CN105324669A - 用于检测rsv的免疫层析装置 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种在层析介质的判定部位上使用了与RSV的F蛋白特异性结合的抗体、RSV的简便且高灵敏度的免疫层析装置以及利用免疫层析法的检测用试剂盒,以及使用了它们的RSV的检测方法。本发明涉及在层析介质的判定部位上不仅使与RSV的F蛋白特异性结合的抗体固定,还使与RSV的N蛋白特异性结合的抗体固定化的免疫层析装置和利用免疫层析法的检测用试剂盒,以及使用了它们的RSV检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及特异性识别呼吸道合胞体病毒(RSV)的F蛋白的抗体和特异性识别N蛋白的抗体被固定化的免疫层析装置、以及含有该装置从而形成的RSV的检测用试剂盒。
背景技术
RSV是呼吸道感染症的致病病毒,并且在以下方面具有特征:被病毒感染的细胞形成多核巨细胞(合胞体)。RSV与年龄无关,是在一生中都会引起感染的病毒,但特别是在婴幼儿时期,是成为引起非常严重的症状的原因的病原体。出生后1年以内50~70%以上的婴儿感染该病毒,到3岁为止,几乎全部的幼儿获得了抗体,而出生后数周至数月的期间内的感染最会引起严重的症状。对出生体重低的婴儿或免疫不健全、有心肺类基础疾病的幼儿而言,病情严重化的风险进一步提高。据报道由RSV感染引起的致死率为1~3%,但根据不同情况有相当的差异,并且据1980年代报道,在对心脏有基础疾病的幼儿的住院例的研究中,致死率达37%。
RSV感染症在世界各地均有报道,并且未见地理的、气候的差异。特征在于,在任意区域中,幼弱的婴幼儿均会重症化,并且尤其是在都市中每年均会反复流行。
据报道,RSV感染症约占婴幼儿肺炎诱因的50%,占毛细支气管炎诱因的50~90%。由肺炎、毛细支气管炎等下呼吸道疾病而导致的幼儿的住院数与其说是与流感,不如说是与RSV感染症的流行高峰相一致。据观察流行期内年长儿童和成人中RSV的再次感染是普遍的,但与婴幼儿中的重症化相比,年长儿童和成人中多数情况较轻,仅呈现轻度的感冒样症状。
已知RSV在环境下较不稳定,而在家庭中会高效地感染传播。将病毒带入家庭内的多数是表现出轻度症状的学龄儿童,有报道说有学龄儿童和婴幼儿的家庭中,在流行期,44%的家庭内经历了RSV的感染传播。作为感染的途径,主要是大的呼吸道飞沫、以及通过被来自呼吸道的分泌物污染的手指或物品的接触,尤其经由密切接触而发生。因此,为了预防婴幼儿的感染,极为重要的是,其家庭正确把握有无RSV感染(无论症状的程度),并在确认感染的情况下,避免与婴幼儿接触,并防止分泌物污染。
从RSV感染、特别是对婴幼儿感染的预防和治疗的观点来看,人们期望简便且灵敏度更高的迅速诊断试剂盒。对于感染了RSV的婴幼儿,希望尽可能在早期开始适当的治疗,因此需要一方面在短时间内能得到检查结果、另一方面即使在感染初期病毒量很少的时期也不会成为假阴性的高灵敏度的检测试剂盒。另外,在婴幼儿的家人表现出感冒症状、疑似RSV感染的情况下,需要检查有无RSV感染且对身体和经济负担小的简易检查方法。
作为满足这样要求的简便且高灵敏度的迅速诊断试剂盒,开发了利用免疫层析法的RSV检测试剂盒。目前,已知多种可用于检测病毒抗原并辅助诊断RSV感染症的利用免疫层析法的检测试剂盒,但那些试剂盒均使用针对RSV的F蛋白的抗体(专利文献1~3)。
RSV的F蛋白是存在于RSV表面的2种主要的糖蛋白中的一种。病毒表面除F蛋白以外还存在G蛋白,G蛋白在RSV亚型A和B之间的同源性只有53%左右,与此相对,F蛋白良好地保持在亚型之间和亚型内。Beeler和Coelingh(1989)的研究表明针对RSV的F蛋白的抗体能与1956~1985年间在美国或澳大利亚的各地分离的全部14种临床分离株结合,并证实了F蛋白非常高度地保存在病毒株之间(专利文献4、非专利文献1)。
通过高度地保存抗原决定基应该能够无遗漏地检测全部临床分离株,为此,在用于检测RSV的试剂盒中使用了针对F蛋白的抗体。然而,在使用通常的RSV检测试剂盒进行RSV检测的情况下,存在用其他的检查方法为阳性的样本的30~40%被判定为阴性的大问题。作为利用免疫层析法的检测试剂盒判定假阴性的较多的原因,据认为可能是试剂盒所使用的针对F蛋白的抗体的结合亲和性不足,结果样本中所含病毒量较少时得不到明确的阳性信号而判定为假阴性。因此,为了开发即使病毒量小也能检测到明确信号的高灵敏度检测试剂盒,尝试制作了对RSV的F蛋白具有高亲和性的单克隆抗体(专利文献5)。然而,仅通过提高针对F蛋白的抗体的亲和性,开发能够无遗漏地检测临床分离株这样的表现出足以实用的阳性检测率的RSV检测试剂盒是非常困难的。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本专利特开2008-14751号公报
专利文献2:日本专利特开2008-122372号公报
专利文献3:日本专利特开2008-164403号公报
专利文献4:日本专利特表2004-534513号公报
专利文献5:日本专利特开2010-25745号公报
非专利文献
非专利文献1:JournalofVirology,July1989,Vol.63,No.7,p.2941-2950
发明内容
发明要解决的问题
本发明提供一种使用了在层析介质的判定部位上与RSV的F蛋白特异性结合的抗体、RSV的简便且灵敏度更高的免疫层析装置和利用免疫层析法的检测用试剂盒,以及使用了它们的RSV的检测方法和判定或诊断RSV感染症的方法。
另外,本发明提供即使在样本中所含病毒量很少的情况下也能高效检测RSV的免疫层析装置和利用免疫层析法的检测用试剂盒,以及使用了它们的RSV的检测方法和判定或诊断RSV感染症的方法。
解决问题的方案
本发明的发明人为了在判定部位上高效捕获样本中所含的RSV从而提高免疫层析装置的灵敏度,除了使更高亲和性的针对F蛋白的抗体在判定部位上固定化以外,还研究了将针对F蛋白的抗体与针对RSV的其他蛋白的抗体组合固定化。而且,本发明的发明人发现,令人惊讶的是,与使针对F蛋白的抗体单独固定化的检测试剂盒相比,通过不仅使针对F蛋白的抗体固定化、而且使其与针对RSV的N蛋白(核蛋白)的抗体组合固定化,可以增强阳性样本测定时的信号。本发明的发明人还发现,通过使与F蛋白结合的抗体和与N蛋白结合的抗体组合固定化在判定部位上,即使是虽然通过PCR法等确认到充分的病毒量存在,但在通常的免疫层析法中判定为阴性的样本,也能正确地判定为阳性,并且能够显著改善与其他检查方法的阳性一致率。
