CN109406650A - 用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 - Google Patents
用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109406650A CN109406650A CN201811248811.8A CN201811248811A CN109406650A CN 109406650 A CN109406650 A CN 109406650A CN 201811248811 A CN201811248811 A CN 201811248811A CN 109406650 A CN109406650 A CN 109406650A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- everolimus
- sample
- sirolimus
- ciclosporin
- whole blood
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/045—Standards internal
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明提供一种用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,包括他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的校准品,他克莫司‑13Cd2、西罗莫司‑d3、依维莫司‑d4和环孢霉素A‑d4的内标,他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的质控品,样本处理液,提取液,流动相,复溶液。采用本发明试剂盒来处理全血样本,通过简单的蛋白沉淀‑液液萃取前处理方法,无需进行复杂的净化提纯步骤就可以获得干净的处理液,而且所需样本量小,可与液相色谱仪串联质谱仪配套使用;同时,该试剂盒能同时检测四种不同的免疫抑制剂类药物,即可单样本多指标同步检测,且检测特异性好,灵敏度高,整个检测流程时间短、通量高,成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域,具体涉及测定人全血中免疫抑制剂类药物浓度的质谱试剂盒及液相色谱串联质谱检测方法。
背景技术
免疫抑制剂在临床上主要应用于抗移植排斥,治疗自身免疫性疾病和变态反应性疾病等。这类药物治疗窗窄、药动学个体差异较大,需进行治疗药物监测(therapeuticdrug monitoring,TDM)。近年来,世界卫生组织(WHO)及我国卫生部药物不良反应监测中心的统计资料均显示,因用药不当而致死者远远高于同期死于各种传染病的人数。而用药不当死亡者中,大多是剂量不当所致。可以说随着医疗技术整体水平的提高,在TDM的指导下制定和调整个体化的合理用药方案,是药物治疗学发展的必然趋势。
免疫抑制剂可抑制或减少免疫系统的活性,从而预防器官或者组织排异。由于新的免疫抑制剂不断加入移植药物治疗序列中,免疫抑制疗法无论在规模或者更新速度上均发生了变化。环孢素A(CsA)、他克莫司(TAC)、西罗莫司(SIR)和依维莫司(EVR)是实体器官移植最常用的免疫抑制剂。CsA为亲脂性环多肽,具有强大的免疫抑制活性。CsA和TAC通过抑制T淋巴细胞的增值起作用。其直接效应是通过抑制钙调磷酸酶,然后减少白介素-2基因在T细胞受体转录来实现。SIR是从吸水链霉菌分离出来的大环内酯。EVR为SIR40-O-(2-羟乙基)衍生物。SIR和EVR与哺乳动物的雷帕霉素(mTOR)复合物靶点结合,抑制T细胞激活的通路。由于治疗窗窄、个体内及个体间差异大,上述这些免疫抑制剂都是强制要求TDM的。因此,如能对CsA、TAC、SIR、MPA、PREDL等多种药物同时进行监测,可以获得更为完整的治疗用药信息,便于调整个体给药方案。
CsA、TAC、SIR、EVR与红细胞广泛结合,药物在红细胞和血浆之间的分配比率超过30:1。因此EDTA抗凝的全血是最常用的样本基质。全血中免疫抑制剂常用免疫法、HPLC-UV法和LC-MS/MS法进行定量。与LC-MS/MS法相比,免疫法通常高估EVR和SIR的浓度。因为SIR和EVR之间的结构类似,采用免疫法彼此互相干扰。另据报道,免疫法高估TAC浓度27.8%和环孢素30.3%。HPLC-UV法受冗长的运行时间和干扰影响。HPLC-MS/MS提供更高的特异性。由于HPLC-MS/MS的高特异性,目标化合物和可能的干扰物不必达到基线分离,这就可以显著降低分析运行时间及简化大量的样品纯化过程。然而,质谱临床检验方法均为实验室自行建立的方法((laboratory developed tests,LDT),采用的试剂多为非试剂盒产品,检测方法难以溯源到参考物质或参考方法,并且检测结果的准确度、重复性、时间可比性有待临床进一步验证。因此,迫切需要商品化的质谱检测试剂盒。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明提供一种用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的质谱试剂盒,采用本发明试剂盒来处理全血样本,无需进行复杂的净化提纯步骤,而且所需样本量小,可与液相色谱仪串联质谱仪配套使用,应用于临床样本的检验;同时,该产品能同时检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A这四种免疫抑制剂类药物,达到单样本多指标同步检测功能,具有准确率高、检测时间短、试剂耗用量少、操作方便等特点。
本发明的技术方案是提供一种用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,包括他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的校准品,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的内标,他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的质控品,样本处理液,提取液,流动相,复溶液。
上述校准品中四种免疫抑制剂类药物分别具有一系列浓度梯度,以便完成校准。
上述内标为他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液。
上述样本处理液为0.1~0.3mol/L硫酸锌水溶液。
上述提取液为正己烷与乙酸乙酯的混合溶液。
上述复溶液为甲醇体积比50~100%的甲醇水溶液。
本发明另一目的是提供利用上述试剂盒对人全血样本中四种免疫抑制剂类药物浓度进行检测,具体采用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)的检测方法,包括如下步骤:
(1)样本前处理:
①取样本与样本处理液混合;
②在步骤①所得的混合液中加入内标,继续混合;
③在步骤②所得的混合液中加入提取液,混合;
④将步骤③所得混合液离心;取上清液干燥后加入复溶液复溶,混合离心,取上清液用于检测;
(2)对步骤④复溶后所得的上清液进行LC/MS/MS检测分析,同时检测的还包括校准品和质控品;
(3)检测结果的计算:
a根据步骤(2)对校准品的检测分析结果进行校准曲线的绘制和拟合;
b根据步骤(2)对质控品的检测分析结果计算回收率;
c根据步骤(2)对样本上清液的检测分析结果并结合步骤a所得的标准曲线计算待测分析物浓度(即四种免疫抑制剂类药物浓度)。
本发明的优点和有益效果:采用本发明试剂盒来处理全血样本,通过简单的蛋白沉淀-液液萃取前处理方法,无需进行复杂的净化提纯步骤就可以获得非常干净的处理液,而且所需样本量小,可与液相色谱仪串联质谱仪配套使用,应用于临床样本的检验;同时,该试剂盒能同时检测四种不同的免疫抑制剂类药物,达到单样本多指标同步检测功能,具有检测特异性好,灵敏度高的优点,并且整个检测流程时间短、通量高,成本低廉。
附图说明
图1是本发明四种免疫抑制剂类药物的总离子流色谱图。
图2为他克莫司标准曲线,线性范围:(2~100)ng/mL。
图3为依维莫司标准曲线,线性范围:(2~100)ng/mL。
图4为西罗莫司标准曲线,线性范围:(2~100)ng/mL。
图5为环孢霉素A标准曲线,线性范围:(10~2000)ng/mL。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明。
本发明提供一种测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,需要对四种免疫抑制剂类药物同时进行准确测定,其难度首先在于样本为人全血样本,本身存在多种其他物质的干扰,在检测过程中通过试剂盒中的试剂处理后的样本需要能够排除这些干扰,将待测物质准确“剥离”出来;其次要做到可同时处理人全血样本中的四种免疫抑制剂类药物,在试剂的确定、配比上需要耗费大量劳动;最后,需要使检测仪器能够准确、灵敏地检测待测物质,需要考虑试剂与检测仪器的配合,整体检测步骤制定以及各操作参数的确定。
为了解决上述问题,提供本发明的试剂盒:
含有六个浓度梯度的校准品,其中,他克莫司、西罗莫司、依维莫司六个浓度点相同,依次为:2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL;环孢霉素A的六个浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL;
各个浓度梯度的校准品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的混合物,例如以第一个浓度点2ng/mL的他克莫司、西罗莫司、依维莫司与10ng/mL的环孢霉素A的混合物作为其中一个梯度浓度的校准品;采用上述系列浓度梯度在临床实际使用中为合适的范围,且灵敏度佳,能够被检测仪器准确测得;
内标:内标溶液为含有他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液,其中,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3和依维莫司-d4在内标溶液中的浓度范围为8~30ng/mL;环孢霉素A-d4在内标溶液中的浓度范围为100~300ng/mL;
采用各待测物质的同位素标记物作为内标,并且限定其在内标溶液中的浓度,能够保证内标物质检测的灵敏度,而且起到辅助判断前处理过程的效率及仪器等检测条件是否正常的作用;
质控品:包括质控品I和质控品II,其中
质控品I组成包括:他克莫司:5~9ng/mL;西罗莫司:9~15ng/mL;依维莫司:9~15ng/mL;环孢素A:90~150ng/mL;
质控品II组成包括:他克莫司:10~18ng/mL;西罗莫司:15~25ng/mL;依维莫司:15~25ng/mL;环孢素A:180~280ng/mL;
质控品I和质控品II均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的混合物;各个成分的浓度为在各自混合物中的浓度;选择质控品I、质控品II这两种不同浓度范围,各待测物质在该两种浓度范围内性质稳定,测量精密度良好;
样本处理液:浓度为0.1~0.3mol/L硫酸锌水溶液;
提取液:正己烷和乙酸乙酯的混合溶液,其中乙酸乙酯的体积百分比为50%~80%;提取液与前述样本处理液相互配合,能够将全血样本中的蛋白通过沉淀去除,并保证待测物质的检测不受干扰;
流动相:流动相A为水溶液,流动相B为甲醇溶液,且流动相A和流动相B中均含有同样的外加试剂,该外加试剂为2~10mmol/L的乙酸铵或甲酸铵以及体积百分比为0.05-0.20%的甲酸或乙酸;
复溶液:体积比为50%~100%的甲醇水溶液;在该浓度的复溶液中样本能够良好完成复溶,以便四种免疫抑制剂类药物在检测过程中顺利准确检出。
在另一改进的实施例中,上述校准品和质控品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的混合物,该混合物可以是全血或全血冻干粉,甲醇溶液或溶液冻干粉。
在另一改进的实施例中,上述样本处理液中硫酸锌的浓度优选为0.3mol/L,该浓度下样本处理程度最佳。
在另一改进的实施例中,上述提取液中乙酸乙酯的体积百分比优选为50%。
在另一改进的实施例中,上述流动相中优选加入乙酸铵和甲酸,其中,乙酸铵浓度优选为2mmol/L,甲酸体积百分比优选为0.1%。这一浓度下样本检测精确度良好。
在另一改进的实施例中,上述复溶液优选为体积比60%的甲醇水溶液。
进一步地,利用上述试剂盒采用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)进行检测,步骤如下:
(1)样本处理
取100μL全血样本至1.5mL的离心管中,加入样本体积1~3倍的样本处理液,即加入100~300μL样本处理液,漩涡混合1min,使红细胞充分裂解;然后结合上述内标液中各物质的浓度以及仪器的灵敏度加入与样本等体积内标,即100μL内标,漩涡混合1min,室温平衡10min使蛋白充分沉淀;最后加入样本体4~10倍的提取液,即400~1000μL提取液,漩涡混合5min,离心5min,取上清液氮气吹干;加入样本体积1~10倍的复溶液,即100~1000μL复溶液复溶,复溶液的具体加入量可根据仪器灵敏度进行调整,混合均匀后离心5min,取200μL上清液用于LC/MS/MS检测分析;
(2)LC/MS/MS检测分析
(2.1)色谱条件
·色谱柱:五氟苯基柱或者相当;
·流动相:流动相A和流动相B;
·流速:0.4mL/min;
·梯度洗脱:按下表1所示;
表1
上表中的梯度洗脱过程,流动相中流动相A和流动相B体积比例随时间不断调整变化,以流动相
A的占比变化为体现。
·柱温:60℃;
·进样器温度:8℃;
·进样量:3μL;
(2.2)质谱条件
电喷雾离子源(ESI),正离子MRM扫描分析,Q1/Q3离子通道分别选择为他克莫司:821.5→768.5,他克莫司-13Cd2:826.5→773.5;西罗莫司:931.7→864.6,西罗莫司-d3:934.6→864.6;依维莫司:975.6→908.6,依维莫司-d4:979.6→912.6;环孢霉素A:1219.8→1202.8,环孢霉素A-d4:1223.8→1206.9。离子源参数包括离子化电压:5500V,离子源温度:300℃,气帘气:25psi,雾化气:65psi,辅助加热气:50psi,碰撞气:5psi;
(2.3)取处理好的校准品、质控品和样本各3μL注入液质连用仪,记录色谱图;其中校准品、质控品的处理方法同上述步骤(1)的样本处理过程,以确保校准品、质控品与样本为等同处理,保证检测结果可靠准确;
(3)检测结果的计算
(3.1)校准曲线的绘制与拟合:一般液相色谱串联质谱系统分析软件可根据校准结果自动绘制校准曲线,通常以6个校准品的标示浓度或校准品标示浓度与内标的浓度比为横坐标(x),以6个校准品的实际测定峰面积与各自内标峰面积的比值为纵坐标(y),用最小二乘法进行线性回归,自动绘制标准曲线,可获得回归方程:y=ax+b,其中y为纵坐标,x为横坐标,a为斜率,b为截距,并计算r(相关系数)值,r值≥0.9900。
(3.2)回收率的计算:质控品各分析物的测定浓度可根据质控品中各分析物及对应内标的峰面积的比值由校准曲线获得,其回收率的计算公式为:回收率(%)=测定浓度/标示浓度×100,回收率(%)应在85%-115%范围内。
(3.3)样本结果的计算:样本中的各分析物测定浓度可根据样本中各分析物及对应内标的峰面积的比值由校准曲线获得。
在另一改进的实施例中,步骤(1)中漩涡混合转速为2000rpm(转/分钟),在该转速下,确保混合液完全混匀从而使待测物质完全提取出来。
在另一改进的实施例中,步骤(1)中加入样本处理液的体积为100μL,提取液为500μL,确保待测物质能够从样本中完全提取出来。
在另一改进的实施例中,步骤(1)中加入提取液混合离心为低温离心,即在8℃下4000rpm离心;加入复溶液混合离心为低温高速离心,即在8℃下15000rpm离心。离心过程优选在低温下进行以保证样本物质稳定,低速、高速配合离心满足将待测物质提取出来的目的。
在另一改进的实施例中,步骤(1)中上清液是在45℃下氮气吹干;以氮气作为保护气氛确保样本中待测物质的稳定。
实施例1
测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,包括
含有六个浓度梯度的校准品,且各个浓度梯度的校准品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的甲醇溶液冻干粉;
其中,他克莫司、西罗莫司、依维莫司六个浓度点相同,依次为:2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL;环孢霉素A的六个浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL;
内标:内标溶液为含有他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液,其中,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3和依维莫司-d4在内标溶液中的浓度均为10ng/mL;环孢霉素A-d4在内标溶液中的浓度为200ng/mL;
质控品:包括质控品I和质控品II,均为多他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的全血冻干粉;其中
质控品I组成为,他克莫司:5ng/mL;西罗莫司:10ng/mL;依维莫司:10ng/mL;环孢素A:120ng/mL;
质控品II组成为,他克莫司:10ng/mL;西罗莫司:20ng/mL;依维莫司:20ng/mL;环孢素A:250ng/mL;
样本处理液:浓度为0.3mol/L硫酸锌水溶液;
提取液:正己烷和乙酸乙酯的混合溶液,其中乙酸乙酯的体积百分比为50%;
流动相:流动相A为水溶液,流动相B为甲醇溶液,二者均含有2mmol/L的乙酸铵以及体积百分比浓度为0.1%的甲酸;
复溶液:体积比为60%的甲醇水溶液。
利用上述试剂盒进行LC/MS/MS检测,步骤如下:
(1)检测样本处理
取100μL全血样本至1.5ml的离心管中,加入100μL样本处理液,2000rpm漩涡混合1min,使红细胞充分裂解。然后加入100μL内标,2000rpm漩涡混合1min,室温平衡10min使蛋白充分沉淀。最后加入500μL提取液,2000rpm漩涡混合5min,8℃下4000rpm离心5min,取上清液45℃氮气吹干。加入500μL复溶液复溶,2000rpm漩涡混合1min后8℃下15000rpm离心5min,取200μL上清液用于LC/MS/MS检测分析;
(2)检测样本LC/MS/MS检测分析
(2.1)色谱条件
·色谱柱:五氟苯基柱或者相当;
·流动相:流动相A和流动相B;
·流速:0.4mL/min;
·梯度洗脱:按表1所示;
·柱温:60℃;
·进样器温度:8℃;
·进样量:3μL;
(2.2)质谱条件:
电喷雾离子源(ESI),正离子MRM扫描分析,Q1/Q3离子通道分别选择为他克莫司:821.5→768.5,他克莫司-13Cd2:826.5→773.5;西罗莫司:931.7→864.6,西罗莫司-d3:934.6→864.6;依维莫司:975.6→908.6,依维莫司-d4:979.6→912.6;环孢霉素A:1219.8→1202.8,环孢霉素A-d4:1223.8→1206.9。离子源参数包括离子化电压:5500V,离子源温度:300℃,气帘气:25psi,雾化气:65psi,辅助加热气:50psi,碰撞气:5psi;
实施例2
测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,包括
含有六个浓度梯度的校准品,且各个浓度梯度的校准品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的甲醇溶液冻干粉;
其中,他克莫司、西罗莫司、依维莫司六个浓度点相同,依次为:2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL;环孢霉素A的六个浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL;
内标:内标溶液为含有他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液,其中,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3和依维莫司-d4在内标溶液中的浓度均为为10ng/mL;环孢霉素A-d4在内标溶液中的浓度为200ng/mL;
质控品:包括质控品I和质控品II,均为多他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的全血冻干粉;其中
质控品I组成为,他克莫司:5ng/mL;西罗莫司:10ng/mL;依维莫司:10ng/mL;环孢素A:120ng/mL;
质控品II组成为,他克莫司:10ng/mL;西罗莫司:20ng/mL;依维莫司:20ng/mL;环孢素A:250ng/mL;
样本处理液:浓度为0.3mol/L硫酸锌水溶液;
提取液:正己烷和乙酸乙酯的混合溶液,其中乙酸乙酯的体积百分比为50%;
流动相:流动相A为水溶液,流动相B为甲醇溶液,二者均含有2mmol/L的甲酸铵以及体积百分比浓度为0.1%的甲酸;
复溶液:体积比为60%的甲醇水溶液。
利用上述试剂盒进行LC/MS/MS检测,方法同实施例1。
实施例3
测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,包括
含有六个浓度梯度的校准品,且各个浓度梯度的校准品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的甲醇溶液冻干粉;
其中,他克莫司、西罗莫司、依维莫司六个浓度点相同,依次为:2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL;环孢霉素A的六个浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL;
内标:内标溶液为含有他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液,其中,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3和依维莫司-d4在内标溶液中的浓度均为为10ng/mL;环孢霉素A-d4在内标溶液中的浓度为200ng/mL;
质控品:包括质控品I和质控品II,均为多他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的全血冻干粉;其中
质控品I组成为,他克莫司:5ng/mL;西罗莫司:10ng/mL;依维莫司:10ng/mL;环孢素A:120ng/mL;
质控品II组成为,他克莫司:10ng/mL;西罗莫司:20ng/mL;依维莫司:20ng/mL;环孢素A:250ng/mL;
样本处理液:浓度为0.1mol/L硫酸锌水溶液;
提取液:正己烷和乙酸乙酯的混合溶液,其中乙酸乙酯的体积百分比为50%;
流动相:流动相A为水溶液,流动相B为甲醇溶液,二者均含有2mmol/L的乙酸铵以及体积百分比浓度为0.1%的甲酸;
复溶液:体积比为60%的甲醇水溶液。
利用上述试剂盒进行LC/MS/MS检测,样本处理过程中加入复溶液的量改为1000μL,其他同实施例1。
实施例4
测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,包括
含有六个浓度梯度的校准品,且各个浓度梯度的校准品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的甲醇溶液冻干粉;
其中,他克莫司、西罗莫司、依维莫司六个浓度点相同,依次为:2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL;环孢霉素A的六个浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL;
内标:内标溶液为含有他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液,其中,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3和依维莫司-d4在内标溶液中的浓度均为为10ng/mL;环孢霉素A-d4在内标溶液中的浓度为200ng/mL;
质控品:包括质控品I和质控品II,均为多他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的全血冻干粉;其中
质控品I组成为,他克莫司:5ng/mL;西罗莫司:10ng/mL;依维莫司:10ng/mL;环孢素A:120ng/mL;
质控品II组成为,他克莫司:10ng/mL;西罗莫司:20ng/mL;依维莫司:20ng/mL;环孢素A:250ng/mL;
样本处理液:浓度为0.1mol/L硫酸锌水溶液;
提取液:正己烷和乙酸乙酯的混合溶液,其中乙酸乙酯的体积百分比为70%;
流动相:流动相A为水溶液,流动相B为甲醇溶液,二者均含有2mmol/L的甲酸铵以及体积百分比浓度为0.1%的甲酸;
复溶液:100%的甲醇。
利用上述试剂盒进行LC/MS/MS检测,样本处理过程中加入样本处理液的量改为200μL,其他同实施例1。
对实施例1-4得到的处理好的校准品、质控品和样本各3μL注入液质连用仪,记录色谱图,按照如下步骤进行检测结果的计算:
(1)校准曲线的绘制与拟合:一般液相色谱串联质谱系统分析软件可根据校准结果自动绘制校准曲线,通常以6个校准品的标示浓度或校准品标示浓度与内标的浓度比为横坐标(x),以6个校准品的实际测定峰面积与各自内标峰面积的比值为纵坐标(y),用最小二乘法进行线性回归,自动绘制标准曲线,可获得回归方程:y=ax+b,其中y为纵坐标,x为横坐标,a为斜率,b为截距,并计算r(相关系数)值,r值≥0.9900。
(2)回收率的计算:质控品各分析物的测定浓度可根据质控品中各分析物及对应内标的峰面积的比值由校准曲线获得,其回收率的计算公式为:回收率(%)=测定浓度/标示浓度×100,回收率(%)应在85%-115%范围内。
(3)样本结果的计算:样本中的各分析物测定浓度可根据样本中各分析物及对应内标的峰面积的比值由校准曲线获得。
图1为四种免疫抑制剂类药物的总离子流色谱图。
实施例1-4的检测结果基本一致,下面结合相关附图对实施例1试剂盒分析性能进行说明:
1.标准曲线与线性:由图2可知他克莫司标准曲线线性范围:(2~100)ng/mL,由图3可知依维莫司标准曲线线性范围:(2~100)ng/mL,由图4可知西罗莫司标准曲线线性范围:(2~100)ng/mL,由图5可知环孢霉素A标准曲线线性范围:(10~2000)ng/mL,因此由图2至5可知,四种免疫抑制剂类药物的相关系数r都大于0.99,线性良好。
2.准确度和精密度
分别对质控品I和质控品II进行测定,结果如下表2所示:
表2
从上述检测结果可知,本发明试剂盒及液相色谱串联质谱检测方法具有良好的准确度、精密度及线性,能完全满足临床检验要求,同时,该产品能同时检测四种不同的免疫抑制剂类药物,达到单样本多指标同步检测功能。
本发明实施例涉及到的材料、试剂和实验设备,如无特别说明,均为符合检验检疫领域的市售产品。
以上所述,仅为本发明的优选实施例,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的核心技术的前提下,还可以做出改进和润饰,这些改进和润饰也应属于本发明的专利保护范围。与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变,都应认为是包括在权利要求书的范围内。
Claims (18)
1.用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,包括:他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的校准品,他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的内标,他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的质控品,样本处理液,提取液,流动相和复溶液。
2.如权利要求1所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述校准品中他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A均具有六个浓度梯度,其中所述他克莫司、西罗莫司、依维莫司六个浓度点相同,分别为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL,环孢霉素A的六个浓度点分别为10ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL。
3.如权利要求1所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述内标为含有他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3、依维莫司-d4和环孢霉素A-d4的甲醇溶液,且他克莫司-13Cd2、西罗莫司-d3和依维莫司-d4在内标溶液中的浓度范围均为8~30ng/mL,环孢霉素A-d4在内标溶液中的浓度范围为100~300ng/mL。
4.如权利要求1所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述质控品包括质控品I和质控品II,
所述质控品I组成包括:他克莫司:5~9ng/mL;西罗莫司:9~15ng/mL;依维莫司:9~15ng/mL;环孢素A:90~150ng/mL;
所述质控品II组成包括:他克莫司:10~18ng/mL;西罗莫司:15~25ng/mL;依维莫司:15~25ng/mL;环孢素A:180~280ng/mL。
5.如权利要求1所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述样本处理液为浓度为0.1~0.3mol/L硫酸锌水溶液;所述提取液为正己烷和乙酸乙酯的混合溶液,所述乙酸乙酯的体积百分比为50%~80%。
6.如权利要求1所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述流动相中流动相A为水溶液,流动相B为甲醇溶液,且流动相A和流动相B中均含有2~10mmol/L的乙酸铵或甲酸铵以及体积百分比为0.05-0.20%的甲酸或乙酸;所述复溶液为体积百分比为50%~100%的甲醇水溶液。
7.如权利要求1所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述校准品和质控品均为他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢霉素A的混合物,且所述混合物为全血或全血冻干粉,或者甲醇溶液或甲醇溶液冻干粉。
8.如权利要求5所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述样本处理液中硫酸锌的浓度为0.3mol/L。
9.如权利要求5所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述提取液中乙酸乙酯的体积百分比为50%。
10.如权利要求6所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述流动相A和B中均加入乙酸铵和甲酸,且所述乙酸铵浓度为2mmol/L,所述甲酸体积百分比为0.1%。
11.如权利要求6所述的用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒,其特征在于,所述复溶液为体积比60%的甲醇水溶液。
12.利用权利要求1~11任一项所述的试剂盒通过液相色谱串联质谱对人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)样本前处理:
①取样本与样本处理液混合;
②在步骤①所得的混合液中加入内标,继续混合;
③在步骤②所得的混合液中加入提取液,混合,后离心;
④取步骤③离心所得上清液干燥后加入复溶液复溶,混合离心,取上清液用于检测;
(2)对步骤④复溶后所得的上清液进行液相色谱串联质谱检测分析,同样检测的还包括校准品和质控品;
(3)检测结果的计算:
a根据步骤(2)对校准品的检测分析结果进行校准曲线的绘制和拟合;
b根据步骤(2)对质控品的检测分析结果计算回收率;
c根据步骤(2)对样本上清液的检测分析结果并结合步骤a所得的标准曲线计算四种免疫抑制剂类药物浓度。
13.如权利要求12所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中样本处理液加入体积为样本体积的1~3倍,内标加入体积为与样本等体积,提取液加入体积为样本体积的4~10倍,复溶液体积为样本体积的1~10倍;混合均采用漩涡混合。
14.如权利要求12所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中
色谱条件为:色谱柱为五氟苯基柱或者相当;流动相为流动相A和流动相B;流速为0.4mL/min;梯度洗脱以流动相A的体积浓度变化计为0分钟60%、1分钟100%、3.5分钟100%、3.51分钟60%、4.5分钟检测完毕;柱温60℃;进样器温度8℃;进样量3μL;
质谱条件为:电喷雾离子源(ESI),正离子MRM扫描分析,Q1/Q3离子通道分别选择为他克莫司:821.5→768.5,他克莫司-13Cd2:826.5→773.5;西罗莫司:931.7→864.6,西罗莫司-d3:934.6→864.6;依维莫司:975.6→908.6,依维莫司-d4:979.6→912.6;环孢霉素A:1219.8→1202.8,环孢霉素A-d4:1223.8→1206.9。离子源参数包括离子化电压:5500V,离子源温度:300℃,气帘气:25psi,雾化气:65psi,辅助加热气:50psi,碰撞气:5psi。
15.如权利要求13所述的检测方法,其特征在于,所述漩涡混合转速为2000转/分钟。
16.如权利要求13所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中样本处理液加入体积为样本体积的1倍,提取液加入体积为样本体积的5倍。
17.如权利要求12所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)之③中离心为低温离心,即在8℃下4000转/分钟离心;加入复溶液混合离心为低温高速离心,即在8℃下15000转/分钟离心。
18.如权利要求12所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)之④中干燥过程为45℃下氮气吹干。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811248811.8A CN109406650A (zh) | 2018-10-25 | 2018-10-25 | 用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811248811.8A CN109406650A (zh) | 2018-10-25 | 2018-10-25 | 用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109406650A true CN109406650A (zh) | 2019-03-01 |
Family
ID=65469156
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811248811.8A Pending CN109406650A (zh) | 2018-10-25 | 2018-10-25 | 用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109406650A (zh) |
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109884234A (zh) * | 2019-04-08 | 2019-06-14 | 杭州同创医学检验实验室有限公司 | 一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法 |
CN110470753A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-11-19 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 一种干血斑中四种免疫抑制剂检测方法及检测试剂盒 |
CN110554123A (zh) * | 2019-09-11 | 2019-12-10 | 深圳华大临床检验中心 | 一种快速检测全血中免疫抑制剂的方法、试剂盒及其应用 |
CN110849694A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-28 | 北京丹大生物技术有限公司 | 一种他克莫司全血样本前处理液及其使用方法和应用 |
CN111693635A (zh) * | 2020-07-23 | 2020-09-22 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中雷帕霉素含量的方法 |
CN111856044A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-10-30 | 美康生物科技股份有限公司 | 全血型冻干粉免疫抑制剂质量控制物质及其制备方法和应用 |
CN114019069A (zh) * | 2021-05-25 | 2022-02-08 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 生物样品中小分子物质检测的前处理试剂 |
CN114636772A (zh) * | 2022-05-17 | 2022-06-17 | 深圳荻硕贝肯精准医学有限公司 | 液相色谱串联质谱对血液中环孢素a浓度的检测方法 |
CN115032302A (zh) * | 2022-06-13 | 2022-09-09 | 深圳荻硕贝肯精准医学有限公司 | 基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法 |
CN115078611A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-09-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 液相色谱-质谱法用免疫抑制剂的流动相配方、检测方法 |
CN115078598A (zh) * | 2022-05-05 | 2022-09-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 直接进样测试血药浓度样本的试剂盒及应用 |
CN115236216A (zh) * | 2022-06-07 | 2022-10-25 | 合肥和合医疗科技有限公司 | 高效液相色谱串联质谱检测全血中免疫抑制剂的试剂盒,其制备方法和检测方法 |
CN115308328A (zh) * | 2022-08-08 | 2022-11-08 | 江苏格诺生物科技有限公司 | 一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法 |
Citations (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1768066A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-05-03 | 特瓦药厂有限公司 | 大环内酯物质的结晶与纯化 |
CN102070652A (zh) * | 2011-02-21 | 2011-05-25 | 西南大学 | 一种从发酵液中分离提取西罗莫司的方法 |
CN102464668A (zh) * | 2010-11-17 | 2012-05-23 | 浙江海正药业股份有限公司 | 雷帕霉素或其衍生物的制备色谱纯化方法 |
CN103271826A (zh) * | 2013-05-15 | 2013-09-04 | 广东恒健制药有限公司 | 一种他克莫司软膏的工业化生产方法 |
CN103284948A (zh) * | 2012-02-29 | 2013-09-11 | 单颖 | 负载西罗莫司类化合物或其衍生物的聚合物组合物的制备及应用 |
CN103819488A (zh) * | 2014-02-20 | 2014-05-28 | 浙江万马药业有限公司 | 一种他克莫司已知杂质他克莫司位置异构体的制备方法 |
CN104428308A (zh) * | 2012-07-06 | 2015-03-18 | 合同酒精株式会社 | 环状大环内酯类化合物的分离方法 |
CN104427975A (zh) * | 2012-05-11 | 2015-03-18 | 迭戈·多尔切塔 | 用于治疗神经变性的,神经炎症的和神经肿瘤学的疾病的mtor抑制剂的鞘内给药 |
CN105566348A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-05-11 | 哈药集团技术中心 | 一种依维莫司的制备方法 |
CN105777777A (zh) * | 2014-12-24 | 2016-07-20 | 北大方正集团有限公司 | 西罗莫司的纯化方法 |
CN106226430A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-12-14 | 合肥远志医药科技开发有限公司 | 一种他克莫司制剂的有关物质检测方法 |
CN106478664A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-03-08 | 广东蓝宝制药有限公司 | 一种发酵液中提取纯化他克莫司的方法 |
CN108047265A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-05-18 | 成都海创药业有限公司 | 一种依维莫司中间体的制备纯化方法 |
CN108676014A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-10-19 | 国药集团川抗制药有限公司 | 纯化依维莫司中间体的方法以及制备依维莫司的方法 |
-
2018
- 2018-10-25 CN CN201811248811.8A patent/CN109406650A/zh active Pending
Patent Citations (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1768066A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-05-03 | 特瓦药厂有限公司 | 大环内酯物质的结晶与纯化 |
CN102464668A (zh) * | 2010-11-17 | 2012-05-23 | 浙江海正药业股份有限公司 | 雷帕霉素或其衍生物的制备色谱纯化方法 |
CN102070652A (zh) * | 2011-02-21 | 2011-05-25 | 西南大学 | 一种从发酵液中分离提取西罗莫司的方法 |
CN103284948A (zh) * | 2012-02-29 | 2013-09-11 | 单颖 | 负载西罗莫司类化合物或其衍生物的聚合物组合物的制备及应用 |
CN104427975A (zh) * | 2012-05-11 | 2015-03-18 | 迭戈·多尔切塔 | 用于治疗神经变性的,神经炎症的和神经肿瘤学的疾病的mtor抑制剂的鞘内给药 |
CN104428308A (zh) * | 2012-07-06 | 2015-03-18 | 合同酒精株式会社 | 环状大环内酯类化合物的分离方法 |
CN103271826A (zh) * | 2013-05-15 | 2013-09-04 | 广东恒健制药有限公司 | 一种他克莫司软膏的工业化生产方法 |
CN103819488A (zh) * | 2014-02-20 | 2014-05-28 | 浙江万马药业有限公司 | 一种他克莫司已知杂质他克莫司位置异构体的制备方法 |
CN105777777A (zh) * | 2014-12-24 | 2016-07-20 | 北大方正集团有限公司 | 西罗莫司的纯化方法 |
CN105566348A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-05-11 | 哈药集团技术中心 | 一种依维莫司的制备方法 |
CN106226430A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-12-14 | 合肥远志医药科技开发有限公司 | 一种他克莫司制剂的有关物质检测方法 |
CN106478664A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-03-08 | 广东蓝宝制药有限公司 | 一种发酵液中提取纯化他克莫司的方法 |
CN108047265A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-05-18 | 成都海创药业有限公司 | 一种依维莫司中间体的制备纯化方法 |
CN108676014A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-10-19 | 国药集团川抗制药有限公司 | 纯化依维莫司中间体的方法以及制备依维莫司的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ANDREAS MEINITZER 等: "Ultra Fast Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry Routine Method for Simultaneous Determination of Cyclosporin A, Tacrolimus, Sirolimus, and Everolimus in Whole Blood Using Deuterated Internal Standards for Cyclosporin A and Everolimus", 《THER DRUG MONIT》 * |
李力 等: "LC-MS/MS法同时测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度", 《中国临床药理学与治疗学》 * |
Cited By (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109884234A (zh) * | 2019-04-08 | 2019-06-14 | 杭州同创医学检验实验室有限公司 | 一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法 |
CN110470753A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-11-19 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 一种干血斑中四种免疫抑制剂检测方法及检测试剂盒 |
CN110554123A (zh) * | 2019-09-11 | 2019-12-10 | 深圳华大临床检验中心 | 一种快速检测全血中免疫抑制剂的方法、试剂盒及其应用 |
CN111856044A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-10-30 | 美康生物科技股份有限公司 | 全血型冻干粉免疫抑制剂质量控制物质及其制备方法和应用 |
CN110849694A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-28 | 北京丹大生物技术有限公司 | 一种他克莫司全血样本前处理液及其使用方法和应用 |
CN111693635A (zh) * | 2020-07-23 | 2020-09-22 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中雷帕霉素含量的方法 |
CN114019069A (zh) * | 2021-05-25 | 2022-02-08 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 生物样品中小分子物质检测的前处理试剂 |
CN115078598A (zh) * | 2022-05-05 | 2022-09-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 直接进样测试血药浓度样本的试剂盒及应用 |
CN115078611A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-09-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 液相色谱-质谱法用免疫抑制剂的流动相配方、检测方法 |
CN114636772A (zh) * | 2022-05-17 | 2022-06-17 | 深圳荻硕贝肯精准医学有限公司 | 液相色谱串联质谱对血液中环孢素a浓度的检测方法 |
CN115236216A (zh) * | 2022-06-07 | 2022-10-25 | 合肥和合医疗科技有限公司 | 高效液相色谱串联质谱检测全血中免疫抑制剂的试剂盒,其制备方法和检测方法 |
CN115236216B (zh) * | 2022-06-07 | 2024-03-01 | 合肥和合医疗科技有限公司 | 高效液相色谱串联质谱检测全血中免疫抑制剂的试剂盒,其制备方法和检测方法 |
CN115032302A (zh) * | 2022-06-13 | 2022-09-09 | 深圳荻硕贝肯精准医学有限公司 | 基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法 |
CN115308328A (zh) * | 2022-08-08 | 2022-11-08 | 江苏格诺生物科技有限公司 | 一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109406650A (zh) | 用于准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 | |
CN109187839A (zh) | 准确测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度的试剂盒及检测方法 | |
CN107247093B (zh) | 尿液中游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法 | |
CN104165937A (zh) | 一种高效液相-高分辨率飞行时间串联质谱法检测血液中降血糖以及降血压药物的方法 | |
CN107941980A (zh) | 水产品中利福平残留的超高效液相色谱串联质谱快速测定方法 | |
Korecka et al. | Review of the newest HPLC methods with mass spectrometry detection for determination of immunosuppressive drugs in clinical practice | |
Gong et al. | A high-throughput LC-MS/MS method for the quantification of four immunosu-ppressants drugs in whole blood | |
CN111693640A (zh) | 一种保健食品中非法添加化合物的筛查方法 | |
CN106990185A (zh) | 一种同时测定血浆中六种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法 | |
CN113899834B (zh) | 一种药物中亚硝胺类杂质的检测方法 | |
CN111579685A (zh) | 一种检测血浆中抗凝血药物的试剂盒及其应用 | |
CN108072689A (zh) | 一种用于离子迁移谱的定量分析方法 | |
CN113933419A (zh) | 一种测定人全血中5种免疫抑制剂类药物浓度的方法 | |
CN110940742A (zh) | 血液病相关药物的浓度的检测方法和应用 | |
CN114509526A (zh) | 一种基于lc-ms/ms的纯溶剂型全血免疫抑制剂药物浓度联检试剂盒及检测方法 | |
CN111595983B (zh) | 一种测定藜芦中化学成分含量的方法 | |
CN112924613A (zh) | 一种定量分析抗结核药血浆浓度的lc-ms/ms方法 | |
CN115840011A (zh) | 一种利用液相色谱-串联质谱分析血浆样本中替米沙坦浓度的方法 | |
CN113866306B (zh) | 一种药物制剂的hplc特征图谱的检测方法 | |
CN115201379A (zh) | 非洛地平中基因毒性杂质的检测方法 | |
CN107045031A (zh) | 人血浆中沙格列汀和5‑羟基沙格列汀的lc‑ms/ms高通量检测方法 | |
CN112362724A (zh) | 一种快速检测人体尿液中3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺含量的方法 | |
CN112198251A (zh) | 含蟾皮类药材制剂中六种蟾蜍甾烯内酯成分在血浆或组织中浓度的检测方法 | |
CN114062557B (zh) | 一种咪唑立宾原料药中降解杂质的检测方法 | |
CN116930352B (zh) | 血液中37种常见抗心律失常药物液相色谱-质谱检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190301 |