CN116814465A - 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用 - Google Patents
一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116814465A CN116814465A CN202310259857.4A CN202310259857A CN116814465A CN 116814465 A CN116814465 A CN 116814465A CN 202310259857 A CN202310259857 A CN 202310259857A CN 116814465 A CN116814465 A CN 116814465A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- streptococcus thermophilus
- strain
- phage
- fermented milk
- direct
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 title claims abstract description 82
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims abstract description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 33
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 33
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 claims description 21
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 15
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 claims description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 2
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 claims description 2
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 2
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 2
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 claims description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 abstract description 8
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 abstract description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 19
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 239000001968 M17 agar Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 4
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002479 acid--base titration Methods 0.000 description 1
- 230000001188 anti-phage Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用，所述具有噬菌体抗性的嗜热链球菌命名为嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株，保藏编号为CGMCC No.24663，保藏日期为2022年4月11日。该菌株可以抵抗至少一种噬菌体的侵染，在有噬菌体存在的情况下，本发明所述的嗜热链球菌依然能够快速酸化，且维持良好的质构和风味，因此将其应用于发酵乳的生产中，可以降低发酵乳生产中噬菌体污染的风险，具有很重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于微生物及微生物发酵技术领域，具体涉及一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用。
背景技术
随着社会经济的不断发展以及人们生活水平的逐步提高，发酵乳因其营养价值高、风味独特以及良好的保健效果，深受广大消费者的青睐。酸奶是生牛乳经杀菌后加入嗜热链球菌和德氏保加利亚乳杆菌的协同作用发酵而成的，因此酸奶工业的发展高度依赖于微生物发酵系统，嗜热链球菌作为关键的发酵剂菌种，在牛奶酸化，酸乳风味提升以及发酵乳产品的质构维持和形成中发挥重要作用。然而，在工业生产过程中，噬菌体污染问题一直是困扰乳品发酵业及其他发酵工业的一大难题，在酸奶生产过程中，如果嗜热链球菌遭受噬菌体的侵染，轻则会影响嗜热链球菌的生长，导致产酸、凝乳能力，产黏能力和营养水平下降，也会影响酸奶的风味；重则使酸奶发酵无法继续进行，导致发酵失败，生产被迫停止，给乳制品行业带来巨大危害，造成巨大的经济损失。
目前噬菌体污染的防治以预防为主，防重于治，在生产中防治噬菌体的方法主要有：优化生产环境，消灭噬菌体的孳生藏匿地；保证发酵设备及其管道无菌化，以清除隐患；进行菌种轮换，更换使用不同噬菌体敏感类型的菌株；即使大多数噬菌体的控制措施已被采用，但对于乳品工业来说噬菌体仍然是一个高风险因素，选育噬菌体抗性嗜热链球菌，利用噬菌体抗性菌株替代敏感菌株是克服噬菌体危害的有效预防措施之一，而且筛选噬菌体抗性嗜热链球菌，对于提高发酵工业中酸奶生产的发酵效率，改善发酵乳产品风味意义重大。
常用的选育抗性菌株筛选方法为抗性质粒转入、诱导突变、DNA重组及自然选育。但是，基因的改变容易导致菌株发酵性能降低，而靠质粒转入获得抗性使后代遗传中质粒容易丢失而失去抗性，并且转基因食物发酵菌株的安全性一直备受质疑。自然选育对菌株破坏较小，安全性高，是安全有效的筛选方法。因此如何通过自然选育筛选出一株具有噬菌体抗性的嗜热链球菌，并将其应用于发酵乳的生产中，降低发酵乳生产中噬菌体污染的风险，具有很重要的应用价值。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌，所述具有噬菌体抗性的嗜热链球菌命名为嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.24663，保藏日期为2022年4月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明提供的嗜热链球菌是从内蒙古自治区锡林郭勒盟传统乳制品农家奶酪中，经过自然选育得到的，所述的嗜热链球菌ST11对至少一种噬菌体具有抗性，可以抵抗至少一种噬菌体的侵染，在有噬菌体存在的情况下，本发明所述的嗜热链球菌依然能够快速酸化，且维持良好的质构和风味，因此将其应用于发酵乳的生产中，可以降低发酵乳生产中噬菌体污染的风险，具有很重要的应用价值。
本发明所涉及的嗜热链球菌的筛选步骤如下：
(1)单菌落筛选纯化：将奶酪样品梯度稀释后涂布在含0.05％溴甲酚紫的M17琼脂培养基表面于37℃培养48h，挑取呈黄色的单菌落，进一步于M17琼脂培养基中重复划线培养，直至获得纯嗜热单菌落，并在-80℃下进行甘油管保藏；
(2)噬菌体宿主菌筛选：将步骤(1)得到的嗜热链球菌冻存管溶解后，按照2％的接种量接种于M17液体培养基中于37℃培养16h得到嗜热链球菌种子液，将得到的嗜热链球菌种子液按照1％的接种量接种于脱脂乳中，同时接种噬菌体Φ07，使噬菌体Φ07的效价为1×109PFU/mL，将嗜热链球菌与噬菌体Φ07在42℃共同培养6h，另用同样接种量的嗜热链球菌发酵脱脂乳做对照，选择生长缓慢或有乳清析出严重的菌株，与噬菌体倒双层平板(下层为M17固体培养基，上层为含有10mmol/L CaCl2的M17半固体培养基)，选择有噬菌斑出现的菌株作为噬菌体宿主菌；
(3)抗性嗜热链球菌初筛：采用次级感染法进行抗性嗜热链球菌的初筛，将步骤(2)得到的噬菌体宿主菌，按照2％的接种量接种于M17液体培养基中，培养16h后，在按照2％的接种量接种于含10mmol/L CaCl2的M17液体培养基中培养，按照MOI(噬菌体最佳感染复数)为0.1加入噬菌体Φ07，于42℃培养24h至完全裂解，将得到的裂解液涂布于M17琼脂平板上，于42℃继续培养36h，挑取获得的单菌落，分别在涂有噬菌体增殖液的平板上划线分离，反复重复几次，直至菌落生长正常，将初筛得到的抗性嗜热链球菌，在-80℃下进行甘油管保藏；
(4)抗性嗜热链球菌复筛：将步骤(3)初筛得到的具有抗性的嗜热链球菌按照1％的接种量接种于脱脂乳中，同时接种噬菌体Φ07，使噬菌体Φ07的效价为1×109PFU/mL，将嗜热链球菌与噬菌体Φ07在42℃共同培养6h，同时用同样接种量对应的宿主菌发酵脱脂乳做对照，选择产酸速度快，发酵凝乳状态及各项指标较好的单菌，进行甘油管保藏，即得到具有抗性的嗜热链球菌ST11。
