因而增强靶向药物递送的一种或多种部分(参见例如V.V.Ranade (1989) J. Clin.Pharmacol.29:685)。示例性靶向部分包括叶酸或生物素（参见例如Low等人的美国专利5,416,016）；甘露糖苷(Umezawa等人, (1988) Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038)；抗体(P.G.Bloeman等人(1995) FEBS Lett.357: 140；M. Owais等人(1995)Antimicrob. Agents Chemother.39:180)；表面活性蛋白A受体(Briscoe等人(1995) Am. J. Physiol.1233: 134)；pl20 (Schreier等人(1994) J. Biol. Chem.269:9090)；还参见K. Keinanen；M.L.Laukkanen (1994) FEBS Lett.346: 123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994) Immunomethods 4:273。
XVI. 用途和方法
本文所述的抗体、抗体组合物和方法具有许多体外和体内效用，包括例如增强免疫应答，例如通过抑制（或拮抗）TIM3（例如信号传导）或检测TIM3。在一个实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体是人抗体。例如，本文所述的抗TIM3可以施用于培养中的细胞（体外或离体），或者施用于人主体（例如体内）以增强多种疾病中的免疫。因此，本文提供改变主体中的免疫应答的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合部分，使得主体中的免疫应答改变。在一些实施方案中，应答被增强、刺激或上调。
适用于本方法的主体包括需要增强免疫应答的人患者。该方法特别适用于治疗患有可通过增强免疫应答（例如T细胞介导的免疫应答，例如抗原特异性T细胞应答）治疗的病症的人患者。在具体的实施方案中，方法特别适合于体内治疗癌症。为了实现抗原特异性免疫增强，本文所述的抗TIM3抗体可以与目标抗原一同施用，或者抗原可以已经存在于待治疗的主体（例如，携带肿瘤或携带病毒的主体）中。当针对TIM3的抗体与另一药剂一同施用时，这两者可以分开或同时施用。
还涵盖的是用于检测样品中存在人TIM3抗原或测量人TIM3抗原的量的方法，其包括在允许所述抗体或其部分与人TIM3之间形成复合物的条件下，将样品和对照样品与特异性结合人TIM3的单克隆抗体例如人单克隆抗体或其抗原结合部分接触。随后检测复合物的形成，其中样品相比于对照样品之间复合物形成差别表明样品中存在人TIM3抗原。此外，本文所述的抗TIM3抗体可以用于经免疫亲和纯化来纯化人TIM3。
考虑到本文所述的抗TIM3抗体刺激或共刺激T细胞应答例如抗原特异性T细胞应答（诸如通过抑制TIM3的负作用）的能力，本文提供使用本文所述的抗TIM3抗体刺激、增强或上调抗原特异性T细胞应答例如抗肿瘤T细胞应答的体外和体内方法。在某些实施方案中，还提供CD3刺激（例如通过与表达膜CD3的细胞共孵育），该刺激可以在用抗TIM3抗体刺激的同时、之前或之后提供。例如，本文提供了刺激抗原特异性T细胞应答的方法，其包括使所述T细胞与本文所述的抗TIM3抗体接触，并任选地与抗CD3抗体接触，从而刺激抗原特异性T细胞应答。
抗原特异性T细胞应答的任何合适的指示物可用于测量抗原特异性T细胞应答。此类合适指示物的非限制性实例包括在抗体存在下增加的T细胞增殖和/或在抗体存在下增加细胞因子产生。在一些实施方案中，刺激由抗原特异性T细胞产生白细胞介素-2和/或干扰素-γ。
可以用抗TIM3抗体增强或共刺激的T细胞包括CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。T细胞可以是Teff细胞，例如CD4+ Teff细胞、CD8+ Teff细胞、T辅助（Th）细胞（例如Th1细胞）或T细胞毒性（Tc）细胞。
进一步涵盖刺激主体中免疫应答（例如抗原特异性T细胞应答）的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体，使得主体中的免疫应答（例如抗原特异性T细胞应答）得到刺激。在一些实施方案中，主体为携带肿瘤的主体并且针对肿瘤的免疫应答得到刺激。肿瘤可以是实体瘤或液体瘤，例如恶性血液肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤是免疫原性肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤是非免疫原性的。在某些实施方案中，肿瘤是PD-L1阳性的。在某些实施方案中，肿瘤是PD-L1阴性的。主体还可以是携带病毒的主体并且针对病毒的免疫应答得到刺激。
进一步提供用于抑制主体中的肿瘤细胞生长的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体，使得主体中肿瘤生长得到抑制。还提供用于治疗主体中的病毒感染的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体，使得主体中的病毒感染得到治疗。
在某些实施方案中，将抗TIM3抗体作为辅助疗法给予主体。用抗TIM3抗体治疗患有癌症的主体可以导致延长的存活期，例如相对于当前护理标准的长期持久应答；长期存活至少3个月、6个月、9个月、1年、2年、3年、4年、5年、10年或更久，或无复发生存期为至少3个月、6个月、9个月、1年、2年、3年、4年、5年、10年或更久。在某些实施方案中，用抗TIM3抗体治疗具有癌症的主体防止癌症复发或延迟癌症复发例如3个月、6个月、9个月、1年、2年、3年、4年、5年、10年或更久。抗TIM3治疗可用作一线、二线或三线治疗。
用本文所述的抗TIM3抗体（例如TIM3.18.IgG1）治疗患有癌症的主体可导致例如稳定的疾病、部分应答、增加的总体存活、增加的无病存活或增强的无进展存活。
在某些实施方案中，本文所述的抗TIM3抗体没有显著毒性。例如，TIM3抗体对人的器官（例如肝、肾、脑、肺和心脏中的一种或多种）没有显著毒性，如例如在临床试验中测定的。在某些实施方案中，TIM3抗体不会显著引发不期望的免疫应答，例如自身免疫或炎症。
在某些实施方案中，用抗TIM3拮抗剂（例如本文所述的抗TIM3抗体）治疗主体不会导致免疫系统过度刺激至主体的免疫系统随后攻击主体本身（例如自身免疫应答）或导致例如过敏反应的程度。因此，在一些实施方案中，抗TIM3抗体不引起过敏反应。
在某些实施方案中，用本文所述的抗TIM3抗体（例如包含13A3的CDR或可变区或其变体的抗体(例如如本文所述的)或本文所述的其他抗TIM3抗体）治疗主体不引起显著的炎症反应，例如免疫介导的肺炎、免疫介导的结肠炎、免疫介导的肝炎、免疫介导的肾炎或肾功能障碍、免疫介导的垂体炎、免疫介导的甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进症或其他免疫介导的不良反应。在某些实施方案中，包含13A3的CDR或可变区或其变体的抗TIM3抗体(例如如本文所述的)引起与其他抗TIM3抗体相比更少的炎症反应，例如免疫介导的肺炎、免疫介导的结肠炎、免疫介导的肝炎、免疫介导的肾炎或肾功能障碍、免疫介导的垂体炎、免疫介导的甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进症、过敏反应或其他免疫介导的不良反应。在某些实施方案中，用本文所述的抗TIM3抗体（例如包含13A3的CDR或可变区或其变体的抗体(例如如本文所述的)或本文所述的其他抗TIM3抗体）治疗主体不会导致严重的心脏病症例如室性心律失常；眼部疾病例如虹膜睫状体炎；输液相关反应；淀粉酶增加、脂肪酶增加；神经系统病症，例如头晕、外周和感觉神经病；皮肤和皮下组织病症，例如皮疹、瘙痒、剥脱性皮炎、多形性红斑、白癜风或牛皮癣；呼吸、胸腔和纵隔病症，例如咳嗽；疲劳；恶心；食欲下降；便秘；关节痛；或腹泻。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体与另一种癌症疗法组合提供协同抗肿瘤作用，所述癌症疗法例如刺激免疫系统的化合物（例如免疫肿瘤学试剂），例如本文所述的化合物或调节本文所述靶标的化合物。
与嵌合或人源化抗体相反，使用人抗体可导致较低水平的抗药物抗体（ADA）。 因此，本文所述的人抗TIM3抗体（例如TIM3.18.IgG1.3）相对于不是人抗体的抗TIM3抗体（例如，相对于人源化或嵌合抗TIM3抗体）可具有更低的ADA。
这些和其他本文所述的方法在下文进一步详细讨论。
XVI.A. 癌症
由抗TIM3抗体对TIM3的抑制可以增强患有癌症的患者中对癌细胞的免疫应答。本文提供治疗患有癌症的主体的方法，其包括向主体施用本文所述的抗TIM3抗体，使得主体得到治疗，例如，使得癌性肿瘤的生长受到抑制或降低和/或肿瘤消退和/或实现延长的存活。抗TIM3抗体可以单独使用以抑制癌性肿瘤的生长。可选地，抗TIM3抗体可以与另一药剂联合使用，例如，另一种免疫原性剂、标准癌症治疗或另一种抗体，如下文所述。
因此，本文提供了在主体中例如通过抑制肿瘤细胞生长来治疗癌症的方法，其包括向主体施用治疗有效量的本文所述的抗TIM3抗体，例如具有野生型IgG恒定区或具有降低的效应子功能的恒定区（例如IgG1.1或IgG1.3）的TIM3.2、TIM3.4、TIM3.5、TIM3.6、9F6、8B9、TIM3.9、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17、TIM3.18、TIM3.7和TIM3.8或其抗原结合部分。抗体可以是人抗TIM3抗体（例如本文所述的任何人抗人TIM3抗体）。可以使用本公开内容的抗体抑制其生长的癌症包括通常对免疫疗法有反应的癌症和通常对免疫疗法无反应的癌症。可以治疗的癌症还包括TIM3阳性癌症。癌症可以是具有实体瘤或血液恶性肿瘤（液体肿瘤）的癌症。用于治疗的癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌（NSCLC）、非鳞状NSCLC、神经胶质瘤、胃肠癌、肾癌（例如透明细胞癌）、卵巢癌、肝癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌（例如肾细胞癌（RCC））、前列腺癌（例如激素难治性前列腺癌）、甲状腺癌、成神经细胞瘤、胰腺癌、成胶质细胞瘤（多形性成胶质细胞瘤）、子宫颈癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌和头颈癌（或恶性肿瘤）、胃癌、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻窦天然杀伤细胞、黑素瘤（例如转移性恶性黑色素瘤，例如皮肤或眼内恶性黑素瘤）、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛区癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统（CNS）肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤(spinal axis tumor)、脑癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症包括由石棉诱导的那些、病毒相关癌症或病毒起源的癌症（例如，人乳头瘤病毒（HPV）相关的或起源的肿瘤）、和源自两种主要血细胞谱系即骨髓细胞系（其产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞）或淋巴细胞系（其产生B、T、NK和浆细胞）中的任一种的血液恶性肿瘤、诸如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤、例如急性、慢性、淋巴细胞和/骨髓性白血病，诸如急性白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）和慢性骨髓性白血病（CML）、未分化的AML（MO）、成髓细胞性白血病（Ml）、成髓细胞性白血病（M2；具有细胞成熟）、前髓细胞性白血病（M3或M3变体[M3V]）、骨髓单核细胞白血病（M4或具有嗜酸性粒细胞增多的M4变体[M4E]）、单核细胞白血病（M5）、红白血病（M6）、巨核细胞白血病（M7）、分离的粒细胞肉瘤和绿色瘤；淋巴瘤如霍奇金淋巴瘤（HL）、非霍奇金淋巴瘤（NHL）、B细胞血液恶性肿瘤例如B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤、间变性（例如Ki 1+）大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞性淋巴瘤、T-淋巴母细胞；和淋巴瘤/白血病（T-Lbly/T-ALL）、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴增生性障碍、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤（LBL）、淋巴谱系的血液肿瘤、急性成淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤（DHL）、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤（CTLC）（也称为蕈样霉菌病或塞扎里综合征）和具有华氏巨球蛋白血症的淋巴浆细胞样淋巴瘤（LPL）；骨髓瘤，例如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤（也称为惰性骨髓瘤）、孤立性浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、毛细胞淋巴瘤；骨髓谱系的造血肿瘤、间充质来源的肿瘤包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸胎癌、中枢和外周神经肿瘤包括星形细胞瘤、神经鞘瘤；间充质来源的肿瘤包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和其他肿瘤包括黑素瘤、色素性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌、淋巴谱系造血肿瘤例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞病症诸如T幼淋巴细胞白血病（T-PLL）、包括小细胞和脑形细胞型；T细胞型的大颗粒淋巴细胞白血病（LGL）； a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤（多形性和免疫母细胞性亚型）；血管中心性（鼻）T细胞淋巴瘤；头颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓性淋巴瘤、以及所述癌症的任何组合。本文所述的方法也可以用于治疗转移性癌症、无法切除的癌症、难治性癌症（例如，对于之前免疫疗法例如用阻断性CTLA-4或PD-1抗体难治的癌症）和/或复发性癌症。
在某些实施方案中，将抗TIM3抗体施用于患有对先前治疗（例如用免疫肿瘤学或免疫疗法药物的先前治疗）表现出不充分应答或对所述先前治疗进展的癌症的患者，或患有难治性或抵抗性、内在难治性或抵抗性（例如对PD-1途径拮抗剂而言是难治的）或其中所述抵抗或难治状态是获得性的癌症的患者。例如，对第一疗法没有应答或没有足够应答或在治疗（例如抗PD-1治疗）后看到疾病进展的主体可以通过单独施用抗TIM3抗体或与另一种疗法（例如与抗PD-1疗法）组合施用抗TIM3抗体来治疗。
在某些实施方案中，将抗TIM3抗体施用于之前未接受（即已经用其治疗）免疫肿瘤学药剂（例如PD-1途径拮抗剂）的患者。
在某些实施方案中，治疗主体中的癌症的方法包括首先确定主体是否是TIM3阳性的，例如是否具有表达TIM3的肿瘤细胞或TIL，并且如果主体具有TIM3阳性癌症或TIL细胞，则向患者施用例如本文所述的抗TIM3抗体。 用抗TIM3抗体治疗患有癌症的主体者的方法可以包括向具有表达TIM3的癌细胞或TIL细胞的主体施用治疗有效量的TIM3抗体。 本文还提供了用于预测主体是否对用抗TIM3抗体治疗应答的方法，其中所述方法包括确定患者的癌症或TIL细胞中TIM3的水平，以及主体的癌症或TIL细胞是否为TIM3阳性，然后主体可能对用TIM3抗体治疗响应。
在某些实施方案中，治疗主体中的癌症的方法包括首先确定主体是否是PD-L1或PD-1阳性的，例如是否具有表达PD-L1或PD-1的肿瘤细胞或TIL，并且如果主体具有PD-L1或PD-1阳性癌症或TIL细胞，则向主体施用例如本文所述的抗TIM3抗体（和任选PD-1或PD-L1拮抗剂）。 用抗TIM3抗体（和任选PD-1或PD-L1拮抗剂）治疗患有癌症的主体的方法可以包括向具有表达PD-L1或PD-1的癌细胞或TIL细胞的主体施用治疗有效量的TIM3抗体（和任选PD-1或PD-L1拮抗剂）。 本文还提供了用于预测主体是否对用抗TIM3抗体（和任选PD-1或PD-L1拮抗剂）治疗应答的方法，其中所述方法包括测定患者的癌症或TIL细胞中PD-L1或PD-1的水平，且如果主体的癌症或TIL细胞是PD-L1或PD-1阳性的，则主体可能对用TIM3抗体（和任选PD-1或PD-L1拮抗剂）治疗应答。
抗TIM3抗体可以与标准护理治疗一起施用。抗TIM3抗体可以作为维持疗法，例如旨在预防肿瘤发生或复发的疗法施用。
抗TIM3抗体可以与另一种治疗例如放射、手术或化学疗法一起施用。例如，当存在可能存在微转移的风险时和/或为了降低复发的风险，可以施用抗TIM3抗体辅助疗法。
抗TIM3抗体可以作为单一疗法施用，或作为唯一的免疫刺激疗法施用。针对TIM3的抗体例如抗TIM3也可以与免疫原性剂例如癌细胞、纯化的肿瘤抗原（包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子）、细胞和用编码免疫刺激细胞因子的基因转染的细胞组合(He等人,(2004) J. Immunol.173:4919-28)。可以使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑素瘤抗原的肽，诸如gp100的肽、MAGE抗原、Trp-2、MART1和/或酪氨酸酶、或经转染以表达细胞因子GM-CSF的肿瘤细胞（下文进一步讨论）。
在人中，已经显示一些肿瘤具有免疫原性，例如黑素瘤。通过经TIM3抑制降低T细胞活化的阈值，可活化宿主中的肿瘤应答，从而允许治疗非免疫原性肿瘤或具有有限免疫原性的肿瘤。
抗TIM3抗体例如本文所述的抗TIM3抗体，可以与接种方案组合。已经设计了用于针对肿瘤接种的许多实验策略(参见Rosenberg, S., 2000, Development of CancerVaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62；Logothetis, C, 2000, ASCOEducational Book Spring: 300-302；Khayat, D. 2000, ASCO Educational BookSpring: 414-428；Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738；还参见Restifo, N.和Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 于DeVita等人(编辑), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, 第五版)。在这些策略之一中，使用自体或同种异体肿瘤细胞制备疫苗。这些细胞疫苗已显示当肿瘤转导以表达GM-CSF时最有效。GM-CSF已显示为用于肿瘤接种的抗原呈递的有效活化物(Dranoff等人(1993) Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.90: 3539-43)。
在各种肿瘤中基因表达和大规模基因表达模式的研究已导致定义所谓的肿瘤特异性抗原(Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7)。在许多情况下，这些肿瘤特异性抗原是表达于肿瘤中和肿瘤产生的细胞中的分化抗原，例如黑素细胞gp100、MAGE抗原和Trp-2。更重要的是，许多这些抗原可以显示为宿主中发现的肿瘤特异性T细胞的靶标。TIM3抑制可以与许多表达于肿瘤中的重组蛋白和/或肽联合使用，以产生针对这些蛋白的免疫应答。这些蛋白通常被免疫系统视为自体抗原，因而对其耐受。肿瘤抗原可以包括蛋白端粒酶，其对于染色体端粒合成是必需的并且表达于超过85%的人癌症中和仅有限数目的体细胞组织中(Kim等人(1994) Science 266: 2011-2013)。肿瘤抗原也可以是由于改变蛋白序列或产生不相关序列之间的融合蛋白（即费城染色体中的bcr-abl）的体细胞突变而表达于癌细胞中的“新抗原(neo-antigen)”或来自B细胞肿瘤的独特型。
其他肿瘤疫苗可以包括来自涉及人癌症中的病毒的蛋白，所述病毒诸如人乳头瘤病毒（HPV）、肝炎病毒（HBV和HCV）和卡波西氏疱疹肉瘤病毒（KHSV）。可以与TIM3抑制联合使用的另一形式的肿瘤特异性抗原是分离自肿瘤组织自身的纯化的热休克蛋白（HSP）。这些热休克蛋白包含来自肿瘤细胞的蛋白的片段并且这些HSP在递送至抗原呈递细胞以引起肿瘤免疫中是高度有效的(Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588；Tamura等人(1997) Science 278: 117-120)。
树突细胞（DC）是可用于引发抗原特异性应答的有效抗原呈递细胞。DC可以离体产生并且用各种蛋白和肽抗原以及肿瘤细胞提取物装载(Nestle等人(1998) Nature Medicine 4: 328-332)。DC还可以通过基因方法转导以还表达这些肿瘤抗原。DC也可以直接与肿瘤细胞融合用于免疫目的(Kugler等人(2000) Nature Medicine 6:332-336)。作为接种方法，DC免疫可以与TIM3抑制有效组合以活化更有效的抗肿瘤应答。
TIM3抑制也可以与标准癌症治疗（例如，手术、放射和化疗）组合。TIM3抑制可以与化学治疗方案有效地组合。在这些情况下，可能可以减少施用的化疗试剂的剂量(Mokyr等人(1998) Cancer Research 58: 5301-5304)。此类组合的实例是抗TIM3抗体和氮烯咪胺的组合用于治疗黑素瘤。此类组合的另一实例是抗TIM3抗体和白细胞介素-2（IL-2）的组合用于治疗黑素瘤。TIM3抑制和化疗的组合使用背后的科学原理是细胞死亡（这是大部分化疗化合物的细胞毒性作用的结果）应导致抗原呈递途径中肿瘤抗原水平增加。其他可经细胞死亡导致与TIM3抑制的协同作用的组合疗法是放射、手术和激素剥夺。这些方案中的每种产生宿主中的肿瘤抗原的来源。血管发生抑制剂也可以与TIM3抑制组合。抑制血管发生导致肿瘤细胞死亡，其可以将肿瘤抗原供给至宿主抗原呈递途径中。
本文所述的抗TIM3抗体也可以与将表达Fcα或Fcγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双特异性抗体组合使用(参见例如美国专利号5,922,845和5,837,243)。双特异性抗体可以用于靶向两种单独的抗原。例如，抗Fc受体/抗肿瘤抗原（例如Her-2/neu）双特异性抗体已经用于将巨噬细胞靶向肿瘤部位。该靶向可以更有效地活化肿瘤特异性应答。这些应答的T细胞臂将通过TIM3的抑制而增加。可选地，抗原可以直接递送至DC，其通过结合肿瘤抗原和树突细胞特异性细胞表面标记物的双特异性抗体。
肿瘤通过许多种机制逃避宿主免疫监视。许多这些机制可以通过由肿瘤表达并且是免疫抑制性的蛋白的失活来克服。这些尤其包括TGF-β (Kehrl等人(1986) J. Exp.Med.163: 1037-1050)、IL-10 (Howard & O'Garra (1992) ImmunologyToday 13:198-200)和Fas配体(Hahne等人(1996) Science 274: 1363-1365)。针对这些实体的每一种的抗体可以与抗TIM3抗体组合使用以抵消免疫抑制剂的作用并促进宿主的肿瘤免疫应答。
活化宿主免疫应答的其他抗体可以与抗TIM3抗体组合使用。这些包括树突细胞表面上活化DC功能和抗原呈递的分子。抗CD40抗体能够有效代替T细胞辅助活性(Ridge等人(1998) Nature 393: 474-478)并且可以与抗TIM3抗体联合使用。针对T细胞共刺激分子诸如CTLA-4 (例如美国专利号5,811,097)、OX-40 (Weinberg等人(2000) Immunol 164:2160-2169)、4-lBB (Melero等人(1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997)和ICOS(Hutloff等人(1999) Nature 397: 262-266)的活化性抗体也可以提供T细胞活化水平增加。PD1或PD-L1的抑制剂也可以与抗TIM3抗体联合使用。其他组合在本文其他地方提供。
骨髓移植目前用于治疗多种造血来源的肿瘤。虽然移植物抗宿主病是该治疗的结果，但是可以从移植物抗肿瘤应答中获得治疗益处。TIM3抑制可用于增加供体移植的肿瘤特异性T细胞的有效性。
