ES2908056T3 - Tratamiento del cáncer por agonistas del TLR9 con inhibidores del punto de control - Google Patents

Abstract

Una composición para usar en el tratamiento de un tumor sólido en un paciente con cáncer metastásico, comprendiendo la composición: un agonista de TLR9 que tiene la estructura 5'-TCG1AACG1TTCG1 -X-G1CTTG1CAAG1CT-5' (5'-SEQ ID NO:4- XSEQ ID NO:4-5'), donde G1 es 2'-desoxi-7-desazaguanosina y X es un enlazador de glicerol; y en el que la composición se coadministrará con un inhibidor dirigido a los puntos de control inmunitarios seleccionado del grupo que consiste en un mAb anti-PD1 (proteína de muerte celular programada 1) y un inhibidor de IDO-1 (indoleamina 2,3-dioxigenasa 1); y en el que el agonista de TLR9 se va a administrar por vía intratumoral al tumor sólido.

Description

DESCRIPCIÓN

Tratamiento del cáncer por agonistas del TLR9 con inhibidores del punto de control

[0001] La invención se refiere en general al campo de la oncología, y más concretamente al uso de la inmunoterapia en el tratamiento del cáncer.

Resumen de la técnica relacionada

[0002] Los receptores tipo Toll (TLR) están presentes en muchas células del sistema inmunitario y se ha demostrado que están implicados en la respuesta inmunitaria innata (Hornung, V. et al, (2002) J. Immunol . 168:4531-4537). En los vertebrados, esta familia consta de once proteínas denominadas TLR1 a TLR11 que se sabe que reconocen patrones moleculares asociados a patógenos de bacterias, hongos, parásitos y virus (Poltorak, A. et al. (1998) Science 282:2085-2088; Underhill , DM y otros (1999) Nature 401:811-815, Hayashi, F. y otros (2001) Nature 410:1099-1103, Zhang, D. y otros (2004) Science 303:1522-1526; Meier, A. et al. (2003) Cell. Microbiol. 5:561-570, Campos, MA et al. (2001) J. Immunol. 167:416-423, Hoebe, K. et al. (2003) Nature 424:743-748; Lund, J. (2003) J. Exp. Med. 198:513-520; Heil, F. et al. (2004) Science 303:1526-1529; Diebold, SS, et al. (2004) Science 303:1529-1531, Hornung, V. y otros (2004) J. Immunol. 173:5935-5943); De Nardo, (2015) Cytokine 74:181-189.

[0003] Los TLR son un medio clave a través del cual los vertebrados reconocen y generan una respuesta inmunitaria frente a moléculas extrañas y también proporcionan un medio a través del cual se vinculan las respuestas inmunitarias innata y adaptativa (Akira, S. et al. (2001) Nature Immunol. 2:675-680, Medzhitov, R. (2001) Nature Rev. Immunol. 1:135-145). Algunos TLR están ubicados en la superficie celular para detectar e iniciar una respuesta a patógenos extracelulares y otros TLR están ubicados dentro de la célula para detectar e iniciar una respuesta a patógenos intracelulares.

[0004] Se sabe que TLR9 reconoce motivos CpG no metilados en ADN bacteriano y en oligonucleótidos sintéticos. (Hemmi, H. y col. (2000) Nature 408:740-745). Se ha demostrado que los agonistas naturales de TLR9 producen actividad antitumoral (p. ej., crecimiento tumoral y angiogénesis), lo que da como resultado una respuesta anticancerígena eficaz (p. ej., antileucemia) (Smith, JB y Wickstrom, E. (1998) J. Natl. Cancer Inst. 90:1146-1154).

[0005] Una de las perspectivas más tentadoras de la inmunoterapia contra el cáncer es el potencial para un control del cáncer de mayor duración. Las células inmunitarias activadas retienen una memoria permanente del marcador de proteína único o antígeno de las células cancerosas. Si el cáncer reaparece, las células inmunitarias se reactivan. Sin embargo, se han identificado muchos factores que hacen que el sistema inmunitario ignore las células cancerosas y, por lo tanto, limite la eficacia de las inmunoterapias contra el cáncer (Marabelle et al. (2013) J Clin Invest, 123(6):2447-2463; Mellman et al (2011)) Nature 480(7378):480-489). Específicamente, el sistema inmunitario tiene numerosos frenos moleculares, o puntos de control, que funcionan como vías inhibitorias endógenas en el sistema inmunitario responsables de mantener la autotolerancia y modular el grado de respuesta del sistema inmunitario para minimizar el daño de los tejidos periféricos. Además, se ha demostrado que los tejidos tumorales cooptan el sistema de puntos de control para reducir la eficacia de la respuesta inmunitaria del huésped, lo que da como resultado la inhibición del sistema inmunitario y el crecimiento tumoral (ver, por ejemplo, Pardoll, 2012, Nature Reviews Cancer 12:252-64 ; Nirschl & Drake, 2013, Clin Cancer Res 19:4917-24).

[0006] Marabelle et al. (Cancer Res. 2012, 72(8 supl.):B-139), Wang et al., (Cancer Immunol. Res. 2014, 3(10 supl.

1):A56), WO 2016/196173, WO 2016/196062; el ensayo clínico NCT02254772 y el documento US 2013/142815 divulgan el uso combinado de agonistas de TLR9 e inhibidores de puntos de control inmunitarios para el tratamiento del cáncer.

[0007] Por lo tanto, existe la necesidad de terapias que mantengan el sistema inmunitario activado para mejorar la eficacia de las terapias inmunomoduladoras contra las células tumorales.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

[0008] La invención está definida por las reivindicaciones adjuntas.

[0009] La invención proporciona una composición para usar en el tratamiento de un tumor sólido en un paciente con cáncer metastásico, comprendiendo la composición un agonista de TLR9 y uno o más inhibidores de puntos de control. El agonista de TLR9 debe administrarse al paciente mediante administración intratumoral (it). El agonista de TLR9 es un inmunómero que tiene la estructura 5'-TCG1AACG1TTCG1-X-G1CTTG1CAAG1CT-5' (5'-SEQ ID NO:4-X-SEQ ID NO:4-5'), donde G1 es 2'-desoxi-7-desazaguanosina y X es un enlazador de glicerol.

[0010] El inhibidor del punto de control inmunitario es un mAb anti-PD-1 o un inhibidor de IDO1. En algunas formas de realización, uno o más inhibidores de puntos de control se administran por cualquier vía adecuada. En algunas formas de realización, la vía de administración de uno o más inhibidores de puntos de control es parenteral, administración mucosa, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, intratumoral, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, intragástrica, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en forma de colirio o enjuague bucal. En algunas formas de realización, uno o más agonistas de TLR9 y uno o más inhibidores de puntos de control se administran cada uno en una cantidad farmacéuticamente eficaz.

[0011] En algunas formas de realización, el cáncer es un cáncer hematológico. En algunas formas de realización, el cáncer hematológico es una leucemia, un linfoma, un mieloma, un linfoma no Hodgkin, un linfoma de Hodgkin o una neoplasia maligna de células B. En algunas formas de realización, el cáncer hematológico es una neoplasia maligna de células B. En algunas formas de realización, la malignidad de células B es linfoma folicular (LF), linfoma difuso de células B grandes (LDCBG), linfoma de células del manto (LCM), macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma múltiple, linfoma de células B de la zona marginal extraganglionar, linfoma de células B de la zona marginal ganglionar, linfoma de Burkitt, linfoma de células B de alto grado no Burkitt, linfoma de células B mediastínico primario (LMP), linfoma inmunoblástico de células grandes, linfoma linfoblástico B precursor, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmocitario , linfoma esplénico de la zona marginal, mieloma de células plasmáticas, plasmocitoma, linfoma de células B grandes mediastínico (tímico), linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de efusión primaria o granulomatosis linfomatoide. En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B es un linfoma difuso de células B grandes (LDCBG). En algunas formas de realización, LDCBG es un linfoma difuso de células B grandes de células B activado (ABC-LDCBG). En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma de linfocitos pequeños (LLP), leucemia prolinfocítica de células B (LPL-B), linfoma no-LLC/LLP, linfoma de células del manto, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, o una combinación de los mismos. En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B es una neoplasia maligna de células B en recaída o refractaria. En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B en recaída o refractaria es linfoma difuso de células B grandes (LDCBG). En algunas formas de realización, el LDCBG recidivante o refractario es un linfoma difuso de células B grandes de células B activado (ABC-LDCBG). En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B en recaída o refractaria es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma de linfocitos pequeños (LLP), leucemia prolinfocítica de células B (LPL-B), linfoma no-LLC/LLP, linfoma de células del manto, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, o una combinación de las mismas. En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B es una neoplasia maligna de células B con metástasis. En algunas formas de realización, la neoplasia maligna de células B metastatizada es linfoma difuso de células B grandes (LDCBG), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico pequeño (LLP), leucemia prolinfocítica de células B (LPL-B), linfoma no LLC/LLP, linfoma de células del manto, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom o una combinación de los mismos. En algunas formas de realización, el cáncer es un sarcoma o carcinoma. En algunas formas de realización, el cáncer se selecciona de cáncer anal; cáncer de apéndice; cáncer de las vías biliares (es decir, colangiocarcinoma); cáncer de vejiga; cáncer de mama; cáncer de cuello uterino; cáncer de colon; cáncer de Primario Desconocido (CUP); cáncer de esófago; cáncer de ojo; cáncer de trompa de Falopio; cáncer gastroenterológico; cancer de riñón; cáncer de hígado; cáncer de pulmón; meduloblastoma; melanoma; cáncer bucal; cáncer de ovarios; cancer de pancreas; enfermedad paratiroidea; cáncer de pene; tumor pituitario; cancer de prostata; cáncer de recto; cáncer de piel; cáncer de estómago; cancer testicular; cáncer de garganta; cáncer de tiroides; cáncer uterino; cáncer de vagina; o cáncer de vulva. En algunas formas de realización, el cáncer se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de conducto biliar proximal o distal y melanoma. En algunas formas de realización, el cáncer es un cáncer de mama. En algunas formas de realización, el cáncer de mama es carcinoma ductal in situ, carcinoma lobulillar in situ, carcinoma ductal invasivo o infiltrante, carcinoma lobulillar invasivo o infiltrante, cáncer de mama inflamatorio, cáncer de mama triple negativo, enfermedad de Paget del pezón, tumor filoides, angiosarcoma o carcinoma de mama invasivo. En algunas formas de realización, el cáncer es un cáncer de colon. En algunas formas de realización, el cáncer de colon es adenocarcinoma, tumores carcinoides gastrointestinales, tumores del estroma gastrointestinal, linfoma colorrectal primario, leiomiosarcoma, melanoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma mucinoso o adenocarcinoma de células en anillo de sello. En algunas formas de realización, el cáncer es un cáncer en recaída o refractario. En algunas formas de realización, el cáncer en recaída o refractario se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de conducto biliar proximal o distal y melanoma. En algunas formas de realización, el cáncer es un cáncer metastatizado. En algunas formas de realización, el cáncer metastatizado se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de conducto biliar proximal o distal y melanoma.

