CN106999574B - 使用tlr9激动剂与检查点抑制剂对癌症的治疗 - Google Patents

Abstract

本发明提供诱导对癌症的免疫应答的方法，所述方法包括向癌症患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂。优选地，所述一种或多种TLR9激动剂通过瘤内(i.t.)施用施用于所述患者。

Description

使用TLR9激动剂与检查点抑制剂对癌症的治疗

相关申请

本申请要求2014年10月10日提交的美国临时申请号62/062,274和2015年9月15日提交的美国临时申请号62/218,934的权益。以上申请的全部教导通过引用并入本文。

发明背景

发明领域

本发明一般涉及肿瘤学领域，更具体地说涉及免疫疗法在癌症治疗中的用途。

相关领域概述

Toll样受体(TLR)存在于免疫系统的许多细胞上并已显示参与先天免疫应答(Hornung,V.等,(2002)J.Immunol.168:4531-4537)。在脊椎动物中，该家族由已知识别来自细菌、真菌、寄生虫和病毒的病原体相关分子模式的称为TLR1至TLR11的11种蛋白质组成(Poltor ak,A.等.(1998)Science 282:2085-2088；Underhill,D.M.,等.(1999)Nature401:811-815；Hayashi,F.等(2001)Nature 410:1099-1103；Zh ang,D.等.(2004)Science303:1522-1526；Meier,A.等.(2003)Cell.Microbiol.5:561-570；Campos,M.A.等.(2001)J.Immunol.167:416-423；Hoebe,K.等.(2003)Nature 424:743-748；Lund,J.(2003)J.Exp.Med.198:513-520；Heil,F.等.(2004)Science 303:1526-1529；Diebold,S.S.,等.(2004)Science 303:1529-1531；Hornung,V.等.(2004)J.Immunol.173:5935-5943)；DeNardo,(2015)Cytokine 74:181-189。

TLR是脊椎动物识别外源分子和产生对外源分子的免疫应答的关键手段，也提供了先天免疫应答和适应性免疫应答相关联的手段(Akira,S.等.(2001)Nature Immunol.2:675-680；Medzhitov,R.(2001)Nature Rev.Immunol.1:135-145)。一些TLR位于细胞表面上以检测并引发对细胞外病原体的应答，并且其它TLR位于细胞内以检测并引发对细胞内病原体的应答。

已知TLR9在细菌DNA和合成的寡核苷酸中识别未甲基化的CpG基序。(Hemmi,H.等.(2000)Nature 408:740-745)。TLR9的天然存在的激动剂已经显示产生抗肿瘤活性(例如肿瘤生长和血管发生)，导致有效的抗癌应答(例如抗白血病)(Smith,J.B.和Wickstrom,E.(1998)J.Natl.Cancer Inst.90:1146-1154)。

癌症免疫疗法最令人期待的前景之一是具有更持久的癌症控制的潜力。活化的免疫细胞保留了对癌细胞独特的蛋白质标志物或抗原的永久记忆。如果癌症再次出现，则免疫细胞重新活化。然而，已经确定许多因素导致免疫系统忽视癌细胞，从而限制癌症免疫疗法的有效性(Marabelle等.(2013)J Clin Invest,123(6):2447-2463；Mellman等(2011)Nature 480(7378):480-489)。具体来说，免疫系统具有许多分子制动器或检查点，其作为负责维持自身耐受性和调节免疫系统应答程度以使外周组织损伤最小化的免疫系统中的内源性抑制途径。另外，已经显示肿瘤组织吸纳(co-opt)检查点系统以降低宿主免疫应答的有效性，导致免疫系统和肿瘤生长的抑制(参见，例如，Pardoll,2012,Nature ReviewsCancer 12:252-64；Nirschl&Drake,2013,Clin Cancer Res 19:4917-24)。

因此，需要保持免疫系统参与的疗法，以提高针对肿瘤细胞的免疫调节疗法的功效。

发明概述

本发明提供诱导对癌症的免疫应答的方法，所述方法包括向癌症患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂。优选地，所述一种或多种TLR9激动剂通过瘤内(i.t.)施用施用于所述患者。优选地，所述一种或多种TLR9激动剂是免疫聚体(immunomer)。

在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂瘤内施用。在一些实施方案中，TLR9激动剂是免疫聚体。在一些实施方案中，免疫聚体是选自表II的化合物。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是程序性死亡配体1(PD-L1，也称为B7-H1、CD274)、程序性死亡1(PD-1)、CTLA-4、PD-L2(B7-DC、CD273)、LAG3、TIM3、2B4、A2aR、B7H1、B7H3、B7H4、BTLA、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、DR3、GAL9、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(诱导型T细胞共刺激物)、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA、VTCN1或其任何组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDOl、CTLA4、PD-1、LAG3、PD-L1、TIM3或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDOl的抑制剂。在一些实施方案中，一个或多个检查点抑制剂通过任何合适的途径施用。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂的施用途径是肠胃外、粘膜递送、口服、舌下、透皮、局部、吸入、鼻内、气溶胶、瘤内、眼内、气管内、直肠内、胃内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或滴眼液或漱口水形式。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂各自以药学有效量施用。在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤。

在一些实施方案中，癌症是血液癌症。在一些实施方案中，血液癌症是白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤或B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，血液癌症是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B-淋巴母细胞性淋巴瘤、B细胞原淋巴性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，DLBCL是活化的B细胞弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是慢性淋巴性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞原淋巴性白血病(B-PLL)、非CLL/SLL淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症或其组合。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是复发性或难治性B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，复发性或难治性B细胞恶性肿瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，复发性或难治性DLBCL是活化的B细胞弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)。在一些实施方案中，复发性或难治性B细胞恶性肿瘤是慢性淋巴性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞原淋巴性白血病(B-PLL)、非CLL/SLL淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症或其组合。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是转移性B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，转移性B细胞恶性肿瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞原淋巴性白血病(B-PLL)、非CLL/SLL淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症或其组合。在一些实施方案中，癌症是肉瘤或癌。在一些实施方案中，癌症选自肛门癌；阑尾癌；胆管癌(bileduct cancer)(即胆管癌(cholangiocarcinoma))；膀胱癌；乳腺癌；宫颈癌；结肠癌；未知原发癌(CUP)；食道癌；眼癌；输卵管癌；胃肠癌；肾癌；肝癌；肺癌；髓母细胞瘤；黑色素瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；甲状旁腺病；阴茎癌；垂体瘤；前列腺癌；直肠癌；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；咽喉癌；甲状腺癌；子宫癌；阴道癌；或外阴癌。在一些实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、胃肠癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、近端或远端胆管癌和黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是原位导管癌、原位小叶癌、侵袭性或浸润性导管癌、侵袭性或浸润性小叶癌、炎性乳腺癌、三阴性乳腺癌、乳头的佩吉特病(paget disease)、叶状肿瘤、血管肉瘤或侵袭性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是结肠癌。在一些实施方案中，结肠癌是腺癌、胃肠类癌肿瘤、胃肠道间质瘤、原发性结肠直肠淋巴瘤、平滑肌肉瘤、黑色素瘤、鳞状细胞癌、粘液腺癌或印戒(Signet ring)细胞腺癌。在一些实施方案中，癌症是复发性或难治性癌症。在一些实施方案中，复发性或难治性癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、胃肠癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、近端或远端胆管癌和黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，转移性癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、胃肠癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、近端或远端胆管癌和黑色素瘤。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是单克隆抗体。

在一些实施方案中，包含免疫检查点抑制剂治疗和瘤内施用TLR9激动剂用于治疗癌症的组合的使用还包括施用另外的抗癌剂。在一些实施方案中，另外的抗癌剂选自化学治疗剂或放射疗法。在一些实施方案中，化学治疗剂选自苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、阿霉素、美沙拉嗪、沙利度胺、来那度胺、替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司、氟达拉滨、福他替尼、紫杉醇、多西他赛、奥法木单抗、利妥昔单抗、地塞米松、强的松、CAL-101、替伊莫单抗、托西莫单抗、硼替佐米、喷司他丁、内皮抑制素或其组合。

附图简述

通过以下对本发明的优选实施方案的更具体的描述(如附图所示)，本发明的前述和其它目的、特征和优点将变得显而易见，其中相同的附图标记贯穿不同视图是指相同的部分。附图不一定按比例绘制，而是将重点放在说明本发明的原理上。

图1是用于线性合成免疫聚体的合成方案。DMTr＝4,4'-二甲氧基三苯甲基；CE＝氰基乙基。

图2是用于平行合成免疫聚体的合成方案。DMTr＝4,4'-二甲氧基三苯甲基；CE＝氰基乙基。

图3A和图3B证明，与皮下施用相比，瘤内施用TLR9激动剂诱导有效的抗肿瘤活性并增加CD3+TIL浸润。

图4A和图4B证明，在A20淋巴瘤模型的局部和远端肿瘤上，瘤内施用TLR9激动剂诱导有效的抗肿瘤活性。

图5A和图5B证明，在CT26结肠癌模型的局部和远端肿瘤上，瘤内施用TLR9激动剂诱导有效的抗肿瘤活性。

图6A和图6B证明，在B16黑色素瘤模型的局部和远端肿瘤上，瘤内施用TLR9激动剂诱导有效的抗肿瘤活性。

图7A至图7D表明抗CTLA4 mAb治疗和瘤内注射TLR9激动剂的组合导致对直接处理的肿瘤结节的肿瘤生长抑制。

图8A和图8B证明抗CTLA4 mAb治疗和瘤内施用TLR9激动剂导致全身性肺转移消退。

图9A至图9D表明组合瘤内施用TLR9激动剂和抗CTLA4 mAb治疗增强肺转移性肿瘤中的T细胞浸润。图9A显示在PBS处理组中与正常组织接触的肿瘤组织中存在少量T细胞。图9B和图9C显示浸润到肿瘤组织中的T细胞增加；然而，来自接受TLR9激动剂和CTLA-4 mAb的组合疗法的小鼠的肿瘤中存在最丰富的T细胞浸润。(CD3IHC染色x400)

图10A和图10B证明抗CTLA4 mAb治疗和瘤内注射TLR9激动剂对治疗的局部肿瘤导致对局部和远端肿瘤的有效的抗肿瘤作用。

图11A至图11E证明抗CTLA4 mAb和TLR9激动剂的瘤内注射增加T淋巴细胞浸润到肿瘤组织中。尽管少数CD3+细胞存在于PBS(媒介物)注射的小鼠中与正常组织接触的肿瘤组织中，但是在用TLR9激动剂或CTLA-mAb处理的小鼠的肿瘤组织中存在大量的CD+3细胞。然而，最丰富的CD3+细胞存在于接受TLR9激动剂和CTLA-4mAb组合疗法的小鼠的肿瘤中。

