CN105886434A - 一株嗜热链球菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一株嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR‑333菌株及其应用，从自然发酵牛乳中分离得到，其保藏编号为CGMCC 10262。该嗜热链球菌AR‑333在40℃条件下用脱脂乳发酵16h，胞外黏多糖产量达到256.97mg/L；同时，该嗜热链球菌作为酸奶发酵剂，可以显著提高酸奶粘度，改善酸奶的组织状态，具有良好的风味，并且其产生的胞外黏多糖具有调节免疫活性的功能，可以刺激巨噬细胞RAW264.7释放NO。

Description

一株嗜热链球菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一株嗜热链球菌及其在制备发酵乳或奶酪以及胞外多糖提取中的应用。
背景技术
胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)是由一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、分泌到环境中的水溶性多糖。这种微生物多糖生产周期短，不受季节、地域和病虫害条件限制，相对于植物多糖，具有较强的市场竞争力和广阔的发展前景。
嗜热链球菌属于这类微生物。嗜热链球菌属于乳酸菌(LAB)，是食品级工业生产菌，其分泌的EPS在乳制品行业被公认绿色、安全，可以直接被应用到发酵食品中，节约工业成本。
乳业发达的西方国家对嗜热链球菌浓缩型乳酸菌发酵剂的研制，目前已实现商业化生产。而国内对嗜热链球菌发酵剂制备不完善、菌株活力差、胞外多糖产量低等问题导致产业化应用程度不高。随着我国乳品工业化的发展，对嗜热链球菌发酵剂的需求将日渐增大，其应用前景广阔。有关高产多糖嗜热链球菌优良菌株的快速筛选等相关研究成为研究的热点，具有非常重要的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明针对现有技术中嗜热链球菌发酵剂制备不完善、菌株活力 差、胞外多糖产量低的问题，提供一株能够解决上述问题的嗜热链球菌及其应用。本发明的嗜热链球菌的第一应用是将其作为发酵剂，用于制备发酵乳或奶酪；本发明的第二个应用是将其作为提取胞外多糖的原料，从嗜热链球菌的发酵液中提取胞外多糖。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明提供了一株嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株，已保藏于中国普通微生物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.10262。
进一步的，本发明提供了嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株的筛选方法，具有这样的特征，包括以下步骤：步骤1，采集自然发酵的乳制品，采用浓度梯度稀释法进行稀释，取一定量的稀释液涂布于脱脂乳琼脂培养基平板上，35～42℃厌氧培养40～56h，挑选菌落大、生长快、挑丝粘度大的菌株进行划线分离纯化，得到分离菌株；步骤2，将步骤1中的挑丝粘度大的分离菌株接种至脱脂乳液体培养基中，35～42℃静置培养8～12h，制备成种子液；步骤3，将步骤2中的种子液按照一定的接种量接入灭好菌的脱脂乳液体培养基中，35～42℃静置培养40～56h，通过测定发酵液中胞外黏多糖的含量，进行初步筛选，得到初步筛选菌株；步骤4，将步骤3中得到的初步筛选菌株分别接入脱脂乳培养基，发酵后离心取上清液，通过测量上清液的表观黏度对初步筛选菌株进行复筛，选取表观黏度最大的菌株，得到AR-333菌株。
进一步的，本发明还提供了一种嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株在制备发酵乳或奶酪中的用途。
采用嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株作为发酵剂进行发酵乳的制备的方法，包括以下步骤：步骤1，将嗜热链球菌AR-333菌株进行活化，得到活化菌种；步骤2，将活化菌种以质量体积比为3-5％的接种量接种于新鲜牛乳中，40～42℃静置发酵至凝乳，冷却后放入2～6℃冰箱进行后熟15-20h，得到发酵乳。其中，步骤1中的活化的方法是：将保藏于脱脂牛乳培养基中的嗜热链球菌AR-333，按质量体积比为3～5％的接种量接入灭菌脱脂牛乳培养基中，35～42℃静置培养8～16h，进行活化。
