CN113875779A - 杀菌剂组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种杀菌剂组合物，其包括以下重量份的组分：贝莱斯芽孢杆菌HAB‑2提取物0.1～1份，ε‑聚赖氨酸35～55份，甘氨酸25～35份，褐藻寡糖4～10份；所述贝莱斯芽孢杆菌HAB‑2的保藏编号为：CCTCC NO:M 2015070。本发明还公开了该杀菌剂组合物的制备方法。本发明中的杀菌剂组合物防病谱广，对于多种植物的真菌病害具备显著的防治作用。

Description

杀菌剂组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及农药领域，尤其涉及一种杀菌剂组合物及其制备方法。
背景技术
ε-聚赖氨酸(ε-PL)是L-赖氨酸的聚合物，其化学结构如下所示。ε-聚赖氨 酸为淡黄色粉末，略有苦味，其对热稳定，吸湿性强，不溶于乙醚、乙醇、乙 酸乙酯等有机溶剂，易溶于水。
Figure BDA0003313003530000011
ε-聚赖氨酸(ε-PL)可直接破坏细胞及细胞器对物质赖以生存的选择性和依 赖于膜结构完整的能量代谢，引起细胞内溶酶体膜破裂，进而诱导微生物产生 自溶作用，最后导致细胞死亡。现有的研究表明，ε-聚赖氨酸对大肠杆菌、金黄 色葡萄球菌、保加利亚乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、黄曲霉、白色念球 菌、黑曲霉等具有较好的抑制作用。因此，往往应用在乳制品、肉制品、海产 品等食品的防腐中。
脂肽类物质是芽孢杆菌通过非核糖体途径合成的一类具有广谱抑制病原菌 的活性化合物。申请人在前期申请中提出了一种生防菌HAB-2，其对番茄早疫 病菌、西瓜枯萎病菌、香蕉枯萎病菌、棉花枯萎病菌、橡胶炭疽病菌、橡胶树 棒抱霉落叶病菌、茶轮斑病菌、芒果炭疽病菌和/或橡胶褐根病菌中的一种或多 种具有抑制作用。探索以上两种物质的进一步应用具有较大的意义。
另一方面，现有的杀菌剂，其防病谱窄，且效果差。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种杀菌剂组合物，其对于多种植 物的真菌病害具备显著的防治作用。
本发明还要解决的技术问题在于，提供一种上述的农药组合物的制备方法。
为了解决本发明的技术问题，本发明提供了一种杀菌剂组合物，其包括以 下重量份的组分：贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.1～1份，ε-聚赖氨酸35～55 份，甘氨酸25～35份，褐藻寡糖4～10份。
其中，贝莱斯芽孢杆菌HAB-2为申请人前期所制备，其保藏编号为：CCTCC NO:M2015070；通过前期实验证明，该菌种的提取物对于番茄早疫病菌、西瓜 枯萎病菌、香蕉枯萎病菌、棉花枯萎病菌、橡胶炭疽病菌、橡胶树棒抱霉落叶 病菌、茶轮斑病菌、芒果炭疽病菌和/或橡胶褐根病菌具有良好的抑制作用。ε- 聚赖氨酸对霉菌有较强的抗菌作用。甘氨酸具有氨基和羧基的两性离子，有很 强的缓冲性，常用作缓冲剂，在配制农药时一般起稳定剂作用。实验证明，贝 莱斯芽孢杆菌HAB-2正丁醇提取物、ε-聚赖氨酸和甘氨酸按一定比例混合后抗 植物真菌病害增效作用显著。
需要说明的是，贝莱斯芽孢杆菌HAB-2，前期鉴定认为是解淀粉芽孢杆菌， 后来由于多个菌株的基因组分析及分子生物学技术的发展，归类为贝莱斯芽孢 杆菌，保藏信息为：
生物材料的分类命名：解淀粉芽孢杆菌HAB-2(Bacillus amyloliquefaciensHAB-2)；
保藏该生物材料样品的单位名称：中国典型培养物保藏中心；
地址：中国武汉武汉大学；
保藏日期：2015年1月27日；
和保藏编号：CCTCC NO:M 2015070。
其中，褐藻寡糖具有多项生物学功能，在医药、食品、日化、饲料和农业 方面有广泛的应用。在植物体内也是重要的信号分子，可促进植物的生长，而 且可提高植物对病虫害的抵抗力。
作为上述技术方案的改进，还包括辅料，所述辅料包括：
pH调节剂2～6份，溶剂4～10份，乳化剂9～20份。
