CN107858300A - 针对番茄的防病、促生、品质提升以及抗逆的解淀粉芽胞杆菌2yn11及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了针对番茄的防病、促生、品质提升以及抗逆的解淀粉芽胞杆菌2YN11及其应用。该菌株分类命名为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2016年6月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.12606。该菌株制剂对解淀粉芽胞杆菌2YN11灌根处理后对多种番茄病害生防效果至少达到47.05％以上，作用十分明显；且对植物的株高以及根长有明显地提高，对植株具有一定的促生作用，经2YN11处理的农田作物与对照组相比，增产超30.54％以上，番茄果实口感提升显著，各项营养指标都有显著提高。

Description

针对番茄的防病、促生、品质提升以及抗逆的解淀粉芽胞杆菌 2YN11及其应用

技术领域

本发明属于植物保护领域，涉及针对番茄的防病、促生、品质提升以及抗逆的解淀粉芽胞杆菌2YN11及其应用。

背景技术

番茄(学名：Lycopersicon esculentum Mill.)，是茄科番茄属一年生或多年生草本植物，体高0.6-2米，全体生粘质腺毛，有强烈气味，茎易倒伏，叶羽状复叶或羽状深裂，花序总梗长2-5厘米，常3-7朵花，花萼辐状，花冠辐状，浆果扁球状或近球状，肉质而多汁液，种子黄色，花果期夏秋季。中国番茄自20世纪60年代开始规模化生产，自80年代开始大力推广高效节能温室栽培模式，1990-2005年是中国番茄种植面积快速增长期，2005年番茄播种总面积超过80万hm²，较1990年增长71.3％，2004年番茄每667m²产量达2917.79kg，较1990年增产5.08％，中国番茄总产量的提高是以增加播种面积实现的。2005-2014年，中国番茄生产进入平稳增长期，番茄播种面积在蔬菜播种面积份额中维持在4.7％，其中鲜食番茄种植面积占90％左右。保护地番茄生产发展较快，而露地播种面积大幅度减少，2014年达101.17万hm²，较2004年增长24.5％，2014年平均667m²产量达3512.14kg，较2004年增产19.7％，保护地每667m²平均产量达5500kg。随着番茄种植生产的持续平稳增长，给农户带来巨大经济利益的同时，也给番茄的植保工作提出了新的要求。番茄作为广泛种植的经济型茄科蔬菜，在大规模种植的同时，也面临着病害多、难防治的问题，这给植保专家带来了巨大的挑战。番茄的常见病害有番茄常见病害有苗期猝倒病、立枯病、青枯病、枯萎病、根结线虫病、早疫病、晚疫病、病毒病、灰霉病、叶霉病、叶斑病、番茄黄化曲叶病毒病等。据不完全统计，在全国各地的番茄栽培地，病害发生几乎无法避免，一般会使番茄产量下降10％-30％，但个别病害严重时会使番茄绝收。

利用土壤有益微生物来控制病害的发生以及诱导提高作物抗逆能力，促进生长是近些年来研究的热点，尤其这些微生物对环境无污染，引起了科学家们利用生物防治手段控制病害、以及应对不良环境的兴趣。解淀粉芽胞杆菌在自然界中分布十分广阔，同时能够对多种真菌与细菌产生抑制作用，并且具有丰富的自身代谢产物。因此，在生物防治方面具有广阔的应用前景，可以适当的代替传统的化学农药。同时，随着分子研究技术的提高，解淀粉芽胞杆菌的基因功能更多地被了解，增加可应用的可行性。以及发酵条件的优化使得解淀粉芽胞杆菌的大规模应用也具备了客观条件。

