CN108484600A - 促尿酸排泄的urat1抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物化学领域，具体涉及一类促尿酸排泄的URAT1抑制剂，它为式(I)结构所示的化合物或其药学上可接受的盐，实验表明，本发明提供的化合物对HEK293转染细胞中hURAT1转运尿酸具有十分良好的抑制作用，显示该类化合物在治疗高尿酸血症或痛风方面具有良好的应用前景。

Description

促尿酸排泄的URAT1抑制剂
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一类具有促尿酸排泄功能的URAT1抑制剂化合物以及该类化合物的应用。
背景技术
痛风是由高尿酸血症所引起的一种最常见的关节炎。目前全球有近1亿痛风病患，其市场规模巨大。据统计，欧洲的痛风发病率约为1-2％，以中老年男性居多(MichaelDoherty,Tim L Jansen,George Nuki,et al.Gout:why is this curable disease soseldom cured？.Annals of the Rheumatic Diseases.2012,71(11):1765-1770)；美国痛风病人也已达830万(Zhu Y,Pandya BJ,Choi HK.Prevalence of gout andhyperuricemia in the US general population:the National Health and NutritionExamination Survey 2007-2008.Arthritis Rheumatol 2011,63(10):3136-3141)；中国的高尿酸血症患者人数约为1.2亿，其中痛风患者已超5000万人，男性痛风患者人数远高于女性。
通常，在临床上当人体内血尿酸浓度大于6.8mg/dL时，称为高尿酸血症。尿酸浓度超过血液中的最大溶解能力时，尿酸盐将在人体组织的滑膜液、外周关节的软骨、耳朵的耳廓和手肘的鹰嘴囊等处产生结晶沉积(Richette P,Bardin T.Gout.Lancet.2010,375(9711):318-328)，可引发反复炎症性的关节炎，产生痛风耀斑，最终将演变成严重的慢性关节病变，甚至发生骨腐蚀(Schlesinger N.Difficult-to-treat gouty arthritis:adisease warranting better management.Drugs,2011,71(11):1413-1439)。当尿酸盐结晶形成并沉积于皮下组织，就会形成痛风石，其可破裂人体表皮组织，引起疼痛，甚至感染。
目前，痛风的标准化治疗方案中包含有降低血尿酸浓度的治疗(urate-loweringtherapy,ULT)，ULT可使机体血尿酸浓度低于饱和浓度而不至于形成尿酸盐结晶，并可使病灶部位的尿酸盐结晶溶解。体内尿酸盐结晶消失后，痛风便不再形成。美国风湿病学会(ACR)和欧盟抗风湿联盟(EULAR)建议一般痛风患者血尿酸浓度须降低至6mg/dL以下，而痛风石患者血尿酸浓度须降低至5mg/dL以下。多项研究表明持续降低血尿酸浓度能够减少临床痛风的严重程度、降低急性痛风耀斑的发生率(Shoji A,Yamanaka H,Kamatani N.Aretrospective study of the relationship between serum urate level andrecurrent attacks of gouty arthritis:evidence for reduction of recurrentgouty arthritis with antihyperuricemic therapy.Arthritis Rheum.2004,51(3):321-325)、减小痛风石的大小和数量(Perez-Ruiz F,Calabozo M,Pijoan JI,etal.Effect of uratelowering therapy on the velocity of size reduction of tophiin chronic gout.Arthritis Rheumatology,2002,47(4):356-360)。
ULT按作用机制主要可分为减少尿酸生成(如黄嘌呤氧化酶抑制剂类)和促进尿酸排泄(如URAT1抑制剂类)。黄嘌呤氧化酶抑制剂主要有别嘌醇和非布索坦，是欧美痛风患者的一线治疗药物，但大量研究表明，约80-85％高尿酸血症患者的病因是由于肾脏对尿酸的排泄不畅(Cheeseman C.Solute carrier family 2,member 9 and uric acidhomeostasis.Current Opinion in Nephrology and Hypertension,2009,18(5):428-432)。因此黄嘌呤氧化酶抑制剂的临床治疗效果并不理想，约40-80％的患者无法通过尿酸生成抑制药达到控制血尿酸水平的目的(Edwards NL.Febuxostat:a new treatment forhyperuricaemia in gout.Rheumatology(Oxford).2009,48(2):15-19)。别嘌醇的临床有效率低(Rashid N,Coburn BW,Wu YL,et al.Modifiable factors associated withallopurinol adherence and outcomes among patients with gout in an integratedhealthcare system.Journal of Rheumatology.2015,42(3):504-512)，大部分患者在接受300mg/天的剂量后血尿酸浓度仍未降至目标值，且可引发致命性的皮疹和多种不良反应；80mg/天的非布索坦疗效虽然优于别嘌醇300mg/天(Schumacher HR,Jr.,Becker MA,Wortmann RL,et al.Effects of febuxostat versus allopurinol and placebo inreducing serum urate in subjects with hyperuricemia and gout:a 28-week,phaseIII,randomized,double-blind,parallel-group trial.Arthritis Rheumatology.2008,59(11):1540-1548)，但仍有40％-52％的患者血尿酸浓度未降至目标值，而且非布索坦存在严重的心血管和胃肠道不适的副作用，也具有肝脏毒性。因此，美国风湿病学会治疗指南建议添加一种能促进尿酸排泄的药物(Khanna D,Fitzgerald JD,Khanna PP,et al.2012American College of Rheumatology guidelines for management of gout,part 1:systematic nonpharmacologic and pharmacologic therapeutic approaches tohyperuricemia.Arthritis Care&Research.2012,64(10):1431-1446)。
促进尿酸排泄药在高尿酸血症和痛风的治疗中占有十分重要的地位，其作用机理是抑制尿酸在肾脏近曲小管的重吸收，增加尿酸的肾脏排泄，从而达到降低血尿酸浓度的目的。人尿酸阴离子转运蛋白1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是有机阴离子转运体(OAT)超家族成员，由SLC22A12基因编码，其cDNA存在多种突变，易引起尿酸代谢异常。hURAT1蛋白在人肾脏近曲小管上皮细胞刷状缘膜上特异性表达，是人体内最主要的尿酸重吸收蛋白，控制着约90％以上的肾小球滤过后尿酸的重吸收(Michael FW,JutabhaP,Quada B.Developing potent human uric acid transporter 1(hURAT1)inhibitors.Journal of Medicinal Chemistry.2011,54:2701-2713)。抑制hURAT1转运作用可有效地降低尿酸重吸收，促进尿酸在肾脏的排泄，达到降低体内血尿酸水平的效果(Michael FW,Jutabha P,Quada B.Developing potent human uric acid transporter 1(hURAT1)inhibitors.Journal of Medicinal Chemistry.2011,54:2701-2713)。
