CN107446847A - 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用 - Google Patents

一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，该贝莱斯芽孢杆菌GT11已于2016年12月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13446，该贝莱斯芽孢杆菌GT11可制成水剂、可湿性粉剂或者包衣剂等形式用于三七、印奇果根腐病和白菜根肿病病害的防治，本发明提供了一种高效、无毒、安全无残留、使用简便的防治根腐病和根肿病等病害的生防菌剂，其有效活性成分为贝莱斯芽孢杆菌GT11菌株，该菌株产生次生代谢产物抗菌活性物质，可降解病原菌的细胞壁，对印奇果、三七和白菜等作物有很好的促生作用，此外，还对一些三七疫霉病菌、三七腐皮镰刀菌、印奇果灰霉病菌和水稻细菌性条斑病等都有较好的抑菌效果。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用
技术领域
本发明涉及生防菌剂技术领域，具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用。
背景技术
印奇果(Plukenetia Volubilis.,sacha inchi)又称为印加果、南美油藤、美藤果等，是大戟科(Euphorbiaceae)的一种木质藤本、多年生油料作物。原产于南美洲秘鲁亚马逊河流域，该植物在南美洲印加地区食用已有上千年历史。印奇果具有调节人体血脂、预防心血管疾病、防衰老等多种保健功能，其主要原因究于印奇果中可榨取包括油酸、亚油酸、亚麻酸等多不饱和脂肪酸组成的Sacha Inchi油，其中3种不饱和脂肪酸(α-亚麻酸、亚油酸和油酸)含量达92％以上，且α-亚麻酸的含量(43.83％～48.6％)要显著高于橄榄油、茶籽油等食用油；Sacha Inchi油中还含有脂质活性物质(生育酚、甾醇、多酚等)，因此该果实可广泛用于食品、保健、制药等领域。在2004年、2006年和2010年的世界食油博览会上分别获得金质奖章，被誉为“植物脑黄金”，引起了世界油料产品开发商的高度关注。鉴于印奇果丰富的营养价值和宝贵的经济价值，该植物在2006年已引种至云南省西双版纳，中文名暂定为“版纳印奇果”，并开始大规模基地种植。2013年1月4日卫生部2013年第1号公告正式批准美藤果油为新资源食品，成为我国新引进的、无食用习惯但符合食品基本要求的食品。但由于该植物在种植过程中，包括从种子、幼苗到成熟植株的过程中，容易受到种子带菌、幼苗和成熟植株遭受根腐病、根结线虫病、灰霉病等多种病害的危害，其中根腐病是其在生长过程中最为严重的病害之一。据调查，5600亩的印奇果西双版纳普文种植基地，从幼苗到植株成熟结实的整个过程。都会受根腐病侵染，造成的经济损失高达30-50％，严重影响其经济价值和自身品质，根腐病作为一种典型的、破坏性极大的土传病害，该病害的寄主多样，可危害三七、草莓、辣椒等多种经济作物。引起印奇果根腐病的病菌主要为腐皮镰孢(Fusarium solani)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)独立或复合侵染引起。
对大多数经济作物根腐病的防治目前主要依靠选育抗性品种和化学药剂加以控制，但生产中缺乏真正有效的抗病品种，而化学药剂的使用则会造成环境污染、药物残留问题及诱发病原菌产生抗药性。生物防治以安全、高效、无污染等特点已成为植物土传病害防治的重要措施，植物病害生物防治是利用有益微生物及其微生物的代谢产物对农作物病害进行有效防治的技术与方法。
根肿病是世界农业生产中影响较大的一类土传病害，主要危害油菜和十字花科蔬菜，造成地下根部肿瘤，地上部萎焉，最后植株死亡。据统计，目前全球油菜根肿病发病面积在1500万亩以上。随着机械化程度的不断提高、大棚温室育苗和漂浮育苗的推广，进一步加快了根肿病病害流行速度和危害范围，特别是云南、四川等地发生最为严重，油菜主产区面临的根肿病威胁更大；油菜和十字花科蔬菜根肿病的病原菌为芸苔根肿菌(Plasmodiophora brassicae)。根肿菌是一种专性寄生菌，病菌以休眠孢子在土壤或根肿组织中越冬存活。根肿病侵染循环划分为休眠孢子土壤中存活、根毛侵染和皮层侵染三个阶段。
生产上主要是通过杀死休眠孢子或者抑制休眠孢子萌发，例如向土壤中施入杀菌剂或生防菌剂，达到降低根毛侵染或皮层侵染，减轻根肿病发生。根肿病传播主要通过土壤、农机具、灌溉水、雨水和粪肥携带休眠孢子传播。由于根肿菌属于专性寄生菌，使得根肿病的防治极其困难，传统的防治理念是在土壤中施加生石灰或石灰氮(氰氨化钙)，提高土壤的pH值，降低根肿病发生。然而，长期施用或过量施用生石灰，除对土壤结构造成破坏外，许多情况下并不能取得良好的控病效果。生物农药具有多种优势，其来源广泛、不易产生耐药性、对人畜安全且具有良好的环境兼容性、开发利用途径多、种类繁多、研发的选择余地大等特点，且具有低毒、低残留、不易产生抗药性、高效等优点，为农业可持续发展提供了非常重要的研究方向并已成为全球农业生产发展的新趋势。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种生防细菌——贝莱斯芽孢杆菌GT11，本发明提供了一种高效、无毒、安全无残留、使用简便的防治根腐病和根肿病等病害的生防菌剂，可降解病原菌的细胞壁，或对病原菌的孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用，从而实现高效的防治效果。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，该贝莱斯芽孢杆菌GT11分离来自云南省昆明市轿子雪山松树林根际土，且该贝莱斯芽孢杆菌GT11已于2016年12月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13446。
优选的，所述的贝莱斯芽孢杆菌GT11可用于防治三七、印奇果根腐病和白菜根肿病病害。
优选的，所述的贝莱斯芽孢杆菌GT11可制成水剂、可湿性粉剂或包衣剂中一种形式使用。
优选的，所述的贝莱斯芽孢杆菌GT11可制成水剂，制备方法在于以下步骤：
(1)菌种培养
a.试管种培养：将NA培养基121℃灭菌30min后倒入9cm的平板中制成NA培养基底板，接种贝莱斯芽孢杆菌GT11，28℃培养24-48h；
所述NA培养基的配方为：葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，琼脂粉17g，用蒸馏水补足到1000mL；
b.菌种摇床扩大培养：将平板种子接种茄瓶斜面NA培养基上，28℃下培养24-48h，获得茄瓶种子；
(2)发酵
a.种子悬浮液的制备：用灭菌水洗下茄瓶斜面上的菌落，得到种子悬浮液；
b.接种：将种子悬浮液通过接种口，利用压差接入发酵罐培养基；
所述发酵罐培养基的配方及处理方法为：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸镁1.5％，磷酸氢二钾1.5％，甘油10％，用蒸馏水补足到1000mL，灭菌前pH 7.0；
c.液体发酵：发酵罐培养基在接种后，培养36-48小时。
优选的，所述步骤(2)中在接种时，发酵罐的罐温为25-32℃，罐压为0.5kg/cm2，罐内搅拌速度为200r/min。
优选的，所述步骤(2)中在接种升压过程中，罐压不超过1.5kg/cm2。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种高效、无毒、安全无残留、使用简便的防治根腐病和根肿病等病害的生防菌剂，其有效活性成分为贝莱斯芽孢杆菌GT11菌株，通过产生次生代谢产物包括葡聚糖酶、蛋白酶、几丁质酶、表面活性素、丰源素、伊枯草菌素等抗菌活性物质，可降解病原菌的细胞壁，或对病原菌的孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用，从而实现高效的防治效果。经云南省农业大学、昆明市寻甸县和景洪市普文镇等地的温室和田间小区进行的防效试验表明，该生物制剂防效显著、稳定，可以有效地控制印奇果和三七根腐病、十字花科作物根肿病，对印奇果的根腐病的抑制作用为64.17-65.47％，三七根腐病的抑制作用65.17-67.08％，对白菜根肿病的相对防治效果达到62.11％。
本发明提供的生防菌剂综合性状较好，对印奇果、三七和白菜等作物有很好的促生作用，此外，还对一些三七疫霉病菌、三七腐皮镰刀菌、印奇果灰霉病菌和水稻细菌性条斑病等都有较好的抑菌效果。该生防菌剂无毒，使用安全无残留，有助于减少化学药剂在农产品中的使用量和残留量，降低生产成本，实用性强，适用于工业化生产。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11水剂的制备
(1)菌种培养
a.试管种培养(以下均为重量百分比)
将NA培养基(蛋白胨5g，蔗糖10g，酵母粉1g，牛肉浸膏3g，琼脂17-20g)放入试管中，用蒸馏水补足到1000mL，灭菌，做成平板，接种贝莱斯芽孢杆菌GT11菌株，28℃培养48h。
b.菌种摇床扩大培养
将平板种子接种茄瓶斜面NA培养基(培养基配方与上述步骤a相同)上，26℃下培养48h，获得茄瓶种子。
(2)发酵
具体发酵生产过程如下：
a.种子悬浮液的制备：用灭菌水洗下茄瓶斜面上的菌落，得到种子悬浮液；
b.接种：将种子悬浮液通过接种口，利用压差接入发酵罐(发酵罐的培养基配方为：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸镁1.5％，磷酸氢二钾1.5％，甘油10％，灭菌前pH 8.0；发酵罐的罐温为25-32℃，罐压为0.5kg/cm2，罐内搅拌速度为200r/min)，注意避免污染；升压时罐压不能超过1.5kg/cm2；
c.液体发酵：
发酵罐在接种后，培养36小时，至菌数不再增加，立即放罐，经平板计数测定含菌量，含菌量达180亿CFU/mL；
本制剂可通过灌根方式施用于作物生长前期和发病阶段作为病害预防或病害防控，方法如下：作物生长前期或在病害始发期，采用生物制剂灌根于作物根部以预防和控病。对印奇果和三七根腐病、白菜根肿病病害发生严重地区可在作物生长过程中追施2至3次。
实施例2：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11可湿性粉剂的制备
(1)制备液体生防菌剂：同实施例1，得发酵液；
(2)添加填充剂：将发酵液压入贮罐，根据以下计算公式加入硅藻土(轻质碳酸钙)作为填充剂，搅拌30min；
填充剂的加入量(公斤)＝[发酵液菌数(亿/毫升)X放罐体积(升)X收率]/成品菌数—发酵液中的残存物(公斤)。然后经、板框压滤、打浆、干燥、粉碎、制成可湿性粉剂，供大田用。
(3)板框过滤：用2kg/cm2的压力，将物料由贮罐压入板框，通过7号滤布过滤，压力随时调节，使滤液中的含菌量不超过0.2亿/毫升，得滤饼和滤液；
(4)打浆：将滤饼卸入打浆罐中，按加入碳酸钙量的8％加入浓乳100号，或按3％加入SDS，再加入辅助剂(CPL)以及适量的滤液均匀搅拌30min；
(5)干燥：将浆液置于60℃以下的烘干房内通风干燥至含水量为5％-8％，得半成品；
(6)粉碎：将半成品进行粉碎，粉碎时出料温度≤60℃；
(7)成品质量指标测定：含菌量、含水量、悬浮率、细度的测定均参照国家企业标准(Q/KWL02-2003)进行，含菌量18亿/克，其余各项指标均符合标准。
实施例3：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11对印奇果根腐病的离体抑菌试验
所用培养基如下：
KB培养基(蛋白胨20g，磷酸氢二钾1.5g，七水硫酸镁1.5g，甘油10mL，蒸馏水1000mL；pH7.0)；
PDA培养基(马铃薯200g，琼脂15g，葡萄糖15g，水1000mL)；
NA培养基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，蔗糖10g，琼脂17g，水1000mL，pH7.0)；
1.贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11的菌剂对印奇果根腐病菌及其它病原菌的离体抑菌试验
1.1供试病原菌
包括尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)等，以上病原菌由云南农业大学植保学院植物病理实验室提供。
1.2试验方法
病原菌的活化：将保存的病原菌菌株移至PDA培养基中，置26℃恒温条件下扩大培养，待菌丝长满培养皿时，供抑菌实验备用。
测定方法：采用平板对峙培养法检测各个菌株对病原菌生长的抑制能力，无菌操作室将PDA培养基上长好的病原菌用打孔器制成d＝5mm菌饼，然后将菌饼转接至PDA培养基平板中央，再用灭菌移液枪枪头将分离纯化的细菌接至距病原菌2.5cm处，每皿接种一株供试细菌，共设3个重复，同时以只放病原菌菌饼的平板为对照，26℃恒温培养，待培养至CK长满培养基时，开始测量菌落直径，计算抑制生长率。
抑制生长率(％)＝(对照菌落半径—处理菌落半径)/对照菌落半径X100
1.3试验结果与分析
试验结果见表1。
表1贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11对不同病原菌生长抑制效果测定
注：菌落平均直径为接种后第7天观察结果。
由表1可知，贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11对5种真菌都有较强的拮抗作用，抑制率均高于60.00％，其中对恶疫霉的抑制效果最强，抑制率达67.08％；对毁灭柱孢菌的抑制作用次之，抑制率为66.27％；对烟草疫霉的抑制作用较其它病原菌的拮抗作用最弱，抑制率为63.26％。
实施例4：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11对印奇果根腐病的温室盆栽防效试验
2.1供试作物：盆栽印奇果
2.2防治对象：印奇果根腐病
2.3实验地点：云南省昆明市云南农业大学植保学院温室
2.4病原菌和生防菌剂的制备
印奇果根腐病菌孢子悬浮液的制备：将在PDA培养基上长势较好的新生菌丝切块(2×2mm)，取8-10块移入PDA液体培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉7g，蒸馏水1000mL)中，于26℃160rpm振荡培养3d，使其产生大量孢子。将孢子浓度稀释成为1×108spores/mL的孢子悬浮液。
生防菌剂的制备：将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11接种于装有500mL KB液体培养基三角瓶中，在摇床中(26℃，160rpm)振荡培养3d，用分光光度计在600nm波长下调OD值到0.5，菌悬液浓度相当于1X108CFU/mL。
2.5接种方法：
将种植2个月的印奇果植株苗先进行生防菌的接种，每株于植株根基部灌根生防菌50mL，在生防菌定殖24h后接种病原菌，每株于植株根基部灌根病原菌50mL，24h后再用同样的方式和同样的灌菌量灌入生防菌，以空白培养液作为空白对照。于接种病原菌后40d进行病情调查，记录印奇果根腐病的发病等级，统计生防菌对印奇果根腐病防效及病情指数，计算并分析结果。
印奇果根腐病菌病情分级标准如下：
0级:无病；
1级:根系稍有变色，变色根系占全部根系的10％以下，植株不萎焉；
3级:根系明显变褐，变色根系占全部根系的10.1％-30％，植株开始萎焉；
5级:变色根系占全部根系的30.1％-50％，植株明显萎焉；
7级:变色根系占全部根系的50.1％-80％，植株萎焉；
9级:全株枯死。
病情指数％＝[∑(病级×该级病株数)/总株数×最高病级数值]×100
相对防效＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数×100％
2.6试验结果与分析
试验结果见表2。
表2生防菌GT11盆栽试验结果(40d)
由表2可知：施用生防菌GT11生物制剂对印奇果根腐病防治效果明显，防治效果达57.11％。对照和农药叶斑宁相比，施用生物制剂GT11的各个处理的病情指数都有显著降低，该生物制剂的防效显著，显示了该菌株潜在的应用开发前景。
实施例5：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11对印奇果根腐病菌孢子的抑制作用
3.1供试作物：印奇果根腐病菌尖孢镰刀菌
3.2防治对象：印奇果根腐病
3.3试验方法
挑取活化好的生防菌株GT11的单菌落分别在KB液体培养基中培养48h，菌液稀释成4个梯度，分别记为原浓度、稀释10倍、稀释100倍、稀释1000倍。用无菌水洗下PDA培养基上培养10d左右的尖孢镰刀菌孢子囊，用四层灭菌纱布过滤菌丝，制成孢子悬浮液，调至10X10倍显微镜下每视野30-50个孢子囊；将孢子悬浮液与生防菌菌液按1:1(体积比25ml:25ml)混合于灭菌的50ml离心管内，每处理重复3次，以无菌水为对照，在26℃培养箱培养，定期检查孢子萌发状况，计算孢子萌发率。孢子萌发率(％)＝(萌发的孢子数/总的孢子数)X100；孢子萌发抑制率(％)＝(对照孢子萌发率-处理孢子萌发率)/对照孢子萌发率X100。
3.4试验结果
表3.贝莱斯芽孢杆菌GT11菌悬液对尖孢镰刀菌孢子萌发的测定
由表3可知：贝莱斯芽孢杆菌GT11菌悬液各浓度处理尖孢镰刀菌24h后，GT11原浓度处理孢子后萌发率为0％；GT11稀释10倍处理组孢子萌发率为18.51％，抑制率为68.27％；GT11稀释100倍和稀释1000倍处理孢子的萌发率分别为27.78％和38.89％，抑制率分别为52.37％和27.82％，CK的孢子萌发率为58.33％。结果表明GT11菌悬液对尖孢镰刀菌孢子的萌发有抑制作用，菌悬液处理的浓度越高，抑制作用越强。
实施例6：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GT11对白菜根肿病的田间控病试验
试验所用供试试剂和培养基如下：
KB培养基(蛋白胨20g，磷酸氢二钾1.5g，七水硫酸镁1.5g，甘油10mL，蒸馏水1000mL；pH7.0)；
NA培养基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，蔗糖10g，琼脂17g，水1000mL，pH7.0)；
4.1供试作物：白菜(鲁春白1号)
4.2防治对象：白菜根肿病
4.3实验地点：云南省玉溪市通海县(肥力中等，小区为一畦4行区，面积30平方米，每处理设3个重复，随机排列，共9个小区，四周设保护行，按高产、优质栽培措施规范化管理)
4.4生防菌剂的制备
生防菌剂的制备：将贝莱斯芽孢杆菌GT11接种于装有500mL KB液体培养基三角瓶中，在摇床中(26℃，160rpm)振荡培养3d，调节菌悬液浓度相当于1X108CFU/mL。
4.5接种方法：
试验设生防菌剂处理、清水对照、农药对照3个处理，施药的方法采用灌根法，每棵白菜根部浇灌生防菌液200mL，发病初期施第一次生防菌剂，7d后再追施2-3次生防菌液，50d后进行病情调查，记录白菜根肿病的发病率和病情指数，计算防效并分析结果。
根据根肿病病情分级标准：0级：无病害症状；1级：仅须根上有肿瘤；3级：侧根上有肿瘤；5级：侧根肿瘤大且主根末梢有小的肿瘤；7级：主根全部肿大，但植株生长正常；9级：根上肿大部分开始龟裂腐烂、植株萎焉或已死亡。
病情指数＝Σ(各级病株数×相对级数值)×100/(调查总株数×最高级数值)
相对防效＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数×100％
4.6试验结果与分析
结果见表4。
表4生防菌剂GT11对白菜根肿病的大田防效测定
由表4可知：施用生防菌GT11生物制剂对白菜根肿病的防治效果明显，防治效果62.11％。与对照及农药叶斑宁相比，施用生物制剂GT11的发病率和病情指数都有减轻。说明生物制剂GT11对白菜根肿病有很好的防治效果，并且此防效试验具有可重复性，说明该生物试剂GT11对白菜根肿病具有稳定、较好的防治效果，也具备了生产上大量推广的基本条件。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，该贝莱斯芽孢杆菌GT11已于2016年12月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13446。
2.根据权利要求1的一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，其特征在于：所述的贝莱斯芽孢杆菌GT11可用于防治三七、印奇果根腐病和白菜根肿病病害。
3.根据权利要求1的一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，其特征在于：所述的贝莱斯芽孢杆菌GT11可制成水剂、可湿性粉剂或包衣剂中一种形式使用。
4.根据权利要求3的一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，所述的贝莱斯芽孢杆菌GT11可制成水剂，其特征在于：制备方法在于以下步骤：
(1)菌种培养
a.试管种培养：将NA培养基121℃灭菌30min后倒入9cm的平板中制成NA培养基底板，接种贝莱斯芽孢杆菌GT11，28℃培养24-48h；
所述NA培养基的配方为：葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，琼脂粉17g，用蒸馏水补足到1000mL；
b.菌种摇床扩大培养：将平板种子接种茄瓶斜面NA培养基上，28℃下培养24-48h，获得茄瓶种子；
(2)发酵
a.种子悬浮液的制备：用灭菌水洗下茄瓶斜面上的菌落，得到种子悬浮液；
b.接种：将种子悬浮液通过接种口，利用压差接入发酵罐培养基；
所述发酵罐培养基的配方及处理方法为：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸镁1.5％，磷酸氢二钾1.5％，甘油10％，用蒸馏水补足到1000mL，灭菌前pH 7.0；
c.液体发酵：发酵罐培养基在接种后，培养36-48小时。
5.根据权利要求4的一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，其特征在于：所述步骤(2)中在接种时，发酵罐的罐温为25-32℃，罐压为0.5kg/cm2，罐内搅拌速度为200r/min。
6.根据权利要求4的一株贝莱斯芽孢杆菌GT11及其应用，其特征在于：所述步骤(2)中在接种升压过程中，罐压不超过1.5kg/cm2。
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Cited By (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107937313A (zh) * 2017-12-21 2018-04-20 福建省农业科学院植物保护研究所 一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN107937312A (zh) * 2017-12-21 2018-04-20 福建省农业科学院植物保护研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用
CN108641981A (zh) * 2018-05-17 2018-10-12 十堰市农业科学院 一株生防芽孢杆菌鉴定及应用
CN108676756A (zh) * 2018-06-04 2018-10-19 中国水产科学研究院珠江水产研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其作为水产病原菌抑制剂的应用
CN108949614A (zh) * 2018-06-21 2018-12-07 华北制药集团爱诺有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌的微生物菌剂
CN109022304A (zh) * 2018-07-04 2018-12-18 华南农业大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其广谱抑菌作用和在防治香蕉病害中的应用
CN109077067A (zh) * 2018-08-16 2018-12-25 南京农业大学 一种生防菌及其在农作物灰霉病防治方面的应用
CN109266586A (zh) * 2018-10-18 2019-01-25 淮海工学院 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03及其用途与发酵方法
CN109370939A (zh) * 2018-11-06 2019-02-22 上海交通大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其分离方法与应用
CN109576188A (zh) * 2018-12-28 2019-04-05 天津开发区坤禾生物技术有限公司 一种防治半夏根腐病菌剂及其制备方法和应用
CN109652336A (zh) * 2019-01-22 2019-04-19 广西金穗生态科技股份有限公司 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN110172423A (zh) * 2019-05-28 2019-08-27 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治根结线虫中的应用
CN110184208A (zh) * 2019-03-29 2019-08-30 华中农业大学 一株用于防治根肿病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN110754466A (zh) * 2019-05-17 2020-02-07 卢志军 贝莱斯芽孢杆菌可溶粒剂及其制备方法
CN111073825A (zh) * 2018-10-19 2020-04-28 沈阳药科大学 具有抗植物土传病害作用的细菌及其用途
CN111349588A (zh) * 2020-04-29 2020-06-30 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN111690572A (zh) * 2020-07-15 2020-09-22 西北农林科技大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用和制剂
CN112342173A (zh) * 2020-12-02 2021-02-09 中国农业科学院特产研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112779183A (zh) * 2020-12-31 2021-05-11 浙江省农业科学院 番茄半边风病害防控生物有机肥、制备方法及其应用
CN112795504A (zh) * 2021-01-07 2021-05-14 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112795506A (zh) * 2021-01-07 2021-05-14 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112899196A (zh) * 2021-02-08 2021-06-04 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治十字花科根肿病中的应用
CN112920966A (zh) * 2020-12-31 2021-06-08 浙江省农业科学院 贝莱斯芽孢杆菌及其微生物菌剂、菌剂制备方法和应用
CN113215031A (zh) * 2021-04-20 2021-08-06 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌19573-3及其应用
CN113317326A (zh) * 2021-06-23 2021-08-31 北京意科乐生态科技有限公司 一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用
CN113416104A (zh) * 2021-06-10 2021-09-21 中国农业科学院油料作物研究所 一种生物防治菌核病并促进油菜丰产喷施型制剂及其制备方法
TWI740263B (zh) * 2019-11-06 2021-09-21 行政院農業委員會高雄區農業改良場 貝萊斯芽孢桿菌khh13菌株及其增量培養方法與用途
CN113969247A (zh) * 2021-11-09 2022-01-25 云南省烟草农业科学研究院 一种抑制烟草病害病原菌的细菌及应用
CN113980836A (zh) * 2021-09-23 2022-01-28 中化化肥有限公司临沂农业研发中心 贝莱斯芽孢杆菌及其在草莓根腐病防治中的应用
CN114149935A (zh) * 2021-06-08 2022-03-08 云南农业大学 一种产酶溶杆菌及其应用
CN110804570B (zh) * 2019-11-20 2022-04-08 中国农业大学 一种同时降解玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN115074287A (zh) * 2022-07-04 2022-09-20 京博农化科技有限公司 贝莱斯芽孢杆菌jbnh 101及其培养基、发酵产物制备方法、制剂与应用
CN115093987A (zh) * 2022-05-12 2022-09-23 云南农业大学 一种谷糠乳杆菌及其应用
CN116376784A (zh) * 2023-05-23 2023-07-04 临沂市农业科学院 一种防治花生根腐病的微生物菌群
WO2023138678A1 (zh) * 2022-01-21 2023-07-27 慕恩（广州）生物科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102286412A (zh) * 2011-08-30 2011-12-21 新疆农业科学院微生物应用研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在番茄枯萎病拮抗中的应用
CN102703342A (zh) * 2012-04-25 2012-10-03 四川农业大学 贝莱斯芽孢杆菌zj20菌株及其液体制剂
CN105087423A (zh) * 2014-05-16 2015-11-25 Cj第一制糖株式会社 新型芽孢杆菌cjbv及含有其的抗菌组合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102286412A (zh) * 2011-08-30 2011-12-21 新疆农业科学院微生物应用研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在番茄枯萎病拮抗中的应用
CN102703342A (zh) * 2012-04-25 2012-10-03 四川农业大学 贝莱斯芽孢杆菌zj20菌株及其液体制剂
CN105087423A (zh) * 2014-05-16 2015-11-25 Cj第一制糖株式会社 新型芽孢杆菌cjbv及含有其的抗菌组合物
JP2017128574A (ja) * 2014-05-16 2017-07-27 シージェイ チェイルジェダン コーポレイション 新規なバチルス・ベレゼンシスｃｊｂｖ及びそれを含む抗菌組成物

Cited By (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107937313B (zh) * 2017-12-21 2019-10-01 福建省农业科学院植物保护研究所 一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN107937312A (zh) * 2017-12-21 2018-04-20 福建省农业科学院植物保护研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治黄瓜疫病中的应用
CN107937313A (zh) * 2017-12-21 2018-04-20 福建省农业科学院植物保护研究所 一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN108641981A (zh) * 2018-05-17 2018-10-12 十堰市农业科学院 一株生防芽孢杆菌鉴定及应用
CN108676756A (zh) * 2018-06-04 2018-10-19 中国水产科学研究院珠江水产研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其作为水产病原菌抑制剂的应用
CN108949614A (zh) * 2018-06-21 2018-12-07 华北制药集团爱诺有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌的微生物菌剂
CN108949614B (zh) * 2018-06-21 2020-05-29 华北制药集团爱诺有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌的微生物菌剂
CN109022304A (zh) * 2018-07-04 2018-12-18 华南农业大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其广谱抑菌作用和在防治香蕉病害中的应用
CN109077067A (zh) * 2018-08-16 2018-12-25 南京农业大学 一种生防菌及其在农作物灰霉病防治方面的应用
CN109077067B (zh) * 2018-08-16 2021-04-30 南京农业大学 一种生防菌及其在农作物灰霉病防治方面的应用
CN109266586A (zh) * 2018-10-18 2019-01-25 淮海工学院 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03及其用途与发酵方法
CN109266586B (zh) * 2018-10-18 2021-04-20 淮海工学院 贝莱斯芽孢杆菌bmf 03及其用途与发酵方法
CN111073825A (zh) * 2018-10-19 2020-04-28 沈阳药科大学 具有抗植物土传病害作用的细菌及其用途
CN109370939A (zh) * 2018-11-06 2019-02-22 上海交通大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其分离方法与应用
CN109576188B (zh) * 2018-12-28 2021-07-09 天津开发区坤禾生物技术有限公司 一种防治半夏根腐病菌剂及其制备方法和应用
CN109576188A (zh) * 2018-12-28 2019-04-05 天津开发区坤禾生物技术有限公司 一种防治半夏根腐病菌剂及其制备方法和应用
CN109652336A (zh) * 2019-01-22 2019-04-19 广西金穗生态科技股份有限公司 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN110184208A (zh) * 2019-03-29 2019-08-30 华中农业大学 一株用于防治根肿病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN110754466A (zh) * 2019-05-17 2020-02-07 卢志军 贝莱斯芽孢杆菌可溶粒剂及其制备方法
US11523614B2 (en) 2019-05-17 2022-12-13 Zhijun Lu Soluble granule of Bacillus velezensis and its preparation method
CN110172423A (zh) * 2019-05-28 2019-08-27 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治根结线虫中的应用
TWI740263B (zh) * 2019-11-06 2021-09-21 行政院農業委員會高雄區農業改良場 貝萊斯芽孢桿菌khh13菌株及其增量培養方法與用途
CN110804570B (zh) * 2019-11-20 2022-04-08 中国农业大学 一种同时降解玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN111349588A (zh) * 2020-04-29 2020-06-30 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN111349588B (zh) * 2020-04-29 2022-01-11 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN111690572A (zh) * 2020-07-15 2020-09-22 西北农林科技大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用和制剂
CN112342173A (zh) * 2020-12-02 2021-02-09 中国农业科学院特产研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112342173B (zh) * 2020-12-02 2022-11-29 中国农业科学院特产研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112920966A (zh) * 2020-12-31 2021-06-08 浙江省农业科学院 贝莱斯芽孢杆菌及其微生物菌剂、菌剂制备方法和应用
CN112779183A (zh) * 2020-12-31 2021-05-11 浙江省农业科学院 番茄半边风病害防控生物有机肥、制备方法及其应用
CN112795504A (zh) * 2021-01-07 2021-05-14 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112795506B (zh) * 2021-01-07 2022-08-19 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112795504B (zh) * 2021-01-07 2022-08-19 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112795506A (zh) * 2021-01-07 2021-05-14 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112899196A (zh) * 2021-02-08 2021-06-04 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治十字花科根肿病中的应用
CN112899196B (zh) * 2021-02-08 2022-03-08 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治十字花科根肿病中的应用
CN113215031B (zh) * 2021-04-20 2022-07-15 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌19573-3及其应用
CN113215031A (zh) * 2021-04-20 2021-08-06 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌19573-3及其应用
CN114149935B (zh) * 2021-06-08 2023-05-23 云南农业大学 一种产酶溶杆菌及其应用
CN114149935A (zh) * 2021-06-08 2022-03-08 云南农业大学 一种产酶溶杆菌及其应用
CN113416104A (zh) * 2021-06-10 2021-09-21 中国农业科学院油料作物研究所 一种生物防治菌核病并促进油菜丰产喷施型制剂及其制备方法
CN113317326A (zh) * 2021-06-23 2021-08-31 北京意科乐生态科技有限公司 一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用
CN113980836A (zh) * 2021-09-23 2022-01-28 中化化肥有限公司临沂农业研发中心 贝莱斯芽孢杆菌及其在草莓根腐病防治中的应用
CN113980836B (zh) * 2021-09-23 2022-09-09 中化化肥有限公司临沂农业研发中心 贝莱斯芽孢杆菌及其在草莓根腐病防治中的应用
CN113969247A (zh) * 2021-11-09 2022-01-25 云南省烟草农业科学研究院 一种抑制烟草病害病原菌的细菌及应用
CN113969247B (zh) * 2021-11-09 2023-02-28 云南省烟草农业科学研究院 一种抑制烟草病害病原菌的细菌及应用
WO2023138678A1 (zh) * 2022-01-21 2023-07-27 慕恩（广州）生物科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN115093987B (zh) * 2022-05-12 2023-05-23 云南农业大学 一种谷糠乳杆菌及其应用
CN115093987A (zh) * 2022-05-12 2022-09-23 云南农业大学 一种谷糠乳杆菌及其应用
CN115074287A (zh) * 2022-07-04 2022-09-20 京博农化科技有限公司 贝莱斯芽孢杆菌jbnh 101及其培养基、发酵产物制备方法、制剂与应用
CN115074287B (zh) * 2022-07-04 2023-09-29 山东京博农化科技股份有限公司 贝莱斯芽孢杆菌jbnh 101及其培养基、发酵产物制备方法、制剂与应用
CN116376784A (zh) * 2023-05-23 2023-07-04 临沂市农业科学院 一种防治花生根腐病的微生物菌群
CN116376784B (zh) * 2023-05-23 2023-09-05 临沂市农业科学院 一种防治花生根腐病的微生物菌群

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