CN115015533B - 一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其特征在于所述试剂R1包括Tris缓冲液、聚乙二醇和烷基糖苷；所述试剂R2包括：甘氨酸缓冲溶液、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体和烷基糖苷。本发明通过氧化低密度脂蛋白测定试剂盒的试剂R1以及试剂R2中添加适量的烷基糖苷，通过烷基糖苷对于试剂盒的稳定作用，使得本发明的试剂盒稳定性好、线性范围广，能够实现氧化低密度脂蛋白的准确测定，适于临床应用及推广。
Description
技术领域
本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒。
背景技术
氧化型低密度脂蛋白(OX－LDL)是低密度脂蛋白(LDL)内大量多价不饱和脂肪酸在过量自由基及其他致氧因素作用下发生过氧化反应，最后产生丙二醛(MDA)，MDA与载脂蛋白B(APOB)中的赖氨酸残基结合发生化学修饰的产物。大量的基础及临床研究资料证明，OX-LDL引发的一系列病理生理改变是导致动脉粥样硬化形成的关键，与动脉粥样硬化患者病情严重程度密切相关。OX-LDL具有很快被巨噬细胞和平滑肌细胞吞噬的生物学特性，是形成泡沫细胞的主要因素，对单核细胞有趋化作用，抑制它在病灶中游走，使其堆积在病灶中，参与粥样斑块的形成。OX-LDL还具有较强的细胞毒性，改变内皮细胞的功能状态，促使单核细胞及低密度脂蛋白进入血管内膜下，加速脂质条纹与动脉硬化的形成。氧化型低密度脂蛋白目前在临床及实验室的测定方法有酶联免疫法等。
例如，中国授权专利CN105158486B公开了一种用于检测人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫试剂盒。其由以下成分组成：(1)包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板；(2)人氧化低密度脂蛋白系列标准品；(3)酶标记抗体溶液；(4)稀释液；(5)洗涤液；(6)底物液；(7)显色液；(8)终止液。
再例如，中国专利申请CN111855988A公开了一种氧化低密度脂蛋白荧光免疫层析检测试剂盒及制备方法，包括干燥剂、密封袋和检测卡。所述检测卡包括扣卡与试剂条；所述试剂条包括样品垫、结合垫、滤血膜、硝酸纤维素膜、吸水纸和PVC底板，所述结合垫包被有氧化低密度脂蛋白抗体；所述氧化低密度脂蛋白抗体为氧化低密度脂蛋白单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体的一种或多种配对组合。本发明方法具有操作简便、检测效率高，检测成本低、灵敏度高、特异性强等突出优点，有重要的实用意义。
然而，酶联免疫法需要手工操作，耗时较长，步骤繁琐，成本较高。免疫比浊法是一种新型的免疫检测技术，它的检测原理是抗原抗体凝集成复合物而使反应体系产生一定的浊度，浊度大小与样品中被检物质的浓度成正比，在一定波长下测定浊度，即可测得样品中被检物质的含量。免疫比浊法可在全自动生化分析仪上使用，不但明显的缩短了检测时间，提高了检测效率，并且在一定程度上减少了人工操作而引入的人为误差，使其在临床上得到了较好的推广。针对氧化低密度脂蛋白免疫比浊法，中国专利申请CN104597252A公开了一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.1％w/v的聚乙二醇、0.01-0.05％w/v的防腐剂；所述试剂2包括：0.1-0.5％w/v标记有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的胶乳颗粒、0.5-5％w/v的稳定物质、10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.05％w/v的防腐剂，所述的稳定物质为生物大分子、高分子聚合物中的一种或多种；所述生物大分子为牛血清白蛋白或糖类物质；所述糖类为蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露糖和葡萄糖中的一种或多种；所述的高分子聚合物为聚乙二醇或聚乙烯醇。该试剂盒灵敏度高、精密度好，适用于全自动生化分析仪。
从上述现有技术的报道来看，针对氧化低密度脂蛋白免疫比浊法，其所面临的挑战在于如何稳定标记有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的胶乳颗粒。临床可用的试剂盒在2℃～8℃避光环境下储存，有效期至少要为18个月以上，试剂在开瓶待机状态下可稳定30天以上。
发明内容
基于上述原因，本发明提出一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒。具体而言，为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案：
本发明一方面涉及一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其特征在于所述试剂R1包括Tris缓冲液、聚乙二醇和烷基糖苷；所述试剂R2包括：甘氨酸缓冲溶液、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体和烷基糖苷；所述试剂R1和试剂R2中的烷基糖苷相同或者不同。
在本发明的一个优选实施方式中，所述烷基糖苷在试剂R1中的含量是0.5-2g/L。
在本发明的一个优选实施方式中，所述烷基糖苷在试剂R2中的含量是5-15g/L。
在本发明的一个优选实施方式中，所述聚乙二醇在试剂R1中的含量是10-30g/L。
在本发明的一个优选实施方式中，所述聚乙二醇的平均分子量为5000-10000。
在本发明的一个优选实施方式中，所述氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体在试剂R2中的含量是3-9g/L。
在本发明的一个优选实施方式中，所述烷基糖苷选自烷基糖苷APG0810、烷基糖苷APG1214和烷基糖苷APG0814中的一种或者多种的组合；特别优选的，所述烷基糖苷为烷基糖苷APG0810。
在本发明的一个优选实施方式中，所述试剂R1和/或试剂R2中不包括其它防腐剂和/或稳定剂。需要说明的，在本领域中，防腐剂有时候也被称为抗菌剂或抑菌剂。
在本发明的一个优选实施方式中，所述试剂R1和/或试剂R2中不包括其它表面活性剂。
在本发明的一个优选实施方式中，所述试剂R1由Tris缓冲液40-60mmol/L和聚乙二醇15-25g/L和烷基糖苷APG0810 0.5-1.5g/L组成。
在本发明的一个优选实施方式中，所述试剂R2由甘氨酸缓冲液40-60mmol/L、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体4-8g/L和烷基糖苷APG0810 8-12g/L组成。
本发明另一方面还涉及上述试剂盒的应用，所述试剂盒用于定量检测氧化低密度脂蛋白的含量。
有益效果
本发明通过氧化低密度脂蛋白测定试剂盒的试剂R1以及试剂R2中添加适量的烷基糖苷，通过烷基糖苷对于试剂盒的稳定作用，使得本发明的试剂盒稳定性好、线性范围广，能够实现氧化低密度脂蛋白的准确测定，适于临床应用及推广。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
实施例1：
一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中，试剂R1包括：Tris缓冲液50mmol/L和聚乙二醇-8000 20g/L和烷基糖苷APG0810 1g/L。试剂R2包括：甘氨酸缓冲液50mmol/L、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体6g/L和烷基糖苷APG0810 10g/L。
实施例2：
一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中，试剂R1包括：Tris缓冲液50mmol/L和聚乙二醇-8000 20g/L和烷基糖苷APG1214 1g/L。试剂R2包括：甘氨酸缓冲液50mmol/L、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体6g/L和烷基糖苷APG1214 10g/L。
实施例3：
一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中，试剂R1包括：Tris缓冲液50mmol/L和聚乙二醇-8000 20g/L和烷基糖苷APG0814 1g/L。试剂R2包括：甘氨酸缓冲液50mmol/L、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体6g/L和烷基糖苷APG0814 10g/L。
比较例1：
一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中，试剂R1包括：Tris缓冲液50mmol/L和聚乙二醇-8000 20g/L和叠氮化钠1g/L。试剂R2包括：甘氨酸缓冲液50mmol/L、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体6g/L、海藻糖10g/L和叠氮化钠1g/L。
实施例4：试剂盒的应用
本发明试剂盒的几餐原理是通过采用OX-LDL抗体致敏的胶乳颗粒，与待测样品中OX-LDL在液相中相遇，立即形成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定浊度。浊度高低反映样品中OX-LDL的含量，通过与同样处理的校准品比较，即可计算出样品中OX-LDL含量。
本试剂盒采用具有500nm～700nm波长的全自动生化分析仪(日立7080型)进行性能验证。
(1)准确度验证
使用实施例1-3和比较例1的试剂盒对质控品进行准确度测试，设3个重复，通过日立7180型全自动生化分析仪读取信号，计算测定均值与靶值的相对偏差进行准确度验证。检测结果如下表1所示：
表1：准确度验证结果
由上述实验结果可知，实施例1-3与靶值的相对偏差均不超过1.5％，实验结果说明本发明所述氧化低密度脂蛋白检测试剂盒的准确度较好。
(2)精密度验证
取临床低值样本、中值样本以及高值样本，使用实施例和比较例的试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定10次，通过日立7080型全自动生化分析仪读取信号，分别计算测定均值和标准差，计算变异系数进行精密度考察。检测结果如下表2所示：
表2：精密度验证结果
由上述实验结果可知，在低值样本、中值样本以及高值样本检测时的变异系数分别均小于1.5％。实验结果说明本发明所述的氧化低密度脂蛋白检测试剂盒具有较高的精密度。