[0012] En algunas formas de realización, el uso de una combinación que comprende el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario y la administración intratumoral de un agonista de TLR9 para el tratamiento de un cáncer comprende además la administración de un agente anticancerígeno adicional. En algunas formas de realización, el agente anticancerígeno adicional se selecciona entre un agente quimioterapéutico o radioterapia. En algunas formas de realización, el agente quimioterapéutico se selecciona entre clorambucilo, ifosfamida, doxorrubicina, mesalazina, talidomida, lenalidomida, temsirolimus, everolimus, fludarabina, fostamatinib, paclitaxel, docetaxel, ofatumumab, rituximab, dexametasona, prednisona, CAL-101, ibritumomab, tositumomab, bortezomib, pentostatina, endostatina o una combinación de los mismos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0013] Los anteriores y otros objetos, características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción más particular de las formas de realización preferidas de la invención, como se ilustra en los dibujos adjuntos en los que los caracteres de referencia similares se refieren a las mismas partes a lo largo de las diferentes vistas. Los dibujos no están necesariamente a escala, sino que se hace hincapié en ilustrar los principios de la invención.

FIG. 1 es un esquema sintético para la síntesis lineal de inmunómeros. DMTr = 4,4'-dimetoxitritilo; CE = cianoetilo.

FIG. 2 es un ejemplo de un esquema sintético para la síntesis paralela de inmunómeros. DMTr = 4,4'-dimetoxitritilo; CE = cianoetilo.

FIG. 3A y la FIG. 3B demuestra que la administración intratumoral del agonista de TLR9 indujo una potente actividad antitumoral y aumentó la infiltración de LIT CD3+ en comparación con la administración subcutánea.

FIG. 4A y la FIG. 4B demuestra que la administración intratumoral del agonista de TLR9 indujo una potente actividad antitumoral en tumores tanto locales como distantes en el modelo de linfoma A20.

FIG. 5A y la FIG. 5B demuestra que la administración intratumoral del agonista de TLR9 indujo una potente actividad antitumoral en tumores tanto locales como distantes en el modelo de carcinoma de colon CT26.

FIG. 6A y la FIG. 6B demuestra que la administración intratumoral del agonista de TLR9 indujo una potente actividad antitumoral en tumores tanto locales como distantes en el modelo de melanoma B16.

FIG. 7A a la FIG. 7D demuestra que la combinación de tratamiento con mAb anti-CTLA4 e inyecciones intratumorales de agonista de TLR9 conduce a la inhibición del crecimiento tumoral en nódulos tumorales tratados directamente.

FIG. 8A y la FIG. 8B demuestra que el tratamiento con mAb anti-CTLA4 y el agonista de TLR9 administrado intratumoralmente conducen a la regresión de la metástasis pulmonar sistémica.

FIG. 9A a la FIG. 9D demuestran que la terapia combinada con agonista de TLR9 administrado por vía intratumoral y mAb anti-CTLA4 mejora la infiltración de células T en tumores metastásicos de pulmón.

FIG. 9A muestra que algunas células T están presentes en los tejidos tumorales que bordean el tejido normal en el grupo tratado con PBS. FIG. 9B y FIG 9C muestran una mayor infiltración de células T en tejidos tumorales; sin embargo, la infiltración de células T más abundante está presente en tumores de ratones que reciben tratamiento combinado de agonista de TLR9 y mAb CTLA-4. (tinción CD3 IHC x400).

FIG. 10A y la FIG. 10B demuestran que el tratamiento con mAb anti-CTLA4 y las inyecciones intratumorales de agonista de TLR9 en un tumor local tratado conducen a potentes efectos antitumorales tanto en tumores locales como distantes.

FIG. 11A a la FIG. 11E demuestran que el mAb anti-CTLA4 y las inyecciones intratumorales del agonista de TLR9 aumentan la infiltración de linfocitos T en los tejidos tumorales. Mientras que pocas células CD3+ están presentes en el tejido tumoral que bordea el tejido normal de ratones inyectados con PBS (vehículo), se presenta una gran cantidad de células CD+3 en el tejido tumoral de ratones tratados con agonistas de TLR9 o CTLA-mAb. Sin embargo, las células CD3+ más abundantes están presentes en tumores de ratones que reciben tratamiento combinado de agonista de TLR9 y mAb CTLA-4.

FIG. 12A a la FIG. 12D demuestran que la combinación de tratamiento con mAb anti-PD-1 e inyecciones intratumorales de agonista de TLR9 conduce a la inhibición del crecimiento tumoral en nódulos tumorales tratados directamente.

FIG. 13A y la FIG. 13B demuestran que el tratamiento anti-PD-1 y el agonista de TLR9 intratumoral conducen a la regresión de la metástasis pulmonar sistémica.

FIG. 14A a la FIG. 14E demuestran que la combinación de tratamiento con inhibidor anti-IDOl e inyecciones intratumorales de agonista de TLR9 conduce a la inhibición del crecimiento tumoral en nódulos tumorales tratados directamente.

FIG. 15A y la FIG. 15B demuestran que el tratamiento anti-IDO1 y el agonista de TLR9 administrado intratumoralmente conducen a la regresión de la metástasis pulmonar sistémica.

FIG. 16A a la FIG. 16D demuestran que el tratamiento anti-IDOl y el agonista de TLR9 administrado intratumoralmente conducen a la supresión del tumor metastásico sistémico.

FIG. 16A muestra que los nódulos tumorales se infiltran en la mayoría de los tejidos pulmonares en el grupo tratado con PBS. FIG. 16B y la FIG. 16C muestran que los nódulos tumorales son más pequeños que los del grupo PBS y están presentes en el borde de los tejidos pulmonares para el grupo agonista de TLR9; sin embargo, la mayoría de los tejidos pulmonares están libres de nódulos tumorales de ratones que reciben tratamiento combinado de agonista de TLR9 e IDO.

FIG. 17A a la FIG. 17D demuestran que el tratamiento con agonista de TLR9 e inhibidor de IDO-1 aumenta las infiltraciones de células T CD3+ en tumores metastásicos de pulmón.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS FORMAS DE REALIZACIÓN PREFERIDAS

[0014] La presente invención se relaciona en general con el campo de la oncología, y más específicamente con el uso de inmunoterapia en el tratamiento o prevención del cáncer. Preferiblemente, la invención proporciona la administración conjunta de uno o más agonistas t LR9 y uno o más inhibidores de puntos de control. Estos agentes pueden usarse para inducir o potenciar la respuesta inmunitaria frente a antígenos asociados a enfermedades, tales como antígenos asociados a tumores (AAT) y potenciar la eficacia general del tratamiento.

[0015] La invención está definida por las reivindicaciones. Cualquier tema que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines informativos. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento, diagnóstico o cirugía se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para uso en un método de tratamiento, diagnóstico o cirugía del cuerpo humano o animal mediante terapia.

[0016] Sin aferrarse a ninguna teoría en particular, se cree que los receptores tipo Toll (TLR) desempeñan un papel central en el sistema inmunitario innato, la primera línea de defensa del cuerpo contra los patógenos invasores, así como las células dañadas o disfuncionales, incluidas las células cancerosas. Se ha demostrado que la administración intratumoral de agonistas de TLR9 tiene una potente actividad antitumoral; sin embargo, a pesar de la promesa de una monoterapia con agonista de TLR9, la respuesta inmunitaria resultante indujo vías de supresión del sistema inmunitario que incluyen puntos de control inmunitarios que disminuyen la eficacia de los agonistas de TLR9. Por lo tanto, parece necesaria una terapia combinada.

[0017] El sistema inmunitario innato también está implicado en la activación del sistema inmunitario adaptativo, que dirige respuestas inmunitarias altamente específicas a patógenos o tejidos diana. Sin embargo, las células cancerosas pueden explotar las vías de los puntos de control reguladores para evitar que el sistema inmunitario las reconozca, protegiendo así al tumor del ataque inmunitario.

[0018] Actualmente, se están diseñando inhibidores de puntos de control para bloquear estos puntos de control inmunitarios, permitiendo así que el sistema inmunitario reconozca las células tumorales y permitiendo una respuesta inmunoterapéutica sostenida. Si bien los tratamientos de monoterapia con inhibidores de puntos de control han mostrado algunos resultados prometedores, estos resultados solo se mostraron en pacientes con PD-L1 positivo. Además, un inconveniente potencial del uso de inhibidores de puntos de control como monoterapia es la generación de toxicidades autoinmunes.

[0019] La administración intratumoral de agonistas de TLR9 da como resultado cambios en el microambiente tumoral tanto en tumores tratados como distantes, como se demuestra mediante la modulación de la expresión génica del punto de control inmunitario. En este contexto, la administración intratumoral de agonistas de TLR9 puede aumentar los linfocitos infiltrantes de tumores (LIT); y potenciar la actividad anticancerígena de los inhibidores de puntos de control en el tumor inyectado así como sistémicamente. Por lo tanto, la administración intratumoral de agonistas de TLR9 puede sensibilizar el microambiente tumoral para la combinación con uno o más inhibidores de puntos de control.

DEFINICIONES

[0020] El término "nucleósido sustituido en 2'" o "arabinósido sustituido en 2'" generalmente incluye nucleósidos o arabinonucleósidos en los que el grupo hidroxilo en la posición 2' de una fracción de pentosa o arabinosa está sustituido para producir un grupo 2'-sustituido o ribonucleósido 2'-O-sustituido. En ciertas formas de realización, dicha sustitución es con un grupo hidrocarbilo inferior que contiene de 1 a 6 átomos de carbono saturados o insaturados, con un átomo de halógeno o con un grupo arilo que tiene de 6 a 10 átomos de carbono, donde dicho grupo hidrocarbilo o arilo puede estar sin sustituir o puede estar sustituido, por ejemplo, con grupos halo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, acilo, aciloxi, alcoxi, carboxilo, carboalcoxi o amino. Los ejemplos de ribonucleósidos 2'-O sustituidos o 2'-O-arabinósidos sustituidos incluyen, sin limitación, ribonucleósidos o arabinósidos 2'-amino, 2'-fluoro, 2'-alilo, 2'-O-alquilo y 2'-propargilo, 2'-O-metilrribonucleósidos o 2'-O-metilarabinósidos y 2-O-metoxietoxirribonucleósidos o 2'-O-metoxietoxiarabinósidos.