目前临床主要用于治疗痛风的URAT1抑制剂包括苯溴马隆、Zurampic、丙磺舒和苯磺唑酮。苯溴马隆是目前市场最有效的促尿酸排泄药。但苯溴马隆有很大的肝脏毒性，没能进入美国市场，2003年已从大部分欧洲国家撤出(Jansen TL,Reinders MK,van Roon EN,et al.Benzbromarone withdrawn from the European market:another case of"absence of evidence is evidence of absence".Clinical ExperimentalRheumatology,2004,22(5):651)。其另一缺点是对肝脏CYP2C9酶有较强的抑制作用。但因市场缺乏好的抗痛风药物，仍然有中国、德国、日本、巴西、新西兰等20多个国家在广泛使用。而丙磺舒和苯磺唑酮疗效十分差，且副作用大。
Lesinurad(RDEA-594)，商品名为Zurampic，是一种新型URAT1抑制剂，由ArdeaBiosciences公司研发。阿斯利康公司于2012年耗资12.6亿美元收购Ardea公司获得了该药。Zurampic在2015年12月和2016年2月由美国和欧洲批准以200mg/天的剂量与别嘌醇合用，其疗效远不如苯溴马隆(50-80mg/天)。一项Zurampic与非布索坦联用治疗痛风患者的III期临床显示，200mg Zurampic+80mg非布索坦联用组与安慰药物组(单独使用80mg非布索坦)经过12个月的控制尿酸对照治疗，血尿酸sUA＜5mg/dl的人数百分率并无显著性差异。Zurampic同时还存在多种毒副作用：(1)该药可能会引起患者发生致死性心血管疾病、非致命性心肌梗死或脑瘁中等重大心血管不良反应。(2)Zurampic刚开始治疗后会发生肾功能相关的不良反应，单独服用400mg时，严重不良事件发生率最高，故临床上禁止高剂量单用，且治疗前后需定期检测肾功能。因此，FDA要求Zurampic用黑框在说明书中标示其严重的肾脏毒性。(3)该药可引发轻中度的肝损伤。虽然FDA已批准Zurampic的上市，但缺少显著疗效加上毒性较大，令这个产品前途暗淡。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一系列新的化合物，旨在获得毒性低且药效佳的URAT1抑制剂用于高尿酸血症或痛风疾病的治疗。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
一种式(I)结构所示的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
A为含有或不含有杂原子O、N或S的非芳香性六元环；
B环为含有两个N原子的五元芳环或呋喃环；
Z、E或X分别独立地为C或N原子；
G为N或O原子；且当G为O原子时，Z、E和X均为C原子；当G为N原子，Z、E和X中只有一个为N原子；
Y为羰基、硫、砜基、亚砜基、任意取代的亚甲基或亚氨基；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1～5烷基、C1～5取代烷基、C1～3取代氨基、C1～3烷氧基、C1～3取代烷氧基或C1-5烷硫基中的一种或几种；
R2为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1～4烷基、C1～3取代烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、C1～3取代氨基、C1～5烷氧基、C1～5取代烷氧基或C1-5烷硫基中的一种或几种；
R3为C1-4烷基、C1-4取代烷基或C3-4环烷基；
m为0～3的整数；
n为1～3的整数；
基团Y中的取代基选自羟基、氰基、硝基、氨基、羧基或C1-3烷氧基，基团R1、R2或R3中的取代基选自羟基、卤素、硝基、氨基或氰基。
本发明中的m为2或3时，即代表该化合物中含有两个R1基团，并且这两个R1基团可以相同，也可以分别采用本申请中的R1所限定的基团。
本发明中的n为2或3时，即代表该化合物中含有两个R2基团，并且这两个R2基团可以相同，也可以分别采用本申请中的R2所限定的基团。
在一种方案中，A环为环已烯环或者至少含一个O或/和N原子的非芳香性六元环。
在一种优选方案中，A环为环己烯环、3,4-二氢-2H-吡喃环、四氢吡喃环、2,3,4,5-四氢吡啶环、5,6-二氢-2H-1,3-噁嗪环或1,2,5,6-四氢嘧啶环。
在一种方案中，R1选自选自氢、氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基中的一种或几种；m为0、1或2。
在一种优选方案中，R1选自氢、氘、氟、氯、溴、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基中的一种或几种；m为0、1或2。
在一种方案中，R2选自选自氢、氘、卤素、氰基、乙烯基、乙炔基、C1-2烷基、取代的C1-2烷基、C1-2烷氧基、取代的C1-2烷氧基、C1-2烷硫基、取代的C1-2烷硫基中的一种或几种；其取代基选自氘、卤素、C1-2烷基、C3-4环烷基或C1-3烷氧基；n为0、1或2。
在一种方案中，R2选自选自氢、氘、卤素、氰基、乙烯基、乙炔基、取代或非取代的C1-2烷基、取代或非取代的C1-2烷氧基、取代或非取代的C1-2烷硫基中的一种或几种；其取代基选自氘、卤素、C1-2烷基、C3-4环烷基或C1-3烷氧基；n为0、1或2。
在一种优选方案中，R2选自氢、氘、卤素、氰基、C1-2烷基、C1-2卤代烷基、C1-2烷氧基或C1-2烷硫基中的一种或几种；n为1或2。
在一种更优选方案中，R2选自溴、氯、氰基中的一种或几种，n为1或2。
在一种方案中，R3选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基或环丁基。
在一种更优选的方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
本发明式(I)结构所示的化合物的制备方法包括方法一和方法二。
方法一：
咪唑并吡啶(或吡唑并吡啶)类化合物通过去甲基化反应以及氢化(或者氘化)反应得到相应的羟基化合物，该化合物可能为最终产物，也可以通过卤化反应、还原反应或其它反应得到相应的目标产物。R1、R2和R3的定义如权利要求及发明内容中通式所述。
方法二：
取代的醛基化合物跟格氏试剂反应得到二取代的甲醇，该化合物经过氧化反应以及去甲基化反应，得到相应的羟基化合物，该化合物可能为最终产物，也可以通过卤化反应、还原反应或其它反应得到相应的目标产物。Z、E、G、R1、R2和R3的定义如权利要求及发明内容中通式所述。
除非另有说明，下列用在权利要求书和说明书中的术语有如下含义：
“非芳香性六元环”，是指由六个环原子构成的环状基团，该基团不具有芳香性，不属于六元芳环，该基团中可以含有饱和的C-C单键，也可以含有不饱和的C＝C、C＝N等双键，其中的环原子可以为除碳原子之外的其他杂原子，例如N、S或O等，杂原子的数目并不局限于一个，可以有两个、三个等。本发明中的非芳香性六元环包括但不限于环己烯环、3,4-二氢-2H-吡喃环、2,3,4,5-四氢吡啶环、5,6-二氢-2H-1,3-噁嗪环、1,2,5,6-四氢嘧啶环等。
“五元芳环”，是指由五个环原子构成的具有共轭的平面环结构稠合环基团，它具有芳性且环原子可以为除碳原子外的其他原子，即杂原子。当五元芳环中含有杂原子时，该杂原子可以为N、S或O，杂原子的数目并不局限于一个，可以有两个、三个等。本发明中的含有杂原子的五元芳环包括但不限于三氮唑环、咪唑环、噻唑环、噁唑环、噁二唑环或噻二唑环等。
“氢”，是指氕(1H)，它是氢元素的主要稳定同位素。
“氘”，是指氢的一种稳定形态同位素，也被称为重氢，其元素符号为D。
“卤素”，是指氟原子，氯原子，溴原子或碘原子。
“烷基”，表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-20”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括20个碳原子)。含1-4个碳原子的烷基称为低级烷基。当低级烷基没有取代基时，称其为未取代的低级烷基。更优选的是，烷基是有2-5个碳原子的中等大小的烷基。本发明中的烷基例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基为有1-4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。
“烷氧基”，表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的环烷基)基团，其进一步表示-O-(未取代的烷基)。代表性实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“羰基”，表示C＝O基团。
“砜基”，表示-S(O)2-基团。
“亚砜基”，表示-S(O)-基团。
“亚甲基”，表示-CH2-基团。
“亚氨基”，表示-NH-基团。
“羟基”，表示-OH基团。
“硝基”，表示-NO2基团。
“氨基”，表示-NH2基团。
“羧基”，表示-COOH基团。
“氰基”，表示-CN基团。