进一步的，本发明还提供了一种采用嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株作为发酵剂进行发酵乳的制备的方法，包括以下步骤：步骤1，将嗜热链球菌AR-333菌株进行活化，得到活化菌种；步骤2，将活化菌种以质量体积比为1-4％的接种量接种于32℃的无菌新鲜牛乳中，当牛乳pH降低至0.2之后，加入质量体积比为0.01～0.03％的凝乳酶，凝乳后进行切割排乳清；步骤3，向步骤2中排好乳清的凝乳中加入一定量的盐，搅拌均匀后入模，成型后切割并喷洒红曲霉发酵剂，在15℃、湿度95％的条件下成熟8-15d，得到奶酪。
进一步的，本发明还提供了一种嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株作为提取胞外多糖的原料的用途。采用嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)AR-333菌株作为原料，从中提取胞外多糖的方法，包括以下步骤：步骤1，制备嗜热链球菌AR-333 菌株发酵液；步骤2，将发酵液煮沸后离心去除菌体以及凝结蛋白，得到第一上清液；步骤3，将第一上清液浓缩至原体积的1/3，采用三氯乙酸法除去第一上清液中沉淀蛋白，得到第二上清液；采用醇沉淀法沉淀第二上清液，得到上清液沉淀；步骤4，将上清液沉淀溶解于去离子水后离心取上清液，该上清液用去离子水透析72～80h，每隔一段时间换水一次，得到胞外多糖。
其中，在步骤1中，制备嗜热链球菌AR-333菌株发酵液的方法包括以下子步骤；子步骤1-1，菌种活化：将嗜热链球菌AR-333菌株接种于脱脂乳培养液中，在35～42℃条件下培养8～16h进行活化，得到活化菌种；子步骤1-2，将活化菌种接种于脱脂乳培养液中，在35～42℃条件下培养8～16h，用作种子液；子步骤1-3，将种子液以体积比为3～5％的接种量接种于脱脂乳培养液中，在40～42℃条件下培养40h，得到嗜热链球菌AR-333菌株发酵液。
在步骤3中，三氯乙酸法是在第一上清液中添加三氯乙酸至三氯乙酸的终浓度为4～6％(w/v)，静置12～24h，而后4℃、10000g、离心20～30min，除去沉淀蛋白；醇沉淀法是向第二上清液中加无水乙醇至乙醇体积百分比为65～75％，4℃静置8～15h，而后4℃、9000g、离心20～30min取沉淀。
发明作用与效果
本发明所提供嗜热链球菌AR-333菌株产生胞外多糖的能力显著，其胞外黏多糖产量为256.97mg/L，不仅能够显著改善酸奶的组 织状态等质构特性，减少乳清析出，而且使得产品无需添加稳定剂就能够满足粘稠度的要求以及消费者对无添加酸奶的需求。
另外，本发明所提供的嗜热链球菌AR-333菌株的筛选及EPS提取的过程简单，有利于大规模工业化应用的实现。
附图说明
图1是本发明的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株的菌落图；
图2是本发明的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株的胞外多糖的产量曲线图；
图3是本发明的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株所产多糖对RAW264.7巨噬细胞释放NO活性的影响结果图。
具体实施方式
以下结合附图来说明本发明的具体实施方式。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。
实施实例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例中所用到的培养基的制备方法如下：
脱脂乳培养液：脱脂乳粉120g/L，115℃灭菌15min。
脱脂乳培养基：脱脂乳粉120g/L，细菌琼脂粉20g/L，115℃灭菌15min。
实施例一、嗜热链球菌AR-333菌株的筛选与鉴定
1.样品稀释液制备及菌株分离
采集自然发酵的乳制品1g加入15mL无菌水，剧烈震荡10min。采用浓度梯度稀释法进行稀释，取稀释液100uL涂布于脱脂乳琼脂培养基平板上，35～42℃厌氧培养40～56h，挑选菌落大、生长快、挑丝粘度大的菌株，进一步划线分离纯化。本实施例中，优选的培养温度为42℃，优选的厌氧培养时间为48h。
2.菌株初筛
将1.1中的挑丝粘度大的分离菌株接种至脱脂乳液体培养基中，35～42℃静置培养8～12h，制备成种子液；然后种子液按照体积分数为5％的接种量接入灭好菌的脱脂乳液体培养基中，35～42℃静置培养40～56h，测定不同菌株的发酵液中胞外多糖的含量，结果如表1所示。
表1 初筛菌株胞外多糖含量
根据表1的结果，选择七株胞外多糖产量高的菌株作为初步筛选菌株。如表1所示，产胞外多糖的能力位于前七位的菌株分别为：AR-333菌株、AR-93菌株、AR-33菌株、AR-163菌株、AR-113菌株、AR-307菌株、AR-330菌株。
3.菌株复筛
上述七株菌株以接菌量3％(v/v)分别接入脱脂乳培养基，发酵后在4℃、10,000g的条件下离心20min，取上清液，达到破坏且除去蛋白网络的目的。使用Discovery HybridRheometer流变仪(TA Instruments,Eschborn,Germany)测量上清液在常温下剪切速率10s-1时的表观黏度，测量程序为flow peak，结果如表2所示。