(3)线性范围验证
择临床超高值样本以及低值样本，随后利用高值样本以及低值样本按比例配置各浓度梯度样本，使用本发明所述试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定3次，通过日立7080型全自动生化分析仪读取信号，分别计算测定均值进行线性范围考察,检测值与理论值的相对偏差小于1.0％作为线性范围。检测结果如下表3所示：
表3：试剂盒线性范围
| 编号 | 下限值(U/mL) | 上限值(U/mL) | R2 |
| 实施例1 | 0.125 | 35 | 0.9996 |
| 实施例2 | 0.25 | 35 | 0.9981 |
| 实施例3 | 0.25 | 35 | 0.9983 |
| 比较例1 | 0.5 | 35 | 0.9842 |
由上述实验结果可知，本发明所述试剂盒组检测值与理论值的相关性R2为0.99以上，线性范围在0.25-35U/L之间，特别是实施例1，其检测值与理论值的相关性R2为0.999以上，线性范围在0.125-35U/L之间。实验结果说明本发明所述的氧化低密度脂蛋白检测试剂盒在线性范围内具有较好的线性相关性。
(4)稳定性验证
试验方法：将实施例1-3和对比例1中的试剂R1和R2置于恒温摇床内，在37℃转速100rpm条件下振荡，隔天取出检测，监测靶值为35U/mL质控品的数值，重复检测三遍，记录并计算平均值，检测质控品数值的变化从而来反应试剂的稳定性，连续检测6次(共计10天)，检测结果如下表4所示：
| 天数 | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
| 实施例1 | 35.14 | 34.33 | 33.54 | 32.89 | 32.07 | 31.28 |
| 实施例2 | 35.16 | 34.05 | 33.19 | 31.88 | 30.57 | 29.42 |
| 实施例3 | 35.22 | 33.72 | 32.45 | 31.08 | 29.79 | 28.36 |
| 比较例1 | 35.37 | 33.07 | 31.08 | 28.95 | 26.37 | 24.31 |
由表4的实验结果可知，本发明中实施例1-3的试剂盒中的试剂拥有较高的稳定性，其中，实施例1的稳定性优于实施例2和3.由此可知，相比于其它稳定剂，烷基糖苷的加入能够增强试剂盒的稳定性。
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。
Claims (2)
1. 一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其特征在于所述试剂R1由Tris缓冲液50mmol/L和聚乙二醇20g/L和烷基糖苷APG0810 1g/L组成；所述试剂R2由甘氨酸缓冲液50mmol/L、氧化型低密度脂蛋白胶乳抗体 6g/L和烷基糖苷APG081010g/L组成。
2.权利要求1所述试剂盒的应用，所述试剂盒用于定量检测氧化低密度脂蛋白的含量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210607675.7A CN115015533B (zh) | 2022-05-31 | 一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210607675.7A CN115015533B (zh) | 2022-05-31 | 一种氧化低密度脂蛋白测定试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115015533A CN115015533A (zh) | 2022-09-06 |
| CN115015533B true CN115015533B (zh) | 2024-06-25 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104181308A (zh) * | 2014-08-22 | 2014-12-03 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂 |
| CN104597252A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-05-06 | 浙江卓运生物科技有限公司 | 一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒 |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104181308A (zh) * | 2014-08-22 | 2014-12-03 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂 |
| CN104597252A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-05-06 | 浙江卓运生物科技有限公司 | 一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒 |
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