“药学上可接受的盐”，是包含通式(I)的化合物与有机酸或无机酸形成的盐，表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：
(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸例如(但不限于)盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
“药物组合物”，指的是在此描述的一种或多种化合物或者它们的药学上可接受的盐和前药与其它的化学成分，例如药学上可接受的载体和赋形剂的混合物。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
在下文中，除非特别地限制，作为治疗剂活性成分的式(I)化合物包括它们的所有药学上可接受的盐，它们应当理解为落入本发明的范围内。在本说明书中，仅仅为了方便，将它们简称为“式(I)的化合物”。
本发明包括一种药物组合物，其包含本发明中任一所述化合物、其药学上可接受的盐或其易水解的前药酯作为活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
本发明的各化合物或其药学上可接受的盐可应用于制备促尿酸排泄药物方面，特别是应用于制备治疗或预防高尿酸血症、肾病或痛风药物方面。实验表明，本发明提供的化合物对HEK293转染细胞中hURAT1转运尿酸具有十分良好的抑制作用，显示该类化合物在治疗高尿酸血症或痛风方面具有良好的应用前景。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明的范围并不局限于下述各实施例。
实施例1：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(5)的合成
步骤A：将2-氨基吡啶(2.0g，21.3mmol)和三乙胺(2.58g，25.5mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)，然后在冰水浴下滴加丙酰氯(2.07g，22.4mmol)。加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。加入水(40mL)，用二氯甲烷(40mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:15～1:10洗脱)，得N-(吡啶-2-基)丙酰胺(1)(2.74g)。收率为85.6％。
步骤B：将含有化合物1(300mg，2.0mmol)、2-溴-1-(4-甲氧基苯基)乙酮(460mg，2.0mmol)和甲苯(10mL)的混合物在回流下搅拌48小时。冷却到室温，加入水(30mL)，用饱和碳酸钾水溶液调节pH值至8～9。用二氯甲烷(40mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:1洗脱)，得(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(2)(254mg)。收率为45.3％。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.18(d，J＝7.0Hz，1H)，7.74-7.69(m，3H)，7.58-7.55(m，1H)，7.17-7.14(m，1H)，7.09(d，J＝8.5Hz，2H)，3.87(s，3H)，2.45(q，J＝7.5Hz，2H)，1.11(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：281.1[M+H]+。
步骤C：将含有化合物2(250mg，0.89mmol)、10％钯碳(25mg)和DMF(7mL)的混合物在氢气下30℃搅拌过夜。然后加入乙酸乙酯(30mL)，通过硅澡土过滤。滤液用水(30mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(3)(230mg)。收率为90.7％。
步骤D：在冰水浴下，将1.0M三溴化硼甲苯溶液(2.3mL)滴加到化合物3(220mg，0.77mmol)的无水二氯甲烷(10mL)溶液中，加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入冰水(30mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(4)(205mg)。收率为98.0％。
步骤E：将溴(260mg，1.63mmol)的醋酸(1mL)溶液滴加到化合物4(200mg，0.74mmol)和无水乙酸钠(182mg，2.2mmol)的醋酸(8mL)溶液中。加完后，所得混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中滴加稀亚硫酸氢钠水溶液，直到颜色褪去。减压蒸除溶剂，加入水(15mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，所得产物用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(5)(175mg)。收率为55.3％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.77(s，2H)，4.02-4.00(m，2H)，2.86-2.83(m，2H)，2.28(q，J＝7.6Hz，2H)，1.92-1.86(m，4H)，1.08(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：426.9[M-H]-。
实施例2：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(5,6,6,7,8-五氘-2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(10)的合成
步骤A：在-10～0℃下，将60％氢化钠(1.68g，42mmol)分批加入到对甲氧基苯乙酮(3.0g，20.0mmol)的DMF(15mL)溶液中。加完后，在该温度下继续搅拌40分钟，然后滴入丙酸乙酯(2.04g，20mmol)。加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。加入水(60mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30洗脱)，得1-(4-甲氧基苯基)戊烷-1.3-二酮(6)(3.16g)。收率为76.6％。
步骤B：将2-氨基-5-溴吡啶(2.60g，15.0mmol)和化合物6(3.72g，18.0mmol)溶解于THF(40mL)，然后在冰水浴下依次加入碘苯二乙酸(5.80g，18.0mmol)和三氟化硼乙醚(430mg，3.03mmol)。加完后，在室温下搅拌过夜。加入水(40mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20洗脱)，得(6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(7)(1.15g)。收率为21.3％。
步骤C：将化合物7(200mg，0.557mmol)悬浮在DMF(10mL)中，加入重水(0.5mL)及5％钯碳(20mg)，所得混合物在氘气下常压搅拌48小时。通过硅藻土过滤后，向滤液中加入水(40mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用水(20mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(4-甲氧基苯基)(5,6,6,7,8-五氘-2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(8)(164mg)。收率为100％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.67(dd，J＝2.0，6.8Hz，2H)，7.06(dd，J＝2.0，6.8Hz，2H)，4.03-4.01(m，1H)，3.86(s，3H)，2.80-2.78(m，1H)，2.18(q，J＝7.6Hz，2H)，1.81-1.79(m，1H)，0.99(t，J＝7.6Hz，3H)。
步骤D和E的实验操作按照实施例1中步骤D和E的制备方法，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(5,6,6,7,8-五氘-2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(10)。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.80(s，2H)，4.05-4.01(m，1H)，2.85-2.83(m，1H)，2.27(q，J＝7.2Hz，2H)，1.83-1.81(m，1H)，1.08(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：434.0[M+H]+。