表2 不同菌株发酵液的表观黏度
如表2所示，由AR-333菌株发酵所得的上清液相对于其他菌株的上清液有着更高的表观黏度(p≤0.05)，说明AR-333菌株产出的可溶于水的黏多糖的量最高。
4.菌株鉴定
AR-333菌株的菌落形状如图1所示。经生理生化鉴定和16SrDNA序列鉴定，实验结果如表3所示：
表3 嗜热链球菌AR-333的生理生化特性
通过16SrDNA序列对比分析，结果显示该序列与NCBI数据库中嗜热链球菌的同源性达99％，可以鉴定该菌为嗜热链球菌。该嗜热链球菌AR-333菌株已于2015年12月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其编号为CGMCC 10262。
实施例一的作用与效果
本实施例提供了从自然发酵的乳制品中筛选嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)AR-333菌株的筛选方法，采用梯度浓度稀释法，将稀释后的样品液涂布于脱脂乳琼脂培养基平板上，35～42℃厌氧培养40～56h，而后进行划线分离纯化，得到分离菌株，而后结合胞外多糖的产生能力实验进行初步筛选，结合发酵液的上清液的表观黏度实验进行复筛，并通过序列比对进行菌株种属的确定。该AR-333菌株产生胞外黏多糖的能力很强，胞外黏多糖的浓度可达256.97mg/L。
实施例二、利用嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株作为发酵剂进行发酵乳以及奶酪的制备
制备例1：制备发酵乳
步骤1，将保藏于脱脂牛乳培养基中的嗜热链球菌AR-333菌株按 质量体积比为3～5％的接种量接入灭菌脱脂牛乳培养基中，35～42℃静置培养8～16h，进行活化，得到活化菌种；
步骤2，将该活化菌种以质量体积比为3-5％的接种量接种于新鲜牛乳中，40～42℃静置发酵至凝乳，冷却后放入2～6℃冰箱进行后熟15-20h，得到所述发酵乳。
本制备例的步骤1中，静置培养的温度优选42℃，静置培养的时间优选10h；步骤2中，后熟温度优选4℃，后熟时间优选16h。
根据本制备例的方法制备得到的发酵乳酸奶质地粘稠，极少有乳清析出，低脂酸奶粘度为3471mPa·s，酸奶持水力为20.1％。
制备例2，制备奶酪
步骤1，新鲜牛乳巴氏杀菌后冷却至28～34℃，添加1-4％(m/v)嗜热链球菌AR-333发酵剂进行酸化；
步骤2，当牛乳pH降低0.2之后，加入质量体积比为0.01～0.03的％凝乳酶，凝乳后进行切割排乳清；
步骤3，向步骤2中排好乳清的凝乳中加入一定量的食用盐，使盐的质量分数为2.5％，将盐和凝乳搅拌均匀后入模，成型后切割并喷洒红曲霉发酵剂，在15℃、湿度95％的条件下成熟8～15d，得到奶酪。
本制备例中，所加入的凝乳酶的最优的质量体积比为0.02％；新鲜牛乳最优的冷却温度为32℃。
根据本制备例的方法制备得到的奶酪，富含乳酸菌胞外多糖，质构均一，口感纯正，风味柔和。
实施例二的作用与效果
利用本实施例的方法制备的发酵乳和奶酪，不仅酸度柔和，粘度适中，而且能够有效促进新鲜牛乳中营养元素的释放，使得发酵产品营养全面、附加值高、口感好，更有利于人体接收和消化。
实施例三，嗜热链球菌AR-333的胞外多糖的提取及免疫调节活性
1、胞外多糖的提取
步骤1，制备嗜热链球菌AR-333菌株发酵液；
步骤2，将发酵液首先经过沸水浴10min，以失活可降解多糖的酶，然后离心(15～30min、9000g，4℃)除去菌体和凝结蛋白，得到第一上清液；
步骤3，将步骤2中得到的第一上清液浓缩至原体积的1/3，添加80％(w/v)的三氯乙酸至终浓度4～6％(w/v)，静置过夜，离心(15～30min，9000g，4℃)除去沉淀蛋白，得到第二上清液；向第二上清液中添加无水乙醇至乙醇体积百分比为65～75％(优选70％)，4℃静置10h，而后4℃、9000g、离心15～30min取沉淀，得到上清液沉淀；
步骤4，将上清液沉淀溶解于去离子水后在离4℃、9000g条件下离心15～30min，取上清液，该上清液用去离子水透析72～80h，每8h换水一次，冷冻干燥得到粗胞外多糖。
其中，步骤1中制备嗜热链球菌AR-333菌株发酵液的方法包括以下子步骤；
子步骤1-1，菌种活化：将嗜热链球菌AR-333菌株接种于脱脂 乳培养液中，在35～42℃条件下培养8～16h进行活化，得到活化菌种；
子步骤1-2，种子培养：将子步骤1-1中的活化菌种接种于脱脂乳培养液中，在35～42℃条件下培养8～16h，用作种子液；
子步骤1-3，发酵培养：将子步骤1-2中的种子液以体积比为3～5％的接种量接种于脱脂乳培养液中，在40～42℃条件下培养40h，得到嗜热链球菌AR-333菌株发酵液。
本实施例中，在制备嗜热链球菌AR-333菌株发酵液的方法中，菌种活化和种子培养的培养条件优选在40℃条件下培养10h。
