CN1051202C - 使肝色牛排菌子实体生长的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种使肝色牛排菌子实体生长的方法，该方法包括使肝色牛排菌菌丝在容器中的固体培养基中蔓延，菌丝体完全充满培养基并足够成熟后，在10-30℃下将长满菌丝体且菌丝体足够成熟的培养基温育1至30天，以便由成熟的菌丝体形成子实体原基，切除子实体原基附近的部分容器壁形成穿孔，将子实体原基置于10至30℃培养10至40天使成熟的子实体通过穿孔长出容器。通过这种方法，可在短期内有效地获得硕大而成熟的子实体。

Description

使肝色牛排菌子实体生长的方法
本发明涉及使肝色牛排菌子实体生长的方法，此法能有效地形成硕大而成熟的肝色牛排菌子实体。本发明也涉及到形成肝色牛排菌子实体的方法。
肝色牛排菌也被称为“牛排蘑菇”，大约在五月，六月或十月天然生长在栗树上。肝色牛排菌子实体(菌伞)具有肝状或牛舌状外形，表面呈红至暗红棕色。子实体的直径大约10至20厘米。
肝色牛排菌新鲜子实体薄片可直接食用或用黄油煎炸后食用，已知它是一种味道鲜美的蘑菇。因此，如果肝色牛排菌一年四季都可大量生长，则它能够丰富一日三餐，另外，由此可提供优良的精制食品。
虽然随着人工培育技术的日益发展，目前蘑菇产量正在增长，但蘑菇的品种有限。肝色牛排菌子实体的人工培育技术还未确立。虽然日本专利公告Nos.sho 52-44603和sho 54-27912公开了使肝色牛排菌生长的技术，这些技术的目的是从培育这种蘑菇所得的营养菌丝体中或从所用的培养基中获得一种抗癌物质。也就是说，它们的目的不是获取子实体而是使营养菌丝体大量生长。
在这种情形下，就要求开展一种在短期内人工种植肝色牛排菌成熟子实体，尤其是硕大而成熟的子实体的技术。
本发明的目的是提供一种在短期内通过人工培育使肝色牛排菌子实体生长的方法，这使在子实体原基形成以后获得硕大而成熟的子实体成为可能。
本发明的目的及其它目的将从以下的描述和举例中明显看出。
肝色牛排菌的菌丝在培养基中蔓延可得到长满菌丝体的培养基，待到菌丝体足够成熟后，将成熟的菌丝体在规定的温度条件下培养，在培养基上形成原基以后除去子实体原基周围的容器壁，可使子实体向着容器外生长，这样可在短期内有效地获得成熟的子实体。本发明就是在这一发现的基础上完成的。
也就是说，本发明提供了一种使肝色牛排菌子实体生长的方法，该方法包括以下步骤：(1)使肝色牛排菌的菌丝在容器中的固体培养基中蔓延，菌丝体完全充满培养基并且足够成熟后，将长满菌丝体且菌丝体足够成熟的培养基在10至30℃培养1至30天，从而由成熟的菌丝体形成子实体原基，(2)将子实体原基在10至30℃培养10至40天以发育成成熟子实体。
在本发明中，蘑菇接种物通过任何方法接种在培养基上或培养基内。通常是蘑菇接种物接种在固体培养基表面。优先选用这种方法，因为将接种物分散接种于整个固体培养基上，然后进行培养，可使肝色牛排菌菌丝短期内蔓延开来。
虽然适合肝色牛排菌的培养基可以是固体的也可以是液体的，但优先选用固体的。任何适合的固体培养基都可用。其中，含有(a)木质材料和(b)包括糖类和有机氮类的养分且pH值在3.5至5.5的范围内的固体培养基对进行人工培育尤为适宜，因为肝色牛排菌的菌丝可在短期内在培养基上蔓延开来。优选的木质材料(a)例如象锯屑类的木质粉末。木质材料也可包括其它的用研磨机研磨或通过砍劈或铇而成的粉末或用铇子或切片机制成的薄片。
木质材料的实例包括阔叶树，例如：山毛榉属、锥栗属、柯树属、栎属、桦木属、赤杨属、榉属、花柏属、柳杉属、冷杉属、松属和落叶松属。尤其是山毛榉树，栗树，栎属蒙古变种grosseserrata，榉树、常青栎、赤杨和白桦；和针叶树，例如：日本雪松，
Figure C9411658100071
树，日本落叶松，日本红松和桧柏树。优选的是山毛榉树，杨树，锥栗属，栎属锯齿形的和栎属蒙古变种的grosseserrata。
要使肝色牛排菌的菌丝在培养基上短期内蔓延开，至少50％(重量)，优选至少70％(重量)，更优选至少80％(重量)的木质材料应能通过孔径为11.10mm但不能通过孔径为850μm的筛板，最好能通过孔径为6.00mm但不能通过孔径为1.00mm的筛板。
养分(b)包括糖类和有机氮类。养分(b)是一种混合物，其中有一种或多种糖选自葡萄糖，糖化物，淀粉，a-淀粉和麦芽汁，还有一种或多种有机含氮物质，选自氨基酸、胨和酵母浸膏。既含有糖类又含有有机氮类的养分的实例包括玉米营养添加剂如粒化或粉碎的玉米芯和玉米糠；大豆营养添加剂如豆腐渣，脱脂大豆和豆粉；选自麦芽和整粒的黑麦及燕麦粉末；米糠；麦糠；和日本酒曲的营养添加剂，其中日本酒曲是首选的。也可将一种糖和/或一种有机含氮物质加入到既含有糖又含有有机含氮物质的养分中。虽然养分中所含的糖和有机含氮物质的量不受特别的限制，但以养分为基准，糖类含量最好为0.1至90％(重量)，有机含氮物质含量最好为0.02至50％(重量)。木质材料与养分之比不受特别的限制，通常是1∶1至9∶1，优选3∶1至9∶1(以干重计)。如有必要，无机物和金属盐例如磷酸盐，镁盐和钙盐也可加入到固体培养基中。
含有木质材料及养分的固体培养基的含水量占整个培养基重量的50至70％，优选50至60％最好是56至58％。
加热灭菌后的固体培养基的pH是3.5至5.5，优选4至5.2，最好是4.2至5.0。
培养基的pH因所加养分的种类和数量而变化。因此，培养基的pH要调控。例如在加热灭菌前后将合适的无机酸或有机酸诸如盐酸溶液，乳酸溶液，醋酸溶液或琥珀酸缓冲液加入到培养基中。测定培养基的pH是将5g培养基悬浮于50ml蒸馏水中，使悬浮液静置10分钟，测定悬浮液的pH。
用常规方法将固体培养基灭菌后，固体或液体形式的接种物在无菌条件下均匀地混入上述的固体培养基中，使微生物在固体培养基中分散，然后进行培养。灭菌的固体培养基与接种物在无菌条件下(用干净的平板或类似物)混合制成含有大体均匀的与接种物的混合物的固体培养基，然后开始培养。换句话说，当使用可以倒入灭菌培养基孔径的接种物，例如使用液体接种物时，使用含有均匀分散的接种物的固体培养基开始培养。虽然分散于固体培养基中的接种物的量不受特别的限制，但优选的是在100份(重量)固体培养基中至少占0.4份(重量)，更优选的是占0.4至20份(重量)，最好是占1至10份(重量)。
特别是，宜将固体培养基装入容器中，然后灭菌。这个容器最好与接种了接种物后使肝色牛排菌子实体向容器外生长所用的容器相同。这个容器必须至少有底部和侧壁，最好是一个带有滤器的封闭容器，可让气体例如氧气和二氧化碳通过但不让孢子或类似物通过，尤其是一个四周都易割破的塑料袋。其中，最好是一个透明或半透明的容器，因为可从外面观察到在容器内生长的肝色牛排菌子实体原基。
优选那些柔韧的塑料袋，它们由聚烯烃如聚乙烯、聚丙烯的膜，聚酯如聚对苯二甲酸乙酯的膜，或尼龙制成或由多层这些膜构成。膜的厚度最好在大约10至80μm，虽然塑料膜只允许气体如氧气和二氧化碳通过不一定要求装入滤器，但通常优选的是加入一个由聚四氟乙烯，聚偏氟乙烯，纤维素混合酯或聚碳酸酯制成的孔径大小为0.05至2μm的滤器。这种滤器在市场上很易购买到，例如Durapore膜滤器(Nippon Millipore Limited)。
本发明中，固体培养基灭菌前所用的容器可以不是上述的容器，这样接种时要将容器的内容物转移到上述的容器中。将固体培养基装入容器以后，容器要在例如100至120℃条件下加热灭菌30至300分钟。
虽然接种和培养前装入容器的固体培养基的量不特别受限，但最好占容器容积的50至85％。
本发明中，接种于容器内的培养基中的接种物可用任何适当的方法来培养以使肝色牛排菌的菌丝在培养基中蔓延，由此可得到长满菌丝体的培养基，并且菌丝体足够成熟。确切地说，将接种物在无菌条件下均匀混入灭菌后的固体培养基中，然后固体培养基在15至32℃下保持15至60天。更为优选的是，在大约25℃和相对湿度为50至85％的暗处进行培养，这样，菌丝在整个培养基中的蔓延要比用常规方法所需的时间短。
因此，可在合适的条件下继续培养。肝色牛排菌的菌丝在培养基中长成成熟菌丝体，然后在10至30℃培养1至30天形成子实体原基。更为优选的培养条件为15至20℃，相对湿度至少70％(尤其75至90％)，亮度控制在50至1000lx范围内，特别优选的是在暗处进行培养得到成熟菌丝体，然后再在亮处进行培养，温度要低2至15℃，尤其是5至12℃。
形成子实体原基后，将子实体原基周围的容器在某些部位割破，让每一个肝色牛排菌的子实体都能通过穿孔长出容器。确切地说，用这样一种方法部分割破容器，即将容器壁割破以在子实体原基附近形成穿孔，或者，将一部分侧壁或容器的上表面去除以在子实体原基周围形成直径大约2cm的圆形穿孔。穿孔的形状和大小应保证生长的子实体不与培养容器发生自然的接触，因为其生长受到容器壁的抑制。然而要求穿孔面积尽可能小。培养容器必须谨慎处理，因为当培养基或子实体原基受到损伤或受强烈刺激时，子实体不生长或子实体原基或小的子实体易溶解。
用上述的方法处理，肝色牛排菌的子实体可由切割成的穿孔长出容器，最终硕大而成熟的子实体可通过本发明而获得。由于大部分的培养基被培养容器所覆盖，可防止培养基干燥并使得培养基的温度和高湿度保持恒定，从而使肝色牛排菌子实体的有效生长成为可能。
要得到成熟子实体，优选的是温度保持在10至30℃，时间10至40天。更为适宜的条件为温度15至20℃，相对湿度至少90％(尤为95至98％)，亮度50至1000lx。尤其选用在子实体原基形成后，增加相对湿度至少5％从而在高湿度条件下培养。
图1所示即是肝色牛排菌子实体通过容器中的穿孔长出容器的情形。在图1中，1表示容器，2表示容器中的穿孔，3表示肝色牛排菌的子实体，4表示滤器。
以下实施例将进一步说明本发明。
实施例1
向不能通过2mm孔径但能通过6mm孔径筛板的山毛榉树木屑534g(整个重量占100％)和178g干燥日本酒曲混合物中加入水得到含水量为60％(重量)的固体培养基。将这样得到的固体培养基装入容量为2.5kg的配有滤器(商标名Kinopack；NisshoKabushiki Kaisha的产品)的蘑菇培育袋中，使密度达到0.5g/cm3，然后于121℃加热灭菌60分钟。固体培养基加热灭菌后pH值为4.9。将17g的肝色牛排菌接种物(在与上述固体培养基组分相同的培养基中培养得到的)在无菌条件下加入到加热灭菌的固体培养基中使之均匀分散。
固体培养基放置在25℃，湿度为85％的暗处保持25天，使肝色牛排菌的菌丝在培养基中蔓延。
对比实施例1
按实施例1同样的方法制备含水量为60％的固体培养基，只是使用同样的山毛榉树木屑775g和同样的干燥日本酒曲178g。
将这样得到的固体培养基装入容量为2.5kg的装有滤器(商标名：Kinopack；Nissho Kabushiki Kaisha的产品)的蘑菇培育袋中，使密度达到0.5g/cm3，然后于121℃加热灭菌60分钟。固体培养基加热灭菌后pH值为4.9。将17g的肝色牛排菌接种物(在与上述固体培养基组分相同的培养基中培养得到的)在无菌条件下接种到加热灭菌的固体培养基的表面上。
固体培养基放置在25℃，湿度为85％的暗处。需要55天使肝色牛排菌菌丝在培养基中蔓延。
因此，用这种方法，总共需要55天才使肝色牛排菌菌丝在培养基中蔓延开，而在实施例1中只需25天就可使之蔓延。
实施例2
将979g(整个重量占100％)不能通过孔径为2mm但能通过孔径为6mm的筛板的山木榉树木屑与178g干燥的日本酒曲混合。向生成的混合物中加入水制成含水量为60％的固体培养基，将得到的固体培养基装入到容量为2.5kg的装有滤器(商标名Kinopock；Nissho Kabushiki Kaisha的产品)的蘑菇培育袋中，使密度达到0.5g/cm3，然后于121℃加热灭菌60分钟。加热灭菌后的固体培养基pH值为4.9。将17g的肝色牛排菌接种物(在与上述培养基组分相同的培养基中培养得到的)在无菌条件下加入到加热灭菌的固体培养基中，使之均匀分散。
固体培养基放置在温度25℃，湿度85％的暗处保持25天以形成成熟的肝色牛排菌的菌丝体。然后在温度20℃，湿度90％，亮度200lx的条件下继续培养5天以形成肝色牛排菌子实体原基。在温度13至23℃，在湿度90％或90％以上，亮度200lx的条件下继续培养19天得到子实体。
实施例3
将781g不能通过孔径2mm，但能通过孔径6mm的筛板的山木榉树木屑与178g干燥的日本酒曲混合。向生成的混合物中加入水得到含水量为58％的固体培养基。将得到的固体培养基装入容量为2.5kg的装有滤器(商标名：Kinopack；Nissho KabushikiKaisha的产品，由厚度为40μm的高密度聚乙烯膜制成)的蘑菇培育袋中，使密度达到0.5g/cm3，然后于121℃加热灭菌60分钟。加热灭菌后的固体培养基的pH值为4.9。将17g的肝色牛排菌接种物(在与上述固体培养基组分相同的培养基中培养得到的)在无菌条件下加入到加热灭菌后的固体培养基中，使之均匀分散。
固体培养基放置在25℃，湿度85％的暗处25天，得到长满菌丝体且菌丝体足够成熟的培养基。然后在温度20℃，湿度90％，亮度200lx的条件下继续培养5天以形成肝色牛排菌子实体原基。将原基周围的培育袋的部分侧壁切割成直径为2cm的穿孔，从外部可观察到它们穿过培养袋。然后在温度13至23℃，湿度90％或90％以上，亮度200lx的条件下继续培养19天以使子实体通过穿孔长出培养袋，这样可收获硕大而成熟的肝色牛排菌子实体。总培养时间为49天，每个固体培养基上子实体的产量为65g，子实体平均重量为21g。
用实施例3同样的方法得到肝色牛排菌子实体原基，然后在实施例3同样的条件下培养，但培育袋全部去除。每个固体培养基上子实体的产量为44g，子实体平均重量为4g。

Claims (9)

1.一种使肝色牛排菌子实体生长的方法，该方法包括以下步骤(1)使肝色牛排菌菌丝在容器中的固体培养基中蔓延，菌丝体完全充满培养基并足够成熟后，在10-30℃下将长满菌丝体且菌丝体足够成熟的培养基温育1至30天，以便由成熟的菌丝体形成子实体原基，(2)切除子实体原基附近的部分容器壁形成穿孔，和(3)将子实体原基置于10至30℃培养10至40天使成熟的子实体通过穿孔长出容器。
2.权利要求1的方法，其中在暗处培养获得子实体原基后，肝色牛排菌子实体在温度15至20℃，相对湿度为70％或70％以上，亮度为50至1000lx的条件下长出容器外。
3.一种使肝色牛排菌子实体生长的方法，该方法包括使肝色牛排菌菌丝在装有允许气体通过但不允许孢子通过的滤器的封闭的透明的塑料容器中的固体培养基中蔓延，得到充满菌丝体且菌丝体足够成熟的培养基，将培养基在10至30℃暗处培养1至30天以由成熟的菌丝体长成子实体原基，切除肝色牛排菌子实体原基周围的部分容器，将它们置于10至30℃，50至1000lx的亮处保持10至40天，成熟的肝色牛排菌子实体通过穿孔长出容器外。
4.权利要求3的方法，其中使用的固体培养基中含有(a)木质材料和(b)含有糖类和有机氮类的养分，其pH在3.5至5.5范围内。
5.一种形成子实体的方法，该方法包括以下步骤(1)使肝色牛排菌菌丝在培养基中蔓延，菌丝体完全充满培养基并且足够成熟后，在10至30℃将长满菌丝体且菌丝体足够成熟的培养基培养1至30天以便由成熟的菌丝体形成子实体原基和(2)将子实体原基置于10至30℃保持10至40天，长成成熟子实体。
6.权利要求5的方法，其中成熟的菌丝体是在暗处培养而得到的，然后将其置于15至20℃，相对湿度70％或70％以上的亮处(50至1000Lx)，形成肝色牛排菌的子实体。
7.权利要求5的方法，其中使用的固体培养基中含有(a)木质材料和(b)含有糖类和有机氮类的养分，其pH在3.5至5.5的范围。
8.权利要求7的方法，其中将肝色牛排菌接种物与适合于肝色牛排菌的灭菌后的固体培养基混合进行接种以使之分散于整个培养基中。
9.权利要求8的方法，其中固体培养基的含水量为50％至70％(重量)。
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蔬菜栽培学各论(北方本)第二版 1980. 2. 1 山东农业大学主编,农业出版社出版;中国食用菌第9卷第2期 1990. 1. 1 姚秋生,牛排菌及其栽培 *

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