第二方面，本发明提供一种直投式酸奶发酵剂，所述直投式酸奶发酵剂包括第一方面所述的嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株，所述嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株的活菌数不低于1×1010CFU/g，例如1×1010CFU/g、2×1010CFU/g、3×1010CFU/g、4×1010CFU/g、5×1010CFU/g、6×1010CFU/g、7×1010CFU/g、8×1010CFU/g、9×1010CFU/g、1×1011CFU/g，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述直投式酸奶发酵剂还包括德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株，保藏编号为CGMCCNo.15751，保藏日期为2018年5月11日，所述嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株与德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株的活菌数之比为(1-10):1，其中(1-10)中具体点值均可选择1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
本发明创造性地发现上述嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株能够与德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株进行复配使用，其在发酵方面的能力显著优异于单一菌剂或者其他复配方式，说明嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株与德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株在提升发酵效果方面具有协同作用。
第三方面，本发明提供一种根据第二方面所述的直投式酸奶发酵剂在制备发酵乳中的应用。
第四方面，本发明提供一种发酵乳，所述发酵乳的制备原料包括第二方面所述直投式酸奶发酵剂、生牛乳、添加剂和水；所述添加剂包括蔗糖和/或稳定剂。
优选地，所述发酵乳的制备原料包括接种量为20-40g/T的直投式酸奶发酵剂、质量百分含量为85％-95％的生牛乳、质量百分含量为5％-7％的蔗糖和质量百分含量为0.2％-0.8％的稳定剂和水。
当上述组分以上述特定的重量配比关系进行组合时，在发酵乳维持良好的质构、风味提升的方面的功效能够最大化。
所述直投式酸奶发酵剂的接种量可以选择20g/T、25g/T、30g/T、35g/T、40g/T等，所述生牛乳的质量百分含量可以选择85％、88％、90％、92％、95％等，所述蔗糖的质量百分含量可以选择5％、5.5％、6％、6.5％、7％等，所述稳定剂的质量百分含量可以选择0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述稳定剂包括果胶、大豆多糖、琼脂、卡拉胶或变性淀粉中的任意一种或至少两种的组合。
第五方面，本发明提供一种根据第四方面所述的发酵乳的制备方法，所述制备方法包括：
(1)将添加剂、生牛乳与水混合，均质，灭菌，得到待发酵基料；
(2)将待发酵基料与直投式酸奶发酵剂混合，发酵，即得。
优选地，所述均质温度为60-70℃，压力为10-20MPa；所述灭菌温度为90-95℃，时间为5-10min。
所述均质温度可以选择61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃等，所述压力可以选择10MPa、11MPa、12MPa、13MPa、14MPa、15MPa、16MPa、17MPa、18MPa、19MPa、20MPa等，所述灭菌温度可以选择90℃、91℃、92℃、93℃、94℃、95℃等，时间可以选择5min、6min、7min、8min、9min、10min等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述发酵的温度为40-45℃，时间为5-8h，所述发酵的温度可以选择40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃，时间可以选择5h、5.5h、6h、6.5h、7h、7.5h、8h等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明通过自然选育的方法创造性地筛选出一株具有噬菌体抗性的嗜热链球菌ST11，所述的嗜热链球菌ST11对至少一种噬菌体具有抗性，可以抵抗至少一种噬菌体的侵染，而且在有噬菌体存在的情况下，本发明所述的嗜热链球菌依然能够快速酸化，且维持良好的质构和风味，因此将其应用于发酵乳的生产中，可以降低发酵乳生产中噬菌体污染的风险，具有很重要的应用价值。另外采用自然选育的方法筛选得到的具有噬菌体抗性的嗜热链球菌安全性也更高，对菌种的特性的破坏性也更小，相较于现有的噬菌体抗性菌株筛选技术效率更高，安全性也更高。
本发明创造性地发现上述嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株能够与德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株进行复配使用，其在发酵方面的能力显著优异于单一菌剂或者其他复配方式，说明嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株与德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株在提升发酵效果方面具有协同作用。