另外因解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，在其自身的生长过程中可以产生一系列的代谢产物，这些代谢产物使得解淀粉芽胞杆菌能够具有广泛地抑制真菌和细菌的活性，或者诱导植物抗性。因此，近些年大量学者在对解淀粉芽胞杆菌的新发现与新应用以及基因功能研究和发酵条件的优化做了大量的探索。它可以不同方式或途径影响植物的许多代谢过程，增加植物根长，改变植物根系形态建成，促进根系对水份和营养元素的吸收，解淀粉芽胞杆菌可以提高植物的抗病能力，抵抗病原菌的侵染，以及抗逆能力，增强植物应对不良环境的胁迫。其中不良环境包括干旱、洪涝、高温、寒冷等恶劣天气，均会对草本作物的生长产生不良影响。20世纪90年代，中国平均每年受旱面积为2733万hm²，作物因旱减产量与总产量之比达到了4.7％。而且每年因涝渍灾害损失达62.3亿千克,年均经济损失46.7亿元。高温、寒冷等天气亦会对作物生产造成严重损害。增加农业作物抵抗外界不良环境能力受到了国内外研究者的高度重视，但目前有效的方法非常少。

发明内容

本发明的目的是针对现有防治番茄病害以及抵抗不良环境技术的不足，提供一种绿色环保的能提高广谱植物防病、促生、抗逆的解淀粉芽胞杆菌2YN11。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

针对番茄的防病、促生、抗逆的解淀粉芽胞杆菌2YN11，该菌株分类命名为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2016年6月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.12606。

本发明所述的解淀粉芽胞杆菌2YN11在对番茄制备防病、促生、抗逆的制剂中的应用；优选在番茄上的病害、促进其生长及提高品质、提高其抗逆性的制剂中的应用。

用本发明所述的针对番茄防病、促生、抗逆的解淀粉芽胞杆菌2YN11制备的菌剂。

所述的的菌剂优选通过以下方法制备得到：

解淀粉芽胞杆菌2YN11在LB培养液中28℃180rpm振荡培养12-16h，然后6000rpm离心10min得到菌体，用灭菌水将菌体进行稀释制成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×10⁹-1×10¹⁰CFU/mL。

本发明所述的菌剂的制备方法，包括以下步骤：

解淀粉芽胞杆菌2YN11在LB培养液中28℃180rpm振荡培养12-16h，然后6000rpm离心10min得到菌体，用灭菌水将菌体进行稀释制成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×10⁹-1×10¹⁰CFU/mL。本发明所述菌剂在对番茄防病、促生抗逆中的应用；优选在番茄上的病害、促进其生长及提高品质、提高其抗逆性的制剂中的应用。

所述的菌剂优选通过灌根处理进行应用。

有益效果

本发明利用对环境无毒害的微生物菌剂防治广谱性植物土传病害以及地上部病害(尤其是番茄病害)，提供了一种绿色环保的解淀粉芽胞杆菌菌剂，防治优选在番茄上的土传病害和地上部病害，促进上述作物的生长并提高品质和其抗逆性(包括抗旱、抗寒、耐盐等)。解决了化学药剂等其它方法效果不佳或者有残留等问题，保护环境，促进农业可持续发展。

该菌制成浓度1×10⁸CFU/mL以上浓度的菌剂，在正常管理条件下，淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂施用处理后对番茄青枯病、细菌性果斑病、番茄病毒病生防效果达到98.3％、61.9％以及47.05％以上，对其他病害生放效果也比较显著；在温室实验室中，2YN11处理后的番茄植株生物量和对照相比增加31.93％；在田间，针对番茄不同年份相同地块，番茄的产量分别提升31.7％和30.54％，促生效果非常显著；对于品质提升方面，2YN11处理后，能够显著的提升番茄次生代谢产物的含量，改善不良指标，番茄果实口感提升显著，各项营养指标都有显著提高；另外，使用2YN11处理后，能够显著提植物的抗逆性，其中对抗旱性有较为明显的提升。

附图说明

图1、2YN11样本进化树

图2、解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理对作物病害的生防效果

图3、解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理对温室作物生物量的影响

图4、解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理对田间作物产量的影响

图5、解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理对作物抗逆性的影响

图6、盐胁迫条件下2YN11处理后对番茄各项生理指标的影响

图7、低温胁迫条件下2YN11处理后对番茄生存率以及各项生理指标的影响

生物材料保藏信息

解淀粉芽胞杆菌2YN11，为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2016年6月13日,菌种保藏号为CGMCC NO.12606,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所。

