CN104749124A - 一种稳定、抗干扰能力强的血清尿素检测方法及试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种抗干扰能力强、稳定性好的血清尿素检测方法及试剂。采用酶偶联速率法,可以有效检测血清尿素的含量,具有抗干扰能力强、稳定性好等优点。该产品包括试剂R1和试剂R2,采用新的缓冲体系和稳定剂,显著改善了试剂的稳定性。同时采用新型表面活性剂烷基糖苷,不仅显著改善测定的性能,而且增强了试剂的稳定性和抗干扰能力,完全可以满足临床需要。
Description
技术领域
本发明涉及用于临床测定血清中尿素含量的检测方法及试剂,属于临床体外检测技术领域。
背景技术
尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%,它通过肝脏中的氨进行合成,是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中,是消除体内多余氮的主要方法。尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。
血液尿素水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准,肾前因素引起的尿素的升高包括心脏代偿失调,缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎,慢性肾炎,多囊肾,肾纤维化和肾小管坏死。
目前临床实验室测定尿素最常用的方法有二乙酰-肟法,脲酶-波氏比色法,酶偶联速率法。
二乙酰一肟法:尿素可与二乙酰作用,在强酸加热的条件下,生成粉红色的二嗪化合物(Fearom反应),在540nm比色,其颜色强度与尿素含量成正比。二乙酰不稳定,用二乙酰一肟代替,后者遇酸水解成二乙酰。此外,二乙酰一肟与尿素的反应不是专一的,与瓜氨酸也有显色。本法专一性差,线性范围狭窄,且试剂中含有强腐蚀性化学物,易对仪器和环境造成污染,一般临床已很少使用此方法。
脲酶—波氏法:首先用脲酶水解尿素生成氨和二氧化碳。然后,氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸反应,生成蓝色的吲哚酚,此过程需用亚硝基氰化钠催化反应。蓝色吲哚酚的生成量与尿素含量成正比,在630nm波长比色测定。该法的缺点在于易受环境中铵根离子的影响造成结果假性偏高,此外脲酶的活性容易受到氟化物的抑制造成结果偏低。
发明内容
本发明提供一种抗干扰能力强、稳定性好的血清尿素检测方法及试剂,该产品包括试剂R1和试剂R2。
试剂
R1
:
PIPES(哌嗪-1,4-二乙磺酸)缓冲液(pH=7.6)
100mmo1/L
α-酮戊二酸
20mmo1/L
谷氨酸脱氢酶
800U/L
ADP
2mmo1/L
BSA
1g/L
海藻糖
2g/L
蔗糖
20g/L
APG(烷基糖苷)
2g/L
叠氮钠(NaN3)
0.5g/L
试剂
R2
:
PIPES(哌嗪-1,4-二乙磺酸)缓冲液(pH=9.4)
100mmo1/L
脲酶
10KU/L
NADH
1.2mmo1/L
BSA
1g/L
海藻糖
2g/L
蔗糖
20g/L
APG(烷基糖苷)
2g/L
叠氮钠(NaN3)
0.5g/L 。
本发明所采用的技术方案是:
尿素在尿素酶催化下,水解生成氨和二氧化碳。氨在α-酮戊二酸和还原性辅酶存在下,经谷氨酸脱氧酶 (GLDH) 催化,生成谷氨酸。同时,NADH 被氧化成NAD +,可在 340
nm 波长处监测吸光度下降的速率,计算样品中尿素的含量。
优选的,所述的试剂R1中缓冲液为25℃,pH为7.6的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。
优选的,所述的试剂R2中缓冲液为25℃,pH为9.4的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。
所述稳定剂为BSA、海藻糖、蔗糖。
所述表面活性剂为APG(烷基糖苷)。
所述的尿素检测试剂,其特征在于所述防腐剂为NaN3。
所述的尿素检测试剂来检测尿素(UREA)的检测方法,其特征在于使用全自动生化分析仪利用固定时间法进行测定,检测主波长为340nm。
所述的检测方法,其特征在于R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
本发明的有益效果是:
本发明采用酶偶联速率法测试血清中的尿素的含量。与国内常见试剂盒相比,本试剂盒采用新的缓冲液和稳定剂,显著改善了试剂的稳定性。此外,所采用新型绿色表面活性剂烷基糖苷,不仅显著改善测定的性能,并且显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力。试剂的准确度和稳定性良好,价格便宜,使用方便,完全可以满足临床需要。
采用新的缓冲体系和稳定剂,显著改善了试剂的稳定性。
采用新型表面活性剂烷基糖苷,不仅显著改善测定的性能,而且增强了试剂的稳定性和抗干扰能力。
实施例
1
本实施例所描述的尿素的检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2。
试剂
R1
:
PIPES(哌嗪-1,4-二乙磺酸)缓冲液(pH=7.6)
100mmo1/L
α-酮戊二酸
20mmo1/L
谷氨酸脱氢酶
800U/L
ADP
2mmo1/L
BSA
1g/L
海藻糖
2g/L
蔗糖
20g/L
APG(烷基糖苷)
2g/L
叠氮钠(NaN3)
0.5g/L
试剂
R2
:
PIPES(哌嗪-1,4-二乙磺酸)缓冲液(pH=9.4)
100mmo1/L
脲酶
10KU/L
NADH
1.2mmo1/L
BSA
1g/L
海藻糖
2g/L
蔗糖
20g/L
APG(烷基糖苷)
2g/L
叠氮钠(NaN3)
0.5g/L。
本实施例试剂的使用方法:
本实施例描述的尿素检测试剂,使用全自动生化分析仪,如迈瑞BS-800全自动分析仪等,利用固定时间法进行测定。将试剂R1和R2放置到对应的试剂位上,在样品盘的对应位置放置好蒸馏水和样本,操作如表1。
表
1
实施例
1
试剂检测方法
计算:尿素含量(
mmol
/L
)=(
∆A
测定
/min
÷
∆A
标准
/min
)×
C
标准。
实施例
2
干扰性试验:取新鲜混合血清,分成2等份,然后将每等份再分成4等份,加入不同的干扰物质,使其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂,与市场常见并认可的UREA试剂同时对比测定血清中UREA的含量,对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值-对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。
由表2可以看出,实施例1试剂在抗坏血酸≤400mg/dL、胆红素≤40mg/dL、血红蛋白≤450 mg/dL、对测试结果没有明显干扰。而对照组试剂在上述浓度干扰物质存在时,受到明显干扰,这说明实施例1试剂的抗干扰性能远远优于对比试剂。