2、胞外多糖(黏多糖)的免疫调节活性
步骤1，重悬巨噬细胞RAW264.7于添加有不同黏多糖浓度(50、100、200、500、1000μg/mL)的RPMI1640培养基中(5×105cells/mL)，得到五种悬浮液；
步骤2，将50μL悬浮液加至96孔板中，同时加入20μL各浓度样品的阴性(PBS)和阳性(LPS，10μg/mL)对照，于37℃、含5％的CO2条件下培养48h；
步骤3，吸取50μL的培养上清，然后加入50μL的Griess试剂，显色10min后，于波长543nm处测定吸光度，根据标准曲线计算相应的NO量，结果如图3所示。
如图3所示，随着黏多糖浓度的提高，NO的释放量逐渐增大。当黏多糖的浓度为1000μg/mL时，其NO的释放量和阳性对照的几乎相同。
实施例三的作用与效果
实施例三所提供的提取胞外多糖(黏多糖)的方法简单，根据该方法从嗜热链球菌AR-333提取的胞外多糖的浓度可高达256mg/L。根据免疫调节活性实验的结果可知，该胞外多糖能够随着其浓度的增大而提高其调节免疫调节的能力，直接证实了胞外多糖的免疫调节能力。

Claims (10)

1.一株嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株，已保藏于中国普通微生物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.10262。
2.嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，采集自然发酵的乳制品，采用浓度梯度稀释法进行稀释，取一定量的稀释液涂布于脱脂乳琼脂培养基平板上，35～42℃厌氧培养40～56h，挑选菌落大、生长快、挑丝粘度大的菌株进行划线分离纯化，得到分离菌株；
步骤2，将所述分离菌株接种至脱脂乳液体培养基中，35～42℃静置培养8～12h，制备成种子液；
步骤3，将所述种子液按照一定的接种量接入灭好菌的脱脂乳液体培养基中，35～42℃静置培养40～56h，通过测定发酵液中胞外多糖的含量，进行初步筛选，得到初步筛选菌株；
步骤4，将所述初步筛选菌株分别接入脱脂乳培养基，发酵后离心取上清液，通过测量所述上清液的表观黏度对所述初步筛选菌株进行复筛，选取表观黏度最大的菌株，得到所述AR-333菌株。
3.嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株在制备发酵乳或奶酪中的用途。
4.一种发酵乳的制备方法，其特征在于，采用嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)AR-333菌株作为发酵剂，包括以下步骤：
步骤1，将所述嗜热链球菌AR-333菌株进行活化，得到活化菌种；
步骤2，将所述活化菌种以质量体积比为3-5％的接种量接种于新鲜牛乳中，40～42℃静置发酵至凝乳，冷却至室温后放入2～6℃冰箱进行后熟15-20h，得到所述发酵乳。
5.根据权利要求4所述的发酵乳的制备方法，其特征在于：
其中，步骤1中所述的活化的方法是：将保藏于脱脂牛乳培养基中的嗜热链球菌AR-333菌株按质量体积比为3～5％的接种量接入灭菌脱脂牛乳培养基中，35～42℃静置培养8～16h，进行活化。
6.一种奶酪的制备方法，其特征在于，采用嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)AR-333菌株作为发酵剂，包括以下步骤：
步骤1，将所述嗜热链球菌AR-333菌株以质量体积比为1-4％的接种量接种于28～34℃的无菌新鲜牛乳中，当牛乳pH降低至0.2之后，加入质量体积比为0.01～0.03％的凝乳酶，凝乳后进行切割排乳清；
步骤2，向所述步骤1中排好乳清的凝乳中加入一定量的食用盐，搅拌均匀后入模，成型后切割并喷洒红曲霉发酵剂，在15℃、湿度95％的条件下成熟8-15d，得到所述奶酪。
7.嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)AR-333菌株作为提取胞外多糖的原料的用途。
8.一种胞外多糖的提取方法，其特征在于，采用嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)AR-333菌株作为原料，包括以下步骤：
步骤1，制备嗜热链球菌AR-333菌株发酵液；
步骤2，将所述发酵液煮沸后离心去除菌体以及凝结蛋白，得到第一上清液；
步骤3，将所述步骤2中得到的所述第一上清液浓缩至原体积的1/3，采用三氯乙酸法除去所述第一上清液中沉淀蛋白，得到第二上清液；采用醇沉淀法沉淀所述第二上清液，得到上清液沉淀；
步骤4，将所述上清液沉淀溶解于去离子水后离心取上清液，得到第三上清液，所述第三上清液用所述去离子水透析72～80h，每预定时间换水一次，得到所述胞外多糖。
9.根据权利要求8所述的胞外多糖的提取方法，其特征在于：
其中，在所述步骤1中，制备所述嗜热链球菌AR-333菌株发酵液的方法包括以下子步骤；
子步骤1-1，菌种活化：将嗜热链球菌AR-333菌株接种于脱脂乳培养液中，在35～42℃条件下培养8～16h进行活化，得到活化菌种；
子步骤1-2，将所述子步骤1-1中的所述活化菌种接种于脱脂乳培养液中，在35～42℃条件下培养8～16h，用作种子液；
子步骤1-3，将所述子步骤1-2中的所述种子液以体积比为3～5％的接种量接种于脱脂乳培养液中，在40～42℃条件下培养35～45h，得到所述嗜热链球菌AR-333菌株发酵液。
10.根据权利要求8所述的胞外多糖的提取方法，其特征在于：
其中，在所述步骤3中，所述三氯乙酸法是在所述第一上清液中添加三氯乙酸至所述三氯乙酸的终浓度为4～6％(w/v)，静置12～24h，而后4℃、10000g、离心15～30min，除去沉淀蛋白，
所述醇沉淀法是向所述第二上清液中加无水乙醇至乙醇体积百分比为65～75％，4℃静置8～15h，而后4℃、9000g、离心15～30min取沉淀。
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Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434461A (zh) * 2016-10-12 2017-02-22 内蒙古农业大学 一株嗜热链球菌菌株及其用途
CN107410479A (zh) * 2017-09-06 2017-12-01 光明乳业股份有限公司 一种发酵乳及其制备方法
CN107788118A (zh) * 2017-08-16 2018-03-13 南京卫岗乳业有限公司 一种使用继代菌种生产的功能性酸奶
CN108004167A (zh) * 2017-12-17 2018-05-08 石家庄君乐宝乳业有限公司 一株产胞外多糖的嗜热链球菌jmcc0019、其分离纯化方法及应用
CN108148775A (zh) * 2017-12-26 2018-06-12 光明乳业股份有限公司 一株高产胞外多糖的嗜热链球菌、保存培养方法及利用该嗜热链球菌制备发酵乳的方法
CN108220201A (zh) * 2018-02-26 2018-06-29 上海理工大学 嗜热链球菌Streptococcus thermophilus Benshit
CN108294114A (zh) * 2017-01-13 2018-07-20 中国农业大学 一种通过辅助发酵剂菌株增强水果风味的干酪及其制备方法
CN110066750A (zh) * 2019-04-26 2019-07-30 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用
CN110305816A (zh) * 2019-07-26 2019-10-08 内蒙古农业大学 一种嗜热链球菌imau20756及其应用
CN110408663A (zh) * 2019-08-01 2019-11-05 浙江一鸣食品股份有限公司 一种高产胞外多糖的乳酸菌及制备方法和应用
CN111560333A (zh) * 2020-05-21 2020-08-21 浙江大学 乳酸菌胞外多糖的分离及其应用
CN112458013A (zh) * 2020-11-26 2021-03-09 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0028、其分离纯化方法及应用
CN112501064A (zh) * 2020-12-03 2021-03-16 张笑薇 一株嗜热链球菌及其应用
CN113197312A (zh) * 2020-07-14 2021-08-03 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 嗜热链球菌mn002在免疫调节产品中的用途及膳食补充剂
CN113913352A (zh) * 2021-11-29 2022-01-11 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用
CN116814465A (zh) * 2023-03-17 2023-09-29 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WEI REN等: "Bioactive exopolysaccharides from a S. thermophilus strain: Screening,purification and characterization", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES》 *
任玮等: "一株嗜热链球菌产多糖条件的优化", 《工业微生物》 *

Cited By (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434461B (zh) * 2016-10-12 2019-05-14 内蒙古农业大学 一株嗜热链球菌菌株及其用途
CN106434461A (zh) * 2016-10-12 2017-02-22 内蒙古农业大学 一株嗜热链球菌菌株及其用途
CN108294114B (zh) * 2017-01-13 2021-09-07 中国农业大学 一种通过辅助发酵剂菌株增强水果风味的干酪及其制备方法
CN108294114A (zh) * 2017-01-13 2018-07-20 中国农业大学 一种通过辅助发酵剂菌株增强水果风味的干酪及其制备方法
CN107788118A (zh) * 2017-08-16 2018-03-13 南京卫岗乳业有限公司 一种使用继代菌种生产的功能性酸奶
CN107410479B (zh) * 2017-09-06 2023-12-08 光明乳业股份有限公司 一种发酵乳及其制备方法
CN107410479A (zh) * 2017-09-06 2017-12-01 光明乳业股份有限公司 一种发酵乳及其制备方法
CN108004167A (zh) * 2017-12-17 2018-05-08 石家庄君乐宝乳业有限公司 一株产胞外多糖的嗜热链球菌jmcc0019、其分离纯化方法及应用
CN108148775A (zh) * 2017-12-26 2018-06-12 光明乳业股份有限公司 一株高产胞外多糖的嗜热链球菌、保存培养方法及利用该嗜热链球菌制备发酵乳的方法
CN108148775B (zh) * 2017-12-26 2021-09-07 光明乳业股份有限公司 一株高产胞外多糖的嗜热链球菌、保存培养方法及利用该嗜热链球菌制备发酵乳的方法
CN108220201A (zh) * 2018-02-26 2018-06-29 上海理工大学 嗜热链球菌Streptococcus thermophilus Benshit
CN110066750A (zh) * 2019-04-26 2019-07-30 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用
CN110066750B (zh) * 2019-04-26 2020-12-15 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用
CN110305816B (zh) * 2019-07-26 2021-06-29 内蒙古农业大学 一种嗜热链球菌imau20756及其应用
CN110305816A (zh) * 2019-07-26 2019-10-08 内蒙古农业大学 一种嗜热链球菌imau20756及其应用
CN110408663A (zh) * 2019-08-01 2019-11-05 浙江一鸣食品股份有限公司 一种高产胞外多糖的乳酸菌及制备方法和应用
CN110408663B (zh) * 2019-08-01 2021-04-06 浙江一鸣食品股份有限公司 一种高产胞外多糖的乳酸菌及制备方法和应用
CN111560333A (zh) * 2020-05-21 2020-08-21 浙江大学 乳酸菌胞外多糖的分离及其应用
CN113197312A (zh) * 2020-07-14 2021-08-03 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 嗜热链球菌mn002在免疫调节产品中的用途及膳食补充剂
CN112458013A (zh) * 2020-11-26 2021-03-09 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0028、其分离纯化方法及应用
CN112501064A (zh) * 2020-12-03 2021-03-16 张笑薇 一株嗜热链球菌及其应用
CN112501064B (zh) * 2020-12-03 2023-07-28 张笑薇 一株嗜热链球菌及其应用
CN113913352A (zh) * 2021-11-29 2022-01-11 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用
CN116814465A (zh) * 2023-03-17 2023-09-29 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用
CN116814465B (zh) * 2023-03-17 2024-03-26 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用

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