存在若干实验治疗方案，其涉及离体活化和扩增抗原特异性T细胞和将这些细胞过继转移至受体中以刺激针对肿瘤的抗原特异性T细胞(Greenberg & Riddell (1999)Science 285: 546-51)。这些方法也可以用于活化针对传染源诸如CMV的T细胞应答。存在抗TIM3抗体的情况下离体活化可以增加过继转移的T细胞的频率和活性。
XVI.B.传染病
本文所述的方法还可用于治疗已暴露于特定毒素或病原体的患者。因此，本文所述的另一方面提供治疗主体中的传染病的方法，其包括向主体施用抗TIM3抗体或其抗原结合部分，使得对所述主体治疗传染病。另外或可替代地，抗体可以是嵌合或人源化抗体。
与如上述的其对肿瘤的应用类似，抗体介导的TIM3抑制可以单独使用、或作为辅助剂与疫苗组合使用，以刺激对病原体、毒素和自体抗原的免疫应答。该治疗方法可以特别有用的病原体的实例包括目前尚无有效疫苗的病原体或常规疫苗对其不是完全有效的病原体。这些包括但不限于HIV、肝炎（甲肝、乙肝和丙肝）、流感、疱疹、贾第鞭毛虫、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。TIM3抑制针对由病原体诸如随感染过程呈递改变的抗原的HIV建立的感染特别有用。这些新表位在抗人TIM3抗体施用时被识别为外源的，因此激发强T细胞应答。
引起可由本文所述方法治疗的感染的病原性病毒的一些实例包括HIV、肝炎（甲肝、乙肝和丙肝）、疱疹病毒（例如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、EB病毒）、腺病毒、流感病毒、黄病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒和虫媒脑炎病毒。
引起可由本文所述的方法治疗的感染的病原性细菌的一些实例包括衣原体、立克次体、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌、克雷伯氏菌、变形杆菌、沙雷菌、假单胞菌、军团菌、白喉、沙门氏菌、芽孢杆菌、霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、钩端螺旋体病和莱姆病病菌。
引起可由本文所述的方法治疗的感染的病原性真菌的一些实例包括假丝酵母（白色念珠菌、克柔假丝酵母、光滑假丝酵母、热带假丝酵母等）、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉（烟曲霉、黑曲霉等）、属毛霉目（毛霉属、犁头霉属、根霉属）、申克氏胞丝菌(Sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。
引起可由本文所述的方法治疗的感染的病原性寄生虫的一些实例包括痢疾变形虫(Entamoeba histolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福氏耐格里变形虫(Naegleriafowleri)、棘阿米巴属种(Acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第虫(Giardia lambia)、隐孢子虫属种(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、微小巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。
在所有上述方法中，TIM3抑制可以与其他形式的免疫疗法，例如本文所述的那些，诸如细胞因子治疗（例如干扰素、GM-CSF、G-CSF、IL-2）或双特异性抗体疗法组合，其提供增强的肿瘤抗原呈递(参见例如，Holliger (1993) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123)。
XVI.C.自身免疫反应
抗TIM3抗体可以激发和扩增自身免疫反应。实际上，使用肿瘤细胞和肽疫苗诱导抗肿瘤应答表明许多抗肿瘤应答涉及抗自身反应性（van Elsas等人(2001) J. Exp. Med.194:481-489；Overwijk,等人(1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.96: 2982-2987；Hurwitz, (2000)同上；Rosenberg & White (1996) J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4)。因此，可以考虑将抗TIM3抗体与各种自身蛋白结合使用，以便设计接种方案以有效地产生针对这些自身蛋白的免疫应答用于疾病治疗。例如，阿尔茨海默氏病涉及脑中淀粉样蛋白沉积物中Aβ肽的不适当积累；针对淀粉样蛋白的抗体应答能够清除这些淀粉样蛋白沉积物(Schenk等人, (1999) Nature 400: 173-177)。
其他自身蛋白也可用作靶标，例如用于治疗过敏症和哮喘的IgE，以及用于类风湿性关节炎的TNF-α。最后，可以通过使用抗TIM3抗体诱导针对各种激素的抗体应答。针对生殖激素的中和抗体应答可用于避孕。针对特定肿瘤生长所需的激素和其他可溶性因子的中和抗体应答也可以被认为是可能的接种靶标。
使用抗TIM3抗体的如上所述的类似方法可用于诱导治疗性自身免疫应答，以治疗具有其他自身抗原（例如淀粉样蛋白沉积物，包括阿尔茨海默病中的Aβ，细胞因子如TNF-α和IgE）不适当积聚的患者。
XVI.D.疫苗
本文所述的抗TIM3抗体可以用于通过共施用抗TIM3抗体和目标抗原（例如疫苗）来刺激抗原特异性免疫应答。因此，本文提供了增强主体中针对抗原的免疫应答的方法，其包括向主体施用：（i）抗原；和（ii）抗TIM3抗体或其抗原结合部分，从而增强主体中针对所述抗原的免疫应答。抗体可以是人抗人TIM3抗体（例如本文所述的任何人抗TIM3抗体）。另外或可替代地，抗体可以是嵌合或人源化抗体。抗原例如可以是例如肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原或来自病原体的抗原。此类抗原的非限制性实例包括以上部分中讨论的那些，诸如上文讨论的肿瘤抗原（或肿瘤疫苗）或来自病毒、细菌或上述的其他病原体的抗原。
在某些实施方案中，将包含抗TIM3抗体结合的表位的肽或融合蛋白用作疫苗代替抗TIM3抗体，或除抗TIM3抗体之外将所述肽或融合蛋白还用作疫苗。
体内和体外施用本文所述的抗体组合物（例如人单克隆抗体、多特异性和双特异性分子和免疫缀合物）的合适途径是本领域众所周知的并且可由普通技术人员选择。例如，抗体组合物可以通过注射（静脉内或皮下）施用。所用分子的合适剂量将取决于主体的年龄和体重以及抗体组合物的浓度和/或制剂。
如前所述，本文所述的抗TIM3抗体可以与一种或多种治疗剂诸如细胞毒性剂、放射毒性剂或免疫抑制剂共同施用。抗体可以与药剂连接（作为免疫复合物）或可以与药剂分开施用。在后一种情况下（分开施用），抗体可以在药剂之前、之后或与其同时施用，或者可以与其他已知疗法例如抗癌疗法例如放射共施用。此类治疗剂尤其包括抗肿瘤药诸如多柔比星（阿霉素）、顺铂硫酸博莱霉素、卡莫司汀、瘤可宁、达卡巴嗪和环磷酰胺羟基脲，其单独时仅在对患者有毒或亚毒性的水平下是有效的。顺铂以100 mg/ml剂量每四周静脉内施用一次并且阿霉素以60-75 mg/ml剂量每21天静脉内施用一次。共施用本文所述的抗TIM3抗体或其抗原结合片段与化疗剂提供两种抗癌剂，其经对人肿瘤细胞产生细胞毒性作用的不同机制运作。此类共施用可以解决由于发展对药物抗性或将使肿瘤细胞对于抗体无反应性的肿瘤细胞抗原性的改变引起的问题。
还在本文所述的范围内的是包含本文所述的抗体组合物（例如，人抗体、双特异性或多特异性分子、或免疫缀合物）及使用说明书的试剂盒。试剂盒可以进一步包含至少一种额外试剂、或一种或多种本文所述的额外的人抗TIM3抗体（例如，具有结合与第一人抗体不同的TIM3抗原中的表位的互补活性的人抗体）。试剂盒通常包含说明试剂盒的内含物的预期用途的标签。术语标签包括任何提供于试剂盒上或连同试剂盒提供的或以其他方式伴随试剂盒提供的任何书写的或记录的材料。
XVI.E.组合疗法
除了上文提供的组合疗法之外，抗TIM3抗体（例如本文所述的那些）也可以用于组合疗法，例如用于治疗癌症，如下所述。
本文提供的是组合疗法的方法，其中抗TIM3抗体与一种或多种额外药剂共同施用，所述额外药剂例如小分子药物，抗体或其抗原结合部分，其在刺激免疫应答中有效，从而进一步增强、刺激或上调主体中的免疫应答。
通常，例如本文所述的抗TIM3抗体可以与免疫细胞，如T细胞上的（i）刺激（例如，共刺激）分子（例如，受体或配体）的激动剂和/或（ii）抑制信号或分子（例如，受体或配体）的拮抗剂组合，两者都导致扩增免疫应答，如抗原特异性T细胞应答。在某些方面，免疫-肿瘤药剂是细胞，例如抑制T细胞活化的那些或参与先天免疫的那些，例如 NK细胞上的（i）刺激（包括共刺激）分子（例如，受体或配体）的激动剂或（ii）抑制（包括共抑制）分子（例如，受体或配体）的拮抗剂，并且其中免疫肿瘤药剂增强先天免疫。此类免疫肿瘤药剂通常称为免疫检查点调节剂，例如免疫检查点抑制剂或免疫检查点刺激剂。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体与靶向刺激或抑制分子的药剂一起施用，所述刺激或抑制分子是免疫球蛋白超家族（IgSF）的成员。例如，例如本文所述的抗TIM3抗体可以与靶向IgSF家族成员的药剂一同向主体施用以增加免疫应答。例如，抗TIM3抗体可以与靶向（或特异性结合）膜结合配体的B7家族成员的药剂或特异性结合B7家族成员的共刺激或共抑制受体或配体一起施用，所述B7家族包括B7-1、B7-2、B7-H1（PD-L1）、B7-DC（PD-L2）、B7-H2（ICOS-L）、B7-H3、B7-H4、B7-H5（VISTA）和B7-H6。
抗TIM3抗体也可以与靶向TNF和TNFR分子家族成员（配体或受体）的药剂一起施用，所述成员诸如CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-lBBL、CD137、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTpR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDA1、EDA2、TNFR1、淋巴毒素a/TNFp、TNFR2、TNFa、LTpR、淋巴毒素a 1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY和NGFR (参见例如Tansey (2009) Drug Discovery Today 00: 1)。
可以通过具有例如 TIM3.2、TIM3.4、TIM3.5、TIM3.6、9F6、8B9、TIM3.9、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17、TIM3.18、TIM3.7和TIM3.8的可变区的抗TIM3抗体与以下药剂中的一种或多种的组合来刺激T细胞应答：
（1）抑制T细胞活化的蛋白（例如，免疫检查点抑制剂）的拮抗剂（抑制剂或阻断剂），所述蛋白诸如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、GITR和LAG-3、半乳凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM- 4；和/或
（2）刺激T细胞活化的蛋白的激动剂，所述蛋白诸如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB (CD137)、4-1BBL、GITR、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H。
调节上述蛋白之一并且可以与抗TIM3抗体（例如本文所述的那些）组合用于治疗癌症的示例性药剂包括：Yervoy® (伊匹单抗)或曲美母单抗(针对CTLA-4)、加利昔单抗(针对B7.1)、BMS-936558 (针对PD-1)、MK-3475 (针对PD-1)、阿特珠单抗(TECENTRIQ®)、AMP224 (针对B7DC)、BMS-936559 (针对B7-H1)、MPDL3280A (针对B7-H1)、MEDI-570 (针对ICOS)、AMG557 (针对B7H2)、MGA271 (针对B7H3)、IMP321 (针对LAG-3)、BMS-663513 (针对CD137)、PF-05082566 (针对CD137)、CDX-1127 (针对CD27)、抗OX40 (Providence HealthServices)、huMAbOX40L (针对OX40L)、阿塞西普(针对TACI)、CP-870893 (针对CD40)、鲁卡木单抗(针对CD40)、达西珠单抗(针对CD40)、Muromonab-CD3 (针对CD3)；抗GITR抗体MK4166、TRX518、Medi1873、INBRX-110、LK2-145、GWN-323、GITRL-Fc或其任何组合。
可以与抗TIM3抗体组合用于治疗癌症的其他分子包括NK细胞上的抑制性受体的拮抗剂或NK细胞上的活化受体的激动剂。例如，抗TIM3抗体可以与KIR的拮抗剂（例如，lirilumab）组合。
T细胞活化也受可溶性细胞因子的调节，并且抗TIM3抗体可以与抑制T细胞活化的细胞因子的拮抗剂或刺激T细胞活化的细胞因子的激动剂一起施用于例如患有癌症的主体。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体可以与（i）抑制T细胞活化的IgSF家族或B7家族或TNF家族的蛋白的拮抗剂（或抑制剂或阻断剂）或抑制T细胞活化的细胞因子（例如， IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF；“免疫抑制细胞因子”）的拮抗剂和/或（ii）IgSF家族、B7家族或TNF家族的刺激受体或刺激T活化的细胞因子的激动剂组合使用，用于刺激免疫应答，例如用于治疗增生性疾病，如癌症。
用于组合疗法的其他药剂包括抑制或消耗巨噬细胞或单核细胞的药剂，包括但不限于CSF-1R拮抗剂，如CSF-1R拮抗剂抗体，包括RG7155 (WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、W013/87699、W013/119716、WO13/132044)或FPA-008 (WO11/140249；W013169264；WO14/036357)。
抗TIM3抗体也可以与抑制TGF-β信号传导的药剂一起施用。
可以与抗TIM3抗体组合的额外药剂包括增强肿瘤抗原呈递的药剂，例如树突细胞疫苗、分泌GM-CSF的细胞疫苗、CpG寡核苷酸和咪喹莫特，或增强肿瘤细胞免疫原性的疗法（例如，蒽环类抗生素）。
可以与抗TIM3抗体组合的仍其他疗法包括消耗或阻断Treg细胞的疗法，例如特异性结合CD25的药剂。
可以与抗TIM3抗体组合的另一种疗法是抑制代谢酶的疗法，例如吲哚胺双加氧酶（IDO）、双加氧酶、精氨酸酶或一氧化氮合成酶。
可以与抗TIM3抗体一起使用的另一类药剂包括抑制腺苷形成的药剂（例如，CD73抑制剂）或抑制腺苷A2A受体的药剂。
可以与抗TIM3抗体组合用于治疗癌症的其他疗法包括逆转/预防T细胞无反应性或耗尽的疗法以及在肿瘤部位引发先天免疫活化和/或炎症的疗法。
可以与抗TIM3抗体组合用于治疗癌症的其他疗法包括例如用HuMax-IL8阻断IL-8的疗法。
抗TIM3抗体可以与多于一种免疫肿瘤药剂组合，并且可以例如与靶向免疫途径的多种元件的组合方法组合，所述组合方法诸如以下一种或多种：增强肿瘤抗原呈递的疗法（例如，树突细胞疫苗、分泌GM-CSF的细胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特）；抑制负免疫调节的疗法，例如，通过抑制CTLA-4和/或PD1/PD-L1/PD-L2途径和/或消除或阻断Treg或其他免疫抑制细胞；刺激正免疫调节的疗法，例如，用刺激CD-137、OX-40和/或CD40或GITR途径和/或刺激T细胞效应子功能的激动剂；系统增加抗肿瘤T细胞频率的疗法；例如，使用CD25的拮抗剂（例如达克珠单抗）或通过离体抗CD25珠消耗来消耗或抑制Treg（如肿瘤中的Treg）的疗法；影响肿瘤中抑制性骨髓细胞功能的疗法；增强肿瘤细胞的免疫原性的疗法（例如，蒽环类抗生素）；过继性T细胞或NK细胞转移，包括遗传修饰的细胞，例如通过嵌合抗原受体修饰的细胞（CAR-T疗法）；抑制代谢酶的疗法，所述代谢酶如吲哚胺双加氧酶（IDO）、双加氧酶、精氨酸酶或一氧化氮合成酶；逆转/阻止T细胞无反应性或耗尽的疗法；在肿瘤部位引发先天免疫活化和/或炎症的疗法；施用免疫刺激细胞因子；或阻断免疫抑制细胞因子。
本文所述的抗TIM3抗体可与以下药剂一起使用：连接正共刺激受体的一种或多种激动剂、通过抑制性受体减弱信号传导的阻断剂、拮抗剂和系统增加抗肿瘤T细胞频率的一种或多种药剂、克服肿瘤微环境中不同免疫抑制途径（例如，阻断抑制受体接合（例如， PD-L1/PD-1相互作用）、消耗或抑制Treg（例如，使用抗CD25单克隆抗体（例如，达克珠单抗））或通过离体抗-CD25珠消耗）、抑制代谢酶如IDO，或逆转/阻止T细胞无反应性或衰竭）的药剂和在肿瘤部位引发先天免疫活化和/或炎症的药剂。
在某些实施方案中，如果主体是BRAF V600突变阳性，则将抗TIM3抗体与BRAF抑制剂一起施用于主体。
用于本文所述组合疗法的适合PD-1拮抗剂包括但不限于配体、抗体（例如，单克隆抗体和双特异性抗体）和多价药剂。在一个实施方案中，PD-1拮抗剂是融合蛋白，例如 Fc融合蛋白，如AMP-244。在一个实施方案中，PD-1拮抗剂是抗PD-1或抗PD-L1抗体。
示例性抗PD-1抗体是纳武单抗（BMS-936558）或包含WO 2006/121168中描述的抗体17D8、2D3、4H1、5C4、7D3、5F4和4A11之一的CDR或可变区的抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体是WO2012/145493中描述的MK-3475（兰洛珠单抗（Lambrolizumab））； WO 2012/145493中描述的AMP-514；或PDR001。其他已知的PD-1抗体和其他PD-1抑制剂包括WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335、WO 2011/066389、WO 2011/161699、WO 2012/145493、美国专利号7,635,757和8,217,149，和美国专利公开号2009/0317368中描述的那些。也可以使用WO2013/173223中公开的任何抗PD-1抗体。与这些抗体之一竞争结合PD-1上的相同表位和/或与其结合的抗PD-1抗体也可以用于组合治疗。
在一些实施方案中，可用于组合疗法的抗PD-L1抗体是BMS-936559（在WO 2007/005874和美国专利号7,943,743中称为12A4），或包含PCT公开WO 07/005874和美国专利号7,943,743中描述的3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4的CDR或可变区的抗体。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736（也称为度伐单抗和抗B7-H1）、MPDL3280A（也称为阿特珠单抗和RG7446）、MSB0010718C（也称为avelumab； WO2013/79174）或rHigM12B7。还可以使用WO2013/173223、WO2011/066389、WO2012/145493、美国专利号7,635,757和8,217,149以及美国公开号2009/145493中公开的任何抗PD-L1抗体。竞争和/或结合如任何这些抗体表位的相同表位的抗PD-L1抗体也可用于组合治疗。
在某些实施方案中，本公开的抗TIM3抗体可以与CTLA-4拮抗剂，例如抗-CTLA-4抗体一起使用。在一个实施方案中，抗CTLA-4抗体是选自以下的抗体：Yervoy® (在PCT公开WO01/14424中描述的伊匹单抗或抗体10D1)、曲美母单抗 (先前称为替西木单抗, CP-675,206)、在以下任何出版物中描述的单克隆或抗CTLA-4抗体：WO 98/42752；WO 00/37504；美国专利号6,207,156；Hurwitz等人(1998) Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071；Camacho等人 (2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract No. 2505 (抗体CP-675206)；和Mokyr等人(1998) Cancer Res. 58:5301-5304。也可以使用WO2013/173223中公开的任何抗CTLA-4抗体。
在其他实施方案中，本公开的抗TIM3抗体与LAG3拮抗剂组合使用。抗LAG3抗体的实例包括含有描述于美国专利公开号US2011/0150892、WO10/19570和WO2014/008218中的抗体25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5的CDR或可变区的抗体。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体是BMS-986016。可以使用的其他本领域公认的抗LAG-3抗体包括IMP731和IMP-321，其描述于US 2011/007023、WO08/132601和WO09/44273中。竞争和/或结合如任何这些抗体表位的相同表位的抗LAG-3抗体也可用于组合治疗。
在一些实施方案中，本公开的抗TIM3抗体可以与CD137（4-1BB）激动剂，如激动性CD137抗体组合施用。合适的CD137抗体包括例如乌瑞鲁单抗或PF-05082566（W012/32433）。
在其他实施方案中，抗TIM3抗体可以与OX40激动剂，如激动性OX40抗体组合施用。合适的OX40抗体包括例如MEDI-6383、MEDI-6469或MOXR0916（RG7888；WO06/029879）。
在一个实施方案中，抗TIM3抗体与CD40激动剂，如激动性CD40抗体组合施用。在某些实施方案中，免疫肿瘤药剂是CD40拮抗剂，如拮抗性CD40抗体。合适的CD40抗体包括例如鲁卡木单抗（HCD122）、达西珠单抗（SGN-40）、CP-870,893或Chi Lob 7/4。
在一个实施方案中，抗TIM3抗体与CD27激动剂，如激动性CD27抗体组合施用。合适的CD27抗体包括例如伐利鲁单抗（CDX-1127）。
在某些实施方案中，抗TIM3抗体与抗GITR抗体一起施用，所述抗GITR抗体例如具有6C8的CDR序列的抗体，例如在WO2006/105021中描述的具有6C8的CDR的人源化抗体；包含WO2011/028683中描述的抗GITR抗体的CDR的抗体；包含JP2008278814中描述的抗GITR抗体的CDR的抗体、包含WO2015/031667、WO2015/187835、WO2015/184099、WO2016/054638、WO2016/057841或WO2016/057846中描述的抗GITR抗体或本文描述或提及的其他抗GITR抗体的CDR的抗体。
在其他实施方案中，抗TIM3抗体与MGA271（针对B7H3）（WO11/109400）组合施用。
在一些实施方案中，抗TIM3抗体与KIR拮抗剂，如lirilumab组合施用。
在其他实施方案中，抗TIM3抗体与IDO拮抗剂组合施用。合适的IDO拮抗剂包括，例如，INCB-024360 (WO2006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、吲哚莫德、NLG-919 (WO09/73620、WO09/1156652、WO11/56652、WO12/142237)或F001287。
在仍其他的实施方案中，抗TIM3抗体与Toll样受体激动剂，例如TLR2/4激动剂(例如，卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin）)；TLR7激动剂 (例如，Hiltonol或咪喹莫特)；TLR7/8激动剂 (例如，瑞喹莫德)；或TLR9 激动剂 (例如，CpG7909)组合施用。
在一个实施方案中，抗TIM3与TGF-β抑制剂，例如 GC1008、LY2157299、TEW7197或IMC-TR1组合施用。
本文所述的抗TIM3抗体和组合疗法还可以与其他众所周知的疗法联合使用，所述疗法因针对所治疗的适应症（例如，癌症）特别有用而被选择。本文所述的抗TIM3抗体的组合可以与已知的药学上可接受的药剂顺序使用。
