CN106478619B - 一类黄嘌呤氧化酶抑制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类黄嘌呤氧化酶抑制剂及其应用，其为通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐。该类化合物、其药学上可接受的盐可应用于制备黄嘌呤氧化酶抑制剂药物方面，特别是应用于制备预防或治疗高尿酸症、痛风或糖尿病肾病的药物方面。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一类黄嘌呤氧化酶抑制剂及其在医药方面的用途。
背景技术
痛风(gout)是由高尿酸血症引起。由于人体内嘌呤代谢紊乱，导致尿酸生成过多以及尿酸排泄不畅，血尿酸水平不断升高。随着血尿酸浓度过饱和，尿酸钠盐出现结晶化，并沉积在关节和软组织等部位，引起痛风的炎性疼痛反应。尿酸为人体内核酸(包括食物中的核酸)中嘌呤的代谢终产物，一般认为，当男性血清中尿酸含量超过7mg/dL和女性血清中尿酸含量超过6mg/dL时为高尿酸血症。
痛风是继糖尿病之后的第二大代谢疾病，已被联合国列为21世纪二十大顽症之一。国内外流行病学研究表明，随着人类生活水平的提高、饮食和生活习惯的改变，高尿酸血症及痛风疾病的发病率呈升高趋势。有报道指出，在1990-1999十年间，美国痛风性关节炎发病率从0.29％增至0.52％(Arthur LW.Epidemiology of gout.Cleveland ClinicJournal of Medicine 2008,75(Suppl 5):S9-12)。英国和德国在2000-2005年间痛风的发病率为1.4％(Annemans L,Spaepen E,Gaskin M,et al.Gout in the UK and Germany:prevalence,comorbidities,and management in general practice 2000-2005.Annalsof the Rheumatic Diseases,2008,67(7):960-966)。在2004年报道的调查中，日本的高尿酸血症患者达25.8％(Nagahama K,Iseki K,Inoue T,et al.Hyperuricemia andcardiovascular risk factor clustering in a screened cohort in Okinawa,Japan.Hypertension Research.2004,27:227-233)。2010年中国国内进行的一项针对3978名40-74岁上海城市人口的流行病学研究显示，被调查人口中25％的男性患高尿酸血症(Raquel Villegas,Xiang YB,Cai QY,et al.Prevalence and determinants ofhyperuricemia in middle-aged,urban Chinese men.Metabolic Syndrome and RelatedDisorders,2010,8(3):263-270)。相应地，中国青岛城市中高尿酸血症患者达25.3％。内陆地区发病率低于沿海，不发达地区低于发达地区(Nan HR,Qiao Q,Dong YH,et al.Theprevalence of hyperuricemia in apopulation of the coastal city of Qingdao,China.The Journal of Rheumatology,2006,33(7):1346-1350)。
据文献报道，痛风可能会引发肾炎、结石等，也会导致慢性肾病和心脏病等(SinghJA,Reddy SG,Kundukulam J.Risk factors for gout and prevention:a systematicreview of the literature.Current Opinion in Rheumatology.2011,23:192-202)。痛风可能与高血压、代谢综合征、高脂血症、糖尿病、胰岛素抵抗等多种病症有一定关联(Terkeltaub RA.Gout.the New England Journal of Medicine.2003,349:1647-1655；Schlesinger N,Schumacher HR Jr.Gout:can management be improved？.CurrentOpinion Rheumatology.2001,13(3):240-244)。
黄嘌呤氧化还原酶(Xanthine oxidoreductase)是一种钼黄素蛋白酶，它由1330个氨基酸构成，人与鼠的同源性达91％。它是由催化活性相互独立的两个完全对称的亚基构成，每个亚基分子量为147kDa。黄嘌呤氧化还原酶广泛存在于哺乳动物组织中，特别在肝脏和肠道具有较高水平，能够催化嘌呤、嘧啶、蝶呤、乙醛及许多氮杂环底物的还原反应，以两种可相互转化的形式即黄嘌呤脱氢酶(Xanthine dehydrogenase，XDH)及黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase，XO)存在，这两种形态均能参与嘌呤分解代谢过程，其中黄嘌呤氧化酶催化活性较高。在人类代谢过程中，黄嘌呤氧化酶能够催化嘌呤代谢过程中的最后两步，将次黄嘌呤氧化为黄嘌呤和将黄嘌呤氧化为尿酸，血液中尿酸浓度的持续升高会导致包括痛风在内多种疾病的发生。所以黄嘌呤氧化酶与痛风的发生密切相关，通过抑制黄嘌呤氧化酶，能够阻断人体内嘌呤代谢成尿酸的通路，有效降低血清尿酸水平，达到预防和治疗痛风和高尿酸血症的发生和发展。
目前治疗痛风的药物主要有抗急性痛风性关节炎药，促进尿酸排泄药以及抑制尿酸生成药。
抗急性痛风性关节炎药物如秋水仙碱，非甾体抗炎药(NSAIDS)，促肾上腺皮质激素(ACTH)，糖皮质激素等，主要用于治疗急性痛风性关节炎，可以缓解病人暂时的疼痛。其中秋水仙碱常伴有腹泻、呕吐、腹痛性痉挛等常见的不良反应；非甾体类抗炎药可以短期内缓解疼痛，但是大部分的非甾体类抗炎药都伴有严重的胃肠道反应。促肾上腺皮质激素和糖皮质激素能抑制非感染性炎症，减轻充血水肿，抑制炎症细胞移动，降低自身免疫水平，用于治疗严重的急性痛风并伴有全身症状的患者，但是这类药物有很强烈的反弹作用。
治疗和缓解痛风必须降低体内尿酸的水平。其途径可通过促进尿酸的排泄和减少尿酸的生成。目前促进体内的尿酸的排泄药物主要有：丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴马隆和Zurampic等。该类药通过对肾近曲小管尿酸盐转运体的抑制作用，而阻碍尿酸的重吸收，增加其排泄，从而降低体内的尿酸浓度。丙磺舒由美国Merck公司研制，其主要副作用表现有皮疹、严重的胃肠道刺激和药热等。由法国Snaofi-Synthelabo公司研制的苯溴马隆于1976年上市；由美国Navatris公司研制的苯磺唑酮于1959年上市；由美国Ardrea公司研制的Zurampic于2016年上市。有报道称，苯溴马隆有很大的肝脏毒性，已从大部分欧洲市场撤出(Jansen TL,Reinders MK,van Roon EN,et al.Benzbromarone with drawn from theEuropean market:another case of"absence of evidence is evidence of absence".Clinical Experimental Rheumatology,2004,22(5):651)。
