CN106754498A - 一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用 - Google Patents

一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106754498A
CN106754498A CN201611136508.XA CN201611136508A CN106754498A CN 106754498 A CN106754498 A CN 106754498A CN 201611136508 A CN201611136508 A CN 201611136508A CN 106754498 A CN106754498 A CN 106754498A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus
microbial inoculum
shi
shi bacillus
active component
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611136508.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN106754498B (zh
Inventor
夏振远
雷丽萍
吴玉萍
莫笑晗
师君丽
马雁军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Original Assignee
Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences filed Critical Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Priority to CN201611136508.XA priority Critical patent/CN106754498B/zh
Publication of CN106754498A publication Critical patent/CN106754498A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106754498B publication Critical patent/CN106754498B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/32—Ingredients for reducing the noxious effect of the active substances to organisms other than pests, e.g. toxicity reducing compositions, self-destructing compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Abstract

本发明公开了一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用，所述的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104为高效氯氰菊酯降解菌，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2015年12月15日，保藏编号：CGMCC No. 11664；所述阿氏芽孢杆菌属于细菌界，厚壁菌门门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂是以所述阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104经活化培养、发酵培养后制成的菌剂。制备方法包括活化培养和发酵培养步骤；所述的菌剂在制备降解高效氯氰菊酯药物中的应用。本发明菌株的菌剂制备工艺简单，成本低廉，使用方便，具有很好的应用前景。

Description

一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用。
背景技术
拟除虫菊酯类杀虫剂属第三代农药，是模仿天然除虫菊酯的化学结构的而人工合成的一类杀虫剂。经过对天然除虫菊酯结构的不断修饰和改造，目前已开发了 50 多种商品化的拟除虫菊酯类农药，其中主要有氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、联苯菊酯、功夫菊酯、氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯等拟除虫菊酯类农药。由于拟除虫菊酯类人工合成的农药因其对环境相对友好，具有杀虫谱广、药效高，对哺乳动物安全性高，这样使得菊酯类杀虫剂在卫生和农用方面迅速扩大了施用面积。随着传统的有机氯、有机磷等毒性高、降解慢的农药的禁用，拟除虫菊酯类农药成为现今我国施用面积最为广泛的农药之一。高效氯氰菊酯是拟除虫菊酯类杀虫剂中的一种，常用于烟草上的害虫控制，具有胃毒和触杀作用，虽然对作物安全，但是它们对人、畜有中等毒性，对水生生物、蜜蜂、家蚕高毒。随着该类农药使用量的增加，环境中的拟除虫菊酯类农药残留不断积累，对生态环境造成了污染，直接影响了农产品的质量和食品安全。对于环境中的农药残留的解决，可以采用禁用、物化方法和生物修复方法，物化方法工程大、费用高、副作用大、易引起二次污染、而且解决不彻底，生物修复方法具有高效、安全、成本低、无二次污染、应用范围广等优势，主要有动植物修复、微生物修复、根际环境的生物降解。微生物降解是消除农药污染的一种重要手段,它具有成本低、效率高、无二次污染等优点。国内外研究最多的就是利用微生物降解修复环境中的农药残留。迄今，已经筛选到多株氯氰菊酯降解菌。但是，关于利用高效氯氰菊酯降解菌降解烟叶上高效氯氰菊酯的报道则很少见到。