例如，本文所述的抗TIM3抗体和组合疗法可以与额外的治疗组合（例如，同时或分开）使用，所述额外的治疗例如放射和/或化疗，例如使用喜树碱（CPT-11）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂、多柔比星、伊立替康、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、紫杉醇、卡铂-紫杉醇（紫杉醇（Taxol））、多柔比星，或喜树碱+ apo21/TRAIL（6X combo））、一种或多种蛋白酶体抑制剂（例如，硼替佐米或MG132）、一种或多种Bcl-2抑制剂（例如、BH3I-2'（bcl-xl抑制剂）、吲哚胺双加氧酶-1抑制剂（例如，INCB24360、吲哚莫德、NLG-919或F001287）、AT-101（R-(-)-棉酚衍生物）、ABT-263（小分子）、GX-15-070（obatoclax）或MCL-1（髓样白血病细胞分化蛋白-1）拮抗剂）、iAP（凋亡蛋白抑制剂）拮抗剂（例如，smac7、smac4、小分子smac模拟物、合成的smac肽（参见 Fulda等人，Nat Med 2002；8：808-15）、ISIS23722（LY2181308）或AEG-35156（GEM-640））、HDAC（组蛋白脱乙酰基酶）抑制剂、抗CD20抗体（例如，利妥昔单抗）、血管生成抑制剂（例如，贝伐单抗）、靶向VEGF和VEGFR的抗血管生成剂（例如，安维汀）、合成三萜（参见 Hyer等人，Cancer Research 2005；65：4799-808）、c-FLIP（细胞FLICE抑制蛋白）调节剂（例如，PPARy的天然和合成配体（过氧化物酶体增殖物活化受体γ）、5809354或5569100）、激酶抑制剂（例如，索拉非尼）、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、替西罗莫司、mTOR抑制剂如雷帕霉素和替西罗莫司、硼替佐米、JAK2抑制剂、HSP90抑制剂、PI3K-AKT抑制剂、来那度胺、GSK3P抑制剂、IAP抑制剂和/或遗传毒性药物。
本文所述的抗TIM3抗体和组合疗法可进一步与一种或多种抗增殖细胞毒性剂组合使用。可用作抗增殖细胞毒性剂的化合物的类别包括但不限于以下：
烷基化剂（包括但不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯）：尿嘧啶氮芥、氮芥(Chlormethine)、环磷酰胺(CYTOXAN®) fosfamide、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺（Triethylenemelamine）、三乙烯硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪和替莫唑胺。
抗代谢药物（包括但不限于叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂）：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁和吉西他滨。
用于与抗TIM3抗体组合的合适的抗增殖剂不限于紫杉烷、紫杉醇（紫杉醇可以作为TAXOL™通过商业途径获得）、多西他赛、圆皮海绵内酯（DDM）、dictyostatin（DCT）、Peloruside A、埃博霉素、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、埃博霉素E、埃博霉素F、呋喃埃博霉素D、脱氧埃博霉素B1、[17]-脱氢脱氧埃博霉素B、[18]脱氢脱氧埃博霉素B、C12,13-环丙基-埃博霉素A、C6-C8桥联埃博霉素A、反式-9,10-脱氢埃博霉素D、顺式-9,10-脱氢埃博霉素D、16-去甲基埃博霉素B、埃博霉素BIO、discoderomolide、帕土匹龙（EPO-906）、KOS-862、KOS-1584、ZK-EPO、ABJ-789、XAA296A（Discodermolide）、TZT-1027（soblidotin）、ILX-651（盐酸tasidotin）、软海绵素B、甲磺酸艾日布林（E-7389）、哈米特林（HTI-286）、E-7974、自念珠藻环肽、LY-355703、美登醇免疫缀合物（DM-1）、MKC-1、ABT-751、Tl-38067、T-900607、SB-715992（伊斯平斯）、SB-743921、MK-0731、STA-5312、软珊瑚醇、17β-乙酰氧基-2-乙氧基-6-氧代-B-高-雌-1,3,5（10）-三烯-3-醇、cyclostreptin、isolaulimalide、laulimalide、4-表-7-脱羟基-14,16-二去甲基-（+）-圆皮海绵内酯和cryptothilone 1以及本领域已知的其他微管稳定剂。
在与本文所述的抗TIM3抗体治疗组合或在用本文所述的抗TIM3抗体治疗之前期望使异常增殖细胞静息的情况下，激素和类固醇（包括合成类似物），如17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、屈他雄酮丙酸酯、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲基-睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌氮芥、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、ZOLADEX®也可以施用于患者。当使用本文所述的方法或组合物时，也可以根据需要施用在临床环境中用于调节肿瘤生长或转移的其他药剂，如抗模拟剂(antimimetics)。
在某些实施方案中，本文讨论的抗TIM3抗体和第二药剂的组合可以作为在药学上可接受的载体中的单一组合物同时施用，或者抗TIM3抗体和第二药剂在药学上可接受的载体中作为单独的组合物同时施用。在另一个实施方案中，抗TIM3抗体和第二药剂的组合可以顺序施用。两种药剂的施用可以以间隔例如30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周的时间开始，或第二药剂的施用可以在已经施用第一药剂后例如 30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周开始。
在一些实施方案中，可以与抗TIM3抗体和/或第二药剂组合的抗肿瘤抗体包括RITUXAN® (利妥昔单抗)、HERCEPTIN® (曲妥珠单抗)、BEXXAR® (托西莫单抗)、ZEVALIN® (替伊莫单抗)、CAMPATH® (阿仑珠单抗)、LYMPHOCIDE® (依帕珠单抗)、AVASTIN® (贝伐单抗)和TARCEVA® (厄洛替尼)，或其任何组合。在其他实施方案中，可用于与抗TIM3抗体的组合疗法的第二抗体可以是抗体药物缀合物。
在其他实施方案中，抗TIM3抗体单独或与另一种药剂组合与骨髓移植同时或顺序使用以治疗多种造血来源的肿瘤。
本文提供了改变与用免疫刺激剂治疗过度增殖性疾病（例如，癌症）相关的不良事件的方法，其包括向主体施用具有或不具有第二药剂的抗TIM3抗体。例如，本文所述的方法提供了通过向患者施用不可吸收的类固醇来降低免疫刺激性治疗抗体诱导的结肠炎或腹泻的发病率的方法。如本文所用，“不可吸收的类固醇”是糖皮质激素，其表现出广泛的首过代谢，使得在肝脏代谢后，类固醇的生物利用度低，即小于约20％。在本文所述的一个实施方案中，不可吸收的类固醇是布地奈德。布地奈德是局部作用的糖皮质激素，其口服施用后主要通过肝脏广泛代谢。ENTOCORT EC®（Astra-Zeneca）是开发以优化药物递送至回肠和整个结肠的布地奈德的pH和时间依赖性的口服制剂。ENTOCORT EC®是在美国批准上市用于治疗涉及回肠和/或升结肠的轻度至中度的克罗恩病。在更进一步的实施方案中，与不可吸收的类固醇缀合的抗TIM3抗体可以进一步与水杨酸盐组合。水杨酸盐包括5-ASA试剂如，例如：柳氮磺吡啶吡啶(AZULFIDINE®, Pharmacia & Up John)；奥沙拉嗪 (DJPENTUM®,Pharmacia & Up John)；巴柳氮 (COLAZAL®, Salix Pharmaceuticals, Inc.)；和马沙拉嗪(ASACOL®, Procter & Gamble Pharmaceuticals；PENTASA®, Shire US；CANASA®,Axcan Scandipharm, Inc.；ROWASA®, Solvay)。
表1
除非另外指出，本公开内容的实践将使用本领域技术的范围之内的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术。文献中充分解释此类技术。例如，参见Sambrook等人, 编辑 (1989) Molecular Cloning ALaboratory Manual (第2版； Cold Spring Harbor Laboratory Press)； Sambrook等人,编辑 (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs HarborLaboratory, NY)； D. N. Glover 编辑, (1985) DNA Cloning, 第I和II卷； Gait, 编辑(1984) Oligonucleotide Synthesis； Mullis等人美国专利号4,683,195； Hames和Higgins, 编辑 (1984) Nucleic Acid Hybridization； Hames和Higgins, 编辑 (1984)Transcription And Translation； Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (AlanR. Liss, Inc.)； Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986)； Perbal(1984) A Practical Guide To Molecular Cloning； the treatise, Methods InEnzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)； Miller和Calos 编辑 (1987) GeneTransfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory)； Wu等人, 编辑, Methods In Enzymology, 第154和155卷； Mayer和Walker, 编辑 (1987)Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press,London)； Weir和Blackwell, 编辑, (1986) Handbook Of Experimental Immunology,卷I-IV； Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N.Y., (1986)； )； Crooks, Antisense drug Technology:Principles, strategies and applications, 第2版 CRC Press (2007) 和Ausubel 等人 (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley和Sons,Baltimore, Md.)。
以上引用的所有参考文献以及本文引用的所有参考文献都通过引用整体并入本文。
提供下述实施例仅为了举例说明而不是为了限制。
实施例
实施例1：人抗TIM3抗体的鉴定
利用人TIM-3转染的HEK-293人细胞的质膜部分免疫人IgG转基因(KM)小鼠。将来自所有免疫小鼠的淋巴结细胞融合到SP2/0融合伴侣。首先使用高通量测定筛选杂交瘤上清液中人IgG抗体的存在。然后通过人TIM-3转染细胞上的FACS结合测定抗原特异性。简言之，进行47次融合，鉴定3935个IgG阳性克隆，其中44个通过ELISA被鉴定为对hTIM3呈阳性，并且通过hTIM3 FACS发现这些中126个为阳性。在这些中，通过多种方法进一步分析了117个克隆（或抗体）：（1）通过Biacore进行的表位结合；（2）TIM3结合TIM-3转染的细胞系(293-TIM3)以测定EC50；（3）Th1测定（如下文进一步描述）；和（4）TIL测定（如下文进一步描述）。在这117个中，由于具有想要的特征，选择7个表达完全人抗人TIM3抗体的杂交瘤：13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8。在图1-7中提供了这些杂交瘤产生的抗体的可变结构域的氨基酸和编码这些可变结构域的核苷酸序列，并且在图13中提供了CDR、可变区和重链和轻链以及其同种型的SEQ ID NO（参见具有杂交瘤名称的行）。杂交瘤和由其分泌的抗体具有相同的名称（例如，13A3）。
还在宿主细胞中重组表达包含抗体13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的CDR和/或可变结构域的抗体。重组抗体在本文中以名称"TIM3.2"至"TIM3.18"被提及。当以其名称"TIM3.2"至"TIM3.18"提及这些重组抗体中任何抗体时，未提及任何具体的恒定区，即，抗体TIM3.2至TIM3.18可能具有任何想要的恒定区，例如在图13中显示的那些。
CDR和可变结构域在以下背景中表达：无效应子IgG1恒定区（同种异型“f”），其包含取代L234A、L235E、G237A、A330S和P331S (“IgG1.1f”)；和IgG1.3f（无效应子IgG1恒定区（同种异型“f”）），其包含取代L234A、L235E、G237A，即其仅因不具有A330S和P331S取代而不同于IgG1.1f。CDR和可变区还可以用于IgG4，例如IgG4P（即，具有“S228P”取代的IgG4）的背景中。这些抗体的某些CDR和构架区也已经被突变。具体而言，13A3和8B9的VHCDR2，13A3和VHFR4的VHCDR3已经被突变。在图13、表1和序列表中提供了已经产生的IgG1.1f和IgG1.3f抗体和可以制备的其他抗体的列表。重组表达的抗体包括在下文实施例中描述的那些，以及已经表达为IgG1.1f抗体的抗体3G4、8C4、9F6、8B9、17C8、5D6。
分别在图8A和9A中提供了抗体13A3、8B9、8C4、17C3、9F6、3G4和17C8的重链和轻链可变区的序列比对。分别在图8B和9B中提供了VH和VL区序列命名。在图10中提供了野生型和突变13A3 VH链的序列比对。在图11中提供了野生型和突变9F6 VH链的序列比对。在图12中提供了野生型和突变8B9 VH链的序列比对。
实施例2：人抗TIM3抗体的表征
测定所选抗TIM3抗体与表达TIM3的细胞的结合。图14A显示了多种抗TIM3抗体与人TIM3转染的细胞（图14A）、和与抗CD3/抗CD28活化的人T细胞的结合（图14B），如通过流式细胞术所测定。通过使用食蟹猴TIM3 转染的细胞(图15A)和抗CD3/抗CD28活化的食蟹猴T细胞(图15B)还测试了抗体与食蟹猴TIM3的结合。图15A显示13A3对食蟹猴TIM3转染的细胞系具有最大结合EC50，并且其是与活化的食蟹猴T细胞反应的唯一抗TIM3抗体。
实施例3：通过表面等离子共振测定的TIM3抗体与人和食蟹猴TIM3的结合亲和力
如下进一步所述，在37℃下补充有0.05% (v/v) Tween-20的PBS pH 7.4中，在BiacoreT200仪器上测定抗TIM3 13A3 Fab片段对人和食蟹猴TIM3的动力学和亲和力。所用的人TIM3蛋白由人TIM3的胞外结构域(ECD)连接小鼠Fc组成，由此形成二聚体hTIM3 ECD-Fc蛋白("hTIM3-mFc")。该融合蛋白从稳定转染的CHO细胞表达，并且使用蛋白A亲和力，随后通过大小排阻层析从培养基中纯化出来。所用的重组食蟹猴TIM3蛋白由食蟹猴TIM3的胞外结构域后接接头和亲和力标签组成，由此形成单体食蟹猴TIM3 ECD蛋白("cyno TIM3-MycHisAvi")。该融合蛋白从瞬时转染的Expi293 细胞(Life Tech)表达并且将蛋白使用亲和力标签(6x His)，随后通过大小排阻层析从培养基中分离并纯化出来。
hTIM3-mFc的氨基酸序列如下：
。
cynoTIM3-MycHisAvi的氨基酸序列如下：
。
使用连接组蛋白尾的13A3和TIM3.18.IgG1.3的Fabs。13A3重链(HC) Fab 6xHis的氨基酸序列如下：
。
13A3重链(HC) N60Q D101E Fab 6xHis的氨基酸序列如下：
。
使用瞬时转染Expi293 (Life Tech)制备重组13A3和TIM3.18.IgG1.3 Fabs。所表达的Fab包含后接hIgG1的CH1的重链可变区和后接hκ的CL结构域的轻链可变区。所表达的Fab分泌到培养基中并使用亲和力标签(6x His)进行纯化。
使用用于小鼠抗体的Biacore捕获试剂盒(目录号BR-1008-38)在Biacore CM4系列S芯片(GE Healthcare Life Sciences 目录号BR-1005-34)上制备抗小鼠抗体捕获芯片。在流动室2和3上以两种不同的表面密度捕获人TIM3-小鼠Fc融合蛋白。在流动室4上捕获食蟹猴TIM3-小鼠Fc融合蛋白。流动室1（空白捕获表面）充当参照。以3倍、6成员稀释系列，利用1.0 µM最高浓度和4.1 nM最低浓度在所有表面上使重组表达的His标签化的抗体Fab片段作为分析物流动。双重参考所得的传感图（使用流动室1和缓冲液空白）并且利用质量运输拟合成1:1 Langmuir结合模型。整体拟合流动室2和3的数据。
在表2中提供了复合体形成(Ka)和解离(KD)速率以及整体解离常数(KD)。
表2：抗TIM3抗体13A3 和TIM3.18.IgG1.3与人以及食蟹猴TIM3蛋白的结合的动力学和亲和力
配体 分析物 ka (1/Ms) kd (1/s) K<sub>D</sub> (nM)
人TIM3 hTIM3Fc/13A3 Fab 3.2 x10<sup>6</sup> 6.9 x10<sup>-3</sup> 2.2
食蟹猴TIM3 cynoTIM3Fc/13A3 Fab 2.4 x10<sup>6</sup> 5.3 x10<sup>-2</sup> 22
人TIM3 hTIM3Fc/TIM3.18 Fab 3.2 x10<sup>6</sup> 5 x10<sup>-3</sup> 1.6
食蟹猴TIM3 cynoTIM3Fc/TIM3.18 Fab 3.4 x10<sup>6</sup> 5.9 x10<sup>-2</sup> 17
利用13A3的实验不是如利用TIM3.18的那些实验在同一天进行。
实施例4：通过Scatchard分析测定的TIM3抗体与人以及食蟹猴TIM3的结合亲和力
使用IODO-GEN®固相碘化试剂(1,3,4,6-四氯-3a-6a-二苯基甘脲； Pierce 目录28601)利用125I-Na (1mCi； PerkinElmer 目录NEZ033H001 MC)将TIM3.18.IgG1.3抗体放射性碘化。使用脱盐柱(Pierce 目录43243)将过量的碘化物去除。收集标记的抗体部分并在Wizard 1470 γ计数器(PerkinElmer)上分析放射性。利用来自Invitrogen的Qubit荧光计计算每一部分中的125I-TIM3.18.IgG1.3抗体浓度。通过峰蛋白和放射性部分的薄层层析(Pinestar Technology 目录151-005)确定放射性纯度。
通过将表达人或食蟹猴TIM3的CHO细胞与125I-TIM3.18.IgG1.3抗体的滴定液孵育来证实放射性碘化的TIM3.18.IgG1.3抗体与表达人或食蟹猴TIM3的CHO细胞的结合。通过在100倍摩尔过量的未标记抗体的滴定液存在下的结合测定非特异性结合并从总CPM中扣减以计算特异性结合。125I-TIM3.18.IgG1.3抗体浓度相对于CPM的线性标准曲线用于外推比活性（specific activity）、最大nM结合的125I- TIM3.18.IgG1.3抗体，并由此计算每个细胞的受体数量。
结果示于图27A和27B中。125I-TIM3.18.IgG1.3抗体标准曲线(图27A)显示1 nM的125I标记的抗体等于81119.3 cpm。通过以下等式：(Bmax) x (阿伏伽德罗数) x (测定体积) / 每孔的细胞数计算每个细胞的受体数量。结果显示TIM3.18.IgG1.3抗体对CHO细胞上过量表达的人TIM3具有0.26-0.48 nM的亲和力（每个细胞具有414,720个受体），并且对过量表达的食蟹猴TIM3具有0.36-0.48 nM的亲和力（每个细胞具有235,944个受体）。
利用来自2个供体的活化的人Th1细胞上的125I-TIM3.18.IgG1.3抗体(50,000细胞/孔)进行的类似分析提供了0.125 – 0.164 nM的亲和力，尽管在供体之间每个细胞的受体数量上存在几乎四倍的差异(图28)。通过将活化的初级人Th1细胞（如在本文其他实施例中所述制备）与125I-TIM3.18.IgG1.3的滴定液孵育证明放射性碘化的TIM3.18.IgG1.3与人TIM3的结合。通过在100倍摩尔过量的未标记抗体的滴定液存在下的结合测定非特异性结合并从总CPM中扣减以计算特异性结合。125I-TIM3.18.IgG1.3浓度相对于CPM的线性标准曲线用于外推最大nM结合的125I-TIM3.18.IgG1.3，并由此计算每个细胞的受体数量。
实施例5：TIM3.18.IgG1.3与人TIM1、人TIM4和小鼠TIM3的交叉反应性的缺失
在针对整个基因库进行TIM-3 IgV结构域的blast搜索后，最高同源分子是TIM1和TIM4(45%同一性)。通过流式细胞术使用人TIM1或TIM4转染的细胞系的TIM3.18.IgG1.3的选择性谱显示与TIM1或TIM4没有交叉反应性。在小鼠TIM3转染的细胞上通过流式细胞术还显示，TIM3.18.IgG1.3与小鼠TIM3转染的细胞没有交叉反应。
实施例6：通过抗TIM3抗体增强了肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的IFN-γ产生
为了进一步表征抗TIM3抗体并鉴定在体内更可能具有显著的T细胞刺激活性的那些，开发了特异性T细胞测定。所述测定测量了从肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)分泌的IFN-γ的量，所述肿瘤浸润淋巴细胞从新鲜肿瘤组织分离，并在表达CD3的经照射的CHO细胞("CHO-OKT3细胞")存在下，在存在或不存在TIM3抗体（或对照）的情况下孵育。不希望受具体作用机制的限制，在存在指定抗TIM3抗体的情况下分泌IFN-γ表明抗体抑制TILs上TIM3正常提供的负信号传导，并刺激TILs的活化（即，IFN-γ产生）。
通过酶消化(Miltenyi, 目录号130-095-929)将来自肾细胞癌症患者的新鲜肿瘤组织（包括肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)）制备成单细胞悬浮液。细胞活力高于80%，如通过FACS所测定。在不同浓度的同种型对照抗体或抗TIM3抗体存在下将1.5 105个细胞与2.5 104个经照射的（67,000 RAD，1小时20分钟；Rad Source Irradiator, RS-2000 BiologicalSystem）CHO-OKT3细胞在含IL-2的培养基(IL-2 (Peprotech, 目录号200-02)，20 IU/ml)中共培养5天。在培养的第5天，收集细胞上清液并通过ELISA (BD Opteia hIFNγ ELISA试剂盒, BD, 目录号555152)测定IFN-γ水平。在图16中显示的结果表明抗TIM3抗体13A3、3G4、17C3、17C8和9F6刺激肾细胞癌症TILs的IFN-γ产生。
利用Miltenyi酶促消化试剂盒(Miltenyi, 目录号130-095-929)消化来自肺癌患者的新鲜肿瘤组织。在不同浓度的同种型对照抗体或抗TIM3抗体存在下，单细胞悬浮液与经照射的(67,000 RAD，1小时20分钟； Rad Source Irradiator, RS-2000 BiologicalSystem) CHO-OKT3细胞在以20 IU/ml含有IL-2的培养基(IL-2 (Peprotech, 目录号200-02)中共培养。在培养的第5天，收集细胞上清液用于IFN-γ ELISA (BD Opteia hIFNγELISA试剂盒, BD, 目录号555152)。在图17A中显示的结果表明所测试的抗TIM3抗体（即，13A3和3G4）刺激肺癌TILs的IFN-γ产生。
此外，在来自肺癌肿瘤组织的细胞悬浮液与利用同种型对照抗体或抗TIM3抗体处理的经照射的(67,000 RAD ，1小时20分钟；Rad Source Irradiator, RS-2000Biological System)的CHO-OKT3细胞在IL-2的存在下共培养的第3.5天，将细胞与BDGolgiStop孵育过夜。随后，首先利用细胞表面标志物CD45、CD4、CD8、TIM3和PD1将细胞染色，然后固定并利用BD Cytofix/ Cytoperm试剂盒透化，随后进行细胞内IFN-γ染色。在图17B中显示的结果显示细胞内IFN-γ表达细胞的百分比在CD8+细胞（下图）中在抗TIM3抗体处理时增加。
图18显示了响应于抗TIM3抗体克隆13A3或3G4的多个肿瘤TIL实验（如在该实施例中上文所述进行）的合并数据（即，图上的每个点代表利用13A3或3G4处理的一个患者肿瘤样品的TIL）。若干肾细胞癌(RCC)和肺癌TIL在促进IFN-γ产生中响应抗TIM-3抗体，而来自甲状腺肿瘤的单个TIL制备物却不能做到这一点。
实施例7：抗TIM3抗体基于FACS的交叉阻断