实施例3：5-(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(16)的合成
步骤A：在冰水浴下，将4-甲氧基苯乙酮(44.0g，293mmol)加到含有1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(104g，294mmol)、碘(38.6g，152mmol)和乙腈(440mL)的混合物中。加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入水(1350mL)，有大量固体析出。过滤，干燥，得3-碘-4-甲氧基苯乙酮(11)(70.0g)。收率为86.5％。
步骤B：将含有化合物11(70.0g，254mmol)、氰化亚铜(34.0g，380mmol)和DMF(400mL)的混合物在130℃搅拌过夜。冷却到室温，经硅藻土过滤后，加入水(1600mL)，用乙酸乙酯(800mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(400mL×2)和饱和食盐水(400mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得5-乙酰基-2-甲氧基苯甲腈(12)粗品(50.0g)。该化合物不经进一步处理直接用于下一步反应。
步骤C：将溴(49.0g，307mmol)的甲醇(50mL)溶液滴加到化合物12粗品(45.0g)的甲醇(250mL)溶液中。加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。加入水(900mL)，过滤，干燥，得5-(2-溴-乙酰基)-2-羟基-3-甲基苯甲腈(13)(41.0g)。步骤B和C两步反应总收率为70.6％。
步骤D：将含有化合物13(41.0g，161mmol)、化合物1(24.0g，161mmol)和甲苯(600mL)的混合物在回流下搅拌48小时。冷却到室温，加入水(400mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(600mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～2:1洗脱)，得5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-甲氧基苯甲腈(14)(25.7g)。收率为52.3％。
步骤E：将含有化合物14(1.0g，3.28mmol)、10％钯碳(100mg)和醋酸(10mL)的混合物在氢气下30℃搅拌过夜。通过硅澡土过滤后，减压蒸除溶剂，然后加入乙酸乙酯(70mL)，用水(20mL)洗涤,无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:3～4:1洗脱)，得5-(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-甲氧基苯甲腈(15)(400mg)。收率为39.5％。
步骤F：在冰水浴下，将60％氢化钠(65mg，1.63mmol)分批加入到乙硫醇(0.12mL)的THF(10mL)溶液中，搅拌约5分钟后过滤，收集滤饼。再将该滤饼加入到化合物15(100mg，0.323mmol)的DMF(6mL)溶液中，所得混合物在60℃搅拌1小时。冷却到室温，经硅藻土过滤后，加入水(40mL)，用2M柠檬酸水溶液调节pH值至5～6。用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:2～5:1洗脱)，得5-(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(16)(52mg)。收率为54.5％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.89(s，1H)，7.79(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H)，7.05(d，J＝8.4Hz，1H)，4.04(t，J＝5.6Hz，2H)，2.83-2.81(m，2H)，2.18(q，J＝7.2Hz，2H)，1.89-1.83(m，4H)，1.01(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：296.2[M+H]+。
实施例4：3-溴-5-(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(17)的合成
步骤A：将溴(27mg，1.63mmol)的醋酸(1mL)溶液滴加到化合物16(50mg，0.74mmol)和无水乙酸钠(28mg，2.2mmol)的醋酸(8mL)溶液中。加完后，所得混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中滴加稀亚硫酸氢钠溶液，直到颜色褪去。减压蒸除溶剂，然后加入水(15mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，所得产物用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得3-溴-5-(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(17)(30mg)。收率为55.3％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.93(d，J＝2.4Hz，1H)，7.71(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(t，J＝5.6Hz，2H)，2.99-2.97(m，2H)，2.37-2.35(m，2H)，1.95-1.89(m，4H)，1.15(t，J＝7.6，3H)。MS(EI，m/z)：376.1[M+H]+。
实施例5：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-7-羟基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(23)和(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-7-甲氧基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(25)的合成
步骤A：将2-氨基-4-甲氧基吡啶(4.9g，39.5mmol)和三乙胺(4.4g，43.5mmol)溶解于四氢呋喃(30mL)，然后在冰水浴下滴加丙酰氯(4.0g，43.5mmol)，所得混合物在室温下搅拌过夜。加入水(100mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，减压蒸除溶剂。向产物中加入碳酸钾(4.1g，29.7mmol)、甲醇(50mL)和水(12mL)，所得混合物在室温下搅拌1小时。减压蒸除溶剂，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得N-(4-甲氧基吡啶-2-基)丙酰胺(18)(4.85g)。收率为68.2％。
步骤B：将含有化合物18(4.85g，26.9mmol)、2-溴-1-(4-甲氧基苯基)乙酮(6.14g，26.9mmol)和甲苯(50mL)的混合物在回流下搅拌过夜。冷却到室温，加入水(50mL)，用2M碳酸钾溶液调节pH值至8～9。用二氯甲烷(70mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:5～2:3洗脱)，得(2-乙基-7-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(19)(900mg)。收率为10.8％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.08(d，J＝7.6Hz，1H)，7.67(d，J＝8.8Hz，2H)，7.17(d，J＝2.4Hz，1H)，7.08(d，J＝8.4Hz，2H)，6.88-6.86(m，1H)，3.91(s，3H)，3.87(s，3H)，2.38(q，J＝7.2Hz，2H)，1.10(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤C：在冰水浴下，将1.0M三溴化硼甲苯溶液(9mL)滴加到化合物19(900mg，2.9mmol)的无水二氯甲烷(25mL)溶液中。