发明内容
本发明第一目的在于提供一种阿氏芽孢杆菌，第二目的在于提供一种以所述阿氏芽孢杆菌作为活性成分的菌剂，第三目的在于提供所述以阿氏芽孢杆菌作为活性成分的菌剂制备方法，第四目的在于提供所述以阿氏芽孢杆菌作为活性成分的菌剂的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104为高效氯氰菊酯降解菌，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2015年12月15日，保藏编号：CGMCC No. 11664；所述阿氏芽孢杆菌属于细菌界，厚壁菌门门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。
——阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104的获得与鉴定
（1）阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104的获得与鉴定
本发明所述的阿氏芽孢杆菌，是从烟草叶片中分离得到。烟叶样品采自云南省玉溪市红塔区，取1g烟叶样品置于250ml锥形瓶中，加入100ml富集培养液，振荡培养(28℃，150rpm)5天，取5ml上层浊液于新鲜的富集培养液中，继续黑暗振荡培养(28℃，150rpm)5天，重复上述操作过程3次，每次培养的接种物均取自于上次培养所得的培养液。
取最后一次培养所得的培养液少许进行梯度稀释，取稀释后的培养液200μl涂布于含100mg/L高效氯氰菊酯的LB固体平板上，置于恒温培养箱(28℃)中培养，待平板上长出菌落后，挑取各菌落于含100mg/L高效氯氰菊酯的LB固体平板上反复纯化，直至菌落单一，将纯化后的各菌落分别接至LB液体试管中振荡培养(28℃，150rpm)过夜，将培养好的菌液离心后接至富集培养液中培养一周，通过高效液相色谱法(HPLC)检测各富集培养液中高效氯氰菊酯残留量，最后筛选获得一株能降解高效氯氰菊酯的菌株，命名为BC104。
菌株鉴定：
将上述获得的菌株进行生化特征和分子生物学鉴定。该菌株的主要生物学特征为：革兰氏染色反应阴性，菌体短杆状，有鞭毛，无芽孢，大小为(0.6μm～1.2μm)×(1.0μm～2.0μm)，菌落表面平坦湿润，接触酶阳性，氧化酶、磷酸酶、酯酶、半乳糖苷酶等阳性，胰蛋白酶、芳胺酶等阴性，能利用β-环糊精、淀粉、葡萄糖、吐温40，不能利用乙酸盐、柠檬酸盐、山梨醇、鼠李糖，甲基红试验阴性。该菌株经16S rDNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的阿氏芽孢杆菌（Bacillus aryabhattai）。
表1 BC104菌株生化特征测定
表1中，“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应。
（2）阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104的保藏
通过上述鉴定结果，确认菌株BC104为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)的一个株系，命名为BC104，于2015年12月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100080），其保藏编号：CGMCC No. 11664。
本发明的第二目的是这样实现的，是以所述阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104经活化培养、发酵培养后制成的菌剂。
本发明的第三目的是这样实现的，包括活化培养、发酵培养步骤，具体包括：
A、活化培养：将阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104接种到无机盐培养液中，于温度25~35℃、震荡频率100~250rpm的条件下震荡培养12~24h得到液体发酵种子；
B、发酵培养：将液体发酵种子按培养基体积1~10%的量接种入发酵罐，在25~35℃下培养24~48h，搅拌速度为100~300rpm，空气流量为0.1~1.0vvm，得到阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104发酵液；
C、将阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104发酵液离心、弃上清，用10~100倍的PH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮得到目标物阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂。
本发明的第四目的是这样实现的，所述的菌剂在制备降解高效氯氰菊酯药物中的应用。
本发明菌种对高浓度的高效氯氰菊酯具有一定的降解能力，在纯培养条件下对50mg/L的高效氯氰菊酯的降解率达95.4%，BC104菌剂对烟叶上残留的高效氯氰菊酯降解率为47.3%。该降解菌可通过直接喷雾的方式应用于烟叶表面残留的高效氯氰菊酯的降解，能安全、高效、快速的降解烟叶上残留的高效氯氰菊酯，含有该菌株的菌剂制备工艺简单，成本低廉，使用方便，具有很好的应用前景。
除非另有说明外，本发明中所采用的百分数均为体积百分数。
附图说明
图1为本发明阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104在LB培养基的菌落特征示意图；