使用Miltenyi T细胞纯化试剂盒从PBMC分离总的人T细胞，并用平板结合的抗CD3（1μg/ml；抗CD3克隆OKT3，eBioscience，目录号16-0037-85）和可溶性抗CD28（1μg/ml；抗CD28克隆CD28.2，BD Biosciences，目录号555725）活化4天。如通过FACS测定，TIM3在> 80％的T细胞中表达。将T细胞与多种抗TIM3抗体一起孵育30分钟，然后与选择的生物素标记的抗TIM3抗体一起孵育30分钟，并通过PE-缀合的链霉抗生物素蛋白检测。图19中显示的结果表明抗体13A3、3G4、17C3、17C8和9F6在相同的分箱(binning)组（组I）中，即彼此交叉竞争，而抗体8B9和8C4在一个单独的分箱组（组II）中，即不与I组中的抗体交叉竞争，但是彼此交叉竞争。显示分箱组I中的抗体具有生物活性（参见实施例），而分箱组II中的抗体具有较弱的活性。不与组I或组II交叉竞争的两种抗TIM3抗体似乎没有任何生物学活性。分箱组I的抗体也是干扰TIM3与PS结合的那些抗体（如本文进一步描述）。
实施例8：通过酵母表面展示法的表位作图
编码人TIM3（NM_032782）的胞外结构域的核苷酸序列，即，
通过连接到XhoI和NotI限制酶位点克隆到酵母展示质粒PDV0023中。使用来自Agilent Technologies的GeneMorph II Random Mutagenesis试剂盒在序列上进行低速率随机诱变以在TIM3编码区上产生单点突变。在VWK18gal酿酒酵母（S. cerevisiae）细胞中产生9.8×106个克隆的文库。传代2×108个文库细胞并诱导抗体标记和细胞分选。将约2×107个诱导细胞与100nM一级靶标抗人TIM3抗体和100nM抗cMyc（9E10）抗体在25℃孵育1小时。洗涤细胞，然后用荧光标记的山羊抗人IgG-PE和山羊抗小鼠IgG-A633二级抗体在4℃下检测45分钟，以检测细胞表面上结合的一级抗体。将标记的细胞在BD FACSARIA II仪器上分选到酵母培养基中。收集用抗Myc抗体阳性标记并用抗人TIM3阴性标记的细胞。将APC+/PE-细胞群体扩增，传代并诱导进行第二轮相同的标记和分选以富集所需群体。从未选择的文库中的约2×107个细胞和两轮选择的分选细胞中纯化酵母质粒DNA。对于每个细胞群体，使用位于人TIM3序列侧翼的载体特异性引物，通过PCR拯救TIM3靶序列并从酵母质粒DNA中纯化出来。使用来自Illumina的用于Illumina测序的Nextera XT DNA文库试剂盒对靶序列PCR产物进行NGS文库制备。将制备的文库送至EA/Q2 Solutions用于在来自Illumina的MiSeq平台上进行高通量测序，且具有300个循环/流动室。将每个文库的50-100万个序列读数与野生型TIM3序列进行比较，并将沿序列的每个位置的突变制成表格。计算所选轮次和未选择文库之间每个残基位置的突变频率差异，并用于确定抗体结合的关键残基。使用基于小鼠TIM3的已知晶体结构的人TIM3结构模型检查具有高突变频率的位置的表面暴露（PDB：2OYP和PDB：3BIB）。高突变频率、表面暴露残基被认为是表位的一部分，而高突变频率、埋藏的残基被认为是假阳性。假阳性残基通常是那些破坏蛋白的局部或核心折叠，并间接改变Ab与其表面表位的结合的残基。
图20显示了对于所使用的每种抗体，被确定为人TIM3上的表位的一部分的残基。此外，D104在所有作图中显示阳性突变评分，并且可能是R81的结构盐桥。对于8B9表位，L84显示高突变频率，尽管似乎埋藏在支持表位残基的结构中。Q113显示对13A3低的但阳性评分。它可能起表位区域结构支持作用，但具有一些表面暴露。
实施例9：TIM3抗体阻断TIM3-PtdSer相互作用
图21A中显示的“串联阻断测定”用于确定抗TIM3抗体是否抑制人TIM3和磷脂酰丝氨酸（“PtSer”或“PS”）之间的相互作用。由于PS不是水溶性的，因此制备PS-脂质体用于测定。简而言之，将脂质与甲醇/氯仿混合，然后在氮气流下蒸发氯仿并真空过夜。随后，用微尖端（micro tip）对脂质进行超声处理，以完全分散脂质以产生脂质体。将它们进一步通过挤出机> 10次以确保均匀的尺寸。
用悬浮于氯仿中的PS（L-α-磷脂酰丝氨酸(Brain, Porcine) Avanti PolarLipids 目录号840032C）产生PS脂质体。首先将PS原料在氯仿中稀释至所需量，并在氮气流下蒸发氯仿直至看不到液体。为了除去痕量的氯仿，将干燥的PS置于真空下过夜。然后通过涡旋和短暂超声处理将干燥的PS悬浮在PBS中直至溶液变浑浊。为了产生尺寸确定的PS脂质体，使用具有100nm过滤器的挤出机。将悬浮的PS装入挤出机中并通过过滤器至少10次。此时，将PS脂质体在PBS中稀释至所需浓度。
在“串联阻断测定”中，在Octet生物传感器上捕获TIM3（ECD）-Fc，并允许抗TIM3抗体和PS-脂质体与TIM3蛋白结合。当抗TIM3结合阻断PS结合的区域时，PS-脂质体显示无结合。
在图21B中显示的结果表明抗体3G4、13A3、17C3和17C8抑制PtSer与人TIM3的结合，而2种其他抗TIM3抗体，即AbA和AbB，不抑制PtSer与人TIM3的结合。 如实施例中进一步描述，抑制PtSer结合的抗体也是具有最强功能活性的抗体（如在Th1和TIL测定中测定的）。
实施例10：TIM3抗体的HDX-MS表位作图
使用氢/氘交换质谱（HDX-MS）来探测hTIM-3与抗体13A3和3G4的结合表位。
HDX-MS通过监测主链酰胺氢原子的氘交换速率和程度来探测溶液中的蛋白构象和构象动力学[1,2]。HDX的水平取决于主链酰胺氢原子和蛋白氢键的溶剂可及性。通过MS可以精确测量HDX后蛋白的质量增加。当该技术与酶消化配对时，可以解析肽水平上的结构特征，使得能够区分表面暴露的肽与折叠在内部的那些肽或从蛋白-蛋白复合物界面处隔离的那些肽。通常，进行氘标记和随后的猝灭实验，然后进行酶消化，肽分离和MS分析。
在表位作图实验之前，进行非氘化实验以产生重组人TIM-3（（hTIM3-ECD（22-200）His-标记的）（参见图25）； 10μM，Sino Biological Inc.）和hTIM-3与抗体13A3和3G4的Fab（1：1摩尔比）的蛋白复合物的常见肽列表。将样品注入Waters Enzymate BEH胃蛋白酶酶柱（2.1×30mm）中，并在200℃下消化3分钟。容纳所有层析元件的UPLC系统的冷却室在整个测量时间内保持在0.0±0.1℃。将注射的肽捕获并以100μL/min脱盐3分钟，然后在6分钟内通过5-40％乙腈-水梯度以65μL/min进行分离。分离柱是1.0mm×50.0mm ACQUITY UPLC BEHC18柱（Waters）。通过在Waters HDX-MS系统上使用ProteinLynx Global SERVER 2.5（Waters）的精确质量分析和MSE的组合来完成消化肽的鉴定。
在HDX-MS实验中，将5μL的每种样品（hTIM-3或具有抗体13A3或3G4的Fab的hTIM-3）稀释到55μL的D2O缓冲液（10mM磷酸盐缓冲液，D2O，pH7）中以开始标记反应。反应进行了不同的时间段：1分钟，10分钟和240分钟。到每个标记反应期结束时，通过加入猝灭缓冲液（含有4M GdnCl和0.4M TCEP的100mM磷酸盐缓冲液，pH 2.5, 1:1, v/v）淬灭反应。使用与非氘化实验中相同的条件在线消化50μL猝灭的样品。所有比较实验均在相同的实验条件下进行。全部实验以一式两份实施。使用软件程序DynamX 3.0TM（Waters）将得到的相对氘水平相对于交换时间作图。
如图25中所示，在HDX-MS实验中获得97.3％的hTIM-3的序列覆盖率。如图26中所示，与抗体13A3和3G4的Fab结合后hTIM-3的HDX-MS数据分析鉴定出以下不连续表位：
。
图26显示了如使用本实施例中描述的HDX-MS方案测定的抗体13A3和3G4结合的HDX-MS肽。
因此，抗体13A3与hTIM3的氨基酸残基49-62和111-127的区域相互作用，但不与其他区域显著相互作用，例如氨基酸残基Y40或V49的N-末端区域，位于氨基酸残基E62和R111之间的区域，和氨基酸残基L127的C-末端区域。13A3结合TIM-3 IgV结构域的磷脂酰丝氨酸结合环。
实施例11：在人体组织交叉反应性中通过TIM3.18的中靶IHC染色
在人和食蟹猴脾的冷冻切片上用13A3进行免疫组织化学（IHC）。在两个物种中，13A3（0.5μg/ml）染色静脉血窦的内皮。如所预期，不与食蟹猴TIM-3交叉反应的抗体3G4染色人脾脏而不是食蟹猴脾脏。
在初步组织交叉反应性分析中，将FITC缀合的TIM3.18.IgG1.3应用于来自20种正常人组织的冷冻切片或涂片，所述组织其包括大脑、小脑、心脏、肝、肺、肾、PBMC涂片、脾、扁桃体、胸腺、皮肤、结肠、小肠、胃、胰腺、周围神经、垂体、甲状腺、前列腺和胎盘（每种1个供体）。在PBMC、脾和扁桃体的单核细胞（MNC）的亚组中以及胸腺中的上皮网状细胞或巨噬细胞中观察到特异性染色。最显著的染色是在巨噬细胞/DC样细胞中，其在所检查的每个组织中观察到，包括组织特异性巨噬细胞（例如，肝脏中的Kupffer细胞，皮肤中的真皮巨噬细胞/DC和胎盘中的Hofbauer细胞）。在器官水平上，在脾中发现最强的染色。除了小的MNC亚组外，在红髓中的脾内皮细胞中经常看到强染色。此外，在肾皮质的皮质肾小管上皮细胞的小亚组中观察到阳性染色。
实施例12：组合抗TIM3和PD-1抗体在小鼠中的抗肿瘤活性
在CT26结肠直肠肿瘤模型中评估大鼠抗小鼠TIM-3（RMT3 23）和PD-1（RMP1-14）商业抗体（Bio-X-Cell）。实验设计类似于先前描述的体内研究Ngiow等人 (2011) Cancer Res.71:3540。由于在该肿瘤模型中TIM-3表达相对较晚（第15天），因此将少量肿瘤细胞（2×105）植入每只小鼠的侧腹，使肿瘤生长最小化，为TIM-3表达留出时间。当肿瘤在第8天变得可触及时，将小鼠随机分成4个治疗组，每组10只小鼠，且平均肿瘤体积为40mm3。通过腹膜内注射施用作为单一或组合药剂（250μg/次注射每种抗体）的RMT3-23（抗TIM-3抗体）和RMP1-14（抗PD-1抗体）；同种型对照以500μg/次注射施用。每只研究动物每次注射接受250μg一种抗体或500μg的2种组合抗体，总共3次剂量。每两周评估一次肿瘤大小。接受单一或组合测试物的每组中的小鼠表现出抗肿瘤活性，其中抗PD-1单一疗法组中的2/10只小鼠和组合抗PD-1和抗TIM-3组中的6/10小鼠在研究终止时仍然是无肿瘤（图24A）。之前相同设计的CT26研究产生了类似的结果，其中抗PD-1单一疗法组中的3/10小鼠和组合的抗PD-1和抗TIM-3组中的7/10小鼠无肿瘤。作为单一药剂施用抗TIM-3几乎没有或没有抗肿瘤活性。
值得注意的是，RMT3-23与活化的小鼠T细胞结合的EC50值为1.7nM，其比结合人TIM-3的TIM3.18的EC50弱17倍。另一种交叉阻断RMT3-23的大鼠抗小鼠TIM-3抗体（Ab M）与活化的小鼠T细胞的结合具有0.1nM的EC50，这相当于TIM3.18的EC50。与RMT3-23一样，Ab M定位到小鼠TIM-3的PS结合环。在CT26肿瘤模型中使用该抗体与mIgG1-D265A（Fc-惰性同种型）重链恒定区证明它增强了对抗PD-1的抗肿瘤应答（图24B）。
实施例13：用TIM3抗体（全长或Fab）阻断的Th1细胞增殖测定
为了进一步表征抗TIM3抗体，开发了使用体外极化Th1细胞的特异性T细胞增殖测定。通过重复再刺激未经处理（naïve）的CD4+ T细胞获得极化Th1细胞。然后在抗TIM3抗体（或对照）存在下将这些细胞与经照射的（生长停滞的）CHO-OKT3细胞一起孵育，并测量Th1细胞增殖。
如下将未经处理的CD4 T细胞极化为Th1记忆样T细胞。使用来自Miltenyi的未经处理的CD4T细胞分离试剂盒从PBMC中纯化未经处理的CD4 T细胞。在存在以下情况下，将细胞以3.6×105细胞/ml在IMDM/10％FBS中培养3-4天：CD3/CD28包被的（分别为80％/20％）珠粒，以1个珠粒比1个细胞的比例；10ng/ml人IL-2； 1ng/ml人IL-12和10000ng/ml抗人IL-4抗体。孵育后，将细胞收集在管中，用磁铁除去珠粒，并将细胞放回新烧瓶中的培养物中。加入重组人IL-2至终浓度为4ng/ml，将细胞再孵育3天。然后收集细胞并用1X IMDM/10％FBS洗涤。计数细胞，以4.1×105细胞/ml重悬于IMDM/10％FBS中，并在存在以下情况下培养3-4天：CD3/CD28包被的（分别为80％/ 20％）珠粒，以1个珠粒比1个细胞的比例；10ng/ml人IL-2； 1ng/ml人IL-12和10000ng/ml抗人IL-4抗体。孵育后，将细胞收集在管中，用磁铁除去珠粒，并将细胞放回新烧瓶中的培养物中。加入重组人IL-2至终浓度为4ng/ml，并将细胞再孵育2-3天。然后收获极化的Th1细胞并洗涤3次。在测定设定当天，将极化的Th1细胞重悬于完全培养基中。
使用以下试剂：
Dynabeads M-450 Epoxy　　　 　Dynal Biotech ASA　　　140.11
100mM磷酸钠缓冲液，pH 8.5　　　Teknova　　　　　　　　0214-250
功能级抗hCD3克隆UCHT-1　　　　eBioscience　　　　　　16-0038-85
功能级抗hCD28克隆CD28.2　　 　eBioscience　　　　　　16-0289-85
重组人IL-2　　　　　　　　　　PeproTech，Inc.　　 　　200-02
重组人IL-12　　　　　　　 　　PeproTech，Inc.　　 　　200-12
抗人IL-4　　　　　　　　　　　eBioscience　　　　　　16-7048-85
Iscove's DMEM 　　　　　　　Mediatech, Inc. 　 　　10-016-CM
胎牛血清（热灭活）　　　　　　　Hyclone　　　　　　　　SH30071.03。
CHO-OKT3细胞系在摇瓶中生长并在测定设定当天照射（67,000 RAD ，1小时20分钟； Rad Source Irradiator，RS-2000 Biological System）。如经Annexin V染色证实，经照射的CHO-OKT3细胞提供T细胞刺激并暴露磷脂酰丝氨酸（PS）。
通过4倍连续稀释从20μg/ml滴定TIM3.18.IgG1.3或同种型对照，其中每种条件一式三份设定。TIM3.18.IgG1.3 Fab也通过4倍连续稀释从53μg/ml滴定。TIM3.18.IgG1.3Fab片段与结晶学实验中使用的相同（参见实施例）。
将培养物设定在0.1μg/ml抗CD28（克隆CD28.2，BD Biosciences，目录号555725）存在下每孔200μL完全培养基中具有1×105个极化的Th1细胞和2.5×104个经照射的CHO-OKT3细胞（CHO：T细胞比率为1：4）的平底TC处理的96孔板（Costar）中，并在37℃和5％CO2下孵育3天。然后将板用每孔1μCi氚化胸苷（Perkin Elmer，目录号NET027001MC）脉冲16小时，然后将细胞收集到滤板（Perkin Elmer）上用于分析氚化的胸苷掺入以评估增殖。
图29A和29B中显示的结果表明抗TIM3抗体TIM3.18.IgG1.3在CHO-OKT3/Th1共培养细胞测定中以剂量依赖性方式增加Th1细胞增殖。TIM3.18.IgG1.3的总活性与其亲本抗体13A3（IgG4同种型）的总活性相当（图29A）。TIM3.18.IgG1.3 Fab片段在CHO-OKT3/Th1细胞测定中还表现出剂量依赖性的增殖诱导（图29B）。
因此，TIM3.18.IgG1.3（全长和Fab）在与经照射的CHO-OKT3细胞共培养物中以剂量依赖性方式强化Th1细胞活性。Fab片段的活性的存在表明TIM3.18.IgG1.3作为拮抗性抗体起作用，并且TIM-3是T细胞功能的抑制性受体。TIM3.18.IgG1.3生物活性不需要Fc交联。
实施例14：具有TIM 3和PD 1共同阻断的Th1细胞增殖测定
该测定是在抗-CD28存在下，在以CHO：T细胞比例为1：4的用人PD-L1转染的经照射的（生长停滞；67,000 RAD，1小时20分钟；Rad Source Irradiator, RS-2000 BiologicalSystem）CHO-OKT3细胞（CHO-OKT3-PD-L1）和Th1细胞之间的共培养。CHO-OKT3-PD-L1细胞系在摇瓶中生长并在测定设定当天进行照射。如本文所述的其他实施例中所述制备极化的Th1细胞。在测定设定当天，将极化的Th1细胞重悬于完全培养基中。
通过10倍连续稀释从10μg/ml滴定抗PD-1抗体纳武单抗，且每种条件一式三份设定。以20μg/ml掺入TIM-3抗体TIM3.18.IgG1.3或同种型对照。
将培养物设定在每孔200 µL完全培养基中具有1×105 Th1细胞和2.5×104 CHO-OKT3-PD-L1细胞的平底TC处理的96孔板(Costar)中[在存在0.1 µg/ml抗CD28 (克隆CD28.2, BD Biosciences, 目录号555725)的情况下]，并在37℃和5％CO2下孵育3天。然后将板用每孔1μCi氚化胸苷（Perkin Elmer，目录号NET027001MC）脉冲16小时，然后将细胞收集到滤板（Perkin Elmer）上用于分析氚化的胸苷掺入以评估增殖。
图30中显示的结果表明抗PD-1抗体纳武单抗以剂量依赖性方式增加用CHO-OKT3-PD-L1细胞刺激的Th1 T细胞的增殖。并且与TIM3.18.IgG1组合极大地增强了增殖。TIM-3和PD-1途径的共同阻断在该测定中显示出累加效应。
实施例15：具有TIM3.18.IgG1.3阻断的肿瘤浸润淋巴细胞IFN-γ释放测定
对于该测定，从手术切除的人肾细胞癌样品或乳腺癌样品中获得新鲜肿瘤组织。使用酶解离试剂盒（Miltenyi，目录130-095-929）分离肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）。TILs补充有20IU/mL IL-2（重组人IL-2，Peprotech, 目录200-02）并与经照射的（生长停滞；67,000RAD，1小时20分钟；Rad Source Irradiator, RS-2000 Biological System）CHO-OKT3细胞以1：6的CHO：T比例共培养。CHO-OKT3细胞系在摇瓶中生长并在测定设定当天进行照射。
TIM-3抗体TIM3.18.IgG1.3或同种型对照通过4倍连续稀释从20μg/ml滴定，且每种条件一式三份设定。将培养物设定在IMDM + 5% FBS和5%人AB血清(Gemini, 目录号100-512)中每孔200μL的具有1.5×105 T细胞和2.5×104经照射的CHO-OKT3细胞的平底TC处理的96孔板（Costar）中，并在37℃和5％CO2下孵育5天。从每个样品收获上清液用于通过ELISA（BD Opteia hIFN-γELISA试剂盒，BD，目录555152）进行IFN-γ测量。
图31中显示的肾细胞癌TIL和图32中显示的乳腺癌TIL的结果表明TIM3.18.IgG1.3在CHO-OKT3/TIL共培养测定中以剂量依赖性方式增加IFN-γ产生，且在肾细胞癌TIL测定中较高浓度的TIM3.18.IgG1.3下相对于阴性对照增加高达4倍。
实施例16：TIM3.18.IgG1.3促进M0：T同种异体MLR测定中的IFN-γ分泌
来自健康供体的分离的CD14+单核细胞在含有M-CSF的培养基中分化至M0阶段。在培养的第6天后，通过FACS染色，显著的巨噬细胞群体在细胞表面上表达CD163+和CD206+，与抑制性巨噬细胞的特征一致。通过用抗TIM-3抗体的流式细胞术，显示TIM-3在M0巨噬细胞中表达（图33）。然后照射这些M0巨噬细胞（5,000 RAD 7分钟； Rad Source Irradiator，RS-2000 Biological System）并与同种异体供体的总T细胞共培养，并且在共培养后第6天，将混合细胞用3H-胸苷脉冲过夜用于评估T细胞增殖。
图34中显示的结果表明与同种型对照相比，TIM3.18.IgG1.3增加T细胞增殖。
实施例17：与hTIM3相互作用的TIM3.18.IgG1.3 Fab的晶体结构
如下将hTIM3 IgV区与TIM3.18的Fab片段共结晶。所用的序列如下：
(SEQ ID NO: 377；TIM3序列加下划线）
表达和纯化。在大肠杆菌（E.Coli）（BL21 DE3）中用pET47b载体表达组氨酸标签化的hTim3 IgV结构域。按照以下公开的mTim3方案进行纯化和重折叠(DeKruyff等人J. Immunology 2010)。Tim3.18 Fab在HEK293细胞中瞬时表达，并通过重链上的C末端His标签纯化。
复合物的结晶和结构测定。将具有Tim3.18 Fab的hTim3 IgV结构域的晶体结构解析至1.5Å。首先用来自Hampton Research的多种筛选筛选Fab：抗原复合物的结晶条件，并在PEG 3350，pH范围为6.5-5.5的条件下观察到晶体簇。进一步优化晶体生长条件以允许单晶生长。用甘油作为冷冻保护剂收获单晶，并在液氮中快速冷冻。使用Pilatus-6M检测器在APS的IMCA-CAT进行数据收集。使用Global Phasing软件处理衍射图像，并使用Tim3.18的Fab模型进行相位分析(phased)。使用CCP4套件，Coot，Phenix和Global Phasing软件套件完成多轮精修。
解析的hTim3 IgV结构域与已公开的hTim3结构（PDB: 5F71；worldwideweb.rcsb.org/pdb/explore/explore.dopdbId=5F71），以及在与PS的复合物中解析的mTim3结构（PDB: 3KAA； worldwideweb.rcsb.org/pdb/explore/explore.dostructureId=3kaa； Rosemarie等人(2010) J Immunol 184:1918）的结构域完全匹配。从这些结构比对推断出hTim3中的PS结合口袋。另外，PS结合口袋的位置在人和小鼠的TIM成员中是保守的(Freemen等人 (2010) Immunol Rev. 235: 172)。
通过计算hTIM3：TIM3.18 Fab晶体结构和单独的hTIM3结构之间的可及表面积的差异（“表面埋藏方法”）鉴定hTim3蛋白上TIM3.18的接触残基。在与TIM3.18 Fab形成复合物后显示埋藏表面积的hTIM3残基被定义为接触残基的一部分。蛋白的溶剂可及表面定义为探针球体（代表1.4-Å半径的溶剂分子）随着它在蛋白的范德瓦尔斯（Van der Waals）表面上滚动时中心的位置。通过在围绕每个原子的延伸球体上产生表面点（在距离原子中心的距离等于原子和探针半径之和处），并消除位于与邻近原子相关的等效球体内的那些来计算溶剂可接触的表面积，如程序AREAIMOL (http://www.ccp4.ac.uk/newsletters/newsletter38/03_surfarea.html)中所执行。
图35和36中显示的结果提供下列氨基酸是接触残基，如上述表面埋藏方法所鉴定：P29、V30、C31、P38、V39、F40、E41、C42、G43、N44、V45、V46、L47、R48、T49、D50、E51、D53、R90、Q92、G95、I96、M97、D99 (根据SEQ ID NO: 290编号，其是成熟的hTIM3胞外结构域)或P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、T70、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120 (根据SEQ ID NO: 286编号 (图20)，其是具有信号肽的hTIM3)。这些结果表明TIM3.18.IgG1.3在人TIM3上的接触残基与人TIM3上的PS结合口袋重叠。具体而言，TIM3.18的重链CDR2占据PS结合口袋。通过重链CDR1和CDR3产生与PS结合环的额外接触。此处生成的结构数据证实了PS阻断测定中获得的结果（参见实施例）。
结晶学结果还显示，hTIM3的下列氨基酸残基具有位于TIM3.18 Fab的氨基酸残基原子的5 Å内（“5 Å距离法”）的原子：P29、V30、C31、P38、V39、F40、E41、C42、G43、N44、V45、V46、L47、R48、D50、E51、D53、R90、I91、Q92、G95、I96、M97、D99 (根据SEQ ID NO: 290编号，其是成熟的hTIM3胞外结构域)或 P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、I112、Q113、G116、I117、M118、D120 (根据SEQ ID NO: 286编号 (图20)，其是具有信号肽的hTIM3)。在表3中显示了Fab和hTIM3蛋白的具体相互作用残基。
表3 与Fab残基相互作用的人TIM3残基的列表
通过两种方法鉴定的氨基酸残基的比较显示残基基本上相同，除了仅通过表面埋藏方法鉴定的残基T49和仅通过“5 Å距离法”鉴定的残基I91。
实施例18：TIM3.18.IgG1.3的额外特征
在表4中提供了在CHO细胞中表达的TIM3.18.IgG1.3的生物物理学特征。
表4：TIM3.18.IgG1.3的生物物理学特征
在重链的N297处确认了单个N糖基化位点，其中聚糖谱与CHO表达的IgG1单克隆抗体的聚糖谱一致。TIM3.18.IgG1.3不结合CD16、CD32或CD64，提示其对任何Fc-FcR介导的效应子功能是惰性的。TIM3.18.IgG1.3具有良好的热稳定性 (Tm1 = 68.1℃, Tm2 = 80.3℃, Tm3 = 82.6℃)和热可逆性(在74℃下为95.6 %，在80℃下为25.5 %)，其提示分子在热应激下保持其结构完整性并且当应激解除时具有强健的重折叠性质。