[0021] El término "3'", cuando se usa direccionalmente, generalmente se refiere a una región o posición en un polinucleótido u oligonucleótido 3' (hacia la posición 3' del oligonucleótido) de otra región o posición en el mismo polinucleótido u oligonucleótido.

[0022] El término "5'", cuando se usa direccionalmente, generalmente se refiere a una región o posición en un polinucleótido u oligonucleótido 5' (hacia la posición 5' del oligonucleótido) de otra región o posición en el mismo polinucleótido u oligonucleótido.

[0023] El término "alrededor de" generalmente significa que el número exacto no es crítico. Por lo tanto, el número de residuos de nucleósido en los oligonucleótidos no es crítico, y los oligonucleótidos que tienen uno o dos residuos de nucleósido menos, o de uno a varios residuos de nucleósido adicionales, se contemplan como equivalentes de cada una de las formas de realización descritas anteriormente.

[0024] El término "adyuvante" generalmente se refiere a una sustancia que, cuando se agrega a un agente inmunogénico como una vacuna o un antígeno, mejora o potencia una respuesta inmune al agente en el huésped receptor tras la exposición a la mezcla.

[0025] Los anticuerpos para usar en la presente invención incluyen, entre otros, anticuerpos monoclonales, anticuerpos sintéticos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, Fv monocatenarios (scFv) (incluyendo scFv bi-específicos), anticuerpos de cadena sencilla, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), Fv enlazados por disulfuro (sdFv) y fragmentos de unión a epítopo de cualquiera de los anteriores. En particular, los anticuerpos para usar en la presente invención incluyen moléculas de inmunoglobulina y porciones inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de unión para una molécula de punto de control inmunitario que se une inmunoespecíficamente a la molécula de punto de control inmunitario. Las moléculas de inmunoglobulina para usar en la invención pueden ser de cualquier tipo (p. ej., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), clase (p. ej., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Preferiblemente, los anticuerpos para usar en la invención son IgG, más preferiblemente, IgG1. Un anticuerpo contra una molécula de punto de control inmunitario adecuado para usar con los métodos descritos en el presente documento puede ser de cualquier origen animal, incluidos pájaros y mamíferos (p. ej., humano, murino, burro, oveja, conejo, cabra, conejillo de Indias, camello, caballo, tiburón o pollo). Preferiblemente, los anticuerpos son anticuerpos monoclonales humanos o humanizados. Como se usa aquí, los anticuerpos "humanos" incluyen anticuerpos que tienen la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana e incluyen anticuerpos aislados de bibliotecas de inmunoglobulinas humanas o de ratones u otros animales que expresan anticuerpos de genes humanos. Un anticuerpo contra una molécula de punto de control inmunitario adecuado para usar con los métodos descritos en el presente documento puede ser monoespecífico, biespecífico, triespecífico o de mayor multiespecificidad. Los anticuerpos multiespecíficos pueden unirse inmunoespecíficamente a diferentes epítopos de un polipéptido o pueden unirse inmunoespecíficamente tanto a un polipéptido como a un epítopo heterólogo, como un polipéptido heterólogo o un material de soporte sólido.

[0026] El término "agonista" generalmente se refiere a una sustancia que se une a un receptor de una célula e induce una respuesta. Tal respuesta puede ser un aumento en la actividad mediada por el receptor. Un agonista a menudo imita la acción de una sustancia natural como un ligando.

[0027] El término "antagonista" o "inhibidor" generalmente se refiere a una sustancia que puede unirse a un receptor, pero que no produce una respuesta biológica tras la unión. El antagonista o inhibidor puede bloquear, inhibir o atenuar la respuesta mediada por un agonista y puede competir con el agonista por unirse a un receptor. Tal actividad antagonista o inhibidora puede ser reversible o irreversible.

[0028] El término "antígeno" generalmente se refiere a una sustancia que es reconocida y unida selectivamente por un anticuerpo o por un receptor de antígeno de células T. Los antígenos pueden incluir, entre otros, péptidos, proteínas, nucleósidos, nucleótidos y combinaciones de los mismos. Los antígenos pueden ser naturales o sintéticos y generalmente inducen una respuesta inmunitaria que es específica para ese antígeno.

[0029] El término "cáncer" generalmente se refiere, sin limitación, a cualquier crecimiento o tumor maligno causado por una proliferación y/o división celular anormal o descontrolada. Los cánceres pueden ocurrir en humanos y/o animales y pueden surgir en cualquiera y en todos los tejidos. El tratamiento de un paciente que tiene cáncer con la invención puede incluir la administración de una formulación farmacéutica compuesta o una vacuna de acuerdo con la invención de manera que se vea afectada la proliferación y/o división celular anormal o descontrolada.

[0030] El término "vehículo" generalmente abarca cualquier excipiente, diluyente, relleno, sal, tampón, estabilizador, solubilizante, aceite, lípido, vesícula que contiene lípidos, microesferas, encapsulación liposomal u otro material bien conocido en la técnica para uso en formulaciones farmacéuticas. Se entenderá que las características del vehículo, excipiente o diluyente dependerán de la vía de administración para una aplicación particular. La preparación de formulaciones farmacéuticamente aceptables que contienen estos materiales se describe, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990.

[0031] El término "farmacéuticamente aceptable" o "fisiológicamente aceptable" generalmente se refiere a un material que no interfiere con la eficacia de un compuesto de acuerdo con la invención, y que es compatible con un sistema biológico tal como una célula, cultivo celular, tejido u organismo. Preferiblemente, el sistema biológico es un organismo vivo, tal como un vertebrado.

[0032] El término "administración conjunta", "administración conjunta" o "administración conjunta" generalmente se refiere a la administración de al menos dos agentes terapéuticos diferentes suficientemente próximos en el tiempo. Dicha administración se puede realizar en cualquier orden, incluida la administración simultánea, así como en un orden espaciado temporalmente desde unos pocos segundos hasta varios días de diferencia. Tal administración también puede incluir más de una sola administración de un agente y/o independientemente del otro agente. La administración de los agentes puede ser por la misma vía o por vías diferentes.

[0033] Los términos "mejorar" o "mejorado" significan aumentar o prolongar la potencia o la duración de un efecto deseado. A modo de ejemplo, potenciar el efecto de los agentes terapéuticos se refiere a la capacidad de aumentar o prolongar, ya sea en potencia o duración, el efecto de los agentes terapéuticos durante el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección. Una “cantidad potenciadora eficaz”, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una cantidad adecuada para potenciar el efecto de un agente terapéutico en el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección. Cuando se usa en un paciente, las cantidades efectivas para este uso dependerán de la gravedad y el curso de la enfermedad, trastorno o condición, la terapia previa, el estado de salud del paciente y la respuesta a los medicamentos, y el juicio del médico tratante.

[0034] El término "cantidad eficaz" generalmente se refiere a una cantidad suficiente para producir un efecto biológico deseado, como un resultado beneficioso. Por tanto, una "cantidad eficaz" dependerá del contexto en el que se administre. Una cantidad eficaz puede administrarse en una o más administraciones profilácticas o terapéuticas.

[0035] El término "en combinación con" generalmente significa administrar un primer agente y otro agente útil para tratar la enfermedad o condición.

[0036] Los términos "individuo", "paciente" o "sujeto" se usan indistintamente y generalmente se refieren a un mamífero, como un ser humano. Los mamíferos generalmente incluyen, pero no se limitan a humanos, primates no humanos, ratas, ratones, gatos, perros, caballos, vacas, cerdos, ovejas y conejos.

[0037] El término "inhibidor de cinasa" generalmente se refiere a moléculas que antagonizan o inhiben la señalización celular dependiente de la fosforilación y/o las rutas de crecimiento en una célula. Los inhibidores de la cinasa pueden ser naturales o sintéticos e incluyen moléculas pequeñas que tienen el potencial de administrarse como agentes terapéuticos orales. Los inhibidores de quinasa tienen la capacidad de inhibir rápida y específicamente la activación de las moléculas de quinasa diana. Las proteínas quinasas son dianas farmacológicas atractivas, en parte porque regulan una amplia variedad de vías de señalización y crecimiento e incluyen muchas proteínas diferentes. Como tales, tienen un gran potencial en el tratamiento de enfermedades que involucran la señalización de quinasas, incluido el cáncer, las enfermedades cardiovasculares, los trastornos inflamatorios, la diabetes, la degeneración macular y los trastornos neurológicos. Los ejemplos de inhibidores de la quinasa incluyen sorafenib (NEXAVAR®), SUTENT®, dasatinib, ZACTIMA™, TYKERB™, ibrutinib (IMBRUVICA®) y STI571.

[0038] El término "síntesis lineal" generalmente se refiere a una síntesis que comienza en un extremo de un oligonucleótido y progresa linealmente hacia el otro extremo. La síntesis lineal permite la incorporación de unidades monoméricas idénticas o no idénticas (en términos de longitud, composición de base y/o modificaciones químicas incorporadas) en un oligonucleótido.

[0039] El término "nucleósido modificado" generalmente es un nucleósido que incluye una base heterocíclica modificada, un resto de azúcar modificado o cualquier combinación de los mismos. En algunas formas de realización, el nucleósido modificado es un nucleósido de pirimidina o purina no natural, como se describe en el presente documento. Para los fines de la invención, un nucleósido modificado, un análogo de pirimidina o purina o una pirimidina o purina no natural pueden usarse indistintamente y se refiere a un nucleósido que incluye una base no natural y/o un resto de azúcar no natural. Para los fines de la invención, se considera que una base no es natural si no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo.

[0040] El término "enlazador" generalmente se refiere a cualquier resto que se pueda unir a un oligonucleótido mediante un enlace covalente o no covalente a través de un azúcar, una base o el esqueleto. El enlazador se puede usar para unir dos o más nucleósidos o se puede unir al nucleótido terminal 5' y/o 3' en el oligonucleótido. En determinadas realizaciones de la invención, dicho enlazador puede ser un enlazador no nucleotídico.

[0041] El término "enlazador no nucleotídico" generalmente se refiere a un resto químico distinto de un enlace nucleotídico que se puede unir a un oligonucleótido mediante un enlace covalente o no covalente. Preferiblemente, tal enlazador no nucleotídico tiene una longitud de aproximadamente 2 angstroms a aproximadamente 200 angstroms, y puede estar en una orientación cis o trans.

[0042] El término "enlace nucleotídico" generalmente se refiere a un enlace químico para unir dos nucleósidos a través de sus azúcares (por ejemplo, 3'-3', 2'-3', 2'-5', 3'-5') que consta de un átomo de fósforo y un grupo cargado o neutro (p. ej., fosfodiéster, fosforotioato o fosforoditioato) entre nucleósidos adyacentes.