图2为本发明阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104对高效氯氰菊酯的降解曲线示意图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明所述的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104为高效氯氰菊酯降解菌，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2015年12月15日，保藏编号：CGMCC No. 11664；所述阿氏芽孢杆菌属于细菌界，厚壁菌门门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。
所述的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104的生物学特征为：革兰氏染色反应阴性，菌体短杆状，有鞭毛，无芽孢，大小为(0.6μm～1.2μm)×(1.0μm～2.0μm)，菌落表面平坦湿润，接触酶阳性，氧化酶、磷酸酶、酯酶、半乳糖苷酶等阳性，胰蛋白酶、芳胺酶等阴性，能利用β-环糊精、淀粉、葡萄糖、吐温40，不能利用乙酸盐、柠檬酸盐、山梨醇、鼠李糖，甲基红试验阴性。
本发明所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂，是以所述阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104经活化培养、发酵培养后制成的菌剂。
本发明所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的制备方法，包括活化培养、发酵培养步骤，具体包括：
A、活化培养：将阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104接种到无机盐培养液中，于温度25~35℃、震荡频率100~250rpm的条件下震荡培养12~24h得到液体发酵种子；
B、发酵培养：将液体发酵种子按培养基体积1~10%的量接种入发酵罐，在25~35℃下培养24~48h，搅拌速度为100~300rpm，空气流量为0.1~1.0vvm，得到阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104发酵液；
C、将阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104发酵液离心、弃上清，用10~100倍的PH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮得到目标物阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂。
所述的A步骤中无机盐培养液的为NaCl 1g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，(NH4)2SO42.0g，MgSO4 0.1g，1ml微量元素溶液，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌后制得，所述的微量元素溶液的配方方法为：1L微量元素溶液按如下组成配制：MnSO4·H2O 0.1g，ZnCl2 0.2g，CuSO4·H2O 0.02g，Na2MoO4·2H2O 0.1g，用蒸馏水补足至1000ml。
所述的B步骤中所述的培养基为LB液体培养基，是以酵母粉10g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌后制得。
所述的C步骤中离心的转速为5000~7000rpm/min，离心时间为2~4min。
所述的PH值为7.0的磷酸缓冲液是取0.2mol/L的磷酸二氢钠39ml和0.2mol/L的磷酸氢二钠61ml，用超纯水定容至1000ml，高压蒸汽灭菌后即得。
本发明所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的应用为所述的菌剂在制备降解高效氯氰菊酯药物中的应用。
下面以具体实施例对本发明做进一步说明：
实施例1
菌株的筛选与鉴定
培养基：
无机盐培养基：NaCl 1g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，(NH4)2SO42.0g，MgSO4 0.1g，1ml微量元素溶液(1L微量元素溶液按如下组成配制：MnSO4·H2O 0.1g，ZnCl2 0.2g，CuSO4·H2O0.02g，Na2MoO4·2H2O 0.1g，用蒸馏水补足至1000ml)，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌(121℃，30min)后制得。
富集培养液：在无机盐培养液中加入高效氯氰菊酯溶液，使得高效氯氰菊酯浓度为50mg/L。
LB液体培养基：酵母粉10g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌(121℃，30min)后制得。
LB固体培养基：酵母粉10g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，琼脂15.0g，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌(121℃，30min)后制得。
菌株分离纯化：
烟叶样品采自云南省玉溪市红塔区，取1g烟叶样品置于250ml锥形瓶中，加入100ml富集培养液，振荡培养(28℃，150rpm)5天，取5ml上层浊液于新鲜的富集培养液中，继续黑暗振荡培养(28℃，150rpm)5天，重复上述操作过程3次，每次培养的接种物均取自于上次培养所得的培养液。
取最后一次培养所得的培养液少许进行梯度稀释，取稀释后的培养液200μl涂布于含100mg/L高效氯氰菊酯的LB固体平板上，置于恒温培养箱(28℃)中培养，待平板上长出菌落后，挑取各菌落于含100mg/L高效氯氰菊酯的LB固体平板上反复纯化，直至菌落单一，将纯化后的各菌落分别接至LB液体试管中振荡培养(28℃，150rpm)过夜，将培养好的菌液离心后接至富集培养液中培养一周，通过高效液相色谱法(HPLC)检测各富集培养液中高效氯氰菊酯残留量，最后筛选获得一株能降解高效氯氰菊酯的菌株，命名为BC104。