图12A至图12D表明抗PD-1 mAb治疗和瘤内注射TLR9激动剂的组合导致对直接处理的肿瘤结节的肿瘤生长抑制。

图13A和图13B证明抗PD-1治疗和瘤内施用TLR9激动剂导致全身性肺转移消退。

图14A至图14E表明抗IDO1抑制剂治疗和瘤内注射TLR9激动剂的组合导致对直接处理的肿瘤结节的肿瘤生长抑制。

图15A和图15B证明抗IDO1治疗和瘤内施用TLR9激动剂导致全身性肺转移消退。

图16A至图16D证明抗IDO1治疗和瘤内施用TLR9激动剂导致全身性转移性肿瘤抑制。图16A显示肿瘤结节渗透到PBS处理组中的大多数肺组织中。图16B和图16C显示肿瘤结节小于PBS组的肿瘤结节，并存在于TLR9激动剂组的肺组织边缘上；然而，大多数肺组织从接受TLR9激动剂和IDO的组合疗法的小鼠中清除肿瘤结节。

图17A至图17D表明用TLR9激动剂和IDO-1抑制剂治疗增强肺转移性肿瘤中的CD3+T细胞浸润。

优选的实施方案详述

本发明一般涉及肿瘤学领域，更具体地说涉及免疫疗法在癌症治疗或预防中的用途。优选地，本发明提供一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂的共同施用。这些药剂可用于诱导或增强针对疾病相关抗原(例如肿瘤相关抗原(TAA))的免疫应答，并增强治疗的总体疗效。

不受任何具体理论束缚，据信Toll样受体(TLR)在先天免疫系统(身体抵抗入侵病原体的第一道防线)以及包括癌细胞在内的损伤或功能失调的细胞中起着关键作用。TLR9激动剂的瘤内施用显示具有有效的抗肿瘤活性；然而，尽管有TLR9激动剂单一疗法的希望，但所产生的免疫应答诱导免疫系统抑制途径，包括降低TLR9激动剂功效的免疫检查点。因此，组合疗法似乎是必要的。

先天免疫系统还参与激活适应性免疫系统，其对目标病原体或组织进行高度特异性的免疫应答。然而，癌细胞可以利用调节性检查点途径以避免被免疫系统识别，从而屏蔽肿瘤免受免疫攻击。

目前，检查点抑制剂被设计成阻断这些免疫检查点，从而使免疫系统能够识别肿瘤细胞并允许持续的免疫疗法应答。虽然使用检查点抑制剂的单一疗法治疗显示出一些有希望的结果，但是这些结果仅在PD-L1阳性的患者中显示。另外，使用检查点抑制剂作为单一疗法的潜在缺点是产生自身免疫毒性。

TLR9激动剂的瘤内施用导致治疗的肿瘤和远端肿瘤二者中肿瘤微环境的变化，如通过调节免疫检查点基因表达所证实。在这种情况下，瘤内TLR9激动剂施用可增加肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)；并且在注射的肿瘤中以及全身性地增强检查点抑制剂的抗癌活性。因此，TLR9激动剂的瘤内施用可以使肿瘤微环境与一种或多种检查点抑制剂组合敏化。

本文引用的所有出版物反映了本领域的技术水平，并且通过引用将其整体并入本文。这些参考文献和本说明书的教导之间的任何冲突都应以后者优先而得到解决。

定义

术语“2'-取代的核苷”或“2'-取代的阿拉伯糖苷”通常包括其中戊糖或阿拉伯糖部分2'位置的羟基被取代以产生2'-取代的或2'-O-取代的核糖核苷的核苷或阿拉伯糖核苷。在某些实施方案中，此类取代为具有1-6个饱和或不饱和碳原子的低级烃基、具有卤素原子或具有6-10个碳原子的芳基，其中这类烃基或芳基可以是未取代的或可以被卤基、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、烷氧羰基或氨基取代。2'-O-取代的核糖核苷或2'-O-取代的阿拉伯糖苷的实例包括但不限于2'-氨基、2'-氟代、2'-烯丙基、2'-O-烷基和2'-炔丙基核糖核苷或阿拉伯糖苷，2'-O-甲基核糖核苷或2'-O-甲基阿拉伯糖苷和2'-O-甲氧基乙氧基核糖核苷或2'-O-甲氧基乙氧基阿拉伯糖苷。

术语“3'”定向使用时，通常是指来自同一多核苷酸或寡核苷酸的另一区域或位置的多核苷酸或寡核苷酸3'(朝向寡核苷酸的3'位置)的区域或位置。

术语“5'”定向使用时，通常是指来自同一多核苷酸或寡核苷酸的另一区域或位置的多核苷酸或寡核苷酸5'(朝向寡核苷酸的5'位置)的区域或位置。

术语“约”通常意指确切的数目不是关键的。因此，寡核苷酸中的核苷残基的数目不是关键的，并且具有一个或两个较少核苷残基或一个至数个另外的核苷残基的寡核苷酸被认为是上述每个实施方案的等效物。

术语“佐剂”通常是指当添加到免疫原性试剂例如疫苗或抗原时，在暴露于混合物中时增强或加强受体宿主中的试剂的免疫应答的物质。

用于本发明的抗体包括但不限于单克隆抗体、合成抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)(包括双特异性scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab')片段、二硫键连接的Fv(sdFv)和任何上述的表位结合片段。特别地，用于本发明的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合免疫检查点分子的免疫检查点分子的结合位点的分子。用于本发明的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型{例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别{例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。优选地，用于本发明的抗体是IgG，更优选IgG1。适用于本文公开的方法的免疫检查点分子的抗体可以来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物(例如，人、鼠、驴、绵羊、兔、山羊、豚鼠、骆驼、马、鲨鱼或鸡)。优选地，抗体是人或人源化单克隆抗体。如本文所用，“人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且包括从人免疫球蛋白文库或从由人基因表达抗体的小鼠或其它动物分离的抗体。适用于本文公开的方法的免疫检查点分子的抗体可以是单特异性的、双特异性的、三特异性的或更多的多特异性。多特异性抗体可以免疫特异性结合多肽的不同表位，或者可以免疫特异性结合多肽以及异源表位，例如异源多肽或固体支持物质。

术语“激动剂”通常是指结合细胞受体并诱导应答的物质。此类应答可能是由受体介导的活性的增加。激动剂通常模拟天然存在的物质(如配体)的作用。

术语“拮抗剂”或“抑制剂”通常是指可以结合受体但在结合时不产生生物应答的物质。拮抗剂或抑制剂可以阻断、抑制或减弱由激动剂介导的应答，并可与激动剂竞争结合受体。此类拮抗剂或抑制活性可以是可逆的或不可逆的。

术语“抗原”通常是指被抗体或被T细胞抗原受体识别并选择性结合的物质。抗原可以包括但不限于肽、蛋白质、核苷、核苷酸及其组合。抗原可以是天然的或合成的，并且通常诱导对该抗原特异的免疫应答。

术语“癌症”通常是指但不限于由异常或不受控制的细胞增殖和/或分裂引起的任何恶性生长或肿瘤。癌症可能发生在人类和/或动物中，并且可能在任何和所有组织中出现。用本发明治疗患有癌症的患者可包括施用根据本发明的化合物、药物制剂或疫苗，使得异常或不受控制的细胞增殖和/或分裂受到影响。

术语“载体”通常包括用于药物制剂的任何赋形剂，稀释剂，填充剂，盐，缓冲剂，稳定剂，增溶剂，油，脂质，含脂质的囊泡，微球，脂质体包封或其它本领域熟知的物质。应当理解，载体、赋形剂或稀释剂的特征将取决于特定应用的施用途径。含有这些物质的药学上可接受的制剂的制备描述于例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,第18版，编辑A.Gennaro,Mack Publishing Co.,Easton,PA,1990。

术语“药学上可接受的”或“生理上可接受的”通常是指不干扰根据本发明的化合物的有效性并且与生物系统(例如细胞、细胞培养物、组织或生物体)相容的物质。优选地，生物系统是活的生物体，例如脊椎动物。

术语“共同施用(co-administration)”、“共同施用(co-administering)”或“共同施用(co-administered)”通常是指至少两种不同的治疗剂在时间上足够接近的施用。此类施用可以以任何顺序进行，包括同时施用，以及从几秒到几天间隔的时间间隔顺序。这种施用还可以包括多于一种药剂的单次施用和/或独立于另一种药剂。药剂的施用可以通过相同或不同途径。

术语“增强(enhance)”或“增强(enhancing)”意指增加或延长效力或期望效果的持续时间。举例来说，“增强”治疗剂的作用是指在治疗疾病、病症或病状期间增加或延长治疗剂作用的效力或持续时间的能力。本文所用的“增强有效量”是指足以增强治疗剂在治疗疾病、病症或病状中的作用的量。当在患者中使用时，对于这种使用有效的量将取决于疾病、病症或病状的严重性和病程、先前的治疗、患者的健康状况和对药物的应答以及治疗医师的判断。

术语“有效量”通常是指足以影响所需生物效应(例如有益结果)的量。因此，“有效量”将取决于其被施用的上下文。有效量可以在一个或多个预防或治疗施用中施用。

术语“与……组合”通常意指施用用于治疗疾病或病状的第一药剂和另一种药剂。

术语“个体”、“患者”或“受试者”可互换使用，并且通常是指哺乳动物，例如人。哺乳动物通常包括但不限于人、非人灵长类动物、大鼠、小鼠、猫、狗、马、家牛、母牛、猪、绵羊和兔。

术语“激酶抑制剂”通常是指在细胞中拮抗或抑制磷酸化依赖性细胞信号传导和/或生长途径的分子。激酶抑制剂可以是天然存在的或合成的，并且包括具有作为口服治疗剂施用的潜力的小分子。激酶抑制剂具有快速且特异性地抑制靶激酶分子活化的能力。蛋白激酶是有吸引力的药物靶标，部分原因在于它们调节多种信号传导和生长途径，并包括许多不同的蛋白质。因此，它们在治疗包括癌症、心血管疾病、炎性病症、糖尿病、黄斑变性和神经障碍的涉及激酶信号传导的疾病方面具有巨大的潜力。激酶抑制剂的实例包括索拉非尼

达沙替尼、ZACTIMA^TM、TYKERB^TM、伊曲他滨

和STI571。

术语“线性合成”通常是指从寡核苷酸的一端开始并且向另一端线性进行的合成。线性合成允许将相同或不相同(在长度、碱基组成和/或掺入的化学修饰方面)的单体单元掺入寡核苷酸中。

术语“修饰的核苷”通常是包含修饰的杂环碱基、修饰的糖部分或其任何组合的核苷。在一些实施方案中，修饰的核苷是非天然嘧啶或嘌呤核苷，如本文所述。为了本发明的目的，修饰的核苷、嘧啶或嘌呤类似物或非天然存在的嘧啶或嘌呤可互换使用，并且是指包含非天然存在的碱基和/或非天然存在的糖部分的核苷。为了本发明的目的，如果碱基不是鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶，则认为碱基是非天然的。