[0043] El término "oligonucleótido" se refiere a un polinucleósido formado a partir de una pluralidad de unidades de nucleósido unidas. Las unidades de nucleósido pueden ser parte o pueden formar parte de virus, bacterias, desechos celulares, siARN o microARN. Dichos oligonucleótidos también se pueden obtener a partir de fuentes de ácidos nucleicos existentes, incluidos el ADN genómico o el ADNc, pero se producen preferentemente mediante métodos sintéticos. En formas de realización preferidas, cada unidad de nucleósido incluye una base heterocíclica y un grupo de pentofuranosilo, trehalosa, arabinosa, nucleósido sustituido en 2'-desoxi-2', arabinosa sustituida en 2'-desoxi-2', arabinosa sustituida en 2'-O o de azúcar hexosa. Los residuos de nucleósidos pueden acoplarse entre sí mediante cualquiera de los numerosos enlaces internucleósidos conocidos. Dichos enlaces internucleósidos incluyen, sin limitación, fosfodiéster, fosforotioato, fosforoditioato, alquilfosfonato, alquilfosfonotioato, fosfotriéster, fosforamidato, siloxano, carbonato, carboalcoxi, acetamidato, carbamato, morfolino, borano, tioéter, fosforamidato con puente, fosfonato de metileno con puente, fosforotioato con puente y fosforotioato con puente y enlaces internucleósidos de sulfona. El término "compuesto basado en oligonucleótidos" también abarca polinucleósidos que tienen uno o más enlaces internucleósidos estereoespecíficos (p. ej., enlaces (R^p )- o (S^p-fosforotioato, alquilfosfonato o fosfotriéster). Como se usa en el presente documento, los términos "oligonucleótido" y "dinucleótido " tienen la intención expresa de incluir polinucleósidos y dinucleósidos que tienen cualquier enlace internucleósido, ya sea que el enlace comprenda o no un grupo fosfato. En ciertas formas de realización preferidas, estos enlaces internucleósido pueden ser enlaces fosfodiéster, fosforotioato o fosforoditioato, o combinaciones de los mismos.

[0044] El término "péptido" generalmente se refiere a polipéptidos que tienen suficiente longitud y composición para afectar una respuesta biológica, por ejemplo, la producción de anticuerpos o la actividad de citoquinas, ya sea que el péptido sea un hapteno o no. El término "péptido" puede incluir aminoácidos modificados (ya sean o no, naturales o no naturales), donde tales modificaciones incluyen, pero no se limitan a p fosforilación, glicosilación, pegilación, lipidización y metilación.

[0045] El término "tratamiento" generalmente se refiere a un enfoque destinado a obtener un resultado beneficioso o deseado, que puede incluir el alivio de los síntomas, o retrasar o mejorar la progresión de una enfermedad.

[0046] En el presente documento, en ciertas formas de realización, se describe una composición para usar en el tratamiento de un tumor sólido en un paciente con cáncer metastásico, la composición comprende un agonista de TLR9 y uno o más inhibidores de puntos de control. El agonista de TLR9 debe administrarse por vía intratumoral. El agonista de TLR9 es un inmunómero que tiene la estructura 5'-TCG1AACG1TTCG1-X-G1CTTG1CAAG1CT-5' (5'-SEQ ID NO:4-X-SEQ ID NO:4-5'), donde G1 es 2'-desoxi-7-desazaguanosina y X es un enlazador de glicerol. El inhibidor del punto de control inmunitario es un mAb anti-PD-1 o un inhibidor de IDO1. En algunas formas de realización, uno o más inhibidores de puntos de control se administran por cualquier vía adecuada. En algunas formas de realización, la vía de administración de uno o más inhibidores de puntos de control es parenteral, administración mucosa, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, intratumoral, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, intragástrica, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en forma de colirio o enjuague bucal. En algunas formas de realización, uno o más agonistas de TLR9 y uno o más inhibidores de puntos de control se administran cada uno en una cantidad farmacéuticamente eficaz. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un sarcoma o carcinoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un sarcoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un carcinoma.

[0047] En algunas formas de realización, el tumor sólido es un tumor sólido en recaída o refractario. En algunas formas de realización, el tumor sólido en recaída o refractario es un sarcoma o carcinoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido en recaída o refractario es un sarcoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido en recaída o refractario es un carcinoma.

[0048] El tumor sólido es un tumor sólido metastatizado. En algunas formas de realización, el tumor sólido metastatizado es un sarcoma o carcinoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido metastatizado es un sarcoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido metastatizado es un carcinoma.

[0049] En algunas formas de realización, el sarcoma se selecciona de rabdomiosarcoma alveolar; sarcoma alveolar de partes blandas; ameloblastoma; angiosarcoma; condrosarcoma; cordoma; sarcoma de células claras de tejido blando; liposarcoma desdiferenciado; desmoides; tumor desmoplásico de células redondas pequeñas; rabdomiosarcoma embrionario; fibrosarcoma epitelioide; hemangioendotelioma epitelioide; sarcoma epitelioide; estesioneuroblastoma; sarcoma de Ewing; tumor rabdoide extrarrenal; condrosarcoma mixoide extraesquelético; osteosarcoma extraesquelético; fibrosarcoma; tumor de células gigantes; hemangiopericitoma; fibrosarcoma infantil; tumor miofibroblástico inflamatorio; Sarcoma de Kaposi; leiomiosarcoma de hueso; liposarcoma; liposarcoma de hueso; histiocitoma fibroso maligno (MFH); histiocitoma fibroso maligno (MFH) de hueso; mesenquimoma maligno; tumor maligno de la vaina del nervio periférico; condrosarcoma mesenquimatoso; mixofibrosarcoma; liposarcoma mixoide; sarcoma fibroblástico mixoinflamatorio; neoplasias con diferenciación de células epiteoides perivasculares; osteosarcoma; osteosarcoma parosteal; neoplasia con diferenciación de células epiteoides perivasculares; osteosarcoma perióstico; liposarcoma pleomórfico; rabdomiosarcoma pleomórfico; PNET/tumor de Ewing extraesquelético; rabdomiosarcoma; liposarcoma de células redondas; osteosarcoma de células pequeñas; tumor fibroso solitario; sarcoma sinovial; osteosarcoma telangiectásico.

[0050] En algunas formas de realización, el carcinoma se selecciona de un adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma adenoescamoso, carcinoma anaplásico, carcinoma de células grandes o carcinoma de células pequeñas. En algunas formas de realización, el carcinoma se selecciona de cáncer anal; cáncer de apéndice; cáncer de las vías biliares (es decir, colangiocarcinoma); cáncer de vejiga; cáncer de mama; cáncer de cuello uterino; cáncer de colon; cáncer de Primario Desconocido (CUP); cáncer de esófago; cáncer de ojo; cáncer de trompa de Falopio; cáncer gastroenterológico; cancer de riñón; cáncer de hígado; cáncer de pulmón; meduloblastoma; melanoma; cáncer bucal; cáncer de ovarios; cancer de pancreas; enfermedad paratiroidea; cáncer de pene; tumor pituitario; cancer de prostata; cáncer de recto; cáncer de piel; cáncer de estómago; cáncer testicular; cáncer de garganta; cáncer de tiroides; cáncer uterino; cáncer de vagina; o cáncer de vulva. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de mama. En algunas formas de realización, el cáncer de mama es carcinoma ductal invasivo, carcinoma ductal in situ, carcinoma lobulillar invasivo o carcinoma lobulillar in situ. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de páncreas. En algunas formas de realización, el cáncer de páncreas es adenocarcinoma o carcinoma de células de los islotes. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer colorrectal (colon). En algunas formas de realización, el cáncer colorrectal es adenocarcinoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un pólipo de colon. En algunas formas de realización, el pólipo de colon está asociado con poliposis adenomatosa familiar. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de vejiga. En algunas formas de realización, el cáncer de vejiga es cáncer de vejiga de células de transición, cáncer de vejiga de células escamosas o adenocarcinoma. En algunas formas de realización, el cáncer de vejiga está abarcado por los cánceres del tracto genitourinario. En algunas formas de realización, los cánceres del tracto genitourinario también abarcan cáncer de riñón, cáncer de próstata y cánceres asociados con los órganos reproductivos. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de pulmón. En algunas formas de realización, el cáncer de pulmón es un cáncer de pulmón de células no pequeñas. En algunas formas de realización, el cáncer de pulmón de células no pequeñas es adenocarcinoma, carcinoma de pulmón de células escamosas o carcinoma de pulmón de células grandes. En algunas formas de realización, el cáncer de pulmón es un cáncer de pulmón de células pequeñas. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de próstata. En algunas formas de realización, el cáncer de próstata es adenocarcinoma o carcinoma de células pequeñas. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de ovario. En algunas formas de realización, el cáncer de ovario es cáncer de ovario epitelial. En algunas formas de realización, el carcinoma es cáncer de vías biliares. En algunas formas de realización, el cáncer de conducto biliar es carcinoma de conducto biliar proximal o carcinoma de conducto biliar distal.

[0051] En algunas formas de realización, el tumor sólido se selecciona de sarcoma alveolar de partes blandas, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer colorrectal (colon), sarcoma óseo de Ewing, cáncer gastroenterológico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, leiomiosarcoma, cáncer de pulmón, melanoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de conducto biliar proximal o distal y neuroblastoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de próstata. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de mama. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de pulmón. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer colorrectal (colon). En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer gastroenterológico. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un melanoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de pulmón. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de riñón. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de cabeza y cuello. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer del conducto biliar proximal o distal. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un sarcoma alveolar de partes blandas. En algunas formas de realización, el tumor sólido es sarcoma óseo de Ewing. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de vejiga. En algunas formas de realización, el tumor sólido es cáncer de ovario. En algunas formas de realización, el tumor sólido es leiomiosarcoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es osteosarcoma. En algunas formas de realización, el tumor sólido es un neuroblastoma.

[0052] En algunas formas de realización, el cáncer de mama es carcinoma ductal in situ (carcinoma intraductal), carcinoma lobulillar in situ, carcinoma ductal invasivo (o infiltrante), carcinoma lobular invasivo (o infiltrante), cáncer de mama inflamatorio, cáncer de mama triple negativo, enfermedad de Paget del pezón, tumor filoides, angiosarcoma o carcinoma de mama invasivo. En algunas formas de realización, el carcinoma de mama invasivo se clasifica adicionalmente en subtipos. En algunas formas de realización, los subtipos incluyen carcinoma adenoide quístico (o adenoquístico), carcinoma adenoescamoso de bajo grado, carcinoma medular, carcinoma mucinoso (o coloide), carcinoma papilar, carcinoma tubular, carcinoma metaplásico, carcinoma micropapilar o carcinoma mixto.

[0053] En algunas formas de realización, el cáncer de mama se clasifica según las etapas o hasta qué punto se han diseminado las células tumorales dentro de los tejidos mamarios y hacia otras partes del cuerpo. En algunas formas de realización, hay cinco etapas de cáncer de mama, Etapa 0-IV. En algunas formas de realización, el cáncer de mama en etapa 0 se refiere a cánceres de mama no invasivos o que no hay evidencia de células cancerosas o células no cancerosas anormales que brotan del sitio de origen. En algunas formas de realización, el cáncer de mama en estadio I se refiere al cáncer de mama invasivo en el que las células cancerosas han invadido los tejidos circundantes. En algunas formas de realización, la etapa I se subclasifica en etapa IA y IB, en la que la etapa IA describe medidas tumorales de hasta 2 cm sin propagación de células cancerosas. La etapa IB describe la ausencia de tumor en la mama, pero tiene pequeños bultos de células cancerosas de entre 0,2 mm y 2 mm dentro de los ganglios linfáticos. En algunas formas de realización, el cáncer de mama en etapa II se subdivide además en etapa IIA y IIB. En algunas formas de realización, la etapa IIA describe un tumor de entre 2 cm y 5 cm solo en la mama, o ausencia de tumor en la mama pero con cáncer de entre 2 mm y 2 cm en los ganglios linfáticos axilares. En algunas formas de realización, la etapa IIB describe un tumor de más de 5 cm solo en la mama, o un tumor de entre 2 cm y 5 cm en la mama con presencia de pequeños tumores de 0,2 mm a 2 mm en los ganglios linfáticos axilares. En algunas formas de realización, el cáncer de mama en etapa III se subdivide además en etapa IIIA, IIIB y IIIC. En algunas formas de realización, la etapa IIIA describe la ausencia de tumor o un tumor de más de 5 cm en la mama con tumores pequeños en 4-9 ganglios linfáticos axilares o tumores pequeños de 0,2 mm-2 mm de tamaño en los ganglios linfáticos axilares. En algunas formas de realización, la etapa IIIB describe la diseminación del tumor en la pared torácica o la piel del seno que causa hinchazón o úlcera y con presencia de tumor en hasta 9 ganglios linfáticos axilares. En algunas formas de realización, el cáncer de mama inflamatorio también se considera como etapa IIIB. En algunas formas de realización, la etapa IIIC describe la ausencia de tumor o la propagación del tumor a la pared torácica o a la piel de la mama, con tumor presente en 10 o más ganglios linfáticos axilares. En algunas formas de realización, el cáncer de mama en etapa i.v. se refiere al cáncer de mama invasivo que ha hecho metástasis en los ganglios linfáticos y otras partes del cuerpo.

[0054] En algunas formas de realización, el cáncer de colon es un cáncer colorrectal. Como se usa aquí y en todo el documento, cáncer de colon se usa de manera intercambiable con cáncer colorrectal. En algunas formas de realización, cáncer colorrectal (colon) se refiere a cáncer rectal. En algunas formas de realización, el cáncer de colon es adenocarcinoma, tumores carcinoides gastrointestinales, tumores del estroma gastrointestinal, linfoma colorrectal primario, leiomiosarcoma, melanoma o carcinoma de células escamosas. En algunas formas de realización, el adenocarcinoma es un adenocarcinoma mucinoso o un adenocarcinoma de células en anillo de sello.

[0055] En algunas formas de realización, el cáncer de colon se clasifica según las etapas o hasta qué punto se han propagado a través de las paredes del colon y el recto. En algunas formas de realización, hay cinco etapas de cáncer de colon, Etapa 0-IV. En algunas formas de realización, el cáncer de colon en etapa 0 se refiere a la etapa muy temprana del cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer de colon en etapa I se refiere a cuando el cáncer se ha diseminado más allá del revestimiento más interno del colon a las capas segunda y tercera y también involucra la pared interior del colon. En algunas formas de realización, el cáncer de colon en etapa II se refiere a cuando el tumor se ha extendido a través de la pared muscular pero aún no se ha extendido a los ganglios linfáticos. En algunas formas de realización, el cáncer de colon en etapa III se refiere cuando el tumor ha metastatizado el colon en uno o más ganglios linfáticos. En algunas formas de realización, el cáncer de colon en estadio rV se refiere a cuando el tumor ha hecho metástasis en otras partes del cuerpo. En algunas formas de realización, hay dos etapas de cáncer de recto, clasificadas como Etapa 0 y Etapa I. En algunas formas de realización, el cáncer de recto en Etapa 0 se refiere a cuando el tumor está ubicado solo en el revestimiento interno del recto. En algunas formas de realización, la Etapa I se refiere a cuando el tumor ha avanzado a través del revestimiento interior del recto pero aún no ha pasado la pared muscular.

[0056] En algunas formas de realización, el uso de una combinación que comprende el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario y la administración intratumoral de un agonista de TLR9 para el tratamiento de un cáncer comprende además la administración de un agente anticancerígeno adicional. En algunas formas de realización, el agente anticancerígeno adicional se selecciona entre un agente quimioterapéutico o radioterapia. En algunas formas de realización, el agente quimioterapéutico se selecciona entre clorambucilo, ifosfamida, doxorrubicina, mesalazina, talidomida, lenalidomida, temsirolimus, everolimus, fludarabina, fostamatinib, paclitaxel, docetaxel, ofatumumab, rituximab, dexametasona, prednisona, CAL-101, ibritumomab, tositumomab., bortezomib, pentostatina, endostatina o una combinación de los mismos.

[0057] Como se usa en el presente documento, el término "agonista de TLR9" generalmente se refiere a un compuesto oligonucleotídico inmunoestimulador que comprende un motivo de dinucleótido CpG y es capaz de potenciar o inducir una estimulación inmunitaria mediada por TLR9. El dinucleótido CpG se puede seleccionar del grupo que consiste en CpG, C*pG, CpG*y C*pG*, en el que C es 2'-desoxicitidina, C* es un análogo del mismo, G es 2'-desoxiguanosina y G* es un análogo del mismo, y p es un enlace internucleósido seleccionado del grupo que consiste en fosfodiéster, fosforotioato y fosforoditioato. C* puede seleccionarse del grupo que consiste en 2'-desoxitimidina, arabinocitidina, 2'-desoxitimidina, 2'-desoxi-2'-arabinocitidina sustituida, 2'-O-arabinocitidina sustituida, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2'-desoxi-N4-alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina. G* puede ser 2' desoxi-7-deazaguanosina, 2'-desoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, 2'-desoxi-2'-arabinoguanosina sustituida, 2'-O-arabinoguanosina sustituida, 2'-desoxiinosina. El dinucleótido inmunoestimulador puede seleccionarse del grupo que consiste en C*pG, CpG* y C*pG*.

[0058] Como se usa en este documento, un inmunómero se refiere a un compuesto que comprende al menos dos oligonucleótidos unidos entre sí a través de sus extremos 3', de modo que el inmunómero tiene más de un extremo 5' accesible, en el que al menos uno de los oligonucleótidos es un oligonucleótido inmunoestimulador. El enlace en los extremos 3' de los oligonucleótidos componentes es independiente de los otros enlaces de oligonucleótidos y puede ser directamente a través de grupos hidroxilo en 5', 3' o 2', o indirectamente, a través de un enlazador no nucleótido o un nucleósido, utilizando las posiciones de hidroxilo 2' o 3' del nucleósido. Los enlaces también pueden utilizar un azúcar funcionalizado o una nucleobase de un nucleótido terminal 3'. El término "extremo 5' accesible" significa que el extremo 5' del oligonucleótido está suficientemente disponible para que los factores que reconocen y se unen a los inmunómeros y estimulan el sistema inmunitario tengan acceso a él. Opcionalmente, el 5' OH puede unirse a un resto de fosfato, fosforotioato o fosforoditioato, un enlazador aromático o alifático, colesterol u otra entidad que no interfiera con la accesibilidad.

[0059] Como se usa en el presente documento, un oligonucleótido inmunoestimulador es un oligodesoxirribonucleótido que comprende un motivo de dinucleótido CpG y es capaz de potenciar o inducir una respuesta inmunitaria mediada por TLR9. El dinucleótido CpG se puede seleccionar del grupo que consiste en CpG, C*pG, CpG*y C*pG*, en el que C es 2'-desoxicitidina, C* es un análogo del mismo, G es 2'-desoxiguanosina y G* es un análogo del mismo, y p es un enlace internucleósido seleccionado del grupo que consiste en fosfodiéster, fosforotioato y fosforoditioato. C* puede seleccionarse del grupo que consiste en 2'-desoxitimidina, arabinocitidina, 2'-desoxitimidina, 2'-desoxi-2'-arabinocitidina sustituida, 2'-O-arabinocitidina sustituida, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2 '-desoxi-N4-alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina. G* puede ser 2'-desoxi-7-deazaguanosina, 2'-desoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, 2'-desoxi-2'-arabinoguanosina sustituida, 2'-O-sustituida-arabinoguanosina, 2'-desoxiinosina. El dinucleótido inmunoestimulador puede seleccionarse del grupo que consiste en C*pG, CpG*y C*pG*.

[0060] El inmunómero puede comprender dos o más oligonucleótidos inmunoestimuladores que pueden ser iguales o diferentes. Preferiblemente, cada oligonucleótido inmunoestimulador tiene al menos un extremo 5' accesible.

[0061] Los oligonucleótidos del inmunómero pueden tener cada uno independientemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 35 residuos de nucleósido, preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 30 residuos de nucleósido, más preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 20 residuos de nucleósido. Los oligonucleótidos pueden tener de aproximadamente 5 a aproximadamente 18, o de aproximadamente 5 a aproximadamente 14, residuos de nucleósido. Como se usa aquí, el término "aproximadamente" implica que el número exacto no es crítico. Por lo tanto, el número de residuos de nucleósido en los oligonucleótidos no es crítico, y los oligonucleótidos que tienen uno o dos residuos de nucleósido menos, o de uno a varios residuos de nucleósido adicionales, se contemplan como equivalentes de cada una de las formas de realización descritas anteriormente. Uno o más de los oligonucleótidos pueden tener 11 nucleótidos.