菌株鉴定：
将上述获得的菌株进行生化特征和分子生物学鉴定。该菌株的主要生物学特征为：革兰氏染色反应阴性，菌体短杆状，有鞭毛，无芽孢，大小为(0.6μm～1.2μm)×(1.0μm～2.0μm)，菌落表面平坦湿润，接触酶阳性，氧化酶、磷酸酶、酯酶、半乳糖苷酶等阳性，胰蛋白酶、芳胺酶等阴性，能利用β-环糊精、淀粉、葡萄糖、吐温40，不能利用乙酸盐、柠檬酸盐、山梨醇、鼠李糖，甲基红试验阴性。该菌株经16S rDNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的阿氏芽孢杆菌（Bacillus aryabhattai）。
表1 BC104菌株生化特征测定
表1中，“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应。
实施例2
菌剂制备
1、将保藏于液体试管中的菌种接种于无机盐培养液中活化培养2d；
2、将活化好的菌种接种于LB液体培养基中，30℃、150rpm振荡养至对数生长期；
3、将上述处于对数生长期的菌液进行离心3min(6000rpm)，弃上清，菌体用适量的PH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮，此即为菌剂。
pH为7.0的0.2mol/L的磷酸缓冲液的配方为：取0.2mol/L的磷酸二氢钠39ml和0.2mol/L的磷酸氢二钠61ml，用超纯水定容至1000ml，高压蒸汽灭菌(121℃、20min)后即得。
实施例3
高效氯氰菊酯液体降解实验
无机盐培养液中高效氯氰菊酯含量的检测：
在20 mL培养基中加20 mL二氯甲烷，剧烈震荡3 min后，静置分层，取有机相经无水Na2SO4脱水，然后准确的取1 mL有机相置于2 mL离心管在通风柜内挥发后，重新定溶到1mL色谱纯的正己烷中，气相色谱检测。检测条件如下：ECD检测器、SPB-5毛细管柱（30.0 mm×0.530 mm×1.5 µm），进样口温度260℃，柱温240℃，检测器温度300℃，载气为氮气，流速为1 mL/min。
高效氯氰菊酯降解实验
取100ml锥形瓶若干，均加入40ml无机盐培养基，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)后加入高效氯氰菊酯溶液，使其浓度均为50mg/L，取适量的高效氯氰菊酯降解菌菌种接种于此无机盐培养基中，相应的配置不含该菌种的作为空白对照，然后一同置于摇床(30℃，200rpm)中黑暗振荡培养。试验组与对照组均为15个重复，在培养时间为0、1、3、4、5d时定时取样，随机抽取三瓶，根据上述方法检测无机盐培养基中高效氯氰菊酯的残留量。
本发明菌株在纯培养条件下对不同浓度的高效氯氰菊酯的降解曲线如图2所示。观察图2，可以发现，培养4d后，本发明高效氯氰菊酯降解菌对50mg/L的高效氯氰菊酯的降解率为95.4％，所有未加菌的空白对照5d后的水解率均小于10％。
实施例4
烟叶上高效氯氰菊酯降解实验
菌体制备同实施例2。
烟草在田间旺长期喷施高效氯氰菊酯，喷施量为100克/亩。施药后7d 喷施BC104菌剂，以清水为对照，菌剂喷施7天后去烟叶样品进行高效氯氰菊酯残留量的测定。取烟叶20g，通过二氯甲烷提取，其他测定方法同实例3的方法。
对照的高效氯氰菊酯残留量为1.459μg/g，喷施BC104菌剂处理的高效氯氰菊酯残留量为0.769μg/g，BC104菌剂对烟叶上残留的高效氯氰菊酯降解率为47.3%。
实验结果表明该菌种对烟叶上残留的高效氯氰菊酯具有较高的降解能力，因此，该菌对烟叶上高效氯氰菊酯的降解具有一定的积极意义。

Claims (9)

1.一种阿氏芽孢杆菌，其特征在于所述的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104为高效氯氰菊酯降解菌，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2015年12月15日，保藏编号：CGMCC No. 11664；所述阿氏芽孢杆菌属于细菌界，厚壁菌门门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。
2.根据权利要求1所述的阿氏芽孢杆菌，其特征在于所述的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104的生物学特征为：革兰氏染色反应阴性，菌体短杆状，有鞭毛，无芽孢，大小为(0.6μm～1.2μm)×(1.0μm～2.0μm)，菌落表面平坦湿润，接触酶阳性，氧化酶、磷酸酶、酯酶、半乳糖苷酶等阳性，胰蛋白酶、芳胺酶等阴性，能利用β-环糊精、淀粉、葡萄糖、吐温40，不能利用乙酸盐、柠檬酸盐、山梨醇、鼠李糖，甲基红试验阴性。
3.一种权利要求1或2所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂，其特征在于是以所述阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104经活化培养、发酵培养后制成的菌剂。
4.一种权利要求3所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的制备方法，其特征在于包括活化培养、发酵培养步骤，具体包括：
A、活化培养：将阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104接种到无机盐培养液中，于温度25~35℃、震荡频率100~250rpm的条件下震荡培养12~24h得到液体发酵种子；
