CN115851479A - 一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌及其应用 - Google Patents

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CN115851479A
CN115851479A CN202210864703.3A CN202210864703A CN115851479A CN 115851479 A CN115851479 A CN 115851479A CN 202210864703 A CN202210864703 A CN 202210864703A CN 115851479 A CN115851479 A CN 115851479A
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王傲雪
李天天
陈秀玲
李英慧
张瑶
程谟桢
仇有文
冯明芳
王迎春
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Abstract

本发明涉及一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌及其应用,属于农业生物防治技术领域。为开发更多用于番茄灰霉病生物防治的安全高效的生防微生物,本发明提供了一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌,其分类命名为暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis),具有抑菌谱广、拮抗作用强的特点,能够有效抑制番茄灰霉病菌等作物致病菌的生长,能够广泛应用于农业生物防治领域,可用于防治灰霉病、枯萎病、炭疽病、茎腐病和菌核病等真菌引起的作物病害。本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs‑9还能够促进番茄种子发芽,促进幼苗植株生长量和根系的发育;还具有防腐保鲜的作用,能够降低果实的腐烂率,具有广泛的生防用途。

Description

一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌及其应用
技术领域
本发明属于农业生物防治技术领域,尤其涉及一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌及其应用。
背景技术
番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌引起的一种真菌性病害,其孢子可通过空气为介质进行传播,也是坏死性病原菌之一。番茄灰霉病的病原菌可在土壤中存在多时,可造成周年危害,一旦染病会造成番茄大面积减产,严重的导致绝收,而且会造成番茄果实品质下降。化学防治仍然是防治番茄灰霉病的主要方法,但其弊端也越来越明显。已有研究表明部分化学农药的作用逐渐减弱,甚至病原菌对混合使用的化学农药产生抗药性。而且随着化学农药的大量使用,化学制剂残留于土壤,造成土壤自然环境失衡;农药残留于果蔬上危害人体健康。如何有效、安全地预防和治理灰霉病是番茄种植过程中的重大问题之一。为适应“绿色有机蔬菜”和“可持续发展”的要求,响应国家“两减”政策,生物农药在市场上逐渐受到欢迎,前景十分广阔。但目前,针对番茄病害的生物防治技术仍不成熟,仍需要开发更多安全、高效的生防微生物用于番茄灰霉病的生物防治。
发明内容
为开发更多用于番茄灰霉病生物防治的安全高效的生防微生物,本发明提供了一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌及其应用。
本发明的技术方案:
一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌,所述生防芽孢杆菌的分类命名为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis),于2022年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCCNo.25088。
进一步的,所述暹罗芽孢杆菌的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
一株对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在农业生物防治方面的应用。
进一步的,所述农业生物防治包括将所述暹罗芽孢杆菌用于防治黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病或甜瓜枯萎病,以及番茄枯萎病菌、轮支镰刀菌、尖孢镰刀菌、葵花菌核病菌、玉米茎基腐病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害。
一株对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。
进一步的,所述应用的具体方法是使用所述暹罗芽孢杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。
一株对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在水果蔬菜防腐保鲜方面的应用。
进一步的,所述应用的具体方法是使用所述暹罗芽孢杆菌菌悬液浸泡处理水果蔬菜。
一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌的菌悬液。
进一步的,所述菌悬液的制备方法为:挑取所述暹罗芽孢杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中,28℃、200r/min培养2d即得到菌液浓度为1×109cfu/mL的菌悬液。
本发明的有益效果:
本发明提供的对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌Bs-9的分类命名为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis),抑菌谱广、拮抗作用强,能够有效抑制番茄灰霉病菌、番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病、黄瓜炭疽病、玉米茎基腐病菌、木贼镰刀菌、尖孢镰刀菌、葵花菌核病菌、轮支镰刀菌、甜瓜枯萎病的生长,能够广泛应用于农业生物防治领域,可用于防治灰霉病、枯萎病、炭疽病、茎腐病和菌核病等真菌引起的作物病害。
本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9能够产生植物生长素IAA;能够分泌蛋白酶和嗜铁素;其无菌上清液和沉淀水溶液具有抑菌作用;能够产生抑菌粗蛋白和脂肽类抗生素;乙酸乙酯粗提产物具有抑菌效果;能够产生挥发性物质抑制病原菌生长。
本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9能够促进番茄种子发芽,促进幼苗植株生长量和根系的发育。同时,暹罗芽孢杆菌Bs-9还具有防腐保鲜的作用,能够降低果实的腐烂率。
附图说明
图1为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的菌落形态照片;
图2为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的显微形态照片;
图3为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的系统发育树;
图4为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的生长曲线图;
图5为本发明提供的暹罗亚宝杆菌Bs-9的生物膜形成检测结果照片;
图6为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9对9种植物病原菌的抑菌效果照片;
图7为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9对灰葡萄孢菌的抑菌效果对比照片;
图8为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9对离体叶片番茄灰霉病的防治效果对比照片;
图9为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9对果实番茄灰霉病的防治效果对比照片;
图10为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9对温室番茄灰霉病的防治效果对比照片;
图11为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9促进番茄种子发芽的效果对比图;
图12为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9促进番茄胚根生长的效果对比图;
图13为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9对根系指标的影响结果照片;
图14为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的IAA检测结果对比照片;
图15为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的无菌上清液和沉底菌体抑菌效果照片;
图16为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9的蛋白酶、嗜铁素和HCN检测结果照片;
图17为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9抗菌粗蛋白和脂肽类抗生素检测结果照片;
图18为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9乙酸乙酯萃取活性物质检测结果照片;
图19为本发明提供的暹罗芽孢杆菌Bs-9挥发性物质检测结果照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明,但并不局限于此,凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置,若未特别指明,本发明实施例中所用的原料等均可市售获得;若未具体指明,本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
本实施例提供了生防细菌的筛选和鉴定结果。
本实施例采用平板稀释涂布法和平板划线法从植物的根际土中分离纯化得到多株细菌,以番茄灰霉病菌作为指示菌,采用平板对峙法,获得一株对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌,将其编号为Bs-9,对该菌株进行形态特性、生理生化特性及分子生物学鉴定。
(1)形态学特征
将该菌种接种于LB固体培养基上划线培养,28℃培养48h,菌落呈乳白色,圆形,表面褶皱,边缘不规则且凸起,中间凹陷,干燥,不透明,其菌落形态见图1;经显微镜油镜观察,菌株Bs-9在革兰氏染色后菌体呈紫色、杆状,单个或成对排列,长短不一,为革兰氏阳性,其微观形态见图2。
(2)生理生化特性
从好氧或厌氧性试验、葡萄糖氧化发酵试验、NaCl耐受试验、甲基红M.R试验、V.P.试验、明胶液化试验、接触酶试验、淀粉水解试验鉴定菌株Bs-9的生理生化特性。
结果显示菌株Bs-9属于好氧型细菌,葡萄糖氧化发酵型,耐盐度达12%,甲基红M.R试验和V.P.试验表现为阴性,明胶液化试验、接触酶试验、淀粉水解试验等均表现为阳性。生长温度范围4-37℃。
(3)16SrDNA序列测定及系统进化分析:
以Bs-9基因组DNA为模板,扩增为16S rDNA的通用引物,得到约1400bp的PCR产物。采用柱式PCR产物,扩增所得片段符合常规的16S rDNA序列长度。对PCR扩增产物进行回收,纯化回收后产物送到北京六合华大基因科技有限公司进行测序。
将菌株Bs-9的16S rDNA序列提交到NCBI的GenBanK数据库中并进行Blast比对,并与已报道的序列进行同源性比对。MEGA6.06软件采用Neighbor-Joining法,构建得到由图3所示的菌株Bs-9和10株模式菌株的系统发育树,经过1000次的相似度重复计算。“T”表示模式菌株。与菌株Bs-9同源性较高的为Bacillus siamensis strain cqsM9 T(MN826567.1)。
通过对菌株Bs-9的形态观察、生理生化等指标鉴定和16S rDNA序列分析,将菌株Bs-9鉴定为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis),并于2022年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.25088。
实施例2
本实施例测定了暹罗芽孢杆菌Bs-9的生长曲线和生物膜形成能力。
生长曲线的具体测定方法为:
将进行分离纯化后的暹罗芽孢杆菌Bs-9菌株接种在100mL LB液体培养基中,28℃,200rpm/min培养24h,为种子液备用。按2%(V/V)接种量,将种子液接种在新配置的100mL LB液体培养基中,28℃,200rpm/min培养。从0h开始每隔6h取样,未接种子液LB液体培养基为对照,紫外分光光度计测定OD600值,共计测量48h。试验3次重复。绘制Bs-9生长曲线,横坐标为培养时间,纵坐标为OD600值。结果如图4所示。
暹罗芽孢杆菌Bs-9菌株的生长曲线大致趋近于“S”型曲线,随着培养时间增长菌量增加。0-6h时菌株生长缓慢,6-30h时菌量增多,生长空间和营养物质充足,菌株大量繁殖,增长迅速;30h以后,菌量逐渐达到最大值,由于空间限制和营养物质耗尽,菌量增长趋于缓慢直至稳定。
生物膜形成能力的具体测定方法为:
将暹罗芽孢杆菌Bs-9菌株接种到LB液体培养基,28℃,200rpm/min培养1d。将4mL菌液于无菌试管底部,28℃静置培养2d。弃菌液,用无菌水多次清洗试管内壁,后加入5mL1%的结晶紫染液,28℃静置15min,弃结晶紫,无菌水清洗三次,试管壁有蓝紫色产生则说明菌株可产生生物膜。结果如图5所示。
在加入结晶紫染液并用无菌水冲洗后,试管壁有蓝紫色物质形成,表明暹罗芽孢杆菌Bs-9菌株可以产生生物膜。生物膜可以提高细菌对自身的生存能力,同时提高菌群密度,以此提高生防细菌分泌胞外酶和抗菌物质浓度。生防细菌以生物膜这种形式存在,可以有效发挥生防细菌的促生和抗病等作用。
实施例3
本实施例将实施例1筛选得到的暹罗芽孢杆菌与多种植物病原菌进行平板对峙试验,测定暹罗芽孢杆菌的抑菌谱。
测试植物病原菌包括:番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病、黄瓜炭疽病、玉米茎基腐病菌、木贼镰刀菌、尖孢镰刀菌、葵花菌核病菌、轮支镰刀菌和甜瓜枯萎病;均保存于东北农业大学园艺生物技术实验室。
具体测试方法如下:
暹罗芽孢杆菌Bs-928℃恒温,200r/min培养24h,得到菌悬液。用无菌接种针将制作好的5mm病原菌饼,置于灭菌晾干的PDA固体培养中间,用无菌枪头蘸取菌悬液于距离3cm等距点处,28℃恒温箱培养7d,测量抑菌带宽带。结果如表1和图6所示:
表1
Figure SMS_1
由表1数据可以看出,暹罗芽孢杆菌Bs-9对测试的9种植物病原真菌均能产生抑菌带,其中番茄枯萎病菌的抑菌带最宽。暹罗芽孢杆菌Bs-9对上述病原真菌的生长均具有较强的拮抗作用,这充分说明暹罗芽孢杆菌Bs-9作为生防菌的抑菌谱较广、抑菌作用较强。
实施例4
本实施例考察了暹罗芽孢杆菌Bs-9对番茄灰霉病的防治效果。
(1)平板对峙实验
暹罗芽孢杆菌Bs-928℃恒温,200r/min培养24h,得到菌悬液,作为对照同时测定了东北农业大学园艺园林学院实验室保存的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs wy-1的菌悬液的平板对峙实验。用无菌接种针将制作好的5mm病原菌饼,置于灭菌晾干的PDA固体培养中间,用无菌枪头蘸取菌悬液于距离3cm等距点处,28℃恒温箱培养7d,测量抑菌带宽带。结果如表2和图7所示。
表2
Figure SMS_2
通过平板对峙试验可以看出,Bs-9抑菌带宽度为1.3cm,Bs wy-1抑菌带宽度为0.8cm,Bs-9对番茄灰霉病均的抑制效果优于Bs wy-1。
(2)番茄叶片离体实验
番茄灰霉病分级标准:
番茄在遭受灰霉病侵害后,会出现叶片褪绿现象。在离体叶片实验中,用番茄离体叶片褪绿面积为发病等级指标;离体番茄果实试验中,依照果实病斑直径确定发病等级;温室盆栽实验中,依照叶片病斑面积计算植株发病情况,病害等级如表3所示。
表3番茄灰霉病分级标准
Figure SMS_3
计算公式:
Figure SMS_4
Figure SMS_5
番茄叶片离体实验的具体方法:
灰霉病原菌孢子悬液制备:取产孢量大的灰霉病原菌,用无菌水冲洗培养基表面,并请用灭菌枪头在菌丝表面划线,刮落孢子,过滤菌丝。用分光光度计和血球计数板调节浓度为1×106cfu/mL。
摘取无病害的番茄叶片,75%酒精浸泡30s,后用无菌水冲洗3次;3%次氯酸钠浸泡3min,水洗3次。将晾干的叶片放置于放有无菌滤纸的培养皿中,叶柄用浸湿无菌脱脂棉包裹,叶片均匀涂抹Bs-9(1×109cfu/mL)菌液、Bs wy-1(1×109cfu/mL)菌液和无菌水,晾干后用浓度为1×106cfu/mL的灰霉病原菌孢子悬液均匀涂抹叶片,25℃恒温培养,逐日观察并记录发病情况。每次处理20片叶片,试验3次重复。结果如表4和图8所示。
表4叶片病情指数
Figure SMS_6
表4数据显示,Bs-9、Bs wy-1和无菌水处理中,Bs-9病情指数最低,为32.78,防治效果为50.84;与Bs wy-1相比病情指数降低了2.03,防治效果提高了2.97%;与对照相比病情指数降低了32.26。Bs-9、Bs wy-1和无菌水相比差异显著。
(3)番茄果实离体实验
试验采用无病害“千禧”番茄,75%酒精浸泡30s,后用无菌水冲洗3次;3%次氯酸钠浸泡3min,水洗3次。晾干,浸泡于Bs-9(1×109cfu/mL)菌液、Bs wy-1(1×109cfu/mL)菌液和无菌水,晾干后接种针挑取灰霉病菌丝穿刺接种于番茄上两点,于无菌培养瓶25℃恒温培养,逐日观察并记录发病情况。结果如表5和图9所示。
表5果实病情指数
Figure SMS_7
表5结果显示,Bs-9、Bs wy-1和无菌水处理中,Bs-9病情指数最低,为15.35,较对照相比降低32.27,防治效果为50.84%;与Bs wy-1和BC相比病情指数差异显著。
(4)番茄植株温室防效实验
将培养10d的番茄幼苗进行温室防效试验,试验设计如下:
(1)BC:仅喷施浓度为1×106cfu/mL番茄灰霉病孢子悬浮液;
(2)Bs wy-1:喷施浓度为1×106cfu/mL番茄灰霉病孢子悬浮液,24h后喷施Bs wy-1(1×109cfu/mL)菌液;
(3)Bs-9:喷施浓度为1×106cfu/mL番茄灰霉病孢子悬浮液,24h后喷施Bs-9(1×109cfu/mL)菌液;
(4)嘧霉胺:喷施浓度为1×106cfu/mL番茄灰霉病孢子悬浮液,24h后喷施40%嘧霉胺1000倍稀释液。
经上述处理后,25℃,保持一定湿度,每日观察植株发病情况,第10天后记录植株发病情况。结果如表6和图10所示。
表6温室防效试验
Figure SMS_8
如表6所示,各处理中病情指数最低为Bs-9,病情指数为21.76,较对照降低38.42;防治效果为63.89。Bs-9的病情指数显著低于BC和Bs wy-1,病情指数和防治效果与化学农药嘧霉胺相比差异不显著。
实施例5
本实施例考察了暹罗芽孢杆菌Bs-9对番茄种子和幼苗的促生作用。
(1)对种子发芽率和胚根长度的影响。
本实验测定Bs-9对番茄种子和幼苗促生的作用,作为对照同时测定了东北农业大学园艺园林学院实验室保存的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs wy-1。具体测定方法为:
将番茄种子置于55℃温水中,浸泡20min;用75%酒精消毒30s,无菌水冲洗3次;3%次氯酸钠浸泡3min,无菌水冲洗3次。
将Bs-9和Bs wy-1分别28℃,200rpm/min培养2d,调节菌液浓度为1×109cfu/mL。后将各组均稀释100倍。生防细菌Bs-9、Bs wy-1和无菌水对照每组10mL液体,各浸泡30粒种子,3h后用无菌水冲洗,后将种子摆入种子袋。分别记录36h、48h种子发芽率和6d种子胚根生长量。试验3次重复。结果如图11和图12所示。
图11和图12显示,Bs-9和Bs wy-1在36h和48h的种子发芽率均高于对照,其中48h种子发芽率最高为Bs-9,为83%,较对照高14%。6d后的种子胚根长度Bs-9为7.84cm,Bswy-1为7.50cm,对照为6.75cm,Bs-9较对照长1.09cm。可知,Bs-9的1×107cfu/mL种子发芽率和胚根伸长具有促进作用。
(2)对根系指标的影响。
Bs-9菌悬液、Bs wy-1菌悬液和水分别浸泡消毒后的番茄种子3h后,播种于营养钵中。移苗时两处理分别在土壤中注入10mL复合菌液和等量无菌水,培养30d。在不损伤根系下用流水冲洗干净后,利用图像分析系统测定幼苗根系指数。结果如表7和图13所示。
表7根系指标
Figure SMS_9
如表7和图13所示,番茄植株根系长度、系节点数和根尖数Bs-9和Bs wy-1差异不显著,Bs-9、Bs wy-1和水相比差异显著。三种处中长度最长、节点数和根尖数最多为Bs-9,分别为559.95、1935.67、663.67。
实施例6
本实施例检测了暹罗芽孢杆菌Bs-9菌株的促生及抑菌物质。
(1)IAA检测
配置50mL LB液体培养基,加入1%的L-色氨酸,后接种生防细菌Bs-9,28℃恒温,200rpm/min培养48h。取Bs-9菌液于离心管,10000rpm离心20min。取1mL上清液,加入2mLSalkowaski(0.5mol/LFecl315 mL,浓硫酸300mL,蒸馏水500mL)试剂,随后加入两滴正磷酸。将混合液于28℃水浴2h,观察溶液是否变红,若变红则说明生防菌能分泌IAA。试验3次重复。结果如图14所示。
图14显示,暹罗芽孢杆菌Bs-9菌株的溶液变为红色,说明Bs-9菌株可以通过产生IAA来促进植物生长。
(2)无菌上清液和沉底菌体抑菌活性检测
配置LB液体培养基,接入Bs-9菌液28℃,200rpm/min培养48h,得到发酵液;4℃,10000rpm/min离心10min,上清液过0.22μm滤膜,沉淀用等量无菌水溶解后超声破碎。将灰霉病菌块和牛津杯分别放置PDA培养基两侧,牛津杯加入100μL液体,28℃,恒温培养7d,观察抑菌情况。结果如图15所示。
图15显示,Bs-9无菌上清液和沉底水溶液均具有抑菌效果。
(3)蛋白酶、嗜铁素和HCN检测
蛋白酶:采用蛋白酶培养基,检测生防菌是否具有此种酶活性。在晾干的培养基中间放置一无菌滤纸片(Φ5mm),滴加5μL菌液;28℃恒温,逐日观察是否有解酶圈产生。
嗜铁素:生防细菌采用嗜铁素固体培养基,晾干培养基中间放置无一菌滤纸片(Φ5mm),滴加5μL生防菌液;28℃,逐日观察是否有透明圈产生。
HCN:取10mL菌液于试管,滴加一滴浓硫酸,充分混匀,取HCN试纸浸入溶液中;等待15min,浓度较低时可等待过夜,根据HCN浓度试纸由浅蓝色变为深蓝色,未变色则证明未产生HCN。
结果如图16所示,Bs-9菌株能分泌蛋白酶和嗜铁素。
(4)抗菌粗蛋白和脂肽类抗生素检测
抗菌粗蛋白:挑取生防菌分别于LB、PDA液体培养基,Bs-9菌液28℃,200rpm/min培养48h,后4℃低温,8000rpm/min离心30min,取上清液过0.45μm滤膜;得到抑菌物质粗提产物。向上述无菌滤液中加入硫酸铵至饱和度为60%,4℃低温静置12h;后8000rpm/min离心30min,去上清液,在沉淀中加入磷酸缓冲液(pH 7.4、0.02mol/L)完全溶解,即得到粗提蛋白。将灰霉病原菌块(Φ=5mm)放在凝固的PDA培养基中心,等距放置牛津杯,取100μL样品于牛津杯,28℃,培养一周,测定抑菌活性。
脂肽类抗生素:将培养3d菌液离心,取上清液,用浓盐酸调节至pH 2.0,沉淀过夜;10000rpm/min离心20min,弃上清,沉淀用原菌液10%体积的甲醇抽提,抽提2h,得到甲醇抽提物过0.22μm滤膜,即为脂肽类抗生素粗提物。
结果如图17所示,生防菌株Bs-9能产生抑菌粗蛋白和脂肽类抗生素。
(5)乙酸乙酯粗提产物抑菌活性检测
取培养好的Bs-9发酵液,8000rpm/min离心20min,取400mL发酵液上清液,加入等体积乙酸乙酯萃取,磁力搅拌器搅拌过夜;分液漏斗取上层液体,旋转蒸发浓缩至2mL,测定其抑菌活性。
结果如图18所示,乙酸乙酯粗提产物具有抑菌效果。
(6)挥发性物质检测
将配置好的LB、PDA固体培养基倒在二分格培养皿一格中,晾干,用接种环挑取细菌接种于LB培养基一格,灰霉菌块接种于PDA培养基一格,对照只接种灰霉菌块。28℃恒温培养,当对照长满二分格培养皿一半时,观察接种生防菌平皿生长情况。
结果如图19所示,接种有Bs-9的二分格培养皿中的灰霉病菌生长受到抑制,说明Bs-9可以产生挥发性物质抑制病原菌生长。

Claims (10)

1.一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌,其特征在于,所述生防芽孢杆菌的分类命名为暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis),于2022年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCCNo.25088。
2.根据权利要求1所述一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌,其特征在于,所述暹罗芽孢杆菌的16SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
3.一株如权利要求1或2所述的对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在农业生物防治方面的应用。
4.根据权利要求3所述对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在农业生物防治方面的应用,其特征在于,所述农业生物防治包括将所述暹罗芽孢杆菌用于防治黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病或甜瓜枯萎病,以及番茄枯萎病菌、轮支镰刀菌、尖孢镰刀菌、葵花菌核病菌、玉米茎基腐病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害。
5.一株如权利要求1或2所述的对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。
6.根据权利要求5所述对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用,其特征在于,所述应用的具体方法是使用所述暹罗芽孢杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。
7.一株如权利要求1或2所述的对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在水果蔬菜防腐保鲜方面的应用。
8.根据权利要求7所述对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌在水果蔬菜防腐保鲜方面的应用,其特征在于,所述应用的具体方法是使用所述暹罗芽孢杆菌菌悬液浸泡处理水果蔬菜。
9.一种如权利要求1或2所述的对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌的菌悬液。
10.根据权利要求9所述一种对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的细菌的菌悬液,其特征在于,所述菌悬液的制备方法为:挑取所述暹罗芽孢杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中,28℃、200r/min培养2d即得到菌液浓度为1×109cfu/mL的菌悬液。
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