具体的，本发明中的杀菌剂组合物可制备为任意剂型，具体的辅料可根据 剂型的需求进行选择。
在本发明的一个实施例之中，将杀菌剂组合物制备为乳剂，其包括以下重 量份的组分：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.2～0.8份，ε-聚赖氨酸37～51份，甘氨酸 26～32份，褐藻寡糖1.5～5份，pH调节剂3～5.5份，溶剂4～8份，乳化剂9～17 份；
上述各组分的重量份之和为100份。
作为上述技术方案的改进，所述贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物的制备方法 为：将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2接种至培养基发酵，发酵液离心后取上清液，上 清液经正丁醇萃取、旋蒸后得到提取物。
具体的，可参见申请人前序申请CN 201510061973.0中的具体方法。
作为上述技术方案的改进，所述pH调节剂选用柠檬酸、乳酸、酒石酸、苹 果酸中的一种或多种；
所述溶剂选用异丁醇、异丙醇、丙三醇、乙二醇中的一种或多种；
所述乳化剂选用吐温、司盘、农乳400、农乳500、农乳600中的一种或多 种。
作为上述技术方案的改进，所述pH调节剂选用柠檬酸，所述溶剂选用丙三 醇，所述乳化剂选用吐温和农乳500的混合物。
作为上述技术方案的改进，所述乳化剂选用吐温20和农乳500的混合物， 且吐温20与农乳500的重量比为1：(1.3～3)。
作为上述技术方案的改进，所述真菌为尖孢镰刀菌、丝核菌、黄萎轮枝孢 菌、炭疽菌、稻瘟菌、灰葡萄孢菌、灰梨孢菌、白粉菌、赤霉菌、和/或拟盘多 毛孢菌。
相应的，本发明还公开了一种上述的农药组合物的制备方法，其包括：将 贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.1～1份，ε-聚赖氨酸35～55份，甘氨酸25～35 份，褐藻寡糖4～10份混合均匀，即得杀菌剂组合物成品。
作为上述技术方案的改进，包括：
(1)将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、褐藻寡 糖混合，得到第一混合物；
(2)将第一混合物与pH调节剂混合，得到第二混合物；
(3)在所述第二混合物中加入溶剂、乳化剂，混合均匀后得到杀菌剂组合 物成品。
实施本发明，具有如下有益效果：
本发明的农药组合物，包括贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、 甘氨酸和褐藻寡糖。其中贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸 具有良好的协同增效效应，对各种植物的真菌病害防治作用显著，具体的，本 发明中农药组合物的防病谱广，对橡胶树白粉病，橡胶树炭疽病，芒果炭疽病， 黄皮炭疽病、番石榴果实轮纹病、水稻稻瘟病等多种植物的真菌病害均有显著 的防治作用。此外，本发明中的褐藻寡糖可提高植物对病虫害的抵抗力，减少 化学农药的使用和对抗农药产生抗药性的风险。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施方式 对本发明作进一步地详细描述。
实施例1农药组合物抑菌效果实验
1供试材料
1.1农药组合物的配方为：
试验组：贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.5份，ε-聚赖氨酸50份，甘氨酸 30份，褐藻寡糖1.5份；
对比组1：ε-聚赖氨酸50份，甘氨酸30份，褐藻寡糖1.5份；
对比组2：贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.5份，甘氨酸30份，褐藻寡糖 1.5份；
对比组3：贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.5份，ε-聚赖氨酸50份，褐藻 寡糖1.5份；
