CN110066750A - 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种嗜热链球菌JMCC0024，它保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年12月14日，保藏编号为CGMCC NO.16940。该菌株具有改善酸奶质构作用，能够代替酸奶中的添加剂，保证其质构良好。本发明还公开了一种嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，它按照以下步骤顺序进行：样品采集、样品富集、菌株分离、菌株纯化、菌株保存。本发明还公开了一种嗜热链球菌JMCC0024的应用，它用于制备发酵乳制品，以改善酸奶质构。

Description

嗜热链球菌JMCC0024及分离纯化方法、应用
技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及一种菌株、筛选方法及应用，具体地说，是一种嗜热链球菌JMCC0024、分离纯化方法及应用。
背景技术
目前我国规定可用于食品的益生菌仅有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种、嗜热链球菌。在食品发酵、工业乳酸发酵、饲料行业和医疗保健领域均有比较广泛的应用。嗜热链球菌作为酸奶发酵剂的主要成分与保加利亚乳杆菌共同完成酸奶的发酵及酸奶风味的形成。
研究表明，嗜热链球菌在发酵过程中，除进行产酸代谢外还可以产生丁二酮等酸奶特有的物质，增强酸奶的风味和口感。此外，嗜热链球菌也能够产生一些功能活性物质，如胞外多糖、细菌素和维生素。嗜热链球菌被广泛应用于发酵乳制品的生产中，是主要的风味物质产生菌，对酸奶的风味影响较大。作为发酵剂的嗜热链球菌发酵乳制品时有两个重要的作用：一是快速酸化凝乳；二是改善产品的质构特征。
质构特性对酸奶品质而言，是一个很重要的影响因素。酸奶的质构，包括稀稠度、粘性、粘丝性、硬度、粘聚性等。不同质构特性的酸奶可以赋予产品不同的特点和食用感觉。制作酸奶时为了得到较好的质构特性需要添加一些食品添加剂，然而目前消费者对于食品安全关注越来越高，对于无添加酸奶的需求日益提高，因此开发一株能够改善酸奶质构的菌株从而替代酸奶中食品添加剂的酸奶发酵剂尤为必要。
发明内容
本发明的目的，是要提供一种嗜热链球菌JMCC0024，它具有改善酸奶质构的特性。
本发明的另外一个目的，是提供一种嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，旨在从甘肃传统的发酵乳制品中采集样品，经样品富集、菌株的分离和菌株的纯化得纯培养物。
本发明还有一个目的，是提供一种嗜热链球菌JMCC0024的应用，旨在得到质构良好的酸奶。
本发明为实现上述目的，所采用的技术方案如下：
一种嗜热链球菌JMCC0024，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年12月14日，保藏号为CGMCCNO. 16940，拉丁文名称为Streptococcus thermophilus。
作为限定，它是从甘肃传统发酵乳中分离筛选出来的。
作为进一步限定，其16SrDNA序列如下：
AGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATTGCTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGACGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCT。
还有一种限定，其Phes基因序列如下：
TAAACAAATTTCCGAGATCTTGCTTCGCACTCATACAAGTCCTGTCCAAGCTCGTACACTTGATAAACATGATTTTTCTAAAGGTCCTCTTAAGATGATCTCACCAGGACGTGTTTTCCGTCGTGATACCGATGATGCGACTCACAGCCACCAGTTTCACCAAATCGAAGGTTTGGTCGTTGGTAAAAACATCTCAATGGGTGATCTGAAGGGAACGCTTGAGATGATTATTCAAAAAATGTTTGGTGCAGAACGTCGAATCCGTTTGCGTCCTTCTTACTTCCCATTCACTGAACCTTCCGTTGAGGTTGACGTGTCATGCTTCAAGTGTGGTGGTAAAGGATGTAACGTATGCAAGAATACAGGTTGGATTGAGATCCTTGGTGCTGGTATGGTTCACCCACAAGTGCTTGAGATGTCAGGTGTTGATTCTGAAGAATATTCAGGTTTTGCTTTTTGGTTTAGG。
本发明还提供了一种上述嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，它按照以下步骤顺序进行：
①采集样品
取甘肃传统发酵乳，加入生理盐水中，充分混匀，得到样品A；
其中，所述发酵乳与所述生理盐水的体积比为1:8~10；
②样品富集
取样品A，加入MRS液体培养基中，35~42℃培养64~80h，得到培养液B；
其中，所述样品A与MRS液体培养基的体积比为1:40~60；
③菌株分离筛选
取培养液B，用浓度为0.9%的无菌生理盐水10倍梯度稀释，分别为梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍，得到菌悬液C1~C5；
取MRS固体培养基，融化后，分别倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，得无菌平板，分别吸取各浓度梯度的菌悬液C1~C5各0.1mL涂布到相应的无菌平板上，置32~42℃环境下厌氧培养64~80h，观察菌落生长情况；
待平板出现典型菌落后，根据标准嗜热链球菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的单菌落D；
④菌株纯化
挑取选中的单菌落D，将菌落培养物划线接种到无菌平面上，32~42℃有氧环境培养64~80h，得单菌落E；连续培养三次，至培养基内菌落形态一致，显微镜观察菌株细胞单一后，得纯培养菌株F；接种环挑取菌落接种至液体MRS培养基内，37℃培养24h，得活化的培养物G；
⑤菌株保存
将培养物G与质量分数为50%的无菌甘油各取800μL，置于菌种保存管内，混匀后在-70℃保存，同时接种MRS固体培养基试管斜面用于临时保存。
作为上述分离纯化方法的限定，所述MRS液体培养基原料包括：
酪蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二胺、吐温-80、K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、蒸馏水；
其中酪蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二胺、吐温-80、K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、蒸馏水的用量比例关系为10g：10g：5g：20g：5g：2g：1g：2g：0.2g：0.05g：1000mL。
作为上述分离纯化方法的进一步限定， 所述MRS固体培养基为每1000mL所述MRS液体培养基中添加15g琼脂。
本发明还提供了一种上述嗜热链球菌JMCC0024的应用：所述该菌用于制备发酵乳制品。
由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比所取得的技术进步在于：
本发明的嗜热链球菌JMCC0024能够提升酸奶黏度、粘聚性、改善粉感，因此可以改善酸奶的质构，可应用于发酵乳制品的开发。
本发明适用于于制备发酵乳制品，以改善酸奶质构。
附图说明
图1为本发明实施例12中嗜热链球菌JMCC0024菌株A6发酵曲线；
图2为本发明实施例14中酸奶H的感官测评结果。
图3为本发明对比实施例中酸奶I的感官测评结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本领域的技术人员应当理解，本发明并不限于以下实施例，任何在本发明具体实施例基础上做出的改进和变化都在本发明权利要求保护的范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 一种嗜热链球菌JMCC0024
本实施例为一种嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)JMCC0024，该菌是从甘肃传统发酵乳中分离筛选出来的，并于2018年12月 14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO.16940。
其16SrDNA序列如下：
AGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATTGCTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGACGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCT。
其Phes基因序列如下：
TAAACAAATTTCCGAGATCTTGCTTCGCACTCATACAAGTCCTGTCCAAGCTCGTACACTTGATAAACATGATTTTTCTAAAGGTCCTCTTAAGATGATCTCACCAGGACGTGTTTTCCGTCGTGATACCGATGATGCGACTCACAGCCACCAGTTTCACCAAATCGAAGGTTTGGTCGTTGGTAAAAACATCTCAATGGGTGATCTGAAGGGAACGCTTGAGATGATTATTCAAAAAATGTTTGGTGCAGAACGTCGAATCCGTTTGCGTCCTTCTTACTTCCCATTCACTGAACCTTCCGTTGAGGTTGACGTGTCATGCTTCAAGTGTGGTGGTAAAGGATGTAACGTATGCAAGAATACAGGTTGGATTGAGATCCTTGGTGCTGGTATGGTTCACCCACAAGTGCTTGAGATGTCAGGTGTTGATTCTGAAGAATATTCAGGTTTTGCTTTTTGGTTTAGG。
实施例2 一种嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法
本实施例为一种嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，该分离纯化方法按照以下步骤顺序进行：
①采集样品
取甘肃传统发酵乳，加入生理盐水中，充分混匀，得到样品A1；
其中，所述发酵乳与所述生理盐水的体积比为1:9；
②样品富集
取样品A1，加入MRS液体培养基中，38℃培养72h，得到培养液B1；
其中，所述样品A1与MRS液体培养基的体积比为1:50；
③菌株分离筛选
取培养液B1，用浓度为0.9%的无菌生理盐水10倍梯度稀释，分别为梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍，得到菌悬液C11~C15；
取MRS固体培养基，融化后，分别倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，得无菌平板，分别吸取各浓度梯度的菌悬液C11~C15各0.1mL涂布到相应的无菌平板上，置38℃环境下厌氧培养72h，观察菌落生长情况；
待平板出现典型菌落后，根据标准嗜热链球菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的单菌落D1；
④菌株纯化
挑取选中的单菌落D1，将菌落培养物划线接种到无菌平面上，38℃第一次有氧环境培养72h，得单菌落E1；然后挑取单菌落E1，继续划线接种到另一无菌平板上，38℃第二次有氧环境培养72h，得单菌落G1，然后挑取单菌落G1，继续划线接种到另一无菌平板上，38℃第三次有氧环境培养72h，连续培养三次至培养基内菌落形态一致，显微镜观察菌株细胞单一后，得纯培养菌株F1；接种环挑取菌落接种至液体MRS培养基内，37℃培养24h，得活化的培养物G1；
⑤菌株保存
将活化的培养物G1与质量分数为50%的无菌甘油各取800μL，置于菌种保存管内，混匀后在-70℃保存，同时接种MRS固体培养基试管斜面用于临时保存。
本实施例所用MRS液体培养基原料包括：
酪蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二胺、吐温-80、K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、蒸馏水；
其中酪蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二胺、吐温-80、K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、蒸馏水的用量比例关系为10g：10g：5g：20g：5g：2g：1g：2g：0.2g：0.05g：1000mL。
所用MRS固体培养基为每1000mL上述MRS液体培养基中添加15g琼脂。
实施例3-8 嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法
实施例3-8分别为一种嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，与实施例2的方法基本相同，不同之处在于分离纯化过程的技术参数不同，具体参数如表1所示：
表1 实施例3-8分离纯化过程及参数
采用实施例2-8的分离纯化方法得到的嗜热链球菌JMCC0024分别记为A2-A8。
实施例9 嗜热链球菌JMCC0024菌种的细菌学基本特征
本实施例为实施例1中嗜热链球菌JMCC0024的细菌学基本特征，其基本特征如表2所示：
表2 嗜热链球菌JMCC0024的基本特征
实施例10 嗜热链球菌JMCC0024菌种的糖发酵特性
本实施例为嗜热链球菌JMCC0024菌种的糖发酵特性。其糖发酵特性的实验方法为：将实施例3的分离纯化方法得到的嗜热链球菌JMCC0024菌株A3挑取单菌落进行平板划线，37℃培养24h，传代一次，取菌悬液接种至糖发酵管中，37℃培养48h，观察颜色变化。其糖发酵特性的鉴定结果如表3所示：
表3 嗜热链球菌JMCC0024糖发酵特性的鉴定结果
注：“+”表示发酵利用；“-”表示不发酵利用。
实施例11 嗜热链球菌JMCC0024的菌种的分子生物学鉴定
将采用实施例5的分离纯化方法得到的嗜热链球菌JMCC0024菌株A5进行分子生物学鉴定，通过DNA提取、PCR扩增、16SrDNA测序，NCBI网站blast最终确定为嗜热链球菌。
其16SrDNA测序结果如下：
AGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATTGCTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGACGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCT。
其Phes基因测序结果如下：
TAAACAAATTTCCGAGATCTTGCTTCGCACTCATACAAGTCCTGTCCAAGCTCGTACACTTGATAAACATGATTTTTCTAAAGGTCCTCTTAAGATGATCTCACCAGGACGTGTTTTCCGTCGTGATACCGATGATGCGACTCACAGCCACCAGTTTCACCAAATCGAAGGTTTGGTCGTTGGTAAAAACATCTCAATGGGTGATCTGAAGGGAACGCTTGAGATGATTATTCAAAAAATGTTTGGTGCAGAACGTCGAATCCGTTTGCGTCCTTCTTACTTCCCATTCACTGAACCTTCCGTTGAGGTTGACGTGTCATGCTTCAAGTGTGGTGGTAAAGGATGTAACGTATGCAAGAATACAGGTTGGATTGAGATCCTTGGTGCTGGTATGGTTCACCCACAAGTGCTTGAGATGTCAGGTGTTGATTCTGAAGAATATTCAGGTTTTGCTTTTTGGTTTAGG。
实施例12 嗜热链球菌JMCC0024的菌种的菌株单独发酵特性
采用实施例6的分离纯化方法得到的嗜热链球菌JMCC0024菌株A6进行单独发酵，基料为生牛乳+7%白砂糖，接种量为3%，得发酵样品，将发酵样品接入pH在线监测，并保持42℃发酵50h。其发酵速度和后酸情况如图1所示。
通过图1可知，嗜热链球菌JMCC0024能在6小时内达到pH4.6以下，并且经过50h发酵后，发酵乳ph达到稳定菌保持在3.8左右，因此其发酵速度和后酸表现无明显差异且与目前的发酵剂发酵特性相似。
实施例13 嗜热链球菌JMCC0024的菌种的菌株单独发酵黏度测试
将嗜热链球菌JMCC0024菌株A2-8进行单独发酵，基料为生牛乳+7%白砂糖，接种量为3%，42℃发酵至pH4.5左右，搅拌器破乳后4℃过夜，过夜后的酸奶放置于室温4h后使用粘度计测量其粘度（转子：LV-03；转速：60rpm；结束条件：30s）各重复三次取平均值，结果如表4所示：
表4 菌株A2-8单独发酵黏度测量结果
实施例14一种质构良好的酸奶
本实施例为嗜热链球菌JMCC0024菌株A2的一种应用。以生牛乳+7%白砂糖发酵基料，每kg发酵底料添加0.8025g发酵剂，发酵剂由川秀家用酸奶16菌量贩系列发酵剂与嗜热链球菌JMCC0024菌株A2按质量比为0.8：0.0025组合而成，于42℃进行发酵5.5h，搅拌器800rpm搅拌2min，破乳后4℃过夜，即得质构良好的酸奶H。将酸奶H放置于室温4h后使用粘度计测量其粘度（转子：LV-03；转速：60rpm；结束条件：30s）；同时进行感官测评实验，感官测评指标为喜好度、香气、口中粘度、粉感、粘聚性。粘度测量结果如表5所示，感官测评结果如图2所示。
表5 酸奶H粘度测量结果
对比实施例
