CN108265012A

CN108265012A - 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用

Info

Publication number: CN108265012A
Application number: CN201611250518.6A
Authority: CN
Inventors: 罗丽莲; 张云华; 郭利辉; 林梅根; 张雄鹏
Original assignee: Jixi Agrosino Biotechnology Co ltd; Beijing Green Agrosino Crop Technology Co ltd
Current assignee: Beijing Green Agrosino Crop Technology Co ltd
Priority date: 2016-12-30
Filing date: 2016-12-30
Publication date: 2018-07-10
Anticipated expiration: 2036-12-30
Also published as: CN108265012B

Abstract

本发明公开了一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其在植物真菌病害防治中的应用。所述菌株为贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01，其保藏号为CGMCC No.12744。贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01对膝曲弯孢霉菌、终极腐霉、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的菌丝生长具有强烈的抑制作用，菌丝生长抑制率分别为85.17 %、91.54 %、90.78%、78.14%、75.69%、86.67%；贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵产物对膝曲弯孢霉菌、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的菌丝生长具有明显的抑制作用，抑制率分别为96.47%、100.00%、83.14%、77.25%、87.84%。贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液能有效防治番茄猝倒病、花生白绢病、小麦赤霉病。以贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液为活性成分的杀菌剂在农业生产上有良好的应用价值。

Description

一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) 菌株及其菌剂和应用。

背景技术

植物病原真菌是引起植物病害的主要病原物，目前所知道的植物病原真菌已经超过了8000种，引起的植物病害种类占植物病害总数的80%，涉及的植物种类30000余种。真菌病害每年在全球范围内致使水稻、小麦、玉米、马铃薯和黄豆等５大粮食作物产量减少1.25亿吨，给全球农业带来每年至少600亿美元的经济损失，严重威胁了粮食的生产。

目前，防治植物真菌性病害最常用的是化学防治法。化学防治在农业生产中占有重要地位，具有见效快、效果好等优点。但是随着化学农药的长期大量使用，“ 3R”问题，即残留( residue) 、抗性(resistance) 、再度猖獗(resurgence)逐渐凸显。化学农药在使用后，往往短时间内无法降解，在土壤或农产品中产生大量残留，并逐渐积累，对环境和人体产生巨大影响。而长期使用单一类化学农药，可使真菌病原物产生抗药性，从而需要不断增加使用剂量，如此恶性循环，直到最终致使病害失控，出现病害再度猖獗的场面。

随着人们环保意识的不断增强及对食品安全的逐渐重视，环境友好、人畜无害等逐渐成为了人们对农药的新要求。农业部近年来不断加强规范化学农药的使用，逐渐禁止或限制一些高毒性、高残留化学农药的使用，并于2015年下发《到2020年农药使用量零增长行动方案》，同时，不断加大对建设绿色生态农业的支持力度，努力寻求高效安全的生物农药。

微生物农药凭借其无公害、无污染、无残留，且不易产生抗药性等优点获得青睐，成为当前研究的热点。研究所涉及的微生物种类包括链霉菌、假单孢杆菌、淡紫拟青霉、芽孢杆菌等，其中芽孢杆菌抑菌性广谱。CN201510894025.5公开了一种解淀粉芽孢杆菌LX-J1，其液体制剂对禾谷丝核菌的抑制率为87.5%、对立枯丝核菌的抑制率为78.82%、对终极腐霉的抑制率为87%、对白绢病菌的抑制率为80.67%、对马铃薯黑痔病的抑制率为78.57%。另外，芽孢杆菌还具有分布广泛、种类繁多、抗逆性强等特性，有利于开发、加工、储藏和使用，具有广阔的研究前景和利用价值。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的化学防治存在的污染环境及不安全的问题，提供一种具有强烈和广谱抑菌活性的芽孢杆菌菌株，及该菌株在植物真菌病害防治中的应用。

首先，本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株，命名为Bv01。该菌株已于2016年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.12744。

本发明的贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01从采自于河北省衡水市饶阳县大尹村镇的土壤样品中分离获得，其菌体形态呈短杆状，在LB培养基上，菌落为淡黄色，隆起，表面褶皱，不透明，干燥，边缘不整齐，其16S rDNA序列如Seq ID No.1所示。

其次，本发明还提供一种广谱杀菌剂，其含有贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液。

在本发明一个实施方案中，所述的广谱杀菌剂为向贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液中添加0.2%-0.5%活性剂而制成的液体杀菌剂。

在本发明另一个实施方案中，所述的广谱杀菌剂为向贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液中添加0.2%-0.5%活性剂后，再加入吸附剂，经风干至水分含量小于10%而获得的固体杀菌剂。

其中，所述的活性剂包括腐殖酸钠，壳聚糖和几丁质中的一种或几种。

其中，所述的吸附剂为硅草土、活性炭和草炭中的一种或几种。

在本发明又一实施方案中，所述广谱杀菌剂为向贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液中添加8-12%硅藻土，7.0-7.4%聚乙烯丙醇，4.6-5.0%烷基萘磺酸缩聚物钠盐，1.5-2.5%羧甲基纤维素及0.5-1.5%荧光增白剂而制成的可湿性粉剂。

本发明还提供一种制备贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液的方法，包括如下步骤：将贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01接种于固体培养基上进行活化，于25-30℃培养44-52h后，接种于液体培养基中，25-30℃、150-200r/min培养20-28 h后，以5-15%的接种量转接种到新的液体培养基中，于25-30℃、150-200r/min摇床中培养68-76h，即可获得贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液。

贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01及其发酵产物具有强烈和广谱的抑菌作用，可用于防治植物真菌病害，因此，本发明提供一种植物真菌病害的防治方法，向植物施用贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液。

在本发明的一个实施方案中，贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01可用于防治由半知菌亚门丝孢纲丝孢目暗色孢科真菌、鞭毛菌亚门卵菌纲霜霉目腐霉科真菌、半知菌亚门丝孢纲无孢目无孢科真菌或半知菌亚门丝孢纲瘤座孢目瘤座孢科真菌引起的植物病害。

在本发明优选的实施方案中，所述植物真菌病害更优选为弯孢属、腐霉属、小核菌属、链格孢属、镰孢属真菌引起的植物病害。

在本发明更优选的实施方案中，所述植物真菌病害更优选为膝曲弯孢霉菌、终极腐霉、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌或尖孢镰孢菌引起的植物病害。

在本发明进一步优选的实施方案中，所述真菌病害最优选为玉米膝曲弯孢霉菌叶斑病、番茄猝倒病、马铃薯早疫病、花生白绢病、小麦赤霉病或番茄枯萎病。

本发明的贝莱斯芽孢杆菌对膝曲弯孢霉菌、终极腐霉、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的菌丝生长具有强烈的抑制作用，菌丝生长抑制率分别为85.17%、91.54 %、90.78%、78.14%、75.69%、86.67%；贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵产物对膝曲弯孢霉菌、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的菌丝生长具有明显的抑制作用，抑制率分别为96.47%、100.00%、83.14%、77.25%、87.84%。贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液对由终极腐霉引起的番茄猝倒病、由齐整小核菌引起的花生白绢病、由禾谷镰孢菌引起的小麦赤霉病的防治效果分别为86.09%、75.82、73.37%。与现有的用于杀菌剂的芽孢杆菌相比，贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01具有更宽广的抑菌谱和更强烈的抑菌作用。以贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液为活性成分制成的菌剂在农业生产上有良好的应用价值。

附图说明

图1贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01菌落形态。

图2贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01 16S rDNA系统发育树。

图3贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01对几种植物病原真菌的抑制作用。

图4贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵产物对几种植物病原真菌的抑制作用。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的分离与鉴定

贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01是从土壤中获得的，土壤样品采自河北省衡水市饶阳县大尹村镇。

（1）分离：取一个三角瓶，放入15颗玻璃珠，加入90 ml蒸馏水，121℃灭菌30 min。称取10 g土壤样品于上述已灭菌的三角瓶中，放进摇床150 r/min 振荡15 min，得到稀释10倍的土壤悬浮液。取4支经过灭菌的试管，每支试管加入9 ml灭菌蒸馏水。取1 ml稀释10倍的土壤悬浮液于上述装有9 ml蒸馏水的试管中，得到稀释10²倍的土壤稀释液，以此类推，一直稀释到10⁵倍的土壤稀释液。将稀释10³倍、10⁴倍和10⁵倍的土壤稀释液放进80℃水浴锅中处理15 min，每个浓度的土壤稀释液取100 μl 涂布于LB培养基平板上，28℃培养48h，挑取单菌落划线于新的LB培养基平板上，48 h后，再一次挑取单菌落划线于新的LB培养基平板上，即可获得纯培养物。其中，LB培养基的配制方法为：称取10 g胰蛋白胨、5 g酵母提取物、10 g NaCl 和20 g琼脂，用蒸馏水溶解并定容至1000 ml，将pH调为7.0，121℃灭菌20 min。

（2）鉴定：A.形态观察：将上述获得的纯培养物划线于LB培养基平板上，28℃培养48 h后，菌落为淡黄色，隆起，表面褶皱，不透明，干燥，边缘不整齐。在显微镜下观察，其菌体形态呈短杆状。

B.分子鉴定：1）总DNA 的提取：将上述纯培养物于2ml液体LB培养基中，28℃摇培48 h后，12000 r/min 离心1 min，收集菌体。然后采用细菌基因组DNA快速提取试剂盒进行DNA样品的制备。2）PCR反应体系：0.25 μl Ex Taq(5U/μl)，5μl 10×Ex Taq Buffer（含Mg² ⁺），4 μl dNTP(各2.5mM)， 2.5 μl模板DNA，1 μl正向引物27F(20 uM，序列为：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，SEQ ID No.2)，1 μl反向引物1492R(20 μM,序列为：TACGGCTACCTTGTTACG ACTT，SEQ ID No.3)，36.25 μl dd H2O。3）PCR反应程序：95℃预变性4 min，然后进行35个扩增循环（94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min 30 s），最后，72℃充分延伸10 min。4）测序及分析：PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分离后，经紫外光检测，将电泳条带位于1500 kb附近、且条带单一明亮的样品送测序公司进行测序，序列如SEQ ID No.1所示。测序所得序列在http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi上进行同源比对分析，结果表明该纯培养物与Bacillus velezensis（基因库登陆号：FJ713021.1）的相似性达100%，在基于16s rDNA序列构建的系统发育树中，该菌株与Bacillus velezensis（基因库登陆号：FJ713021.1）聚在一枝上。结合菌落形态特征及分子鉴定分析，将该菌株确定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) ，命名为Bv01，于2016年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No. 12744。

实施例2 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01对植物病原真菌的抑制作用测定

PDA培养基的配制：称取200 g马铃薯，洗净去皮切碎，加800 ml蒸馏水煮沸半个小时，纱布过滤，再加入20 g葡萄糖和20 g琼脂，用蒸馏水定容至1000 ml，121℃灭菌30分钟。

菌株活化：将膝曲弯孢霉菌、终极腐霉、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌接种于PDA培养基上，28℃培养至菌落直径大约6 cm备用。

对峙培养：用直径为5 mm的打孔器在上述活化好了的菌落边缘打取菌饼，接种到PDA平板中央。然后，取一新的PDA平板，将200 ul贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01悬浮液（10亿/ml）均匀涂布于上面，晾干，用直径为5 mm的打孔器在涂有菌悬浮液的PDA平板上打取饼块，接种到接种有真菌的PDA平板上，接种位置距离真菌菌饼2.5 cm。置于28℃培养，以接种空白PDA饼块为对照，重复三次。当对照组长满培养皿时，测量与Bv01对峙方向上的真菌菌落半径，并计算贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的抑菌率。计算公式为：菌落生长抑制率=（对照菌落半径-处理菌落半径）/（对照菌落半径-菌饼半径）×100%。

表1贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的抑菌效果

上述结果表明，在同一生长环境及范围内，贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的生长对膝曲弯孢霉菌、终极腐霉、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的生长具有明显的抑制作用，菌丝生长抑制率分别为85.17 %、91.54 %、90.78%、78.14%、75.69%、86.67%。

实施例3 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01代谢产物抑菌活性测定

代谢产物的制备：将贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01划线接种于斜面培养基上，28℃培养48h后，用接种环取一环接种于50 ml液体LB培养基中，28℃、180 r/min培养24 h后，取15 ml转接到150 ml LB培养基中，于28℃、180 r/min摇床中培养72 h，获得贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液。经6000 r/min离心10 min，再用细菌过滤器过滤，即可获得贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01代谢产物。

含代谢产物PDA平板的制备：将20 ml上述发酵产物加入80 ml 融化了的PDA培养基中，制成含20%的贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01代谢产物的PDA平板备用。以添加等量LB液体培养基的PDA平板为对照。

接种：用直径为5 mm的打孔器在经过活化，菌落直径大约6 cm的膝曲弯孢霉菌、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的菌落边缘打取菌饼，取一个菌饼接种于上述PDA平板上，置于28℃培养。

结果调查：当对照组长满培养皿时，调查并计算贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵产物的抑菌率。计算公式为：菌落生长抑制率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼直径）×100%。

表2贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01代谢产物抑菌效果

上述结果表明，所制备的贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵产物对膝曲弯孢霉菌、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌的菌丝生长具有明显的抑制作用，抑制率分别为96.47%、100.00%、83.14%、77.25%、87.84%。

实施例4 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液对终极腐霉引起番茄猝倒病的防治效果测定

带菌病土的制备：打取3个终极腐霉菌饼于150 ml PDA液体培养基中，28℃、160 r/min培养72 h，获得菌丝悬浮液。将菌丝悬浮液与灭菌土壤以1:9（V/V）的比例混匀，得到带菌病土，分装于盆钵中备用。

种子的消毒：挑选颗粒饱满、大小一致的番茄种子，于3%次氯酸钠中浸泡15 min，用蒸馏水漂洗4次。

种子的处理：将贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液稀释10倍，取15 ml于灭菌的培养皿中，加入0.5 g经过消毒的番茄种子进行处理16 h。以蒸馏水处理为对照。

播种：将经过处理的番茄种子播种于装有病土的盆钵中，每盆1粒。设3个重复，每个重复30盆。

结果调查：播种25天后进行发病率及防治效果调查，计算公式为：

发病率=（播种种子总数-健康幼苗数）/播种种子总数×100%

防治效果=（对照发病率-处理发病率）/对照发病率×100%

表3贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01对番茄猝倒病的防治效果

上述结果表明，通过施用贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液可以显著防治番茄猝倒病，防治效果可以达86.09%。

实施例5 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液对齐整小核菌引起花生白绢病的防治效果测定

花生的种植：在装有灭菌土的花盆中播种花生种子，每盆3~5粒。10天后，将多余的幼苗拔除，每盆仅留一株。

病原菌接种：播种60天后，采用牙签接种法进行病原菌接种，具体步骤如下：在PDA培养基平板上摆放数根牙签，并用无菌镊子将其按压至刚好没入培养基中，然后，打取1个齐整小核菌菌饼接种于PDA液培养基平板中央，当菌落长满皿后，将牙签取出，并插入花生根部土壤中，每株10根。

药剂处理：病原菌接种后，用稀释10倍的贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液灌根，每株200 ml，设3个重复，每个重复10株。以灭菌水为对照。

结果调查：药剂处理 20天后，调查花生白绢病发病程度，采用0-4级的5级分级标准：

0级：植株无症状；

1级：仅在茎基部产生病斑；

2级：茎基部产生缢缩症状，整株的三分之一以下表现系统症状（枯萎、萎蔫、死亡等）；

3级：整株的三分之二以下表现系统症状；

4级：整株的三分之二以上表现系统症状。

病情指数及防治效果计算公式如下：

防治效果=（对照病情指数-处理病情指数）/对照病情指数×100%

表4 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液对花生白绢病的防治效果

上述结果表明，通过施用贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液可以明显降低花生白绢病的发病率，防治效果可以达75.82%。

实施例6 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液对禾谷镰孢菌引起小麦赤霉病的防治效果测定

小麦的种植：挑选颗粒饱满、大小一致的小麦种子，撒播于盆钵中，每盆3~5粒，10天后，将多余的拔除，每盆仅留一株。

病原菌接种：在小麦抽穗扬花期，用浓度为1×10⁵的禾谷镰孢菌孢子悬浮液喷洒接种，保湿48 h。

药剂处理：用稀释10倍的贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液喷施，设3个重复，每个重复20株。以灭菌蒸馏水为对照。

结果调查：接种后30天，调查病情指数及防治效果。小麦赤霉病分级标准如下：

0级：全穗无病；

1级：全穗的1/4以下小穗发病；

2级：全穗的1/4-1/2小穗发病；

3级：全穗的1/2-3/4小穗发病；

4级：全穗的3/4以上小穗发病。

病情指数及防治效果计算公式如下：

表5 贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液对小麦赤霉病的防治效果

上述结果表明，通过施用贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01的发酵液可以有效预防小麦赤霉病的发生，防治效果可以达73.37%。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 北京绿色农华作物科技有限公司、绩溪农华生物科技有限公司

<120> 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用

<130>

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1340

<212> DNA

<213> 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)

<400> 1

cctcaccgac ttcgggtgtt acaaactctc gtggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc 60

gggaacgtat tcaccgcggc atgctgatcc gcgattacta gcgattccag cttcacgcag 120

tcgagttgca gactgcgatc cgaactgaga acagatttgt gggattggct taacctcgcg 180

gtttcgctgc cctttgttct gtccattgta gcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca 240

tgatgatttg acgtcatccc caccttcctc cggtttgtca ccggcagtca ccttagagtg 300

cccaactgaa tgctggcaac taagatcaag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac 360

atctcacgac acgagctgac gacaaccatg caccacctgt cactctgccc ccgaagggga 420

cgtcctatct ctaggattgt cagaggatgt caagacctgg taaggttctt cgcgttgctt 480

cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcag 540

tcttgcgacc gtactcccca ggcggagtgc ttaatgcgtt agctgcagca ctaaggggcg 600

gaaaccccct aacacttagc actcatcgtt tacggcgtgg actaccaggg tatctaatcc 660

tgttcgctcc ccacgctttc gctcctcagc gtcagttaca gaccagagag tcgccttcgc 720

cactggtgtt cctccacatc tctacgcatt tcaccgctac acgtggaatt ccactctcct 780

cttctgcact caagttcccc agtttccaat gaccctcccc ggttgagccg ggggctttca 840

catcagactt aagaaaccgc ctgcgagccc tttacgccca ataattccgg acaacgcttg 900

ccacctacgt attaccgcgg ctgctggcac gtagttagcc gtggctttct ggttaggtac 960

cgtcaaggtg ccgccctatt tgaacggcac ttgttcttcc ctaacaacag agctttacga 1020

tccgaaaacc ttcatcactc acgcggcgtt gctccgtcag actttcgtcc attgcggaag 1080

attccctact gctgcctccc gtaggagtct gggccgtgtc tcagtcccag tgtggccgat 1140

caccctctca ggtcggctac gcatcgtcgc cttggtgagc cgttacctca ccaactagct 1200

aatgcgccgc gggtccatct gtaagtggta gccgaagcca ccttttatgt ctgaaccatg 1260

cggttcagac aaccatccgg tattagcccc ggtttcccgg agttatccca gtcttacagg 1320

caggttaccc acgtgttact 1340

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tacggctacc ttgttacgac tt 22

Claims

1.一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)新菌株，其保藏号为CGMCC No.12744。

2.一种广谱杀菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述菌株的发酵液。

3.根据权利要求2所述的广谱杀菌剂，其特征在于，所述广谱杀菌剂为向贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液中添加0.2%-0.5%活性剂而制成的液体杀菌剂。

4.根据权利要求2所述的广谱杀菌剂，其特征在于，所述广谱杀菌剂为向贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液中添加0.2%-0.5%活性剂后，再加入吸附剂，经风干至水分含量小于10%而获得的固体菌剂。

5.根据权利要求3或4所述的广谱杀菌剂，其特征在于，所述的活性剂包括腐殖酸钠，壳聚糖和几丁质中的一种或几种。

6.根据权利要求4所述的广谱杀菌剂，其特征在于，所述的吸附剂为硅草土、活性炭和草炭中的一种或几种。

7.根据权利要求2所述的广谱杀菌剂，其特征在于，所述广谱杀菌剂为向贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv01发酵液中添加8-12%硅藻土，7.0-7.4%聚乙烯丙醇，4.6-5.0%烷基萘磺酸缩聚物钠盐，1.5-2.5%羧甲基纤维素及0.5-1.5%荧光增白剂而制成的可湿性粉剂。

8.一种制备权利要求1所述菌株发酵液的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的菌株接种于固体培养基上进行活化，于25-30℃培养44-52h后，接种于液体培养基中，25-30℃、150-200r/min培养20-28h后，以5-15%的接种量转接种到新的液体培养基中，于25-30℃、150-200r/min摇床中培养68-76h，即可获得所述菌株的发酵液。

9.一种植物真菌病害的防治方法，其特征在于，向植物施用权利要求2-7任一项所述的广谱杀菌剂。

10.根据权利要求9所述的植物真菌病害的防治方法，其特征在于，所述植物真菌病害为半知菌亚门丝孢纲丝孢目暗色孢科真菌、鞭毛菌亚门卵菌纲霜霉目腐霉科真菌、半知菌亚门丝孢纲无孢目无孢科真菌或半知菌亚门丝孢纲瘤座孢目瘤座孢科真菌引起的植物病害，优选为弯孢属、腐霉属、小核菌属、链格孢属、镰孢属真菌引起的植物病害，更优选为膝曲弯孢霉菌、终极腐霉、齐整小核菌、茄链格孢菌、禾谷镰孢菌或尖孢镰孢菌引起的植物病害，最优选为玉米膝曲弯孢霉菌叶斑病、番茄猝倒病、马铃薯早疫病、花生白绢病、小麦赤霉病或番茄枯萎病。