术语“接头”通常是指可以通过共价或非共价键合通过糖、碱基或骨架连接到寡核苷酸的任何部分。接头可用于连接两个或更多个核苷，或者可以连接到寡核苷酸中的5'和/或3'末端核苷酸。在本发明的某些实施方案中，此类接头可以是非核苷酸接头。

术语“非-核苷酸接头”通常是指可通过共价或非共价键合连接到寡核苷酸上的除核苷酸键以外的化学部分。优选地，此类非核苷酸接头的长度为约2埃至约200埃，并且可以是顺式或反式取向。

术语“核苷酸键”通常是指通过它们的糖(例如3'-3'、2'-3'、2'-5'、3'-5')连接两个核苷的化学键，其由磷原子和相邻核苷之间的带电荷或中性基团(例如磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯)组成。

术语“寡核苷酸”是指由多个连接的核苷单元形成的多核苷。核苷单元可以是病毒、细菌、细胞碎片、siRNA或微小RNA的一部分，也可以由其中的一部分组成。此类寡核苷酸也可以从现有核酸来源(包括基因组或cDNA)获得，但优选通过合成方法产生。在优选实施方案中，每个核苷单位包括杂环碱基和戊呋喃糖基、海藻糖、阿拉伯糖、2'-脱氧-2'-取代的核苷、2'-脱氧-2'-取代的阿拉伯糖、2'-O-取代的阿拉伯糖或己糖基。核苷残基可以通过许多已知的核苷间键中的任何一个彼此偶联。此类核苷间键包括但不限于磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、烷基硫代膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、烷氧羰基、乙酰胺酯、氨基甲酸酯、吗啉代、硼烷代(borano)、硫醚、桥连的氨基磷酸酯、桥连的亚甲基膦酸酯、桥连的硫代磷酸酯和砜核苷间键。术语“基于寡核苷酸的化合物”还包括具有一个或多个立体特异性核苷间键(例如，(R_P)-或(S_P-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯或磷酸三酯键)的多核苷。如本文所用，术语“寡核苷酸”和“二核苷酸”明确地意图包括具有任何此类核苷间键的多核苷和二核苷，无论该键是否包含磷酸基。在某些优选的实施方案中，这些核苷间键可以是磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯键或其组合。

术语“肽”通常是指具有足够长度和组成以影响生物应答(例如抗体产生或细胞因子活性)的多肽，无论该肽是否为半抗原。术语“肽”可以包括修饰的氨基酸(无论是天然或非天然存在的)，其中此类修饰包括但不限于磷酸化、糖基化、聚乙二醇化、脂化和甲基化。

术语“治疗”通常是指旨在获得有益或期望结果的方法，所述结果可以包括缓解症状或延缓或改善疾病进展。

在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂瘤内施用。在一些实施方案中，TLR9激动剂是免疫聚体。在一些实施方案中，免疫体是选自表II的化合物。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是程序性死亡配体1(PD-L1，也称为B7-H1、CD274)、程序性死亡1(PD-1)、CTLA-4、PD-L2(B7-DC、CD273)、LAG3、TIM3、2B4、A2aR、B7H1、B7H3、B7H4、BTLA、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、DR3、GAL9、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(诱导型T细胞共刺激物)、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA、VTCN1或其任何组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1、CTLA4、PD-1、LAG3、PD-L1、TIM3或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。在一些实施方案中，一个或多个检查点抑制剂通过任何合适的途径施用。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂的施用途径是肠胃外、粘膜递送、口服、舌下、透皮、局部、吸入、鼻内、气溶胶、瘤内、眼内、气管内、直肠内、胃内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或滴眼液或漱口水形式。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂各自以药学有效量施用。在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症是血液癌症。

在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体的实体瘤的方法，所述方法包括向患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂瘤内施用。在一些实施方案中，TLR9激动剂是免疫聚体。在一些实施方案中，免疫体是选自表II的化合物。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是程序性死亡配体1(PD-L1，也称为B7-H1、CD274)、程序性死亡1(PD-1)、CTLA-4、PD-L2(B7-DC、CD273)、LAG3、TIM3、2B4、A2aR、B7H1、B7H3、B7H4、BTLA、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、DR3、GAL9、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(诱导型T细胞共刺激物)、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA、VTCN1或其任何组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1、CTLA4、PD-1、LAG3、PD-L1、TIM3或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。在一些实施方案中，一个或多个检查点抑制剂通过任何合适的途径施用。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂的施用途径是肠胃外、粘膜递送、口服、舌下、透皮、局部、吸入、鼻内、气溶胶、瘤内、眼内、气管内、直肠内、胃内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或滴眼液或漱口水形式。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂各自以药学有效量施用。在一些实施方案中，实体瘤是肉瘤或癌。在一些实施方案中，实体瘤是肉瘤。在一些实施方案中，实体瘤是癌。

在一些实施方案中，实体瘤是复发性或难治性实体瘤。在一些实施方案中，复发性或难治性实体瘤是肉瘤或癌。在一些实施方案中，复发性或难治性实体瘤是肉瘤。在一些实施方案中，复发性或难治性实体瘤是癌。

在一些实施方案中，实体瘤是转移性实体瘤。在一些实施方案中，转移性实体瘤是肉瘤或癌。在一些实施方案中，转移性实体瘤是肉瘤。在一些实施方案中，转移性实体瘤是癌。

在一些实施方案中，肉瘤选自肺泡横纹肌肉瘤；肺泡软组织肉瘤；成釉细胞瘤；血管肉瘤；软骨肉瘤；脊索瘤；软组织透明细胞肉瘤；去分化脂肪肉瘤；硬纤维瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；胚胎横纹肌肉瘤；上皮样纤维肉瘤；上皮样血管内皮瘤；上皮样肉瘤；成感觉神经细胞瘤(esthesioneuroblastoma)；尤文肉瘤(Ewing sarcoma)；肾外横纹肌样肿瘤(extrarenal rhabdoid tumor)；骨骼外粘液样软骨肉瘤；骨骼外骨肉瘤；纤维肉瘤；巨细胞瘤；血管外皮细胞瘤；婴幼儿纤维肉瘤；炎性肌纤维母细胞瘤；卡波西肉瘤(Kaposisarcoma)；骨平滑肌肉瘤；脂肪肉瘤；骨脂肪肉瘤；恶性纤维组织细胞瘤(MFH)；骨的恶性纤维组织细胞瘤(MFH)；恶性间质瘤；恶性外周神经鞘瘤；间质性软骨肉瘤；粘液纤维肉瘤；粘液样脂肪肉瘤；粘液炎性成纤维细胞肉瘤；具有血管周围上皮细胞分化的肿瘤；骨肉瘤；骨旁骨肉瘤；具有血管周围上皮细胞分化的肿瘤；骨膜骨肉瘤；多形性脂肪肉瘤；多形性横纹肌肉瘤；PNET/骨骼外尤文肿瘤；横纹肌肉瘤；圆细胞脂肪肉瘤；小细胞骨肉瘤；孤立性纤维性肿瘤；滑膜肉瘤；毛细血管扩张性骨肉瘤。

在一些实施方案中，癌选自腺癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌、间变性癌、大细胞癌或小细胞癌。在一些实施方案中，癌选自肛门癌；阑尾癌；胆管癌(即胆管癌)；膀胱癌；乳腺癌；宫颈癌；结肠癌；未知原发癌(CUP)；食道癌；眼癌；输卵管癌；胃肠癌；肾癌；肝癌；肺癌；髓母细胞瘤；黑色素瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；甲状旁腺病；阴茎癌；垂体瘤；前列腺癌；直肠癌；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；咽喉癌；甲状腺癌；子宫癌；阴道癌；或外阴癌。在一些实施方案中，癌是乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是侵袭性导管癌、原位导管癌、侵袭性小叶癌或原位小叶癌。在一些实施方案中，癌是胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是腺癌或胰岛细胞癌。在一些实施方案中，癌是结肠直肠(结肠)癌。在一些实施方案中，结肠直肠癌是腺癌。在一些实施方案中，实体瘤是结肠息肉。在一些实施方案中，结肠息肉与家族性腺瘤性息肉病有关。在一些实施方案中，癌是膀胱癌。在一些实施方案中，膀胱癌是过渡性细胞膀胱癌、鳞状细胞膀胱癌或腺癌。在一些实施方案中，膀胱癌由泌尿生殖道癌涵盖。在一些实施方案中，泌尿生殖道癌症还涵盖肾癌、前列腺癌和与生殖器官相关的癌症。在一些实施方案中，癌是肺癌。在一些实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌。在一些实施方案中，非小细胞肺癌是腺癌、鳞状细胞肺癌或大细胞肺癌。在一些实施方案中，肺癌是小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌是前列腺癌。在一些实施方案中，前列腺癌是腺癌或小细胞癌。在一些实施方案中，癌是卵巢癌。在一些实施方案中，卵巢癌是上皮性卵巢癌。在一些实施方案中，癌是胆管癌。在一些实施方案中，胆管癌是近端胆管癌或远端胆管癌。

在一些实施方案中，实体瘤选自肺泡软组织肉瘤、膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠(结肠)癌、尤文氏骨肉瘤、胃肠癌、头颈癌、肾癌、平滑肌肉瘤、肺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、近端或远端胆管癌和神经母细胞瘤。在一些实施方案中，实体瘤是前列腺癌。在一些实施方案中，实体瘤是乳腺癌。在一些实施方案中，实体瘤是肺癌。在一些实施方案中，实体瘤是结肠直肠(结肠)癌。在一些实施方案中，实体瘤是胃肠癌。在一些实施方案中，实体瘤是黑色素瘤。在一些实施方案中，实体瘤是肺癌。在一些实施方案中，实体瘤是肾癌。在一些实施方案中，实体瘤是头颈癌。在一些实施方案中，实体瘤是近端或远端胆管癌。在一些实施方案中，实体瘤是肺泡软组织肉瘤。在一些实施方案中，实体瘤是尤文氏骨肉瘤。在一些实施方案中，实体瘤是膀胱癌。在一些实施方案中，实体瘤是卵巢癌。在一些实施方案中，实体瘤是平滑肌肉瘤。在一些实施方案中，实体瘤是骨肉瘤。在一些实施方案中，实体瘤是神经母细胞瘤。

在一些实施方案中，乳腺癌是原位导管癌(导管内癌)、原位小叶癌、侵袭性(或浸润性)导管癌、侵袭性(或浸润性)小叶癌、炎性乳腺癌、三阴性乳腺癌、乳头的佩吉特病、叶状肿瘤、血管肉瘤或侵袭性乳腺癌。在一些实施方案中，侵袭性乳腺癌进一步分类为亚型。在一些实施方案中，亚型包括腺样囊性(或腺囊性)癌、低级腺鳞癌、髓样癌、粘液性(或胶质)癌、乳头状癌、小管癌、化生性癌、微乳头癌或混合型癌。

