CN106085901A - 一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌及其应用 - Google Patents
一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌CGMCC No.12227及其应用，属于微生物学领域。所述植物乳杆菌具有如下特性：(1)具有一定耐酸能力，在酸性环境(pH 4.0～6.0)下生长良好；(2)具有一定耐盐能力，在2％‑6％盐浓度下生长良好；(3)细胞自溶度较高；(4)菌株产酸能力不强；(5)菌株产双乙酰能力较高；(6)细胞内双乙酰分解能力较弱。本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227可用于发酵食品，能够有效提高产品中双乙酰的含量，且对产品感官品质特性具有一定的改善作用，因此应用前景非常广泛。
Description
技术领域
本发明属于食品微生物技术领域，具体涉及一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌及其应用。
背景技术
双乙酰能够赋予发酵食品奶香风味，对发酵制品整体风味的平衡起促进作用。拥有奶香风味的发酵食品深受消费者的喜爱，因此通过提高发酵食品中的双乙酰含量而加强其奶香风味具有良好的应用前景。
研究发现，发酵乳制品、豆制品和果蔬制品中双乙酰主要是通过微生物的柠檬酸代谢途径合成。柠檬酸在柠檬酸裂解酶的作用下生成草酰乙酸，草酰乙酸在草酰乙酸脱羧酶的作用下生成丙酮酸，部分丙酮酸在α-乙酰乳酸合成酶作用下在合成α-乙酰乳酸，然后α-乙酰乳酸在α-乙酰乳酸脱羧酶作用下转化为乙偶姻，α-乙酰乳酸通过无酶氧化脱羧反应生成双乙酰，双乙酰由双乙酰还原酶作用转化为乙偶姻，乙偶姻在乙偶姻还原酶作用转化为2,3-丁二醇。在柠檬酸代谢途径中α-乙酰乳酸通过无酶氧化脱羧反应生成双乙酰，但是α-乙酰乳酸不稳定，易在α-乙酰乳酸脱羧酶的作用下生成乙偶姻，并且这步反应不可逆。双乙酰在双乙酰还原酶作用下易被还原为乙偶姻。综上可知，柠檬酸代谢生成双乙酰的途径涉及的关键酶是：α-乙酰乳酸脱羧酶、双乙酰还原酶、乙偶姻还原酶。
微生物合成双乙酰的能力存在差异(邵亚东.传统发酵乳制品中乳酸菌产双乙酰特性的研究[D].内蒙古农业大学,2007)，郑应福(郑应福,阚振荣,赵春海.高产双乙酰乳球菌的研究进展[J].中国生物工程杂志,中国生物工程杂志,2005,25(S1):186-189(S1):186-189)等人和Crow(Crow V L.Properties of 2,3-Butanediol Dehydrogenases fromLactococcus lactis subsp.lactis in Relation to Citrate Fermentation.[J].Applied&Environmental Microbiology,1990,56(6):1656-65)等人研究表明拥有双乙酰合成能力的菌株具有较低α-乙酰乳酸脱羧酶、双乙酰还原酶和乙偶姻酶活力。然而，现有技术中未见涉及具有较高的双乙酰合成能力的植物乳杆菌，以及将其应用于改善产品感官特性的实例；因此，目前还需要一种双乙酰的合成能力较高、从而增强产品奶香风味的乳酸菌及相关食品。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明人在总结现有技术的基础上，通过大量实验研究，筛选得到一株具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌，并且将其应用于发酵剂、发酵乳、发酵果蔬制品和发酵豆制品等发酵食品中，提高发酵食品中的双乙酰含量，以增强其奶香风味。
本发明的第一个目的是提供一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM 601，该菌株是从我国新疆的发酵食品中筛选出的。该菌于2016年3月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12227，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
所述的植物乳杆菌CGMCC No.12227具有下述性质：
(1)具有耐酸能力，在酸性(pH为4.0～6.0)环境下生长良好；
(2)具有耐盐能力，在2％-6％盐浓度下生长良好；
(3)细胞自溶度较高，24h时达到20.18±0.14％；
(4)菌株产酸能力不强，24h后pH变化为0.97±0.01；
(5)菌株产双乙酰能力高，达到10.69±0.07mg/L；
(6)细胞内双乙酰分解能力弱，α-乙酰乳酸脱羧酶为0.23±0.00μmol乙偶姻·min-1·g-1，双乙酰还原酶活为0.10±0.01μmol NADH·min-1·g-1，乙偶姻还原酶活为0.02±0.01μmol NADH·min-1·g-1。
本发明的第二个目的是提供一种含有所述植物乳杆菌CGMCC No.12227的发酵剂及其应用。
所述发酵剂，在本发明的一种实施方式中，为直投式发酵剂。
所述直投式发酵剂，在本发明的一种实施方式中，是将植物乳杆菌CGMCCNo.12227活化、培养至活菌数达到108cfu/mL以上，然后通过离心、缓冲液清洗、添加冻干保护剂，调整细胞浓度至109cfu/mL以上，进行真空冷冻干燥，冻干后即得直投式发酵剂。
所述直投式发酵剂，在本发明的另一种实施方式中，是将含有植物乳杆菌CGMCCNo.12227的菌液通过真空冷冻干燥处理制备的粉剂，它含有109cfu/g以上的活性植物乳杆菌CGMCC No.12227。
本发明的第三个目的是提供所述植物乳杆菌CGMCC No.12227在制备发酵食品中的应用。
所述发酵食品，在本发明的一种实施方式中，包括：乳制品、果蔬制品、豆制品。
所述乳制品，在本发明的一种实施方式中，包括酸奶、酸奶油、活性乳酸菌乳饮料、发酵乳等。
所述果蔬制品，在本发明的一种实施方式中，包括果蔬饮料、酵素以及发酵的胡萝卜、黄瓜、甜菜、芹菜等制品。
所述豆制品，在本发明的一种实施方式中，包括酸豆奶、豆腐乳、豆豉、豆酱等。
所述植物乳杆菌CGMCC No.12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种实施方式中，是在生产发酵乳制品、果蔬制品和豆制品的常规生产过程中，将植物乳杆菌CGMCCNo.12227按照常规使用量接种到待处理的原料中，在能够使所述植物乳杆菌CGMCCNo.12227繁殖的温度、压力下进行发酵或存活。植物乳杆菌CGMCC No.12227的加入，其代谢产物使发酵制品具有一定的酸度、香味等优异特性，同时延长了产品保藏时间，改善了产品营养价值和消化性。
所述植物乳杆菌CGMCC No.12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选的实施方式中，是用于制备活性乳酸菌乳饮料；具体是：原料乳经过巴氏杀菌处理后冷却，分别将保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和植物乳杆菌CGMCC No.12227的菌液按照3％-5％(v/v)的添加量添加到原料乳中，然后在42℃下发酵4-6h，冷却搅拌并加入稳定剂、抗氧化剂等配料，均质后包装，即得活性乳酸菌乳饮料。
所述植物乳杆菌CGMCC No.12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选的实施方式中，是用于制备果蔬饮料；具体是：将新鲜水果蔬菜洗净后榨汁，经过高温瞬间灭菌后降温至30-42℃，再接入植物乳杆菌CGMCC No.12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/mL以上，冷藏，即得果蔬饮料。
所述植物乳杆菌CGMCC No.12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选的实施方式中，是用于制备酸豆奶；具体是：浸泡大豆、去除大豆皮、沥去浸泡水，然后磨浆并保温一段时间，筛网过滤后通过离心分离得到粗豆奶，再将粗豆奶加热到140-150℃后迅速抽真空，再降温至30-42℃，然后添加植物乳杆菌CGMCC No.12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/ml以上，冷藏，即得酸豆奶。
所述植物乳杆菌CGMCC No.12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选的实施方式中，是用于制备发酵乳；具体是：向原料乳中加入8％-12％(w/w)的蔗糖并搅拌溶解，然后将乳化稳定剂溶解后按乳体积0.3％加入乳中，在18-22MPa下进行均质，再按照乳体积计3％-5％向乳中分别接入保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌CGMCCNo.12227，在30-42℃下进行发酵，发酵6-8h至凝乳，将凝乳后的酸乳放置成熟，即得发酵乳。
上述原料乳的来源是新鲜牛奶。
所述植物乳杆菌的培养，在本发明的一种实施方式中，是37℃下静置培养。
所述植物乳杆菌的培养，在本发明的另一种实施方式中，是使用MRS培养基进行培养。
本发明的有益效果是：
1、本发明方法安全健康：本发明中应用的植物乳杆菌CGMCC No.12227是可用于食品的安全菌株，制备方法中也没有添加其他化学物质，安全健康。
2、本发明所提供的植物乳杆菌CGMCC No.12227能有效提高发酵制品中双乙酰物质的含量，从而对产品感官品质特性具有一定的改善作用。
附图说明
图1：植物乳杆菌CGMCC No.12227在不同pH条件和不同浓度的盐条件下的生长情况；
图2：植物乳杆菌CGMCC No.12227的自溶度；
图3：添加植物乳杆菌CGMCC No.12227的活性乳酸菌乳饮料中双乙酰含量；
图4：添加植物乳杆菌CGMCC No.12227的活性乳酸菌乳饮料的感官评定结果。
具体实施方式
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：植物乳杆菌CGMCC No.12227的菌种培养方法
MRS平板纯化分离：无菌操作接种环挑取植物乳杆菌CGMCC No.12227，在灭菌的MRS平板上划线，将平板置于37℃培养箱中培养48h后，挑取单菌落进行镜检，实现菌株的纯化分离。
菌株活化：从-80℃冰箱中取出冻藏菌株，融化后取100微升菌液接种于灭菌的MRS液体培养基中，在温度37℃下生长18h，划线，在固体MRS中37℃下培养48h，挑选单菌落接种于灭菌的MRS液体培养基，活化三代后进行实验。
MRS液体培养基组成：20g葡萄糖、10g牛肉膏、10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g乙酸钠、2g磷酸氢二钾、2g柠檬酸二胺、1g吐温80、0.1g硫酸镁、0.05g硫酸锰与1000mL蒸馏水，pH6.2-6.4，该培养基在115℃下灭菌20min。MRS固体培养基需再添加15-20g琼脂条。
培养条件：厌氧条件下静置培养。
实施例2：植物乳杆菌CGMCC No.12227对不同pH值的耐受性实验
将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227接种于MRS液体培养基中，在37℃下培养24h，传代培养2-3次，取菌液200μL接种于10.0mL pH值分别为4.0、5.0、6.0的MRS液体培养基后，在37℃下培养24h，测定不同酸性环境下植物乳杆菌CGMCC No.12227的OD600值，实验结果如图1所示。由图1可知，植物乳杆菌CGMCC No.12227在pH4.0的酸性条件下能维持生长，具有较好的耐酸能力。
实施例3：植物乳杆菌CGMCC No.12227对不同浓度盐溶液的耐受性实验
将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227接种于MRS液体培养基中，在37℃下培养24h，传代培养2-3次，取菌液200μL接种于10.0mL盐浓度分别为2％、4％、6％的MRS液体培养基后，在37℃下培养24h，测定不同盐浓度环境下植物乳杆菌CGMCC No.12227的OD600值，实验结果如图1所示。由图1可知，植物乳杆菌CGMCC No.12227在盐浓度为6％的条件下仍能生长，具有较好的耐盐能力。
实施例4：植物乳杆菌CGMCC No.12227的细胞自溶度实验
将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227接种于MRS液体培养基中，在37℃下培养24h，传代培养2-3次，将菌液按照2％(v/v)的接种量接入MRS液体培养基中增殖培养12h，将菌体培养液冷冻离心(5000g，15min，4℃)，用0.05mol/L的pH 7.0的PBS缓冲液清洗菌体并进行重悬，调整初始OD600为1.0左右，用PBS缓冲液作为空白试剂调零。将悬浮液和空白试剂放置在30℃下24h，在600nm处分别测定初始、24h的吸光度，分别记作OD0，OD24。菌体自溶度计算方法如下：自溶度(％)＝OD0-OD24/OD0×100％。
将本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227与其他菌株(从传统发酵食品中分离得到的Lactobacillus plantarum CCFM 309、Lactococcus lactis cremoris CCFM 223、Lactobacillus sp.CCFM 608)进行自溶度比较，实验结果如图2所示。由图2可知，植物乳杆菌CGMCC No.12227在30℃条件下培养24h后细胞自溶度为20.18％，故该株菌具有高的自溶度，自溶度较高的菌株可快速释放出胞内蛋白酶，加快产物的代谢。
实施例5：植物乳杆菌CGMCC No.12227的产酸能力实验
将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227接种于MRS液体培养基中，在37℃下培养24h，传代培养2-3次，将菌液按照2％(V/V)的接种量接入脱脂乳中进行增殖培养18h，测定脱脂乳培养基的pH(pH1)和脱脂乳培养基的初始pH(pH0)，以ΔpH＝pH0-pH1计算得到菌株的产酸能力，结果见表1。实验结果(表1)表明，培养18h后，pH变化了0.97±0.01，故该株菌产酸能力不强。
表1乳酸菌产酸能力
实施例6：植物乳杆菌CGMCC No.12227的产双乙酰能力实验
(1)建立双乙酰标准曲线
配置双乙酰标准溶液：用微量进样器吸取15μL双乙酰标准品，溶于蒸馏水中，并定容至500mL。取12支编号的试管分成2排放置，并分别加0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL的标准溶液各2支，分别用蒸馏水补足10mL，取5.0mL上述双乙酰标准溶液加入8％的三氯乙酸溶液，这样双乙酰标准溶液的浓度分别为0.0μg/mL、3.0μg/mL、6.0μg/mL、9.0μg/mL、12.0μg/mL、15.0μg/mL。第一排试管中添加0.5mL 1％的邻苯二胺溶液，第二排作为空白对照不添加邻苯二胺溶液；摇匀后置于黑暗处中30min，加入4.0mol/L盐酸以终止反应，第一排试管加2.0mL，第二排试管加2.5mL，混匀后以第二排试管作为空白参照，测定335nm波长下的吸光度值。以双乙酰的浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。
(2)测定样品中双乙酰浓度：
菌株在MRS中活化培养三代，将菌体培养液以2％(v/v)的接种量接入10％(w/v)的脱脂培养基，37℃培养24h。将发酵乳液用等体积8％的三氯乙酸的混合后，4500rpm，10min，4℃离心，取上清液再用滤纸过滤一遍，分别取10mL澄清液加入两支试管，第一支添加0.5ml1％的邻苯二胺，第二支试管不加作为空白对照，混匀后，于黑暗处反应30min后，第一支试管加2ml的4mol/L的盐酸终止反应，第二支加2.5ml的4mol/L的盐酸，混匀后，测定335nm波长下的吸光度值。结果见表2，CCFM 309作为对照菌株。实验结果表明，植物乳杆菌CGMCCNo.12227产双乙酰能力较强，有利于提高发酵食品中的双乙酰含量。
表2菌株产双乙酰能力
实施例7：植物乳杆菌CGMCC No.12227的细胞内双乙酰分解能力实验
(1)无细胞提取物的制备(CFE)
将菌株在MRS培养基中活化培养三代，取菌体培养液在5000g，4℃下离心15min，所得的菌体用PBS(磷酸盐缓冲液)清洗两次后，重悬于0.05mol/L的pH 7.0磷酸钠缓冲液中，调整初始OD 600nm为0.5左右。再利用超声波细胞破碎仪进行细胞破碎。超声波细胞破碎条件：超声工作5s，停止5s，破碎时间为20min，超声工作功率为40％。将破碎后的细胞于10000g，4℃下冷冻离心10min，收集上清液，即得菌体无细胞提取液(CFE)，放置于-80℃下备用。每次使用CFE时都需要采用考马斯亮蓝G-250方法测定蛋白质浓度及蛋白标准曲线。
(2)α-乙酰乳酸脱羧酶活力的测定
反应体系总体积1mL，包括200mM pH 6.0的磷酸钠缓冲液，2-5mg CFE，反应通过添加300mMα-乙酰乳酸开始，分别在反应时间0、15min时测定生成的乙偶姻浓度，一个单位酶活性表征为1μmol乙偶姻/min，得到α-乙酰乳酸脱羧酶活为每分钟每克蛋白0.23±0.00微摩尔乙偶姻。
(3)双乙酰还原酶活力的测定
反应体系总体积300μL，包括3.9mM的双乙酰，0.039mM的NADH，CFE100μL，27mM的pH6.0的磷酸钠缓冲液，37℃下反应30min，在340nm波长下测吸光度，得到双乙酰还原酶为每分钟每克蛋白0.10±0.01微摩尔NADH。
(4)乙偶姻还原酶活力的测定
反应体系总体积(300μL)，包括3.9mM的乙偶姻，0.039mM的NADH，CFE 100μL，27mM的pH 6.0的磷酸钠缓冲液，37℃下反应30min，在340nm波长下测吸光度，得到乙偶姻还原酶活为每分钟每克蛋白0.02±0.00微摩尔NADH。
实验结果(表3)表明，植物乳杆菌CGMCC No.12227具有较低的α-乙酰乳酸脱羧酶、双乙酰还原酶和乙偶姻酶活力，有利于减慢双乙酰的代谢，提高发酵食品中的双乙酰含量，以增强其奶香味。
表3菌株酶活能力
以上数据表明，本发明的植物乳杆菌具有独特的优良性质：(1)具有耐酸性，在低pH下生长良好；(2)具有耐盐能力，在高盐浓度下生长良好；(3)细胞自溶度较高；(4)产酸能力不强；(5)细胞内产双乙酰能力高；(6)细胞内双乙酰分解能力弱。以上特性有利于菌株在发酵食品中保持一定浓度，并合成较高含量的双乙酰，增强发酵食品的奶香味。
应用实施例1：利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227制备直投式发酵剂
植物乳杆菌CGMCC No.12227按照2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃下培养20-24h，使得植物乳杆菌CGMCC No.12227活菌数达到108cfu/mL以上，离心(4000rpm，10min，4℃)，用pH 7.0的PBS缓冲液冲洗沉淀2次后，加入脱脂乳和甘油作为冻干保护剂，调整细胞浓度至109cfu/mL，混合均匀后进行真空冷冻干燥，冻干后即得所述的植物乳杆菌CGMCC No.12227直投式发酵剂。
应用实施例2：利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227制备活性乳酸菌乳饮料
原料乳经过巴氏杀菌处理后冷却至42℃，按照3％-5％(v/v)的添加量向乳中分别接入保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和植物乳杆菌CGMCC No.12227(三种菌株菌液的体积比为1:1:1)，然后在42℃下发酵4-6h，冷却搅拌并加入稳定剂、抗氧化剂，均质后包装，即得含本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227活菌的活性乳酸菌乳饮料。其中，所述稳定剂为高酯果胶、单硬脂酸甘油酯，抗氧化剂为抗坏血酸。
选择实验室保存的从传统发酵食品中分离得到的Lactobacillus plantarumCCFM 309作为对照菌株，按照上述步骤接入CCFM 309，对添加植物乳杆菌CGMCC No.12227和CCFM 309的两种活性乳酸菌乳饮料进行双乙酰含量的测定以及感官评定，结果分别见图3和图4。图3表明：添加植物乳杆菌CGMCC No.12227的活性乳酸菌乳饮料中双乙酰含量上升，图4表明：添加有植物乳杆菌CGMCC No.12227的活性乳酸菌乳饮料的奶香味、喜好度等增强，风味明显得到改善。
应用实施例3：利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227制备果蔬饮料
将新鲜水果蔬菜洗净后榨汁，在温度140℃下高温热杀菌2秒后立即降温到37℃左右，再接入植物乳杆菌CGMCC No.12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/mL以上，在温度4℃下冷藏，即得含本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227活菌的果蔬饮料。
应用实施例4：利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227制备酸豆奶
用软水在温度80℃下浸泡大豆2h，再去除大豆皮，然后沥去浸泡水后加沸水磨浆，并在高于80℃下保温12min。将得到的浆料用150目筛网过滤，然后进行离心处理，得到的离心液即为粗豆奶，再将其加热到140-150℃并迅速导入真空冷却室进行抽真空，然后将温度降至约37℃，再接入本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/ml以上，在温度4℃下冷藏保存，得到含本发明植物乳杆菌CGMCC No.12227活菌的酸豆奶。应用实施例5：利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227制备发酵乳
原料乳购自于无锡天资乳业的合格的标准化原料乳。向原料乳中加入10％(w/w)的蔗糖并搅拌溶解，然后将乳化稳定剂溶解后按乳体积0.3％加入乳中，在20MPa下进行均质，再按照乳体积计3％-5％向乳中分别接入保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌CGMCC No.12227(三种菌株菌液的体积比为1:1:1)，在37℃下进行发酵，发酵8h至凝乳，将凝乳后的酸乳放置4℃成熟24h后，即得所述的发酵乳。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，该菌株已于2016年3月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12227，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
2.含有权利要求1所述的植物乳杆菌CGMCC No.12227的发酵剂。
3.根据权利要求2所述的发酵剂，其特征在于，所述发酵剂为直投式发酵剂，具体制备方法如下：将植物乳杆菌CGMCC No.12227活化培养至活菌浓度达到108cfu/mL以上，然后通过离心、缓冲液清洗、添加冻干保护剂，调整活菌浓度至109cfu/mL以上，进行真空冷冻干燥，冻干后即得直投式发酵剂。
4.根据权利要求2或3所述的发酵剂的应用。
5.根据权利要求1所述的植物乳杆菌CGMCC No.12227的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用具体是在制备发酵食品中的应用，所述发酵食品是乳制品、果蔬制品、豆制品。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述乳制品包括酸奶，酸奶油，活性乳酸菌乳饮料或发酵乳；所述果蔬制品包括果蔬饮料，酵素，发酵胡萝卜、黄瓜、甜菜或芹菜制品；所述豆制品包括酸豆奶、豆腐乳、豆豉或豆酱。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述活性乳酸菌乳饮料的制备方法是：原料乳经过巴氏杀菌处理后冷却，按照以原料乳的体积计3％-5％的添加量分别添加保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和植物乳杆菌CGMCC No.12227到原料乳中，在42℃下发酵4h-6h，冷却搅拌并加入其它配料，均质、包装，即得活性乳酸菌乳饮料。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述果蔬饮料的制备方法是：将新鲜水果蔬菜洗净之后榨汁，经过高温瞬间灭菌后降温至30℃-42℃，再接入植物乳杆菌CGMCCNo.12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/mL以上，冷藏，即得果蔬饮料。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述酸豆奶的制备方法是：浸泡大豆、去除大豆皮、沥去浸泡水，然后磨浆并保温一段时间，筛网过滤后通过离心分离得到粗豆奶，再将粗豆奶加热到140℃-150℃后迅速抽真空，再降温至30℃-42℃，然后添加植物乳杆菌CGMCC No.12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/ml以上，冷藏，即得酸豆奶。
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