在表5中提供了TIM3.18.IgG1.3的稳定性特征。
表5： TIM3.18.IgG1.3的稳定性
在50mg/mL的冻融应激（6个循环）期间未观察到物理稳定性问题。将50mg/mL的强制降解研究设定为4、25和40℃。在测试的任何条件下，在12周内未观察到CDR区中的化学修饰。
通过计算机模拟（in silico）方法评估TIM3.18.IgG1.3的潜在免疫原性风险。TIM3.18.IgG1.3的计算机模拟iDAB分析显示该mAb的CDR中极少潜在的HLA结合序列，表明诱导人免疫应答的风险低。
实施例19：TIM3.18.IgG1.3在猴中的PK/PD
在单剂量PK/PD和耐受性研究中，用2.5mg匙孔血蓝蛋白（KLH）和表达猿猴免疫缺陷病毒（SIV）Nef和Gag蛋白的非增殖重组腺病毒-5（Ad5）载体（每个载体3×109）肌内免疫所有猴。免疫后，以0（媒介物）、0.5、10或25mg/kg（N = 3 /组；混合性别）的剂量向猴静脉内施用TIM3.18.IgG1.3。收集血清样品长达42天以评估药代动力学（PK）和抗药物抗体（ADA），并收集血液样品长达42天以评估受体占有率。保留额外的血清样本用于其他探索性终点，包括可溶性TIM-3水平。
AUC0-168h与0.5至25 mg/kg的剂量成比例。TIM3.18.IgG1.3证明约2周的T1/2和0.18mL/h/kg的总血清清除率。稳态下的分布体积在68至84 mL/kg的范围内，提示TIM3.18.IgG1.3主要驻留在细胞外间隙（表6）.。
表6： 在食蟹猴中IV施用后TIM3.18.IgG1.3的药代动力学参数
*外推的AUC超过20％的截止值并且范围为21％至55％。
基于食蟹猴中的PK和异速比例，预计的人总血清清除率为0.10mL/h/kg，且Vss为88mL/kg。因此，预计的人半衰期约为26天。
实施例20：初步细胞因子释放测定
为了确定用TIM3.18.IgG1.3治疗是否引起细胞因子释放综合征的风险，来自16个人供体的全血与20 μg/mL的TIM3.18.IgG1.3或阳性对照在溶液中一起孵育。对于每个供体检查一组75种血清细胞因子和趋化因子。没有T细胞来源的细胞因子或趋化因子释放增加的证据，提示细胞因子释放综合征的风险低。在来自一些供体的全血测定中，IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α和G-CSF升高，这与上文呈现的TIM-3阻断增加了单核细胞或巨噬细胞衍生的细胞因子产生的证据一致。
实施例21：TIM3.18.IgG1.3不会导致受体下调或内化
为了确定13A3在与细胞膜结合时是否下调或内化细胞膜上的人TIM3，进行如图37中显示的荧光猝灭研究。图38中显示的处理3小时后的结果表明13A3抗体或变体D101E或N60Q在活化的供体CD8+ T细胞中均未引起细胞内TIM3抗体的剂量依赖性积累，提示抗体未被内化。
为了确定潜在的下调，将活化的供体CD8+ T细胞在多种量的13A3、13A3.D101.Ig1.1f、13A3.D101E/N60Q.IgG1.1f或对照抗体或无抗体的存在下孵育2小时，并测定细胞表面上TIM3的量。结果表明与抗TIM3抗体一起孵育不下调细胞表面TIM3。

Claims (77)

1.分离的抗体（例如人抗体）或其抗原结合部分，其结合人含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3（TIM3）并展示出以下特性：
（a）结合可溶性人TIM3；
（b）结合膜结合的人TIM3；
（c）诱导或增强T细胞活化；和任选地：
（d）结合可溶性食蟹猴TIM3；和
（e）结合膜食蟹猴TIM3。
2.权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体刺激抗肿瘤免疫应答。
3.权利要求1或2的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体刺激抗原特异性T细胞应答。
4.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体增加表达TIM3的T细胞中的IFN-γ产生。
5.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体增加T细胞增殖。
6.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体不结合Fc受体，或其中所述抗体缺乏效应子功能。
7.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中如通过Biacore所测量的，所述抗体以10nM或更低的KD结合可溶性人TIM3。
8.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中如通过Biacore所测量的，所述抗体以100nM或更低的KD结合可溶性食蟹猴TIM3。
9.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是抑制通过TIM3的负细胞（例如T细胞）信号传导的拮抗剂抗体。
10.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中如通过流式细胞术所测量的，所述抗体以0.1或1μg/mL或更低的EC50结合膜结合的人TIM3。
11.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中如通过Scatchard分析所测量的，所述抗体以1nM或更低的KD结合膜结合的人TIM3。
12.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中如通过流式细胞术所测量的，所述抗体以1μg/mL或更低的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，或其中如通过Scatchard分析所测量的，所述抗体以1nM或更低的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3。
13.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR3包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ IDNO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO:128或SEQ ID NO: 129。
14.权利要求13的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR1包含X1、X2、X3、X4、Y、X5和X6，并且其中X1是S或无，X2是R或无，X3是S、R或D，X4是Y或H，X5是W或M，且X6是G、N、S或H。
15.权利要求13或14的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR1包含X1、Y、Y、M和X2，并且其中X1是S或D且X2是H或S。
16.权利要求13或14的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR1包含R、X1、Y、W和X2，并且其中X1是H或Y且X2是N或S。
17.权利要求13-16中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR2包含X1、I、X2、X3、X4、G、X5、X6、X7、X8、Y、X9、X10、X11、X12、X13和X14，并且其中X1是S、Y、I或F，X2是Y、H、N或S，X3是Y、P、G、T或S，X4是S、T、R或G，X5是F、S或D，X6是S、T或I，X7是I或无，X8是Y、N或I，X9是N、Q、S或A，X10是P、S、Q或D，X11是S或K，X12是L、F或V，X13是K或Q，且X14是S或G。
18.权利要求13-17中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR2包含Y、I、H、Y、X1、G、S、T、N、Y、N、X2、S、L、K和S，并且其中X1是S或T且X2是S或P。
19.权利要求13-17中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR2包含F、I、S、X1、X2、G、S、X3、I、Y、Y、A、D、S、V、K和G，并且其中X1是G、T或S，X2是G或S，且X3是T或I。
20.权利要求13-17中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR2包含I、I、N、P、R、G、D、S、I、I、Y、A、Q、K、F、Q和G。
21.权利要求13-20中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述轻链CDR1包含SEQ IDNO: 64或SEQ ID NO: 65。
22.权利要求13-21中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述轻链CDR2包含SEQ IDNO: 66或SEQ ID NO: 67。
23.权利要求13-22中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述轻链CDR3包含SEQ IDNO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70或SEQ ID NO: 71。
24.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
（a）所述重链CDR1选自SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO: 45；
（b）所述重链CDR2选自SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 124和SEQ ID NO: 125；
（c）所述重链CDR3选自SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 128和SEQ ID NO: 129；
（d）所述轻链CDR1包含SEQ ID NO: 64或SEQ ID NO: 65；
（e）所述轻链CDR2包含SEQ ID NO: 66或SEQ ID NO: 67；和
（f）所述轻链CDR3包含SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70或SEQ ID NO:71。
25.分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3，所述抗体或其抗原结合部分包含：
（a1）分别包含SEQ ID NO: 41、46、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 41、122、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 41、123、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 41、124、53的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 41、46、126的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 41、46、127的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 41、46、128的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 41、46、129的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 41、122、128的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQ ID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 41、122、126的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQ ID NO: 64、66、68的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 42、47、54的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 42、125、54的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（c）分别包含SEQ ID NO: 43、48和55的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（d）分别包含SEQ ID NO: 44、49和56的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（e）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（f）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和71的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（g1）分别包含SEQ ID NO: 45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO: 65、67和70的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（g2）分别包含SEQ ID NO: 45、50、57的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、71的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（g3）分别包含SEQ ID NO: 45、50、57的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，和分别包含SEQID NO: 64、66、69的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
（h）分别包含SEQ ID NO: 45、51和58的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
（i）分别包含SEQ ID NO: 45、52和59的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
26.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:41、46和53的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
27.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:42、47和54的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
28.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:43、48和55的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
29.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:44、49和56的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
30.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
31.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和71的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
32.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:45、50和57的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 65、67和70的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
33.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:45、51和58的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和68的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
34.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别含有SEQ ID NO:45、52和59的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO: 64、66和69的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
35.分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并包含重链和轻链可变区，其中所述重链可变区包含与选自SEQ ID NO: 34、35、36、37、38、39、40、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121和364的氨基酸序列具有至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约96%、至少约97%、至少约98%、至少约99%或约100%同一性的氨基酸序列。
36.分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并包含重链和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含与选自SEQ ID NO: 60、61、62和63的氨基酸序列具有至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约96%、至少约97%、至少约98%、至少约99%或约100%同一性的氨基酸序列。
37.分离的抗体或其抗原结合部分，其结合人TIM3并与包含VH和VL的参考抗体交叉竞争结合人TIM3，其中所述VH和VL选自：
（a）包含SEQ ID NO: 34所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（b）包含SEQ ID NO: 35所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（c）包含SEQ ID NO: 36所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（d）包含SEQ ID NO: 37所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（e）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（f）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 62所示的氨基酸序列的VL；
（g）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（h）包含SEQ ID NO: 39所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（i）包含SEQ ID NO: 40所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（j）分别包含SEQ ID NO: 121所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（k）分别包含SEQ ID NO: 120所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（l）分别包含SEQ ID NO: 112所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（m）分别包含SEQ ID NO: 113所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（n）分别包含SEQ ID NO: 114所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（o）分别包含SEQ ID NO: 115所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（p）分别包含SEQ ID NO: 116所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（q）分别包含SEQ ID NO: 117所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（r）分别包含SEQ ID NO: 118所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（s）分别包含SEQ ID NO: 119所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；和
（t）分别包含SEQ ID NO: 364所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL。
38.权利要求37的抗体或其抗原结合部分，其如例如通过本文提供的一种或多种方法所测定的，在与所述参考抗体相同的表位处结合TIM3。
39.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含选自以下的VH和VL：
（a）包含SEQ ID NO: 34所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（b）包含SEQ ID NO: 35所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（c）包含SEQ ID NO: 36所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（d）包含SEQ ID NO: 37所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（e）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（f）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 62所示的氨基酸序列的VL；
（g）包含SEQ ID NO: 38所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（h）包含SEQ ID NO: 39所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（i）包含SEQ ID NO: 40所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（j）分别包含SEQ ID NO: 121所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 63所示的氨基酸序列的VL；
（k）分别包含SEQ ID NO: 120所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL；