具体实施方式

实施例1解淀粉芽胞杆菌菌株2YN11菌株的筛选方法、形态学特征和生理生化特征

菌株2YN11为江苏省某农场，番茄病害发生严重地区的土壤筛选所得，具体方法如下采用梯度稀释法，将从病区采集的土壤，称取土壤1g置于盛有9mL无菌水的试管内，剧烈振荡5min，制成土壤悬浮液，梯度稀释10-4d后，涂LB平板，28℃培养箱中黑暗培养，48h后挑取不同菌落形态的单个菌落，经LB平板纯化后4℃保存于LB斜面待用。

将筛选出来的菌株，分别与几种病原菌(青枯病、细菌性斑点病等)进行平板拮抗实验。具体方法如下，以青枯病拮抗实验为例。将活化的青枯病菌液调至浓度为1×10⁷，并以1％的浓度倒入约50℃的已融化固体LB培养基中，之后倒平板。在距离中心2cm处点接细菌，每皿接4个菌株，每个菌株重复3次。设不接种拮抗菌的平板为对照(CK)，置于25℃培养箱黑暗培养，测量并记录透明圈产生的结果。最后我们筛选出拮抗效果最好的菌株，并命名为2YN11,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCCNO.12606。

解淀粉芽孢杆菌2YN11是革兰氏染色阳性细菌，单个或成对排列，在逆境中能产生芽孢，呈椭圆形，抗逆性极强。芽孢杆菌在LB培养基上的菌落呈现为直径0.5-1.0mm、正圆形、略凸起、边缘整齐、表面光滑且有油状、有亮光泽、乳白色、不透明。解淀粉芽杆菌可产生一些细胞代谢物例如几丁质酶、噬铁素以及其他激素类物质，这些代谢物不仅对病原物的生长可产生明显的抑制作用，而且还可以促进相关植株的生长。

实施例2解淀粉芽胞杆菌菌株2YN11的分子学鉴定

细菌基因组试剂盒(赛百盛公司)提取细菌基因DNA后，用gyrB通用引物gyrB1(5'–GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3')；gyrB2R(5'–AGCAGGATACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3')从基因组DNA中扩增出gyrB基因片段。具体扩增体系及程序(25ul)如下：引物1、2(10μM)各1μl；Mix:12.5μl；Taq:0.5μl。ddH₂O:10μl；模板:1μl。94℃预变性5min，94℃变性1min，56℃退火2min，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存。PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳进行检测，90V，30min；EB染色30min，检测扩增产物。扩增产物纯化后连接到pMD19-T载体，转化于Escherichia coli DH5α，提取阳性克隆质粒，委托TaKaRa公司测序，提交NCBI(NationalCenter for Biotechnology Information)进行比对,样本进化树见图1,鉴定为解淀粉芽胞杆菌。

实施例3解淀粉芽胞杆菌菌株2YN11的制备

一种提高对多种作物病害生物防治效果以及促生、抗逆的解淀粉芽胞杆菌2YN11,含微生物成分：解淀粉芽胞杆菌2YN11(保藏号为12606)。由浙江梨园根围土壤中分离得到。

解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂的制备方法如下：

解淀粉芽胞杆菌2YN11在LB培养液中28℃180rpm振荡培养12-16h，然后6000rpm离心10min得到菌体，用灭菌水将菌体进行稀释制成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×10⁹-1×10¹⁰CFU/mL。

实施例4解淀粉芽胞杆菌2YN11温室促生试验

方法：将参试番茄用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。每个营养钵播种10粒种子。正常浇水管理4周后，将长势一致的苗移栽至330ml塑料杯中，移栽时将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，每株30mL量。然后置于温室中培养，28℃，70％相对湿度。以清水处理作为对照，每组处理48株苗，随机放置，共重复三次。30d后测定番茄植株株高、茎粗、鲜重、干重等生物量。

生物量增加(％)＝(处理组植株干重-对照植株干重)/对照植株干重×100％

如图3和下表所示，解淀粉芽胞杆菌2YN11能够显著促进番茄的生长，表现在作物的鲜重干重，茎长，茎粗与对照相比，都有显著的增加，结果计算得解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄生物量增加达到31.93％。