[0062] Los inmunómeros pueden comprender dos oligonucleótidos unidos covalentemente por un enlace nucleotídico, o un enlazador no nucleótido, en sus extremos 3' o por azúcar funcionalizado o por una nucleobase funcionalizada a través de un enlazador no nucleotídico o un enlace nucleotídico. Como ejemplo no limitativo, el enlazador puede unirse al 3'-hidroxilo. El enlazador puede comprender un grupo funcional, que se une al 3'-hidroxilo por medio de un enlace basado en fosfato como, por ejemplo, fosfodiéster, fosforotioato, fosforoditioato, metilfosfonato, o mediante enlaces no basados en fosfato. Los posibles sitios de conjugación para el ribonucleótido se indican en la Fórmula I, a continuación, en la que B representa una base heterocíclica y en la que la flecha que apunta a P indica cualquier unión al fósforo.

[0063] El enlazador no nucleotídico puede ser una molécula pequeña, una macromolécula o una biomolécula, incluidos, entre otros, polipéptidos, anticuerpos, lípidos, antígenos, alérgenos y oligosacáridos. El enlazador no nucleotídico puede ser una molécula pequeña. Una molécula pequeña es un resto orgánico que tiene un peso molecular de menos de 1000 Da. La molécula pequeña puede tener un peso molecular de menos de 750 Da.

[0064] La molécula pequeña puede ser un hidrocarburo alifático o aromático, cualquiera de los cuales puede incluir opcionalmente, ya sea en la cadena lineal que conecta los oligorribonucleótidos o unidos a ella, uno o más grupos funcionales que incluyen, pero sin limitación, hidroxi, amino, tiol, tioéter, éter, amida, tioamida, éster, urea o tiourea. La molécula pequeña puede ser cíclica o acíclica. Los ejemplos de conectores de moléculas pequeñas incluyen, entre otros, aminoácidos, carbohidratos, ciclodextrinas, adamantano, colesterol, haptenos y antibióticos. Sin embargo, con el fin de describir el enlazador no nucleotídico, no se pretende que el término "molécula pequeña" incluya un nucleósido.

[0065] El enlazador no nucleotídico puede ser un enlazador de alquilo o un enlazador de amino. El enlazador de alquilo puede ser una mezcla ramificada o no ramificada, cíclica o acíclica, sustituida o no sustituida, saturada o insaturada, quiral, aquiral o racémica. Los conectores de alquilo pueden tener de aproximadamente 2 a aproximadamente 18 átomos de carbono. Dichos conectores de alquilo pueden tener de aproximadamente 3 a aproximadamente 9 átomos de carbono. Algunos conectores de alquilo incluyen uno o más grupos funcionales que incluyen, entre otros, hidroxi, amino, tiol, tioéter, éter, amida, tioamida, éster, urea y tioéter. Dichos enlazadores de alquilo pueden incluir, entre otros, 1,2 propanodiol, 1,2,3 propanotriol, 1,3 propanodiol, trietilenglicol hexaetilenglicol, enlazadores de polietilenglicol (por ejemplo, [-O-CH2-CH2-]n (n = 1-9)), enlazadores de metilo, enlazadores de etilo, enlazadores de propilo, enlazadores de butilo o enlazadores de hexilo. Estos conectores de alquilo pueden incluir péptidos o aminoácidos.

[0066] El conector no nucleotídico puede incluir, entre otros, los enumerados en la Tabla I.

[0067] Los oligonucleótidos del inmunómero pueden, independientemente, incluir nucleósidos naturales, nucleósidos modificados o mezclas de los mismos. Los oligonucleótidos del inmunómero también se pueden seleccionar, independientemente, entre oligonucleótidos híbridos y quiméricos. Un "oligonucleótido quimérico" es un oligonucleótido que tiene más de un tipo de enlace internucleósido. Un ejemplo preferido de un oligonucleótido quimérico de este tipo es un oligonucleótido quimérico que comprende una región de fosforotioato, fosfodiéster o fosforoditioato y enlaces no iónicos tales como enlaces alquilfosfonato o alquilfosfonotioato (ver, por ejemplo, Pederson et al. Patentes de EE. UU. Nos 5.635.377 y 5.366.878).

[0068] Un "oligonucleótido híbrido" es un oligonucleótido que tiene más de un tipo de nucleósido. Un ejemplo preferido de dicho oligonucleótido híbrido comprende un ribonucleótido o una región de ribonucleótido sustituido en 2' y una región de desoxirribonucleótido (véase, por ejemplo, Metelev y Agrawal, Patentes de EE.UU. N° 5.652.355, 6.346.614 y 6.143.881).

[0069] Los inmunómeros se pueden sintetizar convenientemente usando un sintetizador automatizado y un enfoque de fosforamidita como se representa esquemáticamente en las Figuras 1 y 2, y se describe adicionalmente en los Ejemplos. En algunas formas de realización, los inmunómeros se sintetizan mediante un enfoque de síntesis lineal (ver Figura 1). Como se usa aquí, el término "síntesis lineal" se refiere a una síntesis que comienza en un extremo del inmunómero y progresa linealmente hacia el otro extremo. La síntesis lineal permite la incorporación de unidades monoméricas idénticas o no idénticas (en términos de longitud, composición de base y/o modificaciones químicas incorporadas) en los inmunómeros.

[0070] Un modo alternativo de síntesis es, por ejemplo, "síntesis en paralelo", en la que la síntesis avanza desde un resto conector central (ver Figura 2). Se puede usar un enlazador unido a un soporte sólido para la síntesis en paralelo, como se describe en la Patente de EE.UU. N° 5.912.332. Alternativamente, se puede usar un soporte sólido universal (como un soporte de vidrio de poro controlado unido a fosfato).

[0071] La síntesis paralela de inmunómeros tiene varias ventajas sobre la síntesis lineal: (1) la síntesis paralela permite la incorporación de unidades monoméricas idénticas; (2) a diferencia de en la síntesis lineal, ambas (o todas) las unidades monoméricas se sintetizan al mismo tiempo, por lo que el número de pasos sintéticos y el tiempo requerido para la síntesis es el mismo que el de una unidad monomérica; y (3) la reducción en la síntesis pasos mejora la pureza y el rendimiento del producto inmunómero final.

[0072] Al final de la síntesis mediante protocolos de síntesis lineal o de síntesis en paralelo, los inmunómeros pueden desprotegerse convenientemente con una solución concentrada de amoníaco o según lo recomiende el proveedor de fosforamidita, si se incorpora el nucleósido modificado. El producto inmunómero se purifica preferentemente mediante HPLC de fase inversa, se destritila, desaliniza y dializa.

[0073] La Tabla II muestra los inmunómeros representativos nativos. Todos los enlaces entre nucleótidos son fosforotioato a menos que se indique lo contrario.

TABLA II

(Continuación)

_________________________________________________________________________________

Gi es 2'-desoxi-7-desazaguanosina; G² es 2'-desoxi-arabinoguanosina; G/C/U es 2'-O-metilribonucleótidos; Ui es 2'-desoxi-U; o es un enlace fosfodiéster; X es un conector de glicerol; X² = enlazador de isobutanotriol, Y es enlazador C3; m es enlazador cis,trans-1,3,5-ciclohexanotriol; Y² es el conector 1,3-propanodiol; Y³ es enlazador de 1,4-butanodiol; Y⁴ es conector 1,5-pentadiol; Z es enlazador 1,3,5-pentanotriol; M es conector cis,cis-1,3,5-ciclohexanotriol.

[0074] Los puntos de control inmunitarios se refieren a rutas inhibidoras en el sistema inmunitario que son responsables de mantener la autotolerancia y modular el grado de respuesta del sistema inmunitario para minimizar el daño tisular periférico. La inducción de una respuesta inmunitaria, ya sea a través de la infección por un patógeno (p. ej., bacterias, virus u hongos) o mediante la administración de un agonista inmunitario sintético (p. ej., un agonista de TLR9) conduce a la regulación al alza de los puntos de control inmunitarios. Sin embargo, se ha demostrado que las células tumorales también pueden activar puntos de control del sistema inmunitario para disminuir la eficacia de la respuesta inmunitaria contra los tejidos tumorales. Las moléculas de punto de control ejemplares incluyen, pero no se limitan a proteína 1 de muerte celular programada (PD-1, también conocida como CD279) e indolamina 2,3-dioxigenasa 1 (IDO-1). En formas de realización preferidas, el punto de control es PD-1.

[0075] Se contempla cualquier inhibidor de punto de control inmunitario adecuado para su uso con los métodos descritos en el presente documento. "Inhibidores del punto de control inmunitario", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier modulador que inhiba la actividad de la molécula del punto de control inmunitario. Los inhibidores de puntos de control inmunitarios pueden incluir, entre otros, proteínas de unión a moléculas de puntos de control inmunitarios, inhibidores de moléculas pequeñas, anticuerpos, derivados de anticuerpos (incluidos fragmentos Fab y scFv), conjugados de anticuerpos y fármacos, oligonucleótidos antisentido, siRNA, aptámeros, péptidos y péptidos. miméticos. Los ácidos nucleicos inhibidores que disminuyen la expresión y/o la actividad de las moléculas del punto de control inmunitario también se pueden usar en los métodos descritos en el presente documento. Una forma de realización es un ARN inhibidor pequeño (siARN) para la interferencia o inhibición de la expresión de un gen diana. Las secuencias de ácido nucleico que codifican PD-1, PD-L1 y PD-L2 se describen en los números de acceso de GENBANK® NM_005018, AF344424, NP_079515 y NP_054862.

[0076] En una forma de realización, el inhibidor del punto de control inmunitario reduce la expresión o la actividad de una o más proteínas del punto de control inmunitario. En otra forma de realización, el inhibidor del punto de control inmunitario reduce la interacción entre una o más proteínas del punto de control inmunitario y sus ligandos.

[0077] En algunas formas de realización, el inhibidor del punto de control inmunitario es un anticuerpo monoclonal contra PD-1. En otras realizaciones o en otras adicionales, el inhibidor del punto de control inmunitario es un anticuerpo humano o humanizado contra PD-1. Por ejemplo, los inhibidores de la actividad biológica de PD-1 (o sus ligandos) descritos en las patentes de EE.UU. Nos 7.029.674; 6.808.710; o las Solicitudes de Patente de EE.UU. Nos 20050250106 y 20050159351 pueden usarse en los métodos proporcionados en este documento. Ejemplos de anticuerpos contra PD-1 incluyen: anticuerpo anti-PD-1 de ratón Clon J43 (Cat #BE0033-2) de BioXcell; Clon de anticuerpo anti-PD-1 de ratón RMP 1-14 (Cat #Be 0146) de BioXcell; anticuerpo anti-PD-1 de ratón Clon EH 12; el anticuerpo anti-PD-1 de ratón MK-3475 de Merck (Keytruda, pembrolizumab, lambrolizumab); y el anticuerpo anti-PD-1 de AnaptysBio, conocido como ANB011; anticuerpo MDX-1 106 (ONO-4538); nivolumab, anticuerpo monoclonal IgG4 humano de Bristol-Myers Squibb (Opdivo.RTM., BMS-936558, MDX1106); AMP-514 y AMP-224 de AstraZeneca; y Pidilizumab (CT-01 1), CureTech Ltd.