（l）分别包含SEQ ID NO: 112所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（m）分别包含SEQ ID NO: 113所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（n）分别包含SEQ ID NO: 114所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（o）分别包含SEQ ID NO: 115所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（p）分别包含SEQ ID NO: 116所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（q）分别包含SEQ ID NO: 117所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（r）分别包含SEQ ID NO: 118所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；
（s）分别包含SEQ ID NO: 119所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL；和
（t）分别包含SEQ ID NO: 364所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL。
40.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含VH和VL，所述VH包含选自SEQ IDNO: 34、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 119和SEQ ID NO: 364的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列。
41.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO: 35或SEQ IDNO: 120所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL。
42.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO: 36所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL。
43.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO: 37所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL。
44.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO: 38或SEQ IDNO: 121所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63或SEQ ID NO: 62所示的氨基酸序列的VL。
45.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO: 39所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 60所示的氨基酸序列的VL。
46.权利要求37或38的抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO: 40所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的VL。
47.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。
48.权利要求47的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体是IgG1抗体。
49.权利要求47的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含无效应子IgG1 Fc。
50.权利要求49的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含含有以下突变的无效应子IgG1 Fc：L234A、L235E、G237A和任选A330S和P331S。
51.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其包含含有选自SEQ ID NO:263-266的氨基酸序列的重链恒定区。
52.权利要求1-51中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分是人或人源化抗体。
53.权利要求1-52中任一项的抗体，其中所述抗体包含:
（a1）分别包含SEQ ID NO: 301 (或302)和29的重链和轻链序列；
（a2）分别包含SEQ ID NO: 1 (或8)和29的重链和轻链序列；
（a3）分别包含SEQ ID NO: 15 (或22)和29的重链和轻链序列；
（a4）分别包含SEQ ID NO: 303 (或304)和29的重链和轻链序列；
（a5）分别包含SEQ ID NO: 72 (或82)和29的重链和轻链序列；
（a6）分别包含SEQ ID NO: 92 (或102)和29的重链和轻链序列；
（a7）分别包含SEQ ID NO: 305 (或306)和29的重链和轻链序列；
（a8）分别包含SEQ ID NO: 73 (或83)和29的重链和轻链序列；
（a9）分别包含SEQ ID NO: 93 (或103)和29的重链和轻链序列；
（a10）分别包含SEQ ID NO: 307 (或308)和29的重链和轻链序列；
（a11）分别包含SEQ ID NO: 74 (或84)和29的重链和轻链序列；
（a12）分别包含SEQ ID NO: 94 (或104)和29的重链和轻链序列；
（a13）分别包含SEQ ID NO: 309 (或310)和29的重链和轻链序列；
（a14）分别包含SEQ ID NO: 75 (或85)和29的重链和轻链序列；
（a15）分别包含SEQ ID NO: 95 (或105)和29的重链和轻链序列；
（a16）分别包含SEQ ID NO: 311 (或312)和29的重链和轻链序列；
（a17）分别包含SEQ ID NO: 76 (或86)和29的重链和轻链序列；
（a18）分别包含SEQ ID NO: 96 (或106)和29的重链和轻链序列；
（a19）分别包含SEQ ID NO: 313 (或314)和29的重链和轻链序列；
（a20）分别包含SEQ ID NO: 77 (或87)和29的重链和轻链序列；
（a21）分别包含SEQ ID NO: 97 (或107)和29的重链和轻链序列；
（a22）分别包含SEQ ID NO: 315 (或316)和29的重链和轻链序列；
（a23）分别包含SEQ ID NO: 78 (或88)和29的重链和轻链序列；
（a24）分别包含SEQ ID NO: 98 (或108)和29的重链和轻链序列；
（a25）分别包含SEQ ID NO: 317 (或318)和29的重链和轻链序列；
（a26）分别包含SEQ ID NO: 79 (或89)和29的重链和轻链序列；
（a27）分别包含SEQ ID NO: 99 (或109)和29的重链和轻链序列；
（a28）分别包含SEQ ID NO: 319 (或320)和29的重链和轻链序列；
（a29）分别包含SEQ ID NO: 349 (或350)和29的重链和轻链序列；
（a30）分别包含SEQ ID NO: 351 (或352)和29的重链和轻链序列；
（a31）分别包含SEQ ID NO: 353 (或354)和29的重链和轻链序列；
（b1）分别包含SEQ ID NO: 321 (或322)和30的重链和轻链序列；
（b2）分别包含SEQ ID NO: 2 (或9)和30的重链和轻链序列；
（b3）分别包含SEQ ID NO: 16 (或23)和30的重链和轻链序列；
（b4）分别包含SEQ ID NO: 323 (或324)和30的重链和轻链序列；
（b5）分别包含SEQ ID NO: 80 (或90)和30的重链和轻链序列；
（b6）分别包含SEQ ID NO: 100 (或110)和30的重链和轻链序列；
（b7）分别包含SEQ ID NO: 325 (或326)和30的重链和轻链序列；
（c1）分别包含SEQ ID NO: 327 (或328)和30的重链和轻链序列；
（c2）分别包含SEQ ID NO: 3 (或10)和30的重链和轻链序列；
（c3）分别包含SEQ ID NO: 17 (或24)和30的重链和轻链序列；
（c4）分别包含SEQ ID NO: 329 (或330)和30的重链和轻链序列；
（d1）分别包含SEQ ID NO: 331 (或332)和29的重链和轻链序列；
（d2）分别包含SEQ ID NO: 4 (或11)和29的重链和轻链序列；
（d3）分别包含SEQ ID NO: 18 (或25)和29的重链和轻链序列；
（d4）分别包含SEQ ID NO: 333 (或334)和29的重链和轻链序列；
（e1.1）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和32的重链和轻链序列；
（e1.2）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和33的重链和轻链序列；
（e1.3）分别包含SEQ ID NO: 335 (或336)和31的重链和轻链序列；
（e2）分别包含SEQ ID NO: 5 (或12)和33的重链和轻链序列；
（e3）分别包含SEQ ID NO: 19 (或26)和33的重链和轻链序列；
（e4）分别包含SEQ ID NO: 337 (或338)和33的重链和轻链序列；
（e5）分别包含SEQ ID NO: 81 (或91)和33的重链和轻链序列；
（e6）分别包含SEQ ID NO: 101 (或111)和33的重链和轻链序列；
（e7）分别包含SEQ ID NO: 339 (或340)和33的重链和轻链序列；
（f1）分别包含SEQ ID NO: 341 (或342)和29的重链和轻链序列；
（f2）分别包含SEQ ID NO: 6 (或13)和29的重链和轻链序列；
（f3）分别包含SEQ ID NO: 20 (或27)和29的重链和轻链序列；
（f4）分别包含SEQ ID NO: 343 (或344)和29的重链和轻链序列；
（g1）分别包含SEQ ID NO: 345 (或346)和29的重链和轻链序列；
（g2）分别包含SEQ ID NO: 7 (或43)和30的重链和轻链序列；
（g3）分别包含SEQ ID NO: 21 (或28)和30的重链和轻链序列；或
（g4）分别包含SEQ ID NO: 347 (或348)和30的重链和轻链序列；
其中所述抗体特异性结合人TIM3。
54.权利要求1-53中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分具有以下特性中的一种或多种：
（1）例如以10nM或更低（例如，0.01nM至10nM）的KD结合可溶性人TIM3，例如如通过Biacore所测量的；
（2）例如以100nM或更低（例如，0.01nM至100nM）的KD结合可溶性食蟹猴TIM3，例如如通过Biacore所测量的；
（3）例如以1μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至1μg/mL）的EC50结合膜结合的人TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的；
（4）例如以1nM或更低（例如，0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的人TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的；
（5）例如以20μg/mL或更低（例如，0.01μg/mL至20μg/mL）的EC50结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过流式细胞术所测量的；
（6）例如以1nM或更低（例如，0.01nM至10nM）的KD结合膜结合的食蟹猴TIM3，例如如通过Scatchard分析所测量的；
（7）诱导或增强T细胞活化（例如，通过阻断或降低TIM3的抑制作用），如通过（i）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）中IFN-γ产生增加和/或（ii）表达TIM3的T细胞（例如，Th1细胞或TIL）的增殖增强所证实；
（8）在混合淋巴细胞反应（MLR）测定中刺激T细胞增殖；
（9）抑制磷脂酰丝氨酸与TIM3的结合，例如如通过PS-hTIM3“串联”阻断测定所测量的；
（10）当结合细胞上的TIM3时，不内化或下调细胞表面TIM3；
（11）结合人TIM3胞外结构域(SEQ ID NO: 290)的下列区域之一：(a) CPVFECG (SEQID NO: 296)；(b) RIQIPGIMND (SEQ ID NO: 298)；(c) CPVFECG和RIQIPGIMND (分别为SEQ ID NO: 296和298)；和(d) WTSRYWLNGDFR (SEQ ID NO: 297)；
（12）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸L48、C58、P59、V60、F61、E62、C63、G64、W78、S80、R81、W83、L84、G86、D87、R89、D104、R111、Q113、G116、M118和D120（如SEQ ID NO: 286（图20）中所编号）中的一个或多个被另一种氨基酸取代；
（13）在任一方向或两个方向上与包含以下中任一者的VH和VL结构域的抗体竞争结合人TIM3：13A3、3G4、17C3、17C8、9F6、8B9、8C4、或TIM3.7、TIM3.8、TIM3.10、TIM3.11、TIM3.12、TIM3.13、TIM3.14、TIM3.15、TIM3.16、TIM3.17和TIM3.18；
（l4）如通过HDX-MS所测定的，结合人TIM3区49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)和111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 368)；
（15）如通过X射线晶体学所测定的，具有与人TIM3的以下氨基酸的至少5、10、15、20个或全部相互作用的重链和/或轻链可变区：P50、V51、C52、P59、V60、F61、E62、C63、G64、N65、V66、V67、L68、R69、D71、E72、D74、R111、Q113、G116、I117、M118、D120和任选T70和/或I112（例如在实施例中所述的；根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）；和/或
（16）（a）相对于与野生型人TIM3的结合，具有降低的与这样的人TIM3的结合，在所述人TIM3中氨基酸C58、P59、F61、E62、C63、R111、D120和任选D104和Q113（根据SEQ ID NO: 286（图20）编号）中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个被另一种氨基酸取代；（b）如通过HDX-MS所测定的，结合49VPVCWGKGACPVFE62 (SEQ ID NO: 367)、111RIQIPGIMNDEKFNLKL127 (SEQ ID NO:368)和119NDEKFNLKL127 (SEQ ID NO: 373)，如实施例中所述的；和/或（c）与13A3或TIM3.18.IgG1.3竞争或交叉阻断结合人TIM3。
55.双特异性分子，其包含与具有第二结合特异性的分子连接的前述权利要求中任一项的抗体。
56.核酸，其编码权利要求1-54中任一项的抗体或其抗原结合部分的重链和/或轻链可变区。
57.表达载体，其包含权利要求56的核酸分子。
58.细胞，其转化有权利要求57的表达载体。
59.免疫缀合物，其包含与药剂连接的权利要求1-54中任一项的抗体。
60.组合物，其包含权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物和载体。
61.试剂盒，其包含权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、或双特异性分子或免疫缀合物和使用说明书。
62.制备抗TIM3抗体或其抗原结合部分的方法，其包括在权利要求58的细胞中表达所述抗体或其抗原结合部分和从所述细胞中分离所述抗体或其抗原结合部分。
63.刺激抗原特异性T细胞应答的方法，其包括使T细胞与权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物接触，使得抗原特异性T细胞应答得到刺激。
64.活化或共刺激效应T细胞的方法，其包括使效应T细胞与权利要求1-55和59中任一项的抗TIM3抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物和CD3接触，其中效应T细胞被激活或共刺激。
65.增加T细胞中IFN-γ产生的方法，其包括使T细胞与有效量的权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物接触。
66.增加T细胞增殖的方法，其包括使细胞与有效量的权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物接触。
67.增加主体的T细胞中IFN-γ产生的方法，其包括施用有效量的权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，以增加从T细胞的IFN-γ产生。
68.刺激主体中的TIL活性的方法，其包括向主体施用治疗有效量的权利要求1-54中任一项的抗TIM3抗体。
69.刺激主体中的免疫应答的方法，其包括向主体施用权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，使得主体中的免疫应答得到刺激。
70.权利要求69的方法，其中所述主体具有肿瘤并且针对肿瘤的免疫应答得到刺激。
71.抑制主体中的肿瘤生长或减小主体中的肿瘤大小的方法，其包括向主体施用权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，使得主体中的肿瘤生长受到抑制。
72.治疗癌症的方法，其包括向有此需要的主体施用治疗有效量的权利要求1-55和59中任一项的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物以治疗癌症。
73.权利要求72的方法，其中所述癌症选自：膀胱癌、乳腺癌、子宫/子宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃肠癌、胰腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肾癌、头颈癌、肺癌、胃癌、生殖细胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮肤癌、中枢神经系统肿瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相关的癌症。
74.权利要求72或73所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症、难治性癌症或复发性癌症。
75.权利要求67-74中任一项的方法，其还包括施用一种或多种另外的治疗剂。
76.权利要求75的方法，其中所述另外的疗法是抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗CTLA-4抗体、抗GITR抗体或抗PD-L1抗体。
77.检测样品中含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3（TIM3）的存在的方法，其包括在允许权利要求1-54中任一项的抗体或其抗原结合部分与TIM3之间形成复合物的条件下使样品与所述抗体或其抗原结合部分接触，和检测复合物的形成。
CN201780056616.2A 2016-07-14 2017-07-13 针对tim3的抗体及其用途 Active CN109757103B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311725662.0A CN117683135A (zh) 2016-07-14 2017-07-13 针对tim3的抗体及其用途

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662362541P 2016-07-14 2016-07-14
US62/362541 2016-07-14
US201762459499P 2017-02-15 2017-02-15
US62/459499 2017-02-15
PCT/US2017/041946 WO2018013818A2 (en) 2016-07-14 2017-07-13 Antibodies against tim3 and uses thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311725662.0A Division CN117683135A (zh) 2016-07-14 2017-07-13 针对tim3的抗体及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109757103A true CN109757103A (zh) 2019-05-14
CN109757103B CN109757103B (zh) 2024-01-02

Family

ID=59383664

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311725662.0A Pending CN117683135A (zh) 2016-07-14 2017-07-13 针对tim3的抗体及其用途
CN201780056616.2A Active CN109757103B (zh) 2016-07-14 2017-07-13 针对tim3的抗体及其用途

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311725662.0A Pending CN117683135A (zh) 2016-07-14 2017-07-13 针对tim3的抗体及其用途

Country Status (18)

Country Link
US (6) US20190248893A1 (zh)
EP (1) EP3484920A2 (zh)
JP (3) JP7027401B2 (zh)
KR (2) KR20230020562A (zh)
CN (2) CN117683135A (zh)
AU (1) AU2017297506A1 (zh)
BR (1) BR112019000431A2 (zh)
CA (1) CA3030765A1 (zh)
CL (2) CL2019000100A1 (zh)
CO (1) CO2019000372A2 (zh)
IL (1) IL264011A (zh)
MX (1) MX2019000443A (zh)
MY (1) MY200602A (zh)
PE (1) PE20190418A1 (zh)
SG (2) SG10201911972QA (zh)
TW (2) TWI780057B (zh)
UY (1) UY37325A (zh)
WO (1) WO2018013818A2 (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110517726A (zh) * 2019-07-15 2019-11-29 西安电子科技大学 一种基于高通量测序数据的微生物成分及浓度检测方法
WO2021051351A1 (zh) * 2019-09-19 2021-03-25 上药生物治疗（香港）有限公司 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN113195538A (zh) * 2018-12-12 2021-07-30 上海药明生物技术有限公司 抗tim-3抗体及其用途
CN113214396A (zh) * 2020-07-31 2021-08-06 北京市神经外科研究所 抗tim3的单链抗体及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途
CN114539357A (zh) * 2020-11-27 2022-05-27 广州汉腾生物科技有限公司 信号肽在表达glp-1融合蛋白中的应用
CN114632156A (zh) * 2022-05-17 2022-06-17 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 Tim-3在预防、治疗或减轻疼痛中的应用
WO2024169928A1 (zh) * 2023-02-15 2024-08-22 三优生物医药(上海)有限公司 包含共同轻链的抗体库、其制备方法及其用途