表1解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄生物量的影响

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

实施例5解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄田间提高产量试验

方法：将参试番茄用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。每个营养钵播种10粒种子。正常浇水管理4-5周后，将长势一致的苗移栽至温室大棚，移栽时将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，每株200mL量。然后置于温室大棚中生长，以清水处理作为对照，每组处理48株苗，随机放置，共重复三次。80d后测定番茄植株株高、茎粗、叶绿素、结果数、计算产量等生物量。

实验结果(图4和表2、3)显示，解淀粉芽胞杆菌2YN11可使番茄平均产量提升31.70％以上，并且能够显著提高其他生长指标。

表2解淀粉芽胞杆菌2YN11在田间对番茄生长指标以及产量的影响(2015年)

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

表3解淀粉芽胞杆菌2YN11在田间对番茄生长指标以及产量的影响(2016年)

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

实施例6解淀粉芽胞杆菌2YN11温室大棚对土传性病害番茄番茄青枯病的防效试验

方法：将参试番茄种子用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。

将催芽后的番茄种子播种于装有无菌土壤的育苗盘中，每穴一粒，播种前保持土壤较为干燥。待番茄长到4-5叶期时，移栽至装满基质的330ml塑料杯中，将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11生防菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，随后置于温室中培养，28℃，70％相对湿度以上，16/8h光周期。待接种生防菌5天后，进行病原菌的接种，接种浓度为1.0×10⁷CFU/ml，采用灌根的方式接种，接种前所有植株均未发病，接种病原菌3天后，开始发病并统计其发病率，并计算防效。

参照Kempe and Sequeira(1983)提出的青枯病病级标准:0级为没有青枯症状；1级为1－25％的叶片出现萎蔫症状；2级为26－50％的叶片出现萎蔫症状；3级为51－75％的叶片出现萎蔫症状；4级为76－100％的叶片出现萎蔫症状或死亡。

病害严重度％＝[Σ(病级株数×代表级数)/植株总数×最高代表级值]×100％；

防效％＝(对照发病率－处理防病率)/对照发病率×100％.

试验结果(图2、表4)显示，解淀粉芽胞杆菌2YN11能够显著降低番茄青枯病的发病率，其平均防效达高达98.3％。

表4.解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄青枯病的防效

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

实施例7解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理的防治番茄细菌性斑点病试验

方法：将参试番茄种子用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。

将催芽后的番茄种子播种于装有无菌土壤的育苗盘中，每穴一粒，播种前保持土壤较为干燥。待番茄长到4-5叶期时，移栽至330ml的装满基质的塑料杯中，将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11生防菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，随后置于温室中培养，28℃，70％相对湿度以上，16/8h光周期。待接种生防菌5天后，进行病原菌的接种，接种浓度为1.0×10⁷CFU/ml，采用喷施的方法接种，用稀释好的病原菌菌液均匀喷到作物叶片上，喷施到作物叶片上的开始滴下菌液为止。接种前所有植株均未发病，接种病原菌3天后，开始发病并统计其发病率，并计算防效。

病害严重度分级标准:0级:植株无病斑；1级:植株小于25％的叶片发病；2级:植株小于50％大于25％的叶片发病；3级:植株小于75％大于50％的叶片发病；4级:植株大于75％的叶片发病。

病害严重度％＝[Σ(病级株数×代表级数)/植株总数×最高代表级值]×100％；

防效％＝(对照发病率－处理防病率)/对照发病率×100％

试验结果显示，解淀粉芽胞杆菌2YN11能够显著降低番茄细菌性斑点病的发病率，其平均防效达高达61.9％。

表5.解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄细菌性斑点病的防效

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

实施例8解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理的防治番茄病毒病试验

方法：将番茄种子表面消毒(70％无水乙醇浸泡1～2min，0.05％次氯酸钠溶液浸泡10min，灭菌水冲洗6次)，播种于育苗穴盘中并放置于28℃，16/8h光周期、70％相对湿度的温室中进行培育。待番茄苗长到3～4叶期时(25d)进行移栽。将番茄苗移栽至装满基质的盆钵中，每钵一株，置于条件为28℃、16/8h光周期、70％相对湿度的温室内培育。番茄移栽当日进行生防菌第一次灌根处理，灌根处理菌液浓度约为5×10⁷CFU/mL，每株苗用量为30mL，缓慢浇灌于番茄根部，同时进行喷雾处理，菌液浓度为5×10⁷CFU/mL，按照0.01％的终浓度加入表面活性剂吐温-20，对番茄叶片均匀喷雾。番茄移栽7d后进行病毒接种。接种方法为：将没有携带TYLCV的烟粉虱在表现TYLCD症状的番茄植株上饲养48h，然后将待接种的健康植株移至粉虱温室内，每株番茄30头左右，接种3d后使用吡虫啉除去烟粉虱，将各处理移至防虫温室(28℃，16/8h光周期，70％相对湿度)中(Sade D,Eybishtz A,Gorovits R,et al.A developmentally regulated lipocalin-like gene is overexpressed intomato yellow leaf curl virus-resistant tomato plants upon virus inoculation，and its silencing abolishes resistance[J].Plant Molecular Biology.2012,80:273-287.)。以清水处理作为空白对照，每个处理48株苗，3次重复。病毒接种40d左右，统计病情。

番茄黄化曲叶病毒病病情指数分级标准(Friedmann M,Lapidot M,Cohen S,etal.A novel source of resistance to tomato yellow leaf curl virus exhibiting asymptomLess reaction to viral infection[J].Journal of the American Societyfor Horticultural Science.1998,123:1004-1007.)：

0级：无症状；

1级：顶部叶片轻度黄化，叶边缘轻度卷曲，花期花轻度脱落；

2级：顶部叶片中度黄化，叶边缘中度卷曲褶皱，花期花轻度脱落，结果期产量轻度减产；

3级：叶片严重黄化，卷曲，褶皱，花期花中度脱落，结果期产量中度减产；

4级：大面积叶片严重畸形缩小，植株生长缓慢，明显矮化，花期花严重脱落，结果期产量严重减收或绝产。

病害严重度％＝[∑(发病植株数×病级数)/(总植株数×最高病级数)]×100；

生防效果％＝[(对照病害严重度－处理病害严重度)/对照病害严重度]×100

试验结果显示，解淀粉芽胞杆菌2YN11能够显著降低番茄黄化曲叶病毒病的发病率，其平均防效达47.05％。

表6解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄黄化曲叶病毒病的防效

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

实施例9解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理后提高番茄果实品质的试验

方法：将参试番茄种子用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。

将催芽后的番茄种子播种于装有无菌土壤的育苗盘中，每穴一粒，播种前保持土壤较为干燥。待番茄长到4-5叶期时，移栽至330ml的装满基质的塑料杯中，将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11生防菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，每棵番茄灌30ml菌液随后置于温室中培养，28℃，70％相对湿度以上，16/8h光周期。清水作为对照，在温室中生长60～70天后，摘取番茄果实，测定其品质。相关的品质指标有可溶性固形物、可溶性蛋白、可溶性糖、维生素C、可滴定酸、番茄红素。

结果显示，解淀粉芽胞杆菌2YN11能够显著提高各项品质指标，对番茄红素的提升极其明显。

表7解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄各项品质指标的影响(2015)

表8解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄各项品质指标的影响(2016)

实施例10解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理的诱导抗旱性试验

方法：将参试番茄种子用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。

将催芽后的番茄种子播种于装有无菌土壤中盆砵中，每盆一粒，播种前保持土壤较为干燥。待番茄长到6叶期时，将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11生防菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，随后置于温室中培养，1个月后进行断水干旱，干旱胁迫持续15d，干旱胁迫后正常浇水，观察番茄幼苗的恢复生长情况。每组处理48株苗，随机放置，共重复3次。在温室中按照完全随机区组设计摆放。

浇水进行恢复生长1d后，解淀粉芽胞杆菌2YN11处理组植株恢复正常生长，而对照组植株全部死亡。

表9.解淀粉芽胞杆菌2YN11对植物耐旱性的影响

注：不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

实施例11解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理的诱导抗盐性试验

方法：将参试番茄种子用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。

将催芽后的番茄种子播种于装有无菌土壤中盆砵中，每盆一粒，播种前保持土壤较为干燥。待番茄长到4-5叶期时，移栽至装有250g盐土的塑料杯中，盐土浓度为2g/kg。将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11生防菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，每株浇灌20ml。随后置于温室中培养，并观察番茄幼苗的生长情况，20d后测定相关指标。每组处理48株苗，随机放置，共重复3次。在温室中按照完全随机区组设计摆放。