加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入冰水(50mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，甲醇:二氯甲烷＝1:50～1:20洗脱)，得(2-乙基-7-羟基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(20)(477mg)和(2-乙基-7-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(21)(277mg)。收率分别为58.3％和32.2％。化合物20:1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.83(s，1H)，10.22(s，1H)，9.06(d，J＝7.6Hz，1H)，7.54(d，J＝8.4Hz，2H)，6.89-6.84(m，3H)，6.77-6.75(m，1H)，2.37(q，J＝7.6Hz，2H)，1.08(t，J＝7.6Hz，3H)。化合物21:1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.25(s，1H)，9.03(d，J＝7.6Hz，1H)，7.57(dd，J＝2.0，6.8Hz，2H)，7.15(d，J＝2.4Hz，1H)，6.91-6.83(m，3H)，3.91(s，3H)，2.45(q，J＝7.6Hz，2H)，1.11(t，J＝7.6Hz，3H)。
步骤D：将含有化合物20(185mg，0.66mmol)、雷尼镍(40mg)和乙醇(15mL)的混合物在氢气下60℃搅拌6小时，再向反应混合物中加入雷尼镍(40mg)，然后在氢气下60℃继续搅拌3小时。冷却到室温，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯淋洗。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，甲醇:二氯甲烷＝1:50～1:30洗脱)，得(2-乙基-7-羟基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(22)(106mg)。收率为62.7％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.33(s，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，2H)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H)，5.14(d，J＝3.2Hz，1H)，4.17(s，1H)，4.12-4.02(m，2H)，3.02-2.96(m，1H)，2.74-2.68(m，1H)，2.20(q，J＝7.6Hz，2H)，1.99-1.88(m，2H)，1.00(t，J＝7.6Hz，3H)。
步骤E：将化合物22(56mg，0.22mmol)溶解于DMF(3mL)，加入NBS(77mg，0.44mmol)，所得混合物在冰水浴下搅拌0.5小时。加入水(15mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(15mL×2)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，甲醇:二氯甲烷＝1:50洗脱)，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-7-羟基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(23)(13mg)。收率为13.5％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.81(s，2H)，5.22(s，1H)，4.21-4.19(m，1H)，4.12-4.05(m，2H)，3.08-3.03(m，1H)，2.80-2.76(m，1H)，2.26(q，J＝7.6Hz，2H)，2.03-1.19(m，2H)，1.07(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：442.9[M-H]-。
以化合物21为原料，步骤F和G的实验操作按照本实施例步骤D和E的制备方法，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-7-甲氧基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(25)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.81(s，2H)，4.09-4.03(m，2H)，3.88-3.87(m，1H)，3.33(s，3H)，3.07-3.06(m，1H)，2.94-2.93(m，1H)，2.24(q，J＝7.6Hz，2H)，2.17-2.04(m，2H)，1.06(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：457.0[M-H]-。
实施例6：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)甲酮(32)的合成
步骤A：将含有1-氨基碘化吡啶(15.5g，70.0mmol)、2-戊炔酸乙酯(9.72g，77.1mmol)、碳酸钾(21.26g，154mmol)和DMF(150mL)的混合物在室温下搅拌4.5小时。加入水(450mL)，过滤，滤饼用水(100mL)洗涤，得2-乙基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯(26)湿品(12.25g)。该化合物不经干燥直接用于下一步反应。
步骤B：将含有化合物26湿品(12.25g)、乙醇(30mL)、THF(30mL)和2M氢氧化钠水溶液(70mL)的混合物在60℃搅拌过夜。减压蒸除约一半溶剂，加入水(150mL)，用2M盐酸调节pH值至5～6。过滤，得2-乙基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸(27)湿品(10.0g)。该化合物不经干燥直接用于下一步反应。
步骤C：将含有化合物27湿品(5.60g)悬浮在水(100mL)中，加入浓硫酸(4mL)，所得混合物在80℃搅拌3小时。冷却到室温，用2M氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9。用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(30mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得2-乙基吡唑并[1,5-a]吡啶(28)(3.18g)。步骤A、B和C三步反应总收率为47.7％。
步骤D：将含有化合物28(584mg，3.99mmol)、4-甲氧基苯甲酰氯(680mg，3.99mmol)和三氯化铝(800mg，6.0mmol)的混合物在100℃搅拌过夜。稍微冷却后，加入乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)，用2M氢氧化钠水溶液调节pH值至9～10。分层，收集有机相。水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:10洗脱)，得(2-乙基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(29)(305mg)。收率为27.3％。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.79(d，J＝6.9Hz，1H)，7.66(d，J＝8.7Hz，2H)，7.44-7.39(m，1H)，7.33-7.30(m，1H)，7.08-7.03(m，3H)，3.86(s，3H)，2.84(q，J＝7.5Hz，2H)，1.20(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤E：将60％氢化钠(218mg，5.45mmol)分批加到乙硫醇(338mg，5.44mmol)的DMF(3mL)溶液中。搅拌约5分钟后，将化合物29(305mg，1.09mmol)的DMF(3mL)溶液加入上述反应混合物中，所得混合物在120℃搅拌2小时。冷却到室温，加入水(30mL)，用稀盐酸调节pH值至7～8。然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(20mL×3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(30)(420mg)。该化合物不经纯化直接用于下一步反应。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ10.27(s，1H)，8.76(d，J＝6.6Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H)，7.42-7.31(m，2H)，7.05-7.01(m，1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，2.84(q，J＝7.5Hz，2H)，1.20(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤F的实验操作按照实施例4中步骤D的制备方法，得(2-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(31)。