对比组4：贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.5份，ε-聚赖氨酸50份，甘氨 酸30份；
空白对照组：水
其中，贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物的具体制备方法参见CN 201510061973.0。
1.2病原物：炭疽病病菌(Colletotrichum gloeosporioides)
2实验方法
将PDA培养基于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min后取出，在培养 皿中分别加入不同质量浓度的试验组、对比例组1～4的杀菌剂化合物和PDA 培养基充分混匀，使每个平板培养基中农药化合物溶液的浓度为50mg/L，备用。 从用PDA培养基培养7d的炭疽病病菌菌落边缘取直径为4mm的菌饼，将菌 饼分别接种于平板培养基正中央，每个平板接种一个菌饼，菌丝面朝下，28℃ 培养箱中培养7d。每组重复4次。实验结束后，测量各组菌落直径Di，并计算 抑制率ωi。进而以农药组合物浓度的对数值作为横坐标，抑制率为纵坐标，计算毒力方程和半最大效应浓度EC50。
其中，抑制率由下述公式组计算得到：
Δdi＝Di-di
Figure BDA0003313003530000051
其中，di为实验前第i组的菌落直径，Di为实验后第i组的菌落直径，Δdi为第i组菌落增长直径，Δdc为空白对照组菌落增长直径。
实验结果如下表所示：
抑制率ω/％ EC<sub>50</sub>(mg/L)
试验组 89.23 23.41
对比组1 78.52 24.78
对比组2 80.31 26.54
对比组3 90.47 22.25
对比组4 88.25 23.49
实施例2
本实施例提供一种杀菌剂组合物，其配方如下：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.25份，ε-聚赖氨酸40份，甘氨酸26份， 褐藻寡糖5份，柠檬酸5.25份，丙三醇8份，吐温20 6.5份，农乳500 9份；
其制备方法为：先将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、 褐藻寡糖混合，然后加入柠檬酸，加热(60℃)搅拌均匀后依次加入丙三醇、 吐温20、农乳500，搅拌均匀，得到悬浮状成品。
实施例3
本实施例提供一种杀菌剂组合物，其配方如下：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.45份，ε-聚赖氨酸45.5份，甘氨酸27份， 褐藻寡糖2.25份，柠檬酸4.5份，丙三醇6.6份，吐温20 5.7份，农乳500 8份；
其制备方法为：先将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、 褐藻寡糖混合，然后加入柠檬酸，加热(60℃)搅拌均匀后依次加入丙三醇、 吐温20、农乳500，搅拌均匀，得到悬浮状成品。
实施例4
本实施例提供一种杀菌剂组合物，其配方如下：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.6份，ε-聚赖氨酸48.5份，甘氨酸28.2份， 褐藻寡糖1.9份，柠檬酸3.8份，丙三醇5.7份，吐温20 4.5份，农乳500 6.8份；
其制备方法为：先将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、 褐藻寡糖混合，然后加入柠檬酸，加热(60℃)搅拌均匀后依次加入丙三醇、 吐温20、农乳500，搅拌均匀，得到悬浮状成品。
实施例5
本实施例提供一种杀菌剂组合物，其配方如下：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.7份，ε-聚赖氨酸50.5份，甘氨酸29份， 褐藻寡糖1.5份，柠檬酸3.4份，丙三醇5.1份，吐温20 4.2份，农乳500 5.6份；
其制备方法为：先将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、 褐藻寡糖混合，然后加入柠檬酸，加热(60℃)搅拌均匀后依次加入丙三醇、 吐温20、农乳500，搅拌均匀，得到悬浮状成品。
实施例6
本实施例提供一种杀菌剂组合物，其配方如下：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.8份，ε-聚赖氨酸48份，甘氨酸32份， 褐藻寡糖1.6份，柠檬酸3.2份，丙三醇4.8份，吐温20 4份，农乳500 5.6份；
其制备方法为：先将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、 褐藻寡糖混合，然后加入柠檬酸，加热(60℃)搅拌均匀后依次加入丙三醇、 吐温20、农乳500，搅拌均匀，得到悬浮状成品。
实施例7大田实验1
本试验安排在海南省儋州市海南大学植物保护学院试验基地，试用地为平 地块，土壤为沙土。栽培管理按照农药田间药效试验统一进行规范。
1、供试材料
药剂：应用实施例2～6的杀菌剂组合物。对照药剂为30％苯醚甲环唑悬浮 剂，稀释800倍液使用，喷清水为空白对照。
病原物：炭疽病病菌(Colletotrichum gloeosporioides)
寄主植物：芒果
2、试验方法
试验小区面积为40平方米，每个小区6株芒果树，四次重复。于芒果叶片 炭疽病发病初期(零星发病时)第一次兑水喷雾，连喷2次，间隔5-7天，喷施药 液量为90L/亩。
3、调查方法
每小区随机取样，每点调查3株，梢期每小区随机取样调查3株，每株 按东、西、南、北、中五点取样，每点调查2条梢的全部叶片，记录调查总叶 数、各级病叶数，然后计算病情指数和防治效果。
调查发病分级标准参照防治芒果炭疽病行业标准，分为6个级别：
0级：无病斑；
1级：病斑面积占整个叶面积的5％以下；
3级：病斑面积占整个叶面积的6％～15％；
5级：病斑面积占整个叶面积的16％～25％；
7级：病斑面积占整个叶面积的26％～50％；
9级：病斑面积占整个叶面积的51％以上。
4、药效计算方法
Figure BDA0003313003530000071
Figure BDA0003313003530000072
5、试验结果
各处理变化病情指数和防效如下：
Figure BDA0003313003530000073
实施例8大田实验2
试验在海南省定安县定城镇潭黎村龙州洋水稻田进行。试验地土壤为黑壤 土，肥力中等，排灌良好。栽培管理按照农药田间药效试验统一进行规范。
1、供试材料
药剂：应用实施例2～6的杀菌剂组合物。对照药剂为5％己唑醇乳油，稀释 800倍液使用，喷清水为空白对照。
病原物：稻瘟病(Pyricularia grisea(Cooke)Sacc)
寄主植物：水稻
2、试验方法
试验小区面积为30平方米，四次重复。于水稻稻瘟病发病初期(零星发病时) 第一次兑水喷雾，连喷2次，间隔5-7天，喷施药液量为60L/亩。
3、调查方法
每小区五点取样，每点取50株，每株调查旗叶及旗叶以下三片叶，记录总 株数、病株数和病级数。
调查发病分级标准参照防治水稻稻瘟病行业标准，分为6个级别：
0级：无病；
1级：叶片病斑少于5个，长度小于lcm；
3级：叶片病斑6-10个，部分病斑长度大于1cm；
5级：叶片病斑11-25个，部分病斑连成片，占叶面积10％-25％；
7级：叶片病斑26个以上，病斑连成片，占叶面积26％-50％；
9级：病斑连成片，占叶面积50％以上或全叶枯死。
4、药效计算方法
Figure BDA0003313003530000081
Figure BDA0003313003530000082
5、试验结果
各处理变化病情指数和防效如下：
Figure BDA0003313003530000083
Figure BDA0003313003530000091
实施例9大田实验3
试验在海南省儋州市海南大学儋州校区实验基地香蕉地进行。试验地土壤 为沙壤土，肥力中等，排灌良好。栽培管理按照农药田间药效试验统一进行规 范。
1、供试材料
药剂：应用实施例2～6的农药组合物。对照药剂为250g/L吡唑醚菌酯乳油， 稀释800倍液使用，喷清水为空白对照。
病原物：香蕉叶斑病(Cercosporam usae spp.)