即,本发明涉及一种免疫层析装置,其特征在于,该免疫层析装置包括这样的层析介质作为构成要素而构成,其中在该层析介质中,与F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合的抗体固定化于判定部位。
另外,本发明涉及含有上述免疫层析装置而形成的RSV的检测用试剂盒。
本发明还涉及RSV检测方法,其使用在判定部位上固定化有与F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合的抗体的免疫层析装置。另外,本发明涉及利用免疫层析法的RSV检测率的改善方法,该方法包括使在判定部位固定化的针对F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体与样本液接触的步骤。
进一步如以下(1)~(12)来详细说明本发明的实施方案。
(1)一种免疫层析装置,其含有这样的层析介质而构成,该层析介质具有固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
(2)根据上述(1)所述的免疫层析装置,其实质上由试样添加部、层析介质和吸收部构成。
(3)根据上述(2)所述的免疫层析装置,其还含有标记试剂保持部。
(4)根据上述(1)~(3)中所述的免疫层析装置,其中与F蛋白特异性结合的抗体是与亚群A和亚群B各自的RSV株的F蛋白中的任一者或者这二者特异性结合的抗体。
(5)一种利用免疫层析法的RSV检测用试剂盒,其含有免疫层析装置和样本稀释液,该免疫层析装置含有这样的层析介质而构成,该层析介质具有固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
(6)根据上述(5)所述的检测用试剂盒,其中免疫层析装置实质上由试样添加部、层析介质和吸收部构成。
(7)根据上述(6)所述的检测用试剂盒,其中免疫层析装置还含有标记试剂保持部。
(8)根据上述(6)所述的检测用试剂盒,其中检测用试剂盒还含有标记试剂溶液。
(9)一种RSV的检测方法,其使用免疫层析装置,该免疫层析装置具有固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
(10)一种利用免疫层析法的RSV检测方法,包括以下步骤:
(a)向在判定部位固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的免疫层析装置供给含有样本的样本液的步骤;
(b)使步骤(a)中供给的样本液与标记试剂一起通过所述判定部位的步骤;
(c)在判定部位,使含有标记试剂的样本液与固定化的抗体接触的步骤;以及
(d)在检测到由标记试剂引起的显色的情况下将样本判定为“RSV阳性”的步骤。
(11)根据上述(10)所述的方法,还包括在向免疫层析装置供给之前,用样本稀释液稀释样本的步骤。
(12)一种改善RSV的检测率的方法,其利用了上述(10)或(11)中任意一项所述的方法。
发明的效果
本发明的免疫层析装置中,使与F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合的抗体固定化在层析介质上从而形成判定部位。通过在同一个判定部位上混合使用这两种抗体,可以高效捕获RSV抗原,与各抗体单独固定的检查试剂盒相比,可以增强阳性样本测定时的信号,并且可以提供灵敏度高、可靠性高、且简便的RSV的迅速诊断试剂盒。由于阳性信号被增强,因此即使样本中所含病毒量较少也能高灵敏度地检测RSV,并且即使是由感染初期的患者得到的样本,也能正确地判定RSV的存在。另外,即使根据需要而将样本稀释,也能高灵敏度地检测RSV,因此可以防止鼻拭子、咽拭子等粘性高的样本直接展开时产生的问题,即,样本无法在层析介质中移动而无法判定,或者样本中RSV以外的成分吸附在层析介质中从而产生非特异性的信号这样的问题。
此外,即使在样本中所含的F蛋白的抗原性消失的情况下,固定在本发明的判定部位的与N蛋白特异性结合的抗体也能将RSV抗原捕获在判定部位上,因此本发明能够将含RSV的样本正确地判定为阳性。例如即使F蛋白的抗原性消失也能确切地判定RSV的存在,因此有可能在对F蛋白的抗原性有影响这样的严酷条件下对样本进行前处理或保存。由此,对于传统上由于粘性过高等原因而不适于免疫层析法的样本,通过前处理或适当设定保存条件,可以改性为能在预定时间内在层析介质中移动的状态,并且能够实现迅速而正确的检测,而与样本的状态无关。
本发明的免疫层析装置通过组合使用针对F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体,不仅能够高灵敏度地检测低浓度的RSV,而且能够不遗漏且正确地将含有充分量的病毒的样本判定为阳性。其结果,与传统的利用免疫层析法的检测试剂盒相比,能够大幅提高病毒的检测率,并且可以显著改善与其他检测方法的阳性一致率。因此,本发明能够提供兼具与其他检查方法相当的病毒检测率、以及免疫层析法特有的简便且迅速的优点的有用的RSV检测方法。
附图说明
[图1]图1是示出免疫层析装置的概况的截面图。免疫层析装置通常由试样添加部(1)、具有判定部位(4)的层析介质(3)、吸收部(5)和底板(6)构成,并且可以任选设置标记试剂保持部(2)。
具体实施方式
进一步详细说明本发明的实施方案。
本发明的特征在于,在判定部位上使用与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合的抗体这二者,并且通过利用免疫层析法的原理,检测样本中RSV的F蛋白和/或N蛋白,由此判定样本中RSV的存在。
本发明中RSV的“与F蛋白特异性结合的抗体”是指特异性识别、结合对人有感染性的RSV的F蛋白的抗体。
RSV是归属于副粘病毒科的RNA病毒的一种,分为A型和B型两个亚型。RSV的基因序列已被确定。