US12122832B2 (en) 2021-04-23 2024-10-22 Suzhou Neologics Bioscience Co., Ltd. TIM-3-targeting antibodies and uses thereof

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2016236270B2 (en) 2015-03-23 2022-01-27 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Anti-CEACAM6 antibodies and uses thereof
CN116693685A (zh) 2016-04-12 2023-09-05 法国施维雅药厂 抗tim-3抗体及组合物
MY200602A (en) 2016-07-14 2024-01-04 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
TWI665216B (zh) * 2016-12-29 2019-07-11 財團法人生物技術開發中心 抗人類tim-3抗體及其使用方法
CN110494450A (zh) 2017-03-31 2019-11-22 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
EP4116328A1 (en) 2017-04-05 2023-01-11 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Combination therapies targeting pd-1, tim-3, and lag-3
EP3630833A1 (en) 2017-05-25 2020-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
SG11202001211TA (en) 2017-08-28 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Tim-3 antagonists for the treatment and diagnosis of cancers
EP3694884A1 (en) 2017-10-15 2020-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
EP3740506A1 (en) * 2018-01-16 2020-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
CN110144011B (zh) * 2018-02-14 2020-06-23 上海洛启生物医药技术有限公司 针对t淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3的单域抗体
CN110272489B (zh) * 2018-03-15 2023-08-22 上海健信生物医药科技有限公司 一种针对tim-3的全人源化抗体分子, 抗原结合片段及其医药用途
EP3768725A4 (en) * 2018-03-20 2021-06-02 Wuxi Biologics Ireland Limited NEW ANTI-TIM-3 ANTIBODIES
EP3768715A1 (en) 2018-03-23 2021-01-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
EP3774840A1 (en) 2018-03-27 2021-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Real-time monitoring of protein concentration using ultraviolet signal
WO2019191676A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
CA3092387A1 (en) 2018-04-02 2019-10-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti-trem-1 antibodies and uses thereof
CN116789827A (zh) 2018-04-12 2023-09-22 南京维立志博生物科技有限公司 应用tim-3结合抗体治疗疾病的方法
PE20211604A1 (es) 2018-07-09 2021-08-23 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos de union a ilt4
JP7543247B2 (ja) * 2018-08-21 2024-09-02 アルバート アインシュタイン カレッジ オブ メディスン ヒトＴｉｍ－３に対するモノクローナル抗体
CN109180816B (zh) * 2018-09-17 2021-07-30 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人tim-3抗体及其用途
AU2019371457A1 (en) * 2018-11-01 2021-05-20 Merck Patent Gmbh Anti-TIM-3 antibodies
EP3887397A1 (en) 2018-11-28 2021-10-06 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
CN111253485A (zh) * 2018-11-30 2020-06-09 上海开拓者生物医药有限公司 抗人tim-3单克隆抗体及其应用
IL283746B2 (en) 2018-12-19 2024-08-01 Bayer Ag Pharmaceutical combination of anti-CEACAM6 and TIM3 antibodies
JP7285936B2 (ja) 2019-01-22 2023-06-02 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－７ｒアルファサブユニットに対する抗体及びその使用
WO2020172658A1 (en) 2019-02-24 2020-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating a protein
US20220220430A1 (en) 2019-05-23 2022-07-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of monitoring cell culture media
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
EP3976831A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
CN114174537A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 细胞定位特征和组合疗法
MX2022003197A (es) 2019-09-22 2022-04-11 Bristol Myers Squibb Co Perfilado espacial cuantitativo para terapia con antagonistas de la proteina del gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3).
WO2022047412A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
WO2022076318A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods for concentrating proteins
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
TW202237638A (zh) * 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
EP4267105A1 (en) 2020-12-28 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
EP4267172A1 (en) 2020-12-28 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
WO2023031366A1 (en) 2021-09-02 2023-03-09 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Anti-cecam6 antibodies with reduced side-effects
EP4456907A1 (en) 2021-12-30 2024-11-06 NeoImmuneTech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and vegf antagonist
WO2023173011A1 (en) 2022-03-09 2023-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Transient expression of therapeutic proteins
CN118871451A (zh) 2022-03-18 2024-10-29 百时美施贵宝公司 分离多肽的方法
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2024102722A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Neoimmunetech, Inc. Methods of treating a tumor with an unmethylated mgmt promoter
WO2024163477A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 University Of Rochester Immune checkpoint blockade therapy for treating staphylococcus aureus infections
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120189617A1 (en) * 2010-06-11 2012-07-26 Kyushu University, National University Corporation Anti-tim-3 antibody
WO2013006490A2 (en) * 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
US20150000806A1 (en) * 2013-06-28 2015-01-01 Octavia A. VILORIO Carry bag with attachment accessory
WO2016068802A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 Agency For Science, Technology And Research Anti-tim-3 antibodies
WO2016071448A1 (en) * 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-tim3 antibodies and methods of use

Family Cites Families (238)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4881175A (en) 1986-09-02 1989-11-14 Genex Corporation Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5013653A (en) 1987-03-20 1991-05-07 Creative Biomolecules, Inc. Product and process for introduction of a hinge region into a fusion protein to facilitate cleavage
JPH02500329A (ja) 1987-05-21 1990-02-08 クリエイテイブ・バイオマリキユールズ・インコーポレーテツド ターゲット化多機能蛋白質
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
ATE135370T1 (de) 1988-12-22 1996-03-15 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CA2089661C (en) 1990-08-29 2007-04-03 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
AU6819494A (en) 1993-04-26 1994-11-21 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
WO1995017886A1 (en) 1993-12-27 1995-07-06 Baxter International Inc. Water soluble non-immunogenic polyamide cross-linking agents
US6066322A (en) 1995-03-03 2000-05-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of immune disorders
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1998042752A1 (en) 1997-03-21 1998-10-01 Brigham And Women's Hospital Inc. Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
EP1724282B1 (en) 1997-05-21 2013-05-15 Merck Patent GmbH Method for the production of non-immunogenic proteins
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP1071700B1 (en) 1998-04-20 2010-02-17 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
ES2340745T3 (es) 1998-12-23 2010-06-08 Pfizer Inc. Anticuerpos monoclonales humanos contra ctla-4.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
DK2270150T4 (da) 1999-04-09 2019-08-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle.
EP1074563A1 (en) 1999-08-02 2001-02-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimeric polypeptides enhancing dimer formation through electrostatic interactions and disulfide bond, method for production and uses thereof
US6936704B1 (en) 1999-08-23 2005-08-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Nucleic acids encoding costimulatory molecule B7-4
AU784012B2 (en) 1999-08-24 2006-01-12 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human CTLA-4 antibodies and their uses
WO2001039722A2 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1, a novel immunoregulatory molecule
AU4314801A (en) 2000-02-11 2001-08-20 Lexigen Pharm Corp Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US6725230B2 (en) 2000-07-18 2004-04-20 Aegis Analytical Corporation System, method and computer program for assembling process data of multi-database origins using a hierarchical display
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
JP2004532038A (ja) 2001-05-17 2004-10-21 ディヴァーサ コーポレイション 新規抗原結合分子の治療、診断、予防、酵素、産業ならびに農業各分野への応用とそのための新規抗原結合分子の作製とスクリーニングの方法
CA2448319C (en) 2001-05-31 2010-07-27 Medarex, Inc. Cytotoxins, prodrugs, linkers and stabilizers useful therefor
US8709412B2 (en) 2001-06-29 2014-04-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulation of TIM receptor activity in combination with cytoreductive therapy
CA2452196A1 (en) 2001-06-29 2003-01-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T cell regulatory genes and methods of use thereof
US7838220B2 (en) 2001-06-29 2010-11-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T cell regulatory genes associated with immune disease
ATE430580T1 (de) 2001-10-25 2009-05-15 Genentech Inc Glycoprotein-zusammensetzungen
EP1467759A4 (en) 2002-01-30 2006-05-31 Brigham & Womens Hospital COMPOSITIONS AND METHODS ASSOCIATED WITH TIM-3, TH1-SPECIFIC CELL SURFACE MOLECULE
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
JP4459810B2 (ja) 2002-08-14 2010-04-28 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体とその利用法
EP3502133A1 (en) 2002-09-27 2019-06-26 Xencor, Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1587540B1 (en) 2003-01-09 2021-09-15 MacroGenics, Inc. IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
WO2005033144A2 (en) 2003-10-03 2005-04-14 Brigham And Women's Hospital Tim-3 polypeptides
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
UA86605C2 (ru) 2004-01-12 2009-05-12 Аплайд Молекьюлер Иволюшн, Инк. Антитело, которое содержит вариант исходного человеческого fс-участка
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
WO2005097211A2 (en) 2004-03-24 2005-10-20 Telos Pharmaceuticals, Inc. Compositions as adjuvants to improve immune responses to vaccines and methods of use
AU2005244980B2 (en) 2004-05-19 2011-09-15 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Chemical linkers and conjugates thereof
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
DK2213683T3 (da) 2004-08-04 2013-09-02 Mentrik Biotech Llc VARIANT-Fc-REGIONER
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US20090145493A1 (en) 2004-11-23 2009-06-11 Pip Co., Ltd. Built-in wall water service box
WO2006105021A2 (en) 2005-03-25 2006-10-05 Tolerrx, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
EP2439273B1 (en) 2005-05-09 2019-02-27 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
ES2401482T3 (es) 2005-05-10 2013-04-22 Incyte Corporation Moduladores de la indolamina 2,3-dioxigenasa y métodos de uso de los mismos
ES2546333T3 (es) 2005-07-01 2015-09-22 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (PD-L1) de muerte programada
NZ566982A (en) 2005-09-26 2011-06-30 Medarex Inc Duocarmycin drug conjugates
DK1940789T3 (da) 2005-10-26 2012-03-19 Medarex Inc Fremgangsmåder og forbindelser til fremstilling af CC-1065-analoger
WO2007059404A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
EP1971583B1 (en) 2005-12-20 2015-03-25 Incyte Corporation N-hydroxyamidinoheterocycles as modulators of indoleamine 2,3-dioxygenase
CL2007002650A1 (es) 2006-09-19 2008-02-08 Incyte Corp Compuestos derivados de heterociclo n-hidroxiamino; composicion farmaceutica, util para tratar cancer, infecciones virales y desordenes neurodegenerativos entre otras.
