CN110470753A - 一种干血斑中四种免疫抑制剂检测方法及检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种干血斑中四种免疫抑制剂检测方法及检测试剂盒,其中,干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,包括校准品、质控品、内标混合液、第一提取液、第二提取液、复溶液、流动相A、流动相B和洗针液。本发明所述的干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,能够提供校准品、样品前处理所涉及的试剂和质控品,免除实验室检测自配的繁琐步骤和造成的误差,保证检测结果的准确性。
Description
技术领域
本发明属于临床体外检测试剂技术领域,尤其是涉及一种干血斑中四种免疫抑制剂检测方法及检测试剂盒,其可用于对干血斑中的环孢霉素A、西罗莫司、他克莫司、依维莫司的检测。
背景技术
免疫抑制剂是对机体的免疫反应具有抑制作用的药物,能抑制与免疫反应有关的细胞的增殖和功能,降低抗体免疫反应。免疫抑制剂主要用于器官移植抗排斥反应和自身免疫病。多数作用于免疫系统的药物有正、反两方面的作用,即免疫增强和免疫抑制。免疫抑制剂在临床为自身免疫病和器官移植后的排异反应提供了有效的治疗,受到广泛的关注。
环孢霉素A、西罗莫司、他克莫司、依维莫司的研发,使器官移植和自身免疫性疾病的治疗达到一个新高度。但是免疫抑制剂量的多少也会在不同程度上引起肝肾等器官产生毒性反应,药物的毒性反应和器官移植排斥反应的临床表现不易鉴别,有效浓度与中毒浓度接近。因此,在进行免疫抑制剂药物治疗时,需要进行血药浓度监测。
目前,临床上多采用免疫法进行血药浓度监测,其缺点是易发生交叉反应、特异性差,不同的免疫测试结果不一定统一。随着技术的发展,以色谱作为分离手段、三重四极杆串联质谱作为检测手段的色谱-质谱联用技术成为了定量检测生物样品中痕量目标分析物的强有力的手段。现有的基于液相色谱串联质谱技术检测全血中免疫抑制剂的定量检测方法多为实验室自建方法,由于每个实验室检测方法和试剂选择不同,会造成室间的检测结果差异大,特别是在面对临床大量的检测样本,很难保证检测结果的一致性。想要解决这些问题,就需要针对检测项目直接提供经过验证的配套试剂盒以及标准的检测流程,提高液相色谱串联质谱在临床检测的推广性,保证检测结果的一致性和准确性。
此外,在检测过程中,干血斑具备采血量少、制备操作简单、生物危险性低、生物稳定性好、运输保存方便等优势,可以更好地应用于临床,不仅减少了对样本量的需求,降低了患者的生理负担,而且便于异地检测,检测精准。而目前基于液相色谱串联质谱进行干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法及检测试剂盒还鲜有报道。
发明内容
有鉴于此,本发明旨在提出一种干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,以克服现有技术的缺陷,能够提供校准品、样品前处理所涉及的试剂和质控品,免除实验室检测自配的繁琐步骤和造成的误差,保证检测结果的准确性。
为达到上述目的,本发明的技术方案是这样实现的:
一种干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,包括校准品、质控品、内标混合液、第一提取液、第二提取液、复溶液、流动相A、流动相B和洗针液。
优选的,所述校准品为含有梯度浓度免疫抑制剂的干血斑。
更优选的,所述校准品的制备方法为:先用甲醇稀释免疫抑制剂标准品到梯度浓度,浓度范围分别为环孢霉素A 20-1000ng/mL、西罗莫司2-100ng/mL、他克莫司2-100ng/mL、他克莫司2-100ng/mL,然后与健康全血混合均匀,滴加到干血斑上晾干封装。
优选的,所述质控品为含有一定浓度免疫抑制剂的干血斑;所述质控品包括第一质控品、第二质控品和第三质控品,且三者浓度依次降低。
优选的,所述第一质控品中免疫抑制剂的含量范围分别为:环孢霉素A800-1000ng/mL,西罗莫司80-100ng/mL,他克莫司80-100ng/mL,依维莫司80-100ng/mL;