RSV的F蛋白是存在于RSV表面的3种糖蛋白中的一种。F蛋白也称为融合蛋白,其促进病毒的被膜和易感细胞的细胞膜的融合,并使病毒的核糖核蛋白能够侵入细胞质。F蛋白还促进病毒感染细胞和与其相邻的细胞的细胞膜的融合,由此形成合胞体。
F蛋白是通过切断称为F0的F蛋白前驱体而生成的约50kDa的F1多肽和约20kDa的F2多肽通过二硫键结合而成的约70kDa的异二聚体蛋白。
若干RSV株的F蛋白的氨基酸序列是已知的,(例如)RSVLong株的氨基酸序列已在NCBI的GenBank数据库中作为编录号P12568公布。
本发明中与RSV的F蛋白特异性结合的抗体只要是与对人有感染性的RSV株的F蛋白特异性结合的抗体即可,可以是识别任意抗原决定基的抗体,可以是识别F1多肽上的抗原决定基的抗体、识别F2多肽上的抗原决定基的抗体、或者识别它们通过二硫键结合产生的立体的抗原决定基的抗体。然而,为了防止由亚型不同而导致的病毒漏检,优选识别RSV的亚型A和B中共同的抗原决定基、并且与亚型A和B中任何一个的病毒株的F蛋白都结合的抗体。
本发明中RSV的“与N蛋白特异性结合的抗体”是指特异性识别、结合对人有感染性的RSV的N蛋白的抗体。
RSV的N蛋白也称作核蛋白,由391个氨基酸残基构成。N蛋白是称作核衣壳的核糖核蛋白复合体的构成成分,并形成包围RSV的基因组RNA的螺旋结构。若干RSV株的N蛋白的氨基酸序列是已知的,例如,RSVLong株的氨基酸序列已在NCBI的GenBank数据库中作为编录号DD857370公布。N蛋白的氨基酸序列高度保存在亚型A和B的RSV株之间。
本发明中与RSV的N蛋白特异性结合的抗体只要是与对人有感染性的RSV株的N蛋白特异性结合的抗体即可,也可以是识别N蛋白上所有抗原决定基的抗体。然而,为了防止由亚型不同导致的病毒漏检,优选识别RSV的亚型A和B中共同的抗原决定基、并与亚型A和B中任何一个的病毒株的N蛋白都结合的抗体。
作为本发明的抗体,可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体,还可以是它们的抗原结合片段。然而,从高结合亲和性、供给的稳定性、产品的品质管理的容易度等来考虑的话,优选为单克隆抗体。
可以在本发明中使用的抗体可以是根据已知的方法制造的,也可以从商业上得到。
本发明的识别F蛋白的抗体、或识别N蛋白的抗体的制造可通过使用RSV的F蛋白或N蛋白作为免疫原,并将其给予小鼠、大鼠、豚鼠、狗、山羊、绵羊、猪、马和牛等产生抗体的动物中来进行。关于作为免疫原使用的RSV的F蛋白或N蛋白,只要能够发挥作为免疫原的作用即可,对其给予方式没有特别限定,例如,以纯化RSV、RSV感染细胞或其提取物、纯化的蛋白、或合成了蛋白的氨基酸序列的一部分的肽的方式给予。在合成肽的情况下,F蛋白和N蛋白的氨基酸序列如上所述是已知的。
本发明中所用的抗体为多克隆抗体的情况下,可根据常规方法制造。例如,从上述给予了免疫原的产生抗体的动物中采取血液,并与RSV的F蛋白或N蛋白进行抗原抗体反应,通过亲和层析提纯等方法(该方法使用了结合有RSV的F蛋白或N蛋白的载体)来得到与RSV的其他成分实质上不发生抗原抗体反应的免疫球蛋白组分。
本发明中所用的抗体为单克隆抗体的情况下,例如,可按照常规方法通过制备产生目标抗体的杂交瘤来制造抗体。产生抗体的杂交瘤的制备可以通过(例如)以下方式进行:从上述给予了免疫原的产生抗体的动物中取得脾脏细胞,并用已知的方法(例如,参照Nature,256:495-497(1975))使骨髓瘤细胞等肿瘤细胞与细胞融合。
作为从通过细胞融合所得的杂交瘤中筛选产生目标抗体的杂交瘤的方法,例如,可以通过使用固定了F蛋白或N蛋白的微孔板的固定ELISA等方法来进行。
本发明的抗体可以这样制备:在通常的细胞培养用的培养基中培养产生该抗体的杂交瘤,并从培养上清液中回收从而制备。另外,也可以这样制备:通过给予到杂交瘤所来源的动物的腹腔内,从而贮存腹水,并从该腹水中回收来制备。
关于本发明的识别F蛋白的抗体或识别N蛋白的抗体,除了可如上所述制造以外,还可以(例如)像特表2004-511807号公报所公开的那样,从多个制造商商购得到。作为本发明的抗体,也可以使用像这样可商购得到的抗体。
本发明的“免疫层析装置”实质上由试样添加部、层析介质和吸收部构成,并且可以任选设置标记试剂保持部。
本发明中所用的“层析介质”由多孔性的膜形成,只要能通过毛细管现象使含有样本的样本液在其中移动即可,没有特别限定,可优选使用孔径平均为0.3~15μm的多孔膜。适当的层析介质是由不与溶解在样本中的成分发生反应的惰性材质且可固定抗体的材质形成的,例如,由硝化纤维素、醋酸纤维素、尼龙、聚醚砜、聚乙烯醇、聚酯、玻璃纤维、聚烯烃、纤维素、这些混合纤维形成的人工聚合物等构成。
本发明的“判定部位”通过将与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合的抗体固定在层析介质的一部分上而形成。
针对F蛋白的抗体或针对N蛋白的抗体可以以混合的状态固定在判定部位的区域整体,也可以将判定部位的区域进一步划分从而在各部分中分别固定。从可得到阳性信号的增强效果来看,优选的实施方案为两种抗体以混合的状态固定在判定部位的同一区域。
本发明的判定部位上只要存在针对RSV的F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体二者即可,而对它们的比例没有特别限定,但优选相对于对F蛋白特异性的抗体,对N蛋白特异性的抗体的比例较大。作为优选的存在比例,抗F蛋白抗体/抗N蛋白抗体为1/1~1/5,更优选为1/3~1/4。
将抗体固定在层析介质上的方法可以是物理吸附,也可以是化学结合。将抗体通过物理吸附固定的情况下,可以通过将抗体用缓冲液等稀释后的溶液涂布在层析介质上,并使之干燥来进行。针对F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体的固定可通过将其中任一种抗体涂布在层析介质上、并使之干燥后,将另一种抗体涂布在其他区域、或重复涂布在同一区域来进行。或者,也可以在预先将针对F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体以所需的比例混合后,涂布在层析介质的预定部位上并使之干燥从而固定。
