CN106065010B - 用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物，其为式(I)或式(II)所述的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的化合物或其药学上可接受的盐可应用于促尿酸排泄以治疗或预防高尿酸血症或痛风。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物及其组合物和应用。
背景技术
痛风是由于机体长期嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少，造成尿酸盐结晶在机体组织内沉积而引起的代谢性疾病，其最重要的生化基础是高尿酸血症。痛风患者易患急性尿酸结晶关节炎、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石等高尿酸血症相关疾病。目前我国痛风发病率逐年增加，到2008年我国痛风患病率在一般人群中达1.1％(Robert G,Beth Noe.Intra-Osseous Gout in a Diabetic Patient[J].The Journal ofFoot and Ankle Surgery,2009,48(1):70-73)。发达国家发病率较高，其中美国大约有3-5百万人罹患痛风，且男性的发作率通常是女性的6-9倍。(Terkeltaub,R.A.Gout[J].TheNew England Journal of Medicine.2003,349:1647-1655)
引发高尿酸血症的一个十分重要的原因是尿酸排泄减少。尿酸的排泄过程较为复杂，须经过肾小球滤过、肾近曲小管重吸收、分泌及分泌后再吸收四个过程。肾近曲小管重吸收增加或分泌障碍将引起尿酸潴留，导致血尿酸升高。因此，肾近曲小管对机体内血尿酸浓度的平衡调节起着非常重要的作用。肾近曲小管细胞的刷状缘侧膜和基底外侧膜上存在着多种尿酸转运相关蛋白，人尿酸阴离子转运蛋白1(human urate anion transporter 1,hURAT1)在肾近曲小管细胞刷状缘上表达，为有机阴离子转运蛋白家族(OATs)成员。hURAT1负责尿酸的重吸收，通过有机阴离子交换，将尿酸盐特异性的由肾管腔转运入细胞，从而起到了调控血尿酸浓度的作用。因此，hURAT1是痛风与高尿酸血症药物治疗的重要靶点。
hURAT1基因首先是由Enomoto从人肾脏克隆出来的，由SLC22A12基因编码，位于染色体11q13，其cDNA全长2642bp，编码区长1659bp，编码含有555个氨基酸的蛋白质。SLC22A12基因存在多种突变，易引起尿酸代谢异常，一项Meta分析表明SLC22A12基因对血尿酸水平有0.13％的变量贡献。(So A,Thorens B.Uric acid transport and disease[J].J.Clin.Invest.,2010,120(6):1791-1799)另据研究表明，SLC22A12基因单核苷酸的多态性rs893006位点GG、GT基因型与男性患者高血尿酸水平密切相关，提示该序列的多态性可能是高尿酸血症的基因风险因素。(王瑛.男性高尿酸血症与URAT1基因多态性的关系[J].检验医学,2012,27(1):30-33)
Makoto Hosoyamada等发现了hURAT1的鼠源同系物小鼠肾脏特异性转运蛋白(Mouse Renal-specific transporter，RST)，该蛋白固定在小鼠肾小管上皮细胞刷状缘侧，其cDNA和氨基酸水平上均与hURAT1有较高的同源性(Hosoyamada M，Ichida K，EnomotoA，et al.Function and Localizationof Urate Transporter 1in Mouse Kidney[J].Am.Soc.Nephrol.2004,15(2):261-8.)。RST的发现，为以URAT1为靶点的高尿酸血症治疗药物的研究，提供了取材方便的体内外实验模型来源。
在痛风与高尿酸血症的治疗中，促尿酸排泄药占有十分重要的地位。此类药物作用机理为抑制尿酸在近曲小管的重吸收，增加尿酸的排泄而降低血尿酸浓度，促进尿酸盐溶解。主要包括苯溴马隆(Benzbromarone)、丙磺舒(Probenecid)、磺吡酮(Sulfinpyrazone)等。
苯溴马隆为一种苯并呋喃衍生物，化学名称为3,5-二溴-4-羟苯基-2-乙基-3-苯并呋喃基-甲酮，可用于治疗痛风。
苯溴马隆是以URAT1为靶点治疗高尿酸血症的典型促尿酸排泄药物，它不仅能抑制URAT1对于尿酸盐的转运，还能够降低URAT1的基因表达。据国家药品不良反应监测数据库分析显示，苯溴马隆的严重不良反应中肝损害问题比较突出，肝功能异常及谷草转氨酶、谷丙转氨酶及碱性磷酸酶升高。研究发现，苯溴马隆经肝脏CYP2C9氧化代谢成6-羟基苯溴马隆，再进一步被P450s酶系代谢成两种邻苯二醌类产物。此类物质化学性质活泼，可通过与蛋白质的半胱氨酸残基上的巯基共轭加成，使蛋白质变性失活，这是导致其肝毒性的直接原因(Matthew G.McDonald,Allan E.Rettie.Sequential Metabolism andBioactivation of the Hepatotoxin Benzbromarone:Formation of GlutathioneAdducts from a Catechol Intermediate[J].Chemical Research in Toxicology.2007,20(12):1833-1842)。苯溴马隆目前已发现的多种不良反应还包括：腹泻、胃部不适、恶心等消化系统症状；斑疹、潮红、瘙痒等皮肤过敏症。偶然会呈现肠胃不适感，极少呈现荨麻疹(风疹)。在个别环境下还会呈现眼结膜发炎(结膜炎)，短时候的阳痿，反常性的部分皮肤湿疹(皮疹)，头疼和尿意频增感。据报道，服用苯溴马隆也有瘙痒感，颜面发红，红斑，光过敏症，浮肿，心窝部不适感等不良反应的产生。苯溴马隆因其毒副作用，尤其是肝脏毒性已被欧洲一些国家限制使用，但国内由于其突出的疗效，仍作为主要的促尿酸排泄药物用于临床。
发明内容
本发明的目的是提供新的能抑制URAT1转运尿酸的(4-羟基-3-腈基苯基)-3-苯并呋喃基-甲酮或(4-羟基-3-三氟甲基苯基)-3-苯并呋喃基-甲酮类衍生物，它们是以URAT1为靶点的用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的新型高效促尿酸排泄药物。通过对(4-羟基-3-腈基苯基)-3-苯并呋喃基-甲酮或(4-羟基-3-三氟甲基苯基)-3-苯并呋喃基-甲酮类化合物进行合理的结构修饰，改变其理化性质，影响该类化合物在哺乳动物(包括人)体内的代谢途径，在保持或增强其促尿酸排泄活性的同时，降低它们的毒副作用，提高其在高尿酸血症或痛风等相关疾病的临床治疗或预防方面的应用安全性。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
本发明提供了式(I)或式(II)所述的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
R1选自氢、氘、卤素、羟基、腈基、取代或非取代的C1-4烷基、取代或非取代的C1-4烷氧基中的一种，其取代基选自氟、羟基、C1-4烷氧基或氨基中的一种或几种；
R2选自氢、氘、卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、腈基中的一种；
R3选自C1-4烷基；
n或m分别独立地为1或2；
R4选自氢、氘、卤素、羟基、腈基、取代或非取代的C1-4烷基、取代或非取代的C1-4烷氧基中的一种，其取代基选自氟、羟基、C1-4烷氧基或氨基中的一种或几种；
R5选自氢、氘、卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、腈基中的一种；
R6选自C1-4烷基；
x或y分别独立地为1或2。
在一种优选方案中，R1选自氢、氘、卤素、羟基、腈基、C1-3烷基、取代的C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟代C1-3烷氧基中的一种，其取代基选自氟、羟基、C1-3烷氧基或氨基中的一种或几种。
在另一种优选方案中，R1选自氢、氘、氟、氯、羟基、腈基、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、羟甲基、羟乙基、氨基甲基、氨基乙基、甲氧基、乙氧基、氟代甲氧基、氟代乙氧基中的一种。
在一种方案中，当R1为一个或两个基团时，R1优选在苯并呋喃的5位或/和6位。
在一种优选方案中，R2选自氢、氘、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基、腈基中的一种。
在一种优选方案中，R3选自C1-3烷基，更优选为乙基。
在一种优选方案中，n或m分别独立地为1或2，更优选的，n或m分别为1。
在一种优选方案中，R4选自氢、氘、卤素、羟基、腈基、C1-3烷基、取代的C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟代C1-3烷氧基中的一种，其取代基选自氟、羟基、C1-3烷氧基或氨基中的一种或几种。
在另一种优选方案中，R4选自氢、氘、氟、氯、羟基、腈基、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、羟甲基、羟乙基、氨基甲基、氨基乙基、甲氧基、乙氧基、氟代甲氧基、氟代乙氧基中的一种。
在一种优选方案中，R5选自氢、氘、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基中的一种。
在一种优选方案中，R6选自C1-3烷基，更优选为乙基。
在一种优选方案中，x或y分别独立地为1或2，更优选的，x或y分别为1。
一些具体的式(I)或式(II)化合物，例如：
本发明的式(I)化合物可通过如下方法制得：
取代水杨醛跟氯丙酮在一定条件下反应生成取代的苯并呋喃，然后跟取代的苯甲酰氯反应，所得化合物再依次脱去甲基，碘化和腈化反应得到目标化合物。
苯并呋喃2位其它烷基取代基类似化合物可通过其它方法制备。具体的制备方法参见实施例。
本发明的式(II)化合物可通过如下方法制得：
通过化合物E的合成方法可制备化合物G，按上述方法得到目标化合物。
除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：
“烷基”用于表示饱和烃基，C1-4烷基是指含有1～4个碳原子的饱和烃基，其包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和新丁基。本发明中的烷基优选为C1-4烷基，进一步优选C1-3烷基。取代烷基是指具有一个或大于一个取代基的烷基，当取代基的数目为2个以上(包含2个)时，各取代基可以相同，也可以不同。取代的C1-4烷基是指具有一个或多个(2个或2个以上)取代基的含有1～4个碳原子的饱和烃基；例如“氟代甲基”是指具有一个、两个或三个氟取代基的甲基，“氟代乙基”是指具有1～5个氟取代基的乙基。
“卤代C1-4烷基”是指具有一个或多个(即2个或2个以上)卤素取代基的含有1～4个碳原子的饱和烃基，其中各卤素取代基可以相同，也可以不同。“氟代C1-3烷氧基”是指具有一个或多个(即2个或2个以上)氟取代基的含有1～3个碳原子的饱和烃基。本发明中的卤代C1-4烷基包括但不限于卤代甲基、卤代乙基、卤代正丙基、卤代异丙基、卤代正丁基、卤代异丁基、卤代新丁基等，更具体的基团包括但不限于三氟甲基、二氟甲基、一氟甲基、三氯甲基、二氯甲基、一氯甲基、四氟乙基、三氟乙基、二氟乙基、一氟乙基、三氯乙基、三氯乙基、二氯乙基、一氯乙基等。
“卤素”包括氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。
“烷氧基”是指“-O-烷基”基团，其碳原子数一般为1～10个。C1-4烷氧基是指该烷氧基中含有1～4个碳原子。本发明中的烷氧基优选为C1-4烷氧基，进一步优选C1-3烷氧基。取代烷氧基是指具有一个或大于一个取代基的烷氧基，当取代基的数目为2个以上(包含2个)时，各取代基可以相同，也可以不同。取代的C1-4烷氧基是指具有一个或多个(即2个或2个以上)取代基的含有1～4个碳原子的烷氧基。本发明中的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和新丁氧基等。
“羟基”是指“-OH”基团。
“腈基”是指“-CN”基团。
“氨基”是指“-NH2”基团。
“氘”是指“-D”基团。
“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：
(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸例如(但不限于)盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等，优选盐酸或(L)苹果酸
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
本发明的式(I)或式(II)化合物或其药学上可接受的盐可应用于制备促尿酸排泄药物方面，特别是应用于治疗或预防高尿酸血症或痛风药物的制备。
本发明还包括一种药物组合物，其以本发明所指出的化合物为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的辅料。该药物组合物中的其他活性成分可以为具有促尿酸排泄的药物化合物，也可以为具有其他治疗效果的药物化合物。本药物组合物可以依据现有方法制成多种制剂，例如口服制剂、液体制剂等，更具体的制剂包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸剂、膜剂等。
本发明通过对(4-羟基-3-腈基苯基)-3-苯并呋喃基-甲酮或(4-羟基-3-三氟甲基苯基)-3-苯并呋喃基-甲酮类衍生物进行合理的结构修饰，改变其理化性质，影响该类化合物在哺乳动物(包括人)体内的代谢途径，在保持或增强其促尿酸排泄活性的同时，降低它们的毒副作用，提高其在高尿酸血症或痛风等相关疾病的临床治疗或预防方面的应用安全性。
具体实施方式
给出下列制备实施例和生物学实施例，使本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。它们不应被解释为限制本发明的范围，仅仅是其例证和代表。
制备实施例
实施例1：5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-碘苯甲腈(5)和5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基间苯二甲腈(6)的合成
步骤A：在室温下向氢氧化钾(6.13g，109mmol)的乙醇(80mL)溶液中加入水杨醛(12.2g，100mmol)，升温到回流并继续搅拌2小时。然后在该温度下滴加氯丙酮(10.0g，108mmol)，滴加完毕，保温继续搅拌2小时。冷却到室温，过滤除去不溶物，收集滤液。减压蒸除溶剂，然后向剩余物中加入乙二醇(40mL)和85％水合肼(6.7g，178mmol)，回流搅拌10分钟。冷却到80～100℃，分批加入氢氧化钾(13.0g，232mmol)，有大量气体产生，然后缓慢升温到回流，直到没有气体放出为止。冷却到室温，加入水(400mL)，用甲基叔丁基醚(120mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，石油醚洗脱)，得2-乙基苯并呋喃(1)(13.0g)。收率为78.7％。
步骤B：在冰水浴下将4-甲氧基苯甲酰氯(2.3g，13.5mmol)加入到化合物1(2.0g，13.6mmol)的氯仿(50mL)溶液中，然后向该混合物中滴加四氯化锡(3.56g，13.6mmol)，滴加完毕，自然升温到室温搅拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用二氯甲烷(40mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:15洗脱)，得(2-乙基苯并呋喃-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(2)(3.0g)。收率为78.7％。
步骤C：在冰水浴下将乙硫醇(8mL)滴加到氢化钠(640mg，16.0mmol)的无水THF(15mL)悬浊液中，搅拌5分钟，有大量固体析出。减压蒸除溶剂，然后向剩余物中加入DMF(20mL)，得反应液A。再将化合物2(3.0g，10.7mmol)的DMF(20mL)溶液滴加到反应液A中，然后在110℃搅拌3小时。冷却到室温，加入水(120mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:50～1:6洗脱)，得(2-乙基苯并呋喃-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(3)(2.2g)。收率为77.2％。
步骤D：将化合物3(1.0g，3.76mmol)溶解于甲醇(30mL)，加入硝酸银(1.4g，8.28mmol)和碘(2.1g，8.27mmol)，所得混合物在室温下搅拌3小时。减压蒸除溶剂，向产物中加入乙酸乙酯(60mL)，过滤除去不溶物，用水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:10洗脱)，得(2-乙基苯并呋喃-3-基)(4-羟基-3,5-二碘苯基)甲酮(4)(900mg)。收率为46.2％。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.12(s，2H)，7.66(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45-7.43(m，1H)，7.38-7.34(m，1H)，7.31-7.27(m，1H)，2.79(q，J＝7.6Hz，2H)，1.26(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：517.0[M-H]-。
步骤E：将含有化合物4(700mg，1.35mmol)、氰化亚铜(360mg，4.02mmol)和DMF(5mL)的混合物在100℃搅拌5小时。冷却到室温，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:1～30:1洗脱)，得5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-碘苯甲腈(5)和5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基间苯二甲腈(6)。
化合物5:1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.21(s，1H)，7.74(d，J＝2.4Hz，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.43-7.41(m，1H)，7.35-7.25(m，2H)，2.81(q，J＝7.6Hz，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：416.1[M-H]-。
化合物6:1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.86(s，2H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.42-7.39(m，1H)，7.35-7.25(m，2H)，2.83(q，J＝7.6Hz，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：315.2[M-H]-。
实施例2：5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(7)
将化合物5(80mg，0.192mmol)溶解在乙酸乙酯(15mL)中，加入5％钯碳(20mg)，所得混合物在常温常压下氢化搅拌反应过夜。过滤除去钯碳，减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～1:5洗脱)，得5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(7)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.16(s，1H)，8.06(d，J＝2.0Hz，1H)，7.94(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40-7.34(m，2H)，7.30-7.26(m，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，2.81(q，J＝7.6Hz，2H)，1.26(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：290.2[M-H]-。
实施例3：3-溴-5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(8)的合成
将化合物7(170mg，0.584mmol)溶解于DMF(5mL)，加入NBS(135mg，0.758mmol)，所得混合物在室温下搅拌过夜。加入水(25mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:1洗脱)，得3-溴-5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(8)。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.13(d，J＝1.8Hz，1H)，7.86(d，J＝1.8Hz，1H)，7.52(d，J＝7.8Hz，1H)，7.41(d，J＝7.8Hz，1H)，7.34-7.22(m，2H)，2.88(q，J＝7.5Hz，2H)，1.33(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：368.0[M-H]-。
实施例4：(2-乙基苯并呋喃-3-基)[4-羟基-3-碘-5-(三氟甲基)苯基]甲酮(11)和5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-(三氟甲基)苯甲腈(12)的合成
步骤A：将化合物4(848mg，1.64mmol)溶解于醋酸酐(3mL)，加入DMAP(20mg，0.164mmol)和吡啶(3mL)，所得混合物在室温下搅拌2小时。向反应液中加入水(50mL)，用二氯甲烷(25mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:5洗脱)，得乙酸[4-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2,6-二碘]苯酯(9)(930mg)。收率为100％。
步骤B：将化合物9(780mg，1.39mmol)溶解于DMF(15mL)，加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(1.95mL)和碘化亚铜(663mg，3.48mmol)，所得混合物在90℃及氮气下搅拌1小时。冷却到室温，加入水(60mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，石油醚洗脱)，得乙酸[4-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-碘-6-(三氟甲基)]苯酯(10)(150mg)。收率为23.5％。
步骤C：将化合物10(140mg，0.279mmol)溶解于甲醇(5mL)，加入碳酸钾(115mg，0.833mmol)，所得混合物在室温下搅拌2小时。加入水(25mL)，用石油醚(10mL)洗涤，收集水相。水相用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物用石油醚重结晶，得(2-乙基苯并呋喃-3-基)[4-羟基-3-碘-5-(三氟甲基)苯基]甲酮(11)(120mg)。收率为93.5％。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.36(s，1H)，7.93(s，1H)，7.68-7.65(m，1H)，7.44-7.42(m，1H)，7.38-7.33(m，1H)，7.31-7.26(m，1H)，2.80(q，J＝7.5Hz，2H)，1.27(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：459.0[M-H]-。
步骤D：将含有化合物11(110mg，0.239mmol)、氰化亚铜(32mg，0.357mmol)和DMF(5mL)的混合物在100℃搅拌过夜。冷却到室温，加入水(25mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:5～1:1洗脱)，得5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-(三氟甲基)苯甲腈(12)。
1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ7.95(s，1H)，7.82-7.81(m，1H)，7.62-7.61(m，1H)，7.42-7.40(m，1H)，7.33-7.30(m，1H)，7.27-7.24(m，1H)，2.81(q，J＝7.5Hz，2H)，1.26(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：360.2[M+H]+。
实施例5：5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-甲基苯甲腈(16)的合成
步骤A和B的实验操作分别参见实施例1步骤B和C，其中实施例1步骤B中的氯仿用二氯甲烷替代。
化合物13 1H NMR(DMSO-d6，，300MHz)δ7.68-7.62(m，3H)，7.41(d，J＝7.5Hz，1H)，7.36-7.31(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，7.08(d，J＝9.0Hz，1H)，3.91(s，3H)，2.81(q，J＝7.5Hz，2H)，2.21(s，3H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：317.1[M+Na]+。
步骤C：将化合物14(650mg，2.44mmol)溶解于DMF(15mL)，加入NIS(678mg，3.01mmol)，所得混合物在室温下搅拌30分钟。加入水(75mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30洗脱)，得(2-乙基苯并呋喃-3-基)(4-羟基-3-碘-5-甲基苯基)甲酮(15)(420mg)。收率为42.4％。
1H NMR(DMSO-d6，，500MHz)δ10.03(s，1H)，7.96(s，1H)，7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.36-7.33(m，1H)，7.28-7.25(m，1H)，2.78(q，J＝7.5Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：405.0[M-H]-。
步骤D：将含有化合物15(360mg，0.886mmol)、氰化亚铜(119mg，1.329mmol)和DMF(10mL)的混合物在110℃搅拌3小时。冷却到室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，二氯甲烷:石油醚＝1:1洗脱)，得5-(2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-甲基苯甲腈(16)。
1H NMR(DMSO-d6，，300MHz)δ11.24(s，1H)，7.88-7.86(m，2H)，7.65(d，J＝7.8Hz，1H)，7.42-7.25(m，3H)，2.80(q，J＝7.5Hz，2H)，2.29(s，3H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：304.1[M-H]-。
实施例6：5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-甲基苯甲腈(21)的合成
步骤A：在室温下将氢氧化钾(1.22g，21.74mmol)加入5-氟水杨醛(2.5g，17.84mmol)的乙醇(50mL)溶液，然后升温到回流，再在回流下滴加氯丙酮(1.82g，19.67mmol)，所得混合物在回流下搅拌过夜。冷却到室温，过滤除去不溶物，收集滤液。减压蒸除溶剂，然后向剩余物中加入乙二醇(20mL)和85％水合肼(1.22g，32.36mmol)，回流搅拌20分钟。冷却到室温，加入氢氧化钾(2.23g，39.74mmol)，有大量气体产生，然后缓慢升温到回流，直到没有气体放出为止。冷却到室温，加入水(200mL)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，二氯甲烷:石油醚＝1:5洗脱)，得2-乙基-5-氟苯并呋喃(17)(1.84g)。收率为62.8％。
步骤B：将3-甲基-4-甲氧基-苯甲酸(500mg，3.0mmol)悬浮在氯化亚砜(10mL)中，加入DMF(2滴)，所得混合物在回流下搅拌2小时。减压蒸除溶剂，加入化合物17(500mg，3.05mmol)和无水二氯甲烷(15mL)，再在水浴下滴加四氯化锡(1.59g，6.10mmol)，加完后，室温下搅拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙酯(25mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:40～1:20洗脱)，得(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(4-甲氧基-3-甲基苯基)甲酮(18)(909mg)。收率为97.0％。
步骤C：在水浴下将4M三溴化硼(0.83mL)滴加到化合物18(690mg，2.21mmol)的无水二氯甲烷(15mL)溶液中，所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(4-羟基-3-甲基苯基)甲酮(19)(730mg)粗品。该化合物不经纯化直接用于下一步反应。
步骤D：将化合物19粗品(730mg)溶解于DMF(10mL)，然后分批加入NIS(645mg，2.87mmol)，加完后，所得混合物在室温下搅拌30分钟。加入水(50mL)，用乙酸乙酯(25mL×3)萃取，合并的有机相依次用硫代硫酸钠水溶液(10mL)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20洗脱)，得(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(4-羟基-3-碘-5-甲基苯基)甲酮(20)(640mg)。步骤C和D两步反应总收率为68.3％。
1H NMR(DMSO-d6，，500MHz)δ10.06(s，1H)，7.96(s，1H)，7.70-7.67(m，1H)，7.59(s，1H)，7.22-7.16(m，2H)，2.76(q，J＝7.5Hz，2H)，2.29(s，3H)，1.24(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：423.0[M-H]-。
步骤E：将含有化合物20(590mg，1.39mmol)、氰化亚铜(187mg，2.09mmol)和DMF(10mL)的混合物在115℃搅拌2.5小时。冷却到室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～3:5洗脱)，得5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-甲基苯甲腈(21)。
1H NMR(DMSO-d6，，500MHz)δ11.19(s，1H)，7.89(s，1H)，7.85(s，1H)，7.71-7.68(s，1H)，7.22-7.16(m，2H)，2.76(q，J＝7.5Hz，2H)，2.29(s，3H)，1.23(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：322.1[M-H]-。
实施例7：5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-碘苯甲腈(25)的合成
步骤A：在室温下将4-甲氧基苯甲酰氯(680mg，3.99mmol)加入到化合物17(600mg，3.65mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中，然后加入四氯化锡(1.90g，7.29mmol)，所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用二氯甲烷(30mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:20洗脱)，得(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(22)(1.05g)。收率为96.4％。
步骤B：在水浴下将1M三溴化硼(6.7mL)滴加到化合物22(1.0g，3.35mmol)的无水二氯甲烷(15mL)溶液中，所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得灰白色固体(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(4-羟基苯基)甲酮(23)粗品(1.03g)。该化合物不经纯化直接用于下一步反应
步骤C：将化合物23粗品(1.03g)溶解于甲醇(30mL)，加入无水乙酸钠(660mg，8.05mmol)和碘(2.04g，8.20mmol)，所得混合物在回流下搅拌1.5小时。然后加入含有氢氧化钠(280mg，7mmol)的水(40mL)溶液，继续回流0.5小时。冷却到室温，加入饱和食盐水(40mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相依次用稀硫代硫酸钠溶液(15mL)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经石油醚/乙酸乙酯重结晶，得(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(4-羟基-3,5-二碘苯基)甲酮(24)(1.30g)。步骤B和C两步反应总收率为72.4％。
步骤D：将含有化合物24(1.26g，2.35mmol)、氰化亚铜(115mg，2.34mmol)和DMF(20mL)的混合物在100℃搅拌4小时。冷却到室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝2:5～3:1洗脱)，得5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-碘苯甲腈(25)。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.15(s，1H)，7.95(s，1H)，7.64(s，1H)，7.16-7.13(m，2H)，2.79(q，J＝7.8Hz，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：434.0[M-H]-。
实施例8：5-(5-氯2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-甲基苯甲腈(26)的合成
化合物26的制备方法参见实施例6。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.89-7.85(m，2H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H)，7.45(d，J＝2.1Hz，1H)，7.39(dd，J＝2.1，8.7Hz，1H)，2.75(q，J＝7.5Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.23(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：338.1[M-H]-。
实施例9：5-(5-氯-2-乙基苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-碘苯甲腈(27)的合成
化合物27的制备方法参见实施例7。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.15(d，J＝2.4Hz，1H)，7.67-7.64(m，2H)，7.41(d，J＝2.1Hz，1H)，7.34(dd，J＝2.1，8.7Hz，1H)，2.78(q，J＝7.5Hz，2H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：450.0[M-H]-。
实施例10：(2-乙基-苯并呋喃-3-基)-[4-羟基-3,5-二(三氟甲基)-苯基]-甲酮(29)的合成
化合物29的制备方法参见实施例4中的步骤B和C。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.15(s，2H)，7.68-7.65(m，1H)，7.44-7.42(m，1H)，7.38-7.33(m，1H)，7.31-7.26(m，1H)，2.81(q，J＝7.5Hz，2H)，1.26(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：401.1[M-H]-。
实施例11：5-(2-乙基-5-氟-苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-3-三氟甲基-苯甲腈(30)的合成
化合物30的制备方法参见实施例4。MS(EI，m/z)：376.0[M-H]-。
实施例12：3-溴-5-(2-乙基-5-氟-苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-苯甲腈(31)的合成
化合物31的制备方法参见实施例2和实施例3。MS(EI，m/z)：386.1[M-H]-。
实施例13：(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)[4-羟基-3,5-二(三氟甲基)苯基]甲酮(35)和(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)[4-羟基-3-碘-5-(三氟甲基)苯基]甲酮(36)的合成
化合物35和36的制备方法参见实施例4中的步骤A、B和C。
化合物35：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.12(s，2H)，7.73-7.68(m，1H)，7.23-7.18(m，2H)，2.77(q，J＝7.5Hz，2H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：419.1[M-H]-。
化合物36：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.37(s，1H)，7.93(s，1H)，7.73-7.69(m，1H)，7.24-7.19(m，2H)，2.77(q，J＝7.5Hz，2H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：477.0[M-H]-。
实施例14：5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(41)的合成
步骤A：将3-碘-4-羟基苯甲酸甲酯(4.1g，14.75mmol)溶解于DMF(25mL)，加入碳酸钾(2.65g，19.20mmol)和碘甲烷(3.14g，22.12mmol)，所得混合物在60℃搅拌2小时。冷却到室温，加入水(80mL)，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物用石油醚重结晶，得3-碘-4-甲氧基苯甲酸甲酯(37)(3.81g)。收率为88.4％。
步骤B：将化合物37(3.0g，10.27mmol)溶解在THF(10mL)和乙醇(10mL)中，加入2M氢氧化钠溶液(20mL)，所得混合物在55℃搅拌1小时。减压蒸除约一半溶剂，加入水(60mL)，用稀盐酸调pH值至1～2，乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得3-碘-4-甲氧基苯甲酸(38)(2.76g)。收率为96.7％。
步骤C：将化合物38(2.74g，9.85mmol)悬浮在氯化亚砜(10mL)中，加入DMF(3滴)，所得混合物在65℃搅拌5小时。减压蒸除溶剂，加入化合物17(1.62g，9.86mmol)和无水二氯甲烷(54mL)，再在水浴下加入四氯化锡(5.14g，19.73mmol)。加完后，所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:100～1:20洗脱)，得(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)(3-碘-4-甲氧基苯基)甲酮(39)(2.96g)。收率为70.8％。
步骤D：将含有化合物39(2.48g，5.85mmol)、氰化亚铜(785mg，8.77mmol)和DMF(30mL)的混合物在130℃搅拌过夜。冷却到室温，加入乙酸乙酯(40mL)，经过硅藻土过滤除去不溶物。加入水(90mL)，分层，收集有机层。水层用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并的有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:10洗脱)，得5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-甲氧基苯甲腈(40)(1.62g)。收率为85.6％。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.06-8.03(m，2H)，7.45-7.41(m，1H)，7.09-7.05(m，1H)，7.02-6.98(m，2H)，4.05(s，3H)，2.90(q，J＝7.5Hz，2H)，1.34(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：322.1[M-H]-。
步骤E：在水浴下将1M三溴化硼(7.5mL)加入到化合物40(830mg，2.57mmol)的无水二氯甲烷(15mL)溶液中，所得混合物在室温下搅拌72小时。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～1:5洗脱)，得5-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基苯甲腈(41)。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ12.17(s，1H)，8.08(s，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，7.72-7.70(m，1H)，7.23-7.15(m，3H)，2.77(q，J＝7.5Hz，2H)，1.24(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：308.1[M-H]-。
实施例15：[3-氘-4-羟基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)甲酮(43)的合成
步骤A：将化合物34(340mg，0.654mmol)溶解在乙酸乙酯(20mL)中，加入重水(1mL)和5％钯碳(20mg)，所得混合物在氘气下搅拌过夜。过滤除去钯碳，减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30洗脱)，得[2-氘-4-(2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-羰基)-6-(三氟甲基)]乙酸苯酯(42)(90mg)。收率为34.8％。
步骤B：将化合物42(90mg，0.228mmol)溶解于甲醇(5mL)，加入碳酸钾(95mg，0.688mmol)，所得混合物在室温下搅拌0.5小时。加入水(25mL)，用稀盐酸调节pH值至3～4，乙酸乙酯(25mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物用石油醚重结晶，得[3-氘-4-羟基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)甲酮(43)。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ11.68(s，1H)，7.95-7.93(m，2H)，7.71-7.69(m，1H)，7.22-7.15(m，2H)，2.78(q，J＝7.5Hz，2H)，1.24(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：352.0[M-H]-。
实施例16：[3-溴-4-羟基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)甲酮(44)的合成
将溴(41mg，0.257mmol)的醋酸(1mL)溶液滴加到化合物43(60mg，0.170mmol)的醋酸(5mL)溶液中，所得混和物在室温下搅拌2小时。向混和物中滴加稀亚硫酸氢钠水溶液，直到颜色褪去。然后加入适量水，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:5～3:5洗脱)，得[3-溴-4-羟基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基-5-氟苯并呋喃-3-基)甲酮(44)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.10(s，1H)，7.84(s，1H)，7.71-7.66(m，1H)，7.20-7.17(m，2H)，2.76(q，J＝7.5Hz，2H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：429.0[M-H]-。
实施例17：3-氯-5-(2-乙基-5-氟-苯并呋喃-3-羰基)-2-羟基-苯甲腈(45)的合成
化合物45的制备方法参见实施例6中的步骤B、C、D和E。其中实施例6步骤B中的3-甲基-4-甲氧基苯甲酸用3-氯-4-甲氧基苯甲酸替代。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ8.04-8.02(m，2H)，7.71-7.68(m，1H)，7.20-7.19(m，2H)，2.80(q，J＝7.5Hz，2H)，1.24(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：342.0[M-H]-。