步骤G：在冰水浴下，将NBS(86mg，0.483mmol)加到化合物31(65mg，0.240mmol)的DMF(5mL)溶液中，然后继续搅拌1小时。加入水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(10mL×3)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:二氯甲烷＝1:10洗脱)，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)甲酮(32)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.74(s，2H)，4.05(t，J＝6.0Hz，2H)，3.36-3.34(m，2H)，2.57-2.51(m，2H)，1.96-1.95(m，2H)，1.72-1.70(m，2H)，1.08(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：429.0[M+H]+。
实施例7：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-基)甲酮(41)的合成
步骤A：向环己酮(9.81g，100mmol)和草酸二乙酯(14.6g，100mmol)的THF(100mL)溶液中分批加入60％氢化钠(4.8g，120mmol)。加完后，升温到40℃搅拌0.5小时，然后升温到50℃搅拌1.5小时。冷却到室温，将反应液分批倒入醋酸(8mL)的水(200mL)溶液中。用甲基叔丁基醚(100mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(40mL)洗涤。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，石油醚洗脱)，得2-氧-2-(2-氧环己基)乙酸乙酯(33)(10.5g)。收率为53.0％。
步骤B：将化合物33(10.1g，51.0mmol)和85％水合肼(1.84g，48.8mmol)的乙醇(40mL)溶液在60℃搅拌2小时。减压蒸除溶剂，加入水(40mL)，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1:100～1:3洗脱)，得4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-甲酸乙酯(34)(5.0g)。收率为50.5％。
步骤C：将含有化合物34(2.3g，11.8mmol)、碘乙烷(3.69g，23.7mmol)、碳酸铯(5.79g，17.8mmol)和DMF(25mL)的混合物在室温下搅拌过夜。加入水(75mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并的有机相依次用水(20mL×2)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1:20～1:10洗脱)，得2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-甲酸乙酯(35)(1.58g，石油醚:乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.8)和1-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-甲酸乙酯(36)(1.01g，石油醚:乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.5)。收率分别为60.2％和38.5％。
步骤D：将含有化合物35(1.58g，7.24mmol)、氢氧化钠(580mg，14.5mmol)、甲醇(5mL)和水(15mL)的混合物在40℃搅拌1小时。减压蒸除水，然后用甲苯带水两次。向剩余物中加入氯化亚砜(6mL)和DMF(1滴)，所得混合物在回流下搅拌1小时。减压蒸除溶剂，加入THF(15mL)，然后在冰水浴下将上述THF溶液分批加入到浓氨水(15mL)中。加完后，继续搅拌20分钟。加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-甲酰胺(37)(1.18g)。收率为84.3％。
步骤E：将三氟乙酸酐(1.92g，9.14mmol)和化合物37(1.1g，5.69mmol)的THF(20mL)溶液在室温下搅拌3小时。减压蒸除溶剂，加入水(20mL)，用2M氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9。用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20洗脱)，得2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-甲腈(38)(640mg)。收率为64.2％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ4.22(q，J＝7.2Hz，2H)，2.59-2.50(m，4H)，1.76-1.68(m，4H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤F：在冰水浴下，将1.0M 4-甲氧基苯基溴化镁THF溶液(5.7mL)滴加到化合物38(500mg，2.85mmol)的THF(10mL)溶液中，加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。加入6M盐酸溶液(5mL)，搅拌约1小时后，用2M氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:100～1:1洗脱)，得(2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(39)(300mg)。收率为37.0％。
步骤G：在冰水浴下，将1.0M三溴化硼甲苯溶液(3.2mL)滴加入到化合物39(300mg，1.05mmol)的无水二氯甲烷(6mL)溶液中，加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入冰水(30mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(40)(280mg)。收率为98.6％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.22(s，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，6.81(d，J＝8.4Hz，2H)，3.99-3.96(m，2H)，2.58-2.55(m，2H)，2.10-2.08(m，2H)，1.72-1.70(m，2H)，1.58-1.57(m，2H)，1.21(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤H：将溴(124mg，0.776mmol)的醋酸(3mL)溶液滴加到化合物40(100mg，0.370mmol)和无水乙酸钠(89mg，1.11mmol)的醋酸(15mL)溶液中，加完后，所得混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中滴加稀亚硫酸氢钠水溶液，直到颜色褪去。减压蒸除溶剂，加入水(15mL)，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:100～1:1洗脱)，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-基)甲酮(41)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.83(s，2H)，4.20-4.18(m，2H)，2.60-2.58(m，2H)，2.14-2.11(m，2H)，1.73-1.72(m，2H)，1.57-1.56(m，2H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：426.9[M-H]-。