表
2
实施例试剂抗干扰性能比较
。
实施例
3
相关性实验:利用实施例1配方配制试剂,与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的尿素试剂盒进行对照检测,同时检测了20个临床血清样本,检测结果如表3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示),通过检测结果显示,两个试剂盒的相关系数为0.9974,说明了两者有极大的相关性。
表
3
实施例
1
试剂与市场常见并得到认可的尿素测定试剂盒对比检测结果
。
实施例
4
试剂的稳定性对比试验:对实施例1中的试剂,均匀分装13组,每组的试剂量为R1为18mL,R2为6mL;并且取13组市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的尿素(UREA)试剂盒作对照。放置到2-8℃冰箱中,每月的同一天取出一组试剂检测UREA质控品(靶值为7.29mmol/L),检测结果如图2所示,实施例1试剂在2-8℃储存条件下比市场常见的尿素(UREA)测定试剂盒更加稳定。
通过验证,本试剂与同类检测试剂对比相关性好,临床检测样本结果一致,能够达到市场对产品的应用要求,并且抗干扰性能好,是一种更加稳定、良好的尿素检测试剂。
Claims (8)
1.一种稳定、抗干扰能力强的血清尿素检测方法及试剂,其特征在于包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组成如下:
试剂R1:
PIPES(哌嗪-1,4-二乙磺酸)缓冲液(pH=7.6)···································100mmo1/L
α-酮戊二酸·································································································20mmo1/L
谷氨酸脱氢酶····························································································800U/L
ADP···········································································································2mmo1/L
BSA············································································································1g/L
海藻糖·········································································································2g/L
蔗糖············································································································20g/L
APG(烷基糖苷)···························································································2g/L
叠氮钠(NaN3)···························································································0.5g/L
试剂R2:
PIPES(哌嗪-1,4-二乙磺酸)缓冲液(pH=9.4)···································100mmo1/L
脲酶···········································································································10KU/L
NADH········································································································1.2mmo1/L
BSA············································································································1g/L
海藻糖·········································································································2g/L
蔗糖············································································································20g/L
APG(烷基糖苷)··························································································2g/L
叠氮钠(NaN3)···························································································0.5g/L 。
2.根据权利要求1所述的尿素检测试剂,其特征在于试剂R1中缓冲液为25℃,pH为7.6的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。
3.根据权利要求1所述的的尿素检测试剂,其特征在于试剂R2中缓冲液为25℃,pH为9.4的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的尿素检测试剂,其特征在于所述稳定剂为BSA、海藻糖、蔗糖。
5.根据权利要求1所述的尿素检测试剂,其特征在于所述表面活性剂为APG(烷基糖苷)。
6.根据权利要求1所述的尿素检测试剂,其特征在于所述防腐剂为NaN3。
7.一种使用权利要求1-6中任一项所述的尿素检测试剂来检测尿素(UREA)的检测方法,其特征在于使用全自动生化分析仪利用固定时间法进行测定,检测主波长为340nm。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
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