所述第二质控品中免疫抑制剂的含量范围分别为:环孢霉素A 300-500ng/mL,西罗莫司30-50ng/mL,他克莫司30-50ng/mL,依维莫司30-50ng/mL;
所述第三质控品中免疫抑制剂的含量范围分别为:环孢霉素A 20-100ng/mL,西罗莫司2-10ng/mL,他克莫司2-10ng/mL,依维莫司2-10ng/mL。
优选的,所述质控品的制备方法为:用甲醇分别配制具有第一质控品、第二质控品和第三质控品相应浓度的标准品,然后将相应的标准品与健康全血混合均匀,滴加到干血斑上晾干封装,即得第一质控品、第二质控品和第三质控品。
优选的,所述内标混合液为西罗莫司-d3、他克莫司-d4和子囊霉素的甲醇溶液。
优选的,西罗莫司-d3、他克莫司-d4和子囊霉素在内标混合液中的浓度范围分别为300-600ng/mL、100-300ng/mL、100-300ng/mL。
优选的,所述第一提取液为甲醇和乙腈按体积比1:1混合混合溶液。
优选的,所述第二提取液为0.05mol/mL的稀盐酸,其制备方法是将盐酸用蒸馏水稀释成浓度为0.05mol/mL。
优选的,所述复溶液为甲醇。
优选的,流动相A为含有0.1%甲酸-2mM乙酸铵的水溶液,其制备方法为:称取0.15417g乙酸铵固体溶于一定量的水中,加入1mL的甲酸,用水定容至1L。
优选的,流动相B为含有0.1%甲酸-2mM乙酸铵的甲醇溶液,其制备方法为:制备方法为称取0.15417g乙酸铵固体溶于一定量的甲醇中,加入1mL的甲酸,用甲醇定容至1L。
优选的,所述洗针液甲醇和水按体积比1:1混合的混合溶液。
本发明的另一目的在于提出一种干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,以利用上述试剂盒,与液相色谱-串联四级杆质谱设备联用进行干血斑中四种免疫抑制剂的检测。
为达到上述目的,本发明的技术方案是这样实现的:
一种干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,采用如上所述的试剂盒与液相色谱-串联四级杆质谱设备联用进行干血斑中四种免疫抑制剂的检测。
优选的,所述干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,包括从干血斑上取下整个血班,将该血班与第一提取液、第二提取液、内标混合液涡旋混合密封,并于40-60℃的条件下超声水浴孵化的步骤;将孵化样品于-25℃--15℃冷冻5-30min,并于4-10℃冷冻离心的步骤。
优选的,所述干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)样品制备:吸取一定量的全血滴到滤纸上,室温晾干置于塑料密封袋中,冷冻储存备用;
(2)样本处理:从干血斑上取下整个血班,将该血班与第一提取液、第二提取液、内标混合液涡旋混合密封,并于40-60℃的条件下超声水浴,孵化20-40min;将孵化样品于-25℃--15℃冷冻5-30min,并于4-10℃冷冻离心,取上清液进行氮吹,再用复溶液复溶进样,用液相色谱-串联四级杆质谱检测;
(3)检测结果计算:将标准品出峰面积与对应内标出峰面积的比值作为纵坐标,标准品溶液的浓度作为横坐标,拟合线性方程得到环孢霉素A、西罗莫司、他克莫司、依维莫司的标准曲线;再将质控品样本的峰面积带入标准曲线中计算得到实际的浓度。
优选的,所述干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,其色谱条件为:流动相A为0.1%甲酸-2mM乙酸铵的水溶液,流动相B为0.1%甲酸-2mM乙酸铵的甲醇溶液;色谱柱为Shim-pack GIST-HP C18 100mm×2.1mm,3μm;柱温为60℃;检测时间为4.5min;进样量为10μL;梯度洗脱条件:0~0.4min,40%B,0.4~2.2min,100%B,2.2~3min,100%B,3~3.5min,40%B,3.5~4min,40%B,流速0.5~1mL/min;
优选的,所述干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,其质谱条件为:正离子模式,采用ESI源,碰撞气3Psi,气帘气25psi,雾化气70psi,辅助加热气55psi,喷雾电压4500V,雾化温度300℃。
相对于现有技术,本发明所述的一种干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒具有以下优势:
(1)能够提供校准品,用于每个批次样品检测的工作曲线制定,免除实验室检测自配的繁琐步骤和造成的误差。
(2)能够提供样品前处理所涉及的试剂以及前处理操作流程,实现四种免疫抑制剂从干血斑中的提取和浓缩,避免样品中其他物质对待测物的干扰。
(3)能够提供质控品,随每个检测批次一起检测,保证检测结果的准确性。
本发明所述的一种干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法具有以下优势:
(1)干血斑具备采血量少,制备操作简单,减少了对样本量的需求,降低了患者的生理负担。
(2)生物危险性低、生物稳定性好、运输保存方便、便于异地检测。
附图说明
图1为实施例1实测样品色谱图;
图2为实施例1中环孢霉素A的工作曲线图;
图3为实施例1中西罗莫司的工作曲线图;
图4为实施例1中他克莫司的工作曲线图;
图5为实施例1中依维莫司的工作曲线图。
具体实施方式
除有定义外,以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂,如无特殊说明,均为常规生化试剂;所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。
下面结合实施例及附图来详细说明本发明。
本发明中干血斑中四种免疫抑制剂是指环孢霉素A(CsA)、西罗莫司(SIR)、他克莫司(TAC)、依维莫司(EVE)。
一、试剂来源
(1)环孢菌素A(CsA):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号59865-13-3,为干粉试剂,25mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(2)西罗莫司(SIR):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号53123-88-9,为干粉试剂,1mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(3)西罗莫司-d3(SIR-d3):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号162635-04-3,为干粉试剂,1mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(4)他克莫司(TAC):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号104987-11-3,为干粉试剂,5mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(5)子囊霉素(Asc):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号11011-38-4,为干粉试剂,1mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(6)依维莫司(EVE):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号159351-69-6,为干粉试剂,5mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(7)依维莫司-d4(EVE-d4):使用加拿大多伦多研究化学(TRC)公司试剂,CAS号1338452-54-2,为干粉试剂,1mg/瓶,临用前用甲醇复溶即可使用。
(8)甲醇:使用Fisher Chemical公司67-56-1号试剂,纯度为LC/MS级,常温密封储存。
(9)乙腈:使用Fisher Chemical公司75-05-8号试剂,纯度为LC/MS级,常温密封储存。
(10)甲酸:使用Fisher Chemical公司64-18-6号试剂,纯度为LC/MS级,常温密封储存。
(11)盐酸:使用Sigma-Alorich公司7647-01-0号试剂,纯度为LC/MS级,常温密封储存。
(12)乙酸铵:使用Fisher Chemical公司631-61-8号试剂,纯度为LC/MS级,常温密封储存。
(13)水:符合国标GB/T 6682-2008的一级水。
二、实施例
本实施例中提供干血斑中四种免疫抑制剂的检测试剂盒,包括内标混合液、提取液1、提取液2、复溶液、流动相A、流动相B和洗针液。
配置四种免疫抑制剂的校准品溶液,浓度范围分别为20-1000ng/mL(CsA);2~100ng/mL(SIR、TAC、EVE),具体到本实施例,可以采用如表1所示的梯度浓度。
表1四种免疫抑制剂的校准品溶液梯度浓度分布
干血斑生物标准曲线样品 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 |
CsA(ng/mL) | 20 | 40 | 80 | 100 | 160 | 320 | 800 | 1000 |
SIR(ng/mL) | 2 | 4 | 8 | 10 | 16 | 32 | 80 | 100 |
TAC(ng/mL) | 2 | 4 | 8 | 10 | 16 | 32 | 80 | 100 |
Eve(ng/mL) | 2 | 4 | 8 | 10 | 16 | 32 | 80 | 100 |
质控品样本:含有四种免疫抑制剂低、中、高三个浓度的干血斑样本。高浓度的质控品(也即第一质控品)样本浓度分别为800ng/mL(CsA)、80ng/mL(SIR、TAC、EVE)。中浓度的质控品(也即第二质控品)样本浓度分别为320ng/mL(CsA)、32ng/mL(SIR、TAC、EVE)。低浓度的质控品(也即第三质控品)样本浓度分别为40ng/mL(CsA)、4ng/mL(SIR、TAC、EVE)。
内标混合溶液:含有西罗莫司-d3、子囊霉素、依维莫司-d4浓度分别为500ng/mL、150ng/mL、150ng/mL。
提取液1:甲醇和乙腈按体积比1:1进行混合。
提取液2:0.05mol/mL的稀盐酸。
复溶液:甲醇。
流动相A:称取0.15417g乙酸铵固体溶于一定量的水中,加入1mL的甲酸,用水定容至1L。
流动相B:称取0.15417g乙酸铵固体溶于一定量的甲醇中,加入1mL的甲酸,用甲醇定容至1L。
洗针液:甲醇和水按体积比1:1进行混合。
采用上述试剂盒对干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,包括以下步骤:
(1)样本制备
用移液器吸取20μL全血滴到Whatman903滤纸上,室温晾干后置于塑料密封袋中,-20℃储存备用。待测样本的制备:取20μL全血滴到Whatman903滤纸上。
(2)样品处理
使用该试剂盒进行样品处理,处理步骤如下,用8mm打孔器从干血斑上取下整个血斑,置于2mL的离心管内,加入290μL的提取液1,20μL的提取液2,10μL的混合内标,涡旋混匀密封,50℃的条件下超声水浴,并孵化30min,然后将样品转移至-20℃环境中冷冻10min,冷冻离心10min(4℃,14000rmp),接着取上清液进行氮吹,最后用80μL的复溶液复溶进样,用液相色谱-串联四级杆质谱检测。
(3)检测方法
将复溶液进样液相色谱(岛津)-串联四级杆子质谱(爱博才思)设备中进行检测。采用多反应监测(MRM)扫描方式,色谱测试条件为:流动相A为0.1%甲酸-2mM乙酸铵的水溶液,流动相B为0.1%甲酸-2mM乙酸铵的甲醇溶液;色谱柱为Shim-pack GIST-HP C18(100mm×2.1mm,3μm);柱温为60℃;检测时间为4.5min;进样量为10μL;采用梯度洗脱,0min~0.4min;40%B;0.4min~2.2min,100%B;2.2min~3min,100%B;3min~3.5min,40%B;3.5min~4min,40%B;流速为0.9mL/min。质谱条件为正离子模式,采用ESI源,碰撞气3psi,气帘气25psi,雾化气70psi,辅助加热气55psi,喷雾电压4500V,雾化温度300℃。具体化合物质谱参数如表2所示:
表2化合物质谱参数
化合物 | 母离子(m/z) | 子离子(m/z) | Dwell Time(ms) | DP(V) | EP(V) | CE(V) | CXP(V) |
CsA | 1219.9 | 1202.8 | 70 | 82 | 10 | 30 | 17 |
SIR | 931.8 | 864.4 | 70 | 77 | 10 | 23 | 12 |
SIR-d<sub>3</sub> | 934.6 | 864.5 | 70 | 108 | 11 | 27 | 27 |
TAC | 821.5 | 768.6 | 70 | 91 | 10 | 31 | 11 |
Asc | 809.6 | 756.3 | 70 | 92 | 11 | 32 | 11 |
EVE | 975.8 | 908.6 | 70 | 92 | 10 | 27 | 14 |
EVE-d<sub>4</sub> | 979.6 | 912.5 | 70 | 98 | 10 | 30 | 16 |
(备注:CsA:环孢霉素A;SIR:西罗莫司;SIR-d3:氘代西罗莫司;TAC:他克莫司;Asc:子囊霉素;EVE:依维莫司;EVE-d4:氘代依维莫司)
(4)检测结果
将校准品样本的峰面积与内标峰面积比值作为标准曲线的纵坐标,校准品浓度作为横坐标进行线性拟合,拟合线性方程得到四种免疫抑制剂(环孢霉素A、西罗莫司、他克莫司、依维莫司)的标准曲线,如下:
环孢霉素A的线性方程为:Y=0.114x-0.0718(r=0.9962)
西罗莫司的线性方程为:Y=0.0269x+0.0523(r=0.9981)
他克莫司的线性方程为:Y=0.0196x-0.00762(r=0.9967)
依维莫司的线性方程为:Y=0.0256x-0.01(r=0.9988)
环孢霉素A的线性范围为20~1000ng/mL;西罗莫司的线性范围为2~100ng/mL;他克莫司的线性范围为2~100ng/mL;依维莫司的线性范围为2~100ng/mL。
将质控品样本的峰面积带入标准曲线中计算得到实际的浓度,并与理论值比较评估。质控品干血斑样品测试谱图如图1所示,环孢霉素A线性曲线示例图如图2所示,西罗莫司线性曲线示例图如图3所示,他克莫司线性曲线示例图如图4所示,依维莫司线性曲线示例图如图5所示。
三、效果验证
1、试剂盒正确度验证
以实施例所述的试剂盒测试干血斑样品,通过加标回收率测定试剂盒的正确度,结果如表3-6所示:
表3 CsA正确度
表4 SIR正确度
表5 TAC正确度
表6 EVE正确度
由表3-6的结果可知,在干血斑中加入低、中、高浓度的目标分析物,加标回收率均满足85%-115%的范围,表明试剂盒检测的准确度符合临床需求。
2、试剂盒精密度验证
以实施例所述的试剂盒测试干血斑样品,分别检测试剂盒的批内、批间和总精密度,结果见表7。
表7试剂盒测试干血斑样品的批内、批间和总精密度
由表7的结果可知,试剂盒样品中环孢菌素A、西罗莫司、他克莫司和依维莫司的批内、批间、总精密度均小于15%(1.89%~12.90%),符合临床检测需求。
本发明针对上述的现有检测免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)、西罗莫司(SIR)、他克莫司(TAC)、依维莫司(EVE)的问题,所提供的的试剂盒的使用方法涵盖从样本处理到进样检测、数据质控的整体解决方案,此外,本方案所需要的全血样本量很少,可满足临床试剂检测的需求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,其特征在于:包括校准品、质控品、内标混合液、第一提取液、第二提取液、复溶液、流动相A、流动相B和洗针液;所述内标混合液为西罗莫司-d3、他克莫司-d4和子囊霉素的甲醇溶液。
2.根据权利要求1所述的干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,其特征在于:所述校准品为含有梯度浓度免疫抑制剂的干血斑;优选的,所述校准品的制备方法为:先用甲醇稀释免疫抑制剂标准品到梯度浓度,浓度范围分别为环孢霉素A 20-1000ng/mL、西罗莫司2-100ng/mL、他克莫司2-100ng/mL、他克莫司2-100ng/mL,然后与健康全血混合均匀,滴加到干血斑上晾干封装。
3.根据权利要求1所述的干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,其特征在于:所述质控品为含有一定浓度免疫抑制剂的干血斑;所述质控品包括第一质控品、第二质控品和第三质控品,且三者浓度依次降低;优选的,所述第一质控品中免疫抑制剂的含量范围分别为:环孢霉素A 800-1000ng/mL,西罗莫司80-100ng/mL,他克莫司80-100ng/mL,依维莫司80-100ng/mL;
所述第二质控品中免疫抑制剂的含量范围分别为:环孢霉素A 300-500ng/mL,西罗莫司30-50ng/mL,他克莫司30-50ng/mL,依维莫司30-50ng/mL;
所述第三质控品中免疫抑制剂的含量范围分别为:环孢霉素A 20-100ng/mL,西罗莫司2-10ng/mL,他克莫司2-10ng/mL,依维莫司2-10ng/mL。
4.根据权利要求3所述的干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,其特征在于:所述质控品的制备方法为:用甲醇分别配制具有第一质控品、第二质控品和第三质控品相应浓度的标准品,然后将相应的标准品与健康全血混合均匀,滴加到干血斑上晾干封装,即得第一质控品、第二质控品和第三质控品。
5.根据权利要求1所述的干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,其特征在于:西罗莫司-d3、他克莫司-d4和子囊霉素在内标混合液中的浓度范围分别为300-600ng/mL、100-300ng/mL、100-300ng/mL。
6.根据权利要求1所述的干血斑中四种免疫抑制剂检测试剂盒,其特征在于:所述第一提取液为甲醇和乙腈按体积比1:1混合混合溶液;和/或,所述第二提取液为0.05mol/mL的稀盐酸;和/或,所述复溶液为甲醇;和/或,流动相A为含有0.1%甲酸-2mM乙酸铵的水溶液;和/或,流动相B为含有0.1%甲酸-2mM乙酸铵的甲醇溶液;和/或,所述洗针液甲醇和水按体积比1:1混合的混合溶液。
7.一种干血斑中四种免疫抑制剂的检测方法,其特征在于:采用如权利要求1至6任意一项所述的试剂盒与液相色谱-串联四级杆质谱设备联用进行干血斑中四种免疫抑制剂的检测。
8.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于:包括从干血斑上取下整个血班,将该血班与第一提取液、第二提取液、内标混合液涡旋混合密封,并于40-60℃的条件下超声水浴孵化的步骤;将孵化样品于-25℃--15℃冷冻5-30min,并于4-10℃冷冻离心的步骤。
9.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)样品制备:吸取一定量的全血滴到滤纸上,室温晾干置于塑料密封袋中,冷冻储存备用;
(2)样本处理:从干血斑上取下整个血班,将该血班与第一提取液、第二提取液、内标混合液涡旋混合密封,并于40-60℃的条件下超声水浴,孵化20-40min;将孵化样品于-25℃--15℃冷冻5-30min,并于4-10℃冷冻离心,取上清液进行氮吹,再用复溶液复溶进样,用液相色谱-串联四级杆质谱检测;
(3)检测结果计算:将标准品出峰面积与对应内标出峰面积的比值作为纵坐标,标准品溶液的浓度作为横坐标,拟合线性方程得到环孢霉素A、西罗莫司、他克莫司、依维莫司的标准曲线;再将质控品样本的峰面积带入标准曲线中计算得到实际的浓度。
10.根据权利要求7-9任意一项所述的检测方法,其特征在于:色谱条件为:流动相A为0.1%甲酸-2mM乙酸铵的水溶液,流动相B为0.1%甲酸-2mM乙酸铵的甲醇溶液;色谱柱为Shim-pack GIST-HP C18 100mm×2.1mm,3μm;柱温为60℃;检测时间为4.5min;进样量为10μL;梯度洗脱条件:0~0.4min,40%B,0.4~2.2min,100%B,2.2~3min,100%B,3~3.5min,40%B,3.5~4min,40%B,流速0.5~1mL/min;
和/或,质谱条件为:正离子模式,采用ESI源,碰撞气3Psi,气帘气25psi,雾化气70psi,辅助加热气55psi,喷雾电压4500V,雾化温度300℃。
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