实施例8：2,6-二溴-4-[(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)羟甲基]苯酚(42)的合成
在冰水浴下，将氢化铝锂(18mg，0.474mmol)加入到化合物5(135mg，0.315mmol)的THF(15mL)溶液中，加完后，所得混合物在该温度下继续搅拌0.5小时。加入水(15mL)，用2M柠檬酸溶液调节pH值至5～6，用乙酸乙酯/THF混合溶剂(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，二氯甲烷:甲醇＝1:100～1:30洗脱)，得2,6-二溴-4-[(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)羟甲基]苯酚(42)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.36(s，2H)，5.95(s，1H)，5.78(s，1H)，3.88-3.85(m，2H)，2.67-2.65(m，2H)，2.32(q，J＝7.6Hz，2H)，1.76-1.69(m，4H)，1.04(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：431.0[M+H]+。
实施例9：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-6-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(43)的合成
化合物43的合成按照实施例1的方法制备，其中实施例1步骤A中的2-氨基吡啶用2-氨基-5-甲基吡啶替代。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.79(s，2H)，4.16-4.11(m，1H)，3.57-3.51(m，1H)，2.96-2.79(m，2H)，2.27(q，J＝7.6Hz，2H)，2.03-1.91(m，2H)，1.56-1.47(m，1H)，1.09-1.03(m，6H)。MS(EI，m/z)：441.0[M-H]-。
实施例10：(3-溴-4-羟基-5-甲基苯基)(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(48)的合成
步骤A：在0～5℃下，将溴乙酰溴(9.9g，49.0mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液经过约20分钟滴加到2-甲基苯甲醚(5.0g，40.9mmol)和三氯化铝(6.0g，45.0mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中。加完后，所得混合物在该温度下继续搅拌2.0小时。将反应液分批倒入适量冰水中，用二氯甲烷(60mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(30mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(30mL×2)、水(30mL)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。有机相再通过短硅胶柱过滤。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:100～1:30洗脱)，得2-溴-1-(3-甲基-4-甲氧基苯基)乙酮(44)(3.0g)。收率为30.2％。
步骤B、C、D和E的实验操作按照实施例1步骤B、C、D和E的制备方法，得到(3-溴-4-羟基-5-甲基苯基)(2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(48)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.57(s，1H)，7.28(s，1H)，3.89-3.87(m，2H)，2.76-2.73(m，2H)，2.29(q，J＝7.6Hz，2H)，1.96(s，3H)，1.87-1.80(m，4H)，1.05(q，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：363.1[M+H]+。
实施例11：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)甲酮(58)的合成
步骤A、B和C的实验操作按照实施例7中的步骤A、B和C的制备方法，其中实施例1步骤A中的环己酮用四氢吡喃酮替代。
步骤D：在冰水浴下，将化合物51(2.5g，11.1mmol)的THF(10mL)溶液滴加到含有氢化铝锂(846mg，22.3mmol)和THF(15mL)的混合物中。加完后，所得混合物在该温度下继续搅拌1小时。向反应液中依次滴入水(1mL)，10％氢氧化钠溶液(2mL)和水(3mL)。过滤，滤饼用THF(15mL)淋洗，滤液用无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)甲醇(53)(2.1g)。收率为100％。
步骤E：将含有化合物53(2.0g，11.0mmol)、二氧化锰(4.78g，55.0mmol)和氯仿(15mL)的混合物在45℃搅拌过夜。过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:6洗脱)，得(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)甲醛(54)(928mg)。收率为46.8％。
步骤F：在-70℃下，将1.0M 4-甲氧基苯基溴化镁THF溶液(5.5mL)滴加到化合物54(900mg，4.99mmol)的THF(15mL)溶液中，加完后，所得混合物在该温度下继续搅拌20分钟。将反应液缓慢滴加到冰水(20mL)中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～1:1洗脱)，得(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)(4-甲氧基苯基)甲醇(55)(1.4g)。收率为97.3％。
步骤G：将含有化合物55(1.38g，4.79mmol)、2-碘酰基苯甲酸(1.74g，55.0mmol)和DMSO(15mL)的混合物在室温下搅拌1.5小时。加入水(45mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(20mL×2)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(56)(1.32g)。收率为96.3％。
步骤H实验操作按照实施例3中的步骤F的制备方法，得(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(57)。
步骤I实验操作按照实施例1中的步骤E的制备方法，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-2,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)甲酮(58)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.84(s，2H)，4.26(q，J＝7.2Hz，2H)，4.22(s，2H)，3.86(t，J＝6.4Hz，2H)，2.71(t，J＝6.4Hz，2H)，1.35(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：431.0[M+H]+。
实施例12：(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-6-氟-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(62)的合成
步骤A：将2-氨基-5-氟吡啶(750mg，6.69mmol)和化合物6(1.65g，8.00mmol)溶解于THF(15mL)，然后在冰水浴下依次加入碘苯二乙酸(2.59g，8.05mmol)和三氟化硼乙醚(192mg，1.35mmol)。加完后，在室温下搅拌过夜。加入水(30mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7～8，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚:二氯甲烷＝1:30:1～1:6:1洗脱)，得(6-氟-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(59)(390mg)。收率为19.5％。