另一类治疗痛风的药物用于抑制尿酸生成。该类药物主要是通过抑制嘌呤代谢过程中所需要的黄嘌呤氧化酶，从根本上减少尿酸的生成。上世纪六十年代上市的别嘌呤醇是次黄嘌呤的类似物，为黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂，主要用于肾功能不全的病人。其不良反应包括发热、过敏性皮疹、腹痛、腹泻、白细胞及血小板减少，甚至有肝功能损害等副作用。研究发现别嘌呤醇的代谢产物奥西嘌呤也具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，但同时也发现别嘌呤醇的毒副作用也是由于其代谢产物如奥西嘌呤所致。
非布索坦(Febuxostat)是新一代黄嘌呤氧化酶抑制剂，临床上用于预防、治疗高尿酸血症和痛风。日本帝人公司(Teijin)于2004年初在日本申请上市，欧盟于2008年5月份批准其上市，美国FDA于2009年2月批准上市。非布索坦能够抑制黄嘌呤氧化酶的两种互换的形式，即XDH和XO。相比之下，别嘌呤醇抑制氧化态黄嘌呤氧化酶的能力很弱。非布索坦主要通过肝脏代谢，而别嘌呤醇的代谢和排泄主要通过肾脏，可以较好地避免别嘌呤醇因肾脏代谢和排泄引起的不良反应(Takano Y,Hase-Aoki K,Horiuchi H,et al.Selectivityof febuxostat,a novel non-purine inhibitor of xanthine oxidase/xanthinedehydrogenase.Life Sciences.2005,76(16):1835-1847；Becker MA,Schumacher HR Jr,Wortman RL.Febuxostat compared with allopurinol in patients withhyperuricemia and gout.the New England Journal of Medicine.2005,353:2450-2461)。非布索坦28周的Ⅲ期临床试验(APEX)报告表明，治疗组与安慰剂组相比，治疗后约有48％-69％的患者血尿酸水平低于6mg/dL。别嘌呤醇敏感的患者能够很好地适应非布索坦。80～120mg/天剂量的非布索坦较之300mg/天的别嘌呤醇能够更有效的降低血尿酸水平(Pohar S,Murphy G.Febuxostat for prevention of gout attacks.Issues inEmerging Healthy Technologies.2006,87:1-4)。尽管非布索坦疗效高，但该药物有十分严重的胃肠道副作用、心血管副作用，也会导致头疼及一定的肝损伤。
目前为止，以黄嘌呤氧化酶作为靶点的黄嘌呤氧化酶抑制剂有苯基吡唑衍生物(WO9818765，JP10310578)、2-苯基噻唑衍生物(WO9631211，JP2002105067)、3-苯基异噻唑衍生物(JP6211815)、C稠合的嘧啶衍生物(WO2005121153)，2-苯基噻吩衍生物(WO2006022375)、2-苯基吡啶衍生物(WO2006022374)、芳基三唑类化合物(Nakazawa T,Miyata K,Omura K,et al.Metabolic profile of FYX-051(4-(5-pyridin-4-yl-1H-[1,2,4]triazol-3-yl)pyridine-2-carbonitrile)in the rat,dog,monkey,and human:identification of N-glucuronides and N-glucosides.Drug Metabolism andDisposition,2006,34(11):1880-1886)、三芳基甲酸衍生物(WO2007043457)等。随着近年来高尿酸血症和痛风发病率的大幅增加，人们日益重视对抗痛风新药的研发。近期也有文献报道，抑制黄嘌呤氧化还原酶的活性还可对缺血/再灌注损伤、尤其是心衰也有一定疗效，表明高效低毒的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有巨大开发潜力和应用价值。目前已有多种高活性化合物进入临床试验，但仍面临毒副作用较大等诸多问题，有待更深入的研究。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一类新的具有式(I)结构的化合物，该化合物对黄嘌呤氧化酶具有强烈的抑制作用，可有效降低尿酸的生成。
本发明的另一目的是提供一种上述具有式(I)结构的化合物在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂方面，特别是在预防或治疗高尿酸症、痛风或糖尿病肾病方面具有的用途。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐
其中：
R1选自C2-5烷基、取代的C2-5烷基或C2-7烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；
R2选自-CN或卤素；
R3选自H、C1-4烷基、取代的C1-4烷基，所述取代基选自-NH2、-OH、-COOH或-CONH2；
Y选自O或S；
Z选自S或Se。
在一种方案中，R1可选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基。
在一种优选方案中，R1可选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-3烯基。
在一种更优选方案中，R1可选自乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、新丁基或被取代基取代的上述基团，或者乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙-1-烯-2-基等。
在一种方案中，R1的取代基可选自氘、卤素或C1-3烷氧基。
在一种更优选方案中，R1的取代基可选自氘、氟、氯、溴、甲氧基、乙氧基等。
在一种方案中，R2选自-CN、Cl、Br或I。
在一种优选方案中，R2选自-CN、Br或I。
在一种优选方案中，R3选自H或C1-3烷基。
在一种更优选方案中，R3选自H、甲基、乙基、丙基或异丙基等。
在一种方案中，当Z为S时，R1选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；R2选自-CN、Br或I；R3选自H或C1-4烷基；Y选自O或S。
在一种优选的方案中，当Z为S时，R1选自C2-4烷基或取代的C2-4烷基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；R2选自-CN、Br或I；R3选自H或C1-4烷基；Y选自O或S。
在一种方案中，当Z为Se时，R1选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；R2选自-CN、Br或I；R3选自H或C1-4烷基；Y选自O或S。
在一种优选的方案中，当Z为Se时，R1选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基，所述取代基选自氘或卤素；R2选自-CN、Br或I；R3选自H或C1-4烷基；Y选自O。
在一种方案中，当R2选自Br或I时，R1选自C2-4烷基，R3选自H，Y选自O，Z选自S或Se。
在一种方案中，本发明可选用通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R1选自C2-5烷基、取代的C2-5烷基或C2-7烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；Y选自O或S；Z选自S或Se。
本发明中的R3选择非氢基团时，式(I)化合物可以作为一类易水解的前药酯。
本发明的化合物，它可进一步优选采用下列化合物：
2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸，
2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-异丁基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯，
2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-[7-氰基-2-(1,2-二氘代丙烷-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸。
本发明化合物可按下述合成方法制备。
制备方法一：
制备方法二：
在合成方法中，R1、R2、R3、Y、Z的定义如上所述。
除非另有说明，下列用在权利要求书和说明书中的术语有如下含义：
“氢”，是指氕(1H)，它是氢元素的主要稳定同位素。
“氘”，是指氢的一种稳定形态同位素，也被称为重氢，其元素符号为D。
“卤素”，是指氟原子，氯原子，溴原子或碘原子。
“烷基”，表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-20”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括20个碳原子)。含1-4个碳原子的烷基称为低级烷基。当低级烷基没有取代基时，称其为未取代的低级烷基。更优选的是，烷基是有2-5个碳原子的中等大小的烷基。本发明中的烷基例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基为有2-4个碳原子的低级烷基，例如乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。
“烷氧基”，表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的环烷基)基团，其进一步表示-O-(未取代的烷基)。代表性实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“烯基”，表示具有C＝C双键的不饱和的脂烃基，包括直链和支链基团；本发明中的烯基优选采用C2-7烯基，进一步优选C2-6烯基或C2-4烯基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙-1-烯-2-基等。
“氰基”，表示-CN基团。
“药学上可接受的盐”，是包含通式(I)的化合物与有机酸或无机酸形成的盐，表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：
(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸例如(但不限于)盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
“药用组合物”，指的是在此描述的一种或多种化合物或者它们的药学上可接受的盐和前药与其它的化学成分，例如药学上可接受的载体和赋形剂的混合物。药用组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
在下文中，除非特别地限制，作为治疗剂活性成分的式(I)或式(II)化合物包括它们的所有药学上可接受的盐，它们应当理解为落入本发明的范围内。在本说明书中，仅仅为了方便，将它们简称为“式(I)或式(II)的化合物”。
根据本发明的上述的式(I)或式(II)化合物在下面的实施例中已证实，它们对与通风有关的黄嘌呤氧化酶表现出强烈的抑制作用。因此，它们可以用于预防和治疗与黄嘌呤氧化酶相关的疾病，例如，高尿酸血症、心力衰竭、心血管疾病、高血压、糖尿病、肾疾病、炎症、关节病等。
本发明包括一种药物组合物，其包含本发明中任一所述化合物、其药学上可接受的盐或其易水解的前药酯作为活性成分。
本发明的化合物、其药学上可接受的盐或其易水解的前药酯可应用于制备黄嘌呤氧化酶抑制剂药物方面。
本发明的化合物、其药学上可接受的盐或其易水解的前药酯可应用于制备预防或治疗高尿酸症、痛风、糖尿病肾病、炎性疾病、神经性系统疾病的药物方面。
附图说明
图1为受试物给药1天对大鼠氧嗪酸钾模型血清尿酸水平的影响(n＝10，)图。
图中，#P<0.05，与正常组比较；*P<0.05，**P<0.01，与同时间点模型组比较；▲▲P<0.01，供试品组与同时间点非布索坦组比较。
图2为受试物给药7天对大鼠氧嗪酸钾模型血清尿酸水平的影响(n＝10，)图。
图中，##P<0.01，与正常组比较；**P<0.01，与同时间点模型组比较；P>0.05，供试品组与同时间点非布索坦组比较。
具体实施方式
给出下列制备例和实施例，使本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。它们不应被解释为限制本发明的范围，仅仅是其例证和代表。
制备实施例
实施例1：2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(9)的合成
步骤A：将对羟基苯甲酸甲酯(13.7g，90.0mmol)溶解于甲烷磺酸(150mL)，加入六次甲基四胺(HMTA)(25.2g，180mmol)，所得混合物在100℃及氮气下搅拌过夜。冷却到室温，加入浓盐酸(24mL)和水(300mL)，常温下搅拌30分钟。用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20洗脱)，得3-甲酰基-4-羟基苯甲酸甲酯(1)(4.0g)。收率为24.7％。
步骤B：在冰水浴下将NBS(3.95g，22.2mmol)的DMF(40mL)溶液在40分钟左右滴加到化合物1(4.0g，22.2mmol)的DMF(60mL)溶液中，加完后在该温度下继续搅拌10分钟，然后自然升温到室温并继续搅拌1小时。向反应液中加入水(600mL)，过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)溶解，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯甲酸甲酯(2)(4.3g)。收率为74.8％。
步骤C：将化合物2(4.3g，16.6mmol)悬浮在甲醇(15mL)中，加入2M氢氧化钠水溶液(25mL)和THF(15mL)，所得反应液在30℃搅拌3小时。减压蒸除约一半溶剂，然后加入水(100mL)，用甲基叔丁基醚(MTBE)(30mL×2)洗涤，收集水相。水相用2M盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯甲酸(3)(4.0g)。收率为98.3％。
步骤D：将氢氧化钾(2.74g，48.8mmol)和无水乙醇(100mL)的混合物在室温下搅拌30分钟，加入化合物3(4.0g，16.3mmol)，所得混合物在90℃搅拌2小时。然后在该温度下滴加氯代丙酮(4.53g，48.9mmol)，加完后，回流搅拌过夜。减压蒸除大部分溶剂，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得油状液体。向该油状液体中加入乙二醇(30mL)和85％水合肼(3.1g，82.3mmol)，加热到190℃搅拌20分钟。稍微冷却，再加入氢氧化钾(2.74g，48.8mmol)，在120℃搅拌3小时。冷却到室温，加入水(100mL)，用稀盐酸调节pH值至2～3。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:10洗脱)，得7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-甲酸(4)(700mg)。收率为16.0％。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ8.16(s，1H)，7.96(s，1H)，6.85(s，1H)，2.84(q，J＝7.5Hz，2H)，1.29(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤E：将化合物4(700mg，2.60mmol)溶解于DMF(20mL)，然后在冰水浴下依次加入五氟苯酚(574mg，3.12mmol)、N-甲基吗啉(526mg，5.20mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(748mg，3.90mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(1.48g，3.89mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。加入水(80mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:20洗脱)，得白色固体(680mg)。将该白色固体溶解于THF(10mL)，加入氨水(8mL)，所得混合物在室温下搅拌30分钟。减压蒸除大部分溶剂，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-甲酰胺(5)(720mg)。该化合物不经纯化直接用于下一步反应。
步骤F：将化合物5粗品(720mg)和五硫化二磷(1.80g，8.10mmol)悬浮在无水THF(20mL)中，所得混合物在50℃及氮气下搅拌过夜。冷却到室温，过滤除去不溶物，滤饼再用少量THF洗涤，收集所有液体。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～1:5洗脱)，得7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-硫代甲酰胺(6)(340mg)。步骤E和F两步反应总收率为48.8％。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.09(s，1H)，8.03(s，1H)，7.98(s，1H)，7.38(s，1H)，6.81(s，1H)，2.84(q，J＝7.5Hz，2H)，1.29(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤G：将化合物6(340mg，1.20mmol)及2-氯代乙酰乙酸乙酯(295mg，1.79mmol)加入到DMF(10mL)中，所得混合物在100℃搅拌过夜。加入水(40mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:100～1:70洗脱)，得2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯(7)(345mg)。收率为72.9％。
步骤H：向化合物7(265mg，0.672mmol)的NMP(5mL)溶液中加入氰化亚铜(90mg，1.0mmol)，所得混合物在200℃及氮气下搅拌5小时。减压蒸除NMP，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:60～1:30洗脱)，得2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯(8)(40mg)。收率为17.5％。
步骤I：将化合物8(40mg，0.118mmol)溶解在THF(5mL)和甲醇(5mL)中，加入2M氢氧化钠溶液(3mL)，所得混合物升温到40℃搅拌1小时。减压蒸除约一半溶剂，加入水(20mL)，用MTBE(10mL×2)洗涤，收集水相。水相用稀盐酸调节pH值至5～6，然后用乙酸乙酯(15mL×2)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，所得产物用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(9)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.52(s，1H)，8.31(s，1H)，6.88(s，1H)，2.91(q，J＝7.2Hz，2H)，2.69(s，3H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：311.0[M-H]-。
实施例2：2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(10)的合成
化合物7按实施例1中实验步骤I的方法水解，并酸化后得2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(10)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.17(s，1H)，8.02(s，1H)，6.82(s，1H)，2.86(q，J＝7.2Hz，2H)，2.67(s，3H)，1.29(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：366.0[M-H]-。
实施例3：2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(18)的合成
步骤A：向甲醇(150mL)中加入对羟基苯甲酸甲酯(10g，65.7mmol)、水合乙酸钠(18.78g，138mmol)和碘(35g，137.9mmol)，所得混合物在回流下搅拌1.5小时。再加入含有氢氧化钠(5.52g，138mmol)的水(200mL)溶液，然后回流2.5小时。冷却到室温，加入稀亚硫酸氢钠溶液至颜色褪去。过滤，滤饼用少量水洗涤，然后用乙酸乙酯(200mL)溶解，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，所得产物用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得4-羟基-3,5-二碘苯甲酸甲酯(11)(23g)。收率为86.7％。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ10.44(s，1H)，8.23(s，2H)，3.81(s，3H)。
步骤B：室温下向化合物11(5.258g，13.0mmol)、二(三苯基膦)氯化钯(92mg，0.13mmol)和碘化亚铜(50mg，0.26mmol)的混合物中加入DMF(5mL)和三乙胺(15mL)，然后在氮气下缓慢滴加3-甲基-丁炔(890mg，13.0mmol)，所得混合物在60℃搅拌过夜。减压蒸除大部分溶剂，加入水(30mL)，用2M盐酸调节pH值至2～3，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，石油醚洗脱)，得7-碘-2-异丙基苯并呋喃-5-甲酸甲酯(12)(1.8g)。收率为40.2％。
步骤C：将化合物12(1.8g，5.23mmol)溶解在THF(10mL)和甲醇(10mL)中，加入2M氢氧化钠溶液(8mL)，所得混合物升温到40℃搅拌2小时。减压蒸除大部分溶剂，加入水(60mL)，用MTBE(20mL×2)洗涤，收集水相。水相用稀盐酸调节pH值至5～6，然后用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，得7-碘-2-异丙基苯并呋喃-5-甲酸(13)(1.3g)。该化合物不经纯化直接用于下一步反应。
步骤D：将化合物13粗品(1.1g)悬浮在氯化亚砜(5mL)中，加入DMF(1滴)，所得混合物在回流下搅拌3小时。减压蒸除溶剂，所得产物用无水THF(10mL)溶解，然后在冰水浴下滴加到浓氨水(20mL)中，继续搅拌10分钟。减压蒸除大部分THF，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:5～3:5洗脱)，得7-碘-2-异丙基苯并呋喃-5-甲酰胺(14)(820mg)。步骤C和D两步反应总收率为56.3％。
步骤E：将化合物14(300mg，0.911mmol)和五硫化二磷(405mg，1.82mmol)悬浮在无水THF(10mL)中，所得混合物在50℃及氮气下搅拌3小时。冷却到室温，过滤除去不溶物，滤饼再用少量THF淋洗，收集所有液体。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200-300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10洗脱)，得7-碘-2-异丙基苯并呋喃-5-硫代甲酰胺(15)(360mg)。
步骤F：将化合物15(360mg)及2-氯代乙酰乙酸乙酯(206mg，1.25mmol)加入到乙醇(10mL)中，所得混合物升温到回流搅拌过夜。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200-300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:50洗脱)，得2-(7-碘-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯(16)(270mg)。步骤E和F两步反应总收率为65.1％。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.09(d，J＝1.5Hz，1H)，7.87(d，J＝1.5Hz，1H)，6.41(s，1H)，4.35(q，J＝7.2Hz，2H)，3.15-3.11(m，1H)，2.67(s，3H)，1.41-1.25(m，9H)。
步骤G：将化合物16(270mg，0.593mmol)溶解于DMF(10mL)，加入氰化亚铜(80mg，0.893mmol)，所得混合物在回流下搅拌过夜。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200-300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:50～1:35洗脱)，得2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯(17)(50mg)。收率为23.8％。
步骤H：化合物17按实施例1中实验步骤I的方法水解，并酸化后得2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(18)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.49(s，1H)，8.29(s，1H)，6.85(s，1H)，3.21-3.16(m，1H)，2.68(s，3H)，1.33(d，J＝6.9Hz，6H)。MS(EI，m/z)：325.1[M-H]-。
实施例4：2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(25)的合成
步骤A：在冰水浴及氮气下将无水乙醇(540mL)在3～4小时内滴加到硒粉(50.0g，0.633mol)和硼氢化钠(26.4g，0.698mol)的混合物中，加完后升温到室温，继续搅拌1小时。然后加入含有对羟基苯腈(18.84g，0.158mol)的吡啶(126mL)溶液。升温至回流，再缓慢滴加2M盐酸溶液(320mL)，滴加时间不少于4小时，加完后回流搅拌过夜。减压蒸除大部分乙醇，加入水(400mL)，用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。合并的有机相用2M盐酸(100mL)洗涤，然后用饱和食盐水(100mL)洗涤，减压蒸除溶剂。所得产物用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得对羟基硒代苯甲酰胺(19)(25.0g)。收率为79.1％。
步骤B：将化合物19(25.0g，0.125mol)及2-氯代乙酰乙酸乙酯(24.7g，0.150mol)加入到无水乙醇(500mL)中，升温回流搅拌3小时。反应液冷却至室温，过滤，收集的滤饼用真空干燥，得2-(4-羟基苯基)-4-甲基-硒唑-5-甲酸乙酯(20)(32.7g)。收率为84.3％。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.81(dd，J＝2.0，6.8Hz，2H)，6.87(dd，J＝2.0，6.8Hz，2H)，4.26(q，J＝6.8Hz，2H)，2.64(s，3H)，1.28(t，J＝6.8Hz，3H)。
步骤C：将化合物20(17.6g，56.7mmol)和六次甲基四胺(9.8g，69.9mmol)加入到三氟乙酸(85mL)中，反应液升温到85℃搅拌42小时。减压蒸除大部分溶剂，然后滴加水(300mL)。搅拌60分钟后过滤，滤饼再用乙酸乙酯(200mL)溶解，分液除去残留的水，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，所得产物用柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:8洗脱)，得2-(3-甲酰基-4-羟基苯基)-4-甲基-硒唑-5-甲酸乙酯(21)(8.7g)，收率：45.3％。
步骤D：将化合物21(8.7g，25.7mmol)、盐酸羟胺(2.6g，37.4mmol)和甲酸钠(2.5g，36.7mmol)加入到甲酸(90mL)中，所得溶液升温回流搅拌42小时。反应液冷却至室温，滴加水(270mL)，有大量固体析出。然后进一步冷却到0-5℃，搅拌30分钟，过滤，滤饼用大量水洗，真空干燥得浅黄色固体。该固体用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得2-(3-氰基-4-羟基苯基)-4-甲基-硒唑-5-甲酸乙酯(22)(7.0g)，收率：81.2％。
步骤E：在冰水浴下将三氟甲磺酸(1.5mL)滴加到甲醇(6mL)和二氯甲烷(18mL)的混合物中，然后加入化合物22(1.5g，4.84mmol)和NIS(1.31g，5.82mmol)，所得混合物在室温下搅拌2小时。加入饱和亚硫酸氢钠水溶液(30mL)，用二氯甲烷/甲醇(体积比为10:1)(40mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，所得产物用柱层析纯化(200～300目硅胶，二氯甲烷:甲醇＝100:1～30:1洗脱)，得2-(3-氰基-4-羟基-5-碘苯基)-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯(23)(1.36g)。收率为60.9％。
步骤F：室温下向化合物23(490mg，1.06mmol)、二(三苯基膦)氯化钯(8mg，0.0114mmol)和碘化亚铜(5mg，0.0263mmol)的混合物中加入DMF(1.3mL)和三乙胺(4mL)，然后在氮气下缓慢滴加3-甲基-丁炔(76mg，1.12mmol)，所得混合物在60℃搅拌过夜。减压蒸除大部分溶剂，加入水(30mL)。用2M盐酸调节pH值至2～3，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:50洗脱)，得2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯(24)(210mg)。收率为49.4％。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ8.53(s，1H)，8.34(s，1H)，6.86(s，1H)，4.29(q，J＝7.0Hz，2H)，3.22-3.17(m，1H)，2.69(s，3H)，1.34-1.29(m，9H)。
步骤G：化合物24按实施例1中实验步骤I的方法水解，并酸化后得2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(25)。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ8.52(s，1H)，8.32(s，1H)，6.87(s，1H)，3.22-3.17(m，1H)，2.68(s，3H)，1.33(d，J＝6.5Hz，6H)。MS(EI，m/z)：373.0[M-H]-。
实施例5：2-(7-氰基-2-异丁基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(26)的合成
化合物26的制备方法分别参见实施例4步骤F和实施例1步骤I，其中实施例4步骤F中3-甲基-丁炔用4-甲基-1-戊炔替代。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.52(s，1H)，8.31(s，1H)，6.91(s，1H)，2.76(d，J＝6.6Hz，2H)，2.67(s，3H)，2.13-2.04(m，1H)，0.97(d，J＝6.6Hz，6H)。MS(EI，m/z)：387.0[M-H]-。
实施例6：2-(7-氰基-2-丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(28)的合成
化合物28的制备方法分别参见实施例4步骤F和实施例1步骤I，其中实施例4步骤F中3-甲基-丁炔用1-戊炔替代。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.50(s，1H)，8.30(s，1H)，6.89(s，1H)，2.85(t，J＝7.2Hz，2H)，2.67(s，3H)，1.79-1.72(m，2H)，0.98(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：373.0[M-H]-。
实施例7：2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯(29)的合成
室温下向化合物23(200mg，0.434mmol)、二(三苯基膦)氯化钯(3mg，0.00427mmol)和碘化亚铜(2mg，0.0105mmol)的混合物中加入DMF(0.5mL)和三乙胺(1.5mL)，然后在氮气下缓慢滴加2-甲基-1-丁烯-3-炔(31.7mg，0.479mmol)，所得混合物在室温搅拌8小时，然后升温到60℃搅拌过夜。减压蒸除大部分溶剂，加入水(30mL)，用2M盐酸调节pH值至2～3，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:50洗脱)，得2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯(29)(110mg)。收率为63.5％。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.57(d，J＝1.5Hz，1H)，8.40(d，J＝1.5Hz，1H)，7.20(s，1H)，5.84(s，1H)，5.43(s，1H)，4.29(q，J＝7.2Hz，2H)，2.70(s，3H)，2.15(s，3H)，1.31(q，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：401.0[M+H]+。
实施例8：2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸(30)的合成
化合物29按实施例1中实验步骤I方法水解，并酸化后得2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸(30)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.55(s，1H)，8.37(s，1H)，7.19(s，1H)，5.84(s，1H)，5.42(s，1H)，2.68(s，3H)，2.15(s，3H)。MS(EI，m/z)：371.0[M-H]-。
实施例9：2-[7-氰基-2-(1,2-二氘代丙烷-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸(32)的合成
步骤A：将化合物29(100mg，0.250mmol)溶解于DMF(10mL)和重水(0.5mL)，加入5％无水钯碳(20mg)，所得混合物在氘气中35℃常压下氘化反应24小时。混合物通过硅藻土过滤，滤液中加入乙酸乙酯(40mL)，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:25洗脱)，得2-[7-氰基-2-(1,2-二氘代丙烷-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯(31)(34mg)。收率为33.7％。
步骤B：化合物31按实施例1中实验步骤I方法水解，并酸化后得2-[7-氰基-2-(1,2-二氘代丙烷-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸(32)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.51(s，1H)，8.32(s，1H)，6.86(s，1H)，2.68(s，3H)，1.35-1.33(m，5H)。MS(EI，m/z)：375.0[M-H]-。
实施例10：2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(37)的合成
步骤A：将化合物5(1.6g，5.97mmol)溶解于甲苯(50mL)，加入五氧化二磷(5.0g，35.2mmol)，所得混合物在回流下搅拌过夜。将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10洗脱)，得7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-甲腈(33)(800mg)。收率为53.6％。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ8.12(s，1H)，8.00(s，1H)，6.85(s，1H)，2.87(q，J＝7.5Hz，2H)，1.29(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤B：在冰水浴及氮气下将无水乙醇(7mL)缓慢滴加到硒粉(569mg，7.21mmol)和硼氢化钠(307mg，8.12mmol)的混合物中，加完后升温到室温。然后加入含有化合物33(450mg，1.80mmol)的吡啶(1.5mL)溶液，升温至回流。再缓慢滴加2M盐酸溶液(6mL)，加完后回流搅拌2小时。加入饱和食盐水(40mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200～300目硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝1:10洗脱)，得7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-硒代甲酰胺(34)(400mg)。收率为67.1％。
步骤C、D和E分别参见实施例1中的步骤G、H和I，得2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(37)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.49(s，1H)，8.29(s，1H)，6.87(s，1H)，2.89(q，J＝7.2Hz，2H)，2.67(s，3H)，1.30(q，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：359.0[M-H]-。
实施例11：2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(38)的合成
化合物35按实施例1中实验步骤I的方法水解，并酸化后得2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸(38)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.17(s，1H)，8.02(s，1H)，6.82(s，1H)，2.86(q，J＝7.5Hz，2H)，2.66(s，3H)，1.28(q，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：411.9[M-H]-。
效果实施例
实施例12:化合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用
一、原理
利用黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶(Horse radish peroxidase,HRP)及底物的双酶偶联反应来测试化合物对黄嘌呤氧化酶的活性抑制作用。首先黄嘌呤氧化酶氧化次黄嘌呤产生黄嘌呤和过氧化氢，并进一步氧化黄嘌呤产生尿酸和过氧化氢。然后辣根过氧化物酶催化过氧化氢和10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine(Ampliflu Red)反应产生强荧光化合物试卤灵(Resorufin)，用荧光酶标仪测定试卤灵的荧光强度，该荧光强度与黄嘌呤氧化酶活性成正比关系。
二、试验化合物及反应溶液的配制
将一定量的试验化合物和对照药物非布索坦(北京联本医药化学技术有限公司产品)溶解于DMSO(国药集团化学试剂有限公司产品)。在96孔聚丙烯反应板(Greiner BioOne产品)中用DMSO将试验化合物和对照药物配成2.5倍系列稀释的200倍浓度溶液。并进一步在超纯水中稀释得到3倍浓度的系列稀释溶液。
反应溶液A：在0.1M Tris-HCl(pH 7.5)缓冲溶液中配制6mU/ml的黄嘌呤氧化酶(来自牛乳，Sigma产品)。
反应溶液B：在0.1M Tris-HCl(pH 7.5)缓冲溶液中配制0.6U/ml的辣根过氧化物酶(上海源叶生物技术有限公司产品)，0.15mM的Ampliflu Red(Sigma产品)和0.3mM的次黄嘌呤(Sigma产品)的混合液。该溶液在4℃下避光，现配现用。
三、测量方法
取9μL反应溶液A，与9μL试验化合物或对照药物的2.5倍系列稀释溶液混合于96孔测试板中(Greiner Bio One产品)，置于平板振荡器上，在30℃以100rpm混合30分钟，再加入9μL反应溶液B，在30℃进行30分钟的酶反应。用酶标仪(Perkin Elmer Vitor X4)测量在激发光530nm和发射光590nm处的荧光强度。以无黄嘌呤氧化酶对照的荧光强度为0％，不含试验化合物对照的荧光强度为100％，计算试验化合物和对照化合物的50％抑制浓度(IC50)。其中对照药物为非布索坦。
检测结果见表1。从表1中结果可以看出本发明提供的化合物在体外药效测试中表现出了优异的黄嘌呤氧化酶抑制作用。
表1化合物的黄嘌呤氧化酶抑制剂活性
| 化合物编号 | IC<sub>50</sub>(nM) |
| 非布索坦 | 2.58 |
| 化合物9 | 3.13 |
| 化合物10 | 18.91 |
| 化合物18 | 3.06 |
| 化合物25 | 2.14 |
| 化合物26 | 3.26 |
| 化合物28 | 1.00 |
| 化合物30 | 3.33 |
| 化合物32 | 1.71 |
| 化合物37 | 1.14 |
| 化合物38 | 6.44 |
实施例13：化合物对治疗大鼠高尿酸血症的实验研究
一.试验材料
1.受试药物