B、发酵培养：将液体发酵种子按培养基体积1~10%的量接种入发酵罐，在25~35℃下培养24~48h，搅拌速度为100~300rpm，空气流量为0.1~1.0vvm，得到阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104发酵液；
C、将阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)BC104发酵液离心、弃上清，用10~100倍的PH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮得到目标物阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂。
5.根据权利要求4所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的制备方法，其特征在于所述的A步骤中无机盐培养液的为NaCl 1g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，(NH4)2SO42.0g，MgSO40.1g，1ml微量元素溶液，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌后制得，所述的微量元素溶液的配方方法为：1L微量元素溶液按如下组成配制：MnSO4·H2O0.1g，ZnCl2 0.2g，CuSO4·H2O 0.02g，Na2MoO4·2H2O 0.1g，用蒸馏水补足至1000ml。
6.根据权利要求4所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的制备方法，其特征在于所述的B步骤中所述的培养基为LB液体培养基，是以酵母粉10g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，蒸馏水补足至1000ml，混合后搅拌均匀，自然pH值，高压蒸汽灭菌后制得。
7.根据权利要求4所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的制备方法，其特征在于所述的C步骤中离心的转速为5000~7000rpm/min，离心时间为2~4min。
8.根据权利要求4所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的制备方法，其特征在于所述的pH值为7.0的磷酸缓冲液是取0.2mol/L的磷酸二氢钠39ml和0.2mol/L的磷酸氢二钠61ml，用超纯水定容至1000ml，高压蒸汽灭菌后即得。
9.一种权利要求3所述的阿氏芽孢杆菌为活性成分的菌剂的应用，其特征在于所述的菌剂在制备降解高效氯氰菊酯药物中的应用。
CN201611136508.XA 2016-12-12 2016-12-12 一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用 Active CN106754498B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611136508.XA CN106754498B (zh) 2016-12-12 2016-12-12 一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611136508.XA CN106754498B (zh) 2016-12-12 2016-12-12 一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106754498A true CN106754498A (zh) 2017-05-31
CN106754498B CN106754498B (zh) 2020-03-20

Family

ID=58875571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611136508.XA Active CN106754498B (zh) 2016-12-12 2016-12-12 一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106754498B (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107189962A (zh) * 2017-06-21 2017-09-22 江苏南资环保股份有限公司 一种含氮杂环化合物降解菌及其应用
CN108102963A (zh) * 2017-12-28 2018-06-01 浙江大学 降解黄曲霉毒素b1的芽孢杆菌属菌株及其筛选和应用
CN108102958A (zh) * 2017-12-21 2018-06-01 山东省林业科学研究院 一株重盐碱地植物根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用
CN110468082A (zh) * 2019-09-19 2019-11-19 四川农业大学 一种阿氏芽孢杆菌ocb-6及其应用
CN111534472A (zh) * 2020-06-11 2020-08-14 浙江工业大学 阿耶波多氏芽孢杆菌wzz10及在2-四氢糠酸手性拆分中的应用
CN111560336A (zh) * 2020-06-11 2020-08-21 领先生物农业股份有限公司 一种高浓度阿氏芽孢杆菌菌剂的制备方法
CN111733120A (zh) * 2020-08-25 2020-10-02 鲁东大学 一株阿氏芽孢杆菌及其在西洋参病害防治中的应用
CN112410244A (zh) * 2020-09-30 2021-02-26 山东农业大学 一种阿氏芽孢杆菌及其应用
CN113801816A (zh) * 2021-09-18 2021-12-17 江苏省农业科学院 一株芽孢杆菌及其在促生与降解水稻中毒死蜱的应用
CN115074272A (zh) * 2022-06-10 2022-09-20 广西科学院 一种生物脱硫的阿氏芽孢杆菌及其应用
CN115287228A (zh) * 2022-08-03 2022-11-04 王丽 基于阿氏芽孢杆菌和肾形虫的复合生物菌剂及其应用
CN116478879A (zh) * 2023-04-11 2023-07-25 中国水产科学研究院 一种用于降解除虫脲的菌株及其应用
CN116574642A (zh) * 2023-04-19 2023-08-11 吉林农业大学 一种阿氏普里斯特氏菌yz-151发酵制剂及其制备方法和应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110102787A (ko) * 2010-03-11 2011-09-19 강원대학교산학협력단 식물생장 촉진 활성을 갖는 신균주 바실러스 아리아바타이 ｌｓ9 및 이의 용도
KR20130096879A (ko) * 2012-02-23 2013-09-02 이기성 불용성염 가용화 활성이 있는 신규 균주 바실러스 아리압하타이 엘케이에스28
CN103614319A (zh) * 2013-11-12 2014-03-05 云南省烟草公司曲靖市公司 阿氏芽孢杆菌及其在防治烟草黑胫病中的应用
CN103911321A (zh) * 2014-03-14 2014-07-09 宁波大学 海水环境中氯氰菊酯和/或溴氰菊酯降解菌及其分离纯化和应用
CN103952349A (zh) * 2014-04-24 2014-07-30 烟台地元生物科技有限公司 阿氏芽孢杆菌及微生物菌剂和它们的应用
WO2014145883A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Spogen Biotech Inc. Plant growth-promoting bacteria and methods of use
CN104371954A (zh) * 2014-10-21 2015-02-25 福州大学 一株芽孢杆菌及其菌剂的制备方法
CN104446329A (zh) * 2014-11-14 2015-03-25 中国科学院新疆生态与地理研究所 一种细菌固化尾矿及控制重金属淋溶方法
CN105039197A (zh) * 2015-06-03 2015-11-11 哈尔滨工业大学（威海） 一株抑制黄曲霉毒素的深海阿氏芽孢杆菌

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110102787A (ko) * 2010-03-11 2011-09-19 강원대학교산학협력단 식물생장 촉진 활성을 갖는 신균주 바실러스 아리아바타이 ｌｓ9 및 이의 용도
KR20130096879A (ko) * 2012-02-23 2013-09-02 이기성 불용성염 가용화 활성이 있는 신규 균주 바실러스 아리압하타이 엘케이에스28
WO2014145883A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Spogen Biotech Inc. Plant growth-promoting bacteria and methods of use
CN103614319A (zh) * 2013-11-12 2014-03-05 云南省烟草公司曲靖市公司 阿氏芽孢杆菌及其在防治烟草黑胫病中的应用
CN103911321A (zh) * 2014-03-14 2014-07-09 宁波大学 海水环境中氯氰菊酯和/或溴氰菊酯降解菌及其分离纯化和应用
CN103952349A (zh) * 2014-04-24 2014-07-30 烟台地元生物科技有限公司 阿氏芽孢杆菌及微生物菌剂和它们的应用
CN104371954A (zh) * 2014-10-21 2015-02-25 福州大学 一株芽孢杆菌及其菌剂的制备方法
CN104446329A (zh) * 2014-11-14 2015-03-25 中国科学院新疆生态与地理研究所 一种细菌固化尾矿及控制重金属淋溶方法
CN105039197A (zh) * 2015-06-03 2015-11-11 哈尔滨工业大学（威海） 一株抑制黄曲霉毒素的深海阿氏芽孢杆菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUIP ING HU ET AL.: "Isolation of an Indigenous Imidacloprid-Degrading Bacterium and Imidacloprid Bioremediation Under Simulated In Situ and Ex Situ Conditions", 《J MICROBIOL BIOTECHNOL》 *
于晓菲 等: "高效氯氰菊酯降解菌的筛选及其降解特性", 《大连工业大学学报》 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107189962A (zh) * 2017-06-21 2017-09-22 江苏南资环保股份有限公司 一种含氮杂环化合物降解菌及其应用
CN108102958A (zh) * 2017-12-21 2018-06-01 山东省林业科学研究院 一株重盐碱地植物根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用
CN108102958B (zh) * 2017-12-21 2020-05-22 山东省林业科学研究院 一株重盐碱地植物根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用