步骤B、C和D的实验操作按照实施例1中的步骤C、D和E的制备方法，得(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-6-氟-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(62)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.80(s，2H)，4.98-4.96(m，1H)，4.56-4.51(m，1H)，4.42-4.37(m，1H)，3.01(t，J＝6.4Hz，2H)，2.33-2.21(m，4H)，1.06(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：433.0[M+H]+。
实施例13：3-溴-5-((2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)羟基甲基)-2-羟基苯甲腈(63)的合成
将硼氢化钠(90mg,2.4mmol)加入到化合物17(90mg,0.24mmol)的无水四氢呋喃(7mL)溶液中，室温搅拌1小时，加水(10mL)，用2M柠檬酸水溶液调节pH值至5～6。用乙酸乙酯(15mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:2～5:1洗脱)，得3-溴-5-((2-乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)羟基甲基)-2-羟基苯甲腈(63)(8m g)。收率为8.89％。MS(EI，m/z)：376.10[M+H]+。
实施例14:化合物对HEK293转染细胞株中hURAT1转运尿酸的抑制试验
一、试剂名称及来源:
Zurampic购自成都一超医药科技有限公司；质粒pCMV6-hURAT1购自OrigeneTechnologies,Inc；G418购自生工生物工程股份有限公司；HEK293细胞株购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；多聚赖氨酸购自Sigma-Aldrich Co.LLC；14C-尿酸购自美国American Radiolabeled Chemicals,Inc；葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、葡萄糖酸钙、KH2PO4、MgSO4、葡萄糖和HEPES购自国药集团化学试剂有限公司；DMEM培养基、胎牛血清购自Thermo Fisher Scientific Inc；
二、试验方法和结果:
1.构建高表达hURAT1的HEK293稳转细胞株：采用质粒pCMV6-hURAT1转染进入HEK293细胞内，再经过G418(终浓度500μg/mL)抗性筛选获得稳转细胞株，其高表达hURAT1转运膜蛋白，可用于体外hURAT1转运尿酸的抑制试验(Weaver YM,Ehresman DJ,ButenhoffJL,et al.Roles of rat renal organic anion transporters in transportingperfluorinated carboxylates with different chain lengths.ToxicologicalSciences,2009,113(2):305-314)。
2.包被24孔板：按200μl/孔加入0.1mg/mL多聚赖氨酸，放置过夜。移去多聚赖氨酸，用无菌水清洗并彻底晾干，待用。
3.将HEK293-hURAT1稳转细胞按2×105个/孔接入包被过的24孔板中，在37℃、5％CO2的条件下培养3天。
4.HBSS的配制：按125mM葡萄糖酸钠、4.8mM葡萄糖酸钾、1.3mM葡萄糖酸钙、1.2mMKH2PO4、1.2mM MgSO4、5.6mM葡萄糖、25mM HEPES的终浓度称取各试剂，再加入去离子水定容至相应体积，并充分混合均匀，即得pH 7.4的HBSS溶液，置冰箱中-20℃保存。
5.实验当天，从冰箱中取出HBSS，水浴加热至37℃。再取出24孔细胞培养板，用HBSS清洗2遍细胞并吸净，再按160μl/孔加入HBSS，并按20μl/孔加入终浓度为500nM试验化合物，做为试验化合物孔；按180μl/孔加入HBSS但不加试验化合物，做为空白对照孔。放置室温下10min。
6.按20μl/孔加入终浓度为50μM的14C尿酸，放置室温下20min。
7.吸净每孔溶液，用预冷的HBSS清洗细胞并吸净。最后加入0.2M NaOH溶解细胞，收集细胞碎片并加入适量闪烁液，然后置PerkinElmer MicroBeta Trilux 1450液体闪烁分析仪上检测同位素14C尿酸的放射强度(CPM值)。
8.在HEK293转染细胞株中，化合物对hURAT1转运尿酸的抑制率计算公式如下所示，试验化合物的CPM值以CPM(试验化合物)表示；空白对照的CPM值以CPM(空白对照)表示。试验化合物均设三次重复，试验结果取平均值，并计算标准偏差SD。试验结果见表1。
三、试验结果
试验化合物与Zurampic相比较，在浓度为500nM下，本发明的化合物(特别是化合物5、10、17、23、25、41、42、43和48)对HEK293转染细胞中hURAT1转运尿酸具有十分良好的抑制作用。
表1.试验化合物和Zurampic对HEK293转染细胞株中hURAT1转运尿酸的抑制率

Claims (10)

1.一种式(I)结构所示的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
A为含有或不含有杂原子O、N或S的非芳香性六元环；
B环为含有两个N原子的五元芳环或呋喃环；
Z、E或X分别独立地为C或N原子；
G为N或O原子；且当G为O原子时，Z、E和X均为C原子；当G为N原子，Z、E和X中只有一个为N原子；
Y为羰基、硫、砜基、亚砜基、任意取代的亚甲基或亚氨基；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1～5烷基、C1～5取代烷基、C1～3取代氨基、C1～3烷氧基、C1～3取代烷氧基或C1-5烷硫基中的一种或几种；
R2为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1～4烷基、C1～3取代烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、C1～3取代氨基、C1～5烷氧基、C1～5取代烷氧基或C1-5烷硫基中的一种或几种；
R3为C1-4烷基、C1-4取代烷基或C3-4环烷基；
m为0～3的整数；
n为1～3的整数；
基团Y中的取代基选自羟基、氰基、硝基、氨基、羧基或C1-3烷氧基，基团R1、R2或R3中的取代基选自羟基、卤素、硝基、氨基或氰基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A环为环已烯环或者至少含一个O或/和N原子的非芳香性六元环。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A环为环己烯环、3,4-二氢-2H-吡喃环、四氢吡喃环、2,3,4,5-四氢吡啶环、5,6-二氢-2H-1,3-噁嗪环或1,2,5,6-四氢嘧啶环。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自选自氢、氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基中的一种或几种；m为0、1或2。
5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自选自氢、氘、卤素、氰基、乙烯基、乙炔基、C1-2烷基、取代的C1-2烷基、C1-2烷氧基、取代的C1-2烷氧基、C1-2烷硫基、取代的C1-2烷硫基中的一种或几种；其取代基选自氘、卤素、C1-2烷基、C3-4环烷基或C1-3烷氧基；n为0、1或2。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基或环丁基。
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
8.一种药物组合物，其以权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
9.权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备促尿酸排泄药物方面的应用。
10.权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防高尿酸血症、肾病或痛风药物方面的应用。
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