本实施例为采用与实施例14相同的发酵基料、制备方法、发酵剂接种量，仅发酵剂不同制得的酸奶I，本实施例发酵剂为与实施例14同一批次的川秀家用酸奶16菌量贩系列发酵剂。将酸奶I放置于室温4h后使用粘度计测量其粘度（转子：LV-03；转速：60rpm；结束条件：30s）；同时进行感官测评实验，感官测评指标为喜好度、香气、口中粘度、粉感、粘聚性。粘度测量结果如表6所示，感官测评结果如图3所示。
表6 酸奶I粘度测量结果
通过对比可知，采用本发明嗜热链球菌JMCC0024制备酸奶，发酵速度没有受到影响，同时酸奶的喜好度、香气、口中粘度、粉感、粘聚性均有提升，因此，嗜热链球菌JMCC0024具有改善酸奶质构的作用。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 石家庄君乐宝乳业有限公司
<120> 嗜热链球菌JMCC0024及分离纯化方法、应用
<130> 20181214
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1411
<212> DNA
<213> 嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)
<400> 1
agaacgctga agagaggagc ttgctcttct tggatgagtt gcgaacgggt gagtaacgcg 60
taggtaacct gccttgtagc gggggataac tattggaaac gatagctaat accgcataac 120
aatggatgac acatgtcatt tatttgaaag gggcaattgc tccactacaa gatggacctg 180
cgttgtatta gctagtaggt gaggtaatgg ctcacctagg cgacgataca tagccgacct 240
gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca 300
gtagggaatc ttcggcaatg ggggcaaccc tgaccgagca acgccgcgtg agtgaagaag 360
gttttcggat cgtaaagctc tgttgtaagt caagaacggg tgtgagagtg gaaagttcac 420
actgtgacgg tagcttacca gaaagggacg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata 480
cgtaggtccc gagcgttgtc cggatttatt gggcgtaaag cgagcgcagg cggtttgata 540
agtctgaagt taaaggctgt ggctcaacca tagttcgctt tggaaactgt caaacttgag 600
tgcagaaggg gagagtggaa ttccatgtgt agcggtgaaa tgcgtagata tatggaggaa 660
caccggtggc gaaagcggct ctctggtctg taactgacgc tgaggctcga aagcgtgggg 720
agcgaacagg attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgagtgc taggtgttgg 780
atcctttccg ggattcagtg ccgcagctaa cgcattaagc actccgcctg gggagtacga 840
ccgcaaggtt gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 900
ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcccgatgc tatttctaga 960
gatagaaagt tacttcggta catcggtgac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt 1020
cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaacccc tattgttagt tgccatcatt 1080
cagttgggca ctctagcgag actgccggta ataaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca 1140
aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggttgg tacaacgagt 1200
tgcgagtcgg tgacggcgag ctaatctctt aaagccaatc tcagttcgga ttgtaggctg 1260
caactcgcct acatgaagtc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcacgc cgcggtgaat 1320
acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacga gagtttgtaa cacccgaagt 1380
cggtgaggta accttttgga gccagccgcc t 1411
<210> 2
<211> 466
<212> DNA
<213> 嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)
<400> 2
taaacaaatt tccgagatct tgcttcgcac tcatacaagt cctgtccaag ctcgtacact 60
tgataaacat gatttttcta aaggtcctct taagatgatc tcaccaggac gtgttttccg 120
tcgtgatacc gatgatgcga ctcacagcca ccagtttcac caaatcgaag gtttggtcgt 180
tggtaaaaac atctcaatgg gtgatctgaa gggaacgctt gagatgatta ttcaaaaaat 240
gtttggtgca gaacgtcgaa tccgtttgcg tccttcttac ttcccattca ctgaaccttc 300
cgttgaggtt gacgtgtcat gcttcaagtg tggtggtaaa ggatgtaacg tatgcaagaa 360
tacaggttgg attgagatcc ttggtgctgg tatggttcac ccacaagtgc ttgagatgtc 420
aggtgttgat tctgaagaat attcaggttt tgctttttgg tttagg 466

Claims (8)

1.一种嗜热链球菌JMCC0024，其特征在于：所述嗜热链球菌JMCC0024的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年12月14日，保藏号为CGMCC NO. 16940，拉丁文名称为Streptococcusthermophilus。
2.根据权利要求1所述的嗜热链球菌JMCC0024，其特征在于：它是从甘肃传统发酵乳中分离筛选出来的。
3.根据权利要求1或2所述的嗜热链球菌JMCC0024，其特征在于，其16SrDNA序列如下：
AGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATTGCTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGACGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCT。
4.根据权利要求1或2所述的嗜热链球菌JMCC0024，其特征在于，其Phes基因序列如下：
TAAACAAATTTCCGAGATCTTGCTTCGCACTCATACAAGTCCTGTCCAAGCTCGTACACTTGATAAACATGATTTTTCTAAAGGTCCTCTTAAGATGATCTCACCAGGACGTGTTTTCCGTCGTGATACCGATGATGCGACTCACAGCCACCAGTTTCACCAAATCGAAGGTTTGGTCGTTGGTAAAAACATCTCAATGGGTGATCTGAAGGGAACGCTTGAGATGATTATTCAAAAAATGTTTGGTGCAGAACGTCGAATCCGTTTGCGTCCTTCTTACTTCCCATTCACTGAACCTTCCGTTGAGGTTGACGTGTCATGCTTCAAGTGTGGTGGTAAAGGATGTAACGTATGCAAGAATACAGGTTGGATTGAGATCCTTGGTGCTGGTATGGTTCACCCACAAGTGCTTGAGATGTCAGGTGTTGATTCTGAAGAATATTCAGGTTTTGCTTTTTGGTTTAGG。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，其特征在于，它按照以下步骤顺序进行：
①采集样品
取甘肃传统发酵乳，加入生理盐水中，充分混匀，得到样品A；
其中，所述发酵乳与所述生理盐水的体积比为1:8~10；
②样品富集
取样品A，加入MRS液体培养基中，35~42℃培养64~80h，得到培养液B；
其中，所述样品A与MRS液体培养基的体积比为1:40~60；
③菌株分离筛选
取培养液B，用浓度为0.9%的无菌生理盐水10倍梯度稀释，分别为梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍，得到菌悬液C1~C5；
取MRS固体培养基，融化后，分别倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，得无菌平板，分别吸取各浓度梯度的菌悬液C1~C5各0.1mL涂布到相应的无菌平板上，置32~42℃环境下厌氧培养64~80h，观察菌落生长情况；
待平板出现典型菌落后，根据标准嗜热链球菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的单菌落D；
④菌株纯化
挑取选中的单菌落D，将菌落培养物划线接种到无菌平面上，32~42℃有氧环境培养64~80h，得单菌落E；连续培养三次，至培养基内菌落形态一致，显微镜观察菌株细胞单一后，得纯培养菌株F；接种环挑取菌落接种至液体MRS培养基内，37℃培养24h，得活化的培养物G；
⑤菌株保存
将培养物G与质量分数为50%的无菌甘油各取800μL，置于菌种保存管内，混匀后在-70℃保存，同时接种MRS固体培养基试管斜面用于临时保存。
6.根据权利要求5所述的嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，其特征在于，所述MRS液体培养基原料包括：
酪蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二胺、吐温-80、K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、蒸馏水；
其中酪蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二胺、吐温-80、K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、蒸馏水的用量比例关系为10g：10g：5g：20g：5g：2g：1g：2g：0.2g：0.05g：1000mL。
7.根据权利要求6所述的嗜热链球菌JMCC0024的分离纯化方法，其特征在于，所述MRS固体培养基为每1000mL所述MRS液体培养基中添加15g琼脂。
8.一种如权利要求1-4中任一项所述的嗜热链球菌JMCC0024的应用，其特征在于：所述该菌用于制备发酵乳制品。
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