CN108102963A (zh) * 2017-12-28 2018-06-01 浙江大学 降解黄曲霉毒素b1的芽孢杆菌属菌株及其筛选和应用
CN110468082A (zh) * 2019-09-19 2019-11-19 四川农业大学 一种阿氏芽孢杆菌ocb-6及其应用
CN111560336B (zh) * 2020-06-11 2023-03-24 领先生物农业股份有限公司 一种高浓度阿氏芽孢杆菌菌剂的制备方法
CN111534472A (zh) * 2020-06-11 2020-08-14 浙江工业大学 阿耶波多氏芽孢杆菌wzz10及在2-四氢糠酸手性拆分中的应用
CN111560336A (zh) * 2020-06-11 2020-08-21 领先生物农业股份有限公司 一种高浓度阿氏芽孢杆菌菌剂的制备方法
CN111733120A (zh) * 2020-08-25 2020-10-02 鲁东大学 一株阿氏芽孢杆菌及其在西洋参病害防治中的应用
CN111733120B (zh) * 2020-08-25 2020-11-24 鲁东大学 一株阿氏芽孢杆菌及其在西洋参病害防治中的应用
CN112410244A (zh) * 2020-09-30 2021-02-26 山东农业大学 一种阿氏芽孢杆菌及其应用
CN112410244B (zh) * 2020-09-30 2022-04-05 山东农业大学 一种阿氏芽孢杆菌及其应用
CN113801816B (zh) * 2021-09-18 2023-01-03 江苏省农业科学院 一株芽孢杆菌及其在促生与降解水稻中毒死蜱的应用
CN113801816A (zh) * 2021-09-18 2021-12-17 江苏省农业科学院 一株芽孢杆菌及其在促生与降解水稻中毒死蜱的应用
CN115074272A (zh) * 2022-06-10 2022-09-20 广西科学院 一种生物脱硫的阿氏芽孢杆菌及其应用
CN115074272B (zh) * 2022-06-10 2023-03-24 广西科学院 一种生物脱硫的阿氏芽孢杆菌及其应用
CN115287228A (zh) * 2022-08-03 2022-11-04 王丽 基于阿氏芽孢杆菌和肾形虫的复合生物菌剂及其应用
CN115287228B (zh) * 2022-08-03 2024-04-30 哈尔滨师范大学 基于阿氏芽孢杆菌和肾形虫的复合生物菌剂及其应用
CN116478879A (zh) * 2023-04-11 2023-07-25 中国水产科学研究院 一种用于降解除虫脲的菌株及其应用
CN116478879B (zh) * 2023-04-11 2024-02-06 中国水产科学研究院 一种用于降解除虫脲的菌株及其应用
CN116574642A (zh) * 2023-04-19 2023-08-11 吉林农业大学 一种阿氏普里斯特氏菌yz-151发酵制剂及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN106754498B (zh) 2020-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106754498A (zh) 一种阿氏芽孢杆菌及其菌剂和制备方法与应用
CN107988096A (zh) 一种多功能微生物土壤修复剂及其制备与应用
CN102757915B (zh) 一种氯代乙酰胺类除草剂降解菌及其生产的菌剂和应用
US20140329677A1 (en) Biological product for clearing of water, industrial wastewater and soil from chemicals, which are resistant to degradation and method for using the same
CN103396971B (zh) 一株洋葱伯克霍尔德菌及其应用
CN101139559A (zh) 一株高效降解菊酯类及有机磷农药的新菌株及其用途
CN107058177A (zh) 一种热反硝化地芽孢杆菌菌株tb62及其在促进堆肥腐熟中的应用
CN106434470A (zh) 一种多环芳烃降解菌及其应用
CN113215028A (zh) 一种微生物菌组及其微生物菌剂和应用
CN107541479B (zh) 一种杀虫剂右旋苯醚菊酯降解菌株及其菌剂和降解工艺
CN111286475B (zh) 一种拟除虫菊酯类杀虫剂残留降解菌株及其应用
CN107287137A (zh) 一株农药残留广谱降解菌株ds3及其生产的菌剂和应用
CN106978367A (zh) 一种脲芽孢杆菌菌株tb42及其在促进堆肥腐熟中的应用
CN102154103A (zh) 一种广谱降解有机磷杀虫剂的细菌复合菌剂及其制备方法
CN110591979A (zh) 农药氧化乐果降解微生物复合菌剂及其制备方法
CN105238729B (zh) 一种苍白杆菌及其生物制剂和制备方法与应用
CN105112325A (zh) 高效降解烯酰吗啉的蜡状芽孢杆菌菌株wl08及其应用及使用方法
CN104120100B (zh) 一株内生巨大芽孢杆菌及其在修复二氯喹啉酸药害中的应用
CN109553478A (zh) 一种利用油菜秸秆开发油菜专用生防功能的生物有机肥及其制备方法
CN105617430A (zh) 一种有机废弃物除臭剂及其制备方法
CN101401991A (zh) 产气肠杆菌在降解拟除虫菊酯类农药残留中的应用及制剂
CN109306336B (zh) 以群体感应信号分子AHLs为靶标的病害防治菌株及其应用
CN115340966B (zh) 一种戈登氏菌及其应用
CN101434923A (zh) 缺陷假单胞菌在降解拟除虫菊酯类农药残留的应用及制剂
CN103911319B (zh) 菊酯类农药降解菌株及其菌剂和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant