CN112608867B - 嗜热链球菌jmcc0029、其分离纯化方法及应用 - Google Patents

嗜热链球菌jmcc0029、其分离纯化方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株嗜热链球菌JMCC0029、其分离纯化方法及应用，该菌株是从新疆传统发酵乳制品中采集样品，经样品富集、菌株的分离和菌株的纯化得到的，该菌株已保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏号为CGMCC NO.19074。本发明提供的嗜热链球菌JMCC0029可用于制备发酵乳制品，其与嗜热链球菌JMCC0024、JMCC0028配合使用，能够在不影响发酵乳质构、发酵速度酵乳的香气（香气干净无异味）和喜好度的同时，降低起始发酵温度、提高发酵速度，从而缩短发酵时间、提高生产效率、降低生产成本。

Description

嗜热链球菌JMCC0029、其分离纯化方法及应用
技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及一种菌株、其筛选方法及应用，具体地说，嗜热链球菌JMCC0029、其分离纯化方法及应用。
背景技术
嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)是目前我国规定的可用于食品中的常用益生菌菌株之一，可广泛应用于食品发酵、工业乳酸发酵、饲料行业和医疗保健等领域，但在实际生产应用中，自然界存在的单一菌株一般不能很好地满足生产需求，尤其在发酵乳发酵过程中，需要利用不同菌株之间复杂的协同关系来生产风味佳、质构好的发酵乳。
申请号为201910344674.6的中国发明专利申请公开了一种嗜热链球菌JMCC0024及其分离纯化方法、应用，该嗜热链球菌(保藏号为CGMCC NO.16940)具有改善发酵乳质构的作用，能够代替发酵乳中的添加剂，保证发酵乳质构良好的质构。
申请号为202011344655.2的中国发明专利申请公开了一种嗜热链球菌JMCC0028、其分离纯化方法及应用，该嗜热链球菌(保藏号为CGMCC NO.19073)具有提高JMCC0024发酵乳香气和喜好度同时不影响其质构的作用。
上述两菌株在配合使用过程中，虽然产生了良好的酸奶质构、香气和感官品评喜好度，但存在起始发酵温度较高、发酵速度较慢、生产效率较低的问题。
发明内容
本发明的目的，是要提供一株嗜热链球菌JMCC0029，用于与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合使用，以在不影响发酵乳质构、香气和感官品评喜好度的同时，降低起始发酵温度、提高发酵速度，从而缩短发酵时间、提高生产效率、节约生产成本；
本发明的另外一个目的，是要提供上述嗜热链球菌JMCC0029的分离纯化方法；
本发明还有一个目的，是要提供上述嗜热链球菌JMCC0029的应用。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
一株嗜热链球菌JMCC0029，该菌菌株已保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年12月3日，保藏号为CGMCC NO.19074。
作为本发明的一种限定，所述嗜热链球菌JMCC0029的16Sr RNA序列如下：
ATACATGCAGTAGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATTGTTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGACGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTGGAGCCAGCC。
作为本发明的另一种限定，所述嗜热链球菌JMCC0029的Phes基因序列为：
GACAAGCATAACTGACTCTCAGCACTTGTGGGTGAACCATACCAGCACCAAGGATCTCAATCCAACCTGTATTCTTGCATACGTTACATCCTTTACCACCACACTTGAAGCATGACACGTCAACCTCAACGGAAGGTTCAGTGAATGGGAAGTAAGAAGGACGCAAACGGATTCGACGTTCTGCACCAAACATTTTTTGAATAATCATCTCAAGCGTTCCCTTCAGATCACCCATTGAGATGTTTTTACCAACGACCAAACCTTCGATTTGGTGAAACTGGTGGCTGTGAGTCGCATCATCGGTATCACGACGGAAAACACGTCCTGGTGAGATCATCTTAAGAGGACCTTTAGAAAAATCATGTTTATCAAGTGTACGAGCTTGGACAGGACTTGTATGAGTGCGAAGCAAGATTTCTTCGGTAATGTAGAAAGTATCTTGCATATCACGAGCCTGGATGAAGTCC。
本发明还提供了上述嗜热链球菌JMCC0029的分离纯化方法，它按照以下步骤顺序进行：
①样品采集
取新疆传统发酵乳制品，加入到生理盐水中，混合，得到采集样品；
②样品富集
取采集样品，加至MRS液体培养基中培养，得到培养液；
③菌株分离
取培养液，用无菌生理盐水将其稀释，涂布到MRS固体培养基上，置于厌氧环境下培养；
待平板出现典型菌落后，根据标准嗜热链球菌的菌落特征挑选出单菌落P；
④菌株纯化
挑取单菌落P，将其划线接种到另一MRS固体培养基上，有氧环境下培养，然后挑取该无菌平板上的单菌落Q，继续划线接种到又一新的MRS固体培养基上，如此连续培养多次，至培养基内菌落形态一致，即得所述嗜热链球菌JMCC0029菌株。
作为本发明的一种限定，在菌株纯化后，将JMCC0029菌株与无菌的50％甘油，置于菌种保存管内，混匀后在-70℃保存。
本发明也提供了上述嗜热链球菌JMCC0029的一种应用，该嗜热链球菌JMCC0029用于制备发酵乳制品。
作为本发明的一种限定，嗜热链球菌JMCC0029与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合用于制备发酵乳制品。
由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于：
(一)、本发明提供的嗜热链球菌JMCC0029与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合使用，能够在不影响发酵乳质构、香气和感官品评喜好度的同时，降低起始发酵温度、提高发酵速度，从而进一步提高生产效率，降低生产成本；
(二)、本发明提供的一种嗜热链球菌JMCC0029的分离纯化方法简单；
(三)、本发明提供的嗜热链球菌JMCC0029在其应用过程中具有良好的发酵特性(起始发酵温度较低、发酵速度快、粘度测试及感官测评良好)，与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合使用时，可有效缩短发酵时间，提高生产效率、降低生产成本，且发酵制得的发酵乳质构良好、香气干净无异味、酸度和口中粘度适宜、整体喜好度良好。
本发明用于提供一株嗜热链球菌JMCC0029，该菌株可用于制备发酵乳制品，特别适于与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合使用。
下面结合附图及具体实施例对本发明作更进一步详细说明。
附图说明
图1为实施例7中各组发酵基料的温度随发酵时间变化的曲线；
图2为实施例7中A1～A6各组发酵基料的pH随发酵时间变化的曲线；
图3为实施例7中A1、A7～A11各组发酵基料的pH随发酵时间变化的曲线。
具体实施方式
实施例1嗜热链球菌JMCC0029的分离纯化方法
嗜热链球菌JMCC0029的分离纯化方法，按照以下步骤顺序进行：
①样品采集
取25mL新疆传统发酵乳制品，加入到200mL生理盐水中，混合，得到采集样品；
②样品富集
称取10g酪蛋白胨、10g牛肉膏、6g酵母膏、20g葡萄糖、5g乙酸钠、2g柠檬酸二胺、1g吐温-80、2.2g K2HPO4、0.2g MgSO4·7H2O、0.05g MnSO4·7H2O和1000mL蒸馏水，制备MRS液体培养基；
取2mL采集样品，加入到100mL的MRS液体培养基中，38℃培养72h，得到培养液B；
③菌株分离
取1mL培养液，用无菌生理盐水将其稀释10倍，继续用无菌生理盐水分别做10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍的梯度稀释，得到不同浓度的菌悬液；
称取10g酪蛋白胨、10g牛肉膏、6g酵母膏、20g葡萄糖、5g乙酸钠、2g柠檬酸二胺、-80 1g吐温、2.2g K2HPO4、0.2g MgSO4·7H2O、0.05g MnSO4·7H2O、17g琼脂和1000mL蒸馏水，制备MRS固体培养基；
取MRS固体培养基，灭菌融化后，倒入灭菌的培养皿中制成无菌平板，待其冷却、完全凝固后，吸取0.1mL不同浓度的菌悬液分别涂布到无菌平板；
置于37℃厌氧环境下培养68h；
待平板出现典型菌落后，根据标准嗜热链球菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的单菌落P；
④菌株纯化
挑取选中的单菌落P，将其划线接种到另一无菌平板(MRS固体培养基)上，37℃有氧环境培养72h，然后挑取该无菌平板上的单菌落Q，继续划线接种到又一新的无菌平板(MRS固体培养基)上，连续培养三次至培养基内菌落形态一致，显微镜观察菌株细胞形态单一后，即获得嗜热链球菌，接种环挑取嗜热链球菌接种至液体MRS培养基内，37℃培养24h，得到最终的纯培养菌株，标记为JMCC0029；
⑤菌株保存
各取800μL纯培养菌株与无菌的50％甘油，置于菌种保存管内，混匀后在-70℃保存，同时接种MRS固体培养基试管斜面用于临时保存。
实施例2～6嗜热链球菌及其分离纯化方法
实施例2～6分别为一株嗜热链球菌及其分离纯化方法，其中分离纯化方法的具体步骤与实施例1相似，不同之处仅在于：相关参数不同，具体见表1。
表1实施例2～6分离纯化方法具体步骤及其参数
Figure BDA0002850871380000071
实施例7嗜热链球菌的发酵特性
将实施例1筛选的JMCC0029、实施例2～6筛选的菌株W2～W6、菌株JMCC0024(保藏号为CGMCC NO.16940，其在授权公告号为CN110066750B的中国发明专利中首次公开)、嗜热链球菌JMCC16(保藏号为CGMCC NO.11672，其在公开号为CN109536406A的中国发明专利中首次公开)和JMCC0028(保藏号为CGMCC NO.19703，其在申请号为202011344655.2的中国发明专利申请中首次公开)分别接种至液体MRS培养基37℃培养48h为相应的第一代菌株培养液；
分别取相应的1mL第一代1mL菌株培养液加入9mL脱脂奶中，培养16h作为相应的第二代菌株培养液；
分别取1mL相应的第二代菌株培养液加入9mL脱脂奶中，继续培养16h作为相应的第三代菌株种子液，置于-80℃冰箱冻存备用。
取相应的第三代菌株种子液分别制备发酵乳，具体操作如下：称取1kg生牛乳、70g白砂糖作为基料，接种30g相应的第三代菌株种子液(各组接种方式如表2所示)，42℃发酵6h，制备发酵乳，分别测试各组发酵乳的发酵速度、起始发酵温度、粘度测试、感官测试。
表2制备发酵乳参数一览表
Figure BDA0002850871380000081
一、起始发酵温度和发酵期间pH变化情况
将各组发酵基料(即上述1kg生牛乳、70g白砂糖作为基料，接种30g相应的第三代菌株种子液(各组接种方式如表2所示)，置于42℃恒温水浴中发酵，每6分钟检测一次发酵基料温度和pH，直至发酵基料达到42℃，并记录每组发酵基料pH到达4.5的时间。
记录A1～A12各组发酵基料温度随发酵时间变化，用于探索各组菌株的起始发酵温度，经检测发现各组发酵基料温度随时间的变化基本相同，其变化曲线如图1所示，可以看出，随着发酵时间的延长，发酵基料温度逐渐升高，在50min左右即可达到恒温水浴温度(42℃)。
图2为A1～A6各组发酵基料的pH随发酵时间变化的曲线，可以看出，随着发酵时间的延长，A1～A6各组发酵基料的pH均呈下降趋势，其中，A2、A5和A6组的pH变化较慢，A1组、A3和A4组的pH变化较快，A1组的pH变化率最大。
图3为A1、A7～A11各组发酵基料的pH随发酵时间变化的曲线，可以看出，A11组的pH变化率最大，且在24min时开始快速发酵(结合图1可知，起始发酵温度为35℃左右)；A1组pH变化率较A11组的稍有减小，但也在24min左右开始快速发酵(结合图1可知，起始发酵温度为35℃左右)；A8、A9和A10组的pH变化率较小，约在30min开始快速发酵(结合图1可知，起始发酵温度为38℃左右)；A7组的pH变化率最小，约在36min开始快速发酵(结合图1可知，起始发酵温度为40℃左右)；
表3为各组发酵基料的pH达4.5时所需要的时间，可以看出，A11组所需的时间最短(4.05小时)；A1组次之，仅需4.35小时；而A8组则需5.3小时，pH才能达到4.5；
表3发酵至pH为4.5所需时间
Figure BDA0002850871380000091
Figure BDA0002850871380000101
根据上述结果，选取发酵速率快、起始发酵温度低的JMCC0029、W3和W4作为考虑发酵速率快、起始发酵温度低的备选菌株；上述结果也说明，菌株JMCC0029在与嗜热链球JMCC0024、JMCC0028配合使用过程中，可与嗜热链球JMCC0024、JMCC0028协同作用，降低起始发酵温度、提高发酵速度；。
二、粘度测试
统计A1～A11组发酵6h后的粘度：发酵6h后采用搅拌器破乳(800rpm，2.5min)，然后置于4℃过夜，过夜后的发酵乳置于室温4h后使用粘度计测量其粘度(转子：LV-03；转速：60rpm；结束条件：30s)重复三次取平均值，各测试项的测试结果见下表：
表4粘度测试结果一览表
组别 发酵6h后的粘度测试(cP)
A1 1531
A2 1260
A3 1156
A4 998
A5 856
A6 943
A7 1496
A8 1538
A9 1569
A10 1241
A11 1472
由上表可知，A1、A8和A9组的粘度较高，A7、A11组与A8组数据相比，粘度略有下降；其他组粘度数据较差，因此选取菌株JMCC0029，作为考虑粘度的备选菌株；
由“发酵期间pH变化情况”和“粘度测试”结果可知，不同菌株在与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合使用过程中，即在发酵乳发酵过程中菌株之间存在着复杂的协同和竞争关系，从而对发酵乳的发酵过程和性状产生了不同的影响；与A8组发酵乳(以JMCC0024和JMCC0028为发酵菌株)相比，A2、A3组和A4组的菌株配合使用，虽提高了发酵乳的发酵速度但却影响了发酵乳的粘度；A7组各菌株配合使用过程中，抑制了发酵乳的发酵速度但对发酵乳粘度影响不大；A5、A6组各菌株配合使用过程中，既抑制了发酵乳的发酵速度又严重影响发酵乳的粘度；而A1组的菌株，在配合使用过程中大大提高了发酵乳的发酵速度，同时又维持了发酵乳良好的粘度。
三、感官测试
请15位专业的产品研发及乳品品鉴人员品尝A1～A11组制备的发酵乳，按照表5的感官测试评定标准对发酵乳的风味、状态进行评价，统计A1～A11组的感官评价的均值，结果如表6所示：
表5感官测试评价标准
Figure BDA0002850871380000111
表6感官测试结果一览表
Figure BDA0002850871380000112
Figure BDA0002850871380000121
由上表可以看出，发酵乳的发酵过程中不同菌株与JMCC0024和JMCC0028的组合产生了不同的感官品尝特征，其中A1、A3、A8～A11组的整体喜好度较好(在6分以上)，A1和A8组效果最佳(整体喜好度7分以上)，其粘度保持较好、发酵乳香气明显且异味较小，根据上述结果，选取菌株JMCC0029、W3，作为考虑整体喜好度的备选菌株。
综合考虑发酵速率快、起始发酵温度低、粘度保持较好、整体喜好度好等特点，将菌株JMCC0029作为所需菌株，对其进行细菌学特征测试及生物保藏。
实施例8嗜热链球菌JMCC0029的细菌学特征
一、基本特征
实施例1筛选的嗜热链球菌JMCC0029基本特征如表6所示：
表6嗜热链球菌JMCC0029基本特征
实验项目 革兰氏染色 氧化酶 细胞形态 接触酶 接触酶
实验结果 阳性 - 球状 - -
二、糖发酵特性实验
挑取嗜热链球菌JMCC0029的单菌落进行平板划线，37℃培养24h，传代一次，取菌悬液分别接种至不同的糖发酵管(糖发酵管中具体内含物见表7)中，37℃培养48h，观察颜色变化，具体结果如表7所示：
表7嗜热链球菌JMCC0029的鉴定结果
实验项目 结果 实验项目 结果 实验项目 结果
甘油 - 甘露醇 - 松三糖 -
赤藓醇 - 山梨醇 - 棉子糖 -
D-阿拉伯糖 - α-甲基-甘露糖甙 - 淀粉 -
L-阿拉伯糖 - α-甲基-葡萄糖甙 - 糖原 -
D-核糖 - N-乙酰-葡糖胺 - 木糖醇 -
D-木糖 - 苦杏仁甙 - 龙胆二糖 -
L-木糖 - 熊果甙 - D-松二糖 -
阿东醇 - 七叶灵 - D-来苏糖 -
β-甲基-D-木糖甙 - 水杨苷 - D-塔格糖 -
D-半乳糖 - 纤维二糖 - D-岩藻糖 -
D-葡萄糖 + 麦芽糖 - L-岩藻糖 -
D-果糖 - 乳糖 + D-阿拉伯糖醇 -
D-甘露糖 - 蜜二糖 - L-阿拉伯糖醇 -
L-山梨糖 - 蔗糖 + 葡萄糖酸盐 -
L-鼠李糖 - 海藻糖 - 2-酮基-葡萄糖酸盐 -
卫茅醇 - 菊糖 - 肌醇 -
注：“+”表示发酵利用；“-”表示不发酵利用。
三、分子生物学鉴定
将实施例1筛选的嗜热链球菌JMCC0029菌株进行分子生物学鉴定，通过DNA提取、PCR扩增、16SrRNA测序，NCBI网站blast最终确定为嗜热链球菌。
嗜热链球菌JMCC0029的16Sr RNA序列如下：
ATACATGCAGTAGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATTGTTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGACGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTGGAGCCAGCC
嗜热链球菌JMCC0029的Phes基因序列为：
GACAAGCATAACTGACTCTCAGCACTTGTGGGTGAACCATACCAGCACCAAGGATCTCAATCCAACCTGTATTCTTGCATACGTTACATCCTTTACCACCACACTTGAAGCATGACACGTCAACCTCAACGGAAGGTTCAGTGAATGGGAAGTAAGAAGGACGCAAACGGATTCGACGTTCTGCACCAAACATTTTTTGAATAATCATCTCAAGCGTTCCCTTCAGATCACCCATTGAGATGTTTTTACCAACGACCAAACCTTCGATTTGGTGAAACTGGTGGCTGTGAGTCGCATCATCGGTATCACGACGGAAAACACGTCCTGGTGAGATCATCTTAAGAGGACCTTTAGAAAAATCATGTTTATCAAGTGTACGAGCTTGGACAGGACTTGTATGAGTGCGAAGCAAGATTTCTTCGGTAATGTAGAAAGTATCTTGCATATCACGAGCCTGGATGAAGTCC。
将嗜热链球菌JMCC0029保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年12月3日，保藏号为CGMCCNO.19074，该菌株具有良好的发酵特性(起始发酵温度较低、发酵速度快、粘度测试及感官测评良好)，与JMCC0024和JMCC0028配合使用时，可以在不影响发酵乳质构、香气和感官品评喜好度的同时，降低起始发酵温度、提高发酵速度，从而缩短发酵时间、降低生产成本。
需要说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域技术人员来说，其依然可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明权利要求保护的范围之内。
序列表
<110> 石家庄君乐宝乳业有限公司
<120> 嗜热链球菌JMCC0029、其分离纯化方法及应用
<130> 2020
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1417
<212> DNA
<213> Streptococcus thermophilus
<400> 1
atacatgcag tagaacgctg aagagaggag cttgctcttc ttggatgagt tgcgaacggg 60
tgagtaacgc gtaggtaacc tgccttgtag cgggggataa ctattggaaa cgatagctaa 120
taccgcataa caatggatga cacatgtcat ttatttgaaa ggggcaattg ttccactaca 180
agatggacct gcgttgtatt agctagtagg tgaggtaatg gctcacctag gcgacgatac 240
atagccgacc tgagagggtg atcggccaca ctgggactga gacacggccc agactcctac 300
gggaggcagc agtagggaat cttcggcaat gggggcaacc ctgaccgagc aacgccgcgt 360
gagtgaagaa ggttttcgga tcgtaaagct ctgttgtaag tcaagaacgg gtgtgagagt 420
ggaaagttca cactgtgacg gtagcttacc agaaagggac ggctaactac gtgccagcag 480
ccgcggtaat acgtaggtcc cgagcgttgt ccggatttat tgggcgtaaa gcgagcgcag 540
gcggtttgat aagtctgaag ttaaaggctg tggctcaacc atagttcgct ttggaaactg 600
tcaaacttga gtgcagaagg ggagagtgga attccatgtg tagcggtgaa atgcgtagat 660
atatggagga acaccggtgg cgaaagcggc tctctggtct gtaactgacg ctgaggctcg 720
aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg 780
ctaggtgttg gatcctttcc gggattcagt gccgcagcta acgcattaag cactccgcct 840
ggggagtacg accgcaaggt tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900
gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga catcccgatg 960
ctatttctag agatagaaag ttacttcggt acatcggtga caggtggtgc atggttgtcg 1020
tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ctattgttag 1080
ttgccatcat tcagttgggc actctagcga gactgccggt aataaaccgg aggaaggtgg 1140
ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggttg 1200
gtacaacgag ttgcgagtcg gtgacggcga gctaatctct taaagccaat ctcagttcgg 1260
attgtaggct gcaactcgcc tacatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcacg 1320
ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttgta 1380
acacccgaag tcggtgaggt aacctttgga gccagcc 1417
<210> 2
<211> 467
<212> DNA
<213> Streptococcus thermophilus
<400> 2
gacaagcata actgactctc agcacttgtg ggtgaaccat accagcacca aggatctcaa 60
tccaacctgt attcttgcat acgttacatc ctttaccacc acacttgaag catgacacgt 120
caacctcaac ggaaggttca gtgaatggga agtaagaagg acgcaaacgg attcgacgtt 180
ctgcaccaaa cattttttga ataatcatct caagcgttcc cttcagatca cccattgaga 240
tgtttttacc aacgaccaaa ccttcgattt ggtgaaactg gtggctgtga gtcgcatcat 300
cggtatcacg acggaaaaca cgtcctggtg agatcatctt aagaggacct ttagaaaaat 360
catgtttatc aagtgtacga gcttggacag gacttgtatg agtgcgaagc aagatttctt 420
cggtaatgta gaaagtatct tgcatatcac gagcctggat gaagtcc 467

Claims (3)

1.一株嗜热链球菌JMCC0029，该菌菌株已保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏号为CGMCC NO.19074，拉丁文名称为Streptococcus thermophilus。
2.根据权利要求1所述的嗜热链球菌JMCC0029的一种应用，其特征在于:所述嗜热链球菌JMCC0029用于制备发酵乳制品。
3.权利要求2所述的嗜热链球菌JMCC0029的应用，其特征在于:所述嗜热链球菌JMCC0029与嗜热链球菌JMCC0024和JMCC0028配合，用于制备发酵乳制品；所述嗜热链球菌JMCC0024的保藏号为CGMCC NO.16940，所述嗜热链球菌JMCC0028的保藏号为CGMCCNO.19073。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109536406B (zh) * 2018-12-06 2022-05-13 君乐宝乳业集团有限公司 弱后酸化的嗜热链球菌jmcc16、分离纯化方法及应用
CN113215053B (zh) * 2021-05-31 2023-01-17 内蒙古农业大学 一种嗜热链球菌imau 80287y菌株及其应用、酸奶及其制备方法
CN114196568B (zh) * 2021-10-20 2022-10-18 君乐宝乳业集团有限公司 嗜热链球菌jmcc0032及其应用
CN114196566B (zh) * 2021-10-20 2023-08-29 君乐宝乳业集团有限公司 嗜热链球菌jmcc0033及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003245907A1 (en) * 2002-06-03 2003-12-19 Vrije Universiteit Brussel Streptococcus thermophilus strain producing exopolysaccharide
CN106434461A (zh) * 2016-10-12 2017-02-22 内蒙古农业大学 一株嗜热链球菌菌株及其用途
CN109576175A (zh) * 2018-12-06 2019-04-05 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0022、其分离纯化方法及应用
CN110066750A (zh) * 2019-04-26 2019-07-30 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003245907A1 (en) * 2002-06-03 2003-12-19 Vrije Universiteit Brussel Streptococcus thermophilus strain producing exopolysaccharide
CN106434461A (zh) * 2016-10-12 2017-02-22 内蒙古农业大学 一株嗜热链球菌菌株及其用途
CN109576175A (zh) * 2018-12-06 2019-04-05 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0022、其分离纯化方法及应用
CN110066750A (zh) * 2019-04-26 2019-07-30 石家庄君乐宝乳业有限公司 嗜热链球菌jmcc0024及分离纯化方法、应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一株酸奶发酵嗜热链球菌的筛选及特性研究;官雪芳等;《西北农业学报》;20181231(第01期);全文 *
传统乳制品来源乳酸菌的发酵特性及其在酸奶中的应用;曹永强等;《食品工业科技》;20170401(第07期);全文 *

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