CN112391313A - 一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用 - Google Patents

一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112391313A
CN112391313A CN202011301265.7A CN202011301265A CN112391313A CN 112391313 A CN112391313 A CN 112391313A CN 202011301265 A CN202011301265 A CN 202011301265A CN 112391313 A CN112391313 A CN 112391313A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus amyloliquefaciens
parts
culture medium
culture
bacterial wilt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011301265.7A
Other languages
English (en)
Inventor
王磊
李镇标
姜峰
郭燕锋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Agricultural University
Original Assignee
South China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Agricultural University filed Critical South China Agricultural University
Priority to CN202011301265.7A priority Critical patent/CN112391313A/zh
Publication of CN112391313A publication Critical patent/CN112391313A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F17/00—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation
    • C05F17/20—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation using specific microorganisms or substances, e.g. enzymes, for activating or stimulating the treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F17/00—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation
    • C05F17/80—Separation, elimination or disposal of harmful substances during the treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C05G3/60—Biocides or preservatives, e.g. disinfectants, pesticides or herbicides; Pest repellants or attractants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens B86，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2020497。本发明所述的解淀粉芽孢杆菌对番茄、辣椒等作物的青枯病具有显著的防治作用，在番茄的种植试验中，可显著降低青枯劳尔氏菌导致的作物青枯病死现象。该菌株可用于农业生物防治相关微生物菌剂的制备及有机肥发酵。

Description

一种解淀粉芽孢杆菌B86及其在防治果蔬青枯病害中的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，尤其是涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其在防治果蔬青枯病害中的应用。
背景技术
近年来番茄等蔬菜作物种植面积越来越大，已经成为农业稳定发展的关键点。由于常年单一的重茬连作致使土壤的理化性质恶化、土壤中有害病菌累积增多，导致番茄、辣椒在种植的过程中频繁爆发土传病害(尤其是青枯病)，严重影响了番茄、辣椒等作物产业的持续发展。
番茄等作物的青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的土传病害，该种土传病原细菌可对多种作物如：番茄、辣椒、茄子、花生、马铃薯等多种重要经济作物造成侵染。目前发现该种病原细菌在水体、土壤以及植物组织中均能长期存活，可通过水、土壤和患病的植株进行传播。病原菌接触到植株后，主要通过植株根部的伤口或者根尖和次生根进入植物的根部，感染植物后造成植物维管束堵塞，最后导致整株植物死亡。目前防治青枯病主要是使用化学药剂，比如农用的农用链霉素和农抗120，大量使用农药造成环境的污染、食品安全和病菌产生耐药的问题。
生物防治是一种环保、经济、高效的方法，目前能用于果蔬青枯病防治的菌株主要有芽孢杆菌属、假单胞杆菌属和链霉菌属等。芽孢杆菌是一类好氧或兼性厌氧、产芽孢的革兰氏阳性菌的总称，它的特点是能产生耐热抗逆的芽孢，有利于抑菌剂生产、剂型加工以及繁殖。
发明内容
