CN117305186A - 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用。本申请的贝莱斯芽孢杆菌为Bacillus velezensis H12，其保藏号为CCTCC NO：M 20231804。本申请的贝莱斯芽孢杆菌，不仅对辣椒叶、果和整株植株疫病发生均具有显著的防治效果；而且对包括辣椒疫霉菌在内的8种茄科蔬菜病害病原菌都具有很好的拮抗作用；并且，本申请的贝莱斯芽孢杆菌生长速度快，防治效果好，为辣椒疫病防治提供了一种新的高效防治方案。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
技术领域
本申请涉及辣椒病原菌防治技术领域，特别是涉及一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用。
背景技术
以生物农药研发和应用为核心的作物病害生物防治逐渐成为农业科研与应用的热点。而开发生防菌株是生物防治的基础，芽孢杆菌由于其内生孢子具有很强的适应和存活能力而被广泛开发和应用于生物防治。此外，芽孢杆菌的分离和培养较为容易，它与病原体竞争空间和营养，抑制病原体的生长和扩展，或作为诱导剂和促进剂从而达到植物抵抗病原体感染的目的，是众多生防菌中比较突出的菌株。
辣椒(Capsicum spp.)为茄科辣椒属植物。由于规模化种植、长期连作和品种单一，辣椒不可避免地出现病害加重、连作障碍等问题。由辣椒疫霉菌(Phytophtora capsiciLeon.)侵染引起的辣椒疫病(Phytophthora blight)是严重制约辣椒生产的土传病害之一。辣椒疫病在适宜的环境条件下会迅速爆发，在植株之间传播十分迅速，并且辣椒疫病能够在辣椒的整个生长过程中产生侵害，发病严重时，可减产50％以上，严重影响辣椒的品质和产量，阻碍辣椒产业的健康发展。目前辣椒疫病的防治主要以施用化学农药防治为主，长期施用化学农药不仅增加辣椒疫霉菌的耐药性，而且存在农药残留和环境污染等问题，给辣椒生产和人类健康生活及生态环境带来了威胁。虽然近年来筛选出用于辣椒疫病防治的生防菌株较多，但关于芽孢杆菌防治疫病的应用依然稀缺。
因此，研发更多、更有效的防治辣椒疫病的芽孢杆菌，仍然是辣椒疫病生物防治研究领域亟待解决的问题。
发明内容
本申请的目的是提供一株新的贝莱斯芽孢杆菌及其应用。
本申请采用了以下技术方案：
本申请的第一方面公开了一株贝莱斯芽孢杆菌，即Bacillus velezensis H12，其保藏号为CCTCC NO：M 20231804。
需要说明的是，本申请从辣椒种植地的辣椒根际的土壤样本中筛选和研究了30株菌株，最终获得贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis H12，对辣椒叶、果和整株植株都具有显著的防治效果，同时具有拮抗8种茄科蔬菜病害病原菌的作用。并且，贝莱斯芽孢杆菌H12菌株生长速度快，针对茄科蔬菜病害的防治，特别是辣椒疫病防治，具有广谱拮抗作用。
本申请的第二方面公开了本申请的贝莱斯芽孢杆菌在制备茄科蔬菜病原菌防治的生防制剂中的应用。
可以理解，本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12具有拮抗8种茄科蔬菜病害病原菌的作用，因此可以用于制备茄科蔬菜病原菌防治的生防制剂，例如用于农业生产中防治这些茄科蔬菜病害病。
优选的，本申请的贝莱斯芽孢杆菌在制备茄科蔬菜病原菌防治的生防制剂中的应用，具体包括利用本申请的贝莱斯芽孢杆菌或其培养物或活性提取物抑制茄科蔬菜病原菌的生长。
优选的，本申请的茄科蔬菜病原菌包括辣椒疫病病原菌辣椒疫霉(Phytophthoracapsici Leonian)、辣椒炭疽病病原菌辣椒刺盘菌(Colletotrichum capsici)、辣椒枯萎病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporu)、辣椒黑斑病病原菌交链孢菌(Alternariaalternate)、辣椒根腐病病原菌镰孢菌(Fusarium spp.)、辣椒白绢病病原菌齐整小核菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)、茄轮枝镰刀病菌(Fusarium verticillioide)、番茄早疫病病原菌茄链格孢菌(Alternaria solani(Ell.et Mart.)Sorauer)。
本申请的第三方面公开了本申请的贝莱斯芽孢杆菌在制备抑制茄科蔬菜病原菌生长的试剂中的应用。
可以理解，本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12具有拮抗8种茄科蔬菜病害病原菌的作用，因此可以用于制备抑制这些茄科蔬菜病原菌生长的试剂，例如用于试验或相关的研究中，抑制这些茄科蔬菜病原菌的生长。