附图说明
图1是发酵过程中活菌数的变化结果图。
图2是发酵过程中pH的变化结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述内容中涉及的嗜热链球菌为嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.24663，保藏日期为2022年4月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述内容中涉及的德氏乳杆菌保加利亚亚种为德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15751，保藏日期为2018年5月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述内容中涉及的敏感菌株是指不具有噬菌体抗性的菌株。
实施例1
本实施例提供一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌ST11，其分离筛选方法如下：
(1)单菌落筛选纯化：将奶酪样品梯度稀释后涂布在含0.05％溴甲酚紫的M17琼脂培养基表面于37℃培养48h，挑取呈黄色的单菌落，进一步于M17琼脂培养基中重复划线培养，直至获得纯嗜热单菌落，并在-80℃下进行甘油管保藏；
(2)噬菌体宿主菌筛选：将步骤(1)得到的嗜热链球菌冻存管溶解后，按照2％的接种量接种于M17液体培养基中于37℃培养16h得到嗜热链球菌种子液，将得到的嗜热链球菌种子液按照1％的接种量接种于脱脂乳中，同时接种噬菌体Φ07，使噬菌体Φ07的效价为1×109PFU/mL，将嗜热链球菌与噬菌体Φ07在42℃共同培养6h，另用同样接种量的嗜热链球菌发酵脱脂乳做对照，选择生长缓慢或有乳清析出严重的菌株，与噬菌体倒双层平板(下层为M17固体培养基，上层为含有10mmol/L CaCl2的M17半固体培养基)，选择有噬菌斑出现的菌株作为噬菌体宿主菌；
(3)抗性嗜热链球菌初筛：采用次级感染法进行抗性嗜热链球菌的初筛，将步骤(2)得到的噬菌体宿主菌，按照2％的接种量接种于M17液体培养基中，培养16h后，在按照2％的接种量接种于含10mmol/L CaCl2的M17液体培养基中培养，按照MOI(噬菌体最佳感染复数)为0.1加入噬菌体Φ07，于42℃培养24h至完全裂解，将得到的裂解液涂布于M17琼脂平板上，于42℃继续培养36h，挑取获得的单菌落，分别在涂有噬菌体增殖液的平板上划线分离，反复重复几次，直至菌落生长正常，将初筛得到的抗性嗜热链球菌，在-80℃下进行甘油管保藏；
(4)抗性嗜热链球菌复筛：将步骤(3)初筛得到的具有抗性的嗜热链球菌按照1％的接种量接种于脱脂乳中，同时接种噬菌体Φ07，使噬菌体Φ07的效价为1×109PFU/mL，将嗜热链球菌与噬菌体Φ07在42℃共同培养6h，同时用同样接种量对应的宿主菌发酵脱脂乳做对照，选择产酸速度快，发酵凝乳状态及各项指标较好的单菌，进行甘油管保藏，即得到具有抗性的嗜热链球菌ST11。
实施例2
本实施例对实施例1中筛选到的具有噬菌体抗性的菌株进行形态鉴定、生理生化鉴定和16S rRNA的分子生物学鉴定，具体步骤如下：
(1)形态鉴定
将-80℃保藏的菌株取出，融化后直接划线于M17固体培养基平板上，在37℃培养48h，观察菌落的形状、颜色、大小、透明度、边缘和表面等形态特征。挑取单个菌落进行革兰氏染色，染色后用Motic数码生物显微镜在油镜下(100×)观察细胞的大小和形状。观察可知，筛选得到的菌株在M17培养基上菌落形态较小，呈圆形，乳白色，表面光滑；在显微镜下菌体呈现球形相连接的弯曲型长链状，且长短不一，革兰氏染色为阳性。
(2)生理生化鉴定
根据《伯杰氏细菌手册》中微生物分类的传统指标及生理生化特征的鉴定方法，对嗜热链球菌ST11进行鉴定，嗜热链球菌ST11为革兰氏阳性，链球菌状，接触酶和氧化酶阴性菌株，碳水化合物产酸特性中，可利用乳糖、葡萄糖、蔗糖。
(3)16S rRNA分子生物学鉴定：
将-80℃保藏的菌株取出，接种于M17液体培养基中，在37℃培养16h。吸取1mL菌液于离心管中，12000rpm下离心5min，去上清液，收集菌体。加入无菌水混匀后，加入细菌通用引物，进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序鉴定，结果如SEQ ID No.1所示。
SEQ ID No.1：
GGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGATTGGCTTTAAGAGATTAGCTCGCCGTCACCGACTCGCAACTCGTTGTACCAACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTATTACCGGCAGTCTCGCTAGAGTGCCCAACTGAATGATGGCAACTAACAATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACCGATGTACCGAAGTAACTTTCTATCTCTAGAAATAGCATCGGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCGGCACTGAATCCCGGAAAGGATCCAACACCTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGCCCGCTTTTCGCCACCGGTGTTCCTCCATATATCTACGCATTTCACCCGCTACACATGGAATTCCACTCTCCCCTTCTGCACTCAAGTTTGACAGTTTCCAAAGCGAACTATGGTTGAGCCACAGCCTTTAACTTCAGACTTATCAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTCGGGACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTCCCTTTCTGGTAAGCTACCGTCACAGTGTGAACTTTCCACTCTCACACCCGTTCTTGACTTACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCGGTCAGGGTTGCCCCCATTGCCGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTATGTATCGTCGCCTAGGTGAGCCATTACCTCACCTACTAGCTAATACAACGCAGGTCCATCTTGTAGTGGAGCAATTGCCCCTTTCAAATAAATGACATGTGTCATCCATTGTTATGCGGTATTAGCTATCGTTTCCAATAGTTATCCCCCGCTACAAGGCAGGTTACCTACGCGTTACTCACCCGTTCGCAACTCATCCAAGAAGAGCAA。
实施例3
发酵性能测定
将实施例1中筛选到的嗜热链球菌ST11与敏感菌株分别按照2％接种量接种至10％灭菌脱脂乳中，同时向其中加入1×109PFU/mL噬菌体Φ07，另设置两组分别接种等量的噬菌体抗性菌株ST11和敏感菌株不加噬菌体作为对照，于43℃培养10h，分别在第2、4、6、8和10h取样测定活菌数及pH，待发酵结束后测定持水性，粘度和滴定酸度，并进行后酸的跟踪测试。发酵过程中活菌数的变化结果如图1所示，发酵过程中pH的变化结果如图2所示，凝乳时间、持水性、粘度和后酸的变化结果如表1所示。
将嗜热链球菌ST11、德氏乳杆菌保加利亚亚种LB42、德氏乳杆菌保加利亚亚种ATCC11842、嗜热链球菌ST11与德氏乳杆菌保加利亚亚种LB42的混合物(活菌数之比为5:1)、嗜热链球菌ST11与德氏乳杆菌保加利亚亚种ATCC11842的混合物(活菌数之比为5:1)分别按照2％接种量接种至10％灭菌脱脂乳中，分别在第2、4、6、8和10h取样测定活菌数及pH，待发酵结束后测定持水性、粘度和滴定酸度，并进行后酸的跟踪测试，结果如表2所示。
发酵过程中活菌数的变化采用传统的平板法计数，pH测定采用pH计(METTLERTOLEDO pH计)进行分析测定，持水性测试采用离心称重法，即取4℃发酵乳20g于离心管中，室温下离心弃上清液，离心管倒置10min后立即称重，按照公式：持水性＝(离心后沉淀的重量/所称发酵乳的质量)×100％来进行计算，粘度测试采用黏度计(proRheo R180)测定产品粘度，后酸跟踪测试将发酵至70°T的酸奶终止后置于10℃环境中，采用酸碱滴定法跟踪测定第1、7、14和21天的酸度变化。
表1
由表1中的数据可以发现，在高浓度噬菌体存在的情况下，ST11的凝乳时间与无噬菌体时接近，并且发酵后的粘度，持水性和后酸等特性均比较接近，说明ST11对噬菌体具有抗性，可以在有噬菌体存在的情况下正常发酵，而敏感菌株，在高浓度噬菌体牛乳环境中，产酸速度显著降低，此外粘度和持水性显著降低，说明在高浓度噬菌体存在的情况下，噬菌体繁殖后侵染菌株，导致敏感菌株生长缓慢，降低敏感菌株的产酸和产黏能力，导致粘度和持水性降低。
由图1和图2可知，抗性菌株ST11在高浓度噬菌体存在的情况下，发酵过程中活菌数的增殖情况和pH变化情况与无噬菌体时接近，而敏感菌株在高浓度噬菌体存在时，发酵过程中活菌数前期下降不明显，中期快速下降，并且pH下降缓慢，进一步说明抗性菌株ST11对噬菌体不敏感，抗性很强，可以在噬菌体环境中正常生长发酵。
表2
由表2数据，本发明创造性地发现嗜热链球菌ST11菌株能够与德氏乳杆菌保加利亚亚种LB42菌株进行复配使用，其在发酵方面的效果显著优异于单一菌剂或者其他复配方式，说明嗜热链球菌ST11菌株与德氏乳杆菌保加利亚亚种LB42菌株在发酵方面具有协同增效作用。
实施例4
噬菌体抗性菌株抗噬菌体能力测定
针对实施例1筛选到的具有噬菌体抗性的嗜热链球菌ST11进行抗噬菌体能力分析，采用双层平板法，分析测定抗噬菌体能力。将具有噬菌体抗性的嗜热链球菌ST11活化后，调整菌液浓度至1×108CFU/mL，调整噬菌体Φ07浓度为1×108PFU/mL，取0.1mL嗜热链球菌ST11菌液和0.1mL稀释梯度为10-4、10-5、10-6和10-7的噬菌体Φ07悬液混合均匀，于室温吸附10min，将混合液加入10mmol/L CaCl2的M17半固体培养基中，混合均匀，倒于下层M17固体培养基上，凝固后置于42℃继续培养36h，计算噬菌斑数；敏感菌株作为对照，将等量的噬菌体以敏感菌为指示菌倒双层平板，计算噬菌斑数。结果如表3所示。
表3
| 菌株 | 噬菌斑数(PFU/mL) |
| 抗性菌ST11 | 0 |
| 敏感菌 | 1.17×107 |
由表3中的数据可以发现，抗性菌ST11没有噬菌斑出现，以敏感菌为指示菌时噬菌斑数量达到1.17×107PFU/mL，表明噬菌体抗性菌株ST11具有很高的抵抗噬菌体侵染裂解的能力。
实施例5
噬菌体抗性菌株遗传稳定性分析
将实施例1筛选获得的具有噬菌体抗性的嗜热链球菌ST11分别在有噬菌体的培养基中培养传代，菌液的浓度为1×108CFU/mL，噬菌体的效价为1×108PFU/mL，分别在第0、10、15、20、25和30代时以双层平板的方法检测其抗噬菌体的能力，噬菌体抗性菌株ST11培养在不添加噬菌体培养基中做对照，抗噬菌体能力测定方法同实施例4，结果如表4所示。
表4
由表4可以看出，所得的抗性菌株ST11在有噬菌体存在和无噬菌体存在的情况下，连续传代30次均可正常生长，且无任何噬菌斑，说明其抗性在遗传上比较稳定。
实施例6
噬菌体抗性菌株溶原性分析
将实施例1筛选获得的抗性菌株ST11和敏感菌株分别按照2％的接种量接种于M17培养基中，培养至对数期，在抗性菌株ST11培养液中添加0.5μg/mL丝裂霉素C，静置培养10h后，加入氯仿(4-5滴)，激烈震荡30s，静置5min，10000g离心5min获得上清液，上清液通过0.45μm滤膜转入新的无菌管。以敏感菌株做指示菌，采用双层平板法检测上清中是否存在抗性菌株ST11释放的噬菌体颗粒，以不添加丝裂霉素C做阴性对照，结果如表5所示。
表5
| 菌株 | 噬菌斑数(PFU/mL) |
| 抗性菌ST11+丝裂霉素C | 0 |
| 抗性菌ST11 | 0 |
由表5可以看出敏感菌平板上均未出现噬菌斑，抗性菌ST11在经过丝裂霉素C诱导后没有释放噬菌体颗粒，说明抗性菌株ST11为非溶原性抗性菌，可以在生产中正常使用。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (10)
1.一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌，其特征在于，所述具有噬菌体抗性的嗜热链球菌命名为嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株，保藏编号为CGMCCNo.24663，保藏日期为2022年4月11日。
2.一种直投式酸奶发酵剂，其特征在于，所述直投式酸奶发酵剂包括权利要求1所述的嗜热链球菌Streptococcus thermophilus ST11菌株，所述嗜热链球菌Streptococcusthermophilus ST11菌株的活菌数不低于1×1010CFU/g。
3.根据权利要求2所述的直投式酸奶发酵剂，其特征在于，所述直投式酸奶发酵剂还包括德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LB42菌株，保藏编号为CGMCC No.15751，保藏日期为2018年5月11日，所述嗜热链球菌Streptococcusthermophilus ST11菌株与德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus LB42菌株的活菌数之比为(1-10):1。
4.根据权利要求2或3所述的直投式酸奶发酵剂在制备发酵乳中的应用。
5.一种发酵乳，其特征在于，所述发酵乳的制备原料包括权利要求2或3所述的直投式酸奶发酵剂、生牛乳、添加剂和水；所述添加剂包括蔗糖和/或稳定剂。
6.根据权利要求5所述的发酵乳，其特征在于，所述发酵乳的制备原料包括接种量为20-40g/T的直投式酸奶发酵剂、质量百分含量为85％-95％的生牛乳、质量百分含量为5％-7％的蔗糖和质量百分含量为0.2％-0.8％的稳定剂。
7.根据权利要求5所述的发酵乳，其特征在于，所述稳定剂包括果胶、大豆多糖、琼脂、卡拉胶或变性淀粉中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的发酵乳的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
(1)将添加剂、生牛乳与水混合，均质，灭菌，得到待发酵基料；
(2)将待发酵基料与直投式酸奶发酵剂混合，发酵，即得。
9.根据权利要求8所述的发酵乳的制备方法，其特征在于，所述均质温度为60-70℃，压力为10-20MPa；所述灭菌温度为90-95℃，时间为5-10min。
10.根据权利要求9所述的发酵乳的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为40-45℃，时间为5-8h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310259857.4A CN116814465B (zh) | 2023-03-17 | 2023-03-17 | 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310259857.4A CN116814465B (zh) | 2023-03-17 | 2023-03-17 | 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116814465A true CN116814465A (zh) | 2023-09-29 |
| CN116814465B CN116814465B (zh) | 2024-03-26 |
Family
ID=88122892
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310259857.4A Active CN116814465B (zh) | 2023-03-17 | 2023-03-17 | 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116814465B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1628530A (zh) * | 2003-12-19 | 2005-06-22 | 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 | 酸奶或其发酵乳饮料生产的混合菌干粉发酵剂 |
| CN103013871A (zh) * | 2012-12-07 | 2013-04-03 | 武汉光明乳品有限公司 | 一种嗜热链球菌噬菌体抗性突变体筛选方法 |
| CN105377044A (zh) * | 2013-07-17 | 2016-03-02 | 杜邦营养生物科学有限公司 | 嗜热链球菌菌株 |
| CN105886434A (zh) * | 2016-05-05 | 2016-08-24 | 上海理工大学 | 一株嗜热链球菌及其应用 |
| WO2018220104A1 (en) * | 2017-05-31 | 2018-12-06 | Chr. Hansen A/S | Method of producing streptococcus thermophilus mutant strains |
| CN111575209A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-08-25 | 浙江大学 | 一种用于筛选抗噬菌体的植物乳杆菌菌株的方法 |
| CN112639088A (zh) * | 2018-07-13 | 2021-04-09 | 科·汉森有限公司 | 新细菌 |
-
2023
- 2023-03-17 CN CN202310259857.4A patent/CN116814465B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1628530A (zh) * | 2003-12-19 | 2005-06-22 | 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 | 酸奶或其发酵乳饮料生产的混合菌干粉发酵剂 |
| CN103013871A (zh) * | 2012-12-07 | 2013-04-03 | 武汉光明乳品有限公司 | 一种嗜热链球菌噬菌体抗性突变体筛选方法 |
| CN105377044A (zh) * | 2013-07-17 | 2016-03-02 | 杜邦营养生物科学有限公司 | 嗜热链球菌菌株 |
| CN105886434A (zh) * | 2016-05-05 | 2016-08-24 | 上海理工大学 | 一株嗜热链球菌及其应用 |
| WO2018220104A1 (en) * | 2017-05-31 | 2018-12-06 | Chr. Hansen A/S | Method of producing streptococcus thermophilus mutant strains |
| CN110741075A (zh) * | 2017-05-31 | 2020-01-31 | 科·汉森有限公司 | 产生嗜热链球菌突变菌株的方法 |
| CN112639088A (zh) * | 2018-07-13 | 2021-04-09 | 科·汉森有限公司 | 新细菌 |
| CN111575209A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-08-25 | 浙江大学 | 一种用于筛选抗噬菌体的植物乳杆菌菌株的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116814465B (zh) | 2024-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4772131B2 (ja) | 新規乳酸菌を用いた発酵乳の製造方法 | |
| ES2366898T3 (es) | Bacteria de ácido láctico que proporciona una textura mejorada a productos lácteos fermentados. | |
| US6872411B1 (en) | Process for the manufacture of probiotic cheese | |
| CN110066750B (zh) | 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用 | |
| CN109536406B (zh) | 弱后酸化的嗜热链球菌jmcc16、分离纯化方法及应用 | |
| EP0111392B1 (en) | A culture containing viable cell mass of bifidobacteria and lactic acid bacteria, and a process for preparing said culture | |
| CN112852684B (zh) | 一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum菌株Y388及其应用 | |
| CN112442464B (zh) | 耐氧化胁迫的短双歧杆菌grx201及其应用 | |
| CN108004177A (zh) | 一种可降解亚硝酸盐的副干酪乳杆菌及其特性研究 | |
| CN104054822B (zh) | 一种酸奶发酵乳酸菌组合及发酵剂 | |
| CN107937316B (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton-9-71及应用 | |
| CN116814465B (zh) | 一种具有噬菌体抗性的嗜热链球菌及其应用 | |
| CN107828703A (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton‑9‑35及应用 | |
| Boubekri et al. | Identification of lactic acid bacteria from Algerian traditional cheese, El‐Klila | |
| Quiberoni et al. | Performance of Lactobacillus helveticus spontaneous phage-resistant mutants in hard cheese production | |
| CN112899194B (zh) | 一株短双歧杆菌及其培养方法和用途 | |
| CN112708577B (zh) | 一种具有高肠道粘附力和免疫调节功能的发酵乳杆菌dali02及其应用 | |
| CN107974425A (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton-9-79及应用 | |
| KR101221587B1 (ko) | 스트렙토코커스 마세도니커스 ｌｃ 743 균주를 함유하는 모짜렐라 치즈 및 그 제조방법 | |
| CN108102976B (zh) | 一种空间罗伊氏乳杆菌ss23-27及其在制备纯种益生菌酸奶中的应用 | |
| Champagne et al. | The spot test method for the in-plant enumeration of bacteriophages with paired cultures of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus salivarius subsp. thermophilus | |
| JP4794593B2 (ja) | 新規乳酸菌を用いた発酵乳の製造方法 | |
| Chowdhury et al. | Isolation, characterization and antimicrobial activity of lactic acid bacteria from local milk and milk products | |
| Foster et al. | The bacteriology of brick cheese. III. The bacteria involved in ripening | |
| Mourad et al. | identification and characterization of lactic acid bacteria isolated from rural traditional cheese (Jben) of Djelfa province |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |