CN105777777A

CN105777777A - 西罗莫司的纯化方法

Info

Publication number: CN105777777A
Application number: CN201410814927.9A
Authority: CN
Inventors: 周筠翔; 詹付凤; 叶静; 谢云; 张洪兰; 叶琤
Original assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICAL Co Ltd; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU Healthcare Industry Group
Current assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICAL Co Ltd; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU Healthcare Industry Group
Priority date: 2014-12-24
Filing date: 2014-12-24
Publication date: 2016-07-20

Abstract

本发明公开了一种西罗莫司的纯化方法。将西罗莫司粗品(绝对含量为30％-40％)用硅胶富集，然后浓缩冻干成干粉；将干粉溶解为浓度30mg/mL～67mg/mL的溶液，用半制备液相色谱制备出纯度98％以上的西罗莫司纯品。本发明的制备工艺简单，不易产生副产物和杂质残留，产品分离纯化稳定且纯度高，实现了我国对西罗莫司高纯度纯品分离的突破。

Description

西罗莫司的纯化方法

技术领域

本发明属于化学领域，具体涉及一种大环内酯抗生素类免疫抑制剂的制备方法。

背景技术

西罗莫司(sirolimus)又称雷帕霉素(rapamycin)，是一种大环内酯抗生素类免疫抑制剂。西罗莫司作为免疫抑制剂的机制在于它能阻断T淋巴细胞活化的后期反应(增殖)，抑制细胞从G1期进入S期，阻断白细胞介素-2(IL－2)与其受体的结合，使Tc、Td细胞不能成为具有免疫应答作用的致敏性T淋巴细胞，发挥其免疫作用。最新研究发现，西罗莫司可有效减少肾移植后皮肤癌发生率。据法国HospicesCivilsdeLyoninLyon的医学博士SylvieEuvrard和同事研究，与那些服用环孢霉素或者他克莫司的病人相比，接受西罗莫司治疗的病人发生新的鳞状细胞癌的风险减少一半。西罗莫司可能的作用机制是对血管再生和细胞增殖的抑制，同样也属于抗病毒的作用。

在西罗莫司的生产技术和应用上我国都远远低于外国水平，并且目前国内文献中鲜有有关西罗莫司的制备方法的。为打破生产瓶颈，加快我国自主生产西罗莫司的脚步，如何制备出高纯度的西罗莫司成品，一直受到人们的重视。

发明内容

本发明的目的在于解决上述我国对于西罗莫司纯品制备技术空洞的缺陷，提供一种大环内酯抗生素类免疫抑制剂西罗莫司的纯化方法，其特点是产品分离纯化稳定且成品纯度高。

本发明的技术方案是这样的：一种西罗莫司的纯化方法，包括以下步骤：

a)将西罗莫司粗品(绝对含量为30％-40％)用硅胶富集，然后浓缩冻干至粉末；

b)将步骤a)得到的干粉溶解为浓度30mg/mL～67mg/mL的溶液，然后用半制备液相色谱制备出纯度98％以上的西罗莫司纯品。

上述步骤a)采用的富集硅胶是50-100目硅胶，硅胶装柱，硅胶柱的径高比优选为1∶5～8。西罗莫司粗品用甲醇、乙醇或乙酸乙酯溶解后上硅胶柱，解吸流动相为乙酸乙酯∶正己烷＝10:(90～95)(体积比)。通过硅胶柱富集得到西罗莫司含量为50％-60％的溶液，然后将其浓缩冻干至粉末。

上述步骤b)优选用甲醇、乙醇或乙酸乙酯溶解干粉，最好采用99.99％分析级的甲醇、乙醇、乙酸乙酯。

在本发明的实施例中，步骤b)采用的半制备液相色谱仪是Agilengt1200，采用的半制备柱为上海月旭科技有限公司的LP-C8：20×250cm，5μm。

上述步骤b)采用的制备流动相为正己烷∶(异丙醇和/或乙醇)＝90:(7～10)(体积比)，可以在正己烷中加入0.6％正己烷体积的乙酸。紫外检测波长为277nm，流速为10mL/min～15mL/min。

上述步骤a)、b)所得的样品均通过高效液相色谱(HPLC)进行检测。在本发明的实施例中，采用的液相色谱仪是岛津LC2010，流动相为0.6％(V/V)冰醋酸水溶液∶1,4-二氧六环＝42:58(体积比)；其中冰醋酸水溶液用三乙胺调节pH到3.6；紫外检测波长为277nm，流速为1ml/min；采用的检测柱是AgilengtC8，粒径为5μm。

本发明纯化西罗莫司的方法，利用硅胶对西罗莫司进行富集，提高纯度；利用半制备液相色谱制得西罗莫司高纯度品(可达99.99％)。本发明的制备工艺简单，不易产生副产物和杂质残留，产品分离纯化稳定且纯度高，实现了我国对西罗莫司高纯度纯品分离的突破。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1

取1L50目硅胶装柱(径高比＝1:6)；取西罗莫司粗品(绝对含量32％)10g，用乙醇溶解至30mL上柱。用乙酸乙酯∶正己烷＝10:90(体积比)解吸硅胶柱，梯度抽取检测。将分离出西罗莫司的解吸液合并，浓缩，冻干，收率为93％干物质重3.44g。

取2g上述干物质用30mL的甲醇溶解。将溶解液进半制备液相色谱仪，每针进样4mL，制备流动相为正己烷∶异丙醇＝90:10(体积比)，收集西罗莫司。将收集样品经液相色谱检测纯度为100％，收率98％。

实施例2

取1L80目硅胶装柱(径高比＝1:7)；取西罗莫司粗品(绝对含量为30％)15.00g，用甲醇溶解至30mL上柱。用乙酸乙酯∶正己烷＝10:92(体积比)解吸硅胶柱，梯度抽取检测。将分离出西罗莫司的解吸液合并，浓缩，冻干，收率为95％干物质重4.73g。

取2g上述干物质用30mL的甲醇溶解。将溶解液进半制备液相色谱仪，每针进样4mL，制备流动相为正己烷∶乙醇＝92:8(体积比)，收集西罗莫司。将收集样品进液相检测纯度为99.8％，收率为98％。

实施例3

取1.5L100目硅胶装柱(径高比＝1:8)；取西罗莫司粗品(绝对含量为35％)10.00g，用乙酸乙酯至30mL上柱。用乙酸乙酯∶正己烷＝10:95(体积比)解吸硅胶柱，梯度抽取检测。将分离出西罗莫司解吸液合并，浓缩，冻干，收率96％干物质重3.64g。

取2g上述干物质用30mL的乙醇溶解。将溶解液进半制备液相色谱仪，每针进样4mL，制备流动相为正己烷∶乙醇＝92:7(体积比)，收集西罗莫司。将收集样品进液相检测纯度为98.5％，收率为96％。

Claims

1.一种西罗莫司的纯化方法，包括以下步骤：

a)将西罗莫司粗品用硅胶富集，然后浓缩冻干成干粉；

b)将步骤a)所得干粉溶解为浓度30mg/mL～67mg/mL的溶液，然后用半制备液相色谱制备出纯度98％以上的西罗莫司纯品。

2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤a)采用的硅胶是50-100目硅胶。

3.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤a)硅胶装柱，硅胶柱的径高比为1∶5～8。

4.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤a)西罗莫司粗品用甲醇、乙醇或乙酸乙酯溶解后上硅胶柱，解吸流动相为乙酸乙酯∶正己烷＝10:(90～95)体积比的混合液。

5.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤b)用甲醇、乙醇或乙酸乙酯溶解干粉。

6.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤b)采用的制备流动相为正己烷∶异丙醇和/或乙醇＝90:(7～10)体积比的混合液。

7.如权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，在配制步骤b)的制备流动相的正己烷中添加0.6％正己烷体积的乙酸。

8.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤b)采用的半制备液相色谱仪是Agilengt1200，半制备柱为上海月旭科技有限公司的LP-C8：20×250cm，5μm。

9.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤b)进行半制备液相色谱的紫外检测波长为277nm，流速为10～15mL/min。

10.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，在步骤a)和b)中通过高效液相色谱检测样品，采用的液相色谱仪是岛津LC2010，检测柱是AgilengtC8，粒径为5μm；流动相为0.6％冰醋酸水溶液∶1,4-二氧六环＝42:58体积比；其中冰醋酸水溶液用三乙胺调节pH到3.6；紫外检测波长为277nm，流速为1ml/min。