CN108845140A - 丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒 - Google Patents

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒，试剂盒由第一试剂和第二试剂组成；R1：三羟甲基氨基甲烷(Tris)、还原性辅酶I(NADH)、乳酸脱氢酶(LDH)、叠氮钠(NaN3)、乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)、烷基糖苷(APG)；R2三羟甲基氨基甲烷(Tris)、L‑丙氨酸、α‑酮戊二酸、叠氮钠(NaN3)。本发明通过添加EGTA和烷基糖苷(APG)的组合能有效改善NADH的稳定性，保证试剂一年的有效期。

Description

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒
技术领域
本发明属于临床体外诊断试剂技术领域，涉及丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒。
背景技术
丙氨酸氨基转移酶(ALT)是能够催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移酶，是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶，起着加快人体内蛋白质在体内转化的作用，该酶广泛存在于人体各种组织、器官、肌肉、骨骼中，以肝脏细胞的细胞浆中最多。一旦有肝细胞遭到损害、肝功能下降、肝细胞坏死，细胞内的ALT即可释放到细胞外，从而导致血清中ALT含量升高。ALT活性升高表示有肝细胞损伤，也可见于心肌及骨骼肌损伤。血清ALT活性是肝细胞损伤的敏感指标，尤其是病毒性肝炎的重要标志，目前ALT临床上主要用来检测肝功能。
现有ALT试剂中NADH稳定性不好，试剂放置一年，空白吸光度小于1，导致试剂失效。因此，需要优化反应体系，以提高NADH的稳定性。
用于体外定量测定人体血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性。
人体多种脏器都含有ALT，主要分布在肝、肾、心、肌肉，肝内ALT活性远远超过其它脏器的活性，主要存在肝细胞质的可溶性部分，故测定ALT活性可反映肝脏损害具有特殊的意义。
丙氨酸氨基转移酶检验原理
上述偶联反应中，可引起波长340nm处的吸光度下降，下降速率与ALT活性成正比，从而计算ALT的活性。
注：NADH最大吸收波长为340nm，NADH被氧化为NAD，从而导致340nm出吸光度的下降。
发明内容
本发明提供了一种改善丙氨酸氨基转移酶NADH的稳定性的试剂盒。
本发明的技术方案是：
一种丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒，试剂盒由第一试剂和第二试剂组成；
R1 三羟甲基氨基甲烷
还原性辅酶I
乳酸脱氢酶
叠氮钠
乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸
烷基糖苷
R2 三羟甲基氨基甲烷
L-丙氨酸
α-酮戊二酸
叠氮钠(NaN3)。
进一步地，上述第一试剂和第二试剂组成为：
本发明的技术方案通过加入EGTA和烷基糖苷(APG)的组合能有效改善NADH的稳定性。
附图说明
图1是临床样本比对的结果图。
具体实施方式
本发明下面就具体的实施方式作进一步地说明。
配方1(目前使用配方)
配方2(改进配方1)
配方3(改进配方2)
根据文献报道，金属离子可降低NADH的稳定性，故我们尝试在试剂1(R1)中加入螯合剂EDTA，其空白吸光度变化结果如下表：
空白吸光度变化
第0月 第1月 第3月 第6月 第12月
配方1 2.11 1.82 1.55 1.01 0.53
配方2 2.12 1.95 1.65 1.11 0.74
根据实验结果我们发现，加入EDTA能改善NADH的稳定性，但效果有限，试剂放置一年后仍然失效。
通过多次实验，我们发现通过加入EGTA和烷基糖苷(APG)的组合能有效改善NADH的稳定性，实验结果如下：
空白吸光度变化
第0月 第1月 第3月 第6月 第12月
配方1 2.11 1.82 1.55 1.01 0.53
配方3 2.11 2.08 2.07 2.01 1.91
根据实验数据我们可以看出，配方3可以满足试剂效期一年的要求。为了进一步验证配方3的合理性，我们将配方3与罗氏试剂进行临床样本的方法学比对，结果如下：
从图1临床样本比对的结果图的实验数据可以看出，配方3与罗氏试剂测临床样本结果基本一致。
小结
通过添加EGTA和烷基糖苷(APG)的组合能有效改善NADH的稳定性，保证试剂一年的有效期。

Claims (2)

1.一种丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由第一试剂和第二试剂组成；
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂和第二试剂组成为：
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