[0078] Los anticuerpos anti-PD-1 ejemplares adicionales y métodos para su uso se describen por Goldberg et al, Blood 110(1): 186-192 (2007), Thompson et al. Al, Clin. Cancer Res. 13(6): 1757-1761 (2007), y Korman et al, Solicitud Internacional N° PCT/JP2006/309606 (publicación n° WO 2006/121 168 A1). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-PD-1 es un anticuerpo anti-PD-1 descrito en cualquiera de las siguientes publicaciones de patente: WO014557; WO2011110604; WO2008156712; US2012023752; WO20111 10621; WO2004072286; WO2004056875; WO20100036959; WO2010029434; WO201213548; WO2002078731; WO2012145493; WO2010089411; WO2001014557; WO2013022091; WO2013019906; WO2003011911; US20140294898; y WO2010001617.

[0079] En algunas formas de realización, el inhibidor de PD-1 es un mAb de PD-1 anti-ratón: clon J43, BioXCell (West Lebanon, NH).

[0080] En algunas formas de realización, el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de IDOl. En algunas formas de realización, el inhibidor del punto de control inmunitario es una molécula pequeña contra moléculas pequeñas contra IDOl que incluyen: INCB024360 de Incyte (

), NSC-721782 (también conocido como 1-metil-D-triptófano) y F001287 de Bristol Meyers Squibb.

[0081] El inhibidor de puntos de control es un inhibidor de IDO1 o PD-1 o combinaciones de los mismos. En formas de realización preferidas, el inhibidor del punto de control es un inhibidor de IDO-1. En formas de realización preferidas, el inhibidor del punto de control es un inhibidor de PD-1.

[0082] En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el agonista de TLR9 y/o uno o más inhibidores del punto de control se incluyen en el vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable en una cantidad suficiente para administrar a un paciente una cantidad farmacéuticamente eficaz.

[0083] En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, la coadministración del agonista de TLR9 y/o uno o más inhibidores de puntos de control puede llevarse a cabo utilizando procedimientos conocidos en dosis y durante períodos de tiempo efectivos para reducir los síntomas o marcadores sustitutos de la enfermedad. Puede ser deseable administrar simultáneamente o secuencialmente una cantidad farmacéuticamente eficaz de una o más de las composiciones terapéuticas de la invención a un individuo como un único episodio de tratamiento.

[0084] En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el agonista de TLR9 y/o uno o más inhibidores de puntos de control se pueden coadministrar o administrar en combinación con cualquier otro agente útil para prevenir o tratar la enfermedad o afección que no elimina el efecto del agonista de TLR9 o del inhibidor del punto de control. En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el agente útil para prevenir o tratar la enfermedad o afección incluye, entre otros, vacunas, antígenos, anticuerpos, agentes citotóxicos, agentes quimioterapéuticos, alérgenos, antibióticos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, inhibidores de cinasa, péptidos, proteínas, vectores de terapia génica, vacunas de ADN y/o adyuvantes para potenciar la especificidad o la magnitud de la respuesta inmunitaria, o moléculas coestimuladoras como citocinas, quimiocinas, ligandos proteicos, factores transactivadores, péptidos y péptidos que comprenden aminoácidos modificados. Por ejemplo, en la prevención y/o el tratamiento del cáncer, se contempla que un agente quimioterapéutico o un anticuerpo monoclonal se pueda coadministrar o administrar en combinación con el agonista de t LR9 o el inhibidor del punto de control. Los agentes quimioterapéuticos preferidos incluyen, entre otros, metotrexato de gemcitabina, vincristina, adriamicina, cisplatino, cloroetilnitrosoureas que no contienen azúcar, 5-fluorouracilo, mitomicina C, bleomicina, doxorrubicina, dacarbazina, TAXOL®, fragilina, meglamina GLA, valrubicina, carmustaína y poliferposan, MMI270, BAY 12-9566, inhibidor de farnesil transferasa RAS, inhibidor de farnesil transferasa, MMP, MTA/LY231514, LY264618/Lometexol, Glamolec, CI-994, TNP-470, Hycamtin/Topotecan, PKC412, Valspodar/PSC833, NOVANTRONE® /Mitroxantrona, Metaret/Suramin, Batimastat, E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, Incel/VX-710, VX-853, ZD0101, ISI641, ODN 698, TA 2516/Marmistat, BB2516/Marmistat, CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f, Lemonal DP 2202, FK 317, mesilato de imatinib/GLEEVEC®, Picibanil/OK-432, AD 32/Valrubicina, METASTRO©/derivado de estroncio, Temodal/Temozolomida, Evacet/doxorrubicina liposomal, Yewtaxan/Placlitaxel, TAXOL® /Paclitaxel, Xeload/Capecitabina, Furtulon/Doxifluridin e, Cyclopax/paclitaxel oral, taxoide oral, SPU-077/cisplatino, HMR 1275/flavopiridol, CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/inhibidor del oncogén RAS, BMS-182751/platino oral, UFT™ (Tegafur/Uracil), ERGAMISOL®/Levamisol, Eniluracil/776C85/5FU potenciador, Campto/Levamisole, CAMPTOSAR®/Irinotecan, Tumodex/Ralitrexed, LEUSTATIN®/Cladribina, Paxex/Paclitaxel, DOXIL®/doxorrubicina liposomal, Caelyx/doxorrubicina liposomal, FLUDARA®/Fludarabina, Farmarrubicina/Epirubicina, DEPOCYT®, ZD1839, LU 79553/Bis-naftalimida, LU 103793/Dolastain, Caetyx/doxorrubicina liposomal, GEMZAR®/Gemcitabina, ZD 0473/ANORMED®, YM 116, Semillas de yodo, CDK4 e inhibidores de CDK2, inhibidores de PARP, D4809/Dexifosamida, Ifes/MESNEX®/Ifosamida, VUMON®/Tenipósido, PARAPLATIN®/Carboplatino, Plantinol/cisplatino, Vepesida/Etopósido, ZD 9331, TAXOTERE®/Docetaxel, profármaco de arabinósido de guanina, Análogo de Taxano, nitrosoureas, agentes alquilantes como melfelán y ciclofosfamida, aminoglutetimida, asparaginasa, busulfano, carboplatino, clorombucil, citarabina HC1, dactinomicina, daunorrubicina HC1, estramustina fosfato sódico, etopósido (VP16 -213), floxuridina, fluorouracilo (5-FU), flutamida, hidroxiurea (hidroxicarbamida), ifosfamida, interferón alfa-2a, alfa-2b, acetato de leuprolida (análogo del factor liberador de LHRH), lomustina (CCNU), clorhidrato de mecloretamina (nitrógeno mostaza), mercaptopurina, mesna, mitotano (o.p'-DDD), clorhidrato de mitoxantrona, octreotida, plicamicina, clorhidrato de procarbazina, estreptozocina, citrato de tamoxifeno, tioguanina, tiotepa, sulfato de vinblastina, amsacrina (m-AMSA), azacitidina, ertropoyetina, hexametilmelamina (HMM), Interleucina 2, Mitoguazona (metil-GAG; metilglioxal bis-guanilhidrazona; MGBG), Pentostatina (2'desoxicoformicina), Semustina (metil-CCNU), Tenipósido (VM-26) y Vindesina sulfato. Los anticuerpos monoclonales preferidos incluyen, entre otros, PANOREX® (Glaxo-Welicome), RITUXAN® (IDEC/Genentech/Hoffman la Roche), MYLOTARG® (Wyeth), CAMPATH® (Millennium), ZEVALIN® (IDEC y Schering AG), BEXXAR® (Corixa/GSK), ERBITUX® (Imclone/BMS), AVASTIN® (Genentech) HERCEPTIN® (Genentech/Hoffman la Roche), TARCEVA® (OSI Pharmaceuticals/Genentech).

[0085] Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar adicionalmente ciertas formas de realización preferidas de la invención.

Ejemplo 1: Síntesis de inmunómeros

[0086] Las entidades químicas según la invención se sintetizaron en una escala de 1 pmol a 0,1 mM usando un sintetizador de ADN automatizado (OligoPilot II, AKTA, (Amersham) y/o Expedite 8909 (Applied Biosystem)), siguiendo los procedimientos de síntesis lineal o de síntesis en paralelo descritos en las Figuras 1 y 2.

[0087] Las fosforamiditas 5'-DMT dA, dG, dC y T se adquirieron de Proligo (Boulder, CO). Las fosforamiditas de 5'-DMT, 7-deaza-dG y araG se obtuvieron de Chemgenes (Wilmington, MA). El soporte sólido del enlazador DiDMT-glicerol se obtuvo de Chemgenes. La amidita de 1-(2'-desoxi-PD-ribofuranosil)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina se obtuvo de Glen Research (Sterling, VA), la amidita de 2'-0-metilribonucleósido se obtuvo de Promega (Obispo, CA). Todos los compuestos según la invención estaban modificados en el esqueleto de fosforotioato.

[0088] Todas las fosforamiditas de nucleósidos se caracterizaron mediante espectros de ³¹P y 1H RMN. Los nucleósidos modificados se incorporaron en sitios específicos utilizando ciclos de acoplamiento normales recomendados por el proveedor. Después de la síntesis, los compuestos se desprotegieron utilizando hidróxido de amonio concentrado y se purificaron mediante HPLC de fase inversa, destritilación, seguido de diálisis. Los compuestos purificados en forma de sal de sodio se liofilizaron antes de su uso. La pureza fue probada por CGE y MALDI-TOF MS. Los niveles de endotoxina se determinaron mediante la prueba LAL y estaban por debajo de 1,0 UE/mg.

Ejemplo 2: Inyección intratumoral de agonista de TLR9 en comparación con la administración subcutánea en un modelo de linfoma A20

[0089] Se implantaron s.c. en ratones BALB/c (n=10) 3 X 106 células A20 en el flanco derecho. El tratamiento se inició el día 8 con una inyección intratumoral (i.t.) o subcutánea (s.c.) de 2,5 mg/kg de IMO-4. Se administró IMO-4 los días 8, 10, 12 y 14. Se recolectaron muestras de control con placebo (PBS) y ratones portadores de tumores tratados con IMO-4 el día 21 después de la implantación del tumor. Como se muestra en las Figuras 3A y 3B, IMO-4 intratumoral indujo una potente actividad antitumoral e infiltración de LIT CD3+. IMO-4 intratumoral también moduló la expresión del punto de control tumoral en comparación con la administración subcutánea, sensibilizando así el microambiente tumoral para la combinación con uno o más inhibidores del punto de control (datos no mostrados).