寄主植物：香蕉
2、试验方法
试验小区面积为50平方米，四次重复。于香蕉叶斑病发病初期开始施药， 兑水喷雾，连喷2次，间隔5-7天，喷施药液量为90L/亩。
3、调查方法
根据香蕉叶片为害症状程度分级，以株为单位，每小区随机调查2株-3株， 每株香蕉从顶叶往下调查5片-13片叶(未打开心叶不计)，具体视生育期而定， 营养生长期至抽蓄期可调查8片-13片叶，挂果期可调查5片-10片叶，记录调 查的总叶数、各级病叶数。
调查发病分级标准参照防治芒果炭疽病行业标准，分为6个级别：
0级：全株无病；
1级：病斑面积占整个叶片面积的5％以下；
3级:病斑面积占整个叶片面积的6％-15％；
5级：病斑面积占整个叶片面积的16％-25％；
7级：病斑面积占整个叶片面积的26％50％；
9级：病斑面积占整个叶片面积的51％以上。
4、药效计算方法
Figure BDA0003313003530000101
Figure BDA0003313003530000102
5、试验结果
各处理变化病情指数和防效如下：
Figure BDA0003313003530000103
从实施例7～9可以看出，本发明中的杀菌剂组合物对芒果炭疽病、水稻稻 瘟病和香蕉叶斑病具有良好的防治效果。事实上，本发明的农药组合物对多种 真菌(包括但不限于尖孢镰刀菌、丝核菌、黄萎轮枝孢菌、炭疽菌、稻瘟菌、 灰葡萄孢菌、灰梨孢菌、白粉菌、赤霉菌、拟盘多毛孢菌)所引起的真菌病害 (包括但不限于橡胶树白粉病，橡胶树炭疽病，芒果炭疽病，黄皮炭疽病、番 石榴果实轮纹病、水稻稻瘟病)均有显著的防治作用。
以上所述是发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些 改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种杀菌剂组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.1～1份，ε-聚赖氨酸35～55份，甘氨酸25～35份，褐藻寡糖4～10份；
所述贝莱斯芽孢杆菌HAB-2的保藏编号为：CCTCC NO:M 2015070。
2.如权利要求1所述的杀菌剂组合物，其特征在于，还包括辅料，所述辅料包括：
pH调节剂2～6份，溶剂4～10份，乳化剂9～20份。
3.如权利要求1所述的杀菌剂组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：
贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.2～0.8份，ε-聚赖氨酸37～51份，甘氨酸26～32份，褐藻寡糖1.5～5份，pH调节剂3～5.5份，溶剂4～8份，乳化剂9～17份；
上述各组分的重量份之和为100份。
4.如权利要求2或3所述的杀菌剂组合物，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物的制备方法为：将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2接种发酵，发酵液离心后取上清液，上清液经正丁醇萃取后得到提取物。
5.如权利要求2或3所述的杀菌剂组合物，其特征在于，所述pH调节剂选用柠檬酸、乳酸、酒石酸、苹果酸中的一种或多种；
所述溶剂选用异丁醇、异丙醇、丙三醇、乙二醇中的一种或多种；
所述乳化剂选用吐温、司盘、农乳400、农乳500、农乳600中的一种或多种。
6.如权利要求5所述的杀菌剂组合物，其特征在于，所述pH调节剂选用柠檬酸，所述溶剂选用丙三醇，所述乳化剂选用吐温和农乳500的混合物。
7.如权利要求6所述的杀菌剂组合物，其特征在于，所述乳化剂选用吐温20和农乳500的混合物，且吐温20与农乳500的重量比为1：(1.3～3)。
8.如权利要求1所述的杀菌剂组合物，其特征在于，所述真菌为尖孢镰刀菌、丝核菌、黄萎轮枝孢菌、炭疽菌、稻瘟菌、灰葡萄孢菌、灰梨孢菌、白粉菌、赤霉菌、和/或拟盘多毛孢菌。
9.一种如权利要求1～8任一项所述的杀菌剂组合物的制备方法，其特征在于，包括：将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物0.1～1份，ε-聚赖氨酸35～55份，甘氨酸25～35份，褐藻寡糖4～10份混合均匀，即得杀菌剂组合物成品。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括：
(1)将贝莱斯芽孢杆菌HAB-2提取物、ε-聚赖氨酸、甘氨酸、褐藻寡糖混合，得到第一混合物；
(2)将第一混合物与pH调节剂混合，得到第二混合物；
(3)在所述第二混合物中加入溶剂、乳化剂，混合均匀后得到杀菌剂组合物成品。
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