CN102703342A - 贝莱斯芽孢杆菌zj20菌株及其液体制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株ZJ20，该菌株已于2012年4月13日保藏在中国北京市朝阳区中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.5995，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。)本发明筛选的生防菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJ20新菌株，具有抗逆性强的芽孢，商品贮藏寿命长，对环境适宜性强，可生产成商品生物制剂；代谢产物杀菌力强，在植株上定殖能力强、速度快，能有效占领杂交竹体表，预防梢枯病的发生。产生的抗菌蛋白(几丁质结合蛋白质)不仅可杀灭病菌，且能促进杂交竹和多种竹类枝叶生长、有恢复病后生产能力的新功效。
Description
技术领域
本发明涉及的是贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)一新菌株ZJ20及其液体制剂。
背景技术
撑×绿杂交竹是中国南西南等地引种发展的主要经济竹种之一，在经济、生态、社会效益等方面起着巨大作用。而近年来，由半知菌亚门丝孢纲节菱孢属的暗孢节菱孢菌引起的撑×绿杂交竹梢枯病却成为威胁杂交竹产业的重要病害之一，严重阻碍了撑×绿杂交竹的发展，甚至带来毁灭性的灾害，大大降低了撑×绿杂交竹的应用价值。目前，在林业生产上对该病的防治大多采用化学防治，但由于长时期的施用化学农药不仅会造成病原菌抗药性的增强，也会给人们的身体健康和生态环境带来严重伤害，因此针对该病害有必要探索生物防治等新的防治途径，生物防治是生态学领域的一个应用学科分支，是基于生态平衡的原理，引进有益生物基因或基因产物，达到稳定、有效地防治靶标病(虫)，生物农药(biopesticides)是利用生物活体或者其代谢产物对有害生物进行防治的一类制剂，是生物防治的物质基础和重要手段。
发明内容
本发明在杂交竹生态系中发现贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)一新菌株ZJ20，不仅能有效控制杂交竹梢枯病，且具有促进其生长恢复的新功能。
该菌株于2008年6月2日分离自四川省雅安市雨城区金鸡关杂交竹。该菌株已于2012年4月13日保藏在中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.5995，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。
贝莱斯芽孢杆菌菌株ZJ20的液体制剂，制备方法如下：
①一级斜面种子：常规方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种贝莱斯芽孢杆菌ZJ20后在26-28℃下培养24-36小时制成一级种子；
②二级液体种子：改进的营养肉质培养液经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例装瓶，在无菌状态接种贝莱斯芽孢杆菌ZJ20斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，温度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振荡培养36h，制成贝莱斯芽孢杆菌ZJ20液体种子；
③液体发酵：改进的营养肉质培养液经高压灭菌后，按200mL液体盛于500mL三角瓶比例装瓶，在无菌状态接种ZJ20液体种子，接种量10％，温度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振荡培养72h，制成ZJ20液体制剂。
(1)本发明筛选的生防菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJ20新菌株，具有抗逆性强的芽孢，商品贮藏寿命长，对环境适宜性强，可生产成商品生物制剂；
(2)代谢产物杀菌力强，在植株上定殖能力强、速度快，能有效占领杂交竹体表，预防梢枯病的发生。
(3)产生的抗菌蛋白(几丁质结合蛋白质)不仅可杀灭病菌，且能促进杂交竹和多种竹类枝叶生长、有恢复病后生产能力的新功效。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
(1)贝莱斯芽孢杆菌ZJ20液体制剂的发酵与应用
①一级斜面种子：常规方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基(牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂17g，水1000mL)，接种贝莱斯芽孢杆菌ZJ20后在26-28℃下培养24-36小时制成一级种子。
②二级液体种子：改进的营养肉质培养液(牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，竹叶浸渍液1000mL)经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例(通氧控制)装瓶，在无菌状态接种贝莱斯芽孢杆菌ZJ20斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，温度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振荡培养36h，制成贝莱斯芽孢杆菌ZJ20液体种子。
③液体发酵：改进的营养肉质培养液(牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，竹叶浸渍液1000mL)经高压灭菌后，按200mL液体盛于500mL三角瓶比例(通氧控制)装瓶，在无菌状态接种ZJ20液体种子，接种量10％(体积比)，温度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振荡培养72h，制成ZJ20液体制剂。平板法测定ZJ20对杂交竹梢枯病菌(Arthrinium phaeospermum)抑菌率达到100％以上。
此贝莱斯芽孢杆菌ZJ20液体制剂(活体与代谢物混合剂)用常规喷雾器按600倍(体积比)浓度在发病前喷施于杂交竹体表预防其梢枯病的发生(防效78-99％)，每株100毫升，促进杂交竹枝叶生长(促生效果：10-25％)(表1)。
④制剂保存：瓶装制剂常温保存半年或低温(4度)1年半不影响防治和促生效果。
(2)液体制剂有效成份提取与应用
①液体制剂有效成份提取：上述方法生产的液体制剂经四层纱布过滤，取其滤液，用60％饱和度的硫酸铵沉淀，该沉淀经过透析浓缩后为粗提物(粗蛋白)。将粗提物经过High Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换层析、Sephadex G-75分子筛层析、Sephadex G-50分子筛层析后获得几丁质结合蛋白质纯物质。具体过程如下：
A：DE52离子交换柱(20cm×1.5cm)用1mol/L NaCl清洗后，以0.05mol/L pH8.5 Tris-HCl平衡。取上述粗蛋白上样后，先用0.05mol/L pH8.5Tris-HCl淋洗60min，然后以0.05mol/L pH8.5 Tris-HCl和1mol/L的NaCl进行阶式梯度洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱蛋白峰，蛋白峰液经0.05mol/LpH8.5的Tris-HCl透析、聚乙二醇20 000包埋浓缩。
B：以0.05mol/L pH8.5的Tris-HCl平衡层析柱(50cm×1.5cm，G-75凝胶)。取经离子交换层析后的抗菌蛋白上样，用0.05mol/L pH8.5的Tris-HCl洗脱，流速为0.5mL/min。收集洗脱蛋白峰。
C：以0.05mol/L pH8.5的Tris-HCl平衡层析柱(50cm×1.5cm，G-50凝胶)。取经离子交换层析后的抗菌蛋白上样，用0.05mol/L pH8.5的Tris-HCl洗脱，流速为0.5mL/min。收集洗脱蛋白峰(几丁质结合蛋白质纯物质。)。
②杂交竹上的防病促生应用：将该物质(几丁质结合蛋白质)用常规喷雾器按200 倍(体积比)浓度喷施于杂交竹体表可降低其梢枯病的发生水平，恢复病后生产能力，每株100毫升，每年春、夏季各施用一次，防效81-97％，促生效果为11-21％(表1)。
③其它竹种上的促生应用：上述法提取的ZJ20代谢物(几丁质结合蛋白质)稀释10倍(体积比)用常规喷雾器喷施各类竹种枝叶，每株50毫升，每年春、夏季各施用一次，促生效果分别为：慈竹120％、麻竹118％、楠竹117％、苦竹120％(表3)。
④有效成份保存：该物质需低温(4℃)贮藏，贮藏期不超半年为宜。
表1 Bacillus velezensisZJ20生防和促生功能参数：杂交竹
| 制剂浓度(活体与代谢物混合剂) | 发病率％ | 防治效果％ | 促生效果％ |
| 原液 | 1 | 99 | 25 |
| 稀释10倍 | 4 | 96 | 20 |
| 稀释100倍 | 5 | 94 | 17 |
| 稀释200倍 | 7 | 92 | 14 |
| 稀释400倍 | 9 | 90 | 12 |
| 稀释600倍 | 20 | 78 | 10 |
| 稀释800倍 | 40 | 56 | 7 |
| 稀释1000倍 | 90 | 0 | 4 |
| 对照(自然发病) | 90 | ------- | --------- |
表2 Bacillus velezensisZJ20生防和促生功能参数：杂交竹
| 代谢物：几丁质结合蛋白质浓度 | 发病率％ | 防治效果％ | 促生效果％ |
| 原液 | 3 | 97 | 21 |
| 稀释10倍 | 6 | 93 | 18 |
| 稀释100倍 | 10 | 89 | 14 |
| 稀释200倍 | 17 | 81 | 11 |
| 稀释400倍 | 30 | 56 | 10 |
| 稀释600倍 | 75 | 17 | 8 |
[0031]
| 稀释800倍 | 80 | 11 | 5 |
| 稀释1000倍 | 90 | 0 | 2 |
| 对照(自然发病) | 90 | ------- | --------- |
表3 Bacillus velezensisZJ20代谢物在多种竹上的促生功能参数
(1)生防菌商品贮藏寿命长，对环境适宜性强是商品化生物制剂和成功生防的前提和保障。本发明筛选出的对杂交竹梢枯病有特效的ZJ20新菌株，具有抗逆性强的芽孢体，贮藏性好，抗高温、低温、耐干燥，适宜于商品化生产，且施用一次可长期有效、能持续控病，大幅降低成本。
(2)本发明筛选出的的ZJ20新菌株有病后恢复杂交竹新功能。ZJ20新菌株代谢物可显著提高杂交竹生长能力，增加产量，大幅提升生产效益。ZJ20为一种具有防病、促生双重功能的新菌株。
(3)ZJ20新菌株代谢物(几丁质结合蛋白质)对多种竹类有促生作用，可应用于竹产业生产中作为叶面生物肥料，效益巨大。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
Claims (2)
1.贝莱斯芽孢杆菌菌株ZJ20，该菌株已于2012年4月13日保藏在中国北京市朝阳区中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.5995。
2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株ZJ20的液体制剂，其特征在于，制备方法如下：①一级斜面种子：常规方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种贝莱斯芽孢杆菌ZJ20后在26-28℃下培养24-36小时制成一级种子；
②二级液体种子：改进的营养肉质培养液经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例装瓶，在无菌状态接种贝莱斯芽孢杆菌ZJ20斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，温度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振荡培养36h，制成贝莱斯芽孢杆菌ZJ20液体种子；
③液体发酵：改进的营养肉质培养液经高压灭菌后，按200mL液体盛于500mL三角瓶比例装瓶，在无菌状态接种ZJ20液体种子，接种量10％，温度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振荡培养72h，制成ZJ20液体制剂。
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|---|---|
| CN (1) | CN102703342B (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103361291A (zh) * | 2013-07-25 | 2013-10-23 | 四川农业大学 | 蜡样芽孢杆菌b2菌株、液体制剂及其制作方法和在防治板栗炭疽病中的应用 |
| CN103396960A (zh) * | 2013-07-25 | 2013-11-20 | 四川农业大学 | 蜡样芽孢杆菌b2菌株、液体制剂及其制作方法和在防治核桃枝枯病中的应用 |
| CN107446847A (zh) * | 2017-08-14 | 2017-12-08 | 云南农业大学 | 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用 |
| CN107568434A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-01-12 | 安徽农业大学 | 贝莱斯芽孢杆菌产蛋白酶发酵液的制备方法及其应用 |
| CN108265012A (zh) * | 2016-12-30 | 2018-07-10 | 北京绿色农华作物科技有限公司 | 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用 |
| CN108641981A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-12 | 十堰市农业科学院 | 一株生防芽孢杆菌鉴定及应用 |
| CN108676756A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-10-19 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 贝莱斯芽孢杆菌及其作为水产病原菌抑制剂的应用 |
| CN113755359A (zh) * | 2021-03-20 | 2021-12-07 | 九江学院 | 具有抑制细丽外担菌活性作用的贝莱斯芽孢杆菌JXJ b01及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100817428B1 (ko) * | 2006-11-09 | 2008-03-27 | 논산시(관리부서:논산시농업기술센터) | 바실러스 벨레첸시스 ｎｓ０５균주 및 이를 포함하는 식물병 방제용 미생물 제제 |
| KR20100052797A (ko) * | 2008-11-11 | 2010-05-20 | 한국화학연구원 | 바실러스 벨레젠시스 ｐｂ3 균주 및 이를 이용한 식물병 방제방법 |
| CN102286412A (zh) * | 2011-08-30 | 2011-12-21 | 新疆农业科学院微生物应用研究所 | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在番茄枯萎病拮抗中的应用 |
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2012
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100817428B1 (ko) * | 2006-11-09 | 2008-03-27 | 논산시(관리부서:논산시농업기술센터) | 바실러스 벨레첸시스 ｎｓ０５균주 및 이를 포함하는 식물병 방제용 미생물 제제 |
| KR20100052797A (ko) * | 2008-11-11 | 2010-05-20 | 한국화학연구원 | 바실러스 벨레젠시스 ｐｂ3 균주 및 이를 이용한 식물병 방제방법 |
| CN102286412A (zh) * | 2011-08-30 | 2011-12-21 | 新疆农业科学院微生物应用研究所 | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在番茄枯萎病拮抗中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李姝江: "杂交竹梢枯病菌拮抗细菌筛选及其抗菌物质研究", 《中国生物防治》, 30 November 2010 (2010-11-30), pages 55 - 61 * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103361291A (zh) * | 2013-07-25 | 2013-10-23 | 四川农业大学 | 蜡样芽孢杆菌b2菌株、液体制剂及其制作方法和在防治板栗炭疽病中的应用 |
| CN103396960A (zh) * | 2013-07-25 | 2013-11-20 | 四川农业大学 | 蜡样芽孢杆菌b2菌株、液体制剂及其制作方法和在防治核桃枝枯病中的应用 |
| CN103361291B (zh) * | 2013-07-25 | 2015-07-22 | 四川农业大学 | 蜡样芽孢杆菌b2菌株、液体制剂及其制作方法和在防治板栗炭疽病中的应用 |
| CN108265012A (zh) * | 2016-12-30 | 2018-07-10 | 北京绿色农华作物科技有限公司 | 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用 |
| CN108265012B (zh) * | 2016-12-30 | 2022-05-10 | 北京绿色农华作物科技有限公司 | 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株及其菌剂和应用 |
| CN107446847A (zh) * | 2017-08-14 | 2017-12-08 | 云南农业大学 | 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用 |
| CN107446847B (zh) * | 2017-08-14 | 2020-07-24 | 云南农业大学 | 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用 |
| CN107568434A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-01-12 | 安徽农业大学 | 贝莱斯芽孢杆菌产蛋白酶发酵液的制备方法及其应用 |
| CN108641981A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-12 | 十堰市农业科学院 | 一株生防芽孢杆菌鉴定及应用 |
| CN108676756A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-10-19 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 贝莱斯芽孢杆菌及其作为水产病原菌抑制剂的应用 |
| CN113755359A (zh) * | 2021-03-20 | 2021-12-07 | 九江学院 | 具有抑制细丽外担菌活性作用的贝莱斯芽孢杆菌JXJ b01及其应用 |
| CN113755359B (zh) * | 2021-03-20 | 2023-06-02 | 九江学院 | 具有抑制细丽外担菌活性作用的贝莱斯芽孢杆菌JXJ b01及其应用 |
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