基于此，本发明的一个目的在于，提供一种新的解淀粉芽孢杆菌B86，其能够拮抗青枯劳尔氏菌的生长，能有效防治农作物的青枯病害的传播，并逐渐改善恶化的土壤环境。
本发明采用的技术方案如下：
一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens B86，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2020497。
相对于现有技术，本发明所述解淀粉芽孢杆菌B86对多种造成土传病原真菌都有较好的抑制作用，可用于农作物的病害防治及微生物发酵有机功能肥的制备。
本发明的另一个目的在于提供所述的解淀粉芽孢杆菌B86在防治果蔬青枯病害中的应用。
进一步地，所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法包括以下步骤：
S1接种：所述解淀粉芽孢杆菌B86以1.0×105～5.0×108个/ml接种浓度、0.5％～5％接种量接种于培养基中；
S2培养：将接种有所述解淀粉芽孢杆菌B86的培养基，于28℃～37℃，恒温培养12～48小时。
进一步地，所述培养基包括以下重量份的原料：氯化钠5份、胰蛋白胨8份、酵母粉5份、葡萄糖15份，无菌水1000份，所述培养基的pH为7.5±0.5。
进一步地，步骤S1中的接种浓度为3.0×108个/ml。
进一步地，步骤S1中的菌液与培养基体积比接种量为5％。
进一步地，步骤S2中的培养时长为18小时。
进一步地，步骤S2中，于28℃培养时，以150～220rpm/min速度摇动。
相对于现有技术，本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86在生产和使用过程中，具有更加宽泛的pH、温度和浓度适应范围，更加有利于在农业生产上的应用。
为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。
附图说明
图1为本发明所述的解淀粉胞菌B86培养48h后的菌落形态图；
图2为本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86的16S rRNA序列的PCR扩增核酸电泳图；
图3为基于本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86与相似菌种的16SrRNA序列条形码构建的进化树；
图4为本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86与解淀粉芽孢杆菌Bacillusdecolorationis KMGL1309-AS2的16SrRNA序列比对图；
图5为本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86的青枯劳尓氏菌的抑制效果图；其中，B86为解淀粉芽孢杆菌对青枯劳尓氏菌的抑菌效果，CK为无菌水对青枯劳尓氏菌的抑菌效果；
图6为本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86在番茄种植中的应用效果；其中对照组为空白对照组的应用效果，B86实验组为解淀粉芽孢杆菌B86菌液处理组的应用效果。
具体实施方式
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌，命名为Bacillus amyloliquefaciens B86，于2020年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国湖北省武汉市武汉大学校内中国典型培养物保藏中心)，保藏编号为CCTCC NO:2020497。
实施例一：分离纯化方法
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86的分离纯化方法，步骤如下：
S1：称取10g的土壤样品，所述土壤样品来自广东省海陵岛红树林国家湿地公园；然后，于超净工作台中，向土壤样品中添加90ml无菌水，置于振荡器上振荡60min，使土样均匀地分散在稀释液中成为土壤悬液；待土壤分散后，吸取100ul土壤悬液到900ul无菌水中得到10倍稀释液，然后依次稀释10倍，得到102倍稀释液、103倍稀释液、104倍稀释液、105倍稀释液和106倍稀释液，整个过程在超净工作台中进行。
S2：取100ul的10倍稀释液、102倍稀释液、103倍稀释液、104倍稀释液、105倍稀释液和106倍稀释液分别涂布于2216E琼脂固体培养板上，然后将培养板置于培养箱28℃恒温培养2～3天，培养板上长出菌斑。
S3：培养结束后，根据菌落生长情况从适当稀释梯度平板一一挑取形状、颜色、大小等不同的单菌斑进行平板划线，分离出本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86。本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86在2216E琼脂固体培养板上的形态如附图1所示，单菌落为黄白色圆形或椭圆形，菌落表面不光滑，边缘整齐并且有凸起褶皱。
S4：从2216E挑取已纯化培养的菌株，接种于内含200ml 2216E液体培养基的500ml锥形瓶中，在28℃，180rpm恒温摇床培养条件下培养32h，制得种子液。
所述2216E琼脂固体培养基的配方按照以下重量份组成：蛋白胨5份、酵母浸粉1份、柠檬酸铁0.1份、氯化钠19.45份、氯化镁5.98份、硫酸钠3.24份、氯化钙1.8份、氯化钾0.55份、碳酸钠0.16份、溴化钾0.08份、氯化锶0.034份、硼酸0.022份、硅酸钠0.004份、氟化钠0.0024份、硝酸钠0.0016份、磷酸氢二钠0.008份、琼脂15份、无菌水1000份。配制方法为：称取和量取上述各组分后，将各组分搅拌溶解在无菌水中后分装至锥形瓶中，然后将锥形瓶用灭菌纸封口后，置于灭菌锅内121℃、101KPa高压蒸汽灭菌20min，待灭菌锅温度降至70℃以下，压力恢复至0KPa时取出，于超净台上倒入培养皿中，每个培养皿约倒入20ml培养基，冷却凝固后，将固体培养板于4℃保存。