Ejemplo 3: Inyección intratumoral de agonista de TLR9 en un modelo de linfoma A20

[0090] Se implantaron s.c. ratones BALB/c (n=10) con 3 X 106 células CT26 en el flanco derecho e izquierdo. El tratamiento se inició el día 8 con inyección intratumoral en el flanco izquierdo con 2,5 mg/kg de IMO-4. Se administró IMO-4 los días 8, 10, 12 y 14. Se recolectaron muestras de control con placebo (PBS) y ratones portadores de tumores tratados con IMO-4 el día 21 después de la implantación del tumor. Como se muestra en la Figura 4, la IMO-4 intratumoral indujo una potente actividad antitumoral en los nódulos tumorales tanto tratados como distantes. IMO-4 intratumoral también moduló la expresión del punto de control tumoral sensibilizando así el microambiente tumoral para la combinación con uno o más inhibidores del punto de control (datos no mostrados).

Ejemplo 4: Inyección intratumoral de agonista de TLR9 en un modelo de carcinoma de colon CT26

[0091] Se implantaron s.c. ratones BALB/c (n=9) con 2 X 106 células CT26 en el flanco derecho e izquierdo. El tratamiento se inició el día 7 con inyección intratumoral en el flanco izquierdo con 2,5 mg/kg de IMO-4. Se administró IMO-4 los días 1, 9, 11, 13 y 15. Se recolectaron muestras de control con placebo (PBS) y ratones portadores de tumores tratados con IMO-4 el día 27 después de la implantación del tumor. Como se muestra en la Figura 5, la IMO-4 intratumoral indujo una potente actividad antitumoral en los nódulos tumorales tanto tratados como distantes. La IMO-4 intratumoral también moduló la expresión del punto de control tumoral sensibilizando así el microambiente tumoral para la combinación con uno o más inhibidores del punto de control (datos no mostrados).

Ejemplo 5: Inyección intratumoral de agonista de TLR9 en un modelo de melanoma B16

[0092] Se implantaron s.c. ratones BALB/c (n=9) con 1 X 106 Células B16 en flanco derecho e izquierdo. El tratamiento se inició el día 7 con inyección intratumoral en el flanco izquierdo de 2,5 mg/kg de IMO-4. Se administró IMO-4 los días 7, 9, 11, 13 y 15. Se recogieron muestras de control con placebo (PBS) y ratones portadores de tumores tratados con IMO-4 el día 22 después de la implantación del tumor. Como se muestra en la Figura 6, la IMO-4 intratumoral indujo una potente actividad antitumoral en los nódulos tumorales tanto tratados como distantes. La IMO-4 intratumoral también moduló la expresión del punto de control tumoral sensibilizando así el microambiente tumoral para la combinación con uno o más inhibidores del punto de control (datos no mostrados).

Ejemplo 6: Terapia de combinación de agonista de TLR9 e inhibidor de puntos de control en tumores tratados y metástasis de pulmón

[0093] Se implantaron s.c. ratones BALB/c con 2 X 107 células CT26 en el flanco derecho. Los ratones fueron luego inyectados i.v. con 3 X 106 células CT26 para establecer metástasis pulmonares. El tratamiento se inició el día 5. Se administraron intratumoralmente 2,5 mg/kg de IMO-4 en tumores sólidos CT26 en el flanco derecho y se administraron 10 mg/kg de mAb anti-CTLA-4 mediante inyección interperitoneal (i.p.). IMO-4 y anti-CTLA4 mAb se administraron solos o se coadministraron los días 5, 6, 8 y 9. Se recogieron pulmones y células T de bazos de ratones portadores de tumores tratados con control PBS, IMO-4, anti-CTLA-4 mAb o IMO-4 y anti-CTLA-4 mAb. Las Figuras 7 a 9 muestran los efectos de IMO-4 y mAb anti-CTLA-4 en tumores tratados directamente y metástasis pulmonar sistémica.

[0094] Como se muestra en las Figuras 7 y 8, la terapia de combinación de IMO-4 y mAb anti-CTLA4 resultó en una mejor inhibición del crecimiento tumoral frente a IMO-4 o mAb anti-CTLA4 solos. Como se muestra en la Figura 9, los linfocitos T citotóxicos contra p-gal presentados en los sitios de metástasis pulmonar sistémica aumentaron drásticamente (p<0,01) en comparación con cualquiera de las dos monoterapias solas.

Ejemplo 7: Terapia combinada de agonista de TLR9 e inhibidor de puntos de control en tumores tratados y distantes

[0095] Se implantaron s.c. ratones BALB/c (n=8 por grupo) con 1 X 107 células CT26 de carcinoma de colon murino en el flanco derecho (Tumor 1) y flanco izquierdo (Tumor 2). El tratamiento se inició el día 7 cuando el volumen del tumor alcanza 200 a 300 mm3. Se inyectaron 2,5 mg/kg de IMO-4 (50 mg en 100 pl de PBS) en los nódulos tumorales derechos y se administró mAb anti-PD-1 (10 mg/kg, 200 pg/ratón) mediante inyección i.p. o solo o coadministrado los días 7, 8, 11 y 12 por un total de 4 veces. Los nódulos tumorales se recogieron el día 14.

[0096] Como se muestra en la Figura 10, las inyecciones intratumorales de IMO-4 más mAb anti-PD-1 en un solo tumor conducen a potentes efectos antitumorales tanto en tumores locales (Fig. 10A) como distantes. (Fig. 10B). La figura 11 demuestra que IMO-4 aumenta la infiltración de linfocitos T en los tejidos tumorales. Mientras que pocas células CD3+ están presentes en el tejido tumoral que bordea el tejido normal de ratones inyectados con PBS (vehículo), se presenta una gran cantidad de células CD+3 en el tejido tumoral de ratones tratados con IMO-4 o mAb anti-PD-1. Sin embargo, las células CD3+ más abundantes están presentes en tumores de ratones que reciben tratamiento combinado de IMO-4 y CTLA-4 mAb.

Ejemplo 8: Terapia de combinación de agonista de TLR9 e inhibidor de puntos de control en tumores tratados y metástasis pulmonares sistémicas

[0097] Se implantaron s.c. ratones BALB/c con 1 X 107 células B16.F10 en el flanco derecho. Los ratones fueron luego inyectados i.v. con 2 X 106 células B16.F10 para establecer metástasis pulmonar. El tratamiento se inició el día 5,5 mg/kg de IMO-4 se administraron intratumoralmente en tumores sólidos B16 en el flanco derecho y se administraron 15 mg/kg de mAb anti-PD-1 mediante inyección interperitoneal (i.p.). IMO-4 y mAb anti-PD-1 se administraron solos o se coadministraron los días 5, 6, 7, 8 y 9. Se recogieron muestras de ratones portadores de tumores tratados con control, IMO-4, mAb anti-PD-1 o IMO-4 y anti-PD-1 mAb. Las Figuras 12 y 13 muestran los efectos de IMO-4 y mAb anti-PD-1 en tumores tratados directamente y metástasis pulmonar sistémica.

Ejemplo 9: Terapia de combinación de agonista de TLR9 e inhibidor de puntos de control en tumores tratados y metástasis pulmonares sistémicas

[0098] Se implantaron ratones BALB/c s.c. con 1 X 107 células CT26 en el flanco derecho. Los ratones fueron luego inyectados i.v. con 3 X 106 células CT26 para establecer metástasis pulmonares. El tratamiento se inició el día 4. Se administraron 2,5 mg/kg de IMO-4 por vía intratumoral en tumores sólidos en el flanco derecho y 75 mg/kg de inhibidor anti-IDOl por vía oral (po). El IMO-4 y el inhibidor anti-IDOl se administraron solos o se coadministraron los días 4, 5, 7 y 8. El anti-IDOl se administró dos veces. Se recogieron muestras de ratones portadores de tumores tratados con IMO-4, inhibidor anti-IDOl o IMO-4 e inhibidor anti-IDOl. Las Figuras 14 a 17 muestran los efectos de IMO-4 y el inhibidor anti-IDOl en tumores tratados directamente y metástasis pulmonar sistémica.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Una composición para usar en el tratamiento de un tumor sólido en un paciente con cáncer metastásico, comprendiendo la composición:

un agonista de TLR9 que tiene la estructura 5'-TCG1AACG1TTCG1 -X-G1CTTG1CAAG1CT-5' (5'-SEQ ID NO:4-XSEQ ID NO:4-5'), donde G¹ es 2'-desoxi-7-desazaguanosina y X es un enlazador de glicerol; y

en el que la composición se coadministrará con un inhibidor dirigido a los puntos de control inmunitarios seleccionado del grupo que consiste en un mAb anti-PD1 (proteína de muerte celular programada 1) y un inhibidor de IDO-1 (indoleamina 2,3-dioxigenasa 1); y

en el que el agonista de TLR9 se va a administrar por vía intratumoral al tumor sólido.

2. La composición para el uso según la reivindicación 1, en la que el agonista de TLR9 y el inhibidor deben administrarse cada uno en una cantidad farmacéuticamente eficaz.

3. La composición para el uso según la reivindicación 2, en la que el agonista de TLR9 se va a administrar antes de que se administre el inhibidor al paciente.

4. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el cáncer metastásico se selecciona del grupo que consiste en linfoma no Hodgkin, linfoma de células B, leucemia de células B, linfoma de células T, leucemia de células T, leucemia linfoide aguda, linfoma de células T crónica leucemia, linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, leucemia de células peludas, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, mieloma múltiple, glioma, macroglobulinemia de Waldenstrom, carcinoma, melanoma, sarcoma, glioma, cáncer de piel, cáncer de cavidad oral, cáncer del tracto gastrointestinal, cáncer de colon, cáncer de estómago, cáncer del tracto pulmonar, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de endometrio, cáncer de cuello uterino, cáncer de vejiga urinaria, cáncer de páncreas, cáncer de huesos, cáncer de hígado, cáncer de vesícula biliar, cáncer de riñón y cáncer testicular cáncer.

5. La composición para el uso según la reivindicación 4, en la que el cáncer metastásico es un melanoma.

6. La composición para el uso según la reivindicación 1, en la que el inhibidor es un inhibidor de IDO-1.

7. La composición para el uso según la reivindicación 6, en la que el agonista de TLR9 se va a administrar antes de que al paciente se le administre el inhibidor de IDO-1.

8. La composición para el uso según la reivindicación 1, en la que se va a administrar un agente anticanceroso adicional, en la que el agente anticanceroso adicional se selecciona entre un agente quimioterapéutico o radioterapia.

9. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el inhibidor se va a administrar por vía parenteral o intratumoral.