化合物28为白色粉末，临用前采用0.5％CMC-Na研磨配成相应浓度混悬液供灌胃。
2.动物及饲养
2.1动物种属、来源
SD大鼠，SPF级，雄性，体重180-220g，购自上海杰思捷实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪)2012-0006。
2.2饲养条件
大鼠均饲养于独立送风笼具(IVC)中，空气洁净度10000级，实验室温度24±2℃；相对湿度60％～80％；每小时空气交换次数：10-15次/小时；光照周期：12(日)/12(夜)小时。每笼不超过5只。
饲料：鼠全价颗粒饲料，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司，其质量符合GB14924.1-2001《实验动物配合饲料通用质量标准》。
垫料：灭菌颗粒垫料，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司。
饮水：饮用纯化水，经酸化后自由饮用。
3.主要仪器及器械
BS210S精密电子天平(0.1mg～10g)，德国赛多利斯(sartorius)；
FEJ-200电子天平(0.1～200g)，福州富日衡之宝电子有限公司；
Safire2多功能酶标仪，瑞士TECAN公司。
4.主要试剂
尿酸检测试剂盒(磷钨酸还原法)，南京建成生物工程研究所，批号：20140912；
氧嗪酸钾(O0164)，东京化成工业株式会社，Lot：GR4VI-RK。
二.研究方法
1.试验分组
SD大鼠50只，雄性，体重180-220g，随机分为5组，每组10只，分别为：(1)正常组(0.5％CMC-Na)，(2)模型组(0.5％CMC-Na)，(3)非布索坦1.0mg/kg，(4)化合物28 0.5mg/kg，(5)化合物28 1.0mg/kg。各组药物配成相应浓度混悬液，给药体积均为10ml/kg。
2.模型建立及检测指标
各组大鼠适应性饲养完毕，禁食12h，分别用氧嗪酸钾盐按300mg/kg剂量ip造模，造模后0.5h受试药物组分别灌胃给药1次。分别于氧嗪酸钾盐注射前以及受试药物给药后1、3、5h经眼眶采血，3500rpm离心10min，取血清50μl测定各时间点尿酸水平。
随后连续6天，大鼠每天用氧嗪酸钾盐按300mg/kg剂量ip造模，同时造模后受试药物组分别灌胃给药1次。给药第7天时取禁食12h大鼠，同第1天试验方法，分别于氧嗪酸钾盐注射前以及注射后1、3、5h经眼眶采血，3500rpm离心10min，取血清50μl测定各时间点尿酸水平。
3.数据处理与统计方法
各试验计量数据均以(平均数)±s(标准差)表示，组间比较经F检验后，采用student-t检验考察显著性，以P<0.05作为显著性指标，P<0.01作为极显著性指标。
三.研究结果
1.给药1天对大鼠血清尿酸水平的影响
与正常组相比，氧嗪酸钾造模后3h内血清尿酸水平均显著升高(P<0.05)。与同时间点模型组相比，化合物28能显著降低氧嗪酸钾造模所致的血清尿酸水平升高，具有一定的剂量相关性，与模型组相比5h内各时间点均有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。(表2，图1)
表2.受试物给药1天对大鼠氧嗪酸钾模型血清尿酸水平的影响(n＝10，)
#P<0.05，与正常组比较；*P<0.05，**P<0.01，与同时间点模型组比较；▲▲P<0.01，化合物28与同时间点非布索坦组比较。
2.给药7天对大鼠血清尿酸水平的影响
与正常组相比，氧嗪酸钾造模组5h内血清尿酸水平均显著升高(P<0.01)。与同时间点模型组相比，化合物28高、低剂量组0-5h内血清尿酸水平均显著低于同时间点模型组(表3，图2)。
表3.受试物给药7天对大鼠氧嗪酸钾模型血清尿酸水平的影响(n＝10，)
##P<0.01，与正常组比较；*P<0.05，**P<0.01，与同时间点模型组比较；
参考文献：
1.闫曼,安雅婷,李舰,等.高尿酸血症动物模型研究进展.辽宁中医药大学学报,2014,9(9):88-90。
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3.喻志峰,杨澄,仇熙,等.瑞香苷对高尿酸血症大鼠的影响.中国药科大学学报,2002,33(2):142-145。
Claims (9)
1.通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
R1选自C2-5烷基、取代的C2-5烷基或C2-7烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；
R2选自-CN或卤素；
R3选自H、C1-4烷基、取代的C1-4烷基，所述取代基选自-NH2、-OH、-COOH或-CONH2；
Y选自O或S；
Z选自Se。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R2选自-CN、Br或I；
R3选自H或C1-3烷基。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基，所述取代基选自氘、卤素或C1-3烷氧基；
R2选自-CN、Br或I；
R3选自H或C1-4烷基；
Y选自O或S。
5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自C2-4烷基、取代的C2-4烷基或C2-4烯基，所述取代基选自氘或卤素；
R2选自-CN、Br或I；
R3选自H或C1-4烷基；
Y选自O。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
2-(7-氰基-2-异丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-异丁基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-丙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸乙酯，
2-[7-氰基-2-(丙-1-烯-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-[7-氰基-2-(1,2-二氘代丙烷-2-基)苯并呋喃-5-基]-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-氰基-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸，
2-(7-溴-2-乙基苯并呋喃-5-基)-4-甲基硒唑-5-甲酸。
7.一种药物组合物，其包含如权利要求1～6中任一项所述化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
8.根据权利要求1～6中任一项化合物或其药学上可接受的盐在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂药物方面的应用。
9.根据权利要求1～6中任一项化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗高尿酸症、痛风或糖尿病肾病的药物方面的用途。
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