所述2216E液体培养基的配方按照以下重量份组成：蛋白胨5份、酵母浸粉1份、柠檬酸铁0.1份、氯化钠19.45份、氯化镁5.98份、硫酸钠3.24份、氯化钙1.8份、氯化钾0.55份、碳酸钠0.16份、溴化钾0.08份、氯化锶0.034份、硼酸0.022份、硅酸钠0.004份、氟化钠0.0024份、硝酸钠0.0016份、磷酸氢二钠0.008份、无菌水1000份。称取和量取上述各组分后，将各组分搅拌溶解在无菌水中后分装至锥形瓶中，然后将锥形瓶用灭菌纸封口后，置于灭菌锅内121℃、101KPa高压蒸汽灭菌20min，待灭菌锅温度降至70℃以下，压力恢复至0KPa时取出，保存备用。
实施例二：培养方法
S1接种：将实施例一所得的种子液以2×106个/ml接种浓度、2％菌液与培养基体积比接种量接种于内含300m解淀粉芽孢杆菌B86液体培养基的1000ml锥形瓶中；
S2培养：将接种有所述解淀粉芽孢杆菌B86的培养基，于28℃，180rpm恒温摇床条件下培养48h，制得本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86菌液。
由于本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86在自身的生长过程中，一方面会与病原菌竞争营养物质，并且和病原菌竞争植物表面的结合位点，从而降低病原菌的致病能力；另一方面，本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86能够分泌出抗菌物质，通过抗菌的物质来抑制病原菌生长，从而达到生物防治的作用。
所述的解淀粉芽孢杆菌B86培养基配制方法：氯化钠5份、胰蛋白胨8份、酵母粉2份、葡萄糖20份，无菌水1000份。配制方法为：称取和量取上述各组分后，将各组分搅拌溶解在无菌水中后调整pH到7.5±0.5，然后分装至锥形瓶中，将锥形瓶用灭菌纸封口后，分装至锥形瓶，置于灭菌锅内121℃、101KPa高压蒸汽灭菌20min，待灭菌锅温度降至70℃以下，压力恢复至0KPa时取出，保存备用。
实施例三：PCR扩增16S rRNA序列并测序
S1：基因组DNA的提取
采用Omega Bacterial DNA Kit(D3350-01)试剂盒提取基因组DNA。首先，取实施例一中所述的种子液2ml于无菌的2ml离心管中，12000rpm离心2min，弃上清保留沉淀；然后，向沉淀中加入100ul 1×TE Buffer，涡旋混匀，加入10ul溶菌酶混匀，37℃温浴10min；加入100ul BTL Buffer和20ul蛋白酶K，混匀，55℃温浴1h，中间振荡混匀三次；加入5ulRNaseA酶，混匀，室温静置5min后，10000rpm离心2min，取200ul上清液转移至新的无菌的1.5ml离心管中；加入200ul BTL Buffer，混匀，置于65℃温浴10min；加入200ul无水乙醇，涡旋混匀，将样品全部转移至吸附柱中，10000rpm离心2min，弃上清和吸附柱，将吸附柱放入新的收集管中；向吸附柱中加入500ul HBC Buffer，10000rpm离心2min，弃上清；向吸附柱上加入700ul DNA Wash Buffer，10000rpm离心2min，弃上清，重复两次；将空的吸附柱重新放入收集管中，10000rpm离心2min；向吸附柱中加入用30ul～50ul Elution Buffer(已于65℃预热)溶解DNA沉淀，即得到基因组DNA，-20℃保存备用。
S2：PCR扩增16SrRNA序列
以步骤S1所得基因组DNA为模板，Eubac27F和Eubac1492R为引物进行PCR扩增，PCR反应体系(50μl)如下：
Figure BDA0002786913880000041
Figure BDA0002786913880000051
PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s、55℃复性30s、72℃延伸1min，变性、复性和延伸的过程反复循环30次；72℃再延伸10min，4℃保存PCR扩增产物。
所述上游引物Eubac27F的序列为：5-AGAGTTTGAT CCTGGCTCAG-3
所述下游引物Eubac1492R的序列为：5-GGTTACCTTG TTACGACTT-3
S3：PCR产物进行核酸电泳
取5ul步骤S2所得的PCR产物点样后于120V电压下进行核酸电泳25min。电泳结果如附图2所示，以本发明所述的解淀粉芽孢杆菌的基因组DNA为模板扩增出的16SrRNA片段条带单一且亮度高，且16SrRNA序列长度约为1500bp。
S4：16SrRNA序列进行测序
步骤S2所得的PCR产物经纯化回收后，取30ul纯化产物送广州擎科生物技术有限公司进行序列双向测通测定，测序结果显示本发明所述解淀粉芽孢杆菌的16SrRNA序列长度为1453bp，具体序列如下所示：
Figure BDA0002786913880000052
Figure BDA0002786913880000061
实施例四：构建系统进化树
将实施例三所得的本发明所述解淀粉芽孢杆菌B86的16SrRNA序列输入NCBI中，进行BLAST比对，并基于条形码16SrRNA区段序列构建NJ系统进化树。如附图3所示，根据系统进化树本发明所得的菌株，与解淀粉芽孢杆菌的16SrRNA条形码数据库中大部分序列高度相似但不存在完全重合。因此可知，本发明所得的菌株在分类上属于解淀粉芽孢杆菌，且为一个新种。
实施例五：近源物种比对
将实施例三所得的本发明所述解淀粉芽孢杆菌B86的16SrRNA序列输入NCBI中，与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens BA17的16SrRNA序列进行比对，比对结果如附图4所示，本发明所述解淀粉芽孢杆菌的16SrRNA序列与的16SrRNA序列同源性为99％，但并不完全相同，两者之间存在3个碱基的差异。进一步看出，本发明所得的菌株在分类上属于解淀粉芽孢杆菌，且为解淀粉芽孢杆菌的一个新的菌种，暂时命名为Bacillusamyloliquefaciens B86。
