CN103819488A

CN103819488A - 一种他克莫司已知杂质他克莫司位置异构体的制备方法

Info

Publication number: CN103819488A
Application number: CN201410057153.XA
Authority: CN
Inventors: 桂盼; 单瑞平; 孙克; 李永和; 鲍毅; 李倩
Original assignee: ZHEJIANG WANMA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZHEJIANG WANMA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-02-20
Filing date: 2014-02-20
Publication date: 2014-05-28

Abstract

本发明公开了一种他克莫司已知杂质他克莫司位置异构体的制备方法，包括以他克莫司为原料药，通过异构化反应、纯化、重结晶等反应，制备他克莫司位置异构体。通过对他克莫司杂质的合成，为他克莫司杂质的定性及定量分析提供对照品，从而建立他克莫司的质量标准，为他克莫司的质量研究、安全用药等提供重要的指导意义。且本发明具有合成路线短，操作简单，所的产品纯度高，可应用于质量标准、对照品研究等特点。

Description

一种他克莫司已知杂质他克莫司位置异构体的制备方法

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及他克莫司已知杂质的制备方法。

背景技术

他克莫司（tacrolimus）即FK506，是由日本藤泽制药公司于1982年提取的一种真菌代谢产物，是1985年从链球菌的发酵液中提取的大环类代谢产物。他克莫司是全球首个获批准的非皮质类固醇类外用免疫调节剂，所谓局部免疫调节剂，是通过刺激皮肤局部的免疫因子而产生治疗作用的一类药物。由于这类药物为局部外用，不具有系统性的免疫抑制作用，因此不良反应小。

他克莫司对T细胞具有选择性的抑制作用，主要是通过抑制TH细胞释放IL-2、IL-3、IFN-γ，以及抑制IL-2R的表达而发挥其强大的免疫抑制作用。是世界上非激素治疗特异性皮炎（AD）的第一种外用免疫调节剂。适用于防治器官移植后的排斥反应，其临床疗效是环孢菌素A（CsA）的100倍。

1993年首次在日本上市，1994年获FDA批准，现已在50多个国家和地区上市销售。在中国上市的有胶囊、注射液、软膏以及滴眼液。目前他克莫司软膏获批(FDA、CFDA批准)的适应症是因潜在危险而不宜使用传统疗法,或对传统疗法反应不充分，或无法耐受传统疗法的中至重度特应性皮炎患者，作为短期或间歇性长期治疗。其中0.03%他克莫司软膏被批准用于≥2岁的儿童及成人AD患者，0.1%他克莫司软膏被批准用于成人AD患者；他克莫司胶囊、注射液的适应症为（1）预防肝脏或肾脏移植术后的移植物排斥反应（2）治疗肝脏或肾脏移植术后应用其他免疫抑制药物无法控制的移植物排斥反应。

对他克莫司杂质的相关研究意义非常重大，他可以用于他克莫司研发生产中杂质的定性及定量分析，从而建立他克莫司的质量标准，为他克莫司的质量研究、对照品研究、安全用药等提供重要的指导意义。

美国药典USP37版他克莫司胶囊标准收载了他克莫司已知杂质他克莫司位置异构体，其化学名称为：-7,8,10,13,14,15,16,17,18,19,20,21,26,22,28,28a-十六氢-7,21-二羟基-3-(4-羟基-3-甲氧环己基)-16,18-二甲氧基-4,6,12,14,20-五甲基-17,21-环氧-3H-吡啶[2,1-c][1,4]氧杂氮杂环二十五碳烯-1,9,22,23(6H,25H)-四酮，其结构式分别如下：

发明内容

本发明的目的是提供上述他克莫司已知杂质的制备方法。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

已知杂质他克莫司位置异构体（Tacrolimus regioisomer）的制备方法，其特征在于经过以下步骤：

（1）以他克莫司为起始原料，于一种有机溶剂中发生异构化反应生成他克莫司位置异构体，反应体系的温度为130～140℃;

（2）用柱层析获得粗品他克莫司位置异构体，洗脱剂为正己烷和丙酮的混合溶剂;

（3）粗品杂质用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂重结晶数次，获得纯品杂质。

在一些优选的方式中，步骤（1）中，所述的消除反应在惰性气体保护下进行。惰性气体优选为氮气。

在一些优选的方式中，步骤（1）中，所述的一种有机溶剂为无水二甲苯、甲苯中的一种或几种。优选无水二甲苯。

在一些优选的方式中，在步骤（2）中，所述的正己烷与丙酮混合溶剂体积比为1:1～8:1。优选体积比为4:1。

在一些优选的方式中，在步骤（3）中，所述乙酸乙酯与丙酮混合溶剂体积比为1:1～8:1。优选体积比为5:1。

本发明以他克莫司为原料，通过异构化反应、纯化、重结晶等反应，制备他克莫司位置异构体（Tacrolimus regioisomer）。通过对他克莫司杂质的合成，为他克莫司杂质的定性及定量分析提供对照品，从而建立他克莫司的质量标准，为他克莫司的质量研究、安全用药等提供重要的指导意义。

附图说明

图1.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）红外光谱图。

图2.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）紫外光谱图。

图3.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）核磁共振氢谱。

图4.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）核磁共振碳谱。

图5.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）核磁共振¹H-¹H COSY谱。

图6.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）核磁共振NOESY谱。

图7.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）核磁共振HSQC谱。

图8.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）核磁共振HMBC谱。

图9.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）ESI图。

图10.Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）HPLC图。

有益效果

本发明具有合成路线短，操作简单，所的产品纯度高，可应该用于质量标准、对照品研究等特点。

具体实施方式

实施例1：Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）的制备

1、他克莫司位置异构体(Tacrolimus regioisomer)的制备方法

（1）将原料他克莫司（40g,49.6mmol）溶于无水二甲苯（800ml），氮气保护下，将反应液加热到130～140℃回流24小时，TLC（薄层色谱）监控反应进行，点板显示原料点消失，停止反应。