生物学实施例
实施例17：实施例化合物对HEK293转染细胞株中hURAT1转运尿酸的抑制试验:
1.包被24孔板：按200μL/孔加入0.1mg/mL多聚赖氨酸(poly-D-Lysin),放置过夜。移去多聚赖氨酸,用无菌水清洗并彻底晾干，待用。
2.将HEK293-hURAT1稳转细胞按2×105个/孔接入包被过的24孔板中，37℃，5％CO2孵箱培养3天。
3.实验当天，用温浴过的HBSS(125mM葡萄糖酸钠、4.8mM葡萄糖酸钾、1.3mM葡萄糖酸钙、1.2mM KH2PO4、1.2mM MgSO4、5.6mM葡萄糖、25mM HEPES，pH 7.4)清洗2遍细胞并吸净，再按160μL/孔加入HBSS，并按20μL/孔加入终浓度为500nM待测化合物，做为试验化合物孔(CPM(试验化合物))；按180μL/孔加入HBSS但不加试验化合物，做为空白对照孔(CPM(空白对照))。放置室温下10min。
4.按20μL/孔加入终浓度为50μM的14C尿酸，放置室温下20min。
5.吸净每孔溶液，用预冷的HBSS清洗细胞并吸净。最后加入0.2M NaOH溶解细胞，收集细胞碎片并加入适量闪烁液，在Perkin Elmer MicroBeta Trilux 1450型液体闪烁分析仪上检测同位素14C的放射强度(CPM值)。
6.通过对14C标记尿酸的测定，按以下公式可计算出试验化合物对hURAT1转运尿酸的抑制效果。试验化合物均设三次重复，试验结果取平均值，并计算标准偏差sd。
7.实施例化合物对HEK293转染细胞株中hURAT1转运尿酸抑制率的试验结果见表1。
表1.试验化合物对HEK293转染细胞株中hURAT1转运尿酸的抑制率
试验结果显示，在500nM浓度下，这些化合物对HEK293转染细胞中hURAT1转运尿酸均有较好的抑制效果，其中，化合物5，11，25，29，44和45的抑制效果优于苯溴马隆。
实施例18：化合物25对人正常肝细胞L-02和WRL-68生长的抑制作用
1.人正常肝细胞L-02(购自武汉普诺赛生物科技有限公司)和WRL-68(由南京大学生命科学研究院惠赠)，均用DMEM培养液(含10％胎牛血清，100U/mL青霉素，0.1mg/mL链霉素)在37℃、5％CO2孵箱培养至细胞汇合度达90％左右。按1×103/孔的细胞数接种于96孔板中，置37℃、5％CO2孵箱培养24h。
2.用DMEM培养液配制不同浓度梯度的试验化合物25和对照药物苯溴马隆，并按100μL/孔加入，作为试验化合物孔和对照药物孔；按100μL/孔加入DMEM培养液，做为阴性对照孔。置37℃、5％CO2孵箱中，L-02细胞和WRL-68细胞各培养96h。
3.将Resazurin(15mg/50mL)、Methylene Blue(25mg/10mL)、Potassiumferricyanide(0.329g/100mL)、Potassium ferrocyanide(0.422g/100mL)溶于PBS(0.1M、pH＝7.4)中，配制成Alamar Blue溶液，待用。
4.细胞用PBS(0.1M、pH＝7.4)清洗2次，按100μL/孔加入Alamar Blue溶液；在无细胞的孔中加入100μL/孔Alamar Blue溶液，做为空白对照孔。将96孔板置37℃、5％CO2孵箱中培养3h。
5.用酶标仪Victor X4(Perkin Elmer)在530/590nm处检测细胞荧光值。每个浓度重复测定3次，得出平均值和标准偏差。按以下公式计算细胞存活率：
6.根据细胞存活率，利用Prism Graph软件计算得出药物对细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果显示，化合物25对正常肝细胞L-02和WRL-68的IC50值分别为153.20μM和145.82μM，苯溴马隆对应肝细胞的IC50值为70.95μM和56.03μM。
上述实验数据表明化合物25对正常肝细胞的毒性显著低于苯溴马隆。部分实施例化合物也具有类似效果。
Claims (10)
1.式(I)或式(II)所述的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
R1选自选自氢、卤素、取代或非取代的C1-4烷基中的一种，其取代基选自氟；
R2选自氢、氘、卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、腈基中的一种；
R3选自C1-4烷基；
n或m分别独立地为1或2；
R4选自选自氢、卤素、取代或非取代的C1-4烷基中的一种，其取代基选自氟；
R5选自氢、氘、卤素、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、腈基中的一种；
R6选自甲基或乙基；
x或y分别独立地为1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自氢、卤素、C1-3烷基或取代的C1-3烷基中的一种，其取代基选自氟。
3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自氢、氟、氯、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基中的一种。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自氢、氘、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟代甲基、氟代乙基、腈基中的一种；R3选自C1-3烷基；n或m分别独立地为1。
5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自氢、卤素、C1-3烷基、取代的C1-3烷基中的一种，其取代基选自氟。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自氢、氘、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟代甲基、氟代乙基中的一种；R6选自C1-3烷基；x或y分别独立地为1。
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
8.权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备促尿酸排泄药物方面的应用。
9.权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防高尿酸血症或痛风药物方面的应用。
10.一种药物组合物，其以权利要求1～8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
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