实施例六：测定对青枯劳尔氏菌抑制效果的方法
S1接种：将实施例一所得的种子液以106个/ml接种浓度、2％菌液与培养基体积比接种量接种于内含300ml LB液体培养基的1000ml锥形瓶中；
S2培养：将接种有所述解淀粉芽孢杆菌B86的培养基，于28℃，180rpm恒温摇床条件下培养48h，制得本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86菌液；
S3重悬：培养结束后，12000rpm离心2min收集菌体沉淀，去除上清液，用无菌水重悬沉淀，并且将重悬液的菌密度调节至108个/ml；
S4病原菌的培养：将保存于4℃冰箱中的接种有病原菌的NA斜面培养基取出，用灭菌后的接种环挑取菌丝于新的NA培养基上，28℃培养，活化24h；挑取单菌落于NA液体培养基，220rpm恒温摇床条件下培养24h；12000rpm离心2min收集菌体沉淀，用无菌水重悬沉淀，加入融化后45℃的NA固体培养基中并调节菌密度为108个/ml；
S5解淀粉芽孢杆菌的拮抗作用：将直径为6mm的灭菌后的滤纸片加入S3中所述的重悬液中处理3h，取出放置于S4中所述的含病原菌的NA培养基中，以无菌水处理过得滤纸片作为阴性对照，28℃恒温培养48h，测量抑菌圈大小；
实验结果如附图5所示，解淀粉芽孢杆菌B86在对青枯劳尔氏菌的抑制实验中，抑菌圈的直径大小为：22mm，具有良好的抑制作用。
实施例七：解淀粉芽孢杆菌在番茄种植中的应用效果
实验在华南农业大学实验教学基地番茄种植大棚进行，该大棚为番茄种植重茬大棚，青枯病频发，上一季番茄病死率达30％以上。
实验组，10行，每行50棵，解淀粉芽孢杆菌B86发酵液稀释100倍，定植时番茄苗在解淀粉芽孢杆菌B86发酵稀释液中蘸根30秒后定植土中，定植后将稀释500倍的解淀粉芽孢杆菌B86菌液通过滴灌灌注到根系，每亩地使用菌液800ml。定植后间隔15天，将稀释500倍的解淀粉芽孢杆菌B86菌液通过滴灌灌注到根系，每亩地使用菌液800ml，共灌注5次。盛果期计算成活棵属，计算成活率。
空白对照组，10行，每行50棵，实验过程与实验组平行进行，用水代替解淀粉芽孢杆菌B86菌液。
实验结果如附图6所示，实验组400棵番茄最终成活率92％，空白对照组成活率69％。解淀粉芽孢杆菌菌液B86的使用，大大提高了番茄的成活率，降低了病死率。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Figure BDA0002786913880000081
Figure BDA0002786913880000091
序 列 表
<110> 华南农业大学
<120> 一种解淀粉芽孢杆菌B86及其在防治果蔬青枯病害中的应用
<160> 13
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 1456
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 本发明所述的解淀粉芽孢杆菌B86的16SrRNA序列
<400> 1
ACACTCTCTG TCACTTCGGC GGCTGGCTCC TAAAGGTTAC CTCACCGACT TCGGGTGTTA 60
CAAACTCTCG TGGTGTGACG GGCGGTGTGT ACAAGGCCCG GGAACGTATT CACCGCGGCA 120
TGCTGATCCG CGATTACTAG CGATTCCAGC TTCACGCAGT CGAGTTGCAG ACTGCGATCC 180
GAACTGAGAA CAGATTTGTG GGATTGGCTT AACCTCGCGG TTTCGCTGCC CTTTGTTCTG 240
TCCATTGTAG CACGTGTGTA GCCCAGGTCA TAAGGGGCAT GATGATTTGA CGTCATCCCC 300
ACCTTCCTCC GGTTTGTCAC CGGCAGTCAC CTTAGAGTGC CCAACTGAAT GCTGGCAACT 360
AAGATCAAGG GTTGCGCTCG TTGCGGGACT TAACCCAACA TCTCACGACA CGAGCTGACG 420
ACAACCATGC ACCACCTGTC ACTCTGCCCC CGAAGGGGAC GTCCTATCTC TAGGATTGTC 480
AGAGGATGTC AAGACCTGGT AAGGTTCTTC GCGTTGCTTC GAATTAAACC ACATGCTCCA 540
CCGCTTGTGC GGGCCCCCGT CAATTCCTTT GAGTTTCAGT CTTGCGACCG TACTCCCCAG 600
GCGGAGTGCT TAATGCGTTA GCTGCAGCAC TAAGGGGCGG AAACCCCCTA ACACTTAGCA 660
CTCATCGTTT ACGGCGTGGA CTACCAGGGT ATCTAATCCT GTTCGCTCCC CACGCTTTCG 720
CTCCTCAGCG TCAGTTACAG ACCAGAGAGT CGCCTTCGCC ACTGGTGTTC CTCCACATCT 780
CTACGCATTT CACCGCTACA CGTGGAATTC CACTCTCCTC TTCTGCACTC AAGTTCCCCA 840
GTTTCCAATG ACCCTCCCCG GTTGAGCCGG GGGCTTTCAC ATCAGACTTA AGAAACCGCC 900
TGCGAGCCCT TTACGCCCAA TAATTCCGGA CAACGCTTGC CACCTACGTA TTACCGCGGC 960
TGCTGGCACG TAGTTAGCCG TGGCTTTCTG GTTAGGTACC GTCAAGGTGC CGCCCTATTT 1020
GAACGGCACT TGTTCTTCCC TAACAACAGA GCTTTACGAT CCGAAAACCT TCATCACTCA 1080
CGCGGCGTTG CTCCGTCAGA CTTTCGTCCA TTGCGGAAGA TTCCCTACTG CTGCCTCCCG 1140
TAGGAGTCTG GGCCGTGTCT CAGTCCCAGT GTGGCCGATC ACCCTCTCAG GTCGGCTACG 1200
CATCGTCGCC TTGGTGAGCC GTTACCTCAC CAACTAGCTA ATGCGCCGCG GGTCCATCTG 1260
TAAGTGGTAG CCGAAGCCAC CTTTTATGTC TGAACCATGC GGTTCAGACA ACCATCCGGT 1320
ATTAGCCCCG GTTTCCCGGA GTTATCCCAG TCTTACAGGC AGGTTACCCA CGTGTTACTC 1380
ACCCGTCCGC CGCTAACATC AGGGAGCAAG CTCCCATCTG TCCGCTCGAC TGCATTATAG 1440
ACCCGCCTCC AAT 1453
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 上游引物Eubac27F
<400> 2
AGAGTTTGAT CCTGGCTCAG 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 下游引物Eubac1492R
<400> 3
GGTTACCTTG TTACGACTT 19

Claims (8)

1.一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens B86，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2020497。
2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌B86在防治果蔬青枯病害中的应用。
3.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法，其特征在于包括以下步骤：
S1接种：所述解淀粉芽孢杆菌以1.0×105～5.0×108个/ml接种浓度、0.5％～5％菌液与培养基体积比接种量接种于培养基中；
S2培养：将接种有所述解淀粉芽孢杆菌培养基，于28℃～37℃，恒温震荡培养12～48小时。
4.根据权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法，其特征在于，所述培养基包括以下重量份的原料：氯化钠5份、胰蛋白胨8份、酵母粉2份、葡萄糖20份，无菌水1000份，所述培养基的pH为7.5±0.5。
5.根据权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法，其特征在于：步骤S1中的接种浓度为5.0×108个/ml。
6.根据权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法，其特征在于：步骤S1中的菌液与培养基体积比接种量为5％。
7.根据权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法，其特征在于：步骤S2中的培养时长为18小时。
8.根据权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌B86的培养方法，其特征在于：步骤S2中，于28℃培养时，以150～220rpm/min转速摇动。
CN202011301265.7A 2020-11-19 2020-11-19 一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用 Pending CN112391313A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011301265.7A CN112391313A (zh) 2020-11-19 2020-11-19 一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011301265.7A CN112391313A (zh) 2020-11-19 2020-11-19 一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112391313A true CN112391313A (zh) 2021-02-23

Family

ID=74607459

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011301265.7A Pending CN112391313A (zh) 2020-11-19 2020-11-19 一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112391313A (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102757917A (zh) * 2011-12-28 2012-10-31 浙江大学 防治植物青枯病和根肿病的生防制剂及其制备方法和应用
CN103087960A (zh) * 2013-01-29 2013-05-08 江苏省农业科学院 一株解淀粉芽孢杆菌fqs38及其应用
CN104726383A (zh) * 2015-04-15 2015-06-24 华南农业大学 解淀粉芽孢杆菌jk6及生物肥和应用
CN104911129A (zh) * 2015-06-10 2015-09-16 湖南泰谷生物科技股份有限公司 防治番茄青枯病的解淀粉芽孢杆菌菌株及其微生物有机肥
CN105132336A (zh) * 2015-10-10 2015-12-09 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一株解淀粉芽孢杆菌及其菌剂和应用
CN105950506A (zh) * 2016-05-20 2016-09-21 宁波市农业科学研究院 一株用于防治番茄青枯病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN107858300A (zh) * 2017-05-31 2018-03-30 南京农业大学 针对番茄的防病、促生、品质提升以及抗逆的解淀粉芽胞杆菌2yn11及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102757917A (zh) * 2011-12-28 2012-10-31 浙江大学 防治植物青枯病和根肿病的生防制剂及其制备方法和应用
CN103087960A (zh) * 2013-01-29 2013-05-08 江苏省农业科学院 一株解淀粉芽孢杆菌fqs38及其应用
CN104726383A (zh) * 2015-04-15 2015-06-24 华南农业大学 解淀粉芽孢杆菌jk6及生物肥和应用
CN104911129A (zh) * 2015-06-10 2015-09-16 湖南泰谷生物科技股份有限公司 防治番茄青枯病的解淀粉芽孢杆菌菌株及其微生物有机肥
CN105132336A (zh) * 2015-10-10 2015-12-09 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一株解淀粉芽孢杆菌及其菌剂和应用
CN105950506A (zh) * 2016-05-20 2016-09-21 宁波市农业科学研究院 一株用于防治番茄青枯病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN107858300A (zh) * 2017-05-31 2018-03-30 南京农业大学 针对番茄的防病、促生、品质提升以及抗逆的解淀粉芽胞杆菌2yn11及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112175888B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌Hsg1949及其应用
CN113005056B (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌hy19及其应用
CN113717901A (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治多种蔬菜病害中的应用
CN110066756B (zh) 一株克里布所类芽孢杆菌及其制剂和应用
CN109456921B (zh) 一种多粘类芽孢杆菌、应用及微生物菌剂、粉剂和颗粒剂
CN115927066A (zh) 一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用
CN113943660B (zh) 一株用于防控连作土传枯萎病的篮状菌属真菌njau-l8及其应用
CN112522144B (zh) 一种碰碰香内生贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN106434409A (zh) 一株体外高效拮抗稻瘟病菌的水稻内生放线菌OsiLf‑2
CN113846039B (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112342173B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN108865934B (zh) 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用
CN114437994A (zh) 一种生物防治菌Bacillus siamensis HT1及其在制备生防菌剂中的应用
CN113755389A (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN113444651A (zh) 一种西红花内生真菌及其在防治球茎腐烂病中的应用
CN111073827B (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌jtb8-2及在瓜列当生物防治中的应用
CN101092599A (zh) 一种防病植物内生枯草芽孢杆菌
CN112409100A (zh) 一种防治姜土传病害的微生物有机功能肥及其制备方法
CN116904322B (zh) 一种生防菌卷霉及其应用
CN112175876B (zh) 一种脱色芽孢杆菌及其在拮抗果蔬真菌病害中的应用
CN111109026A (zh) 一种水稻生长过程中病害的生物防治方法及应用
CN113151091B (zh) 一种罗氏假单胞菌pr415及其应用
CN112391313A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌b86及其在防治果蔬青枯病害中的应用
CN111304135B (zh) 一种芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用
CN115851479A (zh) 一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210223