在一些实施方案中，乳腺癌根据分期或肿瘤细胞在乳腺组织内和至身体其它部位扩散到多远进行分类。在一些实施方案中，乳腺癌有五个分期，0-IV期。在一些实施方案中，0期乳腺癌是指非侵袭性乳腺癌，或者没有癌症细胞或异常非癌细胞逃脱出原始部位的迹象。在一些实施方案中，I期乳腺癌是指其中癌细胞已侵袭周围组织的侵袭性乳腺癌。在一些实施方案中，I期细分成IA期和IB期，其中IA期描述了高达2cm的肿瘤测量，癌细胞未扩散。IB期描述了乳房中不存在肿瘤，但在淋巴结内具有0.2mm至2mm之间的小块癌细胞。在一些实施方案中，II期乳腺癌进一步细分为IIA期和IIB期。在一些实施方案中，IIA期描述了仅在乳房中有2cm至5cm之间的肿瘤，或在乳房中不存在肿瘤，但在腋窝淋巴结中具有2mm至2cm之间的癌症。在一些实施方案中，IIB期描述了仅在乳房中有大于5cm的肿瘤，或在乳房中有2cm至5cm之间的肿瘤，且在腋窝淋巴结中存在0.2mm至2mm的小肿瘤。在一些实施方案中，III期乳腺癌进一步细分为IIIA、IIIB和IIIC期。在一些实施方案中，IIIA期描述了在乳房中不存在肿瘤或肿瘤超过5cm，且在4-9个腋窝淋巴结中有小肿瘤或在腋窝淋巴结中小肿瘤尺寸为0.2mm-2mm。在一些实施方案中，IIIB期描述了肿瘤扩散到乳房的胸壁或皮肤中，引起肿胀或溃疡，并且在多达9个腋窝淋巴结中存在肿瘤。在一些实施方案中，炎性乳腺癌也被认为是IIIB期。在一些实施方案中，IIIC期描述了不存在肿瘤或肿瘤扩散到乳房的胸壁或皮肤中，且在10个或更多个腋窝淋巴结中存在肿瘤。在一些实施方案中，IV期乳腺癌是指已转移到淋巴结和身体其它部分的侵袭性乳腺癌。

在一些实施方案中，结肠癌是结肠直肠癌。如本文和全文所用，结肠癌与结肠直肠癌可互换使用。在一些实施方案中，结肠直肠(结肠)癌是指直肠癌。在一些实施方案中，结肠癌是腺癌、胃肠类癌肿瘤、胃肠道间质瘤、原发性结肠直肠淋巴瘤、平滑肌肉瘤、黑色素瘤或鳞状细胞癌。在一些实施方案中，腺癌是粘液性腺癌或印戒细胞腺癌。

在一些实施方案中，结肠癌根据分期或它们通过结肠和直肠壁扩散到多远进行分类。在一些实施方案中，结肠癌有五个分期，0-IV期。在一些实施方案中，0期结肠癌是指非常早期的癌症。在一些实施方案中，I期结肠癌是指当癌症已经扩散到结肠的最内层之后到第二层和第三层时，并且还累及结肠的内壁。在一些实施方案中，II期结肠癌是指当肿瘤已延伸穿过肌肉壁但尚未扩散到淋巴结中时。在一些实施方案中，III期结肠癌是指当肿瘤已从结肠转移到一个或多个淋巴结中时。在一些实施方案中，IV期结肠癌是指当肿瘤已转移到身体其它部位时。在一些实施方案中，直肠癌有两个分期，分为0期和I期。在一些实施方案中，0期直肠癌是指当肿瘤仅位于直肠的内层上时。在一些实施方案中，I期是指当肿瘤已穿过直肠内层，但尚未到达肌肉壁时。

在一些实施方案中，包含免疫检查点抑制剂治疗和瘤内施用TLR9激动剂用于治疗癌症的组合的使用还包括施用另外的抗癌剂。在一些实施方案中，另外的抗癌剂选自化学治疗剂或放射疗法。在一些实施方案中，化学治疗剂选自苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、阿霉素、美沙拉嗪、沙利度胺、来那度胺、替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司、氟达拉滨、福他替尼、紫杉醇、多西他赛、奥法木单抗、利妥昔单抗、地塞米松、强的松、CAL-101、替伊莫单抗、托西莫单抗、硼替佐米、喷司他丁、内皮抑制素或其组合。

在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体的血液癌症的方法，所述方法包括向患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂瘤内施用。在一些实施方案中，TLR9激动剂是免疫聚体。在一些实施方案中，免疫聚体是选自表II的化合物。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是程序性死亡配体1(PD-L1，也称为B7-H1、CD274)、程序性死亡1(PD-1)、CTLA-4、PD-L2(B7-DC、CD273)、LAG3、TIM3、2B4、A2aR、B7H1、B7H3、B7H4、BTLA、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、DR3、GAL9、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(诱导型T细胞共刺激物)、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA、VTCN1或其任何组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1、CTLA4、PD-1、LAG3、PD-L1、TIM3或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂通过任何合适的途径施用。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂的施用途径是肠胃外、粘膜递送、口服、舌下、透皮、局部、吸入、鼻内、气溶胶、瘤内、眼内、气管内、直肠内、胃内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或滴眼液或漱口水形式。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂各自以药学有效量施用。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。

在一些实施方案中，血液癌症是白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、T细胞恶性肿瘤或B细胞恶性肿瘤。

在一些实施方案中，血液癌症是T细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，T细胞恶性肿瘤是非特指型外周T细胞淋巴瘤(PTCL-NOS)、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、母细胞性NK细胞淋巴瘤(blasticNK-cell lymphoma)、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾(hematosplenic)γ-δT细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、鼻NK/T细胞淋巴瘤或治疗相关的T细胞淋巴瘤。

在一些实施方案中，血液癌症是B细胞增殖性病症。在一些实施方案中，癌症是慢性淋巴性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、高风险CLL或非CLL/SLL淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B-淋巴母细胞性淋巴瘤、B细胞原淋巴性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，DLBCL进一步分为亚型：活化的B细胞扩散性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)、生发中心弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB DLBCL)和双重打击(Double-Hit)(DH)DLBCL。在一些实施方案中，ABC-DLBCL的特征在于CD79B突变。在一些实施方案中，ABC-DLBCL的特征在于CD79A突变。在一些实施方案中，ABC-DLBCL的特征在于MyD88、A20或其组合的突变。在一些实施方案中，癌症是急性或慢性骨髓性(或髓性)白血病、骨髓增生异常综合征或急性淋巴性白血病。

在一些实施方案中，癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，癌症是活化的B细胞弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)。在一些实施方案中，癌症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，癌症是多发性淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是慢性淋巴性白血病(CLL)。在一些实施方案中，癌症是小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)。在一些实施方案中，癌症是非CLL/SLL淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是高风险CLL或高风险SLL。

在一些实施方案中，血液癌症是白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、T细胞恶性肿瘤或B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，血液癌症是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是慢性淋巴性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、高风险CLL、非CLL/SLL淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B-淋巴母细胞性淋巴瘤、B细胞原淋巴性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，血液癌症是CLL。在一些实施方案中，血液癌症是SLL。在一些实施方案中，血液癌症是DLBCL。在一些实施方案中，血液癌症是套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，血液癌症是FL。在一些实施方案中，血液癌症是瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症。在一些实施方案中，血液癌症是多发性淋巴瘤。在一些实施方案中，血液癌症是伯基特氏淋巴瘤。

在某些实施方案中，本文公开了增强检查点抑制剂的抗肿瘤活性的方法，所述方法包括向患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和检查点抑制剂。在该方面的某些实施方案中，TLR9激动剂在患者被施用检查点抑制剂之前经由瘤内施用施用于癌症患者。在优选实施方案中，TLR9激动剂是免疫聚体。在一些实施方案中，免疫体是选自表II的化合物。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是程序性死亡配体1(PD-L1，也称为B7-H1、CD274)、程序性死亡1(PD-1)、CTLA-4、PD-L2(B7-DC、CD273)、LAG3、TIM3、2B4、A2aR、B7H1、B7H3、B7H4、BTLA、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、DR3、GAL9、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(诱导型T细胞共刺激物)、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA、VTCN1或其任何组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDOl、CTLA4、PD-1、LAG3、PD-L1、TIM3或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂通过任何合适的途径施用。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂的施用途径是肠胃外、粘膜递送、口服、舌下、透皮、局部、吸入、鼻内、气溶胶、瘤内、眼内、气管内、直肠内、胃内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或滴眼液或漱口水形式。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂各自以药学有效量施用。在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症是血液癌症。

在某些实施方案中，本文公开了增加或恢复以前对检查点抑制剂无应答或已产生抗性的癌症中的检查点抑制剂的抗肿瘤活性的方法，此类方法包括向患者共同施用一种或多种TLR9激动剂和检查点抑制剂。在该方面的某些实施方案中，TLR9激动剂在患者被施用检查点抑制剂之前经由瘤内施用施用于癌症患者。在一些实施方案中，TLR9激动剂是免疫聚体。在一些实施方案中，免疫体是选自表II的化合物。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是程序性死亡配体1(PD-L1，也称为B7-H1、CD274)、程序性死亡1(PD-1)、CTLA-4、PD-L2(B7-DC、CD273)、LAG3、TIM3、2B4、A2aR、B7H1、B7H3、B7H4、BTLA、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、DR3、GAL9、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(诱导型T细胞共刺激物)、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA、VTCN1或其任何组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDOl、CTLA4、PD-1、LAG3、PD-L1、TIM3或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂通过任何合适的途径施用。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂的施用途径是肠胃外、粘膜递送、口服、舌下、透皮、局部、吸入、鼻内、气溶胶、瘤内、眼内、气管内、直肠内、胃内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或滴眼液或漱口水形式。在一些实施方案中，一种或多种TLR9激动剂和一种或多种检查点抑制剂各自以药学有效量施用。在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症是血液癌症。

在一些实施方案中，在本文的任何方法中，癌症选自由以下组成的组：非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞白血病、T细胞淋巴瘤、T细胞白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、伯基特淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、神经胶质瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、癌、黑色素瘤、肉瘤、神经胶质瘤、皮肤癌、口腔癌、胃肠道癌、结肠癌、胃癌、肺道癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、肝癌、胆囊癌、肾癌和睾丸癌。在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤、结肠癌或黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症是黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是结肠癌。

如本文所用，术语“TLR9激动剂”通常是指包含CpG二核苷酸基序的免疫刺激性寡核苷酸化合物，并且能够增强或诱导由TLR9介导的免疫刺激。在一些实施方案中，CpG二核苷酸选自由以下组成的组：CpG、C*pG、CpG*和C*pG*，其中C为2'-脱氧胞苷，C*为其类似物，G为2'-脱氧鸟苷，G*为其类似物，并且p是选自由磷酸二酯、硫代磷酸酯和二硫代磷酸酯组成的组的核苷间键。在优选的实施方案中，C*选自由以下组成的组：2'-脱氧胸苷、阿糖胞苷、2'-脱氧胸苷、2'-脱氧-2'-取代的阿糖胞苷、2'-O-取代的阿糖胞苷、2'-脱氧-5-羟基胞苷、2'-脱氧-N4-烷基-胞苷、2'-脱氧-4-硫尿苷。在优选的实施方案中，G*是2'-脱氧-7-脱氮鸟苷、2'-脱氧-6-硫代鸟苷、阿糖鸟苷、2'-脱氧-2'取代的-阿糖鸟苷、2'-O-取代的-阿糖鸟苷、2'-脱氧肌苷。在某些优选实施方案中，免疫刺激性二核苷酸选自由C*pG、CpG*和C*pG*组成的组。

如本文所用，免疫聚体是指包含通过其3'末端连接在一起的至少两个寡核苷酸的化合物，使得免疫聚体具有多于一个可接近的5'末端，其中至少一个寡核苷酸是免疫刺激性寡核苷酸。组分寡核苷酸的3'末端的键与其它寡核苷酸键无关，并且可以直接经由5'、3'或2'羟基，或间接地经由非核苷酸接头或核苷，利用核苷的2'或3'羟基位置。键还可以利用3'末端核苷酸的官能化糖或核碱基。术语“可接近的5'末端”意指寡核苷酸的5'末端是足够可用的，使得识别并结合免疫聚体并刺激免疫系统的因子可以进入其中。任选地，5'OH可以连接到磷酸酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯部分、芳族或脂族接头、胆固醇或不干扰可接近性的另一实体。

如本文所用，免疫刺激性寡核苷酸是包含CpG二核苷酸基序并能够增强或诱导TLR9介导的免疫应答的寡脱氧核糖核苷酸。在一些实施方案中，CpG二核苷酸选自由以下组成的组：CpG、C*pG、CpG*和C*pG*，其中C为2'-脱氧胞苷，C*为其类似物，G为2'-脱氧鸟苷，G*为其类似物，并且p是选自由磷酸二酯、硫代磷酸酯和二硫代磷酸酯组成的组的核苷间键。在优选的实施方案中，C*选自由以下组成的组：2'-脱氧胸苷、阿糖胞苷、2'-脱氧胸苷、2'-脱氧-2'-取代的阿糖胞苷、2'-O-取代的阿糖胞苷、2'-脱氧-5-羟基胞苷、2'-脱氧-N4-烷基-胞苷、2'-脱氧-4-硫尿苷。在优选的实施方案中，G*是2'-脱氧-7-脱氮鸟苷、2'-脱氧-6-硫代鸟苷、阿糖鸟苷、2'-脱氧-2'取代的-阿糖鸟苷、2'-O-取代的-阿糖鸟苷、2'-脱氧肌苷。在某些优选实施方案中，免疫刺激性二核苷酸选自由C*pG、CpG*和C*pG*组成的组。

在一些实施方案中，免疫聚体包含两个或更多个可以相同或不同的免疫刺激性寡核苷酸。优选地，每种此类免疫刺激性寡核苷酸具有至少一个可接近的5'末端。

在一些实施方案中，免疫聚体的寡核苷酸各自独立地具有约3至约35个核苷残基，优选约4至约30个核苷残基，更优选约4至约20个核苷残基。在一些实施方案中，寡核苷酸具有约5至约18个或约5至约14个核苷残基。如本文所用，术语“约”意指确切的数目不是关键的。因此，寡核苷酸中的核苷残基的数目不是关键的，并且具有一个或两个较少核苷残基或一个至数个另外的核苷残基的寡核苷酸被认为是上述每个实施方案的等效物。在一些实施方案中，一个或多个寡核苷酸具有11个核苷酸。

在本发明的某些实施方案中，免疫聚体包含在其3'端通过核苷酸键或非核苷酸接头或通过官能化糖或通过官能化核碱基经由非核苷酸接头或核苷酸键共价连接的两个寡核苷酸。作为非限制性实例，接头可以连接至3'-羟基。在此类实施方案中，接头包含通过基于磷酸酯的键，例如磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯或通过基于非磷酸酯的键连接至3'-羟基的官能团。核糖核苷酸缀合的可能位点在下面的式I中表示，其中B表示杂环碱基，并且其中指向P的箭头表示与磷的任何连接。

在一些实施方案中，非核苷酸接头是小分子、大分子或生物分子，包括但不限于多肽、抗体、脂质、抗原、变应原和寡糖。在一些其它实施方案中，非核苷酸接头是小分子。为了本发明的目的，小分子是分子量小于1,000Da的有机部分。在一些实施方案中，小分子具有小于750Da的分子量。

在一些实施方案中，小分子是脂族或芳族烃，二者中的任一者任选地可以包括在连接寡核糖核苷酸的线性链中或附加于其中的一个或多个官能团，包括但不限于羟基、氨基、硫醇、硫醚、醚、酰胺、硫代酰胺、酯、脲或硫脲。小分子可以是环状或非环状的。小分子接头的实例包括但不限于氨基酸、碳水化合物、环糊精、金刚烷、胆固醇、半抗原和抗生素。然而，为了描述非核苷酸接头的目的，术语“小分子”不旨在包括核苷。

在一些实施方案中，非-核苷酸接头是烷基接头或氨基接头。烷基接头可以是支链或非支链、环状或非环状、取代或未取代的、饱和或不饱和的、手性、非手性或外消旋混合物。烷基接头可具有约2至约18个碳原子。在一些实施方案中，此类烷基接头具有约3至约9个碳原子。一些烷基接头包括一个或多个官能团，包括但不限于羟基、氨基、硫醇、硫醚、醚、酰胺、硫代酰胺、酯、脲和硫醚。此类烷基接头可以包括但不限于1,2-丙二醇、1,2,3-丙三醇、1,3-丙二醇、三甘醇、六甘醇、聚乙二醇接头(例如[-O-CH2-CH2-]_n(n＝1-9))、甲基接头、乙基接头、丙基接头、丁基接头或己基接头。在一些实施方案中，此类烷基接头可以包括肽或氨基酸。

在一些实施方案中，非核苷酸接头可以包括但不限于表I所列的那些。

表I：代表性的非核苷酸接头

表I：续

表I：续

表I：续

表I：续

免疫聚体的寡核苷酸可以独立地包括天然存在的核苷、修饰的核苷或其混合物。免疫聚体的寡核苷酸也可以独立地选自杂合和嵌合寡核苷酸。“嵌合寡核苷酸”是具有多于一种类型的核苷间键的寡核苷酸。此类嵌合寡核苷酸的一个优选实例是包含硫代磷酸酯、磷酸二酯或二硫代磷酸酯区和非离子键(如烷基膦酸酯或烷基硫代磷酸酯键)的嵌合寡核苷酸(参见例如，Pederson等美国专利号5,635,377和5,366,878)。

“杂合寡核苷酸”是具有多于一种类型的核苷的寡核苷酸。此类杂交寡核苷酸的一个优选实例包括核糖核苷酸或2'-取代的核糖核苷酸区和脱氧核糖核苷酸区(参见，例如，Metelev和Agrawal,美国专利号5,652,355、6,346,614和6,143,881)。

可以使用如图1和图2中示意性描绘的自动合成仪和亚磷酰胺方法方便地合成免疫聚体，并且在实施例中进一步描述。在一些实施方案中，通过线性合成方法合成免疫聚体(参见图1)。如本文所用，术语“线性合成”是指从免疫聚体的一端开始并且向另一端线性进行的合成。线性合成允许将相同或不相同(在长度、碱基组成和/或掺入的化学修饰方面)的单体单元掺入免疫聚体中。

一种替代的合成模式是例如“平行合成”，其中合成从中心接头部分向外进行(参见图2)。固体支持物连接的接头可用于平行合成，如美国专利号5,912,332中所述。或者，可以使用通用固体支持物(例如磷酸盐附着的受控孔隙玻璃支持物。

免疫聚体的平行合成具有优于线性合成的几个优点：(1)平行合成允许引入相同的单体单元；(2)与线性合成不同，同时合成两种(或全部)单体单元，从而合成步骤的数目和合成所需的时间与单体单元相同；和(3)合成步骤的减少提高了最终免疫聚体产物的纯度和产率。

在通过线性合成或平行合成方案的合成结束时，如果掺入修饰的核苷，则可以方便地用浓氨溶液或如亚磷酰胺供应商推荐使免疫聚体脱保护。产物免疫聚体优选通过反相HPLC纯化、脱三苯甲基、脱盐和透析。

表II显示了代表性的免疫聚体。除非另有说明，否则所有核苷酸间键均为硫代磷酸酯。

表II

G₁是2'-脱氧-7-脱氮鸟苷；G₂是2'-脱氧-阿糖鸟苷；G/C/U是2'-O-甲基核糖核苷酸；U₁是2'-脱氧-U；o是磷酸二酯键；X是甘油接头；X₂＝异丁三醇接头，Y是C3-接头；m是顺,反-1,3,5-环己烷三醇接头；Y₂是1,3-丙二醇接头；Y₃是1,4-丁二醇接头；Y₄是1,5-戊二醇接头；Z是1,3,5-戊三醇接头；M是顺,顺-1,3,5-环己烷三醇接头。

免疫检查点是指负责维持自身耐受性和调节免疫系统应答程度以使外周组织损伤最小化的免疫系统中的抑制途径。无论是通过感染病原体(例如，细菌、病毒或真菌)或通过施用合成的免疫激动剂(例如，TLR9激动剂)诱导免疫应答导致免疫检查点的上调。然而，已显示肿瘤细胞还可以活化免疫系统检查点以降低对肿瘤组织的免疫应答的有效性。示例性检查点分子包括但不限于细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4，也称为CD152)、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1，也称为CD279)、程序性细胞死亡1配体1(PD-L1，也称为CD274)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3；CD223)、B7-H3、B7-H4、杀伤细胞免疫球蛋白受体(KIR)、肿瘤坏死因子受体超家族、成员4(TNFRSF4，也称为OX40和CD134)及其配体OX40L(CD252)、吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO-1)、吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO-2)、癌胚抗原相关细胞粘附分子1(CEACAM1)、B和T淋巴细胞衰减子(BTLA；也称为CD272)和T细胞膜蛋白3(TIM3)。在优选实施方案中，检查点是CTLA4、IDO-1、PD-L1或PD-1。在优选实施方案中，检查点是CTLA4。在优选实施方案中，检查点是PD-L1。在优选实施方案中，检查点是IDO-1。在优选实施方案中，检查点是PD-1。

预期任何合适的免疫检查点抑制剂与本文公开的方法一起使用。本文所用的“免疫检查点抑制剂”是指抑制免疫检查点分子的活性的任何调节剂。免疫检查点抑制剂可以包括但不限于免疫检查点分子结合蛋白、小分子抑制剂、抗体、抗体衍生物(包括Fab片段和scFv)、抗体-药物缀合物、反义寡核苷酸、siRNA、适体、肽和肽模拟物。降低免疫检查点分子的表达和/或活性的抑制性核酸也可用于本文公开的方法中。一个实施方案是用于干扰或抑制靶基因表达的小抑制性RNA(siRNA)。编码PD-1、PD-L1和PD-L2的核酸序列公开于

登录号NM_005018、AF344424、NP_079515和NP_054862。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂降低一种或多种免疫检查点蛋白的表达或活性。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂降低一种或多种免疫检查点蛋白和其配体之间的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的单克隆抗体。在其它或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的人或人源化抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂降低一种或多种免疫检查点蛋白(诸如PD-L1)的表达或活性。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂降低PD-1和PD-L1之间的相互作用。示例性免疫检查点抑制剂包括抗体(例如，抗PD-L1抗体)、RNAi分子(例如，抗PD-L1RNAi)、反义分子(例如，抗PD-L1反义RNA)、显性负性蛋白(dominant negative protein)(例如，显性负性PD-L1蛋白)和小分子抑制剂。抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、去免疫化抗体和Ig融合蛋白。示例性抗PD-L1抗体包括克隆EH12。针对PD-L1的示例性抗体包括：Genentech的MPDL3280A(RG7446)；来自BioXcell的抗小鼠PD-L1抗体克隆10F.9G2(目录号BE0101)；来自Bristol-Meyer's Squibb的抗PD-L1单克隆抗体MDX-1105(BMS-936559)和BMS-935559；MSB0010718C；小鼠抗PD-L1克隆29E.2A3；和AstraZeneca的MEDI4736。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是任何以下专利公布中公开的抗PD-L1抗体(通过引用并入本文)：WO2013079174；CN101104640；WO2010036959；WO2013056716；WO2007005874；WO2010089411；WO2010077634；WO2004004771；WO2006133396；WO201309906；US20140294898；WO2013181634或WO2012145493。

在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是PD-L1表达的核酸抑制剂。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂公开在以下专利公布之一(通过引用并入本文)：WO2011127180或WO2011000841中。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是雷帕霉素。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L2的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的单克隆抗体。在其它或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的人或人源化抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂降低一种或多种免疫检查点蛋白(诸如PD-L2)的表达或活性。在其它实施方案中，免疫检查点抑制剂降低PD-1和PD-L2之间的相互作用。示例性免疫检查点抑制剂包括抗体(例如，抗PD-L2抗体)、RNAi分子(例如，抗PD-L2 RNAi)、反义分子(例如，抗PD-L2反义RNA)、显性负性蛋白(例如，显性负性PD-L2蛋白)和小分子抑制剂。抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、去免疫化抗体和Ig融合蛋白。

在一些实施方案中，PD-L2抑制剂是GlaxoSmithKline的AMP-224(Amplimmune)。在一些实施方案中，PD-L2抑制剂是rHIgM12B7。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的单克隆抗体。在其它或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的人或人源化抗体。例如，在美国专利号7,029,674；6,808,710；或美国专利申请No:20050250106和20050159351中公开的PD-1生物活性抑制剂(或其配体)可以用于本文提供的方法中。针对PD-1的示例性抗体包括：来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆J43(目录号BE0033-2)；来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆RMP1-14(目录号BE0146)；小鼠抗PD-1抗体克隆EH12；Merck的MK-3475抗小鼠PD-1抗体(Keytruda、派姆单抗(pembrolizumab)、拉姆布罗力珠单抗(lambrolizumab))；和AnaptysBio的抗PD-1抗体，称为ANB011；抗体MDX-1 106(ONO-4538)；Bristol-Myers Squibb的人IgG4单克隆抗体纳武单抗(nivolumab)(Opdivo.RTM.,BMS-936558,MDX1106)；AstraZeneca的AMP-514和AMP-224；和皮地利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011),CureTech Ltd.。

另外的示例性抗PD-1抗体及其使用方法描述于Goldberg等,Blood 1 10(1):186-192(2007)，Thompson等,Clin.Cancer Res.13(6):1757-1761(2007)，和Korman等，国际申请号PCT/JP2006/309606(公布号WO 2006/121168 A1)，其各自明确地通过引用并入本文。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是任何以下专利公布中公开的抗PD-1抗体(通过引用并入本文)：WO014557；WO2011110604；WO2008156712；US2012023752；WO2011110621；WO2004072286；WO2004056875；WO20100036959；WO2010029434；WO201213548；WO2002078731；WO2012145493；WO2010089411；WO2001014557；WO2013022091；WO2013019906；WO2003011911；US20140294898；和WO2010001617。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是如WO200914335(通过引用并入本文)所公开的PD-1结合蛋白。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是如WO2013132317(通过引用并入本文)所公开的PD-1拟肽类抑制剂。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗小鼠PD-1mAb：克隆J43，BioXcell(WestLebanon,NH)。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是用于治疗某些恶性肿瘤的临床研究中测试的PD-L1蛋白、PD-L2蛋白或片段以及抗体MDX-1 106(ONO-4538)(Brahmer等,J ClinOncol.2010 28(19):3167-75,2010年6月1日电子出版物)。如上所述，本领域技术人员基于PD-1和PD-L1/PD-L2之间相互作用的已知结构域可以容易地鉴定和制备其它阻断抗体。例如，使用本领域熟知的方法，可以使用对应于PD-1或PDL1/PD-L2的IgV区(或该区的一部分)的肽作为抗原来产生阻断抗体。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对IDO1的小分子。针对IDO1的示例性小分子包括：Incyte的INCB024360

NSC-721782(也称为1-甲基-D-色氨酸)和Bristol Meyers Squibb的F001287。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的单克隆抗体。在其它或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的人或人源化抗体。在一个实施方案中，抗CTLA-4抗体阻断CTLA-4与在抗原呈递细胞上表达的CD80(B7-1)和/或CD86(B7-2)的结合。针对CTLA-4的示例性抗体包括：Bristol Meyers Squibb的抗CTLA-4抗体伊匹单抗(ipilimumab)(也称为Yervoy.RTM.、MDX-010、BMS-734016和MDX-101)；来自Millipore的抗CTLA4抗体，克隆9H10；Pfizer的曲美木单抗(tremelimumab)(CP-675,206，替西木单抗(ticilimumab))；和来自Abcam的抗CTLA4抗体克隆BNI3。

在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体是任何以下专利公布中公开的抗CTLA-4抗体(通过引用并入本文)：WO 2001014424；WO 2004035607；US2005/0201994；EP 1212422B1；WO2003086459；WO2012120125；WO2000037504；WO2009100140；WO200609649；WO2005092380；WO2007123737；WO2006029219；WO20100979597；WO200612168；和WO1997020574。另外的CTLA-4抗体描述于美国专利号5,811,097、5,855,887、6,051,227和6,984,720；PCT公布号WO 01/14424和WO 00/37504；和美国公布号2002/0039581和2002/086014；和/或美国专利号5,977,318、6,682,736、7,109,003和7,132,281，通过引用并入本文)。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体是例如在以下公开的那些：WO 98/42752；美国专利号6,682,736和6,207,156；Hurwitz等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95(17):10067-10071(1998)；Camacho等,J.Clin.Oncol.,22(145):Abstract号2505(2004)(antibody CP-675206)；Mokyr等,CancerRes.,58:5301-5304(1998)(通过引用并入本文)。

在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是WO1996040915中公开的CTLA-4配体。

在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是CTLA-4表达的核酸抑制剂。例如，抗CTLA4RNAi分子可以采用Mello和Fire在PCT公布号WO 1999/032619和WO 2001/029058；美国公布号2003/0051263、2003/0055020、2003/0056235、2004/265839、2005/0100913、2006/0024798、2008/0050342、2008/0081373、2008/0248576和2008/055443；和/或美国专利号6,506,559、7,282,564、7,538,095和7,560,438中描述的分子的形式(通过引用并入本文)。在一些情况下，抗CTLA4 RNAi分子采用Tuschl在欧洲专利号EP 1309726中描述的双链RNAi分子的形式(通过引用并入本文)。在一些情况下，抗CTLA4 RNAi分子采用Tuschl在美国专利号7,056,704和7,078,196中描述的双链RNAi分子的形式(通过引用并入本文)。在一些实施方案中，CTLA4抑制剂是PCT公布号WO2004081021中描述的适体。

另外，本发明的抗CTLA4 RNAi分子可以采用由Crooke在美国专利号5,898,031、6,107,094、7,432,249和7,432,250以及欧洲申请号EP 0928290中描述的RNA分子的形式(通过引用并入本文)。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3(CD223)的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的单克隆抗体。在其它或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的人或人源化抗体。在另外的实施方案中，针对LAG3的抗体阻断LAG3与主要组织相容性复合体(MHC)II类分子的相互作用。针对LAG3的示例性抗体包括：来自eBioscience的抗Lag-3抗体克隆eBioC9B7W(C9B7W)；来自LifeSpan Biosciences的抗Lag3抗体LS-B2237；来自Immutep的IMP321(ImmuFact)；抗Lag3抗体BMS-986016；和LAG-3嵌合抗体A9H12。在一些实施方案中，抗LAG3抗体是任何以下专利公布中公开的抗LAG3抗体(通过引用并入本文)：WO2010019570；WO2008132601；或WO2004078928。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3(也称为HAVCR2)的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的单克隆抗体。在其它或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的人或人源化抗体。在另外的实施方案中，针对TIM3的抗体阻断TIM3与半乳凝素-9(Gal9)的相互作用。在一些实施方案中，抗TIM3抗体是任何以下专利公布中公开的抗TIM3抗体(通过引用并入本文)：WO2013006490；WO201155607；WO2011159877；或WO200117057。在另一个实施方案中，TIM3抑制剂是WO2009052623中公开的TIM3抑制剂。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对B7-H3的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是MGA271。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对MR的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是利鲁单抗(Lirilumab)(IPH2101)。在一些实施方案中，针对MR的抗体阻断KIR与HLA的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD 137(也称为4-1BB或TNFRSF9)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是乌瑞芦单抗(urelumab)(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)、PF-05082566(抗4-1BB、PF-2566，Pfizer)或XmAb-5592(Xencor)。在一个实施方案中，抗CD137抗体是美国公开申请号US 2005/0095244中公开的抗体；发布的美国专利号7,288,638中公开的抗体(诸如20H4.9-IgG4[10C7或BMS-663513]或20H4.9-IgGl[BMS-663031])；发布的美国专利号6,887,673中公开的抗体[4E9或BMS-554271]；发布的美国专利号7,214,493中公开的抗体；发布的美国专利号6,303,121中公开的抗体；发布的美国专利号6,569,997中公开的抗体；发布的美国专利号6,905,685中公开的抗体；发布的美国专利号6,355,476中公开的抗体；发布的美国专利号6,362,325中公开的抗体[1D8或BMS-469492；3H3或BMS-469497；或3E1]；发布的美国专利号6,974,863中公开的抗体(诸如53A2)；或发布的美国专利号6,210,669中公开的抗体(诸如1D8、3B8或3E1)。在另一实施方案中，免疫检查点抑制剂是WO 2014036412中公开的抑制剂。在另一个实施方案中，针对CD137的抗体阻断CD137与CD137L的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PS的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是巴维昔单抗(Bavituximab)。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD52的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是阿仑单抗(alemtuzumab)。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD30的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是布妥昔单抗(brentuximab vedotin)。在另一个实施方案中，针对CD30的抗体阻断CD30与CD30L的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD33的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD20的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是奥法木单抗。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是利妥昔单抗。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是托西莫单抗。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD27(也称为TNFRSF7)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CDX-1127(Celldex Therapeutics)。在另一个实施方案中，针对CD27的抗体阻断CD27与CD70的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对OX40(也称为TNFRSF4或CD134)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗OX40小鼠IgG。在另一个实施方案中，针对OX40的抗体阻断OX40与OX40L的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是TRX518(GITR,Inc.)。在另一个实施方案中，针对GITR的抗体阻断GITR与GITRL的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对可诱导T细胞共刺激因子(ICOS，也称为CD278)的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是MEDI570(MedImmune,LLC)或AMG557(Amgen)。在另一个实施方案中，针对ICOS的抗体阻断ICOS与ICOSL和/或B7-H2的相互作用。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对BTLA(CD272)、CD160、2B4、LAIR1、TIGHT、LIGHT、DR3、CD226、CD2或SLAM的抑制剂。如本文别处所述，免疫检查点抑制剂可以是结合免疫检查点分子的一种或多种结合蛋白、抗体(或其片段或变体)、下调免疫检查点分子的表达的核酸、或结合免疫检查点分子的任何其它分子(即小有机分子、肽模拟物、适体等)。在某些情况下，BTLA(CD272)的抑制剂是HVEM。在某些情况下，CD160的抑制剂是HVEM。在一些情况下，2B4的抑制剂是CD48。在某些情况下，LAIR1的抑制剂是胶原。在一些情况下，TIGHT的抑制剂是CD112、CD113或CD 155。在某些情况下，CD28的抑制剂是CD80或CD86。在某些情况下，LIGHT的抑制剂是HVEM。在某些情况下，DR3的抑制剂是TL1A。在某些情况下，CD226的抑制剂是CD155或CD112。在某些情况下，CD2的抑制剂是CD48或CD58。在某些情况下，SLAM是自我抑制性的并且SLAM的抑制剂是SLAM。

在优选实施方案中，检查点抑制剂是CTLA4、PD-L1、IDO1或PD-1或其组合的抑制剂。在优选实施方案中，检查点抑制剂是CTLA4的抑制剂。在优选实施方案中，检查点抑制剂是IDO-1的抑制剂。在优选实施方案中，检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。

在根据本发明的任何方法中，一种或多种TLR9激动剂和/或一种或多种检查点抑制剂以足以药物有效量递送给患者的量包括在药学上可接受的载体或稀释剂中。

在根据本发明的任何方法中，一种或多种TLR9激动剂和/或一种或多种检查点抑制剂的共同施用可以使用已知方法以有效减少该病的症状或替代标志物的剂量和时间段进行。可能需要同时或依次将药学有效量的一种或多种本发明的治疗组合物作为单次治疗事件施用于个体。

在根据本发明的任何方法中，一种或多种TLR9激动剂和/或一种或多种检查点抑制剂还可以共同施用或与用于预防或治疗不废除TLR9激动剂或检查点抑制剂的作用的疾病或病状的任何其它试剂组合施用。在根据本发明的任何方法中，用于预防或治疗疾病或病状的试剂包括但不限于疫苗、抗原、抗体、细胞毒性剂、化学治疗剂、变应原、抗生素、反义寡核苷酸、TLR激动剂、激酶抑制剂、肽、蛋白质、基因治疗载体、DNA疫苗和/或增强免疫应答的特异性或大小的佐剂、或共刺激分子如细胞因子、趋化因子、蛋白质配体、反式激活因子、肽和包含修饰的氨基酸的肽。例如，在预防和/或治疗癌症中，预期化学治疗剂或单克隆抗体可以与TLR9激动剂或检查点抑制剂共同施用或组合施用。优选的化学治疗剂包括但不限于吉西他滨甲氨蝶呤、长春新碱、阿霉素、顺铂、不含糖的氯乙基亚硝基脲、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、博来霉素、阿霉素、达卡巴嗪、

fragyline、Meglamine GLA、戊柔比星(valrubicin)、卡莫司汀(carmustaine)和聚苯丙生(poliferposan)、MMI270、BAY 12-9566、RAS法尼基(famesyl)转移酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、MMP、MTA/LY231514、LY264618/洛美曲索(Lometexol)、格拉默来(Glamolec)、CI-994、TNP-470、和美新/托泊替康(Hycamtin/Topotecan)、PKC412、伐司朴达(Valspodar)/PSC833、

米托蒽醌(Mitroxantrone)、Metaret/苏拉明(Suramin)、巴马司他(Batimastat)、E7070、BCH-4556、CS-682、9-AC、AG3340、AG3433、Incel/VX-710、VX-853、ZD0101、ISI641、ODN698、TA 2516/马米司他(Marmistat)、BB2516/马米司他、CDP 845、D2163、PD183805、DX8951f、乳杆菌制剂(Lemonal)DP2202、FK 317、甲磺酸伊马替尼/

溶血性链球菌制剂(Picibanil)/OK-432、AD 32/戊柔比星、

锶衍生物、Temodal/替莫唑胺、Evacet/脂质体阿霉素、Yewtaxan/紫杉醇、

紫杉醇、Xeload/卡培他滨、Furtulon/去氧氟尿苷、CyClopax/口服紫杉醇、口服紫杉类、SPU-077/顺铂、HMR 1275/夫拉平度(Flavopiridol)、CP-358(774)/EGFR、CP-609(754)/RAS致癌基因抑制剂、BMS-182751/口服铂、UFT^TM(喃氟啶(Tegafurl)/尿嘧啶)、

左旋咪唑(Levamisole)、恩尿嘧啶(Eniluracil)/776C85/5FU增强剂、Campto/左旋咪唑、

伊立替康、图莫得(Tumodex)/雷利特塞(Ralitrexed)、

克拉屈滨(Cladribine)、Paxex/紫杉醇、

脂质体阿霉素、Caelyx/脂质体阿霉素、

氟达拉滨、表阿霉素(Pharmarubicin)/表柔比星、

ZD1839、LU 79553/萘二甲酰亚胺(Bis-Naphtalimide)、LU 103793/多拉司他汀(Dolastain)、Caetyx/脂质体阿霉素、

吉西他滨、ZD 0473/

YM 116、罗丁种子(lodine seeds)、CDK4和CDK2抑制剂、PARP抑制剂、D4809/Dexifosamide、

异环磷酰胺(Ifosfamide)、

替尼泊苷、

卡铂(Carboplatin)、Plantinol/顺铂、Vepeside/依托泊苷、ZD 9331、

多西他赛、鸟嘌呤阿糖胞苷的前药、紫杉类似物(Taxane Analog)、亚硝基脲、烷基化剂如美法仑(melphelan)和环磷酰胺、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、天冬酰胺酶(Asparaginase)、白消安(Busulfan)、卡铂、氯丁酸氮芥(Chlorombucil)、盐酸阿糖胞苷(Cytarabine HCl)、放线菌素D、盐酸柔红霉素、雌莫司汀磷酸钠、依托泊苷(VP16-213)、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、氟他胺、羟基脲(羟基尿素)、异环磷酰胺、干扰素α-2a、α-2b、醋酸亮丙瑞林(LHRH释放因子类似物)、洛莫司汀(CCNU)、盐酸双氯乙基甲胺(氮芥)、巯嘌呤、美司钠(Mesna)、米托坦(Mitotane)(o.p'-DDD)、盐酸米托蒽醌、奥曲肽、普卡霉素、盐酸丙卡巴肼、链脲佐菌素、柠檬酸他莫昔芬、硫鸟嘌呤、噻替哌(Thiotepa)、硫酸长春碱、安吖啶(m-AMSA)、阿扎胞苷、促红细胞生成素、六甲基三聚氰胺(HMM)、白细胞介素2、米托胍腙(甲基GAG；甲基乙二醛双脒腙；MGBG)、喷司他丁(2’脱氧助间型霉素(2'deoxycoformycin)、司莫司汀(甲基-CCNU)、替尼泊苷(VM-26)和硫酸长春地辛。优选的单克隆抗体包括但不限于

(Glaxo-Welicome)、

(IDEC/Genentech/Hoffman la Roche)、

(Wyeth)、

(Millennium)、

(IDEC and Schering AG)、

(Corixa/GSK)、

(Imclone/BMS)、

(Genentech)

(Genentech/Hoffman la Roche)、

(OSIPharmaceuticals/Genentech)。

以下实施例旨在进一步说明本发明的某些优选实施方案，并不意图以任何方式限制本发明的范围。

实施例1：免疫聚体的合成

使用自动化DNA合成仪(OligoPilot II,AKTA,(Amersham)和/或Expedite 8909(Applied Biosystem))，按照图1和图2中概述的线性合成或平行合成程序，在1μmol至0.1mM规模上合成根据本发明的化学实体。

5’-DMT dA、dG、dC和T亚磷酰胺购自Proligo(Boulder,CO)。5'-DMT 7-脱氮-dG和araG亚磷酰胺从Chemgenes(Wilmington,MA)获得。DiDMT-甘油接头固体支持物从Chemgenes获得。1-(2'-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-2-氧代-7-脱氮-8-甲基-嘌呤亚酰胺(amidite)从Glen Research(Sterling,VA)获得，2'-O-甲基核糖核苷亚酰胺从Promega(Obispo,CA)获得。根据本发明的所有化合物都是硫代磷酸酯骨架修饰的。

所有核苷亚磷酰胺的特征为³¹P和¹H NMR光谱。使用供应商推荐的正常偶联循环将修饰的核苷掺入特定位点。合成后，使用浓氢氧化铵将化合物脱保护，并通过反相HPLC纯化，脱三苯甲基化，然后透析。在使用前将呈钠盐形式的纯化的化合物冻干。通过CGE和MALDI-TOF MS测试纯度。通过LAL试验测定内毒素水平，且其低于1.0EU/mg。

实施例2：A20淋巴瘤模型中，与皮下施用相比，TLR9激动剂的瘤内注射

在BALB/c小鼠(n＝10)的右侧皮下植入3x10⁶个A20细胞。在第8天开始治疗，瘤内(i.t.)或皮下(s.c.)注射2.5mg/kg的IMO-4。IMO-4在第8、10、12和14天给予。在肿瘤植入后第21天收集来自安慰剂(PBS)对照和IMO-4处理的荷瘤小鼠的样品。如图3A和3B所示，瘤内IMO-4诱导有效的抗肿瘤活性和CD3+TIL浸润。与皮下施用相比，瘤内IMO-4还调节肿瘤检查点表达，从而使肿瘤微环境敏化，以与一种或多种检查点抑制剂组合(数据未显示)。

实施例3：A20淋巴瘤模型中TLR9激动剂的瘤内注射

在BALB/c小鼠(n＝10)的右侧和左侧皮下植入3x10⁶个CT26细胞。在第8天以左侧瘤内注射2.5mg/kg的IMO-4开始治疗。IMO-4在第8、10、12和14天给予。在肿瘤植入后第21天收集来自安慰剂(PBS)对照和IMO-4处理的荷瘤小鼠的样品。如图4所示，在处理的肿瘤结节和远端肿瘤结节中瘤内IMO-4诱导有效的抗肿瘤活性。瘤内IMO-4还调节肿瘤检查点表达，从而使肿瘤微环境敏化，以与一种或多种检查点抑制剂组合(数据未显示)。

实施例4：CT26结肠癌模型中TLR9激动剂的瘤内注射

在BALB/c小鼠(n＝9)的右侧和左侧皮下植入2x10⁶个CT26细胞。在第7天以左侧瘤内注射2.5mg/kg的IMO-4开始治疗。IMO-4在第7、9、11、13和15天给予。在肿瘤植入后第27天收集来自安慰剂(PBS)对照和IMO-4处理的荷瘤小鼠的样品。如图5所示，在处理的肿瘤结节和远端肿瘤结节中瘤内IMO-4诱导有效的抗肿瘤活性。瘤内IMO-4还调节肿瘤检查点表达，从而使肿瘤微环境敏化，以与一种或多种检查点抑制剂组合(数据未显示)。

实施例5：B16黑色素瘤模型中TLR9激动剂的瘤内注射

在BALB/c小鼠(n＝9)的右侧和左侧皮下植入1x10⁶个B16细胞。在第7天以左侧瘤内注射2.5mg/kg的IMO-4开始治疗。IMO-4在第7、9、11、13和15天给予。在肿瘤植入后第22天收集来自安慰剂(PBS)对照和IMO-4处理的荷瘤小鼠的样品。如图6所示，在处理的肿瘤结节和远端肿瘤结节中瘤内IMO-4诱导有效的抗肿瘤活性。瘤内IMO-4还调节肿瘤检查点表达，从而使肿瘤微环境敏化，以与一种或多种检查点抑制剂组合(数据未显示)。

实施例6：对处理的肿瘤和肺转移进行TLR9激动剂和检查点抑制剂组合疗法

在BALB/c小鼠的右侧皮下植入2x10⁷个CT26细胞。然后小鼠静脉内注射3×10⁶个CT26细胞以建立肺转移。在第5天开始治疗。将2.5mg/kg的IMO-4在右侧瘤内施用于CT26实体瘤，并通过腹膜内(i.p.)注射施用10mg/kg的抗CTLA-4 mAb。在第5、6、8和9天，单独或共同施用给予IMO-4和抗CTLA4 mAb。收集来自PBS对照、IMO-4、抗CTLA-4 mAb或IMO-4和抗CTLA-4 mAb处理的荷瘤小鼠脾脏的肺和T细胞。图7至图9显示了IMO-4和抗CTLA-4 mAb对直接处理的肿瘤和全身性肺转移的影响。

如图7和图8所示，相对于单独的IMO-4或抗CTLA4 mAb，IMO-4和抗CTLA4 mAb组合疗法导致改善的肿瘤生长抑制。如图9所示，与单独的单一疗法相比，全身性肺转移部位中存在的针对β-gal的细胞毒性T细胞显著增加(p<0.01)。

实施例7：对治疗的肿瘤和远端肿瘤进行TLR9激动剂和检查点抑制剂组合疗法

将BALB/c小鼠(每组n＝8)在右侧(肿瘤1)和左侧(肿瘤2)皮下植入1x10⁷个鼠结肠癌CT26细胞。在第7天当肿瘤体积达到200至300mm³时开始治疗。在右侧肿瘤结节处瘤内注射2.5mg/kg的IMO-4(在100μl PBS中50μg)，并在第7、8、11和12天共4次单独或共同施用通过腹膜内注射施用抗PD-1 mAb(10mg/kg，每只小鼠200μg)。在第14天收集肿瘤结节。

如图10所示，在单个肿瘤上瘤内注射IMO-4加抗PD-1 mAb导致对局部(图10A)和远端肿瘤(图10B)的强效抗肿瘤作用。图11显示了IMO-4增加T淋巴细胞浸润到肿瘤组织中。尽管少数CD3+细胞存在于PBS(媒介物)注射的小鼠中与正常组织接触的肿瘤组织中，但是在用IMO-4或抗PD-1 mAb处理的小鼠的肿瘤组织中存在大量的CD+3细胞。然而，最丰富的CD3+细胞存在于接受IMO-4和CTLA-4 mAb组合治疗的小鼠的肿瘤中。

实施例8：对处理的肿瘤和全身性肺转移进行TLR9激动剂和检查点抑制剂组合疗法

在BALB/c小鼠的右侧皮下植入1x10⁷个B16.F10细胞。然后小鼠静脉内注射2x10⁶个B16.F10细胞以建立肺转移。在第5天开始治疗。将5mg/kg的IMO-4在右侧瘤内施用于B16实体瘤，并通过腹膜内(i.p.)注射施用15mg/kg的抗PD-1 mAb。在第5、6、7、8和9天单独或共同施用给予IMO-4和抗PD-1 mAb。收集来自对照、IMO-4、抗PD-1 mAb或IMO-4和抗PD-1 mAb处理的荷瘤小鼠的样品。图12和图13显示了IMO-4和抗PD-1 mAb对直接处理的肿瘤和全身性肺转移的影响。

实施例9：对处理的肿瘤和全身性肺转移进行TLR9激动剂和检查点抑制剂组合疗法

在BALB/c小鼠的右侧皮下植入1x10⁷个CT26细胞。然后小鼠静脉内注射3x10⁶个CT26细胞以建立肺转移。在第4天开始治疗。将2.5mg/kg的IMO-4在右侧瘤内施用于实体瘤，并口服施用(p.o.)75mg/kg的抗IDO1抑制剂。在第4、5、7和8天，单独或共同施用给予IMO-4和抗IDO1抑制剂。抗IDO1被施用两次。收集来自对照、IMO-4、抗IDO1抑制剂或IMO-4和抗IDO1抑制剂处理的荷瘤小鼠的样品。图14至图17显示了IMO-4和抗IDO1抑制剂对直接处理的肿瘤和全身性肺转移的影响。

等效物

尽管出于清楚和理解的目的已经对前述发明进行了一些细节的描述，但是本领域技术人员将会理解，通过阅读本公开内容，可以在不脱离本发明和所附权利要求书的实际范围的情况下进行形式和细节上的各种改变。

Claims (15)

1.一种TLR9激动剂用于制备治疗患者的转移性癌症的药物的用途，所述TLR9激动剂具有结构5’-TCG₁AACG₁TTCG₁-X-G₁CTTG₁CAAG₁CT-5’ (5’-SEQ ID NO:4-X-SEQ ID NO:4-5’)，其中G₁是2’-脱氧-7-脱氮鸟苷，且X是甘油接头，其中所述患者对于免疫检查点抑制剂疗法是难治性的、产生抗性的、或无应答，所述TLR9激动剂是瘤内施用至所述转移性癌症的治疗的肿瘤，从而所述TLR9激动剂与检查点抑制剂的组合疗法使得所述转移性癌症的治疗的肿瘤和远端肿瘤的微环境敏化，其中所述药物与一种或多种靶向免疫检查点的抑制剂共同施用，所述免疫检查点选自由CTLA-4、PD-1和PD-L1组成的组。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述TLR9激动剂和所述一种或多种靶向选自由CTLA-4、PD-1和PD-L1组成的组的免疫检查点的抑制剂各自以药学有效量施用。

3.根据权利要求2所述的用途，其中在向所述患者施用所述一种或多种靶向选自由CTLA-4、PD-1和PD-L1组成的组的免疫检查点的抑制剂之前施用所述TLR9激动剂。

4.根据权利要求2所述的用途，其中向所述患者同时施用所述一种或多种靶向选自由CTLA-4、PD-1和PD-L1组成的组的免疫检查点的抑制剂以及所述TLR9激动剂。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述一种或多种抑制剂靶向选自由CTLA-4、PD-L1和PD-1或其组合组成的组的免疫检查点。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述一种或多种CTLA-4、PD-1和/或PD-L1抑制剂包括CTLA-4抑制剂，所述CTLA-4抑制剂为抗CTLA-4的抗体。

7.根据权利要求1所述的用途，其中所述转移性癌症选自由以下组成的组：B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、神经胶质瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、黑色素瘤、肉瘤、皮肤癌、口腔癌、胃肠道癌、结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、肝癌、胆囊癌、肾癌和睾丸癌。

8.根据权利要求1所述的用途，其中所述转移性癌症选自由以下组成的组：B细胞白血病、T细胞白血病、肺道癌、子宫内膜癌和子宫颈癌。

9.根据权利要求1所述的用途，其中所述转移性癌症选自由以下组成的组：非霍奇金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤和毛细胞白血病。

10.根据权利要求1所述的用途，其中所述转移性癌症选自由以下组成的组：急性淋巴性白血病和慢性淋巴性白血病。

11.根据权利要求1所述的用途，其中所述转移性癌症为恶性上皮肿瘤。

12.根据权利要求7所述的用途，其中所述转移性癌症是黑色素瘤。

13.根据权利要求1所述的用途，其中所述转移性癌症的治疗还包括施用另外的抗癌剂，其中所述另外的抗癌剂选自化学治疗剂或放射疗法。

14.根据权利要求1所述的用途，其中所述一种或更多种检查点抑制剂是肠胃外施用或瘤内施用。

15.根据权利要求1所述的用途，其中所述TLR9激动剂与如下共同施用：

CTLA-4抑制剂；和

PD-1抑制剂。

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