ES2444574T3 (es) 2006-09-19 2014-02-25 Incyte Corporation N-hidroxiamidinoheterociclos como moduladores de la indolamina 2,3-dioxigenasa
AU2007319806A1 (en) 2006-11-15 2008-05-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Therapeutic uses of TIM-3 modulators
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
AR065404A1 (es) 2007-02-21 2009-06-03 Medarex Inc Conjugados farmaco-ligando, los que se unen a citotoxinas potentes, composicion farmaceutica que los contienen y su uso para retardar o detener el crecimiento de un tumor en un mamifero
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
JP2008278814A (ja) 2007-05-11 2008-11-20 Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk アゴニスティック抗ヒトｇｉｔｒ抗体による免疫制御の解除とその応用
WO2009014708A2 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
DE102007036200A1 (de) 2007-08-02 2009-02-05 Knorr-Bremse Systeme für Nutzfahrzeuge GmbH Induktiver Weg- oder Drehwinkelsensor mit zwischen zwei Spulen angeordnetem Abschirmblech
EP2044949A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Immutep Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response
US9416165B2 (en) 2007-10-26 2016-08-16 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting viral replication and improving T cell function employing soluble Tim-3 inhibitors
US20090181037A1 (en) 2007-11-02 2009-07-16 George Heavner Semi-Synthetic GLP-1 Peptide-FC Fusion Constructs, Methods and Uses
CA2932121A1 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Newlink Genetics Corporation Ido inhibitors
US20110059106A1 (en) 2008-01-29 2011-03-10 Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods for modulating a population of myeloid-derived suppressor cells and uses thereof
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
EP2271672B1 (en) 2008-03-26 2015-11-11 Cellerant Therapeutics, Inc. Immunoglobulin and/or toll-like receptor proteins associated with myelogenous haematological proliferative disorders and uses thereof
WO2009156652A1 (fr) 2008-05-29 2009-12-30 Saint-Gobain Centre De Recherches Et D'etudes Europeen Structure en nid d'abeille a base de titanate d'aluminium
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
KR20190069615A (ko) 2008-12-09 2019-06-19 제넨테크, 인크. 항-ｐｄ-ｌ１ 항체 및 ｔ 세포 기능을 향상시키기 위한 그의 용도
JP5569946B2 (ja) 2009-01-26 2014-08-13 国立大学法人 岡山大学 免疫抑制剤および自己免疫疾患の予防および治療剤
WO2010117057A1 (ja) 2009-04-10 2010-10-14 協和発酵キリン株式会社 抗tim-3抗体を用いた血液腫瘍治療法
US20110007023A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Sony Ericsson Mobile Communications Ab Display device, touch screen device comprising the display device, mobile device and method for sensing a force on a display device
ES2788869T3 (es) 2009-09-03 2020-10-23 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos anti-GITR
CA2778115C (en) 2009-10-28 2016-04-05 Newlink Genetics Corporation Imidazole derivatives as ido inhibitors
WO2011066389A1 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Medimmmune, Limited Targeted binding agents against b7-h1
MY159679A (en) 2009-12-10 2017-01-13 Hoffmann La Roche Antibodies binding preferentially human csf1r extracellular domain 4 and their use
PL2509409T3 (pl) 2009-12-10 2017-02-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Myszy wytwarzające przeciwciała ciężkołańcuchowe
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
ME02288B (me) 2010-02-08 2016-02-20 Regeneron Pharma Miš sa zajedničkim lakim lancem
JP5998060B2 (ja) 2010-03-04 2016-09-28 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｂ７−ｈ３と反応性のある抗体、その免疫学的に活性なフラグメントおよびその使用
CN102918060B (zh) 2010-03-05 2016-04-06 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗人csf-1r抗体及其用途
WO2011131407A1 (en) 2010-03-05 2011-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against human csf-1r and uses thereof
NZ626610A (en) 2010-05-04 2015-11-27 Five Prime Therapeutics Inc Antibodies that bind csf1r
CA2802344C (en) 2010-06-18 2023-06-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
HUE044001T2 (hu) 2010-06-22 2019-09-30 Regeneron Pharma Humán variábilis régiót tartalmazó immunglobulin hibrid könnyûláncot expresszáló egerek
US8907053B2 (en) 2010-06-25 2014-12-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
RU2710717C2 (ru) 2010-09-09 2020-01-10 Пфайзер Инк. Молекулы, связывающиеся с 4-1ВВ
GB201016266D0 (en) 2010-09-28 2010-11-10 Fujifilm Mfg Europe Bv Polymers and membranes
BR112013012213A2 (pt) * 2010-11-17 2020-09-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha moléculas de ligação a antígeno mul tlespecíficas tendo função alternativa à função dos fatores viii, ix e x de coagulação sanguínea, e anticorpo bies- 5 pecífico, seus usos na prevenção ou tratamento de hemorragia, ácido nucleico, vetor, célula, método para produzir as referidas moléculas de ligação, composição farmacêutica e kit
NO2694640T3 (zh) 2011-04-15 2018-03-17
PL2699264T3 (pl) 2011-04-20 2018-08-31 Medimmune, Llc Przeciwciała i inne cząsteczki wiążące B7-H1 i PD-1
EP2714738B1 (en) * 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
US8790651B2 (en) * 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
JP6138813B2 (ja) 2011-11-28 2017-05-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 抗ｐｄ−ｌ１抗体及びその使用
CN102492038B (zh) 2011-12-09 2014-05-28 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 抗人Tim-3的中和性单克隆抗体L3D及其用途
MX356337B (es) 2011-12-15 2018-05-23 Hoffmann La Roche Anticuerpos contra csf-1r humano y sus usos.
WO2013119716A1 (en) 2012-02-06 2013-08-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for using csf1r inhibitors
IN2014DN07022A (zh) 2012-02-21 2015-04-10 Inst Nat Sante Rech Med
IN2014DN07023A (zh) 2012-02-21 2015-04-10 Inst Nat Sante Rech Med
AR090263A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
DE18200782T1 (de) 2012-04-02 2021-10-21 Modernatx, Inc. Modifizierte polynukleotide zur herstellung von proteinen im zusammenhang mit erkrankungen beim menschen
EP2847220A1 (en) 2012-05-11 2015-03-18 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
MX368507B (es) 2012-05-15 2019-10-07 Bristol Myers Squibb Co Uso de un anticuerpo anti-pd-1 en combinación con un anticuerpo anti-ctla-4 en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
WO2014022332A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modulation of the immune response
CN104684582A (zh) 2012-08-31 2015-06-03 戊瑞治疗有限公司 用结合群落刺激因子1受体(csf1r)的抗体治疗病状的方法
MX2015013163A (es) * 2013-03-15 2016-04-04 Zyngenia Inc Complejos multiespecificos multivalente y monovalentes y sus usos.
DE102013215334A1 (de) 2013-08-05 2015-02-05 Tridonic Gmbh & Co Kg Dimmbare LED-Leuchtmittelstrecke
TW201605896A (zh) 2013-08-30 2016-02-16 安美基股份有限公司 Gitr抗原結合蛋白
EP3757130A1 (en) 2013-09-26 2020-12-30 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
MX2016005925A (es) 2013-11-05 2016-11-28 Cognate Bioservices Inc Combinaciones de inhibidores de punto de regulacion y terapeuticos para tratar el cancer.
CN103721255A (zh) 2014-01-07 2014-04-16 苏州大学 共同阻断pd-1和tim-3信号通路在抗胃癌治疗中的用途
CN104072615B (zh) 2014-01-26 2016-08-24 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种能阻断Tim-3信号通路的人Tim-3融合蛋白
CN103936853B (zh) 2014-01-26 2016-08-17 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种检测tim-3试剂盒及其使用方法
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
EP3142689B1 (en) 2014-05-13 2020-11-11 Bavarian Nordic A/S Combination therapy for treating cancer with a poxvirus expressing a tumor antigen and a monoclonal antibody against tim-3
RS61678B1 (sr) 2014-05-28 2021-05-31 Agenus Inc Anti-gitr antitela i postupci za njihovu primenu
SG10201810507WA (en) 2014-06-06 2018-12-28 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
US10501537B2 (en) 2014-07-07 2019-12-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating cancer
EP3201232A1 (en) 2014-10-03 2017-08-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) antibodies and methods of use thereof
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
WO2016068803A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 Agency For Science, Technology And Research Anti-tim-3 antibodies
HUE052526T2 (hu) * 2014-11-21 2021-05-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek, amelyek tartalmaznak módosított nehéz konstans régiókat
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
EP3250229B1 (en) 2015-01-29 2022-07-27 The Trustees of the University of Pennsylvania Checkpoint inhibitor and vaccine combinations and use of same for immunotherapy
CN104592388B (zh) 2015-03-02 2017-05-31 中国人民解放军总医院 一种抗人Tim‑3的单克隆抗体的抗原结合部分
US20180044404A1 (en) 2015-03-05 2018-02-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Immunomodulatory fusion proteins and uses thereof
KR20180008405A (ko) 2015-03-06 2018-01-24 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 Tim3에 결합하는 항체 치료제
MA41867A (fr) 2015-04-01 2018-02-06 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre l'immunoglobuline de cellule t et protéine 3 de mucine (tim-3)
WO2016166139A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Eberhard Karls Universität Tübingen Bispecific fusion proteins for enhancing immune responses of lymphocytes against tumor cells
DK3283508T3 (en) 2015-04-17 2021-05-31 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory Proteins with Tunable Affinities
US20180298095A1 (en) 2015-04-24 2018-10-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Interactions between ceacam and tim family members
US20180153986A1 (en) 2015-04-24 2018-06-07 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Interactions between ceacam and tim family members
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
WO2016179472A2 (en) 2015-05-07 2016-11-10 University Of Maryland, Baltimore Modulation of natural killer cell tolerance
EP3316902A1 (en) 2015-07-29 2018-05-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
WO2017031242A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Sutro Biopharma, Inc. Anti-tim-3 antibodies, compositions comprising anti-tim-3 antibodies and methods of making and using anti-tim-3 antibodies
KR101785155B1 (ko) 2015-09-22 2017-10-16 국립암센터 Ｔｉｍ－３을 표적으로 하는 뇌손상 질환 치료용 조성물 및 이의 스크리닝 방법
JP6622392B2 (ja) 2015-10-02 2019-12-18 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ１とｔｉｍ３に特異的な二重特異性抗体
WO2017055399A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Cellular based fret assay for the determination of simultaneous binding
WO2017079112A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
CN116693685A (zh) 2016-04-12 2023-09-05 法国施维雅药厂 抗tim-3抗体及组合物
KR20230091191A (ko) 2016-05-27 2023-06-22 아게누스 인코포레이티드 항-tim-3 항체 및 이의 사용 방법
MY200602A (en) 2016-07-14 2024-01-04 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
JOP20190013A1 (ar) 2016-08-25 2019-01-31 Lilly Co Eli أجسام مضادة لـ (تي آي ام -3)
CN116478290A (zh) 2016-08-26 2023-07-25 百济神州有限公司 抗tim-3抗体及其用途
KR20190059304A (ko) 2016-09-26 2019-05-30 어드밴테이진, 인크. Tim-3 상승을 치료하는 방법
EP3689419A1 (en) 2016-11-01 2020-08-05 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against t cell immunoglobulin and mucin protein 3 (tim-3)
JOP20190133A1 (ar) 2016-12-08 2019-06-02 Innovent Biologics Suzhou Co Ltd أجسام مضادة لـ Tim-3 لمزجها بأجسام مضادة لـ PD-1
WO2018106529A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Eli Lilly And Company Anti-tim-3 antibodies for combination with anti-pd-l1 antibodies
CN106632675A (zh) 2016-12-15 2017-05-10 常州格露康生物医药科技有限公司 一种抗人Tim‑3单克隆抗体8E11及其制备方法
TWI665216B (zh) 2016-12-29 2019-07-11 財團法人生物技術開發中心 抗人類tim-3抗體及其使用方法
US11046764B2 (en) 2017-01-03 2021-06-29 Trellis Bioscience, Llc Native human antibodies for immune checkpoint modulation targets TIM-3 and B7-H3
EP4116328A1 (en) 2017-04-05 2023-01-11 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Combination therapies targeting pd-1, tim-3, and lag-3
JOP20190222A1 (ar) 2017-04-11 2019-09-24 Zymeworks Inc الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لـ pd-l1 والمضادة لـ tim-3
SG11202001211TA (en) * 2017-08-28 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Tim-3 antagonists for the treatment and diagnosis of cancers
WO2019099838A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120189617A1 (en) * 2010-06-11 2012-07-26 Kyushu University, National University Corporation Anti-tim-3 antibody
WO2013006490A2 (en) * 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
US20150000806A1 (en) * 2013-06-28 2015-01-01 Octavia A. VILORIO Carry bag with attachment accessory
WO2016068802A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 Agency For Science, Technology And Research Anti-tim-3 antibodies
WO2016071448A1 (en) * 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-tim3 antibodies and methods of use

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FERRIS R L等: "Too much of a good thing? Tim-3 and TCR signaling in T cell exhaustion", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 *
KIKUSHIGE Y等: "TIM-3 as a therapeutic target for malignant stem cells in acute myelogenous leukemia", 《ANNALS OF THE NEW YORK ACADEMY OF SCIENCES》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113195538A (zh) * 2018-12-12 2021-07-30 上海药明生物技术有限公司 抗tim-3抗体及其用途
CN113195538B (zh) * 2018-12-12 2023-03-14 上海药明生物技术有限公司 抗tim-3抗体及其用途
CN110517726A (zh) * 2019-07-15 2019-11-29 西安电子科技大学 一种基于高通量测序数据的微生物成分及浓度检测方法
CN110517726B (zh) * 2019-07-15 2023-07-04 西安电子科技大学 一种基于高通量测序数据的微生物成分及浓度检测方法
WO2021051351A1 (zh) * 2019-09-19 2021-03-25 上药生物治疗（香港）有限公司 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN113166264A (zh) * 2019-09-19 2021-07-23 上药生物治疗（香港）有限公司 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN113166264B (zh) * 2019-09-19 2024-02-27 上药生物治疗（香港）有限公司 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN113214396A (zh) * 2020-07-31 2021-08-06 北京市神经外科研究所 抗tim3的单链抗体及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途
CN114539357A (zh) * 2020-11-27 2022-05-27 广州汉腾生物科技有限公司 信号肽在表达glp-1融合蛋白中的应用
US12122832B2 (en) 2021-04-23 2024-10-22 Suzhou Neologics Bioscience Co., Ltd. TIM-3-targeting antibodies and uses thereof
CN114632156A (zh) * 2022-05-17 2022-06-17 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 Tim-3在预防、治疗或减轻疼痛中的应用
WO2024169928A1 (zh) * 2023-02-15 2024-08-22 三优生物医药(上海)有限公司 包含共同轻链的抗体库、其制备方法及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CL2019000100A1 (es) 2019-05-10
US20180298097A1 (en) 2018-10-18
US20190248893A1 (en) 2019-08-15
US20230382992A1 (en) 2023-11-30
PE20190418A1 (es) 2019-03-19
JP7027401B2 (ja) 2022-03-01
TW202244061A (zh) 2022-11-16
SG10201911972QA (en) 2020-02-27
JP2022078102A (ja) 2022-05-24
BR112019000431A2 (pt) 2019-07-09
MY200602A (en) 2024-01-04
TWI780057B (zh) 2022-10-11
US20180016336A1 (en) 2018-01-18
US10533052B2 (en) 2020-01-14
CN109757103B (zh) 2024-01-02
CN117683135A (zh) 2024-03-12
MX2019000443A (es) 2019-06-20
SG11201900026TA (en) 2019-01-30
EP3484920A2 (en) 2019-05-22
JP7387776B2 (ja) 2023-11-28
CL2021000698A1 (es) 2021-08-13
US10077306B2 (en) 2018-09-18
CA3030765A1 (en) 2018-01-18
UY37325A (es) 2018-01-31
KR20190027384A (ko) 2019-03-14
TW201811829A (zh) 2018-04-01
JP2024023302A (ja) 2024-02-21
US20200190186A1 (en) 2020-06-18
WO2018013818A2 (en) 2018-01-18
WO2018013818A3 (en) 2018-02-22
KR20230020562A (ko) 2023-02-10
IL264011A (en) 2019-01-31
AU2017297506A1 (en) 2019-02-21
CO2019000372A2 (es) 2019-01-18
KR102493282B1 (ko) 2023-02-01
US11591392B2 (en) 2023-02-28
JP2019533981A (ja) 2019-11-28
US20240209083A1 (en) 2024-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11591392B2 (en) Antibodies against TIM3 and uses thereof
CN107207594B (zh) 针对tigit的抗体
EP3377532B1 (en) Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
EP3610924B1 (en) Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
TWI711630B (zh) 抗ｃｄ７３抗體及其用途
CN109476740A (zh) 利用抗cd73抗体的联合治疗
CN107922500A (zh) 具有增强的激动剂活性的抗cd40抗体
CN107771184A (zh) 针对cd40的抗体
US12129297B2 (en) Antibodies against TIM3 and uses thereof
EA044112B1 (ru) Антитела к tim3 и их применение

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TG01 Patent term adjustment
TG01 Patent term adjustment