层析介质上固定有抗体的判定部位形成后,根据需要,也可以对层析介质进行封闭处理以防止非特异性的反应。例如,除了牛血清白蛋白、脱脂乳、酪蛋白、明胶等蛋白质以外,封闭处理也可以使用BlockingPeptideFragment(TOYOBO公司制造)或亲水性高分子聚合物等市售的封闭剂来实施。
本发明中的“试样添加部”是本发明的免疫层析装置中含有样本的样本液供给的部位,配置为通过毛细管与层析介质相连。关于试样添加部,只要样本液可通过毛细管现象移动即可,对其材质没有特别限定,通常根据其目的从人造丝、铜氨纤维、滤纸、玻璃纤维滤纸等多孔性物质中选择。
本发明中的“吸收部”是本发明的免疫层析装置中吸收样本和标记试剂的部位。供给至试样添加部的样本液通过层析介质的判定部位、并在吸收部被吸收。吸收部只要能迅速地吸收过剩的样本和标记试剂即可,对其材质没有特别限定,根据目的从纤维、滤纸、玻璃纤维滤纸等多孔性物质中选择使用,并配置为通过毛细管与层析介质相连。
本发明的层析装置实质上由层析介质、试样添加部和吸收部形成,而为了提高操作性,还可以进一步设置底板。底板支持层析介质,并使接合了试样添加部和吸收部的层析介质的使用变得容易。底板只要能达到其目的即可,对其材质没有特别限制,一般优选使用无色或白色的塑料。
本发明的层析装置通过固定在判定部位上的抗F蛋白抗体和抗N蛋白抗体,从而将样本中所含的F蛋白抗原和/或N蛋白抗原捕获在判定部位上。在判定部位上被捕获的这些抗原通过进一步与标记试剂结合,从而它们的存在变得可见。
本发明中的“标记试剂”由与F蛋白特异性结合的抗体和/或与N蛋白特异性结合的抗体以及标记物形成。本发明的标记试剂使样本中所含F蛋白抗原和N蛋白抗原与标记物通过抗体间接结合。
可用于本发明标记试剂的抗体只要是能与通过固定在判定部位上的抗F蛋白抗体和抗N蛋白抗体被捕获的状态下的F蛋白抗原或N蛋白抗原结合的抗体即可,可以是任何抗体。例如,可以使用对RSV特异的多克隆抗体、对F蛋白或N蛋白特异的多克隆抗体或单克隆抗体,但优选使用对F蛋白或N蛋白特异的单克隆抗体,还更优选使用识别与固定在判定部位的单克隆抗体不同的抗原决定基的、对F蛋白或N蛋白特异的单克隆抗体。
关于可用于本发明的标记试剂的标记物,只要是在判定部位经抗原和抗体间接结合的状态下,能够产生肉眼可见的信号的标记物即可,没有特别限制,通常可优选使用酶或不溶性载体。可用作标记物的酶可列举(例如)碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶等,并与产生有色的生成物的基质组合使用。关于可用作标记物的不溶性载体,只要是具有可通过毛细管现象在多孔性的层析介质中移动的粒径的有色物质即可,没有特别限定。例如,可使用胶体状金属颗粒、胶体状金属氧化物颗粒、胶体状非金属颗粒和乳胶颗粒等,优选使用平均粒径1nm~500nm的胶体状金属颗粒,更优选使用平均粒径40nm~100nm的胶体状金颗粒。
关于本发明的标记试剂,可通过物理吸附或化学结合等已知的方法使与F蛋白或N蛋白特异性结合的抗体和标记物结合而制造。例如,由抗体和胶体状金颗粒形成的标记试剂可通过将抗体加入金颗粒以胶体状分散的溶液中从而物理吸附后,添加牛血清白蛋白溶液或上述的封闭剂等,从而将未结合抗体的颗粒表面封闭从而制备。
作为抗体,使用针对F蛋白的单克隆抗体和针对N蛋白的单克隆抗体时,通过预先将那些抗体以所需的比例混合,然后使之与胶体状金颗粒结合,从而可以制造能与在判定部位上捕获的F蛋白和N蛋白二者结合的标记试剂。或者,将两种以上的抗体分别与金颗粒结合后,通过以所需的比例混合结合了抗体的金颗粒,也可以制造能与F蛋白和N蛋白结合的标记试剂。由于可以严格控制标记试剂中所含的抗F蛋白抗体和抗N蛋白抗体的比例,因此优选后面的制造方法。虽然标记试剂中所含的抗F蛋白抗体和抗N蛋白抗体的比例没有特别限制,但优选与在判定部位上的那些抗体的存在比例相同。
在本发明的一个实施方案中,标记试剂以干燥状态保持在免疫层析装置中任选设置的标记试剂保持部。本发明的标记试剂保持部设置在免疫层析装置的试剂添加部和判定部位之间。保持在标记试剂保持部的标记试剂溶解在供给到层析装置的样本液中,并与样本中的RSV抗原一起通过判定部位。
本发明的标记试剂保持部只要能干燥保持标记试剂,并能配置为通过毛细管与层析介质相连即可,其材质没有特别限制,例如可以使用纤维素滤纸、玻璃纤维滤纸、尼龙无纺布等。为了使标记试剂的再溶解性变得良好,标记试剂保持部也可以含有蔗糖(サッカロース)、蔗糖(スクロース)、海藻糖、麦芽糖、乳糖等糖类,以及甘露糖醇等糖醇等。
在本发明的另一个实施方案中,标记试剂以溶液的状态作为与免疫层析装置分开的构成单元包含在检测试剂盒中。标记试剂溶液以什么样的样式供给到层析装置皆可,只要标记试剂可以与样本中的RSV抗原一起通过判定部位,并且标记试剂能与RSV抗原结合而不妨碍RSV抗原被固定在判定部位的抗体捕获即可。例如,可以将标记试剂溶液与样本液混合后,将混合物供给到免疫层析装置的试样添加部,也可以在供给样本液后,继续将标记试剂溶液供给到试样添加部。
作为可根据本发明来判定RSV存在的“样本”,只要是有RSV存在嫌疑的生物试样、并且是液体的话,均可以适用于本发明,但优选列举鼻拭子、咽拭子、鼻吸液、鼻涕或洗鼻液等。
根据本发明,在判定鼻拭子、咽拭子、鼻吸液、鼻涕或洗鼻液中RSV存在的情况下,也可以将这些液体试样直接供给到免疫层析装置并展开。然而,为了使在层析介质中的移动变得容易,可将这些粘性高的试样用样本稀释液稀释并供给。本发明中,“样本液”是指液体样本本身或用样本稀释液稀释过的样本。
在本发明中所用的“样本稀释液”可以使用水为溶剂,向其中添加盐和用于调节pH的缓冲剂来制备。此外,在样本稀释液中,为了提高样本的流动性,以及为了降低样本中所含RSV以外的成分引起的非特异性反应,也可以添加表面活性剂和乙烯基类水溶性聚合物。
作为本发明的样本稀释液中所用的盐,只要是由酸和碱反应得到的盐即可,没有特别限制,但可以列举(例如)氯化钠、氯化钾等碱金属无机盐。优选为氯化钠。
作为本发明的样本稀释液中所用的缓冲剂,只要是即便添加样本也能保持溶液的pH恒定即可,没有特别限制,但优选能将pH保持在7~11的范围内的缓冲剂,可以使用(例如)磷酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐、Tris缓冲剂或Good’s缓冲剂等。
作为本发明的稀释液中所用的表面活性剂,优选非离子型表面活性剂,更优选亲水亲油平衡值(HLB值)为13~18的非离子型表面活性剂,进一步优选HLB值13~18的聚氧乙烯类表面活性剂。作为优选的表面活性剂,可以列举:(例如)聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(商品名“Tween”系列)、聚氧乙烯对叔辛基苯基醚(商品名“Triton”系列)、聚氧乙烯对叔壬基苯基醚(商品名“TritonN”系列)等。这些表面活性剂可以单独使用,也可以两种以上混合使用。非离子性表面活性剂的含量没有特别限定,但是可在相对于检体稀释液总重量为0.01~10.0重量%的范围内使用,优选在0.1~5.0重量%的范围内使用,更优选在0.1~1.0重量%的范围内使用,进一步优选在0.3~1.0重量%的范围内使用。
作为本发明的稀释液中所用的乙烯基类水溶性聚合物,优选具有含氧原子和氮原子的极性基团的乙烯基类水溶性聚合物,可以列举(例如)具有丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、二甲基甲基丙烯酰胺、乙烯基吡咯烷酮等乙烯基类单体的双键断裂的结构单元的聚合物。本发明的乙烯基类水溶性聚合物也可以是乙烯醇、醋酸乙烯酯、丙烯酸烷基酯等具有含氧原子的极性基团的乙烯基类单体以(例如)50摩尔%以下、优选30摩尔%以下、特别优选15摩尔%以下的比例共聚而成的聚合物。作为本发明的乙烯基类水溶性聚合物优选的具体例子,可以列举聚乙烯基吡咯烷酮、二甲基丙烯酰胺/乙烯基吡咯烷酮共聚物(二甲基丙烯酰胺的共聚比例为50摩尔%以下的共聚物)、乙烯醇/乙烯基吡咯烷酮共聚物(乙烯醇的共聚比例为50摩尔%以下的共聚物)、醋酸乙烯酯/乙烯基吡咯烷酮共聚物(醋酸乙烯酯的共聚比例为20摩尔%以下的共聚物)等非离子性的共聚物。这些乙烯基类水溶性聚合物的分子量为1万~100万、更优选为10万~100万、进一步优选为20万~50万。乙烯基类水溶性聚合物的含量没有特别限定,但相对于样本稀释液整体的重量可以在0.01~5.0重量%的范围内使用,优选在0.1~2.0重量%的范围内使用。
优选的样本稀释液的组成为含有0.1~1重量%的非离子表面活性剂、0.05~0.2M的碱金属无机盐、pH为7~11的缓冲剂、以及0.1~1重量%的乙烯基类水溶性聚合物的水溶液。更优选为含有0.1~1重量%的HLB值为13~18的非离子表面活性剂、0.05~0.2M的碱金属无机盐、pH为7~11的Tris缓冲剂或Good’s缓冲剂、以及具有含氧原子和氮原子的极性基团的0.1~1重量%的乙烯基类水溶性聚合物的水溶液。
本发明的样本稀释液可以用来稀释鼻拭子等粘度高、含固态物质的样本。通过用样本稀释液稀释样本,防止样本堵塞层析介质并使样本的移动变得容易。另外,也可以防止溶解在样本中的成分在层析介质上的非特异性吸附。
本发明的样本稀释液也可以作为用以展开液量少的样本的展开液使用。在样本的液量少、供给到试样添加部的样本无法到达吸收部的情况下,通过追加供给本发明的样本稀释液,从而确保样本通过判定部位并到达吸收部。
样本稀释液与免疫层析装置一起包含在本发明的检测试剂盒中。
本发明的RSV检测用试剂盒至少含有免疫层析装置和样本稀释液,并任选包含标记试剂溶液。
此外,本发明的检测用试剂盒根据需要也可以包含样本取样装置、样本过滤器、阳性对照和阴性对照。样本取样装置可根据样本的性质适当选择,可以列举(例如)消毒棉签等。样本过滤器用于通过(例如)对采集的样本本身或者用样本稀释液稀释的样本进行过滤来除去固态物质。
下面说明本发明的检测RSV的原理。
若将含有RSV抗原的样本液供给到免疫层析装置的试样添加部,则样本液通过毛细管现象到达层析介质,并沿层析介质移动。
通过在供给前将样本液与标记试剂溶液混合、或者使保持在标记试剂保持部的标记试剂溶解于样本液、或者在样本液供给后供给标记试剂溶液,从而使样本液所含的RSV抗原与标记试剂结合。
RSV抗原与标记试剂一起通过层析介质的判定部位。通过样本液与抗体的接触,固定的抗F蛋白抗体或抗N蛋白抗体将RSV抗原捕获在判定部位。
剩余的样本和标记试剂进一步沿着层析介质移动从而在吸收部被吸收。
样本含有RSV抗原的情况下,与标记试剂结合的F蛋白抗原和/或N蛋白抗原在判定部位被捕获,因此在判定部位出现肉眼可见的信号。即,判定部位出现的明显的信号意味着样本含有RSV,并将样本判定为阳性。
另一方面,在判定部位与标记试剂结合的RSV抗原未被以充分的量捕获的情况下,判定部位不出现信号。这通常意味着样本不含RSV,或者即使含RSV,其量也在检测限以下,并将样本判定为阴性。
根据本发明的RSV检测方法的具体步骤示例如下。
(1)向在判定部位固定有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的免疫层析装置供给样本液;
(2)与样本液同时或之后向免疫层析装置供给标记试剂溶液;
(3)使样本与标记试剂一起通过所述判定部位,并使样本与固定在判定部位的抗体接触;
(4)在判定部位,检测标记试剂引起的显色;
(5)在检测到显色的情况下将样本判定为“RSV阳性”,在未检测到显色的情况下将样本判定为“RSV阴性”。
需要说明的是,步骤(1)中,样本液也可以是用样本稀释液稀释的样本。另外,步骤(2)是任选的,例如在免疫层析装置中设置有标记试剂保持部的情况下可以省略。
利用上述步骤可以进行样本中所含RSV的检测。特别是,与利用传统的免疫层析法的检测方法相比,通过利用上述的步骤进行RSV的检测,可以大幅提高病毒的检测率。
下面,利用实施例对本发明更具体地进行说明,但本发明并不受这些实施例的任何限定。
实施例
(实施例1)
(1)抗RSV单克隆抗体的制作
用纯化RSV株或RSV感染细胞对BALB/c小鼠免疫,并通过采血确认针对RSV的F蛋白或N蛋白的抗体值的上升。从确认抗体值上升的小鼠上摘出脾脏,通过凯勒等人的方法(Kohleretal.,Nature,vol,256,p495-497(1975))使之与小鼠骨髓瘤细胞融合。
将所得融合细胞(杂交瘤)在37℃的恒温箱中培养,通过使用固定了RSV的F蛋白抗原或N蛋白抗原的板的ELISA来确认培养上清液的抗体值。针对分别来源于RSV的亚型A和B的F蛋白或N蛋白,选择确认了培养上清液中的抗体值上升的杂交瘤。进一步进行克隆以纯化(单克隆化)杂交瘤。
将单克隆化的抗体产生杂交瘤腹腔内给予进行了姥鲛烷处理的BALB/c小鼠,约2周后,采集含有抗体的腹水。使用ProteinA柱层析(アマシャム公司制造)利用亲和纯化从所得腹水中纯化IgG,从而得到抗F蛋白单克隆抗体或抗N蛋白单克隆抗体。
(2)层析介质的判定部位的制作
将上述(1)制作的抗F蛋白单克隆抗体或抗N蛋白单克隆抗体以重量比1:1混合,并用含5重量%异丙醇的磷酸缓冲液(pH7.4)稀释到0.5mg/mL的浓度从而制作抗体溶液。
使用抗体涂布机(BioDot公司制造)将上述抗体溶液涂布到25×2.5cm的硝化纤维素膜(ミリポア公司制造:HF120)上,并在50℃下干燥30分钟,然后在室温下干燥过夜,从而在层析介质上制作判定部位。
(3)标记试剂溶液的制作
使用与用于判定部位制作的抗F蛋白抗体或抗N蛋白抗体不同的从克隆所获得的抗F蛋白抗体或抗N蛋白抗体,从而进行标记试剂的制作。
向0.5mL金胶体悬浊液(田中貴金属工業社制造:平均粒径40nm)中加入0.1mL用HEPES缓冲液(pH7.5)稀释到0.1mg/mL浓度的抗F蛋白单克隆抗体或抗N蛋白单克隆抗体,在室温下静置10分钟。接着,加入0.1mL含10重量%牛血清白蛋白的HEPES缓冲液(pH7.5),并在室温下静置10分钟。其后,充分搅拌,然后以8000×g进行离心分离15分钟,除去上清液后,加入0.1mL含1重量%牛血清白蛋白的磷酸缓冲液(pH7.4),从而制作含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液或含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液。
(4)免疫层析装置的制作
将如上制作的含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液和含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液以体积比1:1混合。向200μL混合后的标记试剂溶液中加入100μL25重量%的海藻糖水溶液,将所得的溶液均匀添加到16mm×100mm的玻璃纤维垫(ミリポア公司制造)上,然后通过真空干燥机干燥,从而制作标记试剂保持部。然后,将具有判定部位的层析介质、标记试剂保持部、作为试样添加部的玻璃纤维制的样本垫、用来吸收剩余的样本和标记物的吸收垫粘贴在塑料制的底板上。并且用切割机切成宽5mm从而制成免疫层析装置。
(5)样本稀释液的制作
制作由0.5%Tween20、0.6%聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)K-90(分子量36万)、含有1.0%牛血清白蛋白和150mM氯化钠的Tris缓冲溶液(pH8.0)形成的溶液,并作为用于稀释处理鼻拭子、咽拭子、鼻吸液、鼻涕或洗鼻液等样本的样本稀释液。
(6)测定
使用如上制作的免疫层析装置和样本稀释液,按照以下的方法判定样本中的RS病毒存在与否。
用上述样本稀释液将从感染RSV的人采集的鼻涕稀释10倍、50倍、100倍。将这些试样120μL供给到免疫层析装置的样本垫上使之展开,并在10分钟后用肉眼进行判定。判定部位上可以明显地确认到红线的设为“+++”,可以确认到红线的设为“++”,可以确认到红线但颜色较淡的设为“+”,未确认到红线的设为“-”。结果在表1中示出。
(比较例1)
(1)层析介质的判定部位的制作
仅使用抗F蛋白单克隆抗体,用与上述实施例1的(2)相同的方法制作层析介质的判定部位。使用的抗F蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于相同克隆的抗体。
(2)免疫层析装置的制作
用与上述实施例1的(3)相同的方法,制作仅含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液,并用与上述实施例1的(4)相同的方式制作免疫层析装置。
(3)测定
使用上述实施例1的(5)所记载的样本稀释液,用与实施例1的(6)相同的方式,进行样本的测定。结果在表1中示出。
(比较例2)
(1)层析介质的判定部位的制作
仅使用抗F蛋白单克隆抗体,用与上述实施例1的(2)相同的方式制作层析介质的判定部位。使用的抗F蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于不同克隆的抗体。
(2)免疫层析装置的制作
用与上述实施例1的(3)相同的方法,制作仅含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液,并用与上述实施例1的(4)相同的方式制作免疫层析装置。
(3)测定
使用上述实施例1的(5)所记载的样本稀释液,用与实施例1的(6)相同的方式,进行样本的测定。结果在表1中示出。
(比较例3)
(1)层析介质的判定部位的制作
仅使用抗N蛋白单克隆抗体,用与上述实施例1的(2)相同的方式制作层析介质的判定部位。使用的抗N蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于相同克隆的抗体。
(2)免疫层析装置的制作
用与上述实施例1的(3)相同的方法,制作仅含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液,并用与上述实施例1(4)相同的方式制作免疫层析装置。
(3)测定
使用上述实施例1的(5)所记载的样本稀释液,用与实施例1的(6)相同的方式,进行样本的测定。结果在表1中示出。
(比较例4)
(1)层析介质的判定部位的制作
仅使用抗N蛋白单克隆抗体,用与上述实施例1的(2)相同的方式制作层析介质的判定部位。使用的抗N蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于不同克隆的抗体。
(2)免疫层析装置的制作
用与上述实施例1的(3)相同的方法,制作仅含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液,并用与上述实施例1的(4)相同的方式制作免疫层析装置。
(3)测定
使用上述实施例1的(5)所记载的样本稀释液,用与实施例1的(6)相同的方式,进行样本的测定。结果在表1中示出。
表1
(实施例2)判定部位中抗体比率的研究
(1)层析介质的判定部位的制作
用与上述实施例1的(2)相同的抗F蛋白单克隆抗体和抗N蛋白单克隆抗体进行判定部位的制作。使抗F蛋白抗体(抗FP抗体)和抗N蛋白抗体(抗NP抗体)的混合比变为2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5,用与上述实施例1的(2)相同的顺序制作判定部位。
(2)免疫层析装置的制作
用与上述实施例1的(3)相同的方法,制作含有抗F蛋白抗体的标记试剂和含有抗N蛋白抗体的标记试剂。使它们的混合比变为2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5,使用各混合溶液,用与实施例1的(4)相同的方式制作免疫层析装置。
(3)测定
使用上述实施例1的(5)所记载的样本稀释液,用与实施例1的(6)相同的方式,进行样本的测定。结果在表2中示出。
样本1的测定(样本为50倍稀释)
表2
样本2的测定(样本为50倍稀释)
表3
根据表1的比较例3和4的结果,样本1和样本2均存在RSV抗原。然而,样本2所含的F蛋白抗原容易通过抗F蛋白抗体捕获,与此相对,样本1所含的F蛋白抗原难以通过抗F蛋白抗体捕获。尽管样本中的F蛋白的捕获难易程度具有多样性,表2和3的结果表明,在判定部位固定了抗F蛋白抗体和抗N蛋白抗体的情况下,通常抗N蛋白抗体的比率高的一方得到较强的阳性信号。即,通过更多地在判定部位固定抗N蛋白抗体,可以提供无论样本中的RSV抗原的状态如何,都能高灵敏度地检测的免疫层析装置。
产业实用性
本发明通过在判定部位组合使用与F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合的抗体,与传统的利用免疫层析法的检测试剂盒相比,提供了高灵敏度且RSV的检测率显著提高的免疫层析装置。
因此,本发明在RSV感染症的临床检查的产业领域中是有用的,具有产业实用性。
Claims (12)
1.一种免疫层析装置,其含有这样的层析介质而构成,该层析介质具有固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
2.根据权利要求1所述的免疫层析装置,其实质上由试样添加部、层析介质和吸收部构成。
3.根据权利要求2所述的免疫层析装置,还含有标记试剂保持部。
4.根据权利要求1至3中任意一项所述的免疫层析装置,其中与F蛋白特异性结合的抗体是与亚群A和亚群B各自的RSV株的F蛋白中的任一者或者这二者特异性结合的抗体。
5.一种利用免疫层析法的RSV的检测用试剂盒,其含有免疫层析装置和样本稀释液,该免疫层析装置含有这样的层析介质而构成,该层析介质具有固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
6.根据权利要求5所述的检测用试剂盒,其中免疫层析装置实质上由试样添加部、层析介质和吸收部构成。
7.根据权利要求6所述的检测用试剂盒,其中免疫层析装置还含有标记试剂保持部。
8.根据权利要求6所述的检测用试剂盒,其中检测用试剂盒还含有标记试剂溶液。
9.一种RSV的检测方法,其使用了免疫层析装置,该免疫层析装置具有固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
10.一种利用免疫层析法检测RSV的方法,包括以下步骤:
(a)向在判定部位固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的免疫层析装置供给含有样本的样本液的步骤;
(b)使在步骤(a)中供给的样本液与标记试剂一起通过所述判定部位的步骤;
(c)在判定部位,使含有标记试剂的样本液与固定化的抗体接触的步骤;以及
(d)在检测到由标记试剂引起的显色的情况下将样本判定为“RSV阳性”的步骤。
11.根据权利要求10所述的方法,还包括在向免疫层析装置供给之前,用样本稀释液稀释样本的步骤。
12.一种改善RSV的检测率的方法,其利用了根据权利要求10或11中任意一项所述的方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105606798A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-05-25 | 四川新健康成生物股份有限公司 | 一种免疫荧光层析检测用样本稀释液 |
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Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020122773A (ja) * | 2019-01-31 | 2020-08-13 | 田中貴金属工業株式会社 | デングウイルス検出用免疫クロマト分析装置 |
JP7267548B2 (ja) * | 2019-04-24 | 2023-05-02 | 株式会社ニップン | トマト黄化葉巻ウイルス(tylcv)の免疫学的診断法 |
JP2021073934A (ja) * | 2019-11-12 | 2021-05-20 | デンカ株式会社 | 抗rsウイルスn蛋白質を認識する抗体、並びに該抗体を用いた免疫測定方法及び免疫測定器具 |
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US20210199652A1 (en) * | 2019-12-31 | 2021-07-01 | Panion & Bf Biotech Inc. | Test Kit For Detecting A Plurality Of Analytes |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005015207A2 (en) * | 2003-08-05 | 2005-02-17 | Istituto Nazionale Per Le Malattie Infettive 'lazzaro Spallanzani' Irccs | Method and diagnostic tests based on flow cytometric analysis of antigen-specific t lymphocytes |
CN101629959A (zh) * | 2008-07-18 | 2010-01-20 | 希森美康株式会社 | 使用抗rsv单克隆抗体的rsv检测试剂盒、免疫层析试验用具和抗rsv单克隆抗体 |
JP2012083370A (ja) * | 2012-01-31 | 2012-04-26 | Denka Seiken Co Ltd | 着色ラテックス粒子を用いるメンブレンアッセイ法およびキット |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5811524A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Neutralizing high affinity human monoclonal antibodies specific to RSV F-protein and methods for their manufacture and therapeutic use thereof |
EP1340086B1 (en) | 2000-10-17 | 2008-07-30 | Besst-Test Aps | Assay for directly detecting a rs virus related biological cell in a body fluid sample |
TWI327600B (en) | 2000-11-28 | 2010-07-21 | Medimmune Llc | Methods of administering/dosing anti-rsv antibodies for prophylaxis and treatment |
JP2008014751A (ja) | 2006-07-05 | 2008-01-24 | Denka Seiken Co Ltd | 着色ラテックス粒子を用いるメンブレンアッセイ法およびキット |
JP4339906B2 (ja) | 2006-10-19 | 2009-10-07 | デンカ生研株式会社 | 試料ろ過フィルターを用いる簡易メンブレンアッセイ方法及びキット |
JP5431644B2 (ja) | 2006-12-28 | 2014-03-05 | シスメックス株式会社 | 呼吸器感染症の検査方法 |
EA023179B1 (ru) * | 2009-08-13 | 2016-05-31 | Круселл Холланд Б.В. | Антитела против респираторного синцитиального вируса (pcb) и способы их применения |
CA2808417A1 (en) * | 2010-08-18 | 2012-02-23 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. | Circulating biomarkers for disease |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005015207A2 (en) * | 2003-08-05 | 2005-02-17 | Istituto Nazionale Per Le Malattie Infettive 'lazzaro Spallanzani' Irccs | Method and diagnostic tests based on flow cytometric analysis of antigen-specific t lymphocytes |
CN101629959A (zh) * | 2008-07-18 | 2010-01-20 | 希森美康株式会社 | 使用抗rsv单克隆抗体的rsv检测试剂盒、免疫层析试验用具和抗rsv单克隆抗体 |
JP2012083370A (ja) * | 2012-01-31 | 2012-04-26 | Denka Seiken Co Ltd | 着色ラテックス粒子を用いるメンブレンアッセイ法およびキット |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
HIDEAKI KIKUTA ET AL: "Comparison of a Lateral-Flow Immunochromatography Assay with Real-Time Reverse Transcription-PCR for Detection of Human Metapneumovirus",,,", 《JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105606798A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-05-25 | 四川新健康成生物股份有限公司 | 一种免疫荧光层析检测用样本稀释液 |
CN114729032A (zh) * | 2019-11-12 | 2022-07-08 | 电化株式会社 | 识别抗rs病毒的抗体、以及使用了该抗体的免疫测定方法及免疫测定仪器 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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