CN104181308A - 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂，其包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，R1的组分与含量为：HEPES缓冲液 0.05mol/L、NaCl10mmol/L、聚乙二醇6000 3g/L、烷基糖苷 3g/L、防腐剂NaN30.5g/L；R2的组分与含量为：HEPES缓冲液0.05mol/L、羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3.5%、聚乙二醇6000 3g/L、烷基糖苷 3g/L、防腐剂NaN3 0.5g/L；本发明准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。

Description

一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂
技术领域
本发明涉及一种稳定的肌钙蛋白I的检测试剂，属于临床体外检测技术领域。
背景技术
肌钙蛋白是组成横纹肌细肌丝的结构蛋白，其亚单位I、T和C组成复合物。在肌肉收缩和舒张过程中起着重要调节作用。其中，肌钙蛋白I(cTnI)经大量的研究，已被证实为心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一。正常人血液中含量一般低于0.3μg／L．当心肌细胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破坏时。游离的cTnI可迅速透过细胞膜进入血流。因此，在发病初期。快速、灵敏且准确地测定人血中的cTnI及其变化趋势对于急性心肌梗死的诊断、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素导致的心肌损伤等有着重要的临床意义。
目前检测肌钙蛋白I(cTnI)的方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法、酶联荧光分析法、胶体金免疫层析法(ICA)、金标银染法、质谱分析法和免疫比浊法等。其中酶联免疫吸附法(ELISA)比较普遍、但是，由于cTnI血清含量偏低，临床需快速检测，而ELISA法存在着测定周期偏长、灵敏度相对较低、线型范围偏窄等诸多不足，因而限制了该法在cTnI检测方面的进一步应用。
化学发光法、胶体金免疫层析法(ICA)虽然灵敏度高、结果可靠，但价格昂贵，设备要求较高，不适合基层医院开展。而金标银染法、质谱分析法操作步骤繁琐，且对设备要求高，尚不成熟，由实验室真正走向临床还有较长的道路。
免疫比浊分析属液相沉淀试验。其基本原理是抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应。形成小分子免疫复合物，在增浊剂的作用下，迅速形成免疫复合物微粒，使反应液出现浊度，待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。该法根据检测器的位置及其所检测的 光信号的不同，可分为免疫乳胶比浊法(turbidimetry)、免疫散射比浊法(nephelometry)等。免疫比浊法具有价格低廉、结果准确快速、重复性好、可自动化批量分析等优点，被广泛应用于临床，但是它也存在一些缺点，如试剂稳定性稍差、灵敏度有待提高等。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种稳定的肌钙蛋白I的检测试剂。
本发明的技术方案如下：一种肌钙蛋白I检测试剂，其包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，其组分和含量分别为：
HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）缓冲液(pH=7.6，25℃) 0.05mol/L
NaCl(氯化钠)10mmol/L
聚乙二醇60003g/L
烷基糖苷3g/L
防腐剂NaN3 0.5g/L；
2）试剂R2的组分为：
HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）缓冲液(pH=7.6，25℃) 0.05mol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3.5%（V/V）
聚乙二醇60003g/L
烷基糖苷3g/L
防腐剂NaN3 0.5g/L。
本发明采用液体双试剂胶乳增强免疫比浊法测试血清中的肌钙蛋白I的含量。该试剂盒用经过离子层析法纯化的羊抗人TnI抗体纯度高、抗体效价可达1:100000，这大大提高了试剂盒的分析灵敏度，最低检出限可达0.1ng/mL。采用新型生物缓冲体系HEPES缓冲液显著改善试剂的稳定性，而且改用非离子表面活性剂烷基糖苷对维护体系的稳定，防止出现脂浊，效果明显，相比之前所用的TWEEN20等有更好的效果，并且显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力。试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。
附图说明
图1为本发明与市售产品的检测对比图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
本实施例所描述的肌钙蛋白I的检测试剂盒，包试剂R1和试剂R2：
1）其R1的组成为：
HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）缓冲液 0.05mol/L
NaCl(氯化钠)10mmol/L
聚乙二醇60003g/L
烷基糖苷3g/L
防腐剂NaN3 0.5g/L；
2）试剂R2的组分为：
HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）缓冲液 0.05mol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3.5%（V/V）
聚乙二醇60003g/L
烷基糖苷3g/L
防腐剂NaN3 0.5g/L。
3）本实施例试剂的使用方法：
本实施例描述的肌钙蛋白I检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，将R1和R2按照3:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1：
表1肌钙蛋白I检测试剂检测方法
计算：肌钙蛋白I含量（U/mL）＝（∆A测定/min÷∆A标准/min）×C标准。
相关性实验
利用上述配方中配比配制试剂，与市售的肌钙蛋白I测定试剂盒进行对照检测，同时检测了20个临床血清样本，检测结果如表4所示。并获得了两种试剂的相关性曲线，通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为0.9997，说明了两者有极大的相关性。
表2实施例1试剂与某进口肌钙蛋白I测定试剂盒对比检测结果
线性范围实验
用接近线性区间下限的肌钙蛋白I低值标本稀释接近线性区间上限的肌钙蛋白I高值标本，混合成至少 5 个稀释浓度（x i ）。用试剂（盒）分别测试以上样本，每个稀释浓度测试 3 次，分别求出每个稀释浓度检测结果的均值（y i ）。以稀释浓度（x i ）为自变量，以检测结果均值（y i ）为因变量求出线性回归方程。计算线性回归的相关系数r。
测试结果如下所示，
由以上结果可以看出，实施例1试剂的线性范围可达0.3~50ng/mL，比市场常见的肌钙蛋白I试剂盒线性范围（常见肌钙蛋白I线性范围：0.5~25ng/mL）更宽，大大降低了复检率。
试剂的稳定性对比试验
对实施例1中的试剂，均匀分装13组，每组的试剂量为R1为18mL，R2为6mL；并且取13组市售肌钙蛋白I（TnI）测定试剂盒作对照。放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一组试剂检测定值血清（理论浓度为4.56ng/mL），检测结果如图1所示，实施例1试剂在2-8℃储存条件下比进口肌钙蛋白I测定试剂盒更加稳定，采用新型生物缓冲体系HEPES缓冲液显著改善试剂的稳定性，而且改用非离子表面活性剂烷基糖苷对维护体系的稳定，防止出现脂浊，效果明显，相比之前所用的TWEEN20等有更好的效果，试剂的稳定性明显提高。
通过验证，本试剂与同类检测试剂对比相关性好，临床检测样本结果一致，能够达到市场对产品的应用要求，并且灵敏度高，线性范围宽，是一种更加稳定、良好的肌钙蛋白I检测试剂。

Claims (1)

1.一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂，其包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，其组分和含量分别为：
试剂R1：
HEPES缓冲液 0.05mol/L
NaCl 10mmol/L
聚乙二醇60003g/L
烷基糖苷3g/L
防腐剂NaN3 0.5g/L；
试剂R2：
HEPES缓冲液 0.05mol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3.5%（V/V）
聚乙二醇60003g/L
烷基糖苷3g/L
防腐剂NaN3 0.5g/L。
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