（2）当原料消失后，将反应液冷却到室温，控制水浴70℃时旋蒸除去溶剂，得到的粘稠油状物用柱层析（洗脱剂正己烷：丙酮＝4：1）纯化，得到白色的发泡状固体粗品。

（3）粗品再用乙酸乙酯/正己烷（5：1）重结晶两次，得到Tacrolimus regioisomer（他克莫司位置异构体）的白色固体（5.8g，HPLC纯度：98.54％），收率：14.5％。

2.结构确证

2.1红外光谱

测试条件：KBr压片法

测试结果：主要的吸收峰及归属列于表1，谱图见图1。

表1、红外光谱数据列表

2.2紫外光谱

测试条件：溶剂为乙腈，扫描范围（200nm-800nm）。

测试结果：紫外光谱显示在200nm处有最大吸收。紫外吸收光谱见图2。`

2.3核磁共振谱

测试条件：溶剂为CDCl₃

测试项目：¹H-NMR,¹³C-NMR,,¹H-¹H COSY,HSQC,HMBC,NOESY

测试结果：样品NMR谱图见图3-8，归属情况列于表2。

表2、核磁共振氢谱、碳谱数据列表

2.4ESI-MS

测试条件：离子源模式：ESI正离子模式，干燥气体流速8.0L/min,干燥气体温度350℃，毛细管电压3000V,碰撞诱导解离70V,雾化室压力35Psi.

结果分析：样品的ESI-MS报告见图9，ESI-MS观测到的主要离子归属为m/z=827([M+Na]⁺),m/z=787([M-OH]⁺)。

2.5纯度测定

测试条件：

流动相:A:乙腈(0.05%TFA)B:水(0.05%TFA)

梯度:A from5%to100%for5.0min and hold100%for1.0min;

流速:2.0ml/min

色谱柱:Waters XBridge-C18,4.6×50mm,3.5um

柱温:40℃

测试结果：HPLC报告见图10，样品平均纯度98.54%。

3.结论

样品质谱ESI-MS m/z827[M+Na]⁺，推出它的分子式为C₄₄H₆₉NO₁₂；氢谱显示，25号碳上氢的化学位移为2.6和26号碳上氢的化学位移为5.25跟文献（Tetrahedron Letters,1990,131,6477-6480）中数据一致，可以说明C26-C28处发生重排。结合核磁共振、质谱等数据结果以及文献报道（Tetrahedron Letters,1990,131,6477-6480）可以确定本发明的方法合成的结构就是预期的结构：-7,8,10,13,14,15,16,17,18,19,20,21,26,22,28,28a-十六氢-7,21-二羟基-3-(4-羟基-3-甲氧环己基)-16,18-二甲氧基-4,6,12,14,20-五甲基-17,21-环氧-3H-吡啶[2,1-c][1,4]氧杂氮杂环二十五碳烯-1,9,22,23(6H,25H)-四酮，而且其纯度很高为98.54%。其光谱数据为：

IR(KBr)υ_max cm^-1：3534.84,2938.12,1716.68,1645.16,1147.17;1H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ1.68(1H,m,H-17);δ1.88-1.97(1H,m,H-18);δ5.10(1H,d,J=10.0Hz,H-20);δ3.30(1H,m,H-21);δ2.22-2.67(1H,dd,J=18.6,1.6Hz,H-23);δ3.89(1H,m,H-24);δ2.58(1H,m,H-25);δ5.25(1H,d,J=9.6Hz,H-26);δ4.98(1H,m,H-28);δ1.83(1H,m,H-29);δ1.03(1H,d,J=6.5Hz,H-35);δ1.02(1H,d,J=6.5Hz,H-36);δ1.73(1H,s,H-37);δ2.19-2.48(1H,m,H-38);δ5.69(1H,m,H-39);δ4.99-5.03(1H,m,H-40);δ0.78(1H,d,J=6.5Hz,H-41);δ1.67(1H,s,H-42);¹³C-NMR(400MHz,CDCl₃):δ25.7(C-17);δ49.39(C-18);δ123.35(C-20);δ52.14(C-21);δ44.89(C-23);δ71.33(C-24);δ37.88(C-25);δ127.92(C-26);δ80.57(C-28);δ39.03(C-29);δ16.17(C-35);δ18.30(C-36);δ15.39(C-37);δ34.65(C-38);δ135.58(C-39);δ116.54(C-40);δ17.64(C-41);δ17.31(C-42);正离子ESIMS:m/z827[M+Na]⁺,m/z787[M-OH]⁺,ESIMS:m/z827[C₄₄H₆₉NO₁₂Na]⁺。

Claims

1.已知杂质他克莫司位置异构体的制备方法，其特征在于经过以下步骤： (1) 以他克莫司为起始原料，于一种有机溶剂中发生异构化反应生成他克莫司位置异构体，反应体系的温度为130~140oC; （2）用柱层析层析步骤（1）的产物获得粗品他克莫司位置异构体，其中洗脱剂为正己烷和丙酮的混合溶剂; （3）步骤（2）中的粗品杂质用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂重结晶数次，获得纯品杂质。

2.根据权利要求1的所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的异构化反应在惰性气体保护下进行。

3.根据权利要求1的所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的有机溶剂为无水二甲苯、甲苯中的一种或几种。

4.根据权利要求1的所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的正己烷与丙酮混合溶剂体积比为1:1~8:1。

5.根据权利要求1的所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的乙酸乙酯与丙酮混合溶剂体积比为1:1~8:1。