结果(表10)显示，解淀粉芽胞杆菌2YN11处理过后可是番茄生物量增加37.83％，20天后处理组无因盐胁迫而造成的萎蔫，而对照萎蔫率达到20.83％。另外，在盐胁迫下处理组叶片相对含水、根系还原强度和可溶性蛋白都显著高于对照组(图6)，证明2YN11处理过后的番茄抗逆性提高，另外处理组MDA含量要显著低于对照组，证明在盐胁迫下处理组植物细胞氧化损伤要好于对照组。

表10.解淀粉芽胞杆菌2YN11对番茄抗盐性的影响

实施例12解淀粉芽胞杆菌2YN11菌剂处理的诱导番茄抗寒性试验

方法：将参试番茄种子用10％H₂O₂表面消毒10min，无菌水洗净后晾干备用。

将催芽后的番茄种子播种于装有无菌土壤中盆砵中，每盆一粒，播种前保持土壤较为干燥。待番茄长到4-5叶期时，移栽至330ml装满基质的塑料杯中。将悬浮好的解淀粉芽胞杆菌2YN11生防菌剂以1.0×10⁷CFU/mL的浓度灌根施用于作物根部，每株浇灌20ml，对照组用清水代替。菌剂处理5d后，将番茄幼苗转移至低温培养箱(温度4℃，湿度70～80％，光照强度120μmol photons m^-2s^-1，光照时间为16h)中培养，在第7d取叶片进行生理生化指标检验。低温培养7d后将番茄幼苗移回温室继续培养7d，统计处理组和对照组番茄幼苗的存活率。每组处理48株苗，随机放置，共重复3次。在温室中按照完全随机区组设计摆放。

结果显示，在低温胁迫下解淀粉芽胞杆菌2YN11处理过后的番茄存活率到达94.59％，而对照组存活率只有25.56％。另外，在低温胁迫下番茄的MDA含量、相对电导率以及H₂0₂含量处理组均显著低于对照组(图7)，证明解淀粉芽胞杆菌2YN11可以降低低温逆境对番茄细胞的破坏，提高番茄植株的抗逆性。

Claims (9)

1.针对番茄的多种病害防治、促生、果实品质提升、抗逆的解淀粉芽孢杆菌2YN11，该菌株分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2016年6月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.12606；所述的多种病害包括土传病害和地上部病害；所述的促生包括促进番茄地上部和地下部的生长；所述的抗逆包括抗旱、抗寒、耐热、耐涝。

2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌2YN11在防治番茄的土传病害和地上部病害，促进番茄的生长并提高品质和提高其抗逆性中的应用；所述的抗逆包括抗旱、抗寒、耐热、耐涝。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌2YN11在制备能够防治番茄病害、促进其生长及品质提升、提高其抗逆性的制剂中的应用。

4.用权利要求1所述的针对番茄防病、促生、果实品质提升、抗逆的解淀粉芽孢杆菌2YN11制备的菌剂。

5.权利要求4所述的的菌剂，其特征在于通过以下方法制备得到：

权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌2YN11用于制备生防菌剂的方法，其特征在于将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌2YN11在LB培养液中28℃180rpm振荡培养12-16h，然后6000rpm离心10min得到菌体，用灭菌水进行稀释制成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×10⁹-1×10¹⁰CFU/mL。

6.根据权利要求5所述的菌剂，其特征在于通过以下方法制备得到：

权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌2YN11用于制备生防菌剂的方法，其特征在于将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌2YN11在LB培养液中28℃180rpm振荡培养12-16h，然后6000rpm离心10min得到菌体，用灭菌水进行稀释制成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×10⁹-1×10¹⁰CFU/mL。

7.权利要求5或6所述菌剂在番茄防病、促生、果实品质提升、抗逆中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，权利要求5或6所述菌剂在防治番茄的土传病害和地上部病害，促进番茄的生长并提高品质和提高其抗逆性中的应用；所述的抗逆包括抗旱、抗寒、耐热、耐涝。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述的菌剂通过灌根处理。