本申请的第四方面公开了一种含有本申请的贝莱斯芽孢杆菌或其培养物或活性提取物的生防制剂。
可以理解，本申请的关键在于研究发现贝莱斯芽孢杆菌H12对辣椒叶、果和整株植株都具有显著的防治效果，至于具体的生防制剂，可以根据需求采用本申请的贝莱斯芽孢杆菌，或者本申请贝莱斯芽孢杆菌的培养物，或者本申请贝莱斯芽孢杆菌的活性提取物。
本申请的一种实现方式中，本申请的生防制剂还含有与本申请的贝莱斯芽孢杆菌协同作用的生防菌。
可以理解，虽然本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12对辣椒叶、果和整株植株都具有显著的防治效果；但是，不排除还可以与其他的具有类似功能或者其他病原菌防治功能的生防菌联合使用，使得本申请的生防制剂具有更强的辣椒病原菌防治效果，或者具有更广的对其他病原菌的防治功能。
本申请的一种实现方式中，本申请的生防制剂还含有药学上可接受的载体或辅料。
可以理解，本申请的生防制剂可以根据需求制成不同的剂型，在选择相应的载体或辅料时，只要能够利于本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12发挥作用，至少不对本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12造成不利影响即可；具体的载体或辅料可以参考现有的生防制剂，在此不累述。
本申请的有益效果在于：
本申请的贝莱斯芽孢杆菌，不仅对辣椒叶、果和整株植株疫病发生均具有显著的防治效果；而且对包括辣椒疫霉菌在内的8种茄科蔬菜病害病原菌都具有很好的拮抗作用；并且，本申请的贝莱斯芽孢杆菌生长速度快，防治效果好，为辣椒疫病防治提供了一种新的高效防治方案。
附图说明
图1是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12在NA平板上培养24h的菌落形态观察结果图；
图2是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12对辣椒疫霉病菌的抑制作用结果图，其中A为对照组的结果图，B为H10对疫霉菌的结果图，C为贝莱斯芽孢杆菌H12的结果图；
图3是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12菌株的16S rRNA基因序列系统发育树；
图4是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒离体叶片疫病的结果图；
图5是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒离体果实疫病的结果图；
图6是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒植株疫病的结果图；
图7是本申请实施例中贝莱斯芽孢杆菌H12对8种茄科蔬菜病害病原菌的抑制作用结果图，其中，A图为对辣椒疫病病原菌辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)的结果图，B图为对辣椒炭疽病病原菌辣椒刺盘菌(Colletotrichum capsici)的结果图，C图为对辣椒枯萎病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporu)的结果图，D图为对辣椒黑斑病病原菌交链孢菌(Alternaria alternate)的结果图，E图为对辣椒根腐病病原菌镰孢菌(Fusariumspp.)的结果图，F图为对辣椒白绢病病原菌齐整小核菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)的结果图，G图为对茄轮枝镰刀病菌(Fusarium verticillioide)的结果图，H图为对番茄早疫病病原菌茄链格孢菌(Alternaria solani(Ell.et Mart.)Sorauer)的结果图。
本申请的贝莱斯芽孢杆菌，拉丁学名Bacillus velezensis H12，于2023年09月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，保藏编号CCTCC NO：M 20231804。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本申请作进一步详细说明，以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
下述实施例中所用的材料和试剂，如无特别说明，均可从商业途径得到，下述实施例中所使用的实验方法如无特别说明，均为常规方法。
本发明实施例中所用的NA培养基为：蛋白胨10.0g/L，牛肉粉3.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂15.0g/L，pH值7.3±0.1(25℃)，灭菌条件：121℃，100kPa，15min。
本发明实施例中所用的NB培养基为：蛋白胨10.0g/L，牛肉粉3.0g/L，氯化钠5.0g/L，pH值7.2±0.2(25℃)，灭菌条件：121℃，100kPa，15min。
本发明实施例中所用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)为：通过称量新鲜土豆200g，20g葡萄糖，20g琼脂，1000mL去离子水，先将马铃薯去皮，切成小块称取200g于1000mL去离子水种熬煮20-30min，用两层纱布过滤，将滤液加入去离子水至1000mL，加入琼脂和葡萄糖，煮沸后分装至锥形瓶，121℃，100kPa，20min灭菌。
实施例1贝莱斯芽孢杆菌的分离、筛选和鉴定
1.分离
1.1采样：2021年11月26-28日，海南省海口市、琼海市，由实验人员从辣椒种植地根际采集土壤样本。
1.2分离：(1)样品处理：取10g经20目筛过的土壤样品于90mL灭菌的去离子水(SDW)中，150rpm振荡混匀15min后置于80℃水浴锅，10min后取出样品室温静置10min，用移液枪取样于NA培养基上平板稀释涂布，28℃培养1-2d。挑取大小、形态、颜色等有明显差异的菌落进行编号并置于NA培养基进行培养纯化，最后用50％甘油溶液-20℃保存备用。本试验共获得并保存30株菌株。
2.筛选：采用平板对峙法进行筛选试验，在NB液体培养基上接种上述保存的菌株，28℃培养24h，用SDW分别调至OD600＝1.0作为供试菌液待用。
将指示菌辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)LT1534菌株(由海南大学热带农林学院陈庆河教授团队提供)置于马铃薯培养基(PDA)活化，用8mm打孔器取指示菌块置于PDA培养(90mm培养皿)基中心，在四周距中心20mm处分别接种供试0.5μL菌液，接种等量SDW作为对照，每株供试菌株重复三次，置于28℃培养至对照指示菌长满整个培养皿后分别测量指示菌落直径，计算抑制率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100％。最终获得一株抑菌能力最强的菌株，编号为H12，H12的NA培养图如图1所示，抑菌效果如图2所示，菌株H12对辣椒疫霉菌的抑制率为64.4％，如表1所示。
表1菌株H12对辣椒疫霉菌的抑制效果
菌株 抑制圈直径/mm 抑制率/％
对照 0 /
H10 0 0
H12 5.37±0.26 64.4
图2中，A为对照组SDW的结果图，B为H10的结果图，C为H12的结果图。表1和图2的结果显示，H10对疫霉菌无抑制作用，H12对辣椒疫霉菌有很好的抑制效果，抑制率为64.4％。
3.鉴定
3.1菌株H12的生理生化试验鉴定
生理生化实验采用EasyID蜡样芽孢杆菌生化鉴定试剂盒(广东环凯微生物科技有限公司)鉴定，鉴定结果如表2所示。
表2菌株H12的生理生化试验结果
3.2菌株H12的分子生物学鉴定
3.2.1采用FastPure Bacteria DNAIsolation Mini Kit试剂盒(南京诺唯赞生物科技公司)提取H12的总DNA。
3.2.2利用细菌16S rRNA的通用引物27F和1492R，以H12的总DNA为模板，进行PCR扩增反应。反应体系为2×Taq Master Mix(Dye Plus)(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)7μL，DNA模板1μL，引物各1μL，ddH2O补足至10μL。
PCR反应程序为：94℃预变性1min；25个循环：94℃变性1min、57℃退火1min、72℃延伸8min；循环完成后，4℃待机。
其中，27F序列为：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’。
1492R序列为：5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’。
PCR产物经电泳凝胶检测，得到条带约1400bp，将PCR产物送至海口楠山基因生物科技有限公司进行纯化并测序。
3.2.3测序结果序列在NCBI网站上进行BLAST分析，结果显示，H12与贝莱斯芽孢杆菌的相似度最高，达99.93％。从序列列表选择不同种芽孢杆菌在EzBioCloud.net下载16SrRNA参照序列用MEGA11.0的邻接法(Neighbour-Joining method，NJ)构建系统发育进化树，用自展值检验(Bootstrap test)估计所建系统发育进化树的可靠性，重复次数为1000次，结果如图3所示。最终该菌株H12鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，该菌株被命名为贝莱斯芽孢杆菌H12，拉丁学名Bacillus velezensis H12，其菌落形态特征如图1和图2所示。该菌菌种保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M20231804。
实施例2贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒疫病实验
1.贝莱斯芽孢杆菌H12对辣椒疫病离体叶片防治效果
贝莱斯芽孢杆菌H12经NB培养24h后离心，菌体溶于SDW并调制OD600＝1.0(ca.1×108CFU/mL)。辣椒叶片采用花期分枝上的叶片，去离子水清洗叶片表面，将叶片表面水晾干后采用喷壶将菌液喷洒在叶片表面，待叶面晾干后将直径＝8mm的疫霉菌块接种在中心叶脉并将接种的叶片置于无菌托盘，28℃，保湿，接种后每隔12或24h调查记录1次发病情况，观察拍照并记录叶片病斑大小。病斑分级标准为0级：无病症；1级：病斑限接种液边缘外0.5cm以内；2级：病斑扩展到接种液边缘外0.5cm至病斑占1/3叶面积；3级：1/3<病斑占叶面积≤1/2；4级：1/2<病斑占叶面积≤3/4；5级：病斑占叶面积3/4以上，以接种叶平均病级作为鉴定效果分析和抗性分级的指标，防效(％)＝(对照平均病级-处理平均病级)/对照平均病级×100％。
试验结果如图4所示，贝莱斯芽孢杆菌H12处理的叶片病斑面积显著小于对照处理，如表3所示，说明H12能够有效的抑制叶片疫霉菌的生长。
表3贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒离体叶片疫病测定效果
菌株 平均病级 防效/％
对照 4.06±0.19 /
H12 1.33±0.17 67.1
2.贝莱斯芽孢杆菌H12对辣椒疫病离体果实防治效果
贝莱斯芽孢杆菌H12经NB培养24h后离心，菌体溶于SDW并调制OD600＝1.0(ca.1×108CFU/mL)。辣椒果实采用完熟期的果实，果实表面70％乙醇消毒，晾干后采用喷壶将菌液喷洒在果实表面，待果实表面晾干后用无菌小刀切0.5mm小口，将直径＝8mm的疫霉菌块接种在小口处并将接种的果实置于无菌托盘，28℃，保湿，观察72h，拍照记录果实病斑大小。
试验结果如图5所示，贝莱斯芽孢杆菌H12处理的果实形状完好，无发病症状，对照处理的果实呈水渍状，说明H12能够有效的抑制果实疫霉菌的生长。
3.贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒疫病植株
3.1辣椒苗的准备：以4-5叶期的茄门辣椒幼苗为实验材料，辣椒种子用75％乙醇溶液消毒1min，接着用2％次氯酸钠消毒3min后，再用灭菌的去离子水(SDW)清洗5-6次，种子室温催芽后播于50孔育苗穴盘中，置于育苗室正常水肥管至辣椒长至4-5片真叶。
3.2疫霉菌液的制备：保存的疫霉菌用PDA培养基扩繁，待疫霉菌长满全皿后进行光培养6d，刮下孢子囊于SDW中置于4℃冰箱中40min后取出在温室下放置，3层纱布过滤得到疫霉菌菌液，并利用血球计数板计数法调整浓度为1.0×105CFU/mL。
3.3苗期接种试验：将辣椒苗转至8×8cm的育苗杯置于人工培养箱(26±2℃，14h光照/10h黑暗)中培养2d后，在距离辣椒苗根部2cm处用小刀伤根，并注入贝莱斯芽孢杆菌H12菌液，每株5mL，以SDW处理作为对照，置于相同条件培养箱培养2d后进行疫霉菌接种，在伤根处注入3mL病原菌菌液后放入人工培养箱中培养，并观察记录实验苗的发病情况。待病情稳定后(21d)统计发病率，发病率(％)＝发病株数/调查总株数×100％，防治效果(％)＝(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100％。试验结果如表4和图6所示，图6分别是对照和处理组第21d的结果图。
表4贝莱斯芽孢杆菌H12防治辣椒植株疫病测定效果
菌株 发病率/％ 防治效果/％
对照 83.3±14.4 /
H12 33.3±14.4 60.0
表4和图6的试验结果显示，贝莱斯芽孢杆菌H12处理的辣椒植株发病率为33.3％，显著低于对照，防治效果达60.0％。
实施例3贝莱斯芽孢杆菌H12对辣椒病原真菌的拮抗谱试验
采用平板对峙法检测贝莱斯芽孢杆菌H12对茄科蔬菜多种病原真菌的拮抗作用。包括辣椒疫病病原菌辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)，辣椒炭疽病病原菌辣椒刺盘菌(Colletotrichum capsici)，辣椒枯萎病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporu)，辣椒黑斑病病原菌交链孢菌(Alternaria alternate)，辣椒根腐病病原菌镰孢菌(Fusarium spp.)，辣椒白绢病病原菌齐整小核菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)，茄轮枝镰刀病菌(Fusarium verticillioide)，番茄早疫病病原菌茄链格孢菌(Alternaria solani(Ell.et Mart.)Sorauer)，以上病原菌菌株由湖南省农科院提供。将以上病原真菌在PDA培养基上活化，8mm打孔器打孔并转接到新的PDA培养基。贝莱斯芽孢杆菌H12菌液通过NB培养基培养，离心后将浓度调至OD600＝1.0(ca.1×108CFU/mL)，在距离病原菌块2mm的四周接种0.5μL，以灭菌蒸馏水接种作为空白对照。28℃培养至对照长满整个培养皿，拍照记录实验结果。试验重复三次。试验结果如图7所示。
图7的结果显示，贝莱斯芽孢杆菌H12对供试8种病原菌均具有强的拮抗作用。
综上，本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12菌株对辣椒叶、果和整株植株具有显著的防治效果，同时具有拮抗8种茄科蔬菜病害病原菌的作用。并且，本申请的贝莱斯芽孢杆菌H12菌株生长速度快，针对茄科蔬菜病害(特别是辣椒疫病)的防治具有广谱拮抗作用，该菌株在植物病害的生物防治具有广阔的应用前景，在生物防治药剂的开发方面同样具有极高的发展价值。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。

Claims (10)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于：所述贝莱斯芽孢杆菌为Bacillus velezensisH12，其保藏号为CCTCC NO：M 20231804。
2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备茄科蔬菜病原菌防治的生防制剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：包括利用所述贝莱斯芽孢杆菌或其培养物或活性提取物抑制所述茄科蔬菜病原菌的生长。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述茄科蔬菜病原菌包括辣椒疫病病原菌辣椒疫霉、辣椒炭疽病病原菌辣椒刺盘菌、辣椒枯萎病病原菌尖孢镰刀菌、辣椒黑斑病病原菌交链孢菌、辣椒根腐病病原菌镰孢菌、辣椒白绢病病原菌齐整小核菌、茄轮枝镰刀病菌和番茄早疫病病原菌茄链格孢菌。
5.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备抑制茄科蔬菜病原菌生长的试剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：包括利用所述贝莱斯芽孢杆菌或其培养物或活性提取物抑制所述茄科蔬菜病原菌的生长。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于：所述茄科蔬菜病原菌包括辣椒疫病病原菌辣椒疫霉、辣椒炭疽病病原菌辣椒刺盘菌、辣椒枯萎病病原菌尖孢镰刀菌、辣椒黑斑病病原菌交链孢菌、辣椒根腐病病原菌镰孢菌、辣椒白绢病病原菌齐整小核菌、茄轮枝镰刀病菌和番茄早疫病病原菌茄链格孢菌。
8.一种含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或其培养物或活性提取物的生防制剂。
9.根据权利要求8所述的生防制剂，其特征在于：所述生防制剂还含有与所述贝莱斯芽孢杆菌协同作用的生防菌。
10.根据权利要求8或9所述的生防制剂，其特征在于：所述生防制剂还含有药学上可接受的载体或辅料。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180020676A1 (en) * 2014-12-29 2018-01-25 Fmc Corporation Bacillus velezensis rti301 compositions and methods of use for benefiting plant growth and treating plant disease
CN108265012A (zh) * 2016-12-30 2018-07-10 北京绿色农华作物科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用
CN109266586A (zh) * 2018-10-18 2019-01-25 淮海工学院 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03及其用途与发酵方法
US20190261633A1 (en) * 2017-09-08 2019-08-29 Zhijun Lu Type of bacillus velezensis and its applications in plants
CN110283742A (zh) * 2019-06-17 2019-09-27 北京农业生物技术研究中心 一株广谱抗病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
KR20210076260A (ko) * 2019-12-13 2021-06-24 대한민국(농촌진흥청장) 식물 병원균에 대한 항균 활성을 갖는 바실러스 벨레젠시스 afb2-2 균주 및 이의 용도
CN113717901A (zh) * 2021-09-30 2021-11-30 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治多种蔬菜病害中的应用
WO2023138678A1 (zh) * 2022-01-21 2023-07-27 慕恩（广州）生物科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN116836877A (zh) * 2023-07-18 2023-10-03 河北好菌多生物科技有限公司 一株广谱拮抗植物病原真菌的贝莱斯芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180020676A1 (en) * 2014-12-29 2018-01-25 Fmc Corporation Bacillus velezensis rti301 compositions and methods of use for benefiting plant growth and treating plant disease
CN108265012A (zh) * 2016-12-30 2018-07-10 北京绿色农华作物科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用
US20190261633A1 (en) * 2017-09-08 2019-08-29 Zhijun Lu Type of bacillus velezensis and its applications in plants
CN109266586A (zh) * 2018-10-18 2019-01-25 淮海工学院 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03及其用途与发酵方法
CN110283742A (zh) * 2019-06-17 2019-09-27 北京农业生物技术研究中心 一株广谱抗病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
KR20210076260A (ko) * 2019-12-13 2021-06-24 대한민국(농촌진흥청장) 식물 병원균에 대한 항균 활성을 갖는 바실러스 벨레젠시스 afb2-2 균주 및 이의 용도
CN113717901A (zh) * 2021-09-30 2021-11-30 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治多种蔬菜病害中的应用
WO2023138678A1 (zh) * 2022-01-21 2023-07-27 慕恩（广州）生物科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN116836877A (zh) * 2023-07-18 2023-10-03 河北好菌多生物科技有限公司 一株广谱拮抗植物病原真菌的贝莱斯芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHENGQIANG WANG ET AL: ""effects of Bacillus velezensis FKM10 for promoting the growth of Malus hupehensis Rehd. And inhibiting Fusarium Verticillioides", 《FRONTIERS IN MICROBIOLOGY》, vol. 10, 10 January 2020 (2020-01-10), pages 1 - 16, XP055851448, DOI: 10.3389/fmicb.2019.02889 *
傅慧珍等: "辣椒砧木种质资源对疫病的抗性及遗传初步分析", 《种子》, vol. 36, no. 6, 30 June 2017 (2017-06-30), pages 45 - 49 *

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